JPH06345794A - ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体 - Google Patents
ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体Info
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
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- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は修飾ＤＮＡの合成に際して重要とな
るヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体を提供するもの
である。 【構成】 非放射性標識がリンカーを介して２'-又は
３'-水酸基に導入されたヌクレオシド又はヌクレオチド
誘導体。 【効果】 本発明の誘導体を用いれば、非放射性標識を
オリゴマー中の任意の位置に任意の数だけ導入すること
ができるうえ、核酸本来の機能を損なう可能性も低く、
誘導体自身も安価に製造出来る。
るヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体を提供するもの
である。 【構成】 非放射性標識がリンカーを介して２'-又は
３'-水酸基に導入されたヌクレオシド又はヌクレオチド
誘導体。 【効果】 本発明の誘導体を用いれば、非放射性標識を
オリゴマー中の任意の位置に任意の数だけ導入すること
ができるうえ、核酸本来の機能を損なう可能性も低く、
誘導体自身も安価に製造出来る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、たとえばＤＮＡ診断薬
の開発に利用するために必要な、オリゴマー中の任意の
位置に任意の数の非放射性標識を導入した、修飾ＤＮＡ
の合成に際して重要となるヌクレオシド及びヌクレオチ
ド誘導体を提供するものであり、医薬業界で広く利用さ
れるものである。
の開発に利用するために必要な、オリゴマー中の任意の
位置に任意の数の非放射性標識を導入した、修飾ＤＮＡ
の合成に際して重要となるヌクレオシド及びヌクレオチ
ド誘導体を提供するものであり、医薬業界で広く利用さ
れるものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、分子生物学の発展にともなって、
いわゆるＤＮＡプローブ法を用いた診断薬などの研究が
活発に行われている。これらの分野では、有機化学的合
成、生化学的合成を問わず、天然型ＤＮＡだけでなく特
定の修飾を施した、すなわち、チオール又はアミノリン
カー、あるいは非同位体標識を導入したＤＮＡが研究材
料として盛んに用いられており、その需要は急速に高ま
っている。これに対応して、有機合成化学の分野では、
修飾ＤＮＡの合成原料として用いることができる各種の
ヌクレオシド誘導体の合成研究が行われてきた。すなわ
ち、核酸塩基部にリンカーあるいは非同位体標識を導入
したヌクレオシドの合成研究であり、下記の文献等にそ
の代表的成果を見ることができる。 J-P. Roduit, et al. Nucleosides, Nucleotides, 6, 3
49(1987) J. Haralambidis, et al. Nucleic Acids Res., 15, 48
57(1987) Institut Pasteur, WO-88/00593 A. F. Cook, et al. Nucleic Acids Res., 16, 4077(19
88) A. Roget, et al. Nucleic Acids Res., 17, 7643(198
9)コハ゜ニー・オリ・インタ゛ストリー・ソシエテ・アノニム , 公表特許公報 平３−５
０５２０９ これらの業績は、分子生物学の分野に対して新規な修飾
ＤＮＡを提供することで、多大な貢献をしてきたもので
ある。しかしながら、上記の文献等に記載されたヌクレ
オシド誘導体は、その合成経路において、高価なハロゲ
ン化あるいはチオ化されたヌクレオシド又は核酸塩基を
必要としているため、それらを用いて合成された修飾Ｄ
ＮＡも高価なものとなり、また、核酸塩基部にリンカー
あるいは非放射性標識を導入した場合、核酸塩基が持つ
水素結合性等の機能に変化を生じさせる恐れも否定でき
ない。
いわゆるＤＮＡプローブ法を用いた診断薬などの研究が
活発に行われている。これらの分野では、有機化学的合
成、生化学的合成を問わず、天然型ＤＮＡだけでなく特
定の修飾を施した、すなわち、チオール又はアミノリン
カー、あるいは非同位体標識を導入したＤＮＡが研究材
料として盛んに用いられており、その需要は急速に高ま
っている。これに対応して、有機合成化学の分野では、
修飾ＤＮＡの合成原料として用いることができる各種の
ヌクレオシド誘導体の合成研究が行われてきた。すなわ
ち、核酸塩基部にリンカーあるいは非同位体標識を導入
したヌクレオシドの合成研究であり、下記の文献等にそ
の代表的成果を見ることができる。 J-P. Roduit, et al. Nucleosides, Nucleotides, 6, 3
49(1987) J. Haralambidis, et al. Nucleic Acids Res., 15, 48
57(1987) Institut Pasteur, WO-88/00593 A. F. Cook, et al. Nucleic Acids Res., 16, 4077(19
88) A. Roget, et al. Nucleic Acids Res., 17, 7643(198
9)コハ゜ニー・オリ・インタ゛ストリー・ソシエテ・アノニム , 公表特許公報 平３−５
０５２０９ これらの業績は、分子生物学の分野に対して新規な修飾
ＤＮＡを提供することで、多大な貢献をしてきたもので
ある。しかしながら、上記の文献等に記載されたヌクレ
オシド誘導体は、その合成経路において、高価なハロゲ
ン化あるいはチオ化されたヌクレオシド又は核酸塩基を
必要としているため、それらを用いて合成された修飾Ｄ
ＮＡも高価なものとなり、また、核酸塩基部にリンカー
あるいは非放射性標識を導入した場合、核酸塩基が持つ
水素結合性等の機能に変化を生じさせる恐れも否定でき
ない。
【０００３】他の研究者らは、核酸塩基部ではなく、ヌ
クレオシドを構成するフラノース環の特定部分に非放射
性標識等を導入する方法を開発しており、次の公報にそ
の内容が開示されている。カルホルニア・インステイテュート・オフ゛・テクノロシ゛ー , 公開特許公報 平４−
６０６００ヘキスト・アクチエンケ゛セ゛ルシヤフト , 公開特許公報 平４−２９０８９
６ しかしこれらの誘導体は、フラノース環の水酸基をアミ
ノ基またはチオール基に変換したことにその構造的特徴
があり、リンカー（スペーサー）部分が含まれていな
い。したがって、これらの誘導体は、J Haralambidisら
が主張する(Nucleic AcidsRes.,15,4857(1987)）、長鎖
のリンカーを有している修飾ＤＮＡほど二本鎖形成能が
高いという問題に満足な解答を与えるものではない。
クレオシドを構成するフラノース環の特定部分に非放射
