JPS6187640A - 分離法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 酸 本発明はα−ヒドロキシカルボン八へはその塩のエナン
チオマーを液体クロマトグラフィーによって光学分割す
る分離方法に関する。

〔従来の技術〕

これまで液体クロマトグラフィーを用いたα−ヒドロキ
シカルボン酸の光学分割には、谷村らによる分析化学会
、第３０回講演要旨集、ＰＩ３（１９８１）、あるいは
ＢｅｎｅｃｋｅによるＪ、Ｏｈｒｏｍａｚｏｇｒ、、　
２９１　（１９’８４　）、１５５、に記載のものがあ
る。これらは、逆相分配型充填剤を用い、移動相に２価
鋼と光学活性なアミノ謄又は光学活性なＮ、Ｎ−ジアル
キルアばノ酸とを用いる方法であシ、検出には５価鉄塩
溶液を発色試薬゛とするボストラベル検出法を採用して
いる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

併しながら上記文献に記載されている方法は、微量の光
学活性体である試料の光学分割のた込に、圧倒的に多量
の光学活性体を移動相として消費するという問題点を有
している。

又、文献記載の移動相は紫外線及び可視光線に対し強い
吸光度を示すため、液体り四マドグラフィー用の検出器
として最も一般的に普及している紫外・５ＩｐＡ吸元光
度計（ＵＶ−ＶＩＳ検出器〕を使用することができず、
装置としては複雑なボストラベル検出法を用いなけれは
ならないという欠点がある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、移動相に光学活性な物置を便用スること
なく、α−ヒドロキシカルボン酸又はその場のエナンチ
オマーを分離する方法として、分離暴利（液体クロマト
グラフィー用充填剤）１鋭意検討し７ＩＣ結果、担体に
光学活性なアミノ酸の金属基金結合した充填剤を用いる
ことにより上記の問題点を解決しうることを見い出し、
本発明ケ完成した。

ｊＧＤち本発明は担体に光字活性なアミノ酸の金Ｎ４塩
を結合してなる充填剤を用いる液体クロマトグラフィー
によるα−ヒドロキシカルボン酸又は／及びその塩のエ
ナンチオマーの分離法である。

本発明において使用する担体には、シリカゲル、多孔性
合成高分子、多糖類が例示され、さらに具体的には多孔
性合成篩分子としてはスチレノージビニルベンゼン共重
合体、多価アルコールのアクリル酸エステルの重合物、
そして多糖類としてはデキストラン、セルロースカ例示
されるが、シリカゲルが最も好ましい。

シリカゲルを担体として使用する場合、本発明において
使用する充填剤は下記の一般式（１）で示される。

Ｙ　−８ｉ−Ｘ−Ｒ（１ 〔但し、式中Ｙ、Ｙ、Ｙ　　のうち、少なくとも１つは
シリカゲル及びシリカゲルとのシロキサン結合部分を表
わし、残りはそれぞれ水素、炭素数１〜６のアルキル基
、炭素数６〜１４のアリール基、炭素数７〜２０のアリ
ールアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、または炭素
数１〜６のアルコキシ基もしくはこれら任意の組合せを
表わす。Ｘは炭素数１〜２０のスペーサーを表わす。Ｒ
は光学活性なアミノ酸の金属塩を表わす〕 上記一般式（１）で示される充填剤のスペーサ一部分を
形成させるシラン処理剤としては公知のいかなるもので
も用いられるが、具体的には３−クロロプロピルトリメ
トキシシラン、５−クロロプロピルジメトキシメチルシ
ラン、５−クロロプロピルメチルジクロロシラン、３−
／ロロプロビルトリクロロシラン、５−ブロモプロピル
ジメチルクロロシラン、５−ブロモプロピルトリクロロ
シラン、３−ブロモプロピルトリメトキシシラン、２−
＜５．４−エポキシシクロヘキシルエチル〕トリメトキ
シシラン、５−グリシドキシプロビルトリメトキシシラ
ン、ジェトキシ−５−グリシドキシプロビルメチルシラ
ン、５−グリシドキシプロビルジメチルエトキシシラン
、８−ブロモオクチルトリクロロシランなどが例示され
る。光学活性なアミノ酸の金属塩としては天然もしくは
非天然のα−アミノ酸及びβ−アミノ酸の金属塩が例示
される。更に具体的には、アラニン、アルギニン、アス
パラギン、アスパラギン酸、システィン、グルタミン酸
、ヒスチジン、インロイシン、ロイシン、リジン、オル
ニチン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、スレ
オニン、）ｌＪ７’）７７；／、チロシン、バリン、フ
ェニルグリシン、フロリン、ヒドロキシプロリン、アロ
ヒドロキシプロリン等の金属塩が例示される。また塩を
形成する金属としては２価の銅、ニッケル及び５価のコ
バルトが例示される。

本発明の分離方法としては一般式（りで示す物Ｘｔ−液
体クロマトグラフイーの充填剤として用い、移動相に２
価の銅の強酸塩の水浴液又はそれにアセトニトリル、ア
ルコールを混合した液を用いるのが好ましい。２価の銅
の強酸塩仁しては例えば塩化第二銅、硝酸第二銅、硫酸
銅、過塩素酸鋼及びこれらの水和物でおり、これらの水
溶液として使用する。

