JPH06256380A - ヌクレオシド誘導体ならびにリンカーを有するヌクレオシド誘導体の合成方法 - Google Patents
ヌクレオシド誘導体ならびにリンカーを有するヌクレオシド誘導体の合成方法Info
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- JPH06256380A JPH06256380A JP5075129A JP7512993A JPH06256380A JP H06256380 A JPH06256380 A JP H06256380A JP 5075129 A JP5075129 A JP 5075129A JP 7512993 A JP7512993 A JP 7512993A JP H06256380 A JPH06256380 A JP H06256380A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は修飾ＤＮＡの合成に際して重要とな
るヌクレオシド誘導体を提供するものである。 【構成】 特定の構造式で示されるヌクレオシド誘導体
ならびに該誘導体を用いたリンカーを有するヌクレオシ
ド誘導体の合成方法。 【効果】 本発明で提供される２'-または３'-水酸基
にリンカーあるいは非放射性標識を有するヌクレオシド
誘導体によりリンカー、または、非放射性標識をオリゴ
マー中の任意の位置に任意の数だけ導入することがで
き、また、核酸本来の機能を損なう可能性も低いという
効果を奏することができる。
るヌクレオシド誘導体を提供するものである。 【構成】 特定の構造式で示されるヌクレオシド誘導体
ならびに該誘導体を用いたリンカーを有するヌクレオシ
ド誘導体の合成方法。 【効果】 本発明で提供される２'-または３'-水酸基
にリンカーあるいは非放射性標識を有するヌクレオシド
誘導体によりリンカー、または、非放射性標識をオリゴ
マー中の任意の位置に任意の数だけ導入することがで
き、また、核酸本来の機能を損なう可能性も低いという
効果を奏することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、たとえばＤＮＡ診断薬
の開発に利用するために必要な、オリゴマー中の任意の
位置に任意の数のアミノリンカーまたはチオールリンカ
ーあるいはそれらを介して非放射性標識を導入した、修
飾ＤＮＡの合成に際して重要となるヌクレオシド誘導体
および該ヌクレオシド誘導体を用いた合成方法を提供す
るものであり、医薬業界で広く利用されるものである。
の開発に利用するために必要な、オリゴマー中の任意の
位置に任意の数のアミノリンカーまたはチオールリンカ
ーあるいはそれらを介して非放射性標識を導入した、修
飾ＤＮＡの合成に際して重要となるヌクレオシド誘導体
および該ヌクレオシド誘導体を用いた合成方法を提供す
るものであり、医薬業界で広く利用されるものである。
【０００２】
【従来技術】近年、分子生物学の発展にともなって、い
わゆるＤＮＡプローブ法を用いた診断薬などの研究が活
発に行われている。これらの分野では、有機化学的合
成、生化学的合成を問わず、天然型ＤＮＡだけでなく特
定の修飾を施した、すなわち、チオールまたはアミノリ
ンカー、あるいは非同位体標識を導入したＤＮＡが研究
材料として盛んに用いられており、その需要は急速に高
まっている。この需要に対応するため、有機合成化学の
分野で、修飾ＤＮＡの合成原料として用いることができ
る各種のヌクレオシド誘導体の合成研究が盛んに行われ
てきた。すなわち、核酸塩基部にリンカーあるいは非同
位体標識を導入したヌクレオシドの合成研究であり、下
記の文献等にその代表的成果を見ることができる。 J-P. Roduit, et al., Nucleosides, Nucleotides, 6,
349(1987) J. Haralambidis, et al., Nucleic Acids Res., 15, 4
857(1987) Institut Pasteur, WO-88/00593 A. F. Cook, et al., Nucleic Acids Res., 16, 4077(1
988) A. Roget, et al., Nucleic Acids Res., 17, 7643(198
9)コハ゜ニー・オリ・インタ゛ストリー・ソシエテ・アノニム , 公表特許公報 平3-5052
09 これらの業績は、分子生物学の分野に対して新規な修飾
ＤＮＡを提供することで、多大な貢献をしてきているも
のである。しかしながら、上記の文献等に記載されたヌ
クレオシド誘導体は、その合成経路において、高価なハ
ロゲン化あるいはチオ化されたヌクレオシドまたは核酸
塩基を必要としているため、合成される修飾ＤＮＡも高
価なものとなり、また、核酸塩基部にリンカーあるいは
非放射性標識を導入した場合、核酸塩基が持つ水素結合
性等の機能に変化を生ずさせる恐れがあるものである。
わゆるＤＮＡプローブ法を用いた診断薬などの研究が活
発に行われている。これらの分野では、有機化学的合
成、生化学的合成を問わず、天然型ＤＮＡだけでなく特
定の修飾を施した、すなわち、チオールまたはアミノリ
ンカー、あるいは非同位体標識を導入したＤＮＡが研究
材料として盛んに用いられており、その需要は急速に高
まっている。この需要に対応するため、有機合成化学の
分野で、修飾ＤＮＡの合成原料として用いることができ
る各種のヌクレオシド誘導体の合成研究が盛んに行われ
てきた。すなわち、核酸塩基部にリンカーあるいは非同
位体標識を導入したヌクレオシドの合成研究であり、下
記の文献等にその代表的成果を見ることができる。 J-P. Roduit, et al., Nucleosides, Nucleotides, 6,
349(1987) J. Haralambidis, et al., Nucleic Acids Res., 15, 4
857(1987) Institut Pasteur, WO-88/00593 A. F. Cook, et al., Nucleic Acids Res., 16, 4077(1
988) A. Roget, et al., Nucleic Acids Res., 17, 7643(198
9)コハ゜ニー・オリ・インタ゛ストリー・ソシエテ・アノニム , 公表特許公報 平3-5052
09 これらの業績は、分子生物学の分野に対して新規な修飾
ＤＮＡを提供することで、多大な貢献をしてきているも
のである。しかしながら、上記の文献等に記載されたヌ
クレオシド誘導体は、その合成経路において、高価なハ
ロゲン化あるいはチオ化されたヌクレオシドまたは核酸
塩基を必要としているため、合成される修飾ＤＮＡも高
価なものとなり、また、核酸塩基部にリンカーあるいは
非放射性標識を導入した場合、核酸塩基が持つ水素結合
性等の機能に変化を生ずさせる恐れがあるものである。
【０００３】他の研究者らは、核酸塩基部ではなく、ヌ
クレオシドを構成するフラノース環の特定部分に非放射
性標識等を導入する方法を開発しており、次の公報にそ
の内容が開示されている。カルホルニア・インステイテュート・オフ゛・テクノロシ゛ー , 特許公報 平4-60600ヘキスト・アクチエンケ゛セ゛ルシヤフト , 公開特許公報 平4-290896 しかしこれらの誘導体は、フラノース環の水酸基をアミ
ノ基またはチオール基に変換したことにその構造的特徴
があり、リンカー（スペーサー）部分が含まれていな
い。したがって、これらの誘導体は、J Haralambidisら
が主張する(Nucleic AcidsRes.,15,4857(1987))、長鎖
のリンカーを有している修飾ＤＮＡほど二本鎖形成能が
高いという問題に対する満足な解答を与えるものではな
い。
クレオシドを構成するフラノース環の特定部分に非放射
性標識等を導入する方法を開発しており、次の公報にそ
の内容が開示されている。カルホルニア・インステイテュート・オフ゛・テクノロシ゛ー , 特許公報 平4-60600ヘキスト・アクチエンケ゛セ゛ルシヤフト , 公開特許公報 平4-290896 しかしこれらの誘導体は、フラノース環の水酸基をアミ
ノ基またはチオール基に変換したことにその構造的特徴
があり、リンカー（スペーサー）部分が含まれていな
い。したがって、これらの誘導体は、J Haralambidisら
が主張する(Nucleic AcidsRes.,15,4857(1987))、長鎖
のリンカーを有している修飾ＤＮＡほど二本鎖形成能が
高いという問題に対する満足な解答を与えるものではな
い。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、分子生
物学の分野で需要が急速に高まっている修飾ＤＮＡを提
供するに際して必要となるヌクレオシド誘導体におい
て、入手容易な天然型ヌクレオシドを出発物質として、
核酸塩基部ではなく、ヌクレオシドを構成するフラノー
ス環の特定部分にアミノリンカーまたはチオールリンカ
ー、あるいはそれらのリンカーを介して非放射性標識が
