JPH0627093B2 - 分離法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はα−ヒドロキシカルボン酸又はその塩のエナン
チオマーを液体クロマトグラフィーによって光学分割す
る分離方法に関する。

〔従来の技術〕

これまで液体クロマトグラフイーを用いたα−ヒドロキ
シカルボン酸の光学分割には、谷村らによる分析化学
会、第３０回講演要旨集、Ｐ１５（１９８１）、あるい
はBeneckeによるJ.Chromatogr.,２９１（１９８４）、
１５５、に記載のものがある。これらは、逆相分配充填
剤を用い、移動相に２価銅と光学活性なアミノ酸又は光
学活性なＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸とを用いる方法で
あり、検出には３価鉄塩溶液を発色試薬とするポストラ
ベル検出法を採用している。

〔発明が解決しようとする問題点〕

併しながら上記文献に記載されている方法は、微量の光
学活性体である試料の光学分割のために、圧倒的に多量
の光学活性体を移動相として消費するという問題点を有
している。

又、文献記載の移動相は紫外線及び可視光線に対し強い
吸光度を示すため、液体クロマトグラフイー用の検出器
として最も一般的に普及している紫外・可視吸光光度計
（UV-V1S検出器）を使用することができず、装置として
は複雑なポストラベル検出法を用いなければならないと
いう欠点がある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、移動相に光学活性な物質を使用すること
なく、α−ヒドロキシカルボン酸又はその塩のエナンチ
オマーを分離する方法として、分離基材（液体クロマト
グラフイー用充填剤）を鋭意検討した結果、シリカゲル
にＬ−プロリンの金属塩を結合した充填剤を用いること
により上記の問題点を解決しうることを見い出し、本発
明を完成した。

即ち本発明はシリカゲルにＬ−プロリンの金属塩を結合
してなる充填剤を用いる液体クロマトグラフイーによる
α−ヒドロキシカルボン酸又は／及びその塩のエナンチ
オマーの分離法である。

本発明において使用する担体には、シリカゲル、多孔性
合成高分子、多糖類が例示され、さらに具体的には多孔
性合成高分子としてはスチレン−ジビニルベンゼン共重
合体、多価アルコールのアクリル酸エステルの重合物、
そして多糖類としてはデキストラン、セルロースが例示
されるが、シリカゲルが最も好ましい。

シリカゲルを担体として使用した本発明において使用す
る充填剤は下記の一般式(I)で示される。

〔但し、式中Ｙ^１，Ｙ^２，Ｙ^３のうち、少なくとも１つ
はシリカゲル及びシリカゲルとのシロキサン結合部分を
表わし、残りはそれぞれ水素、炭素数１〜６のアルキル
基、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数７〜２０のア
リールアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、または炭
素数１〜６のアルコキシ基もしくはこれら任意の組合せ
を表わす。Ｘは炭素数１〜２０のスペーサーを表わす。
ＲはＬ−プロリンの金属塩を表わす〕 上記一般式(I)で示される充填剤のスペーサー部分を形
成させるシラン処理剤としては公知のいかなるものでも
用いられるが、具体的には３−クロロプロピルトリメト
キシシラン、３−クロロプロピルジメトキシメチルシラ
ン、３−クロロプロピルメチルジクロロシラン、３−ク
ロロプロピルトリクロロシラン、３−ブロモプロピルジ
メチルクロロシラン、３−プロモプロピルトリクロロシ
ラン、３−ブロモプロピルトリメトキシシラン、２−
（３，４−エポキシシクロヘキシルエチル）トリメトキ
シシラン、３−グリシドキシプロピルトリメトキシシラ
ン、ジエトキシ−３−グリシドキシプロピルメチルシラ
ン、３−グリシドキシプロピルジメチルエトキシシラ
ン、８−ブロモオクチルトリクロロシランなどが例示さ
れる。Ｌ−プロリンの金属塩としては、２価の銅、ニッ
ケル及び３価のコバルトの塩が例示される。

本発明の分離方法としては一般式(I)で示す物質を液体
クロマトグラフイーの充填剤として用い、移動相に２価
の銅の強酸塩の水溶液又はそれにアセトニトリル、アル
コールを混合した液を用いるのが好ましい。２価の銅の
強酸塩としては例えば塩化第二銅、硝酸第二銅、硫酸
銅、過塩素酸銅及びこれらの水和物であり、これらの水
溶液として使用する。

本発明に於てα−ヒドロキシカルボン酸及びその塩のエ
ナンチオマーを分離する液体クロマトグラフイーに使用
する円筒カラムはガラス製もしくはステンレススチール
製のいずれでもよいが、通常は使用圧力と耐圧能力から
選択される。またカラムの大きさはいかなるものでも原
理的には可能であるが、試料の注入量、分析時間、溶媒
流量などから適当なものが撰択される。

