JPH06256275A - 抗血小板薬 - Google Patents
抗血小板薬Info
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- JPH06256275A JPH06256275A JP4776893A JP4776893A JPH06256275A JP H06256275 A JPH06256275 A JP H06256275A JP 4776893 A JP4776893 A JP 4776893A JP 4776893 A JP4776893 A JP 4776893A JP H06256275 A JPH06256275 A JP H06256275A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- formula
- tetrafibricin
- fibrinogen
- compound represented
- streptomyces
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】
【化３】
で表わされるテトラフィブリシンをStreptomyces neyag
awaensis NR0577 の菌株の培養液から得た。 【効果】 テトラフィブリシンは、抗血小板薬として有
用である。
awaensis NR0577 の菌株の培養液から得た。 【効果】 テトラフィブリシンは、抗血小板薬として有
用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗血小板薬として有用
な後記式Ｉで表わされるテトラフィブリシン（tetrafib
ricin)に関する。
な後記式Ｉで表わされるテトラフィブリシン（tetrafib
ricin)に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】血小
板血栓の形成は、障害血管壁への血小板の粘着、血小板
自身の活性化、および血小板相互の凝集、という３つの
反応をへておこることが知られている。これまで開発の
進められてきた抗血小板薬は、血小板内部の活性化経路
を遮断することにより、凝集を阻害する物が中心であっ
た。しかし、これらの薬物は、血小板以外の細胞にも作
用して副作用をおこすこと、異なる活性化経路を介する
様々な血小板活性化物質に対して必ずしも一律に抑制効
果を示さないことが欠点として指摘されている。これに
対し、血小板凝集反応は血しょう中のフィブリノーゲン
が血小板膜上の糖タンパク質ＧＰIIｂ／III ａと結合
し、血小板同士を架橋することによって起こり、血小板
に特異的な反応で、かつあらゆる血小板活性化物質によ
る凝集に関与している。このことから、フィブリノーゲ
ンとＧＰIIｂ／III ａの結合を阻害する薬物は、より血
小板に特異的で、副作用の少ない抗血小板薬として有用
であろうと考えられる。そこで本発明者らは、ＧＰIIｂ
／III ａとフィブリノーゲンの結合を特異的に阻害する
化合物の探索を行い、本発明のテトラフィブリシンを見
出した。
板血栓の形成は、障害血管壁への血小板の粘着、血小板
自身の活性化、および血小板相互の凝集、という３つの
反応をへておこることが知られている。これまで開発の
進められてきた抗血小板薬は、血小板内部の活性化経路
を遮断することにより、凝集を阻害する物が中心であっ
た。しかし、これらの薬物は、血小板以外の細胞にも作
用して副作用をおこすこと、異なる活性化経路を介する
様々な血小板活性化物質に対して必ずしも一律に抑制効
果を示さないことが欠点として指摘されている。これに
対し、血小板凝集反応は血しょう中のフィブリノーゲン
が血小板膜上の糖タンパク質ＧＰIIｂ／III ａと結合
し、血小板同士を架橋することによって起こり、血小板
に特異的な反応で、かつあらゆる血小板活性化物質によ
る凝集に関与している。このことから、フィブリノーゲ
ンとＧＰIIｂ／III ａの結合を阻害する薬物は、より血
小板に特異的で、副作用の少ない抗血小板薬として有用
であろうと考えられる。そこで本発明者らは、ＧＰIIｂ
／III ａとフィブリノーゲンの結合を特異的に阻害する
化合物の探索を行い、本発明のテトラフィブリシンを見
出した。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明は、式Ｉ、
【０００４】
【化２】
【０００５】で表わされる新規化合物テトラフィブリシ
ン、そのＮ−アシル誘導体、ケトン部分が還元されたヒ
ドロキシ誘導体またはそれらのエステルもしくは塩に関
するものである。
ン、そのＮ−アシル誘導体、ケトン部分が還元されたヒ
ドロキシ誘導体またはそれらのエステルもしくは塩に関
するものである。
【０００６】本発明はまた、テトラフィブリシンを含む
抗血小板薬として有用な医薬組成物、テトラフィブリシ
ンの製造方法およびテトラフィブリシンを産生する微生
物に関するものである。
抗血小板薬として有用な医薬組成物、テトラフィブリシ
ンの製造方法およびテトラフィブリシンを産生する微生
物に関するものである。
【０００７】テトラフィブリシンの物理化学的性状は次
の通りである。 形状：淡黄色無定形粉末 比旋光度：［α]24 D -38.9°（Ｃ＝１、水） 分子式：C41H67NO13 高分解能ファーストアトムボンバードメントマススペク
トル： （C41H68NO13として）計算値 782.4691 実験値 782.
4676（M+H)+ 紫外部吸収スペクトル： λmax(水）ε：229(4,200)、323(48,400) λmax(０．０５規定塩酸）ε：235(3,700)、３３９（４
３，５００） λｍａｘ（０．０５規定水酸化ナトリウム溶液）ε：22
9(4,100)、322(43,900)赤外部吸収スペクトル： νmax(kBr)：3,400 、2,940 、1,710 、1,630 、1,550
、1,390 、1,010 、975 cm-1 溶解性 可溶：水、メタノール、エタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド、ピリジン、ジメチルスルホキシド 不溶：ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチルエステ
ル1 H 核磁気共鳴スペクトル：400MHz、重水中； （δ ppm) 1.08(3H, d, J=7.1Hz), 1.50(1H, m), 1.52
(2H, m), 1.60(5H, m),1.66(2H, m), 1.72(2H, m), 1.7
5(2H, m), 2.22(2H, m), 2.24(2H, m), 2.30(2H, t, J=
6.6Hz), 2.32(1H, m), 2.36(1H, m), 2.71(1H, dd, J=1
7.0, 3.2Hz), 2.74(1H, m), 2.82(1H, dd, J=17.0, 8.8
Hz), 2.98(2H, ddd, J=7.6, 7.1, 2.2Hz), 3.70(1H,
m), 3.76(1H, m), 3.93(1H, m), 3.97(2H, m), 4.02(1
H, m), 4.15(1H, br.t, J=6.0Hz), 4.18(1H, m), 4.25
(1H, m), 4.26(1H, m), 5.52(1H, dd,J=15.5, 7.6Hz),
5.55(1H, dd, J=15.5, 6.8Hz), 5.58(1H, dd, J=15.5,
5.2Hz), 5.66(1H, dd, J=15.5, 6.6Hz), 5.67(1H, dt,
J=15.5, 6.8Hz), 5.73(1H, dt, J=15.5, 6.3Hz), 5.78
(1H, dt, J=15.2, 6.2Hz), 5.93(1H, d, J=15.2Hz), 6.
25(1H, dd, 15.2, 11.0Hz), 6.33(1H, dd, J=15.2, 11.