性標識等を導入する方法を開発しており、次の公報にそ
の内容が開示されている。カルホルニア・インステイテュート・オフ゛・テクノロシ゛ー , 公開特許公報 平４−
６０６００ヘキスト・アクチエンケ゛セ゛ルシヤフト , 公開特許公報 平４−２９０８９
６ しかしこれらの誘導体は、フラノース環の水酸基をアミ
ノ基またはチオール基に変換したことにその構造的特徴
があり、リンカー（スペーサー）部分が含まれていな
い。したがって、これらの誘導体は、J Haralambidisら
が主張する(Nucleic AcidsRes.,15,4857(1987)）、長鎖
のリンカーを有している修飾ＤＮＡほど二本鎖形成能が
高いという問題に満足な解答を与えるものではない。
【０００４】本発明者らは、分子生物学の分野で需要が
急速に高まっている修飾ＤＮＡを提供するに際して必要
となるヌクレオシド誘導体において、入手容易な天然型
ヌクレオシドを出発物質として、核酸塩基部ではなく、
ヌクレオシドを構成するフラノース環の特定部分にチオ
ールリンカーまたはアミノリンカー、あるいは、いずれ
かのリンカーを介して非放射性標識が結合した誘導体の
合成方法及びその合成中間体を開発することに成功し、
先にその発明に関し二つの出願を行った（平成５年３月
９日出願）。
急速に高まっている修飾ＤＮＡを提供するに際して必要
となるヌクレオシド誘導体において、入手容易な天然型
ヌクレオシドを出発物質として、核酸塩基部ではなく、
ヌクレオシドを構成するフラノース環の特定部分にチオ
ールリンカーまたはアミノリンカー、あるいは、いずれ
かのリンカーを介して非放射性標識が結合した誘導体の
合成方法及びその合成中間体を開発することに成功し、
先にその発明に関し二つの出願を行った（平成５年３月
９日出願）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記し
た分子生物学の分野で需要が急速に高まっている修飾Ｄ
ＮＡを提供するに際して必要となるヌクレオシド、ヌク
レオチド誘導体を、先に開発したものよりさらに簡便か
つ安価に合成することを課題として研究を行ったのであ
る。
た分子生物学の分野で需要が急速に高まっている修飾Ｄ
ＮＡを提供するに際して必要となるヌクレオシド、ヌク
レオチド誘導体を、先に開発したものよりさらに簡便か
つ安価に合成することを課題として研究を行ったのであ
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、核酸塩基
部ではなく、ヌクレオシドを構成するフラノース環の特
定部分に非放射性標識が結合したヌクレオシド、ヌクレ
オチド誘導体をさらに簡便かつ安価に合成することに成
功し、本発明を完成したのである。すなわち、本発明は
次の式［Ｉ］で示されるヌクレオシド又はヌクレオチド
誘導体に関するものである。
部ではなく、ヌクレオシドを構成するフラノース環の特
定部分に非放射性標識が結合したヌクレオシド、ヌクレ
オチド誘導体をさらに簡便かつ安価に合成することに成
功し、本発明を完成したのである。すなわち、本発明は
次の式［Ｉ］で示されるヌクレオシド又はヌクレオチド
誘導体に関するものである。
【０００７】
【化２】
【０００８】但し、式中のＢはプリン又はピリミジン塩
基、Ｒ1は水素原子、水酸基の保護基、リン酸残基、二
リン酸残基又は三リン酸残基であり、Ｒ2、Ｒ3はいずれ
か一方が水素原子又は水酸基の保護基で、他方が(Ｃ
Ｈ2)nＲ4であり、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ4
は酸素原子を介して結合されたフェノール性水酸基又は
カルボキシル基を有する非放射性標識を示す。
基、Ｒ1は水素原子、水酸基の保護基、リン酸残基、二
リン酸残基又は三リン酸残基であり、Ｒ2、Ｒ3はいずれ
か一方が水素原子又は水酸基の保護基で、他方が(Ｃ
Ｈ2)nＲ4であり、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ4
は酸素原子を介して結合されたフェノール性水酸基又は
カルボキシル基を有する非放射性標識を示す。
【０００９】○式［Ｉ］で示される誘導体の合成方法 式［Ｉ］で示されるヌクレオシド、ヌクレオチド誘導体
は、たとえば、次の式［II］で示されるヌクレオシド、
ヌクレオチド誘導体を経由して、フェノール性水酸基ま
たはカルボキシル基を有する非放射性標識との間でハロ
ゲン化水素の脱離による求核置換反応により合成するこ
とができる。
は、たとえば、次の式［II］で示されるヌクレオシド、
ヌクレオチド誘導体を経由して、フェノール性水酸基ま
たはカルボキシル基を有する非放射性標識との間でハロ
ゲン化水素の脱離による求核置換反応により合成するこ
とができる。
【００１０】
【化３】
【００１１】但し、式中のＢ、Ｒ1は式［Ｉ］と同じで
あり、Ｒ5、Ｒ6はいずれか一方が水素原子又は水酸基の
保護基で、他方が(ＣＨ2)nＸであり、Ｘはハロゲン原子
を示す。
あり、Ｒ5、Ｒ6はいずれか一方が水素原子又は水酸基の
保護基で、他方が(ＣＨ2)nＸであり、Ｘはハロゲン原子
を示す。
【００１２】すなわち、３'-及び５'-水酸基を保護した
ヌクレオシド誘導体（式［II］においてＲ1及びＲ5が、
水酸基の保護基であり、Ｂのプリンまたはピリミジン残
基が好ましくはアデニン残基、グアニン残基、シトシン
残基及びウラシル残基であり、Ｘのハロゲン原子が好ま
しくは臭素原子である）とフェノール性水酸基又はカル
ボキシル基を有する非放射性標識とを、適当な溶媒中
で、塩基を作用させて（但し、フェノール性水酸基又は
カルボキシル基を有する非放射性標識が予め塩基との塩
を形成している場合は、さらに塩基を加えなくてもよ
い）、数時間から数日間反応させると、式［Ｉ］で示さ
れるヌクレオシドが合成される。酸素原子を介して結合
されるフェノール性水酸基又はカルボキシル基を有する
非放射性標識としては、ＤＮＡプローブの検出などに用
いることができるものであればその使用に格別の限定は
無いが、本発明にとり好ましいものは、フルオレセイ
ン、フルオレセインメチルエステル又はエチルエステル
である。この反応で用いる溶媒としては、本反応の進行
を妨害しないものの中から選択すれば良いが、なかで
も、テトラヒドロフラン、1,5-ジオキサン、テトラヒド
ロフラン／水、1,4-ジオキサン／水、ジメトキシエタ
ン、アセトン、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメチルス
ルホキシド、N,N-ジメチルホルムアミド／水混合物など
が好ましい。塩基としては、アルカリ金属の炭酸塩又は
重炭酸塩、金属水酸化物、水素化金属、アルキル金属、
グリニャール試薬などを用いることができ、好ましく
は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム又は水酸化テトラ-n-ブチルアンモ
ニウムである。又、触媒として、臭化テトラ-n-ブチル
アンモニウムあるいはテトラ-n-ブチルアンモニウム硫
酸水素塩、トリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチル]アミ
ン、ヨウ化カリウム、トリフェニルホスフィンあるいは
トリブチルホスフィンなどを加えると効果的であり、こ
れらの触媒は、単独または併用して用いることができ、