結合した誘導体の合成方法を提供すべく検討を行ったの
である。
物学の分野で需要が急速に高まっている修飾ＤＮＡを提
供するに際して必要となるヌクレオシド誘導体におい
て、入手容易な天然型ヌクレオシドを出発物質として、
核酸塩基部ではなく、ヌクレオシドを構成するフラノー
ス環の特定部分にアミノリンカーまたはチオールリンカ
ー、あるいはそれらのリンカーを介して非放射性標識が
結合した誘導体の合成方法を提供すべく検討を行ったの
である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため鋭意研究を行った結果、核酸塩基部では
なく、ヌクレオシドを構成するフラノース環の特定部分
にチオールリンカーまたはアミノリンカー、あるいは、
いずれかのリンカーを介して非放射性標識が結合したヌ
クレオシド誘導体の合成方法を開発することに成功し、
本発明を完成したのである。すなわち、本発明は次の式
［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体、および
を解決するため鋭意研究を行った結果、核酸塩基部では
なく、ヌクレオシドを構成するフラノース環の特定部分
にチオールリンカーまたはアミノリンカー、あるいは、
いずれかのリンカーを介して非放射性標識が結合したヌ
クレオシド誘導体の合成方法を開発することに成功し、
本発明を完成したのである。すなわち、本発明は次の式
［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体、および
【０００６】
【化３】
【０００７】但し、式中のＢは、プリンまたはピリミジ
ン塩基、Ｒ1 は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ2、
Ｒ3は、いずれか一方が水素原子で他方が（ＣＨ2)nＲ4
であり、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ4は、ハロ
ゲン原子を示す。
ン塩基、Ｒ1 は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ2、
Ｒ3は、いずれか一方が水素原子で他方が（ＣＨ2)nＲ4
であり、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ4は、ハロ
ゲン原子を示す。
【０００８】上記式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導
体のハロゲン原子をアミノ基またはチオール基で置換す
ることを特徴とする次の式［II］で示されるリンカーを
有するヌクレオシド誘導体の合成方法に関するものであ
る。
体のハロゲン原子をアミノ基またはチオール基で置換す
ることを特徴とする次の式［II］で示されるリンカーを
有するヌクレオシド誘導体の合成方法に関するものであ
る。
【０００９】
【化４】
【００１０】但し、式中のＢは、プリンまたはピリミジ
ン塩基、Ｒ1は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ5、Ｒ
6は、いずれか一方が水素原子で他方が（ＣＨ2)nＲ7で
あり、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ7は、保護基
もしくは非放射性標識を有することもあるアミノ基また
はチオール基を示す。
ン塩基、Ｒ1は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ5、Ｒ
6は、いずれか一方が水素原子で他方が（ＣＨ2)nＲ7で
あり、ｎは３以上の任意の整数を示し、Ｒ7は、保護基
もしくは非放射性標識を有することもあるアミノ基また
はチオール基を示す。
【００１１】 ○式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体の合成方法 式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体は、例えば、以
下の様にして、合成することができる。市販のリボヌク
レオシドを公知の方法（たとえば、H.G.Khorana, et.a
l.,J.Am. Chem. Soc., 84, 430(1962)及び86, 4188(196
4), K.K.Ogilvie, et.al.,Can.J.Chem., 56, 2768(197
8)および57, 2230(1979)）により調製した下記式 [III]
で示される5'-水酸基を保護したヌクレオシド誘導体
に、適当な有機溶媒中で、塩基を作用させてアルコキシ
ドを形成させる。
下の様にして、合成することができる。市販のリボヌク
レオシドを公知の方法（たとえば、H.G.Khorana, et.a
l.,J.Am. Chem. Soc., 84, 430(1962)及び86, 4188(196
4), K.K.Ogilvie, et.al.,Can.J.Chem., 56, 2768(197
8)および57, 2230(1979)）により調製した下記式 [III]
で示される5'-水酸基を保護したヌクレオシド誘導体
に、適当な有機溶媒中で、塩基を作用させてアルコキシ
ドを形成させる。
【００１２】
【化５】
【００１３】式中、Ｒ8は水酸基の保護基であり、Ｂは
プリンまたはピリミジン残基を示し、好ましくはアデニ
ン残基、グアニン残基、シトシン残基およびウラシル残
基である。
プリンまたはピリミジン残基を示し、好ましくはアデニ
ン残基、グアニン残基、シトシン残基およびウラシル残
基である。
【００１４】アルコキシドが形成されたヌクレオシド誘
導体に、Ｘ(ＣＨ2)nＸ（Ｘはハロゲン原子、好ましくは
臭素原子であり、ｎは３以上の整数である）およびN,N-
ジメチルホルムアミドを加えて数時間から数日間加熱還
流すると、上記式で示されたヌクレオシド誘導体の水酸
基に(ＣＨ2)nＸ基が導入された下記式［IV］または
［Ｖ］でで示される２種の誘導体が混合物として生成す
る。この混合物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により精製されそれぞれの化合物に単離できる。
導体に、Ｘ(ＣＨ2)nＸ（Ｘはハロゲン原子、好ましくは
臭素原子であり、ｎは３以上の整数である）およびN,N-
ジメチルホルムアミドを加えて数時間から数日間加熱還
流すると、上記式で示されたヌクレオシド誘導体の水酸
基に(ＣＨ2)nＸ基が導入された下記式［IV］または
［Ｖ］でで示される２種の誘導体が混合物として生成す
る。この混合物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により精製されそれぞれの化合物に単離できる。
【００１５】
【化６】
【００１６】
【化７】
【００１７】この反応で用いられる有機溶媒としては、
本反応の進行を妨害するものでなければ良いが、なかで
も、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン、ピリジン、
ジメトキシエタン、ジエチルエーテルおよびこれらの混
合物が好ましい。塩基としては、水素化金属、アルキル
金属、グリニャール試薬などを用いることができ、好ま
しくは、塩化tert-ブチルマグネシウム、塩化sec−ブチ
ルマグネシウム、tert-ブチルリチウム、sec-ブチルリ
チウムである。また、触媒として、臭化テトラn-ブチル
アンモニウム、トリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチル]
アミンなどを加えることもできる。水酸基の保護基とし
ては、トリチル型保護基、ベンジルおよびアリル型保護
基、アシル型保護基、シリル型保護基などが例示され、
本発明にとり好ましいものは、4,4'-ジメトキシトリチ
ル基、4-メトキシトリチル基、および、tert-ブチルジ
メチルシリル基である。
本反応の進行を妨害するものでなければ良いが、なかで
も、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン、ピリジン、
ジメトキシエタン、ジエチルエーテルおよびこれらの混
合物が好ましい。塩基としては、水素化金属、アルキル
金属、グリニャール試薬などを用いることができ、好ま
しくは、塩化tert-ブチルマグネシウム、塩化sec−ブチ
ルマグネシウム、tert-ブチルリチウム、sec-ブチルリ
チウムである。また、触媒として、臭化テトラn-ブチル
アンモニウム、トリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチル]
アミンなどを加えることもできる。水酸基の保護基とし
ては、トリチル型保護基、ベンジルおよびアリル型保護
基、アシル型保護基、シリル型保護基などが例示され、
本発明にとり好ましいものは、4,4'-ジメトキシトリチ
ル基、4-メトキシトリチル基、および、tert-ブチルジ
メチルシリル基である。