0Hz), 6.42(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 6.43(1H, dd, J
=15.2, 11.0Hz), 6.62(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 7.03
(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz).13 C 核磁気共鳴スペクトル：100MHz、重水中； （δ ppm) 13.4, 26.1, 35.2, 41.3, 41.9, 42.1, 42.
4, 42.6, 46.0, 46.1,46.3, 46.9, 47.4, 51.6, 54.5,
67.6×2、 68.3, 70.0, 70.3, 71.9, 73.1 ×2,73.9, 7
4.6, 130.0, 130.2, 131.0, 132.0, 133.7, 134.2, 13
5.3, 136.1, 137.1, 137.2, 138.0, 138.5, 141.6, 14
4.1, 178.6, 219.0
の通りである。 形状：淡黄色無定形粉末 比旋光度：［α]24 D -38.9°（Ｃ＝１、水） 分子式：C41H67NO13 高分解能ファーストアトムボンバードメントマススペク
トル： （C41H68NO13として）計算値 782.4691 実験値 782.
4676（M+H)+ 紫外部吸収スペクトル： λmax(水）ε：229(4,200)、323(48,400) λmax(０．０５規定塩酸）ε：235(3,700)、３３９（４
３，５００） λｍａｘ（０．０５規定水酸化ナトリウム溶液）ε：22
9(4,100)、322(43,900)赤外部吸収スペクトル： νmax(kBr)：3,400 、2,940 、1,710 、1,630 、1,550
、1,390 、1,010 、975 cm-1 溶解性 可溶：水、メタノール、エタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド、ピリジン、ジメチルスルホキシド 不溶：ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチルエステ
ル1 H 核磁気共鳴スペクトル：400MHz、重水中； （δ ppm) 1.08(3H, d, J=7.1Hz), 1.50(1H, m), 1.52
(2H, m), 1.60(5H, m),1.66(2H, m), 1.72(2H, m), 1.7
5(2H, m), 2.22(2H, m), 2.24(2H, m), 2.30(2H, t, J=
6.6Hz), 2.32(1H, m), 2.36(1H, m), 2.71(1H, dd, J=1
7.0, 3.2Hz), 2.74(1H, m), 2.82(1H, dd, J=17.0, 8.8
Hz), 2.98(2H, ddd, J=7.6, 7.1, 2.2Hz), 3.70(1H,
m), 3.76(1H, m), 3.93(1H, m), 3.97(2H, m), 4.02(1
H, m), 4.15(1H, br.t, J=6.0Hz), 4.18(1H, m), 4.25
(1H, m), 4.26(1H, m), 5.52(1H, dd,J=15.5, 7.6Hz),
5.55(1H, dd, J=15.5, 6.8Hz), 5.58(1H, dd, J=15.5,
5.2Hz), 5.66(1H, dd, J=15.5, 6.6Hz), 5.67(1H, dt,
J=15.5, 6.8Hz), 5.73(1H, dt, J=15.5, 6.3Hz), 5.78
(1H, dt, J=15.2, 6.2Hz), 5.93(1H, d, J=15.2Hz), 6.
25(1H, dd, 15.2, 11.0Hz), 6.33(1H, dd, J=15.2, 11.
0Hz), 6.42(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 6.43(1H, dd, J
=15.2, 11.0Hz), 6.62(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 7.03
(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz).13 C 核磁気共鳴スペクトル：100MHz、重水中； （δ ppm) 13.4, 26.1, 35.2, 41.3, 41.9, 42.1, 42.
4, 42.6, 46.0, 46.1,46.3, 46.9, 47.4, 51.6, 54.5,
67.6×2、 68.3, 70.0, 70.3, 71.9, 73.1 ×2,73.9, 7
4.6, 130.0, 130.2, 131.0, 132.0, 133.7, 134.2, 13
5.3, 136.1, 137.1, 137.2, 138.0, 138.5, 141.6, 14
4.1, 178.6, 219.0
【０００８】以上のような物理化学的性状から、テトラ
フィブリシンは、分子内に共役テトラエン酸構造を有す
る前記式Ｉで表わされる新規化合物であると決定した。
フィブリシンは、分子内に共役テトラエン酸構造を有す
る前記式Ｉで表わされる新規化合物であると決定した。
【０００９】本発明によって提供される方法に従って、
テトラフィブリシンは、微生物に好適な液体培地中、好
気的条件下に、テトラフィブリシンを産生しうる微生物
を深部培養し、培養液からテトラフィブリシンを採取す
ることによって製造される。
テトラフィブリシンは、微生物に好適な液体培地中、好
気的条件下に、テトラフィブリシンを産生しうる微生物
を深部培養し、培養液からテトラフィブリシンを採取す
ることによって製造される。
【００１０】前記の方法で用いられる微生物は、テトラ
フィブリシンを産生しうる微生物であればいかなる微生
物も使用できるが、特にStreptomyces属に属する微生物
が好ましい。特に好ましい株は、Streptomyces neyagaw
aensis NR0577 およびその変異株である。Streptomyces
neyagawaensis NR0577 は、日本国三重県紀伊長島町で
採取された土壌より分離された新菌株である。
フィブリシンを産生しうる微生物であればいかなる微生
物も使用できるが、特にStreptomyces属に属する微生物
が好ましい。特に好ましい株は、Streptomyces neyagaw
aensis NR0577 およびその変異株である。Streptomyces
neyagawaensis NR0577 は、日本国三重県紀伊長島町で
採取された土壌より分離された新菌株である。
【００１１】Streptomyces neyagawaensis NR0577 とし
て表示された菌株は、ブダペスト条約に基づいて１９９
３年３月４日付で以下の通り日本工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されている：
て表示された菌株は、ブダペスト条約に基づいて１９９
３年３月４日付で以下の通り日本工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されている：
【００１２】Streptomyces neyagawaensis NR0577 (FER
M-BP 4214)
M-BP 4214)
【００１３】Streptomyces neyagawaensis NR0577 (FER
M-BP 4214)（以下、ＮＲ０５７７株と称する場合があ
る）の菌学的性質は以下の通りである。
M-BP 4214)（以下、ＮＲ０５７７株と称する場合があ
る）の菌学的性質は以下の通りである。
【００１４】分類学的研究は、国際ストレプトマイセス
プロジェクト（Shirling, E.B. & D. Gottlieb: Method
s for characterization of Streptomyces species. In
t. J. Syst. Bacteriol. 16: 313$340, 1966) の手順に
従って行った。
プロジェクト（Shirling, E.B. & D. Gottlieb: Method
s for characterization of Streptomyces species. In
t. J. Syst. Bacteriol. 16: 313$340, 1966) の手順に
従って行った。
【００１５】気菌糸は、しわ状あるいはこぶ状の表面を
有する螺旋状の胞子鎖を形成した。菌核、胞子のう、鞭
毛胞子は観察されなかった。
有する螺旋状の胞子鎖を形成した。菌核、胞子のう、鞭
毛胞子は観察されなかった。
【００１６】２７℃で１５日間、種々の寒天培地上で生
育したＮＲ０５７７株の培養学的特徴を第１表に示す。
育したＮＲ０５７７株の培養学的特徴を第１表に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】気菌糸は灰色を呈した。オートミール寒天
及び無機塩スターチ寒天上での培養後期の気菌糸に湿潤
化した部分が観察された。基生菌糸は無色から灰味黄褐
色であった。メラニン及び他の可溶性色素が生産され
た。生理学的特徴を第２表に示す。
及び無機塩スターチ寒天上での培養後期の気菌糸に湿潤
化した部分が観察された。基生菌糸は無色から灰味黄褐
色であった。メラニン及び他の可溶性色素が生産され
た。生理学的特徴を第２表に示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】ＮＲ０５７７株の全菌体加水分解物は、Ｌ
Ｌ型のジアミノピメリン酸を含んでいた。
Ｌ型のジアミノピメリン酸を含んでいた。
【００２１】上記形態学的特徴及び細胞壁タイプを基
に、ＮＲ０５７７株は、Streptomyces属に帰属すると考
えられた。
に、ＮＲ０５７７株は、Streptomyces属に帰属すると考
えられた。
【００２２】ＮＲ０５７７株は、この属の既知種のう
ち、Streptomyces neyagawaensis Yamamoto, Nakazawa,
Horii, and Miyake (Shirling, E.B. & D. Gottlieb:
Cooperative description of type strains of Strepto
myces. V. Additional descriptions. Int. J. Syst.