上記一般式(I)で示される充填剤は、上記カラムに充填
されるが、充填方法としては乾式あるいは湿式のいずれ
の方法も可能であるが、小さいカラムでは通常は高い理
論段数が得られる湿式法即ちスラリー法で充填するのが
良い。充填されたカラムはポンプと接続され溶媒が流さ
れるがポンプとカラムの間に注入器をもうけておき、そ
こから溶媒中に分離すべきエナンチオマーを注入し、カ
ラム中で分割が行なわれる。分割されたエナンチオマー
はカラム出口に設けられた検出器で検出されるが検出の
方法は可能ないかなる方法ででもよく、一般によく用い
られているＵＶ検出器で多くの場合十分目的に適合しう
る。

本発明によつて光学分割できる対象化合物はα−ヒドロ
キシカルボン酸及びその塩のマセミ混合物である。具体
例を上げると、乳酸、マンデル酸、リンゴ酸、グリセリ
ン酸及びそれらのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウ
ム塩等がある。

〔発明の効果〕

α−ヒドロキシカルボン酸は光学活性な物質、特に生理
活性物質などを合成する上での中間体としても重要な物
質であり、多くの場合、対掌体の一方のみを必要とする
ので、その異性体の分析及その単離は重要である。本発
明によつて提供される分離方法は、α−ヒドロキシカル
ボン酸及びその塩のエナンチオマーに対して極めて良好
な光学分割能を示し、エナンチオマーであるＤ体とＬ体
は溶出時間に十分な差を持つて溶出し、かつ各々の成分
のピークはシヤープに分離されるので、エナンチオマー
の定性・定量分析及びその分取に有利に使用され得る。

〔実施例〕

以下に本発明を実施例をもつて述するが、本発明はこれ
らに限定されるものではない。

合成例１ シリカゲルLichrosorb SI １００、粒径１０μｍ（E.Me
rck社製）に真空中で５時間、１２０〜１５０℃に加熱
し、乾燥する。乾燥したシリカゲル２０ｇを無水ベンゼ
ン１２０mlに懸濁し、そこにグリシドキシプロピルトリ
メトキシシラン８mlを加え、乾燥窒素気流下、加熱還流
する。このとき生成するメタノールは系外に除くように
して３時間反応させる。反応終了後室温に冷却し、グラ
スフイルターで過する。得られた修飾シリカゲルは無
水ベンゼンで洗つた後、真空中４０℃で乾燥する。Ｌ−
プロリンのナトリウム塩1.２４ｇを無水メタノール３０
mlに溶解し、これに上記修飾シリカゲル3.５ｇを加え懸
濁させ室温で４日間振盪する。修飾したシリカゲルは
過し、メタノールで洗つた後、硫酸銅２ｇを純水５０ml
に溶解した水溶液中に移して銅塩とした。これを再び
過し、純水で洗うことにより、Ｌ−プロリンの銅塩が化
学的に結合したシリカゲルを得た。

実施例１ 合成例１で得られた充填剤を用いて種々のα−ヒドロキ
シカルボン酸及びその塩のラセミ体の光学分割を行なつ
た。即ち、平均粒径が１０μｍで、平均細孔径が１００
Åの全多孔性シリカゲルに結合したＬ−プロリンの銅塩
よりなる充填剤を高速液体クロマトグラフ用ステンレス
カラム（２５cm×0.４６cm）に充填し、2.５×１０^−４
Ｍ硫酸銅水溶液を溶媒に用いて流速１ml／分、室温で下
記に示すα−ヒドロキシカルボン酸又はその塩のラセミ
体の光学分割を行なうと、次の表−１の如き結果が得ら
れた。

表−１中、ｋ′，α，Ｒ_Ｓは夫々次の如く定義される。

すなわち、表−１のα，Ｒ_Ｓの値が示すように、各々の
化合物において、エナンチオマーであるＤ体、Ｌ体の溶
出時間には十分な差が認められ、かつピークとして両者
は完全に分離しているので、本発明の方法がエナンチオ
マーの定性・定量分析、並びにその分取に使用しうる優
れた分離方法であることがわかる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｃ 59/50 8930−4Ｈ Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｗ 8310−2Ｊ // Ｃ０７Ｂ 57/00 ３４６ 7419−4Ｈ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】α−ヒドロキシカルボン酸又は／及びその
   塩のエナンチオマーを、シリカゲルにＬ−プロリンの金
   属塩を結合してなる充填剤を用いる液体クロマトグラフ
   ィーによって分離することを特徴とする分離法。