【００１８】 ○式［II］で示されるヌクレオシド誘導体の合成方法 前記式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体のハロゲン
原子をアミノ基またはチオール基で置換して前記式［I
I］で示されるヌクレオシド誘導体の合成は、たとえ
ば、以下の様にして行われる。前記方法で合成し単離精
製した前記式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体のう
ち、たとえば、式［IV］で示されるヌクレオシド誘導体
を用いて、ガブリエル反応（J.C.Sheehan, et.al., J.A
m.Chem.Soc.,72,2786(1950) およびD.Landini,et.al.,S
ynthesis, 389(1976)など）を行うと、下記式で示され
るN-アルキルフタルイミド誘導体が得られる。
原子をアミノ基またはチオール基で置換して前記式［I
I］で示されるヌクレオシド誘導体の合成は、たとえ
ば、以下の様にして行われる。前記方法で合成し単離精
製した前記式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘導体のう
ち、たとえば、式［IV］で示されるヌクレオシド誘導体
を用いて、ガブリエル反応（J.C.Sheehan, et.al., J.A
m.Chem.Soc.,72,2786(1950) およびD.Landini,et.al.,S
ynthesis, 389(1976)など）を行うと、下記式で示され
るN-アルキルフタルイミド誘導体が得られる。
【００１９】
【化８】
【００２０】得られたN-アルキルフタルイミド誘導体
は、常法により、フタロイル基を除去すると、前記式
［II］で示される2'-にアルキレン基を介してアミノ
基、保護基を有するアミノ基または、非放射性標識を有
するアミノ基が付加した各種のヌクレオシド誘導体を得
ることができる。アミノ基の保護基としては、トリチル
型保護基、ベンジルおよびアリル型保護基、アシル型保
護基、炭酸エステル型保護基などが例示され、本発明に
とり好ましいものは、フタロイル基、トリフルオロアセ
チル基、9-フルオレニルメトキシカルボニル基である。
非放射性標識としては、プローブの検出などに用いるこ
とができるものであり、ビオチン誘導体、ジニトロフェ
ニル誘導体、ダンシル誘導体、フルオロセイン誘導体、
ローダミン誘導体、アミノフルオレン誘導体などが例示
され、本発明にとり好ましいものは、ビオチニル、ダン
シル、フルオロセインイソチオシアニル、スルホローダ
ミニル(テキサスレッド)、または、2,4-ジニトロフェニ
ル基である。
は、常法により、フタロイル基を除去すると、前記式
［II］で示される2'-にアルキレン基を介してアミノ
基、保護基を有するアミノ基または、非放射性標識を有
するアミノ基が付加した各種のヌクレオシド誘導体を得
ることができる。アミノ基の保護基としては、トリチル
型保護基、ベンジルおよびアリル型保護基、アシル型保
護基、炭酸エステル型保護基などが例示され、本発明に
とり好ましいものは、フタロイル基、トリフルオロアセ
チル基、9-フルオレニルメトキシカルボニル基である。
非放射性標識としては、プローブの検出などに用いるこ
とができるものであり、ビオチン誘導体、ジニトロフェ
ニル誘導体、ダンシル誘導体、フルオロセイン誘導体、
ローダミン誘導体、アミノフルオレン誘導体などが例示
され、本発明にとり好ましいものは、ビオチニル、ダン
シル、フルオロセインイソチオシアニル、スルホローダ
ミニル(テキサスレッド)、または、2,4-ジニトロフェニ
ル基である。
【００２１】また、同様に式［Ｉ］で示されるヌクレオ
シド誘導体を用いて、常法によりチオールあるいはチオ
カルボン酸などと反応させ、精製物を単離すると、前記
式［II］で示される２'-にアルキレン基を介してチオー
ル基、保護基を有するチオール基または、非放射性標識
を有するチオール基が付加した各種のヌクレオシド誘導
体を得ることができる。チオール基の保護基は、通常の
有機合成手法で用いられるものであり、トリチル型保護
基、ベンジルおよびアリル型保護基、アシル型保護基、
マロネート型保護基、炭酸エステル型保護基などが例示
され、本発明にとり好ましいものは、アセチル基、ベン
ゾイル基またはトリチル基である。なお、これらの反応
においては、必要に応じてプリンまたはピリミジン残基
に公知の方法により保護基を導入することができる。ア
ルキル基の鎖長を示すｎは３以上の任意の整数を示すも
のであるが、原料入手の困難性を考慮すると、本発明に
とりｎが２０以下のものが好ましい。
シド誘導体を用いて、常法によりチオールあるいはチオ
カルボン酸などと反応させ、精製物を単離すると、前記
式［II］で示される２'-にアルキレン基を介してチオー
ル基、保護基を有するチオール基または、非放射性標識
を有するチオール基が付加した各種のヌクレオシド誘導
体を得ることができる。チオール基の保護基は、通常の
有機合成手法で用いられるものであり、トリチル型保護
基、ベンジルおよびアリル型保護基、アシル型保護基、
マロネート型保護基、炭酸エステル型保護基などが例示
され、本発明にとり好ましいものは、アセチル基、ベン
ゾイル基またはトリチル基である。なお、これらの反応
においては、必要に応じてプリンまたはピリミジン残基
に公知の方法により保護基を導入することができる。ア
ルキル基の鎖長を示すｎは３以上の任意の整数を示すも
のであるが、原料入手の困難性を考慮すると、本発明に
とりｎが２０以下のものが好ましい。
【００２２】○利用方法 本発明方法で得られる式［II］で示される２'-または
３'-水酸基にリンカーあるいはリンカーを介して非放射
性標識を有するヌクレオシド誘導体は、ＤＮＡ、ＲＮＡ
などのオリゴマー中の任意の位置に任意の数のチオール
リンカー、アミノリンカーあるいは非放射性標識を導入
し、他の物質との共有結合体の調製、あるいは、プロー
ブの検出などに利用されるものであるが、ＤＮＡ、ＲＮ
Ａなどのオリゴマーに導入するには公知の方法を用いる
ことができ、リン酸トリエステル法、ホスホロアミダイ
ト法、Ｈ−ホスホネート法あるいはチオホスファイト法
などの有機化学的手法および５'-三リン酸誘導体に変換
した後、酵素の作用を利用する生化学的手法を例示する
ことができる。
３'-水酸基にリンカーあるいはリンカーを介して非放射
性標識を有するヌクレオシド誘導体は、ＤＮＡ、ＲＮＡ
などのオリゴマー中の任意の位置に任意の数のチオール
リンカー、アミノリンカーあるいは非放射性標識を導入
し、他の物質との共有結合体の調製、あるいは、プロー
ブの検出などに利用されるものであるが、ＤＮＡ、ＲＮ
Ａなどのオリゴマーに導入するには公知の方法を用いる
ことができ、リン酸トリエステル法、ホスホロアミダイ
ト法、Ｈ−ホスホネート法あるいはチオホスファイト法
などの有機化学的手法および５'-三リン酸誘導体に変換
した後、酵素の作用を利用する生化学的手法を例示する
ことができる。
【００２３】
【作用】本発明によれば、従来の核酸塩基部に導入する
方法あるいは、ヌクレオシドを構成するフラノース環の
特定部分に非放射性標識を直接導入する方法に比較し
て、核酸本来の機能を損なう可能性が低く、リンカー、
または、非放射性標識をオリゴマー中の任意の位置に任
意の数だけ導入することができる２'-または、３'-−水
酸基にリンカーあるいは非放射性標識を有するヌクレオ
シド誘導体を容易に合成できるという優れた作用を示
す。
方法あるいは、ヌクレオシドを構成するフラノース環の
特定部分に非放射性標識を直接導入する方法に比較し
て、核酸本来の機能を損なう可能性が低く、リンカー、
または、非放射性標識をオリゴマー中の任意の位置に任
意の数だけ導入することができる２'-または、３'-−水
酸基にリンカーあるいは非放射性標識を有するヌクレオ
シド誘導体を容易に合成できるという優れた作用を示
す。
【００２４】
【実施例】以下、実施例により本発明で提供される２'
-、または、３'-水酸基にリンカーあるいは非放射性標
識を有するヌクレオシド誘導体の合成方法ならびに合成
に使用されるヌクレオシド誘導体およびその合成につい
て説明する。以下の実施例における構造式においては次
の略号を使用する。すなわち、Ａd＝アデニン残基、Ｕr
＝ウラシル残基、ＤＭＴr＝4,4'-ジメトキシトリチル
基、ＭＭＴr＝4-メトキシトリチル基、Ｔr＝トリチル基
である。なお本発明は、以下の実施例に限定されるもの
ではない。
-、または、３'-水酸基にリンカーあるいは非放射性標
識を有するヌクレオシド誘導体の合成方法ならびに合成
に使用されるヌクレオシド誘導体およびその合成につい
て説明する。以下の実施例における構造式においては次
の略号を使用する。すなわち、Ａd＝アデニン残基、Ｕr
＝ウラシル残基、ＤＭＴr＝4,4'-ジメトキシトリチル
基、ＭＭＴr＝4-メトキシトリチル基、Ｔr＝トリチル基
である。なお本発明は、以下の実施例に限定されるもの
ではない。
【００２５】［実施例１］下記式で示される化合物１お