Bacteriol 22: 26394, 1972 ）に最も良く似ていた。そ
こで、ＮＲ０５７７株の微生物学的特徴をStreptomyces
neyagawaensis IFO 13477の特徴と直接比較した。
ち、Streptomyces neyagawaensis Yamamoto, Nakazawa,
Horii, and Miyake (Shirling, E.B. & D. Gottlieb:
Cooperative description of type strains of Strepto
myces. V. Additional descriptions. Int. J. Syst.
Bacteriol 22: 26394, 1972 ）に最も良く似ていた。そ
こで、ＮＲ０５７７株の微生物学的特徴をStreptomyces
neyagawaensis IFO 13477の特徴と直接比較した。
【００２３】Streptomyces neyagawaensis IFO 13477
は、イースト麦芽寒天及び無機塩スターチ寒天上での培
養後期の気菌糸上に湿潤化した部分が観察された。第１
表及び第２表に見られるように、ＮＲ０５７７株の生理
学的特徴は、ミルクのペプトン化及び硝酸塩の還元を除
いて、Streptomyces neyagawaensis 1FO 13477の特徴と
非常に良く似ていた。これらの相違は、ＮＲ０５７７株
を別種とみなすには非常に小さいものであった。故に、
ＮＲ０５７７株はStreptomyces neyagawaensisの一菌株
であると同定し、Streptomyces neyagawaensis NR0577
と命名した。
は、イースト麦芽寒天及び無機塩スターチ寒天上での培
養後期の気菌糸上に湿潤化した部分が観察された。第１
表及び第２表に見られるように、ＮＲ０５７７株の生理
学的特徴は、ミルクのペプトン化及び硝酸塩の還元を除
いて、Streptomyces neyagawaensis 1FO 13477の特徴と
非常に良く似ていた。これらの相違は、ＮＲ０５７７株
を別種とみなすには非常に小さいものであった。故に、
ＮＲ０５７７株はStreptomyces neyagawaensisの一菌株
であると同定し、Streptomyces neyagawaensis NR0577
と命名した。
【００２４】ＮＲ０５７７株は、適した条件下で発育さ
せたとき、テトラフィブリシンを生産する。ＮＲ０５７
７株を含む培養液は、該菌株の胞子あるいは菌体を適し
た培地に接種し、好気的条件下で培養することにより調
製される。テトラフィブリシンの生産のために、固形培
地上での培養も可能であるが、大量生産のためには液体
培地での培養が好ましい。培養温度は、菌株が発育し得
る２０°〜３５℃の広い範囲を適用できるが、２６°〜
３０℃で、ほぼ中性のpHの培地で培養することが好まし
い。テトラフィブリシンの生産のための菌株の深部好気
培養において、培地は炭素源として市販されているグリ
セライドオイル、あるいはグリセリン、グルコース、マ
ルトース、ラクトース、デキストリン、スターチなどの
炭水化物を純粋又は加工されていない状態で、また窒素
源として、大豆粉、ディスティラーズソリュブル、落花
生粉、綿実粉、肉エキス、ペプトン、魚粉、酵母エキ
ス、コーンスティープリカーなどの有機物、また場合に
より、硝酸塩、アンモニム塩などの無機窒素源を含み得
る。鉱物塩としては、食塩、また、例えば硫酸アンモニ
ウム、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、リン酸カリウ
ム、炭酸カルシウム、微量の重金属塩を含み得る。培地
にはまた、クエン酸ナトリウムやリン酸塩などの緩衝剤
も含み得る。通気深部培養工程においては、流動パラフ
ィン、脂肪油やシリコン化合物のような消泡剤が好適に
用いられる。１種類以上の炭素源、窒素源や消泡剤がテ
トラフィブリシンの生産に使用され得る。
せたとき、テトラフィブリシンを生産する。ＮＲ０５７
７株を含む培養液は、該菌株の胞子あるいは菌体を適し
た培地に接種し、好気的条件下で培養することにより調
製される。テトラフィブリシンの生産のために、固形培
地上での培養も可能であるが、大量生産のためには液体
培地での培養が好ましい。培養温度は、菌株が発育し得
る２０°〜３５℃の広い範囲を適用できるが、２６°〜
３０℃で、ほぼ中性のpHの培地で培養することが好まし
い。テトラフィブリシンの生産のための菌株の深部好気
培養において、培地は炭素源として市販されているグリ
セライドオイル、あるいはグリセリン、グルコース、マ
ルトース、ラクトース、デキストリン、スターチなどの
炭水化物を純粋又は加工されていない状態で、また窒素
源として、大豆粉、ディスティラーズソリュブル、落花
生粉、綿実粉、肉エキス、ペプトン、魚粉、酵母エキ
ス、コーンスティープリカーなどの有機物、また場合に
より、硝酸塩、アンモニム塩などの無機窒素源を含み得
る。鉱物塩としては、食塩、また、例えば硫酸アンモニ
ウム、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、リン酸カリウ
ム、炭酸カルシウム、微量の重金属塩を含み得る。培地
にはまた、クエン酸ナトリウムやリン酸塩などの緩衝剤
も含み得る。通気深部培養工程においては、流動パラフ
ィン、脂肪油やシリコン化合物のような消泡剤が好適に
用いられる。１種類以上の炭素源、窒素源や消泡剤がテ
トラフィブリシンの生産に使用され得る。
【００２５】産生したテトラフィブリシンは培養液中に
存在するので、培養液を遠心分離あるいはろ過等の通常
の手段を用いて上澄液と菌体とに分離し、その上澄液か
ら精製する。テトラフィブリシンを培養液から採取する
には、当該物質が両性水溶性物質であるので、このよう
な微生物代謝産物を採取するために通常用いられる分離
・精製手段が適宜利用できる。培養上澄液中に含まれる
活性物質を、はじめに活性炭あるいは非イオン性ハイポ
ーラス樹脂（ＨＰ−２０、ＨＰ−２１、ＣＨＰ−２０
Ｐ、ＸＡＤ−２等）のような吸着剤に吸着させ、水と混
合可能な有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、イ
ソプロピルアルコール、アセトン等と水を適当な混合比
で混ぜた混合液を用いて溶出する。得られた粗テトラフ
ィブリシンは、さらに有機溶媒と水による分配方法、不
純物との溶解度の差を利用する方法、各種カラムクロマ
トグラフィー（担体としてイオン交換樹脂、イオン交換
セファデックス、非イオン性ハイポーラス樹脂、ゲルろ
過剤、逆相シリカゲル等）などをそれぞれ単独又は組合
わせて利用する。
存在するので、培養液を遠心分離あるいはろ過等の通常
の手段を用いて上澄液と菌体とに分離し、その上澄液か