用いる量としては、それぞれ０.０５当量から２当量が
好ましい。反応温度は、室温から還流温度までを用いる
ことができる。水酸基の保護基としては、トリチル型保
護基、ベンジル及びアリル型保護基、アシル型保護基、
シリル型保護基などが例示され、本発明にとり好ましい
ものは、4,4'-ジメトキシトリチル基、4-メトキシトリ
チル基、および、tert-ブチルジメチルシリル基であ
る。水酸基の保護基の除去は、常法により行えば良く、
リン酸化反応あるいは三リン酸化反応などを行うと、式
［Ｉ］で示される各種のヌクレオシド、ヌクレオチド誘
導体が得られる。なお、これらの反応においては、必要
に応じてプリンまたはピリミジン残基に公知の方法によ
り保護基を導入することができる。Ｒ2、Ｒ3におけるア
ルキレン基の鎖長を示すｎは３以上の任意の整数を示す
ものであり、ｎが３未満のものは合成が殆ど不可能であ
り、原料入手の困難性を考慮すると本発明にとりｎが２
０以下の整数が好ましい。
ヌクレオシド誘導体（式［II］においてＲ1及びＲ5が、
水酸基の保護基であり、Ｂのプリンまたはピリミジン残
基が好ましくはアデニン残基、グアニン残基、シトシン
残基及びウラシル残基であり、Ｘのハロゲン原子が好ま
しくは臭素原子である）とフェノール性水酸基又はカル
ボキシル基を有する非放射性標識とを、適当な溶媒中
で、塩基を作用させて（但し、フェノール性水酸基又は
カルボキシル基を有する非放射性標識が予め塩基との塩
を形成している場合は、さらに塩基を加えなくてもよ
い）、数時間から数日間反応させると、式［Ｉ］で示さ
れるヌクレオシドが合成される。酸素原子を介して結合
されるフェノール性水酸基又はカルボキシル基を有する
非放射性標識としては、ＤＮＡプローブの検出などに用
いることができるものであればその使用に格別の限定は
無いが、本発明にとり好ましいものは、フルオレセイ
ン、フルオレセインメチルエステル又はエチルエステル
である。この反応で用いる溶媒としては、本反応の進行
を妨害しないものの中から選択すれば良いが、なかで
も、テトラヒドロフラン、1,5-ジオキサン、テトラヒド
ロフラン／水、1,4-ジオキサン／水、ジメトキシエタ
ン、アセトン、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメチルス
ルホキシド、N,N-ジメチルホルムアミド／水混合物など
が好ましい。塩基としては、アルカリ金属の炭酸塩又は
重炭酸塩、金属水酸化物、水素化金属、アルキル金属、
グリニャール試薬などを用いることができ、好ましく
は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム又は水酸化テトラ-n-ブチルアンモ
ニウムである。又、触媒として、臭化テトラ-n-ブチル
アンモニウムあるいはテトラ-n-ブチルアンモニウム硫
酸水素塩、トリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチル]アミ
ン、ヨウ化カリウム、トリフェニルホスフィンあるいは
トリブチルホスフィンなどを加えると効果的であり、こ
れらの触媒は、単独または併用して用いることができ、
用いる量としては、それぞれ０.０５当量から２当量が
好ましい。反応温度は、室温から還流温度までを用いる
ことができる。水酸基の保護基としては、トリチル型保
護基、ベンジル及びアリル型保護基、アシル型保護基、
シリル型保護基などが例示され、本発明にとり好ましい
ものは、4,4'-ジメトキシトリチル基、4-メトキシトリ
チル基、および、tert-ブチルジメチルシリル基であ
る。水酸基の保護基の除去は、常法により行えば良く、
リン酸化反応あるいは三リン酸化反応などを行うと、式
［Ｉ］で示される各種のヌクレオシド、ヌクレオチド誘
導体が得られる。なお、これらの反応においては、必要
に応じてプリンまたはピリミジン残基に公知の方法によ
り保護基を導入することができる。Ｒ2、Ｒ3におけるア
ルキレン基の鎖長を示すｎは３以上の任意の整数を示す
ものであり、ｎが３未満のものは合成が殆ど不可能であ
り、原料入手の困難性を考慮すると本発明にとりｎが２
０以下の整数が好ましい。
【００１３】○利用方法 本発明の２'-又は３'-水酸基に非放射性標識を有するヌ
クレオシド、ヌクレオチド誘導体は、ＤＮＡ、ＲＮＡな
どのオリゴマー中の任意の位置に任意の数の非放射性標
識を導入し、プローブの検出などに利用されるものであ
るが、ＤＮＡ、ＲＮＡなどのオリゴマーに導入するには
公知の方法を用いることができ、リン酸トリエステル
法、ホスホロアミダイト法、Ｈ−ホスホネート法あるい
はチオホスファイト法などの有機化学的手法および酵素
の作用を利用する生化学的手法を例示することができ
る。
クレオシド、ヌクレオチド誘導体は、ＤＮＡ、ＲＮＡな
どのオリゴマー中の任意の位置に任意の数の非放射性標
識を導入し、プローブの検出などに利用されるものであ
るが、ＤＮＡ、ＲＮＡなどのオリゴマーに導入するには
公知の方法を用いることができ、リン酸トリエステル
法、ホスホロアミダイト法、Ｈ−ホスホネート法あるい
はチオホスファイト法などの有機化学的手法および酵素
の作用を利用する生化学的手法を例示することができ
る。
【００１４】
【作用】本発明の２'-又は３'-水酸基に非放射性標識を
有するヌクレオシド、ヌクレオチド誘導体においては、
非放射性標識をオリゴマー中の任意の位置に任意の数だ
け導入することができること、及び、従来の核酸塩基部
に導入する方法あるいは、ヌクレオシドを構成するフラ
ノース環の特定部分に非放射性標識を直接導入する方法
に比較して、核酸本来の機能を損なう可能性が低いとい
う作用を示す。また、本発明の誘導体は、フルオレセイ
ンイソチオシアネートなどの高価な原料を用いることな
く、安価なフルオレセイン又はそのエステルを用いて製
造することができる。
有するヌクレオシド、ヌクレオチド誘導体においては、
非放射性標識をオリゴマー中の任意の位置に任意の数だ
け導入することができること、及び、従来の核酸塩基部
に導入する方法あるいは、ヌクレオシドを構成するフラ
ノース環の特定部分に非放射性標識を直接導入する方法
に比較して、核酸本来の機能を損なう可能性が低いとい
う作用を示す。また、本発明の誘導体は、フルオレセイ
ンイソチオシアネートなどの高価な原料を用いることな
く、安価なフルオレセイン又はそのエステルを用いて製
造することができる。
【００１５】
【実施例】以下、実施例により本発明で提供される２'-
又は３'-水酸基に非放射性標識を有するヌクレオシド、
ヌクレオチド誘導体の合成例について説明するが、本発
明は、これらの実施例に限定されるものではない。な
お、以下の構造式においては、次の略号を使用する。す
なわち、Ａｄ＝アデニン残基、Ｕｒ＝ウラシル残基、Ｍ
ＭＴｒ＝4-メトキシトリチル基、ＴＢＤＭＳ＝t-ブチル
ジメチルシリル基である。
又は３'-水酸基に非放射性標識を有するヌクレオシド、
ヌクレオチド誘導体の合成例について説明するが、本発
明は、これらの実施例に限定されるものではない。な
お、以下の構造式においては、次の略号を使用する。す
なわち、Ａｄ＝アデニン残基、Ｕｒ＝ウラシル残基、Ｍ
ＭＴｒ＝4-メトキシトリチル基、ＴＢＤＭＳ＝t-ブチル
ジメチルシリル基である。
【００１６】実施例１ 下記式で示される化合物１及び化合物２を以下の様にし