よび化合物２の合成
よび化合物２の合成
【００２６】
【化９】
【００２７】
【化１０】
【００２８】5'-Ｏ-4,4'-ジメトキシトリチル-3'-Ｏ-t-
ブチルジメチルシリルウリジン６.64ｇ(１０.0mmol）の
テトラヒドロフラン５０ml溶液に氷冷下で、２.0Ｍの塩
化sec-ブチルマグネシウム／ジエチルエーテル溶液１５
mlを滴下し１０分間攪拌した後、1,5-ジブロモペンタン
１１.0ml(２２.0mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド２
５ml溶液を加え、３０時間加熱還流した。放冷後、１５
％水酸化ナトリウム水溶液３０mlを加え、３時間攪拌
後、クロロホルムルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した。
無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーによる精製を行い、それぞれ淡黄
色粉末状の化合物２種を得た。ＮＭＲおよびＩＲ分析に
よりそれぞれ上記化合物１および２であることを確認し
た。化合物１の収量１.0９ｇ（１６％）。化合物２の収
量0.１１ｇ（２％）。1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲ
シグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数および
シリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に示
し、 1Ｈ−ＮＭＲチャートを図１および図２に示す。 化合物１1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.17 −２.13 （６
Ｈ，ｍ） ３.20 −４.57 （１６Ｈ，ｍ） ５.47 （１Ｈ，ｄ），５.83 （１Ｈ，ｄ） ６.63 −７.00 （４Ｈ，ｍ） ７.10 −７.47 （９Ｈ，ｍ） ７.83 （１Ｈ，ｄ）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：２５.46 ，２６.65 ，
３２.24 ，３３.54 ，５５.27 ，６２.44 ，７０.99 ，
７６.37 ，７７.36 ，８４.71 ，８７.09 ，９１.86 ，
１０１.72 ，１１３.31 ，１２７.16 ，１２８.00 ，１
２８.07 ，１３０.08 ，１３５.26 ，１３７.60 ，１４
４.26 ，１５１.92 ，１５８.72 ，１６２.44 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４２０，２９３０，１７１０，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５０（ヘ
キサン：酢酸エチル＝１：５） 化合物２1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.20 −２.23 （６
Ｈ，ｍ） ３.20 −４.50 （１６Ｈ，ｍ） ５.40 （１Ｈ，ｄ），５.90 （１Ｈ，ｄ） ６.67 −７.00 （４Ｈ，ｍ） ７.10 −７.50 （９Ｈ，ｍ） ７.80 （１Ｈ，ｄ）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：２３.35 ，２４.62 ，
３２.35 ，３３.43 ，５５.27 ，６２.42 ，７０.68 ，
７０.74 ，７３.94 ，８１.46 ，８７.11 ，８９.67 ，
１０２.45 ，１１３.33 ，１２７.78 ，１２８.11 ，１
２９.13 ，１３０.08 ，１３５.22 ，１４０.10 ，１４
４.20 ，１５０.46 ，１５８.76 ，１６２.95 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４４０，２９３０，１７００，
１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.３８（ヘ
キサン：酢酸エチル＝１：５）
ブチルジメチルシリルウリジン６.64ｇ(１０.0mmol）の
テトラヒドロフラン５０ml溶液に氷冷下で、２.0Ｍの塩
化sec-ブチルマグネシウム／ジエチルエーテル溶液１５
mlを滴下し１０分間攪拌した後、1,5-ジブロモペンタン
１１.0ml(２２.0mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド２
５ml溶液を加え、３０時間加熱還流した。放冷後、１５
％水酸化ナトリウム水溶液３０mlを加え、３時間攪拌
後、クロロホルムルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した。
無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーによる精製を行い、それぞれ淡黄
色粉末状の化合物２種を得た。ＮＭＲおよびＩＲ分析に
よりそれぞれ上記化合物１および２であることを確認し
た。化合物１の収量１.0９ｇ（１６％）。化合物２の収
量0.１１ｇ（２％）。1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲ
シグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数および
シリカゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に示
し、 1Ｈ−ＮＭＲチャートを図１および図２に示す。 化合物１1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.17 −２.13 （６
Ｈ，ｍ） ３.20 −４.57 （１６Ｈ，ｍ） ５.47 （１Ｈ，ｄ），５.83 （１Ｈ，ｄ） ６.63 −７.00 （４Ｈ，ｍ） ７.10 −７.47 （９Ｈ，ｍ） ７.83 （１Ｈ，ｄ）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：２５.46 ，２６.65 ，
３２.24 ，３３.54 ，５５.27 ，６２.44 ，７０.99 ，
７６.37 ，７７.36 ，８４.71 ，８７.09 ，９１.86 ，
１０１.72 ，１１３.31 ，１２７.16 ，１２８.00 ，１
２８.07 ，１３０.08 ，１３５.26 ，１３７.60 ，１４
４.26 ，１５１.92 ，１５８.72 ，１６２.44 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４２０，２９３０，１７１０，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５０（ヘ
キサン：酢酸エチル＝１：５） 化合物２1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.20 −２.23 （６
Ｈ，ｍ） ３.20 −４.50 （１６Ｈ，ｍ） ５.40 （１Ｈ，ｄ），５.90 （１Ｈ，ｄ） ６.67 −７.00 （４Ｈ，ｍ） ７.10 −７.50 （９Ｈ，ｍ） ７.80 （１Ｈ，ｄ）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：２３.35 ，２４.62 ，
３２.35 ，３３.43 ，５５.27 ，６２.42 ，７０.68 ，
７０.74 ，７３.94 ，８１.46 ，８７.11 ，８９.67 ，
１０２.45 ，１１３.33 ，１２７.78 ，１２８.11 ，１
２９.13 ，１３０.08 ，１３５.22 ，１４０.10 ，１４
４.20 ，１５０.46 ，１５８.76 ，１６２.95 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４４０，２９３０，１７００，
１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.３８（ヘ
キサン：酢酸エチル＝１：５）
【００２９】［実施例２］ 下記式で示される化合物３の合成
【００３０】
【化１１】
【００３１】実施例１で合成した化合物１の３.46 ｇ
(４.97 mmol)、９０％フタルイミドカリウム２.06ｇ(１
０.0mmol)、およびトリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチ
ル]アミン１.60ml(５.00mmol)のN,N-ジメチルホルムア
ミド５０ｍｌ懸濁液を７０℃で２０時間攪拌後、１０％
炭酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムルで抽出
し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾
燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
る精製を行い、淡黄色液状の化合物２.86ｇを得た(収率
７５％)。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物
３であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミ
カルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層
クロマトグラフィーの移動度を以下に示し、ＩＲチャー
トを図３に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.10 −２.00 （６
Ｈ，ｍ） ３.17 −４.87 （１６Ｈ，ｍ） ５.35 （１Ｈ，ｄ），５.80 （１Ｈ，ｄ） ６.57 −６.93 （４Ｈ，ｍ） ７.03 −８.00 （１４Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４５０，２９３０，１７７０，
１７１０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.３２（ク
ロロホルム：メタノール＝２５：１）
(４.97 mmol)、９０％フタルイミドカリウム２.06ｇ(１
０.0mmol)、およびトリス[2-(2-メトキシエトキシ)エチ
ル]アミン１.60ml(５.00mmol)のN,N-ジメチルホルムア
ミド５０ｍｌ懸濁液を７０℃で２０時間攪拌後、１０％
炭酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムルで抽出
し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾
燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
る精製を行い、淡黄色液状の化合物２.86ｇを得た(収率
７５％)。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物
３であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミ
カルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層
クロマトグラフィーの移動度を以下に示し、ＩＲチャー
トを図３に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.10 −２.00 （６
Ｈ，ｍ） ３.17 −４.87 （１６Ｈ，ｍ） ５.35 （１Ｈ，ｄ），５.80 （１Ｈ，ｄ） ６.57 −６.93 （４Ｈ，ｍ） ７.03 −８.00 （１４Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４５０，２９３０，１７７０，
１７１０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.３２（ク
ロロホルム：メタノール＝２５：１）
【００３２】［実施例３］下記式で示される化合物４の
合成
合成
【００３３】
【化１２】
【００３４】実施例２で合成した化合物３の１.30ｇ
(１.71mmol)をエタノール１５mlに溶解した溶液にヒド
ラジン一水和物0.１７ml(３.50mmol)を加え、６０℃で
２４時間攪拌後、放冷し、生成した不溶物を炉別した
後、濃縮した。残さをピリジン共沸により脱水した後、
ジクロロメタン１０mlおよびピリジン５mlを加えて溶解
した。−２０℃に冷却した後、トリフルオロ酢酸無水物
0.２５ml(１.77mmol)のジクロロメタン１０ml溶液を滴
下し、室温下で１６時間攪拌した。次に、１０％炭酸ナ
トリウム水溶液を加え、クロロホルムルで抽出し、飽和
食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を
行い、淡黄色粉末状の化合物0.２５ｇを得た（収率２０
％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物４
であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカ
ルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーの移動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲ
チャートを図４に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.07 −１.95 （６
Ｈ，ｍ） ３.10 −４.63 （１６Ｈ，ｍ） ５.42 （１Ｈ，ｄ），５.83 （１Ｈ，ｄ） ６.62 −７.48 （１４Ｈ，ｍ） ７.77 （１Ｈ，ｄ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４３０，２９４０，１７１０，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.２６（ク
ロロホルム：メタノール＝２５：１）
(１.71mmol)をエタノール１５mlに溶解した溶液にヒド
ラジン一水和物0.１７ml(３.50mmol)を加え、６０℃で
２４時間攪拌後、放冷し、生成した不溶物を炉別した
後、濃縮した。残さをピリジン共沸により脱水した後、
ジクロロメタン１０mlおよびピリジン５mlを加えて溶解
した。−２０℃に冷却した後、トリフルオロ酢酸無水物
0.２５ml(１.77mmol)のジクロロメタン１０ml溶液を滴
下し、室温下で１６時間攪拌した。次に、１０％炭酸ナ
トリウム水溶液を加え、クロロホルムルで抽出し、飽和
食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を
行い、淡黄色粉末状の化合物0.２５ｇを得た（収率２０
％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物４
であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカ
ルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーの移動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲ
チャートを図４に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.07 −１.95 （６
Ｈ，ｍ） ３.10 −４.63 （１６Ｈ，ｍ） ５.42 （１Ｈ，ｄ），５.83 （１Ｈ，ｄ） ６.62 −７.48 （１４Ｈ，ｍ） ７.77 （１Ｈ，ｄ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４３０，２９４０，１７１０，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.２６（ク
ロロホルム：メタノール＝２５：１）
【００３５】［実施例４］下記式で示される化合物５の
合成
合成
【００３６】
【化１３】
【００３７】実施例２で合成した化合物３の１.05ｇ
(１.38mmol)をエタノール２０mlに溶解した溶液にヒド
ラジン一水和物0.１４ml(２.89mmol)を加え、８０℃で
５時間攪拌後、放冷し、生成した不溶物を炉別した後、
濃縮した。残さをピリジン共沸により脱水した後、N,N-
ジメチルホルムアミド８mlを加えて溶解した。次に、ビ
オチニル-N-ヒドロキシスクシイミドエステル５００mg
(１.46mmol)を加え、室温下で５時間攪拌した後、１０
％炭酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムルで抽出
し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾
燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
る精製を行い、淡黄色粉末状の化合物１.14ｇを得た
（収率９６％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上
記化合物５であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナ
ルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に示し、Ｉ
Ｒチャートを図５に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.07 −１.97 （１２
Ｈ，ｍ） ２.60 −４.57 （２３Ｈ，ｍ） ５.33 （１Ｈ，ｄ） ５.73 −６.00 （２Ｈ，ｍ）６.33 −６.90 （５Ｈ，