ら精製する。テトラフィブリシンを培養液から採取する
には、当該物質が両性水溶性物質であるので、このよう
な微生物代謝産物を採取するために通常用いられる分離
・精製手段が適宜利用できる。培養上澄液中に含まれる
活性物質を、はじめに活性炭あるいは非イオン性ハイポ
ーラス樹脂（ＨＰ−２０、ＨＰ−２１、ＣＨＰ−２０
Ｐ、ＸＡＤ−２等）のような吸着剤に吸着させ、水と混
合可能な有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、イ
ソプロピルアルコール、アセトン等と水を適当な混合比
で混ぜた混合液を用いて溶出する。得られた粗テトラフ
ィブリシンは、さらに有機溶媒と水による分配方法、不
純物との溶解度の差を利用する方法、各種カラムクロマ
トグラフィー（担体としてイオン交換樹脂、イオン交換
セファデックス、非イオン性ハイポーラス樹脂、ゲルろ
過剤、逆相シリカゲル等）などをそれぞれ単独又は組合
わせて利用する。
【００２６】テトラフィブリシンは遊離型で単離される
が、必要に応じていろいろな医薬適用の塩（カルボン酸
の塩としてナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩
等、アミンの塩として塩酸塩、硫酸塩等）に変換でき
る。またそのエステル、例えばメチルエステルは、ジア
ゾメタンまたはトリメチルシリルジアゾメタンと反応さ
せることにより容易に得られる。Ｎ−アシル誘導体、例
えばアセチルアミド誘導体は、水、メタノール、テトラ
ヒドロフラン又はこれらを組合わせた混合液中で、酸無
水物と反応させることにより容易に得られる。テトラフ
ィブリシンを適当な還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリ
ウム、水素化ホウ素リチウム、シアン化水素化ホウ素ナ
トリウム等を用いて、ケトン部分が還元されたヒドロキ
シ誘導体が得られる。
が、必要に応じていろいろな医薬適用の塩（カルボン酸
の塩としてナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩
等、アミンの塩として塩酸塩、硫酸塩等）に変換でき
る。またそのエステル、例えばメチルエステルは、ジア
ゾメタンまたはトリメチルシリルジアゾメタンと反応さ
せることにより容易に得られる。Ｎ−アシル誘導体、例
えばアセチルアミド誘導体は、水、メタノール、テトラ
ヒドロフラン又はこれらを組合わせた混合液中で、酸無
水物と反応させることにより容易に得られる。テトラフ
ィブリシンを適当な還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリ
ウム、水素化ホウ素リチウム、シアン化水素化ホウ素ナ
トリウム等を用いて、ケトン部分が還元されたヒドロキ
シ誘導体が得られる。
【００２７】テトラフィブリシンのフィブリノーゲン結
合抑制作用について、以下のような方法で検討した。
合抑制作用について、以下のような方法で検討した。
【００２８】（固相法によるＧＰIIｂ／III ａとフィブ
リノーゲンの結合実験）血小板膜上の糖タンパク質ＧＰ
IIｂ／III ａの精製は以下のようにして行った。ヒト洗
浄血小板をトリトンＸ−１００で可溶化し、コンカナバ
リンＡカラム、続いてアミノエチルグリシル化したＲＧ
ＤＳ−セファロースカラムにかけ、結合したＧＰIIｂ／
III ａを３mM ＲＧＤＳで溶出して精製した。フィブリ
ノーゲン（ＩＭＣＯ社）は０．１M ＮａＨＣＯ3 溶液に
１mg/ml の割合で溶解し、これにＮＨＳ−ビオチン（１
mg/ml ジメチルホルムアミド溶液）を１００分の１量加
えてビオチン化した後、トリス緩衝液等を含む生理食塩
水（２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０mM ＮａＣｌ、
１mM ＣａＣｌ2 、１mM ＭｇＣｌ2 、pH７．４）で透
析した。精製したＧＰIIｂ／III ａを９６穴プレートに
０．２μg/wellコートし、洗浄後前記緩衝液８５μl 、
薬物１５μl 、ビオチン化フィブリノーゲン（２μg/m
l）５０μl を加えて、５時間室温にて保温後、結合し
たフィブリノーゲン量をアビジン−ビオチン法にて測定
した。
リノーゲンの結合実験）血小板膜上の糖タンパク質ＧＰ
IIｂ／III ａの精製は以下のようにして行った。ヒト洗
浄血小板をトリトンＸ−１００で可溶化し、コンカナバ
リンＡカラム、続いてアミノエチルグリシル化したＲＧ
ＤＳ−セファロースカラムにかけ、結合したＧＰIIｂ／
III ａを３mM ＲＧＤＳで溶出して精製した。フィブリ
ノーゲン（ＩＭＣＯ社）は０．１M ＮａＨＣＯ3 溶液に
１mg/ml の割合で溶解し、これにＮＨＳ−ビオチン（１
mg/ml ジメチルホルムアミド溶液）を１００分の１量加
えてビオチン化した後、トリス緩衝液等を含む生理食塩
水（２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０mM ＮａＣｌ、
１mM ＣａＣｌ2 、１mM ＭｇＣｌ2 、pH７．４）で透
析した。精製したＧＰIIｂ／III ａを９６穴プレートに
０．２μg/wellコートし、洗浄後前記緩衝液８５μl 、
薬物１５μl 、ビオチン化フィブリノーゲン（２μg/m
l）５０μl を加えて、５時間室温にて保温後、結合し
たフィブリノーゲン量をアビジン−ビオチン法にて測定
した。
【００２９】テトラフィブリシンの阻害活性を第３表に
示す。
示す。
【００３０】
【表３】
【００３１】血小板凝集は、フィブリノーゲンが血小板
上のフィブリノーゲン受容体に結合し、血小板同士を架
橋することにより起こる。フィブリノーゲンは二量体と
して働らくと考えられており、血小板同士を架橋し、血
小板凝集を引き起こす。フィブリノーゲンは、α，β，
およびγ鎖から構成されており、血小板のフィブリノー
ゲンリセプター中の２つの領域ＧＰIIｂおよびＧＰIII
ａに結合することが明らかにされている。すなわち、フ
ィブリノーゲンα鎖中の４つのアミノ酸配列、アルギニ
ル−グリシル−アスパルチル−セリン（ＲＧＤＳ）を持
つ部分がＧＰIII ａに、フィブリノーゲンγ鎖のＣ末端
の１２のアミノ酸より成る部分（γ４００−４１１）が
ＧＰIIｂに結合する。
上のフィブリノーゲン受容体に結合し、血小板同士を架
橋することにより起こる。フィブリノーゲンは二量体と
して働らくと考えられており、血小板同士を架橋し、血
小板凝集を引き起こす。フィブリノーゲンは、α，β，
およびγ鎖から構成されており、血小板のフィブリノー
ゲンリセプター中の２つの領域ＧＰIIｂおよびＧＰIII
ａに結合することが明らかにされている。すなわち、フ
ィブリノーゲンα鎖中の４つのアミノ酸配列、アルギニ
