JPH0634704B2 - 微生物ハイホジーマ・ロセオニガー - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 ドデカハイドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナ
フト〔２，１−ｂ〕フラン(1)は重要な芳香性化学製品
である（米国特許第３，０２９，２５５号参照）。それ
は例えば化粧品、家庭用品のような高級香料組成物や官
能性製品において持続的な龍涎香効果が望まれる場合に
用いられて来た。化合物(1)はまた龍涎香チンキの成分
であり（ビー．デー．ムークハージーとアール．アー
ル．パーテル，第７回精油国際会議，日本，京都，論文
番号１３６参照）、そして化合物(1)は人工龍涎香処方
において用いられて来た。化合物(1)はサルビアセージ
（サルビア・スクラレア（Salvia Sclarea））から得ら
れるスクラレオールとして一般に云われている２−エテ
ニルデカハイドロ−２−ハイドロキシ−α−２，５，
５，８ａ−ペンタメチル−１−ナフタレンプロパノール
(4)から製造されるであろう。

米国特許第３，０５０，５３２号は二段階酸化過程を用
いて化合物(4)をドデカハイドロ−３ａ，６，６，９ａ
−テトラメチルナフト〔２，１−ｂ〕フラン−２（１
Ｈ）−オン(2)に変換する方法を開示している。第１段
階ではスクラレオールの水性分散物がアルカリ条件下に
おいて過マンガン酸アルカリ金属塩酸試薬と密接に接触
せられて該スクラレオールが部分的に酸化せられる。第
２段階において、第１段階で得られた水性反応混合物は
酸性にされそして酸性条件下で過マンガン酸塩またはク
ロム酸酸化薬試薬と密接に接触せられることにより酸化
を完全に行なう。化合物(2)は既知の方法によって化合
物(1)に容易に変換されるであろう。例えば水素化物試
薬による化合物(2)の還元は環化によって化合物(1)に容
易に変換されるデカハイドロ−２−ハイドロキシ−２，
５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール(3)
を与える（例えばヘルベチカ．ヒミア．アクタ１９５０
年，第３３巻，第１３０８頁参照）。

米国特許第３，０２９，２５５号は２００〜２２５℃に
おいてＡｌ₂Ｏ₃で化合物(3)を脱水し、次いでβ−ナフ
タレンスルホン酸の存在で真空下に加熱することにより
（１３０℃から１６０℃まで）化合物(1)に環化せしめ
る化合物(1)の製造方法を開示している。

それに代えて、キャンビー等によって開示されるように
（オーストラリア，ジャーナル オブ ケミカル，１９
７１年，第２４巻，第５９１頁参照）、化合物(1)はピ
リジン中でトルエン−パラ−スルホニルクロライドを用
いて化合物(3)を環化することによって得られるであろ
う。

本発明によって提供される新規なそして営利効果のある
方法によるラダン化合物を微生物学的方法を経由してデ
カハイドロ−２−ハイドロキシ−α，２，５，５，８ａ
−テトラメチルナフタレンエタノール(3)またはドデカ
ハイドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト
〔２，１−ｂ〕フラン(1)へ変換することは従来技術に
は何等の教唆も示唆もない。

〔発明の要約〕

本発明はＣＢＳ２１４．８３とＡＴＣＣ２０６２４の識
別特性を有する微生物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hy
phozyma roseoniger）の生物学的純粋培養物に関するも
のである。

他の実施の態様においては、本発明はＣＢＳ２１４．８
３とＡＴＣＣ２０６２４の識別特性を有する微生物ハイ
ホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseoniger）を含
む培養物に関するものであり、該培養物は下記の構造 を有するジオールを および こゝにＲは である。

からなるグループからの化合物を水性栄養媒体における
好気的条件下において変化させることにより回収可能な
量で製造することが可能である。

更に他の実施の態様においては、本発明はＣＢＳ２１
４．８３とＡＴＣＣ２０６２４の識別特性を有する微生
物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseonige
r）を水性栄養培地中で好気的条件下で培養することに
よって調製される混合物に関するものである。

更に他の実施の態様においては、本発明はＣＢＳ２１
４．８３とＡＴＣＣ２０６２４の識別特性を有する微生
物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseonige
r）を好気性条件下で および こゝにＲは である。

からなるグループからの１種またはそれ以上の化合物を
含む水性栄養培地中で培養することからなる下記の構造 を有するジオールを調製する方法に関するものである。

更に他の実施の態様においては、本発明はＣＢＳ２１
４．８３とＡＴＣＣ２０６２４の識別特性を有する微生
物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseonige
r）を好気性条件下において および こゝにＲは である。

からなるグループからの１種またはそれ以上の化合物を
含む水性栄養培地中で培養して下記の構造 を有するジオールを生成すること、該ジオールを水性栄
養培地中で環化して該フラン化合物を生成すること、お
よび該フラン化合物を回収することからなる下記の構造 を有するフラン化合物を調製する方法に関するものであ
る。