本発明に於てａ−ヒドロキシカルボン酸及びその塩のエ
ナンチオマー、ｔ−分離する液体クロマトグラフィーに
使用する円筒カラムはガラス製モジくハステンレススチ
ール製のいずれでもよいが、通常は使用圧力と耐圧能力
から撰択される。またカラムの大きさはいかなるもので
も原理的には可能であるが、試料の注入量、分析時間、
溶媒流−ｍなどから適当なものが撰択される。

上記一般式（１１で示される充填剤は、上記カラムに充
填されるが、充填方法としては乾式あるいは湿式のいず
れの方法も可能であるが、小さいカラーでは通常は高い
理論段数が得られる湿式法即ちスラリー法で充填するの
が良い。充填されたカラムはポンプと接続され溶媒が流
されるがポンプとカラムの間に注入器をもうけておき、
そこから溶媒中に分離すべきエナンチオマー會注入し、
カラム中で分割が行なわれる。分割されたエナンチオマ
ーはカラム出口に設けられた検出器で検出されるが検出
の方法は可能ないかなる方法でもよく、一般によく用い
られているＵｖ検出器で多くの場合十分目的に適合し５
る。

本発明によって光学分割でさる対象化合物はα−ヒドロ
キシカルボン酸及びその塩のラセミ混合物である。具体
例を上げると、乳酸、マンデル酸、リンゴ酸、グリセリ
ン酸及びそれらのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウ
ム塩等がある。

〔発明の効果〕

α−ヒドロキシカルボン酸は光学活性な物質、特に生理
活性物質など全合成する上での中間体としても重装な物
質であり、多くの場合、対掌体の一方のみを心壁とする
ので、その異性体の分析及びその単離はＭ要である。本
発明によって提供される分離方法は、α−ヒドロキシカ
ルボン酸及びその塩のエナンチオマーに対して極めて良
好な光学分割能を示し、エナンチオマーでおるＤ体と５
体は溶出時間に十分な差を持って溶出し、かつ各々の成
分のピークはシャープに分離されるので、エナンチオマ
ーの定性・定置分析及びその分取に有利に使用され得る
。

〔実施例〕

以下に本発明を実施例をもって詳述するが、本発明はこ
れらに限定されるものではない。

合成例１ シリカゲルＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＳＩ　１００　、粒
径１０μｍ（ＩＣ，ＭｅｒＯｋ社製）ｔ−真空中で５時
間、１２０〜１５０℃に加熱し、乾燥する。乾燥したシ
リカゲル２０ｇ１無水ベンゼン１２０　＋＋＋ｔＫ懸ｒ
蜀し、そこにグリシドキシプロビルトリメトキシシラン
８ｍｌを加え、乾燥窒素気流下、加熱還流する。

このとき生成するメタノールは系外に除くようにして５
時間反応させる。反応終了後室温に冷却シ、グラスフィ
ルターでｐ遇する。得られた４１％飾シクシリカゲル水
ベンゼンで洗った後、真空中４０℃で乾燥する。Ｌ−プ
ロリンのナトリウム塩１．２４９全無水メタノールｓｏ
ｍｔｖｃ溶解し、これに上ｄＣ修飾シリカゲル５．５　
Ｎ　ｋ加え懸削させ室温で４日間振盪する。修飾したシ
リカゲルは涙過し、メタノールで洗った後、硫酸鋼２ｇ
を純水５０ｄに溶解した水溶液中に移して銅塩とした。

これを再びＶ過し、純水で洗うことにより、Ｌ−プロリ
ンの銅塩が化学的に結合したシリカゲルを得た。

実施例１ 合成例１で得られた充填剤を用いて拙々のα−ヒドロキ
シカルボン酸及びその塩のラセミ体の元竿分割を行なっ
た。即ち、平均粒径が１０μｍで、平均細孔径が１０Ｏ
Ａの全多孔性シリカゲルに結合したＬ−プロリンの銅塩
よりなる充填剤を高速液体クロマトグラフ用ステンレス
カラム（２５（至）Ｘｏ、４６＋’？＋りに充填し、２
．５×１０−’　Ｍ硫酸銅水溶液全溶媒に用いて流通１
祷／分、室温で下記に示すａ−ヒドロキシカルボン酸又
はその塩のラセミ体の光学分割上行なうと、次の表−１
の如き結果が得られた。

表−１ 表−１中、ｋ′、α、Ｒｓは夫々次の如く定義される。

よシ弱く吸着される対掌体の容量比 すなわち、表−１のα、Ｒ８のＩＩαが示すように、各
々の化合物において、エナンチオマーである０体、Ｌ体
の溶出時間には十分な差が認められ、かつピークとして
両者は完全に分離しているので、本９ｅｉ明の方法がエ
ナンチオマーの定性・定損分析、並びにその分取に使用
しつる優れた分離方法であることがわかる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. α−ヒドロキシカルボン酸又は／及びその塩のエナンチ
   オマーを、担体に光学活性なアミノ酸の金属塩を結合し
   てなる充填剤を用いる液体クロマトグラフィーによつて
   分離することを特徴とする分離法。