ル−グリシル−アスパルチル−セリン（ＲＧＤＳ）を持
つ部分がＧＰIII ａに、フィブリノーゲンγ鎖のＣ末端
の１２のアミノ酸より成る部分（γ４００−４１１）が
ＧＰIIｂに結合する。
【００３２】第３表中のＲＧＤＳおよびγ４００−４１
１は、上記それぞれのアミノ酸配列を持つ合成ペプチド
で、いずれも競合的にフィブリノーゲンがフィブリノー
ゲン受容体に結合するのを阻害する。テトラフィブリシ
ンはこれらのペプチドとは全く異なる構造を有する新規
物質であり、かつ第３表に示すように、フィブリノーゲ
ンのフィブリノーゲンリセプターへの結合を、ＲＧＤＳ
やγ４００−４１１ペプチドより強く阻害する。したが
って、テトラフィブリシンはフィブリノーゲンの血小板
への結合を阻害することによる血小板凝集の抑制剤、即
ち抗血小板薬として使用することができる。テトラフィ
ブリシンの急性毒性は１０mg/kg でも検出させず、毒性
はなかった。
１は、上記それぞれのアミノ酸配列を持つ合成ペプチド
で、いずれも競合的にフィブリノーゲンがフィブリノー
ゲン受容体に結合するのを阻害する。テトラフィブリシ
ンはこれらのペプチドとは全く異なる構造を有する新規
物質であり、かつ第３表に示すように、フィブリノーゲ
ンのフィブリノーゲンリセプターへの結合を、ＲＧＤＳ
やγ４００−４１１ペプチドより強く阻害する。したが
って、テトラフィブリシンはフィブリノーゲンの血小板
への結合を阻害することによる血小板凝集の抑制剤、即
ち抗血小板薬として使用することができる。テトラフィ
ブリシンの急性毒性は１０mg/kg でも検出させず、毒性
はなかった。
【００３３】本発明の新規化合物テトラフィブリシン
は、その溶媒和物またはその塩を含有する薬学的粗製物
は、経腸的に、例えば錠剤、ラッカー処理錠剤、糖被覆
錠剤、硬質および軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳濁
液、又は懸濁液の形態で経口的に、あるいは座剤の形態
で直腸的に又はスプレーとして投与することができる。
錠剤、ラッカー処理剤、糖被覆錠剤および硬質ゼラチン
カプセルを製造するために、活性化合物を薬学的に不活
性な無機又は有機賦形剤と混合することができる。錠
剤、糖被覆錠剤および硬質ゼラチンカプセルに対して使
用することのできるこのような賦形剤の例は、ラクトー
ス、とうもろこし澱粉、又はその誘導体、タルク、ステ
アリン酸又はその塩である。軟質ゼラチンカプセルに対
する適当な賦形剤の例は、植物油、ワックス、脂肪、半
固形および液状のポリオールである。しかしながら、活
性化合物の特性が適当である場合は、軟質ゼラチンカプ
セルを使用する場合に何れの賦形剤も必要でない。
は、その溶媒和物またはその塩を含有する薬学的粗製物
は、経腸的に、例えば錠剤、ラッカー処理錠剤、糖被覆
錠剤、硬質および軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳濁
液、又は懸濁液の形態で経口的に、あるいは座剤の形態
で直腸的に又はスプレーとして投与することができる。
錠剤、ラッカー処理剤、糖被覆錠剤および硬質ゼラチン
カプセルを製造するために、活性化合物を薬学的に不活
性な無機又は有機賦形剤と混合することができる。錠
剤、糖被覆錠剤および硬質ゼラチンカプセルに対して使
用することのできるこのような賦形剤の例は、ラクトー
ス、とうもろこし澱粉、又はその誘導体、タルク、ステ
アリン酸又はその塩である。軟質ゼラチンカプセルに対
する適当な賦形剤の例は、植物油、ワックス、脂肪、半
固形および液状のポリオールである。しかしながら、活
性化合物の特性が適当である場合は、軟質ゼラチンカプ
セルを使用する場合に何れの賦形剤も必要でない。
【００３４】溶液およびシロップの製造に対して適当な
賦形剤の例は、水、ポリオール、シュクロース、転化糖
およびグルコースである。注射用溶液に対する適当な例
は、水、アルコール、ポリオール、グリセオールおよび
植物油である。座剤に対する適当な例は、天然又は硬化
油、ワックス、脂肪および半液状又は液状のポリオール
である。薬学的組成物は、さらに、防腐剤、可溶化剤、
安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、風味料、浸
透圧を変化させる塩、緩衝剤、被覆剤又は酸化防止剤を
含有することができる。前述した疾患を抑制又は防止す
る活性化合物の投与量は、広範囲な範囲で変化すること
ができる。そして勿論、それぞれの特定の場合における
個々の状況に適合するように調節しなければならない。
一般に、一日につき約１０〜４００mgの投与量が成人に
対する経口投与において適当である。
賦形剤の例は、水、ポリオール、シュクロース、転化糖
およびグルコースである。注射用溶液に対する適当な例
は、水、アルコール、ポリオール、グリセオールおよび
植物油である。座剤に対する適当な例は、天然又は硬化
油、ワックス、脂肪および半液状又は液状のポリオール
である。薬学的組成物は、さらに、防腐剤、可溶化剤、
安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、風味料、浸
透圧を変化させる塩、緩衝剤、被覆剤又は酸化防止剤を
含有することができる。前述した疾患を抑制又は防止す
る活性化合物の投与量は、広範囲な範囲で変化すること
ができる。そして勿論、それぞれの特定の場合における
個々の状況に適合するように調節しなければならない。
一般に、一日につき約１０〜４００mgの投与量が成人に
対する経口投与において適当である。
【００３５】
【実施例】Streptomyces neyagawaensis NR0577 (FERM-
BP 4214)の凍結菌液（１．５ml）を、グルコース２．０
％、トーストソーヤ２．０％、ＮａＣｌ ０．２５％、
ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．００５％、ＣｕＳＯ4 ・５
Ｈ2 Ｏ ０．０００５％、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ ０．
０００５％、ＣａＣＯ3 ０．３２％およびニッサンディ
スフームＣＡ−１１５ ０．０５％から成る培地１００
mlの入った５００mlのフラスコに接種し、２７℃で３日
間、１９０rpm で振盪培養した。その後、この培養物２
mlを上記培地１００mlの入った５００mlのフラスコに移
植し、２７℃、１９０rpm で振盪培養した。テトラフィ
ブリシンの生産は、５日間の培養で最大に達した。大量
培養は、２００Ｌファーメンターで行った。
BP 4214)の凍結菌液（１．５ml）を、グルコース２．０
％、トーストソーヤ２．０％、ＮａＣｌ ０．２５％、
ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．００５％、ＣｕＳＯ4 ・５
Ｈ2 Ｏ ０．０００５％、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ ０．
０００５％、ＣａＣＯ3 ０．３２％およびニッサンディ
スフームＣＡ−１１５ ０．０５％から成る培地１００
mlの入った５００mlのフラスコに接種し、２７℃で３日
間、１９０rpm で振盪培養した。その後、この培養物２
mlを上記培地１００mlの入った５００mlのフラスコに移
植し、２７℃、１９０rpm で振盪培養した。テトラフィ
ブリシンの生産は、５日間の培養で最大に達した。大量
培養は、２００Ｌファーメンターで行った。
【００３６】上述のように準備した種培養物３Ｌを、上
記培地１５０Ｌの入ったファーメンターに移植した。フ
ァーメンターは２７℃、通気量１５０Ｌ／分、撹拌３５
０rpm で運転した。５日目にテトラフィブリシンの生産
は最大に達した。
記培地１５０Ｌの入ったファーメンターに移植した。フ
ァーメンターは２７℃、通気量１５０Ｌ／分、撹拌３５
０rpm で運転した。５日目にテトラフィブリシンの生産
は最大に達した。
【００３７】培養液中のテトラフィブリシンの取得は、
次のようにして行った。培養上澄２３０Ｌを、水で平衡
化したダイヤイオンＨＰ−２１に吸着させた後、カラム
を作成し、水で非吸着物質を溶出後１０％含水エタノー
ルで洗浄し、５０％含水エタノール２００Ｌで活性物質
を溶出した。溶出液を約２０Ｌになるまで減圧濃縮し、
等容のｎ−ブチルアルコールと酢酸エチルエステルの混
合液で脂溶性不純物を抽出除去し、活性物質が含まれる
水層をさらに約５Ｌになるまで減圧濃縮し、凍結乾燥す
ることにより、テトラフィブリシンを含む混合物１８０
g を得た。
次のようにして行った。培養上澄２３０Ｌを、水で平衡
化したダイヤイオンＨＰ−２１に吸着させた後、カラム
を作成し、水で非吸着物質を溶出後１０％含水エタノー
ルで洗浄し、５０％含水エタノール２００Ｌで活性物質
を溶出した。溶出液を約２０Ｌになるまで減圧濃縮し、
等容のｎ−ブチルアルコールと酢酸エチルエステルの混
合液で脂溶性不純物を抽出除去し、活性物質が含まれる
水層をさらに約５Ｌになるまで減圧濃縮し、凍結乾燥す
ることにより、テトラフィブリシンを含む混合物１８０
g を得た。
【００３８】前操作で得たテトラフィブリシンを含む混
合物を、８Ｌのメタノール中で１時間撹拌後、不溶な沈
殿物をろ過した。そのろ液を減圧濃縮することによりテ
トラフィブリシンを含む混合物３１．１g を得た。
合物を、８Ｌのメタノール中で１時間撹拌後、不溶な沈
殿物をろ過した。そのろ液を減圧濃縮することによりテ
トラフィブリシンを含む混合物３１．１g を得た。
【００３９】前操作で得たテトラフィブリシンを含む混
合物を１５％含水エタノール５００mlに溶解し、１５％
含水エタノールで平衡化したＭＣＩゲルＣＨＰ−２０Ｐ
カラム（１．５Ｌ) に通塔し、１５％含水エタノール、
１７．５％含水エタノールで順次洗浄後、３０％含水エ
タノールで溶出した。この溶出液を減圧濃縮後、凍結乾
燥することによりテトラフィブリシンを含む混合物６ｇ
を得た。
合物を１５％含水エタノール５００mlに溶解し、１５％
含水エタノールで平衡化したＭＣＩゲルＣＨＰ−２０Ｐ
カラム（１．５Ｌ) に通塔し、１５％含水エタノール、
１７．５％含水エタノールで順次洗浄後、３０％含水エ
タノールで溶出した。この溶出液を減圧濃縮後、凍結乾
燥することによりテトラフィブリシンを含む混合物６ｇ
を得た。
【００４０】前操作で得たテトラフィブリシンを含む混
合物を水に溶解し、分取高速液体クロマトグラフィーを
用いて分取した。用いたカラムは、資生堂製(Capcell p
ak C18AG 3×25cm) であり、０．０５M Ｎａ2 ＨＰＯ4
を含む３５％含水メタノールを用い溶出した。ＧＰIIｂ
／III ａとフィブリノーゲンとの結合に対し阻害活性を
示す画分を分取し、その画分を１規定塩酸でpH７．０に
調整後、水を加えることにより最終的に１０％含水メタ
ノール溶液になるように活性画分を希釈した。その溶液
を１５％含水エタノールで平衡化したＭＣＩゲルＣＨＰ
−２０Ｐカラム（１Ｌ）に通塔し、１５％含水エタノー
ルで洗浄後、５０％含水エタノール（２Ｌ）により溶出
させることによりリン酸塩を除去した。その溶出液を減
圧濃縮し、凍結乾燥することにより、テトラフィブリシ
ンを含む混合物７９８mgを得た。
合物を水に溶解し、分取高速液体クロマトグラフィーを
用いて分取した。用いたカラムは、資生堂製(Capcell p
ak C18AG 3×25cm) であり、０．０５M Ｎａ2 ＨＰＯ4
を含む３５％含水メタノールを用い溶出した。ＧＰIIｂ
／III ａとフィブリノーゲンとの結合に対し阻害活性を
示す画分を分取し、その画分を１規定塩酸でpH７．０に
調整後、水を加えることにより最終的に１０％含水メタ
ノール溶液になるように活性画分を希釈した。その溶液
を１５％含水エタノールで平衡化したＭＣＩゲルＣＨＰ
−２０Ｐカラム（１Ｌ）に通塔し、１５％含水エタノー
ルで洗浄後、５０％含水エタノール（２Ｌ）により溶出
させることによりリン酸塩を除去した。その溶出液を減
圧濃縮し、凍結乾燥することにより、テトラフィブリシ
ンを含む混合物７９８mgを得た。
【００４１】前操作で得たテトラフィブリシンを含む混
合物を水６mlに溶解し、トヨパールＨＷ−４０ＳＦカラ
ム（３Ｌ）に通塔し、水により溶出した。ＧＰIIｂ／II
I ａとフィブリノーゲンとの結合に対し阻害活性を示す
画分を集め、減圧濃縮、さらに凍結乾燥することによ
り、２１０mgの淡黄色無定形粉末としてテトラフィブリ
シンを得た。
合物を水６mlに溶解し、トヨパールＨＷ−４０ＳＦカラ
ム（３Ｌ）に通塔し、水により溶出した。ＧＰIIｂ／II
I ａとフィブリノーゲンとの結合に対し阻害活性を示す
画分を集め、減圧濃縮、さらに凍結乾燥することによ
り、２１０mgの淡黄色無定形粉末としてテトラフィブリ
シンを得た。
【００４２】実施例２ 下記のそれぞれの成分を含む錠剤を、それ自体公知の方
法で製造した。 テトラフィブリシン １００mg スターチ ２６mg カルボキシメチルセルロース １５mg 結晶セルロース ２０mg ステアリン酸マグネシウム ４mg （計） （１６５mg）
法で製造した。 テトラフィブリシン １００mg スターチ ２６mg カルボキシメチルセルロース １５mg 結晶セルロース ２０mg ステアリン酸マグネシウム ４mg （計） （１６５mg）
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年５月１４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】テトラフィブリシンの物理化学的性状は次