て合成した。
て合成した。
【００１７】
【化４】
【００１８】
【化５】
【００１９】５'-Ｏ-４-メトキシトリチル-２'-Ｏ-(５-
ブロモペンチル)ウリジン４.０７g(６.１１mmol)の1,4-
ジオキサン７０ml溶液に、フルオレセイン２ナトリウム
４.５９g(１２.２mmol)、水酸化ナトリウム０.２５g
(６.２５mmol)及びヨウ化カリウム１.０２g(６.１４mmo
l)の水２５ml溶液を滴下し、４８時間加熱還流した。放
冷後、５％クエン酸水溶液を加え、クロロホルムルで抽
出し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで
乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに
よる精製を行い、それぞれ燈褐色粉末状の化合物２種を
得た。ＮＭＲおよびＩＲ分析によりそれぞれ上記化合物
１及び２であることを確認した。化合物１の収量は１.
２０g(２１％)。化合物２の収量は０.４９g(９％)であ
った。1Ｈ−ＮＭＲのケミカルシフト、ＩＲシグナルの
波数及びシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を
以下に示し、ＩＲチャートを図１及び図２に示す。 化合物１1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.９７−２.０３ (６Ｈ，
ｍ) ３.２３−４.５５ (１３Ｈ，ｍ) ５.２５−５.５３ (１Ｈ，ｍ) ５.７３−６.００ (１Ｈ，ｍ) ６.４２−８.０８ (２５Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４１０，２９４０，１７７０，１
７１０，１６６０，１６１０，１４６０，１２５０，１
１８０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.４７ (クロロホルム：メタノール＝１０：１) 化合物２1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.６７−２.００ (６Ｈ，
ｍ) ３.２２−４.５７ (１３Ｈ，ｍ) ５.２０−５.５３ (１Ｈ，ｍ) ５.７７−６.０３ (１Ｈ，ｍ) ６.５０−８.４０ (２５Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４１０，２９３０，１７１０，１
６６０，１５９０，１４６０，１２５０，１１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.３９ (クロロホルム：メタノール＝１０：１)
ブロモペンチル)ウリジン４.０７g(６.１１mmol)の1,4-
ジオキサン７０ml溶液に、フルオレセイン２ナトリウム
４.５９g(１２.２mmol)、水酸化ナトリウム０.２５g
(６.２５mmol)及びヨウ化カリウム１.０２g(６.１４mmo
l)の水２５ml溶液を滴下し、４８時間加熱還流した。放
冷後、５％クエン酸水溶液を加え、クロロホルムルで抽
出し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで
乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに
よる精製を行い、それぞれ燈褐色粉末状の化合物２種を
得た。ＮＭＲおよびＩＲ分析によりそれぞれ上記化合物
１及び２であることを確認した。化合物１の収量は１.
２０g(２１％)。化合物２の収量は０.４９g(９％)であ
った。1Ｈ−ＮＭＲのケミカルシフト、ＩＲシグナルの
波数及びシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を
以下に示し、ＩＲチャートを図１及び図２に示す。 化合物１1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.９７−２.０３ (６Ｈ，
ｍ) ３.２３−４.５５ (１３Ｈ，ｍ) ５.２５−５.５３ (１Ｈ，ｍ) ５.７３−６.００ (１Ｈ，ｍ) ６.４２−８.０８ (２５Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４１０，２９４０，１７７０，１
７１０，１６６０，１６１０，１４６０，１２５０，１
１８０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.４７ (クロロホルム：メタノール＝１０：１) 化合物２1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.６７−２.００ (６Ｈ，
ｍ) ３.２２−４.５７ (１３Ｈ，ｍ) ５.２０−５.５３ (１Ｈ，ｍ) ５.７７−６.０３ (１Ｈ，ｍ) ６.５０−８.４０ (２５Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４１０，２９３０，１７１０，１
６６０，１５９０，１４６０，１２５０，１１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.３９ (クロロホルム：メタノール＝１０：１)
【００２０】実施例２ 下記式で示される化合物３を以下の様にして合成した。
【００２１】
【化６】
【００２２】実施例１で合成した化合物１の２.８０g
(３.０５mmol)をクロロホルム２０mlに溶解し、ギ酸２.
００ml(５３.０mmol)を加え、室温下で２．５時間攪拌
した後、水及び飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネ
シウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化合物０.７
１gを得た（収率３６％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析
により上記化合物３であることを確認した。1Ｈ−ＮＭ
Ｒシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およ
びシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に
示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図３に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3-ＣＤ3ＯＤ)δ：１.２３−２.１
３（６Ｈ，ｍ） ３.５０−４.３３（９Ｈ，ｍ） ５.６８（１Ｈ，ｄ） ５.８３（１Ｈ，ｄ） ６.３３−６.８０（６Ｈ，ｍ） ７.０７−７.３３（１Ｈ，ｍ） ７.４３−８.０７（４Ｈ，ｍ） ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４１０，２９４０，１７４０，１
７１０，１６６０，１４７０，１２５０，１１９０，１
１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５１ (クロロホルム：メタノール＝５：１)
(３.０５mmol)をクロロホルム２０mlに溶解し、ギ酸２.