ｍ）７.00 −７.50 （９Ｈ，ｍ）７.77 （１Ｈ，ｄ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３３３０，２９３０，１７００，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５３（ク
ロロホルム：メタノール＝５：１）
(１.38mmol)をエタノール２０mlに溶解した溶液にヒド
ラジン一水和物0.１４ml(２.89mmol)を加え、８０℃で
５時間攪拌後、放冷し、生成した不溶物を炉別した後、
濃縮した。残さをピリジン共沸により脱水した後、N,N-
ジメチルホルムアミド８mlを加えて溶解した。次に、ビ
オチニル-N-ヒドロキシスクシイミドエステル５００mg
(１.46mmol)を加え、室温下で５時間攪拌した後、１０
％炭酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムルで抽出
し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾
燥、濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
る精製を行い、淡黄色粉末状の化合物１.14ｇを得た
（収率９６％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上
記化合物５であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナ
ルのケミカルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィーの移動度を以下に示し、Ｉ
Ｒチャートを図５に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.07 −１.97 （１２
Ｈ，ｍ） ２.60 −４.57 （２３Ｈ，ｍ） ５.33 （１Ｈ，ｄ） ５.73 −６.00 （２Ｈ，ｍ）６.33 −６.90 （５Ｈ，
ｍ）７.00 −７.50 （９Ｈ，ｍ）７.77 （１Ｈ，ｄ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３３３０，２９３０，１７００，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５３（ク
ロロホルム：メタノール＝５：１）
【００３８】［実施例５］下記式で示される化合物６の
合成
合成
【００３９】
【化１４】
【００４０】5'-Ｏ-4,4'-ジメトキシトリチル−アデノ
シン２.37ｇ(４.16mmol)のテトラヒドロフラン３０ml溶
液に氷冷下で、２.0Ｍ塩化sec-ブチルマグネシウム／ジ
エチルエーテル溶液２.10mlを滴下し１５分間攪拌した
後、1,10-ジブロモデカン６.24ｇ(２０.8mmol）、およ
び臭化テトラ-n-ブチルアンモニウム１.34ｇ(４.16mmo
l)のN,N-ジメチルホルムアミド１５ml溶液を加え、５０
時間加熱還流した。放冷後、酢酸エチルで抽出し、飽和
食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を
行い、淡褐色粉末状の化合物0.２５ｇ（収率８％）を得
た。1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により
上記化合物６であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲおよ
び13Ｃ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナ
ルの波数およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移
動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図６、13Ｃ
−ＮＭＲチャートを図７、ＩＲチャートを図８に示す。 1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：0.８３−2.００（１６
Ｈ，ｍ） 3.００−3.８０（１３Ｈ，ｍ） 4.００−4.５７（３Ｈ，ｍ） 5.８３−6.３４（３Ｈ，ｍ） 6.５０−6.８０（４Ｈ，ｍ） 6.９３−7.８０（９Ｈ，ｍ） 7.８８（１Ｈ，ｓ），8.１１（１Ｈ，ｓ）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：２５.90 ，２８.15 ，
２８.71 ，２９.28 ，２９.33 ，２９.37 ，２９.57 ，
３２.81 ，３４.02 ，５５.23 ，６３.08 ，６９.90 ，
７１.45 ，８１.64 ，８３.96 ，８６.61 ，８６.96 ，
１１３.20 ，１２０.13 ，１２６.94 ，１２７.89 ，
１２８.22 ，１３０.14 ，１３５.77 ，１３９.14 ，１
４４.57 ，１４９.63 ，１５３.09 ，１５５.36 ，１５
８.58 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３３４０，２９３０，１６１０，
１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.４２（ク
ロロホルム：メタノール＝１０：１）
シン２.37ｇ(４.16mmol)のテトラヒドロフラン３０ml溶
液に氷冷下で、２.0Ｍ塩化sec-ブチルマグネシウム／ジ
エチルエーテル溶液２.10mlを滴下し１５分間攪拌した
後、1,10-ジブロモデカン６.24ｇ(２０.8mmol）、およ
び臭化テトラ-n-ブチルアンモニウム１.34ｇ(４.16mmo
l)のN,N-ジメチルホルムアミド１５ml溶液を加え、５０
時間加熱還流した。放冷後、酢酸エチルで抽出し、飽和
食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を
行い、淡褐色粉末状の化合物0.２５ｇ（収率８％）を得
た。1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により
上記化合物６であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲおよ
び13Ｃ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、ＩＲシグナ
ルの波数およびシリカゲル薄層クロマトグラフィーの移
動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを図６、13Ｃ
−ＮＭＲチャートを図７、ＩＲチャートを図８に示す。 1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：0.８３−2.００（１６
Ｈ，ｍ） 3.００−3.８０（１３Ｈ，ｍ） 4.００−4.５７（３Ｈ，ｍ） 5.８３−6.３４（３Ｈ，ｍ） 6.５０−6.８０（４Ｈ，ｍ） 6.９３−7.８０（９Ｈ，ｍ） 7.８８（１Ｈ，ｓ），8.１１（１Ｈ，ｓ）13 Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：２５.90 ，２８.15 ，
２８.71 ，２９.28 ，２９.33 ，２９.37 ，２９.57 ，
３２.81 ，３４.02 ，５５.23 ，６３.08 ，６９.90 ，
７１.45 ，８１.64 ，８３.96 ，８６.61 ，８６.96 ，
１１３.20 ，１２０.13 ，１２６.94 ，１２７.89 ，
１２８.22 ，１３０.14 ，１３５.77 ，１３９.14 ，１
４４.57 ，１４９.63 ，１５３.09 ，１５５.36 ，１５
８.58 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３３４０，２９３０，１６１０，
１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.４２（ク
ロロホルム：メタノール＝１０：１）
【００４１】［実施例６］下記式で示される化合物７の
合成
合成
【００４２】
【化１５】
【００４３】トリチルチオール１００mg(0.３６２mmo
l）のN,N-ジメチルホルムアミド２ml溶液に室温下で、
６０％油性水素化ナトリウム１５.0mg(0.３７５mmol）
を加え、１５分間攪拌後、実施例５で合成した化合物６
を１４０mg(0.１７７mmol）を加え、室温下で１６時間
攪拌した後、クロロホルムルで抽出し、水および飽和食
塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を
行い、淡黄色粉末状の化合物0.１２ｇを得た（収率６９
％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物７
であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカ
ルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーの移動度を以下に示し、ＩＲチャート
を図９に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：０.87 −１.83 （１６
Ｈ，ｍ） １.97 −２.33 （２Ｈ，ｍ） ２.77 −４.40 （１４Ｈ，ｍ） ５.73 −６.20 （３Ｈ，ｍ） ６.53 −６.93 （４Ｈ，ｍ） ７.03 −７.60 （２８Ｈ，ｍ） ８.00 （１Ｈ，ｓ），８.23 （１Ｈ，ｓ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３３４０，２９３０，１６１０，
１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５０（ク
ロロホルム：メタノール＝１０：１）
l）のN,N-ジメチルホルムアミド２ml溶液に室温下で、
６０％油性水素化ナトリウム１５.0mg(0.３７５mmol）
を加え、１５分間攪拌後、実施例５で合成した化合物６
を１４０mg(0.１７７mmol）を加え、室温下で１６時間
攪拌した後、クロロホルムルで抽出し、水および飽和食
塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を
行い、淡黄色粉末状の化合物0.１２ｇを得た（収率６９
％）。1Ｈ−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物７
であることを確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカ
ルシフト、ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーの移動度を以下に示し、ＩＲチャート
を図９に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：０.87 −１.83 （１６
Ｈ，ｍ） １.97 −２.33 （２Ｈ，ｍ） ２.77 −４.40 （１４Ｈ，ｍ） ５.73 −６.20 （３Ｈ，ｍ） ６.53 −６.93 （４Ｈ，ｍ） ７.03 −７.60 （２８Ｈ，ｍ） ８.00 （１Ｈ，ｓ），８.23 （１Ｈ，ｓ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３３４０，２９３０，１６１０，
１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５０（ク
ロロホルム：メタノール＝１０：１）
【００４４】［実施例７］下記式で示される化合物８の
合成
合成
【００４５】
【化１６】
【００４６】5'-Ｏ-4-メトキシトリチルウリジン１７.5
ｇ(３３.9mmol)のテトラヒドロフラン１００ml溶液に氷
冷下で、２.0Ｍ塩化tert-ブチルマグネシウム／テトラ
ヒドロフラン溶液３５mlを滴下し３０分間攪拌した後、
1,5-ジブロモペンタン３９.0ｇ(１７０mmol)のN,N-ジメ
チルホルムアミド５０ml溶液を加え、４日間加熱還流し
た。放冷後、酢酸エチルで抽出し、水および飽和食塩水
で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、
白色粉末状の化合物1.８３ｇ（収率８％）を得た。1Ｈ
−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物８であること
を確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、
ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層クロマトグラ
フィーの移動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを
図１０に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.12 −２.22 （６
Ｈ，ｍ） ３.03 −４.45 （１３Ｈ，ｍ） ５.43 （１Ｈ，ｄ） ５.65 −５.92 （１Ｈ，ｂｒ） ６.62 −７.60 （１４Ｈ，ｍ） ７.68 （１Ｈ，ｄ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４４０，２９４０，１７１０，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.４７（ク
ロロホルム：メタノール＝１０：１）
ｇ(３３.9mmol)のテトラヒドロフラン１００ml溶液に氷
冷下で、２.0Ｍ塩化tert-ブチルマグネシウム／テトラ
ヒドロフラン溶液３５mlを滴下し３０分間攪拌した後、
1,5-ジブロモペンタン３９.0ｇ(１７０mmol)のN,N-ジメ
チルホルムアミド５０ml溶液を加え、４日間加熱還流し
た。放冷後、酢酸エチルで抽出し、水および飽和食塩水
で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、
白色粉末状の化合物1.８３ｇ（収率８％）を得た。1Ｈ
−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物８であること
を確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、
ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層クロマトグラ
フィーの移動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを
図１０に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：１.12 −２.22 （６
Ｈ，ｍ） ３.03 −４.45 （１３Ｈ，ｍ） ５.43 （１Ｈ，ｄ） ５.65 −５.92 （１Ｈ，ｂｒ） ６.62 −７.60 （１４Ｈ，ｍ） ７.68 （１Ｈ，ｄ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４４０，２９４０，１７１０，
１６６０，１５１０，１２５０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.４７（ク
ロロホルム：メタノール＝１０：１）
【００４７】［実施例８］下記式で示される化合物９の
合成
合成
【００４８】
【化１７】
【００４９】実施例７で合成した化合物８を１.64 ｇ
(２.46 mmol)、９０％フタルイミドカリウム１.02 ｇ
(４.96 mmol)、およびトリス[2-(2-メトキシエトキシ)
エチル]アミン１６０mg(0.４９５mmol)のN,N-ジメチル
ホルムアミド２５ml懸濁液を７０℃で１６時間攪拌後、
１０％炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出
し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾
燥、濃縮後、残さをジクロロメタン２５mlに溶解し、ジ
クロロ酢酸２.50 ml(３０.3mmol)を加え、室温で３０分
間攪拌した。次に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗
浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、白
色粉末状の化合物0.７１ｇを得た（収率６３％）。 1Ｈ
−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物９であること
を確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、
ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層クロマトグラ
フィーの移動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを
図１１に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：０.97 −２.00 （６
Ｈ，ｍ） ３.17 −４.73 （１１Ｈ，ｍ） ５.57 −５.83 （２Ｈ，ｍ） ７.58 −７.93 （５Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４５０，２９４０，１７７０，
１７１０，１６６０，１４７０，１２７０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５０（ク
ロロホルム：メタノール＝５：１）
(２.46 mmol)、９０％フタルイミドカリウム１.02 ｇ
