JPH0629227B2 - Ｄ−ベ−タ−リジルメタンジアミンおよびその製造法 - Google Patents
Ｄ−ベ−タ−リジルメタンジアミンおよびその製造法Info
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- JPH0629227B2 JPH0629227B2 JP25370085A JP25370085A JPH0629227B2 JP H0629227 B2 JPH0629227 B2 JP H0629227B2 JP 25370085 A JP25370085 A JP 25370085A JP 25370085 A JP25370085 A JP 25370085A JP H0629227 B2 JPH0629227 B2 JP H0629227B2
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質Ｄ−ベーターリジルメタンジアミ
ンに関し、またこの化合物を、ストレプトミセス属に属
する微生物の培養によつて製造する方法に関する。
ンに関し、またこの化合物を、ストレプトミセス属に属
する微生物の培養によつて製造する方法に関する。
本発明者らは東京都品川区上大崎の微生物化学研究所構
内の土壌試料より分離された放線菌ＭＤ７４３−ＧＦ４
株を培養して、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを生
産，蓄積せしめ、その培養物から新規化合物，Ｄ−ベー
ターリジルメタンジアミンを採取することができること
を発見した。Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンはグラ
ム陽性菌に有効な抗生物質であり、また免疫増強作用を
有する。また、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの加
水分解によつて得られるＤ−ベーターリジンは本発明者
らによつて発明されたグラム陰性菌に有効な抗生物質デ
オキシネガマイシンを合成する出発原料として有用であ
る。（特開昭５２−５９１１２号，昭和５２年５月１６
日公開）。
内の土壌試料より分離された放線菌ＭＤ７４３−ＧＦ４
株を培養して、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを生
産，蓄積せしめ、その培養物から新規化合物，Ｄ−ベー
ターリジルメタンジアミンを採取することができること
を発見した。Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンはグラ
ム陽性菌に有効な抗生物質であり、また免疫増強作用を
有する。また、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの加
水分解によつて得られるＤ−ベーターリジンは本発明者
らによつて発明されたグラム陰性菌に有効な抗生物質デ
オキシネガマイシンを合成する出発原料として有用であ
る。（特開昭５２−５９１１２号，昭和５２年５月１６
日公開）。
第一の本発明の要旨とするところは、新規化合物として
次式(I) で表わされるＤ−ベーターリジルメタンジアミンおよび
その酸付加塩にある。
次式(I) で表わされるＤ−ベーターリジルメタンジアミンおよび
その酸付加塩にある。
この新規化合物の理化学的性状ならびに生理学的性状は
次のとおりである。
次のとおりである。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは強塩基性物質であ
り、その1/2炭酸塩として単離されたＤ−ベーターリジ
ルメタンジアミンは吸湿性の無色粉末で明確な融点を測
定できない。この1/2炭酸塩の比旋光度は〔α〕D 26＝-
7.4゜(c0.5,水)および〔α〕D 26＝-21.3゜(c0.46,0.08Ｎ
塩酸)を示し、元素分析値はＣ44.75％，Ｈ8.63％，Ｎ2
6.50％，Ｏ20.62％で、C7H18N4O・1/2H2CO3の分子式（理
論値：Ｃ43.89％，Ｈ9.33％，Ｎ27.30％，Ｏ19.49％）
が推定され、質量分析（SIMS）によつてｍ／ｚ１７５
（MH+）を示した。水溶液中のＤ−ベーターリジルメタ
ンジアミンの紫外部吸収スペクトル曲線は特異吸収を示
さない。臭化カリウム錠で測定した赤外部吸収スペクト
ル曲線は添付図面の第１図に示すごとくである。重水中
（pD6）で測定した核磁気共鳴スペクトルの化学シフト
（δ，ppm）は第１表に示すとおりである。
り、その1/2炭酸塩として単離されたＤ−ベーターリジ
ルメタンジアミンは吸湿性の無色粉末で明確な融点を測
定できない。この1/2炭酸塩の比旋光度は〔α〕D 26＝-
7.4゜(c0.5,水)および〔α〕D 26＝-21.3゜(c0.46,0.08Ｎ
塩酸)を示し、元素分析値はＣ44.75％，Ｈ8.63％，Ｎ2
6.50％，Ｏ20.62％で、C7H18N4O・1/2H2CO3の分子式（理
論値：Ｃ43.89％，Ｈ9.33％，Ｎ27.30％，Ｏ19.49％）
が推定され、質量分析（SIMS）によつてｍ／ｚ１７５
（MH+）を示した。水溶液中のＤ−ベーターリジルメタ
ンジアミンの紫外部吸収スペクトル曲線は特異吸収を示
さない。臭化カリウム錠で測定した赤外部吸収スペクト
ル曲線は添付図面の第１図に示すごとくである。重水中
（pD6）で測定した核磁気共鳴スペクトルの化学シフト
（δ，ppm）は第１表に示すとおりである。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは水によく溶けるが
一般に有機溶媒に難溶または不溶である。ニンヒドリン
反応およびライドン−スミス反応陽性である。セルロー
ス（アビセルＳＦ，フナコシ薬品）の薄層クロマトグラ
フイー（展開系：プロパノール・ピリジン・酢酸・水，
１５：１０：３：１２容）で、Rf0.38に単一スポツト
（ニンヒドリン反応）を示した。
一般に有機溶媒に難溶または不溶である。ニンヒドリン