の通りである。 形状：淡黄色無定形粉末 比旋光度：［α]24 D -38.9°（Ｃ＝１、水） 分子式：C41H67NO13 高分解能ファーストアトムボンバードメントマススペク
トル： （C41H68NO13として）計算値 782.4691 実験値 782.
4676（M+H)+ 紫外部吸収スペクトル： λmax(水)nm(ε): 229(4,200) 、323(48,400) λmax(０．０５規定塩酸)nm(ε): 235(3,700) 、339(4
3,500) λmax(０．０５規定水酸化ナトリウム溶液)nm(ε): 229
(4,100) 、322(43,900) 赤外部吸収スペクトル： νmax(kBr)：3,400 、2,940 、1,710 、1,630 、1,550
、1,390 、1,010 、975 cm-1 溶解性 可溶：水、メタノール、エタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド、ピリジン、ジメチルスルホキシド 不溶：ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチルエステ
ル1 H 核磁気共鳴スペクトル：400MHz、重水中； （δ ppm) 1.08(3H, d, J=7.1Hz), 1.50(1H, m), 1.52
(2H, m), 1.60(5H, m),1.66(2H, m), 1.72(2H, m), 1.7
5(2H, m), 2.22(2H, m), 2.24(2H, m), 2.30(2H, t, J=
6.6Hz), 2.32(1H, m), 2.36(1H, m), 2.71(1H, dd, J=1
7.0, 3.2Hz), 2.74(1H, m), 2.82(1H, dd, J=17.0, 8.8
Hz), 2.98(2H, ddd, J=7.6, 7.1, 2.2Hz), 3.70(1H,
m), 3.76(1H, m), 3.93(1H, m), 3.97(2H, m), 4.02(1
H, m), 4.15(1H, br.t, J=6.0Hz), 4.18(1H, m), 4.25
(1H, m), 4.26(1H, m), 5.52(1H, dd,J=15.5, 7.6Hz),
5.55(1H, dd, J=15.5, 6.8Hz), 5.58(1H, dd, J=15.5,
5.2Hz), 5.66(1H, dd, J=15.5, 6.6Hz), 5.67(1H, dt,
J=15.5, 6.8Hz), 5.73(1H, dt, J=15.5, 6.3Hz), 5.78
(1H, dt, J=15.2, 6.2Hz), 5.93(1H, d, J=15.2Hz), 6.
25(1H, dd, 15.2, 11.0Hz), 6.33(1H, dd, J=15.2, 11.
0Hz), 6.42(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 6.43(1H, dd, J
=15.2, 11.0Hz), 6.62(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 7.03
(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz).13 C 核磁気共鳴スペクトル：100MHz、重水中； （δ ppm) 13.4, 26.1, 35.2, 41.3, 41.9, 42.1, 42.
4, 42.6, 46.0, 46.1,46.3, 46.9, 47.4, 51.6, 54.5,
67.6×2、 68.3, 70.0, 70.3, 71.9, 73.1 ×２，７３．
９， ７４．６， １３０．０， １３０．２， １３
１．０， １３２．０， １３３．７， １３４．２，
１３５．３， １３６．１， １３７．１， １３
７．２， １３８．０， １３８．５， １４１．６，
１４４．１， １７８．６， ２１９．０
の通りである。 形状：淡黄色無定形粉末 比旋光度：［α]24 D -38.9°（Ｃ＝１、水） 分子式：C41H67NO13 高分解能ファーストアトムボンバードメントマススペク
トル： （C41H68NO13として）計算値 782.4691 実験値 782.
4676（M+H)+ 紫外部吸収スペクトル： λmax(水)nm(ε): 229(4,200) 、323(48,400) λmax(０．０５規定塩酸)nm(ε): 235(3,700) 、339(4
3,500) λmax(０．０５規定水酸化ナトリウム溶液)nm(ε): 229
(4,100) 、322(43,900) 赤外部吸収スペクトル： νmax(kBr)：3,400 、2,940 、1,710 、1,630 、1,550
、1,390 、1,010 、975 cm-1 溶解性 可溶：水、メタノール、エタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド、ピリジン、ジメチルスルホキシド 不溶：ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチルエステ
ル1 H 核磁気共鳴スペクトル：400MHz、重水中； （δ ppm) 1.08(3H, d, J=7.1Hz), 1.50(1H, m), 1.52
(2H, m), 1.60(5H, m),1.66(2H, m), 1.72(2H, m), 1.7
5(2H, m), 2.22(2H, m), 2.24(2H, m), 2.30(2H, t, J=
6.6Hz), 2.32(1H, m), 2.36(1H, m), 2.71(1H, dd, J=1
7.0, 3.2Hz), 2.74(1H, m), 2.82(1H, dd, J=17.0, 8.8
Hz), 2.98(2H, ddd, J=7.6, 7.1, 2.2Hz), 3.70(1H,
m), 3.76(1H, m), 3.93(1H, m), 3.97(2H, m), 4.02(1
H, m), 4.15(1H, br.t, J=6.0Hz), 4.18(1H, m), 4.25
(1H, m), 4.26(1H, m), 5.52(1H, dd,J=15.5, 7.6Hz),
5.55(1H, dd, J=15.5, 6.8Hz), 5.58(1H, dd, J=15.5,
5.2Hz), 5.66(1H, dd, J=15.5, 6.6Hz), 5.67(1H, dt,
J=15.5, 6.8Hz), 5.73(1H, dt, J=15.5, 6.3Hz), 5.78
(1H, dt, J=15.2, 6.2Hz), 5.93(1H, d, J=15.2Hz), 6.