(４.96 mmol)、およびトリス[2-(2-メトキシエトキシ)
エチル]アミン１６０mg(0.４９５mmol)のN,N-ジメチル
ホルムアミド２５ml懸濁液を７０℃で１６時間攪拌後、
１０％炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出
し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾
燥、濃縮後、残さをジクロロメタン２５mlに溶解し、ジ
クロロ酢酸２.50 ml(３０.3mmol)を加え、室温で３０分
間攪拌した。次に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗
浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮後、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、白
色粉末状の化合物0.７１ｇを得た（収率６３％）。 1Ｈ
−ＮＭＲおよびＩＲ分析により上記化合物９であること
を確認した。1Ｈ−ＮＭＲシグナルのケミカルシフト、
ＩＲシグナルの波数およびシリカゲル薄層クロマトグラ
フィーの移動度を以下に示し、1Ｈ−ＮＭＲチャートを
図１１に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3) δ：０.97 −２.00 （６
Ｈ，ｍ） ３.17 −４.73 （１１Ｈ，ｍ） ５.57 −５.83 （２Ｈ，ｍ） ７.58 −７.93 （５Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：３４５０，２９４０，１７７０，
１７１０，１６６０，１４７０，１２７０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ：0.５０（ク
ロロホルム：メタノール＝５：１）
【００５０】
【発明の効果】本発明で提供される２'-または３'-水酸
基にリンカーあるいは非放射性標識を有するヌクレオシ
ド誘導体においては、リンカー、または、非放射性標識
をオリゴマー中の任意の位置に任意の数だけ導入するこ
とができること、および、従来の核酸塩基部に導入する
方法あるいは、ヌクレオシドを構成するフラノース環の
特定部分に非放射性標識を直接導入する方法に比較し
て、核酸本来の機能を損なう可能性が低いという特徴を
有しているため、その利用価値は高い。
基にリンカーあるいは非放射性標識を有するヌクレオシ
ド誘導体においては、リンカー、または、非放射性標識
をオリゴマー中の任意の位置に任意の数だけ導入するこ
とができること、および、従来の核酸塩基部に導入する
方法あるいは、ヌクレオシドを構成するフラノース環の
特定部分に非放射性標識を直接導入する方法に比較し
て、核酸本来の機能を損なう可能性が低いという特徴を
有しているため、その利用価値は高い。
【図１】図１は実施例１で得られた化合物１の 1Ｈ−Ｎ
ＭＲチャート。
ＭＲチャート。
【図２】図２は実施例１で得られた化合物２の 1Ｈ−Ｎ
ＭＲチャート。
ＭＲチャート。
【図３】図３は実施例２で得られた化合物３のＩＲチャ
ート。
ート。
【図４】図４は実施例３で得られた化合物４の 1Ｈ−Ｎ
ＭＲチャート。
ＭＲチャート。
【図５】図５は実施例４で得られた化合物５のＩＲチャ
ート。
ート。
【図６】図６は実施例５で得られた化合物６の 1Ｈ−Ｎ
ＭＲチャート。
ＭＲチャート。
【図７】図６は実施例５で得られた化合物６の13Ｃ−Ｎ
ＭＲチャート。
ＭＲチャート。
【図８】図８は実施例５で得られた化合物６のＩＲチャ
ート。
ート。
【図９】図９は実施例６で得られた化合物７のＩＲチャ
ート。
ート。
【図１０】図１０は実施例７で得られた化合物８の 1Ｈ
−ＮＭＲチャート。
−ＮＭＲチャート。
【図１１】図１１は実施例８で得られた化合物９の 1Ｈ
−ＮＭＲチャート。
−ＮＭＲチャート。
Claims (2)
- 【請求項１】 次の式［Ｉ］で示されるヌクレオシド誘
導体。 【化１】 但し、式中のＢは、プリンまたはピリミジン塩基、Ｒ1
は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ2、Ｒ3は、いずれ
か一方が水素原子で他方が（ＣＨ2)nＲ4であり、ｎは３
以上の任意の整数を示し、Ｒ4 は、ハロゲン原子を示
す。 - 【請求項２】 請求項１記載のヌクレオシド誘導体のハ
ロゲン原子をアミノ基またはチオール基で置換して合成
することを特徴とする次の式［II］で示されるリンカー
を有するヌクレオシド誘導体の合成方法。 【化２】 但し、式中のＢは、プリンまたはピリミジン塩基、Ｒ1
は水素原子または水酸基の保護基、Ｒ5、Ｒ6は、いずれ
か一方が水素原子で他方が（ＣＨ2)nＲ7であり、ｎは３
以上の任意の整数を示し、Ｒ7は、保護基もしくは非放
射性標識を有することもあるアミノ基またはチオール基
を示す。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5075129A JPH06256380A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | ヌクレオシド誘導体ならびにリンカーを有するヌクレオシド誘導体の合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5075129A JPH06256380A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | ヌクレオシド誘導体ならびにリンカーを有するヌクレオシド誘導体の合成方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06256380A true JPH06256380A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=13567283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5075129A Pending JPH06256380A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | ヌクレオシド誘導体ならびにリンカーを有するヌクレオシド誘導体の合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06256380A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR950032263A (ko) * | 1994-04-27 | 1995-12-20 | 베르너 발데그 | 2'-에테르 그룹을 갖는 뉴클레오사이드 및 올리고 뉴클레오타이드 |
| US6635993B1 (en) | 1998-08-26 | 2003-10-21 | Ngk Insulators, Ltd. | Joined bodies, high-pressure discharge lamps and a method for manufacturing the same |
| US6812642B1 (en) | 2000-07-03 | 2004-11-02 | Ngk Insulators, Ltd. | Joined body and a high-pressure discharge lamp |
-
1993
- 1993-03-09 JP JP5075129A patent/JPH06256380A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR950032263A (ko) * | 1994-04-27 | 1995-12-20 | 베르너 발데그 | 2'-에테르 그룹을 갖는 뉴클레오사이드 및 올리고 뉴클레오타이드 |
| EP0679657A3 (de) * | 1994-04-27 | 1996-04-10 | Ciba Geigy Ag | Nukleoside und Oligonukleotide mit 2'-Ethergruppen. |
| US6635993B1 (en) | 1998-08-26 | 2003-10-21 | Ngk Insulators, Ltd. | Joined bodies, high-pressure discharge lamps and a method for manufacturing the same |
| US6812642B1 (en) | 2000-07-03 | 2004-11-02 | Ngk Insulators, Ltd. | Joined body and a high-pressure discharge lamp |
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