反応およびライドン−スミス反応陽性である。セルロー
ス（アビセルＳＦ，フナコシ薬品）の薄層クロマトグラ
フイー（展開系：プロパノール・ピリジン・酢酸・水，
１５：１０：３：１２容）で、Rf0.38に単一スポツト
（ニンヒドリン反応）を示した。
蟻酸・酢酸・水（１：３：３６容）を用いた高圧・紙
電気泳動（3,300Ｖ，15分）でアラニンの移動度を１．
０としたとき、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの移
動度は２．５０を示した。
電気泳動（3,300Ｖ，15分）でアラニンの移動度を１．
０としたとき、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの移
動度は２．５０を示した。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンのピクリン酸塩は黄
色結晶で分解点１８１−１８３℃を示し、元素分析値は
Ｃ34.74％，Ｈ3.21％，Ｎ21.40％，Ｏ40.95％で、C7H18
N4O・3C6H3N3O7の理論値（Ｃ34.85％，Ｈ3.16％，Ｎ21.1
3％，Ｏ40.85％）に合致した。
色結晶で分解点１８１−１８３℃を示し、元素分析値は
Ｃ34.74％，Ｈ3.21％，Ｎ21.40％，Ｏ40.95％で、C7H18
N4O・3C6H3N3O7の理論値（Ｃ34.85％，Ｈ3.16％，Ｎ21.1
3％，Ｏ40.85％）に合致した。
本発明で得られたＤ−ベーターリジルメタンジアミン
（1/2炭酸塩）は、０．５％ペプトン寒天平板上で測定
した黄色ブドウ球菌（スミス株）、枯草菌（Ｂ−５５８
株およびＰＣＩ２１９株）に対する最小発育阻止濃度が
それぞれ５０mcg/mlであつた。さらに、Ｄ−ベーターリ
ジルメタンジアミンを連日静脈注射されたマウスに対し
て、ヒツジ赤血球（SRBC）を抗原として投与し、その数
日后に脾臓を摘出して脾臓細胞について抗体産生細胞数
を測定したところ、対照試験に比べて抗体産生細胞数が
増加していることが見出され、Ｄ−ベーターリジルメタ
ンジアミンは液性免疫増強作用を有することが認められ
た。また、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを連日、
腹腔内投与されたマウスに対して、抗原としてSRBCをマ
ウスの足蹠に投与し、SRBCに対する免疫の成立後に再び
SRBCを投与してから足蹠の厚さの増加、すなわち浮腫増
加率を求める手法で遅延性過敏症（Delayed Type Hyper
sensitivity）の応答を調べたところ、細胞性免疫増強
作用が認められた。
（1/2炭酸塩）は、０．５％ペプトン寒天平板上で測定
した黄色ブドウ球菌（スミス株）、枯草菌（Ｂ−５５８
株およびＰＣＩ２１９株）に対する最小発育阻止濃度が
それぞれ５０mcg/mlであつた。さらに、Ｄ−ベーターリ
ジルメタンジアミンを連日静脈注射されたマウスに対し
て、ヒツジ赤血球（SRBC）を抗原として投与し、その数
日后に脾臓を摘出して脾臓細胞について抗体産生細胞数
を測定したところ、対照試験に比べて抗体産生細胞数が
増加していることが見出され、Ｄ−ベーターリジルメタ
ンジアミンは液性免疫増強作用を有することが認められ
た。また、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを連日、
腹腔内投与されたマウスに対して、抗原としてSRBCをマ
ウスの足蹠に投与し、SRBCに対する免疫の成立後に再び
SRBCを投与してから足蹠の厚さの増加、すなわち浮腫増
加率を求める手法で遅延性過敏症（Delayed Type Hyper
sensitivity）の応答を調べたところ、細胞性免疫増強
作用が認められた。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンのマウス静脈内投与
による急性毒性試験で２５０mg／kgの投与量で死亡例は
なかつた。
による急性毒性試験で２５０mg／kgの投与量で死亡例は
なかつた。
第一の本発明によるＤ−ベーターリジルメタンジアミン
は遊離塩基またはその水和物または炭酸塩として得るこ
とができるが、通常の方法により薬学的に許容できる酸
を加えて他の任意の無毒性の産付加塩とすることができ
る。付加すべき酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、
燐酸、硝酸などの無機塩、酢酸、リンゴ酸、クエン酸、
アスコルビン酸、メタンスルホン酸、ピクリン酸などの
有機酸が用いられる。
は遊離塩基またはその水和物または炭酸塩として得るこ
とができるが、通常の方法により薬学的に許容できる酸
を加えて他の任意の無毒性の産付加塩とすることができ
る。付加すべき酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、
燐酸、硝酸などの無機塩、酢酸、リンゴ酸、クエン酸、
アスコルビン酸、メタンスルホン酸、ピクリン酸などの
有機酸が用いられる。
第二の本発明の要旨とするところは、ストレプトミセス
属に属するＤ−ベーターリジルメタンジアミンの生産菌
を培養し、その培養物からＤ−ベーターリジルメタンジ
アミンを採取するＤ−ベーターリジルメタンジアミンの
製造法にある。
属に属するＤ−ベーターリジルメタンジアミンの生産菌
を培養し、その培養物からＤ−ベーターリジルメタンジ
アミンを採取するＤ−ベーターリジルメタンジアミンの
製造法にある。
本発明の方法によれば、Ｄ−ベーターリジルメタンジア
ミンはそれぞれ純粋な状態で、あるいは粗製の状態で、
また溶液の状態で、あるいは固体の状態で採取される。
ミンはそれぞれ純粋な状態で、あるいは粗製の状態で、
また溶液の状態で、あるいは固体の状態で採取される。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミン生産菌の一例は昭和
４８年２月、微生物化学研究所において、研究所構内の