25(1H, dd, 15.2, 11.0Hz), 6.33(1H, dd, J=15.2, 11.
0Hz), 6.42(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 6.43(1H, dd, J
=15.2, 11.0Hz), 6.62(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz), 7.03
(1H, dd, J=15.2, 11.0Hz).13 C 核磁気共鳴スペクトル：100MHz、重水中； （δ ppm) 13.4, 26.1, 35.2, 41.3, 41.9, 42.1, 42.
4, 42.6, 46.0, 46.1,46.3, 46.9, 47.4, 51.6, 54.5,
67.6×2、 68.3, 70.0, 70.3, 71.9, 73.1 ×２，７３．
９， ７４．６， １３０．０， １３０．２， １３
１．０， １３２．０， １３３．７， １３４．２，
１３５．３， １３６．１， １３７．１， １３
７．２， １３８．０， １３８．５， １４１．６，
１４４．１， １７８．６， ２１９．０
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１４】分類学的研究は、国際ストレプトマイセス
プロジェクト（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ， Ｅ．Ｂ． ＆
Ｄ． Ｇｏｔｔｌｉｅｂ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｉｎｔ． Ｊ．
Ｓｙｓｔ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １６： ３１３〜
340,1966) の手順に従って行った。
プロジェクト（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ， Ｅ．Ｂ． ＆
Ｄ． Ｇｏｔｔｌｉｅｂ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｉｎｔ． Ｊ．
Ｓｙｓｔ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １６： ３１３〜
340,1966) の手順に従って行った。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２２】ＮＲ０５７７株は、この属の既知種のう
ち、Streptomyces neyagawaensis Yamamoto, Nakazawa,
Horii, and Miyake (Shirling, E.B. & D. Gottlieb:
Cooperative description of type strains of Strepto
myces. V. Additional descriptions. Int. J. Syst.
Bacteriol 22 : 265〜394,1972）に最も良く似ていた。
そこで、ＮＲ０５７７株の微生物学的特徴をStreptomyc
es neyagawaensis IFO 13477の特徴と直接比較した。
ち、Streptomyces neyagawaensis Yamamoto, Nakazawa,
Horii, and Miyake (Shirling, E.B. & D. Gottlieb:
Cooperative description of type strains of Strepto
myces. V. Additional descriptions. Int. J. Syst.
Bacteriol 22 : 265〜394,1972）に最も良く似ていた。
そこで、ＮＲ０５７７株の微生物学的特徴をStreptomyc
es neyagawaensis IFO 13477の特徴と直接比較した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３１】血小板凝集は、フィブリノーゲンが血小板
上のフィブリノーゲン受容体に結合し、血小板同士を架
橋することにより起こる。フィブリノーゲンは二量体と
して働らくと考えられており、血小板同士を架橋し、血
小板凝集を引き起こす。フィブリノーゲンは、α，β，
およびγ鎖から構成されており、この中の２つの領域が
血小板のフィブリノーゲンリセプターＧＰIIｂおよびＧ
ＰIII ａに結合することが明らかにされている。すなわ
ち、フィブリノーゲンα鎖中の４つのアミノ酸配列、ア
ルギニル−グリシル−アスパルチル−セリン（ＲＧＤ
Ｓ）を持つ部分がＧＰIII ａに、フィブリノーゲンγ鎖
のＣ末端の１２のアミノ酸より成る部分（γ４００−４
１１）がＧＰIIｂに結合する。
上のフィブリノーゲン受容体に結合し、血小板同士を架
橋することにより起こる。フィブリノーゲンは二量体と
して働らくと考えられており、血小板同士を架橋し、血
小板凝集を引き起こす。フィブリノーゲンは、α，β，
およびγ鎖から構成されており、この中の２つの領域が
血小板のフィブリノーゲンリセプターＧＰIIｂおよびＧ
ＰIII ａに結合することが明らかにされている。すなわ
ち、フィブリノーゲンα鎖中の４つのアミノ酸配列、ア
ルギニル−グリシル−アスパルチル−セリン（ＲＧＤ
Ｓ）を持つ部分がＧＰIII ａに、フィブリノーゲンγ鎖
のＣ末端の１２のアミノ酸より成る部分（γ４００−４
１１）がＧＰIIｂに結合する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 13/00 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者 佐藤 知子 神奈川県藤沢市大庭5683−７番地 駒寄47 −505号室 (72)発明者 渡辺 順子 神奈川県横浜市港南区港南台１丁目５番12 −405号
Claims (6)
- 【請求項１】 式Ｉ、 【化１】 で表わされる化合物、そのＮ−アシル誘導体、ケトン部
分が還元されたヒドロキシ誘導体またはそのエステルも
しくは塩。 - 【請求項２】 前記式Ｉで表わされる化合物、そのＮ−
アシル誘導体、ケトン部分が還元されたヒドロキシ誘導
体またはそのエステルもしくは塩の治療学的な有効量お
よび治療学的に不活性な担体を含む医薬組成物。 - 【請求項３】 前記式Ｉで表わされる化合物を産生しう
る微生物を培養し、培養液から式Ｉで表わされる化合物
を採取することを特徴とする式Ｉで表わされる化合物の
製造方法。 - 【請求項４】 微生物が、ストレプトミセス属に属する
前記式Ｉで表わされる化合物の生産菌である請求項３に
記載の製造方法。 - 【請求項５】 微生物が、Streptomyces neyagawaensis
NR0577 (FERM-BP 4214)もしくはその変異株である請求
項４に記載の製造方法。 - 【請求項６】 ミルクのペプトン化及び硝酸塩の還元が
陽性である、前記式Ｉで表わされる化合物生産性のStre
ptomyces neyagawaensis NR0577(FERM-BP 4214) もしく
はその変異株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4776893A JPH06256275A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | 抗血小板薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4776893A JPH06256275A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | 抗血小板薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06256275A true JPH06256275A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=12784560
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4776893A Pending JPH06256275A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | 抗血小板薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06256275A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002074970A1 (en) * | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Council Of Scientific And Industrial Research | A process for the production of an inhibitor of human platelet aggregation and soybean lipoxygenase |
-
1993
- 1993-03-09 JP JP4776893A patent/JPH06256275A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002074970A1 (en) * | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Council Of Scientific And Industrial Research | A process for the production of an inhibitor of human platelet aggregation and soybean lipoxygenase |
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