００ml(５３.０mmol)を加え、室温下で２．５時間攪拌
した後、水及び飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネ
シウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化合物０.７
１gを得た（収率３６％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析
により上記化合物３であることを確認した。1Ｈ−ＮＭ
Ｒシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およ
びシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に
示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図３に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3-ＣＤ3ＯＤ)δ：１.２３−２.１
３（６Ｈ，ｍ） ３.５０−４.３３（９Ｈ，ｍ） ５.６８（１Ｈ，ｄ） ５.８３（１Ｈ，ｄ） ６.３３−６.８０（６Ｈ，ｍ） ７.０７−７.３３（１Ｈ，ｍ） ７.４３−８.０７（４Ｈ，ｍ） ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４１０，２９４０，１７４０，１
７１０，１６６０，１４７０，１２５０，１１９０，１
１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５１ (クロロホルム：メタノール＝５：１)
【００２３】実施例３ 下記式で示される化合物４を以下の様にして合成した。
【００２４】
【化７】
【００２５】実施例１で合成した化合物２の１.２５g
(１.３６mmol)をクロロホルム１０mlに溶解し、ギ酸１.
００ml(２６.５mmol)を加え、室温下で２.５時間攪拌し
た後、水および飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネ
シウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化合物０.３
３gを得た（収率３７％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析
により上記化合物４であることを確認した。1Ｈ−ＮＭ
Ｒシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およ
びシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に
示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図４に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3-ＣＤ3ＯＤ)δ：０.８７−１.８
３ (６Ｈ，ｍ) ３.３７−４.３３ (９Ｈ，ｍ) ５.７０ (１Ｈ，ｄ) ５.８７ (１Ｈ，ｄ) ６.３７−８.３７ (１１Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３９０，１７１０，１６６０，１
５９０，１４６０，１２６０，１２１０，１１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.１９ (クロロホルム：メタノール＝５：１)
(１.３６mmol)をクロロホルム１０mlに溶解し、ギ酸１.
００ml(２６.５mmol)を加え、室温下で２.５時間攪拌し
た後、水および飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネ
シウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化合物０.３
３gを得た（収率３７％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析
により上記化合物４であることを確認した。1Ｈ−ＮＭ
Ｒシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およ
びシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に
示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図４に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3-ＣＤ3ＯＤ)δ：０.８７−１.８
３ (６Ｈ，ｍ) ３.３７−４.３３ (９Ｈ，ｍ) ５.７０ (１Ｈ，ｄ) ５.８７ (１Ｈ，ｄ) ６.３７−８.３７ (１１Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３９０，１７１０，１６６０，１
５９０，１４６０，１２６０，１２１０，１１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.１９ (クロロホルム：メタノール＝５：１)
【００２６】実施例４ 下記式で示される化合物５を以下の様にして合成した。
【００２７】
【化８】
【００２８】まず、下記式で示される化合物６及び化合
物７を以下の様にして調製した。
物７を以下の様にして調製した。
【００２９】
【化９】
【００３０】
【化１０】
【００３１】アデノシン６.３６g(２３.８mmol)、1,10-
ジブロモデカン３５.７g(１１９mmol)のN,N-ジメチルホ
ルムアミド１００ml懸濁液に０℃で６０％油性水素化ナ
トリウム１.００g(２５.０mmol)を加え、室温下で３.５
時間攪拌した後、クロロホルムルで抽出し、飽和食塩水
で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、
無色結晶性の化合物二種を得た。1Ｈ−ＮＭＲ及びＩＲ
分析によりそれぞれ化合物６(収率３１％)及び化合物７
（収率３％）であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグ
ナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に示し
た。 化合物６1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：０.９０
−２.１０(１６Ｈ，ｍ) ３.１７−３.９０(７Ｈ，ｍ) ４.０７−４.２７(１Ｈ，ｍ) ４.３３−４.７７(３Ｈ，ｍ) ５.９８(１Ｈ，ｄ) ６.８３−７.２０(２Ｈ，ｂｒ) ８.１０(１Ｈ，ｓ) ８.１５(１Ｈ，ｓ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３３０，３１６０，２９３０，２
８５０，１６７０，１６００，１３３０，１３００，１
０９０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.３３（クロロホルム：メタノール＝１０：
１） 化合物７1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：１.００
−２.１０(１６Ｈ，ｍ) ３.１７−４.３３(９Ｈ，ｍ) ４.６７−５.０３(２Ｈ，ｍ) ５.８８(１Ｈ，ｄ) ６.７３−７.１７(２Ｈ，ｂｒ) ８.０６(１Ｈ，ｓ) ８.１３(１Ｈ，ｓ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３２０，３１７０，２９３０，２
８５０，１６９０，１６１０，１３４０，１３００，１
１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.２５（クロロホルム：メタノール＝１０：
１）
ジブロモデカン３５.７g(１１９mmol)のN,N-ジメチルホ
ルムアミド１００ml懸濁液に０℃で６０％油性水素化ナ
トリウム１.００g(２５.０mmol)を加え、室温下で３.５
時間攪拌した後、クロロホルムルで抽出し、飽和食塩水
で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、
無色結晶性の化合物二種を得た。1Ｈ−ＮＭＲ及びＩＲ
分析によりそれぞれ化合物６(収率３１％)及び化合物７
（収率３％）であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグ
ナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に示し