土壌により分離された放線菌で、ＭＤ７４３−ＧＦ４の
菌株番号が付された菌株である。ＭＤ７４３−ＧＦ４株
の菌学的性状は次に示すとおりである。
４８年２月、微生物化学研究所において、研究所構内の
土壌により分離された放線菌で、ＭＤ７４３−ＧＦ４の
菌株番号が付された菌株である。ＭＤ７４３−ＧＦ４株
の菌学的性状は次に示すとおりである。
１．形態 ＭＤ７４３−ＧＦ４株は、顕微鏡下で分枝した基底菌糸
よりらせん状の気菌糸を形成し、輪生枝は、みとめられ
ない。成熟した胞子鎖は、２０個以上の胞子の連鎖をみ
とめ、胞子の大きさは０．６〜０．７×１．４〜１．７
ミクロン位で、胞子の表面は、平滑である。
よりらせん状の気菌糸を形成し、輪生枝は、みとめられ
ない。成熟した胞子鎖は、２０個以上の胞子の連鎖をみ
とめ、胞子の大きさは０．６〜０．７×１．４〜１．７
ミクロン位で、胞子の表面は、平滑である。
２．各種培地における生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準は、コンテイナー
・コーポレーシヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニユアル（Container Corporation of America
のColor harmony manual）を用いた。
・コーポレーシヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニユアル（Container Corporation of America
のColor harmony manual）を用いた。
(1)シユクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 無色の発育上に、明るい茶灰〔４ge,Rose Beige〕の気
菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素はみとめられな
い。
菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素はみとめられな
い。
(2)グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） うす黄〔２gc,Bamboo〕〜にふ黄〔３pc,Amber〕の発育
上に、白の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は、
黄色味をおびる。
上に、白の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は、
黄色味をおびる。
(3)グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養） うす黄〔２gc,Bamboo〕の発育上に、明るい茶灰〔４ge,
Rose Beige〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめら
れない。
Rose Beige〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめら
れない。
(4)イースト・麦芽寒天培地（ISP−培地２，２７℃培
養） うす黄茶〔３ng,Yellow Maple〕の発育上に、明るい茶
灰〔３dc,Natural〜５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。
養） うす黄茶〔３ng,Yellow Maple〕の発育上に、明るい茶
灰〔３dc,Natural〜５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。
(5)オートミール寒天培地（ISP−培地３，２７℃培養） うす黄〔３ie,Camel〕の発育上に、明るい茶灰〔５fe,A
shes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられな
い。
shes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられな
い。
(6)スターチ・無機塩寒天培地（ISP−培地４，２７℃培
養） 無色〜うす茶〔３lg,Lt Brown〕の発育上に、明るい茶
灰〔５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみと
められない。
養） 無色〜うす茶〔３lg,Lt Brown〕の発育上に、明るい茶
灰〔５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみと
められない。
(7)グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP−培地５，
２７℃培養） うす茶〔３pg,Golden Brown〕の発育上に、白〜明るい
茶灰〔５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は、
黄色味をおびる程度である。
２７℃培養） うす茶〔３pg,Golden Brown〕の発育上に、白〜明るい
茶灰〔５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素は、
黄色味をおびる程度である。
(7)チロシシ寒天培地（ISP−培地７，２７℃培養） うす茶〔３ng,Yellow Maple〕の発育上に、明るい灰
〔３dc,Natural〕〜明るい茶灰〔５fe,Ashes〕の気菌糸
を着生し、溶解性色素はほとんどみとめられない。
〔３dc,Natural〕〜明るい茶灰〔５fe,Ashes〕の気菌糸
を着生し、溶解性色素はほとんどみとめられない。
(8)リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養） 発育は、うす黄〔２ea,Lt Wheat〕，気菌糸はうつすら
と白色を呈し、溶解性色素はみとめられない。
と白色を呈し、溶解性色素はみとめられない。
(9)栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はうす茶〔２pi,Mustard Brown〕で、気菌糸は着生
せず、溶解性色素もみとめられない。
せず、溶解性色素もみとめられない。
(10)スターチ寒天培地（２７℃培養） うす黄〔２gc,Bamboo〕の発育上に、明るい茶灰〔３dc,
Natural〜５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素
はみとめられない。
Natural〜５fe,Ashes〕の気菌糸を着生し、溶解性色素
はみとめられない。
(11)脱脂牛乳（３７℃培養） うす黄〔２ic,Honey Gold〕の発育上に、茶灰の気菌糸
を着生し、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度で
ある。
を着生し、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度で
ある。
(12)ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、うす黄茶〔３n
e,Topaz〕の発育上に、うつすらと白〜灰色の気菌糸を
着生し、溶解性色素は茶色味をおびる。グルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地（２７℃培養）では、発育はうす
黄茶〔２ic,Honey Gold〕で、気菌糸は着生せず、溶解
性色素は暗い茶色を呈する。
e,Topaz〕の発育上に、うつすらと白〜灰色の気菌糸を
着生し、溶解性色素は茶色味をおびる。グルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地（２７℃培養）では、発育はうす
黄茶〔２ic,Honey Gold〕で、気菌糸は着生せず、溶解
性色素は暗い茶色を呈する。
(13)セルロース（２７℃培養） 無色の発育上に茶灰の気菌糸を着生し、溶解性色素はみ
とめられない。
とめられない。
３．生理的性質 (1)生育温度範囲 イースト・スターチ寒天（イーストエキス（大五栄養化
学製）０．２％，可溶性デンプン（小宗化学製）１．０
％，ひも寒天３．０％，pH７．０）を用い、２０℃，２
４℃，２７℃，３０℃，３７℃，５０℃の各温度で試験
の結果、５０℃を除いて、そのいずれの温度でも発育し
たが、最適生育温度は、２４℃〜２７℃付近であると思
われる。
学製）０．２％，可溶性デンプン（小宗化学製）１．０
％，ひも寒天３．０％，pH７．０）を用い、２０℃，２
４℃，２７℃，３０℃，３７℃，５０℃の各温度で試験
の結果、５０℃を除いて、そのいずれの温度でも発育し
たが、最適生育温度は、２４℃〜２７℃付近であると思
われる。
(2)ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン，２０℃培
養；グルコース・ペプトン・ゼラチン，２７℃培養） 単純ゼラチン培地では培養後１４日目頃から、グルコー
ス・ペプトン・ゼラチン培地の場合は、培養後１０日目
頃から、それぞれ液化が始まる。その作用は共に中等度
である。
養；グルコース・ペプトン・ゼラチン，２７℃培養） 単純ゼラチン培地では培養後１４日目頃から、グルコー
ス・ペプトン・ゼラチン培地の場合は、培養後１０日目
頃から、それぞれ液化が始まる。その作用は共に中等度
である。
(3)スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地お
よびスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） スターチ無機塩寒天培地では、培養後３日目頃から、ま
たスターチ寒天培地では、培養後７日目頃から、ともに
水解性がみとめられ、その作用は強い方である。
よびスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） スターチ無機塩寒天培地では、培養後３日目頃から、ま
たスターチ寒天培地では、培養後７日目頃から、ともに
水解性がみとめられ、その作用は強い方である。
(4)脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（１０％スキムミルク
（Difco），３７℃培養） 培養後９日目頃から弱いペプトン化が始まり、１３日目
頃に完了する。その作用は強い方である。凝固は、みと
められない。
（Difco），３７℃培養） 培養後９日目頃から弱いペプトン化が始まり、１３日目
頃に完了する。その作用は強い方である。凝固は、みと
められない。
(5)メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブ
ロス，ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天、
ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天，ＩＳＰ−培地７，いず
れも２７℃培養） いずれの培地でもメラニン様色素の生成が認められた。
その作用は、トリプトン・イースト・ブロスでは中程
度、ペプトン・イースト・鉄寒天では強い方で、チロシ
ン寒天では弱い方である。
ロス，ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天、
ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天，ＩＳＰ−培地７，いず
れも２７℃培養） いずれの培地でもメラニン様色素の生成が認められた。
その作用は、トリプトン・イースト・ブロスでは中程
度、ペプトン・イースト・鉄寒天では強い方で、チロシ
ン寒天では弱い方である。