た。 化合物６1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：０.９０
−２.１０(１６Ｈ，ｍ) ３.１７−３.９０(７Ｈ，ｍ) ４.０７−４.２７(１Ｈ，ｍ) ４.３３−４.７７(３Ｈ，ｍ) ５.９８(１Ｈ，ｄ) ６.８３−７.２０(２Ｈ，ｂｒ) ８.１０(１Ｈ，ｓ) ８.１５(１Ｈ，ｓ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３３０，３１６０，２９３０，２
８５０，１６７０，１６００，１３３０，１３００，１
０９０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.３３（クロロホルム：メタノール＝１０：
１） 化合物７1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：１.００
−２.１０(１６Ｈ，ｍ) ３.１７−４.３３(９Ｈ，ｍ) ４.６７−５.０３(２Ｈ，ｍ) ５.８８(１Ｈ，ｄ) ６.７３−７.１７(２Ｈ，ｂｒ) ８.０６(１Ｈ，ｓ) ８.１３(１Ｈ，ｓ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３２０，３１７０，２９３０，２
８５０，１６９０，１６１０，１３４０，１３００，１
１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.２５（クロロホルム：メタノール＝１０：
１）
【００３２】つぎに、下記式で示される化合物８を以下
の様にして調製した。
の様にして調製した。
【００３３】
【化１１】
【００３４】フルオレセイン２ナトリウム５.１０g(１
３.６mmol)及びテトラ-n-ブチル硫酸水素塩４.６０g(１
３.５mmol)のイソプロピルアルコール−水（１：１）６
０ml溶液に硫酸ジエチル３.６０ml(２７.５mmol)を加
え、室温下で２時間攪拌した後、炭酸カリウム３.８０g
(２７.５mmol)及び硫酸ジエチル２.７０ml(２７.５mmo
l)を加えた。４５分間攪拌後、クロロホルムルで抽出
し、１０％クエン酸水溶液および飽和食塩水で洗浄し
た。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーによる精製およびアセトンか
らの再結晶を行い、赤褐色結晶性の化合物１.３０ｇを
得た（収率２７％）。1Ｈ−ＮＭＲ、紫外−可視吸光ス
ペクトルおよびＩＲ分析により化合物８であることを確
認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲ
シグナルの波数、紫外−可視吸光スペクトルの吸収波長
およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以
下に示し、1Ｈ−ＮＭＲ、紫外−可視吸光スペクトルの
チャートを図５および図６に示した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：０.９３
(３Ｈ，ｔ) ３.９７(２Ｈ，ｑ) ６.５０−７.８７(９Ｈ，ｍ) ８.０７−８.２７(１Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：１７２０，１６４０，１５９０，１
４６０，１２７０，１２１０，１１１０． 紫外−可視吸光スペクトル（メタノール）λｍａｘ：２
２９，４９８． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.３７（クロロホルム：メタノール＝１０：
１）
３.６mmol)及びテトラ-n-ブチル硫酸水素塩４.６０g(１
３.５mmol)のイソプロピルアルコール−水（１：１）６
０ml溶液に硫酸ジエチル３.６０ml(２７.５mmol)を加
え、室温下で２時間攪拌した後、炭酸カリウム３.８０g
(２７.５mmol)及び硫酸ジエチル２.７０ml(２７.５mmo
l)を加えた。４５分間攪拌後、クロロホルムルで抽出
し、１０％クエン酸水溶液および飽和食塩水で洗浄し
た。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーによる精製およびアセトンか
らの再結晶を行い、赤褐色結晶性の化合物１.３０ｇを
得た（収率２７％）。1Ｈ−ＮＭＲ、紫外−可視吸光ス
ペクトルおよびＩＲ分析により化合物８であることを確
認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲ
シグナルの波数、紫外−可視吸光スペクトルの吸収波長
およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以
下に示し、1Ｈ−ＮＭＲ、紫外−可視吸光スペクトルの
チャートを図５および図６に示した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：０.９３
(３Ｈ，ｔ) ３.９７(２Ｈ，ｑ) ６.５０−７.８７(９Ｈ，ｍ) ８.０７−８.２７(１Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：１７２０，１６４０，１５９０，１
４６０，１２７０，１２１０，１１１０． 紫外−可視吸光スペクトル（メタノール）λｍａｘ：２
２９，４９８． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.３７（クロロホルム：メタノール＝１０：
１）
【００３５】上記の様にして調製した化合物６の１.５
６g(３.２１mmol)、化合物８の１.７４g(４.８３mmo
l)、トリフェニルホスフィン０.８４g(３.２１mmol)及
び臭化テトラ-n-ブチルアンモニウム０.１０g(０.３２m
mol)のN,N-ジメチルホルムアミド１５ml懸濁液に炭酸カ
リウム２.２２g(１６.１mmol)を加え、９０℃で２４時
間攪拌後、放冷した。１０％炭酸ナトリウム水溶液を加
え、クロロホルムで抽出し、飽和食塩水で洗浄した。無
水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、残さをジクロロメ
タン２０mlに溶解し、イミダゾール０.７０g(１０.３mm
ol)及び塩化t-ブチルジメチルシリル１.５０ｇg(９.９
６mmol)を加え、室温で２４時間攪拌した。次に、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化合物１.
１１ｇを得た（収率３５％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ
分析により上記化合物５であることを確認した。1Ｈ−
ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数
およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以
下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図７に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.１２(１２Ｈ，ｓ) ０.８３−２.１５(３７Ｈ，ｍ) ３.３７−４.６８(１１Ｈ，ｍ) ５.７７−６.１８(３Ｈ，ｍ) ６.３８−７.００(６Ｈ，ｍ) ７.２２−７.７８(３Ｈ，ｍ) ８.００−８.３７(３Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３３０，２９３０，２８６０，１
７２０，１６４０，１６００，１５２０，１４７０，１
２５０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５１（クロロホルム：メタノール＝５：１）
６g(３.２１mmol)、化合物８の１.７４g(４.８３mmo
l)、トリフェニルホスフィン０.８４g(３.２１mmol)及
び臭化テトラ-n-ブチルアンモニウム０.１０g(０.３２m
mol)のN,N-ジメチルホルムアミド１５ml懸濁液に炭酸カ
リウム２.２２g(１６.１mmol)を加え、９０℃で２４時
間攪拌後、放冷した。１０％炭酸ナトリウム水溶液を加
え、クロロホルムで抽出し、飽和食塩水で洗浄した。無
水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、残さをジクロロメ
タン２０mlに溶解し、イミダゾール０.７０g(１０.３mm
ol)及び塩化t-ブチルジメチルシリル１.５０ｇg(９.９
６mmol)を加え、室温で２４時間攪拌した。次に、飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化合物１.