(6)炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地，ＩＳＰ−培地９，２７℃培養） グルコース，ラフイノースを利用して発育し、Ｌ−アラ
ビノース，Ｄ−キシロース，Ｄ−フラクトース，シユク
ロース，イノシトール，Ｌ−ラムノース，Ｄ−マンニト
ールは利用しない。
地，ＩＳＰ−培地９，２７℃培養） グルコース，ラフイノースを利用して発育し、Ｌ−アラ
ビノース，Ｄ−キシロース，Ｄ−フラクトース，シユク
ロース，イノシトール，Ｌ−ラムノース，Ｄ−マンニト
ールは利用しない。
(7)リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天，２７℃培
養） リンゴ酸石灰の溶解がみとめられ、その作用は中等度〜
強い方である。
養） リンゴ酸石灰の溶解がみとめられ、その作用は中等度〜
強い方である。
(8)硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリ含有ペプトン
水，ＩＳＰ−培地８，２７℃培養） 陽性である。
水，ＩＳＰ−培地８，２７℃培養） 陽性である。
以上の性状を要約すると、ＭＤ７４３−ＧＦ４株は、ス
トレプトミセス（Streptomyces）属に属し、細胞壁に含
まれる２，６−ジアミノピメリン酸は、ＬＬ−型であ
る。又、胞子のうをみとめず、気菌糸は、らせん形成を
有し、輪生枝はみとめられない。また胞子の表面は平滑
である。種々の培地で無色〜うす黄茶、あるいはうす茶
の発育上に白〜明るい茶灰の気菌糸を着生し、溶解性色
素はほとんど認められないか、わずかに黄色味を呈す
る。メラニン様色素は陽性、蛋白分解力は中等度、スタ
ーチの水解性は強い方である。
トレプトミセス（Streptomyces）属に属し、細胞壁に含
まれる２，６−ジアミノピメリン酸は、ＬＬ−型であ
る。又、胞子のうをみとめず、気菌糸は、らせん形成を
有し、輪生枝はみとめられない。また胞子の表面は平滑
である。種々の培地で無色〜うす黄茶、あるいはうす茶
の発育上に白〜明るい茶灰の気菌糸を着生し、溶解性色
素はほとんど認められないか、わずかに黄色味を呈す
る。メラニン様色素は陽性、蛋白分解力は中等度、スタ
ーチの水解性は強い方である。
これらの性状より、ＭＤ７４３−ＧＦ４株に近縁の既知
菌種を検索すると、次の種があげられる。
菌種を検索すると、次の種があげられる。
すなわち、ストレプトミセス・ナツシユビルエンシス
（Streptomyces nashvillensis,文献International Jou
rnal of Systematic Bacteriology,１９巻，455頁，196
9；Antibiotics and Chomotherapy,１１巻，312頁，196
1），ストレプトミセス・ミサキエンシス（Streptomyce
s misakiensis,文献International Journal of Systema
tic Bacteriology,１８巻348頁，1968）、およびストレ
プトミセス・キサントシデイカス（Streptomyces xanth
ocidicus,文献International Journal of Systematic B
acteriology,２２巻，372頁，1972）である。これら３
種のＩＳＰ菌株を入手し、ＭＤ７４３−ＧＦ４株と比較
検討した。その結果、ストレプトミセス・ミサキエンシ
スは蛋白分解力が極めて弱く、糖の利用でＤ−キシロー
ス，Ｄ−フラクトース，シユクロースを利用する点でＭ
Ｄ７４３−ＧＦ４株と区別される。他方、ストレプトミ
セス・キサントシデイカスとは、この株が蛋白分解力を
示さないこと、糖の利用能でＬ−アラビノース，Ｄ−キ
シロース，Ｄ−フラクトース，シユクロースを利用して
発育するなど、ＭＤ７４３−ＧＦ４株と大きな相異点を
示した。残るストレプトミセス・ナツシユビルエンシス
とは、比較実験の成績を次の第２表に示した。
（Streptomyces nashvillensis,文献International Jou
rnal of Systematic Bacteriology,１９巻，455頁，196
9；Antibiotics and Chomotherapy,１１巻，312頁，196
1），ストレプトミセス・ミサキエンシス（Streptomyce
s misakiensis,文献International Journal of Systema
tic Bacteriology,１８巻348頁，1968）、およびストレ
プトミセス・キサントシデイカス（Streptomyces xanth
ocidicus,文献International Journal of Systematic B
acteriology,２２巻，372頁，1972）である。これら３
種のＩＳＰ菌株を入手し、ＭＤ７４３−ＧＦ４株と比較
検討した。その結果、ストレプトミセス・ミサキエンシ
スは蛋白分解力が極めて弱く、糖の利用でＤ−キシロー
ス，Ｄ−フラクトース，シユクロースを利用する点でＭ
Ｄ７４３−ＧＦ４株と区別される。他方、ストレプトミ
セス・キサントシデイカスとは、この株が蛋白分解力を
示さないこと、糖の利用能でＬ−アラビノース，Ｄ−キ
シロース，Ｄ−フラクトース，シユクロースを利用して
発育するなど、ＭＤ７４３−ＧＦ４株と大きな相異点を
示した。残るストレプトミセス・ナツシユビルエンシス
とは、比較実験の成績を次の第２表に示した。
第２表にみられるように、ＭＤ７４３−ＧＦ４株とスト
レプトミセス・ナツシユビルエンシスとは、Ｌ−アラビ
ノース，Ｄ−キシロースの利用性を除いて、よく一致し
ている。
レプトミセス・ナツシユビルエンシスとは、Ｌ−アラビ
ノース，Ｄ−キシロースの利用性を除いて、よく一致し
ている。
ＭＤ７４３−ＧＦ４株のＬ−アラビノースの利用につい
ては、くりかえしの実験で変動がみられ、わずかに利用
する場合もある。この点を考え合わせると両者の確実な
相異点は、Ｄ−キシロースの利用のみとも考えられる。
これらのことから、ＭＤ７４３−ＧＦ４株はストレプト
ミセス・ナツシユビルエンシス（Streptomyces nashvil
lensis）に近縁の種と考えられ、ストレプトミセス・ナ
ツシユビルエンシスＭＤ７４３−ＧＦ４と同定した。な
お、ＭＤ７４３−ＧＦ４株を工業技術院微生物工業技術
研究所に昭和６０年９月７日、保管委託申請し、受託番
号は、微工研菌寄第８４４２号である。なお、このＭＤ
７４３−ＧＦ４株は、平成３年１２月２５日に再寄託さ
れて微工研第１２６７６号の寄託番号が付与された。
ては、くりかえしの実験で変動がみられ、わずかに利用
する場合もある。この点を考え合わせると両者の確実な
相異点は、Ｄ−キシロースの利用のみとも考えられる。
これらのことから、ＭＤ７４３−ＧＦ４株はストレプト
ミセス・ナツシユビルエンシス（Streptomyces nashvil
lensis）に近縁の種と考えられ、ストレプトミセス・ナ
ツシユビルエンシスＭＤ７４３−ＧＦ４と同定した。な
お、ＭＤ７４３−ＧＦ４株を工業技術院微生物工業技術
研究所に昭和６０年９月７日、保管委託申請し、受託番
号は、微工研菌寄第８４４２号である。なお、このＭＤ
７４３−ＧＦ４株は、平成３年１２月２５日に再寄託さ
れて微工研第１２６７６号の寄託番号が付与された。
放線菌は人工的に、また自然界で変異をおこしやすい
が、本発明にいうストレプトミセス・ナツシユビルエン
シスはその変異菌のすべてを包含する。本発明にいうＤ
−ベーターリジルメタンジアミン生産菌は、Ｄ−ベータ
ーリジルメタンジアミンを生産して上記のＭＤ７４３−
ＧＦ４株およびその変異菌と明確に区別されない菌株を
含めて、ストレプトミセス属に属してＤ−ベーターリジ
ルメタンジアミンを生産する菌株のすべてを包含する。
が、本発明にいうストレプトミセス・ナツシユビルエン
シスはその変異菌のすべてを包含する。本発明にいうＤ
−ベーターリジルメタンジアミン生産菌は、Ｄ−ベータ
ーリジルメタンジアミンを生産して上記のＭＤ７４３−
ＧＦ４株およびその変異菌と明確に区別されない菌株を
含めて、ストレプトミセス属に属してＤ−ベーターリジ
ルメタンジアミンを生産する菌株のすべてを包含する。
本発明の方法では、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミン
生産菌、特に前記のＭＤ７４３−ＧＦ４株を通常の微生
物が利用しうる栄養源含有培地に接種して、培養し、好
ましくは好気的条件下に発育させることによつて、主に
培養液中にＤ−ベーターリジルメタンジアミンを生産蓄
積させ、さらに培養物、特に培養液から目的物を分離す
る。
生産菌、特に前記のＭＤ７４３−ＧＦ４株を通常の微生
物が利用しうる栄養源含有培地に接種して、培養し、好
ましくは好気的条件下に発育させることによつて、主に
培養液中にＤ−ベーターリジルメタンジアミンを生産蓄
積させ、さらに培養物、特に培養液から目的物を分離す
る。
用いる培地中の栄養源としては、放線菌の栄養源として
用いられる公知のものが使用できる。例えば市販されて
いる大豆粉、落花生粉、棉実粉、乾燥酵母、ペプトン、
肉エキス、カゼイン、コーン・スチープ・リカー、硝酸
ソーダ、硫酸アンモンなどの窒素源、および市販されて
いるグルコース、ガラクトール、澱粉、グリセリン、マ
ルトース、デキストリン、燕糖、乳糖などの炭水化物、
あるいは大豆油、脂肪などの炭素源と、必要に応じて食
塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガ
ン、硫酸アンモニウム、燐酸塩などの無機塩類および各
種のアミノ酸などを使用できる。これらのものはＤ−ベ
ーターリジルメタンジアミン生産菌が利用し、Ｄ−ベー
ターリジルメタンジアミンの生産に役立つものであれば
良く、公知の放線菌の培養材料はすべて使用できる。そ
の大量生産には、液体通気攪拌培養が好ましく、培養温
度はＤ−ベーターリジルメタンジアミン生産菌が発育
し、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを生産する範囲
で適用しうるが、殊に好ましいのは２５〜３０℃であ
る。培養は普通、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンが
充分蓄積するまで継続され、通常２〜７日間の培養が行
なわれる。
用いられる公知のものが使用できる。例えば市販されて
いる大豆粉、落花生粉、棉実粉、乾燥酵母、ペプトン、
肉エキス、カゼイン、コーン・スチープ・リカー、硝酸
ソーダ、硫酸アンモンなどの窒素源、および市販されて
いるグルコース、ガラクトール、澱粉、グリセリン、マ
ルトース、デキストリン、燕糖、乳糖などの炭水化物、
あるいは大豆油、脂肪などの炭素源と、必要に応じて食
塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガ
ン、硫酸アンモニウム、燐酸塩などの無機塩類および各
種のアミノ酸などを使用できる。これらのものはＤ−ベ
ーターリジルメタンジアミン生産菌が利用し、Ｄ−ベー
ターリジルメタンジアミンの生産に役立つものであれば
良く、公知の放線菌の培養材料はすべて使用できる。そ
の大量生産には、液体通気攪拌培養が好ましく、培養温
度はＤ−ベーターリジルメタンジアミン生産菌が発育
し、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを生産する範囲
で適用しうるが、殊に好ましいのは２５〜３０℃であ
る。培養は普通、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンが
充分蓄積するまで継続され、通常２〜７日間の培養が行
なわれる。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの定量は、試験菌と
してバシルス・サブチリスＰＣＩ２１９株を使用して、
抗生物質の定量に用いられる通常の円筒平板法によつて
行ない、本発明で得られた精製Ｄ−ベーターリジルメタ
ンジアミンを1000mcg（単位）／mgとして標準物質とし
た。