１１ｇを得た（収率３５％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ
分析により上記化合物５であることを確認した。1Ｈ−
ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数
およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以
下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図７に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.１２(１２Ｈ，ｓ) ０.８３−２.１５(３７Ｈ，ｍ) ３.３７−４.６８(１１Ｈ，ｍ) ５.７７−６.１８(３Ｈ，ｍ) ６.３８−７.００(６Ｈ，ｍ) ７.２２−７.７８(３Ｈ，ｍ) ８.００−８.３７(３Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３３０，２９３０，２８６０，１
７２０，１６４０，１６００，１５２０，１４７０，１
２５０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５１（クロロホルム：メタノール＝５：１）
【００３６】実施例５ 下記式で示される化合物９を以下の様にして合成した。
【００３７】
【化１２】
【００３８】まず、下記式で示される化合物１０を以下
の様にして調製した。
の様にして調製した。
【００３９】
【化１３】
【００４０】５'-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルウリジン
２５.５g(７１.１mmol)のテトラヒドロフラン１００ml
溶液に０℃で２.０Ｍ塩化-t-ブチルマグネシウム／テト
ラヒドロフラン溶液７５.０ml(１５０mmol)を滴下し、
３０分間攪拌後、同温で1,5-ジブロモペンタン８２.０g
(３５７mmol)のN,N-ジメチルホルムアミド１００ｍｌ溶
液加え、２１時間加熱還流した。放冷後、メタノール２
０mlを加えて不溶物を溶解した後、酢酸エチルで抽出
し、１０％クエン酸水溶液および飽和食塩水で洗浄し
た。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーによる精製を行い、無色液状
の化合物を得た（収率５０％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩ
Ｒ分析により化合物１０であることを確認した。1Ｈ−
ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数
およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以
下に示した。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.０８(６Ｈ，ｓ) ０.８９(９Ｈ，ｓ) １.３３−２.１７(６Ｈ，ｍ) ３.２０−４.４５(１０Ｈ，ｍ) ５.６０−５.９０(２Ｈ，ｍ) ７.８２(１Ｈ，ｄ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４３０，２９３０，１７１０，１
６６０，１４６０，１１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５３（クロロホルム：メタノール＝１０：
１）
２５.５g(７１.１mmol)のテトラヒドロフラン１００ml
溶液に０℃で２.０Ｍ塩化-t-ブチルマグネシウム／テト
ラヒドロフラン溶液７５.０ml(１５０mmol)を滴下し、
３０分間攪拌後、同温で1,5-ジブロモペンタン８２.０g
(３５７mmol)のN,N-ジメチルホルムアミド１００ｍｌ溶
液加え、２１時間加熱還流した。放冷後、メタノール２
０mlを加えて不溶物を溶解した後、酢酸エチルで抽出
し、１０％クエン酸水溶液および飽和食塩水で洗浄し
た。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーによる精製を行い、無色液状
の化合物を得た（収率５０％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩ
Ｒ分析により化合物１０であることを確認した。1Ｈ−
ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数
およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以
下に示した。1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ3)δ：０.０８(６Ｈ，ｓ) ０.８９(９Ｈ，ｓ) １.３３−２.１７(６Ｈ，ｍ) ３.２０−４.４５(１０Ｈ，ｍ) ５.６０−５.９０(２Ｈ，ｍ) ７.８２(１Ｈ，ｄ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３４３０，２９３０，１７１０，１
６６０，１４６０，１１００． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５３（クロロホルム：メタノール＝１０：
１）
【００４１】上記の様にして得られた化合物１０の１.
８０g(３.５５mmol)、前記化合物８の１.３５g(３.７５
mmol)、トリフェニルホスフィン０.９３g(３.５５mmol)
及び臭化テトラ-n-ブチルアンモニウム０.１２g(０.３
６mmol)のN,N-ジメチルホルムアミド１５ml懸濁液に炭
酸カリウム２.４５g(１７.７mmol)を加え、９０℃で１
０時間攪拌後、放冷した。次に、１.０Ｍフッ化テトラ-
n-ブチルアンモニウム／テトラヒドロフラン溶液５.０m
l(５.０mmol)を加え、室温で３．５時間攪拌後、クロロ
ホルムで抽出し、水および飽和食塩水で洗浄した。無水
硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化
合物１.１５ｇを得た（収率４８％）。1Ｈ−ＮＭＲおよ
びＩＲ分析により上記化合物９であることを確認した。
1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナル
の波数およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動
度を以下に示し、ＩＲチャートを図８に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：０.８２
−２.０５(９Ｈ，ｍ) ５.６３(１Ｈ，ｄ) ５.８８(１Ｈ，ｄ) ６.２０−８.３３(１１Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３９０，２９４０，１７１０，１
６６０，１６００，１５００，１４６０，１２５０，１
２１０，１１１０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５９（クロロホルム：メタノール＝５：１）
８０g(３.５５mmol)、前記化合物８の１.３５g(３.７５
mmol)、トリフェニルホスフィン０.９３g(３.５５mmol)
及び臭化テトラ-n-ブチルアンモニウム０.１２g(０.３
６mmol)のN,N-ジメチルホルムアミド１５ml懸濁液に炭
酸カリウム２.４５g(１７.７mmol)を加え、９０℃で１
０時間攪拌後、放冷した。次に、１.０Ｍフッ化テトラ-
n-ブチルアンモニウム／テトラヒドロフラン溶液５.０m
l(５.０mmol)を加え、室温で３．５時間攪拌後、クロロ
ホルムで抽出し、水および飽和食塩水で洗浄した。無水
硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィーによる精製を行い、燈褐色粉末状の化
合物１.１５ｇを得た（収率４８％）。1Ｈ−ＮＭＲおよ
びＩＲ分析により上記化合物９であることを確認した。
1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナル
の波数およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動
度を以下に示し、ＩＲチャートを図８に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3−ＤＭＳＯ−ｄ6)δ：０.８２
−２.０５(９Ｈ，ｍ) ５.６３(１Ｈ，ｄ) ５.８８(１Ｈ，ｄ) ６.２０−８.３３(１１Ｈ，ｍ) ＩＲ(ＫＢｒ)cm-1：３３９０，２９４０，１７１０，１
６６０，１６００，１５００，１４６０，１２５０，１
２１０，１１１０． シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｒｆ：０.５９（クロロホルム：メタノール＝５：１）
【００４２】実施例６ 下記式で示される化合物１１及び化合物１２を以下の様
にして合成した。
にして合成した。
【００４３】
【化１４】
【００４４】
【化１５】
【００４５】実施例５で合成した化合物９の６７３mg
(１.００mmol)をトリメチルホスフェート５mlに溶解
し、−１０〜−２０℃で、オキシ塩化リン０.１０ml
(１.０７mmol)を滴下し、同温で３０分間攪拌後、さら
にオキシ塩化リン０.１０ml(１.０７mmol)を滴下した。
室温下で５０分間攪拌した後、反応混合物を−１０〜−
２０℃で、１.０Ｍピロリン酸−トリス(トリ-n-ブチル
アンモニウム)／N,N-ジメチルホルムアミド溶液９.０ml
に滴下した。室温下で２時間攪拌した後、反応混合物を
０℃で、トリエチルアミン１.４０mlの水２０ml溶液に
加え、１５分間攪拌した後、４℃で２０時間放置した。
クロロホルムで抽出した後、有機層に、水２５ml、０.