してバシルス・サブチリスＰＣＩ２１９株を使用して、
抗生物質の定量に用いられる通常の円筒平板法によつて
行ない、本発明で得られた精製Ｄ−ベーターリジルメタ
ンジアミンを1000mcg（単位）／mgとして標準物質とし
た。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンおよびその塩は水に
よく溶け、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミン生産菌の
培養物中に、主として液体部分中に存在する。液体中の
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは実質的にブタノー
ル、酢酸ブチル、クロロホルムなどの有機溶媒に抽出さ
れないので、これらの溶媒による処理は夾雑物の除去の
ために必要ならば利用できる。培養液あるいは水溶液中
のＤ−ベーターリジルメタンジアミンは種々の吸着剤を
用いて吸着することにより採取することができる。吸着
剤として活性炭を使用した場合、吸着した抗生物質は弱
酸性水および弱酸性のメタノール水、プロパノール水、
アセトン水などで溶出される。
よく溶け、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミン生産菌の
培養物中に、主として液体部分中に存在する。液体中の
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは実質的にブタノー
ル、酢酸ブチル、クロロホルムなどの有機溶媒に抽出さ
れないので、これらの溶媒による処理は夾雑物の除去の
ために必要ならば利用できる。培養液あるいは水溶液中
のＤ−ベーターリジルメタンジアミンは種々の吸着剤を
用いて吸着することにより採取することができる。吸着
剤として活性炭を使用した場合、吸着した抗生物質は弱
酸性水および弱酸性のメタノール水、プロパノール水、
アセトン水などで溶出される。
また、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンはその塩基性
の性状にもとづいて、収率よく陽イオン交換樹脂に吸着
され適当な溶出剤で溶出される。この吸着溶出法は大量
の培養液より採取するのに最も適した方法である。陽イ
オン交換体としては、カルボン酸を活性基とするアンバ
ーライトＩＲＣ−５０，ＣＧ−５０（ローム・アンド・
ハース社製），レワチツトＣＮＰ（バイエル社製）、Ｃ
Ｍ−セフアデツクス（フアルマシア社製）などのＨ型，
Ｎａ型，ＮＨ４型などおよびそれらの混合型が用いら
れ、吸着した抗生物質は酸性水、稀アンモニア水および
無機塩の水溶液などによつて収率よく溶出され、通常
０．２−１Ｎ塩酸および０．２Ｎ−１Ｎアンモニア水が
使用される。Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは実質
的に陰イオン交換樹脂に吸着しないので、その酸性溶液
の中和や、酸性の夾雑物を除去するのに好ましい材料で
ある。
の性状にもとづいて、収率よく陽イオン交換樹脂に吸着
され適当な溶出剤で溶出される。この吸着溶出法は大量
の培養液より採取するのに最も適した方法である。陽イ
オン交換体としては、カルボン酸を活性基とするアンバ
ーライトＩＲＣ−５０，ＣＧ−５０（ローム・アンド・
ハース社製），レワチツトＣＮＰ（バイエル社製）、Ｃ
Ｍ−セフアデツクス（フアルマシア社製）などのＨ型，
Ｎａ型，ＮＨ４型などおよびそれらの混合型が用いら
れ、吸着した抗生物質は酸性水、稀アンモニア水および
無機塩の水溶液などによつて収率よく溶出され、通常
０．２−１Ｎ塩酸および０．２Ｎ−１Ｎアンモニア水が
使用される。Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは実質
的に陰イオン交換樹脂に吸着しないので、その酸性溶液
の中和や、酸性の夾雑物を除去するのに好ましい材料で
ある。
Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンは上述の抽出法、分
離法を適宜組合せ、あるいは繰返すことによつて純粋に
採取することができる。
離法を適宜組合せ、あるいは繰返すことによつて純粋に
採取することができる。
以下に本発明を実施例を示して説明するが、Ｄ−ベータ
ーリジルメタンジアミンの性状が本発明によつて明らか
にされたので、それらの性状にもとずきＤ−ベーターリ
ジルメタンジアミンの製造法を種々考案することができ
る。従つて、本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段は勿論、本発明によつて明らかに
されたＤ−ベーターリジルメタンジアミンの性状にもと
ずいて公知の手段を施してＤ−ベーターリジルメタンジ
アミンを生産、濃縮、抽出、精製する方法をすべて包括
する。
ーリジルメタンジアミンの性状が本発明によつて明らか
にされたので、それらの性状にもとずきＤ−ベーターリ
ジルメタンジアミンの製造法を種々考案することができ
る。従つて、本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段は勿論、本発明によつて明らかに
されたＤ−ベーターリジルメタンジアミンの性状にもと
ずいて公知の手段を施してＤ−ベーターリジルメタンジ
アミンを生産、濃縮、抽出、精製する方法をすべて包括
する。
実施例１ 寒天斜面培地に培養したストレプトミセス・ナツシユビ
ルエンシスＭＤ７４３−ＧＦ４株（微工研菌寄第８４４
２号）を、ガラクトース2.0％、デキストリン2.0％、ペ
プトン（バクトソイトン、デイフコ製）1.0％、コーン
・ステイープ・リカー（味の素製）0.5％、硫酸アンモ
ニウム0.2％、炭酸カルシウム0.2％を含む液体培地（５
００ml三角フラスコ中１１０ml）に接種し、２８℃で２
日間回転振盪培養（毎分１８０回転）して種培養を得
た。この種培養各２mlを上記と同様の培地（１１０ml）
に接種し、同様の条件で９０本の三角フラスコを３日間