５Ｍ炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウム水溶液(pＨ＝
９.０)１０ml及びアセトン２５mlを加えて攪拌した後、
水層を分取した。水層を高速液体クロマトグラフィーを
用い、下記条件で分析したところ、図９に示すチャート
が得られた。 カラム： ＯＤＳ−１５ 溶出溶媒： メタノール水溶液 ２０−４０％（２０
分） 検出波長： ２５４nm チャートスピード： ２.５mm/min ピークＩ及びピークIIをそれぞれ分取し、紫外−可視吸
光スペクトル及び31Ｐ−ＮＭＲ分析を行い、ピークＩが
化合物１１、ピークIIが化合物１２であることを確認し
た。紫外−可視吸光スペクトルの吸収波長および31Ｐ−
ＮＭＲのケミカルシフトを以下に示し、紫外−可視吸光
スペクトルのチャートを図１０および図１１に示した。 化合物１１ 紫外−可視吸光スペクトル（Ｈ2Ｏ)λｍａｘ：２２９，
２５４，４５４，４７７．31 Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：−２２.７， −１２.２，
−７.４ 化合物１２ 紫外−可視吸光スペクトル（Ｈ2Ｏ)λｍａｘ：２２８，
２５３，４５４，４７７．31 Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ： −１１.９， −７.９
(１.００mmol)をトリメチルホスフェート５mlに溶解
し、−１０〜−２０℃で、オキシ塩化リン０.１０ml
(１.０７mmol)を滴下し、同温で３０分間攪拌後、さら
にオキシ塩化リン０.１０ml(１.０７mmol)を滴下した。
室温下で５０分間攪拌した後、反応混合物を−１０〜−
２０℃で、１.０Ｍピロリン酸−トリス(トリ-n-ブチル
アンモニウム)／N,N-ジメチルホルムアミド溶液９.０ml
に滴下した。室温下で２時間攪拌した後、反応混合物を
０℃で、トリエチルアミン１.４０mlの水２０ml溶液に
加え、１５分間攪拌した後、４℃で２０時間放置した。
クロロホルムで抽出した後、有機層に、水２５ml、０.
５Ｍ炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウム水溶液(pＨ＝
９.０)１０ml及びアセトン２５mlを加えて攪拌した後、
水層を分取した。水層を高速液体クロマトグラフィーを
用い、下記条件で分析したところ、図９に示すチャート
が得られた。 カラム： ＯＤＳ−１５ 溶出溶媒： メタノール水溶液 ２０−４０％（２０
分） 検出波長： ２５４nm チャートスピード： ２.５mm/min ピークＩ及びピークIIをそれぞれ分取し、紫外−可視吸
光スペクトル及び31Ｐ−ＮＭＲ分析を行い、ピークＩが
化合物１１、ピークIIが化合物１２であることを確認し
た。紫外−可視吸光スペクトルの吸収波長および31Ｐ−
ＮＭＲのケミカルシフトを以下に示し、紫外−可視吸光
スペクトルのチャートを図１０および図１１に示した。 化合物１１ 紫外−可視吸光スペクトル（Ｈ2Ｏ)λｍａｘ：２２９，
２５４，４５４，４７７．31 Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：−２２.７， −１２.２，
−７.４ 化合物１２ 紫外−可視吸光スペクトル（Ｈ2Ｏ)λｍａｘ：２２８，
２５３，４５４，４７７．31 Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ： −１１.９， −７.９
【００４６】
【発明の効果】本発明で提供される２'-又は３'-水酸基
に非放射性標識を有するヌクレオシド、ヌクレオチド誘
導体を用いれば、非放射性標識をオリゴマー中の任意の
位置に任意の数だけ導入することができること、及び、
従来の核酸塩基部に導入する方法あるいは、ヌクレオシ
ドを構成するフラノース環の特定部分に非放射性標識を
直接導入する方法に比較して、核酸本来の機能を損なう
可能性が低いという特長を有しているため、その利用価
値は高い。又、フルオレセインイソチオシアネートなど
の高価な原料を用いることなく、安価なフルオレセイン
またはそのエステルを用いることができ安価に製造出来
るという特長を示す。
に非放射性標識を有するヌクレオシド、ヌクレオチド誘
導体を用いれば、非放射性標識をオリゴマー中の任意の
位置に任意の数だけ導入することができること、及び、
従来の核酸塩基部に導入する方法あるいは、ヌクレオシ
ドを構成するフラノース環の特定部分に非放射性標識を
直接導入する方法に比較して、核酸本来の機能を損なう
可能性が低いという特長を有しているため、その利用価
値は高い。又、フルオレセインイソチオシアネートなど
の高価な原料を用いることなく、安価なフルオレセイン
またはそのエステルを用いることができ安価に製造出来
るという特長を示す。
【図１】 図１は実施例１で得られた化合物１のＩＲ
チャート。
チャート。
【図２】 図２は実施例１で得られた化合物２のＩＲ
チャート。
チャート。
【図３】 図３は実施例２で得られた化合物３の1Ｈ
−ＮＭＲチャート。
−ＮＭＲチャート。
【図４】 図４は実施例３で得られた化合物４の1Ｈ
−ＮＭＲチャート。
−ＮＭＲチャート。
【図５】 図５は実施例４で調製した化合物８の1Ｈ
−ＮＭＲチャート。
−ＮＭＲチャート。
【図６】 図６は実施例４で調製した化合物８の紫外
−可視吸収スペクトルチャート。
−可視吸収スペクトルチャート。
【図７】 図７は実施例４で得られた化合物５の1Ｈ
−ＮＭＲチャート。
−ＮＭＲチャート。
【図８】 図８は実施例５で得られた化合物９のＩＲ
チャート。
チャート。
【図９】 図９は実施例６で得られた反応物のＨＰＬ
Ｃチャート。
Ｃチャート。
【図１０】 図１０は実施例６で得られた化合物１１の
紫外−可視吸収スペクトルチャート。
紫外−可視吸収スペクトルチャート。
【図１１】 図１０は実施例６で得られた化合物１２の
紫外−可視吸収スペクトルチャート。
紫外−可視吸収スペクトルチャート。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 7823−4Ｂ
Claims (1)
- 【請求項１】 次の式［Ｉ］で示されるヌクレオシド又
はヌクレオチド誘導体 【化１】 但し、式中のＢはプリン又はピリミジン塩基、Ｒ1は水
素原子、水酸基の保護基、リン酸残基、二リン酸残基又
は三リン酸残基であり、Ｒ2、Ｒ3はいずれか一方が水素
原子又は水酸基の保護基で、他方が(ＣＨ2)nＲ4であ
り、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ4は酸素原子を
介して結合されたフェノール性水酸基又はカルボキシル
基を有する非放射性標識を示す。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5160235A JPH06345794A (ja) | 1993-06-04 | 1993-06-04 | ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5160235A JPH06345794A (ja) | 1993-06-04 | 1993-06-04 | ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06345794A true JPH06345794A (ja) | 1994-12-20 |
Family
ID=15710629
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5160235A Pending JPH06345794A (ja) | 1993-06-04 | 1993-06-04 | ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06345794A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007017602A3 (fr) * | 2005-08-11 | 2007-08-02 | Synth Innove Lab | Marqueurs, leur procede de fabrication et leurs applications |
-
1993
- 1993-06-04 JP JP5160235A patent/JPH06345794A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007017602A3 (fr) * | 2005-08-11 | 2007-08-02 | Synth Innove Lab | Marqueurs, leur procede de fabrication et leurs applications |
| US8034626B2 (en) | 2005-08-11 | 2011-10-11 | Laboratoires Synth-Innove | Labels, their production process and their uses |
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