培養した。
ルエンシスＭＤ７４３−ＧＦ４株（微工研菌寄第８４４
２号）を、ガラクトース2.0％、デキストリン2.0％、ペ
プトン（バクトソイトン、デイフコ製）1.0％、コーン
・ステイープ・リカー（味の素製）0.5％、硫酸アンモ
ニウム0.2％、炭酸カルシウム0.2％を含む液体培地（５
００ml三角フラスコ中１１０ml）に接種し、２８℃で２
日間回転振盪培養（毎分１８０回転）して種培養を得
た。この種培養各２mlを上記と同様の培地（１１０ml）
に接種し、同様の条件で９０本の三角フラスコを３日間
培養した。
この培養液を集め過して9000mlの液（pH６．０，
８．０mcg／ml）を得た。この液をアンバーライトＩ
ＲＣ−５０（ＮＨ４型：Ｈ型，７：３）５５０mlを充填
した塔に通過、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを吸
着せしめ、水洗（1.100ml）後、１．２Ｎアンモニア水
で溶出した。活性溶離液（1370ml）を集めて減圧濃縮乾
燥し、粗粉末６３６mg（６４４mcg／mg）を得た。
８．０mcg／ml）を得た。この液をアンバーライトＩ
ＲＣ−５０（ＮＨ４型：Ｈ型，７：３）５５０mlを充填
した塔に通過、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンを吸
着せしめ、水洗（1.100ml）後、１．２Ｎアンモニア水
で溶出した。活性溶離液（1370ml）を集めて減圧濃縮乾
燥し、粗粉末６３６mg（６４４mcg／mg）を得た。
この粗粉末を１０mgの水にとかし、アンバーライトＣＧ
−５０（ＮＨ４型）６０mlをつめた塔にかけて吸着せし
め、水１２０ml（分面１−１８）、０．６Ｎアンモニア
水３００ml（分画１９−６０）で洗浄後、１．２Ｎアン
モニア水３００ml（分画６１−１０１）で溶出した。分
画７７−９５を合して減圧濃縮乾固し、さらに乾燥する
と、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの1/2炭酸塩が
無色の粉末状物質（吸湿性）として得られた。収量は３
７０mg（1,000mcg／mg）で培養液よりの収率が５０．８
％であつた。この物質の比旋光度〔α〕D 26−７．４°
（ｃ０．５，水）を示した。なお、この物質は吸湿する
と無色あめ状になつた。
−５０（ＮＨ４型）６０mlをつめた塔にかけて吸着せし
め、水１２０ml（分面１−１８）、０．６Ｎアンモニア
水３００ml（分画１９−６０）で洗浄後、１．２Ｎアン
モニア水３００ml（分画６１−１０１）で溶出した。分
画７７−９５を合して減圧濃縮乾固し、さらに乾燥する
と、Ｄ−ベーターリジルメタンジアミンの1/2炭酸塩が
無色の粉末状物質（吸湿性）として得られた。収量は３
７０mg（1,000mcg／mg）で培養液よりの収率が５０．８
％であつた。この物質の比旋光度〔α〕D 26−７．４°
（ｃ０．５，水）を示した。なお、この物質は吸湿する
と無色あめ状になつた。
第１図は本発明によるＤ−ベーターリジルメタンジアミ
ン炭酸塩の臭化カリウム錠中で測定した赤外部吸収スペ
クトル曲線を示す。
ン炭酸塩の臭化カリウム錠中で測定した赤外部吸収スペ
クトル曲線を示す。
Claims (2)
- 【請求項１】次式(I) で表わされるＤ−ベーターリジルメタンジアミンおよび
その酸付加塩。 - 【請求項２】ストレプトミセス属に属するＤ−ベーター
リジルメタンジアミンの生産菌を培養し、その培養物か
らＤ−ベーターリジルメタンジアミンを採取することを
特徴とするＤ−ベーターリジルメタンジアミンの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25370085A JPH0629227B2 (ja) | 1985-11-14 | 1985-11-14 | Ｄ−ベ−タ−リジルメタンジアミンおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25370085A JPH0629227B2 (ja) | 1985-11-14 | 1985-11-14 | Ｄ−ベ−タ−リジルメタンジアミンおよびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62114947A JPS62114947A (ja) | 1987-05-26 |
| JPH0629227B2 true JPH0629227B2 (ja) | 1994-04-20 |
Family
ID=17254934
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25370085A Expired - Lifetime JPH0629227B2 (ja) | 1985-11-14 | 1985-11-14 | Ｄ−ベ−タ−リジルメタンジアミンおよびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0629227B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05178743A (ja) * | 1991-12-27 | 1993-07-20 | Microbial Chem Res Found | エイズウイルス感染阻害剤 |
| JPH0859588A (ja) * | 1994-08-24 | 1996-03-05 | Microbial Chem Res Found | Ｄ−β−リジルメタンジアミン誘導体、およびそれらの製法 |
-
1985
- 1985-11-14 JP JP25370085A patent/JPH0629227B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62114947A (ja) | 1987-05-26 |
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