〔詳細な説明〕

第１図には本発明にかゝる化合物のいくつかのものの構
造が示される。

化合物(4)から(14)は本発明の変態方法において所望の
製造物を製造するための基質として用いられるであろ
う。化合物(6)，(11)および(13)は本発明の方法におい
てスクラレオールの変態過程での中間物質として観察さ
れている。該変態方法は化合物(4)から(14)の存在下に
おいて水性栄養培地中で微生物ハイホジーマ・ロセオニ
ガー（Hyphozyma roseoniger）、ＣＢＳ２１４．８３お
よびＡＴＣＣ２０６２４の培養を含むものである。これ
らの化合物は単一でもしくは該化合物の任意の数を含む
混合物として用いられるであろう。

微生物が用いられる形態は限定的なものではない。それ
らは例えば細胞と相応する栄養溶液とを含む培養物（懸
濁液）としてあるいはバッファー溶液中に懸濁されてい
る細胞の形状で用いられることが出来る。該細胞もしく
はその酵素抽出物は変態を行なうために用いられるであ
ろう適当な固形支持体上に固定されるであろう。

懸濁された培養混合物は微生物の存在する適当な水性栄
養培地の接種によって調製される。適当な栄養培地は窒
素源、無機塩、成長因子、所望の基質、および所望なれ
ば他の炭素源を含むものである。本発明の方法に用いる
に適したいくらかの炭素源は、例えばグルコース、ガラ
クトース、Ｌ−ソルボーズ、マルトース、蔗糖、セロビ
オース、トレハロース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノ
ース、エタノール、グリセロース、Ｌ−エリスリトー
ル、Ｄ−マンニトール、ラクトース、メリビオース、ラ
フィノース、メレチトース、澱粉、Ｄ−キシロース、Ｄ
−ソルビトール、α−メチル−Ｄ−グルコシド、乳酸、
クエン酸、およびコハク酸を含む。適当な窒素源は例え
ばペプトン、肉抽出物、イースト抽出物、コーン浸漬
液、カゼイン、尿素、アミノ酸のような窒素含有有機物
質、または硝酸塩、亜硝酸塩、および無機アンモニウム
塩のような窒素含有無機化合物を含む。適当な無機塩は
例えばマグネシウム、カリウム、カルシウム、またはナ
トリウムの燐酸塩を含む。上記培養基栄養素は例えば所
望なればＢグループのビタミン類の１種もしくはそれ以
上、および（または）Ｆｅ，Ｍｏ，Ｃｕ，Ｍｎ、および
Ｂのような痕跡ミネラルの１種もしくはそれ以上によっ
て補強されるであろう。クロロアンフイニカルまたはク
ロロテトラサイクリンのような抗生物質の添加はバクテ
リア汚染が問題である時には望ましいものである。

微生物の培養は好気性条件下において固定培養もしくは
水中培養（例えば震盪培養、動揺培養）として行われ
る。約2.5から約9.0のpH範囲、望ましくは約3.0から約
7.5の範囲、更に望ましくは約3.0から約6.5の範囲にお
いて培養は好適に行われるであろう。該pHは例えば塩
酸、酢酸、修酸のような無機もしくは有機酸の添加、ま
たは例えば苛性ソーダ、水酸化アンモニウムのような塩
基の添加、または例えば燐酸塩、フタラートのようなバ
ッファーの添加によって調節されるであろう。孵置温度
は約１２℃から約３３℃の間、更に望ましくは約１５℃
から約３０℃の間、最とも望ましくは約１８℃から約２
８℃の間に維持されるのが適当であろう。

本発明による方法は単一の炭素源として培養の始めに栄
養培地に化合物(4)から(14)までの一種またはそれ以上
を添加することによって都合良く行われるであろう。そ
れに代わって、基質は例えばデキストローズのような他
の炭素源と組合わせて培養の間もしくは炭素源がなくな
ってしまった時のいづれかに添加されるであろう。培地
中の基質の濃度に関する唯一の限定は効果的に曝気する
ことが出来ることである。しかしながら基質濃度は望ま
しくは約0.1ｇ／から約１００ｇ／の間の範囲、更
に望ましくは約0.5ｇ／から約５０ｇ／の間の範
囲、最も望ましくは約1.5ｇ／から約３０ｇ／の範
囲である。変態は上記のいかなる濃度下においても好適
に行われる。

全変態時間（最初の培養期の後）は栄養培地の組成と基
質濃度とに大巾に依存するであろう。一般に震盪フラス
コ培養は約１２時間から約２４時間を要する。しかしな
がら、動揺器が用いられた場合には培養時間は約４８時
間かそれ以下に減小せしめられるであろう。

変態は培養溶液から単離された微生物の細胞を用いるか
周知の方法で該細胞から単離された酵素によって行われ
るであろう。この場合、変態は例えばバッファー溶液、
生理学的食塩溶液、新鮮な栄養溶液、または水のような
種々の水性栄養培地中で好都合に行われることが出来
る。

単離された細胞または酵素抽出物は固形支持体に固定さ
れそして所望の変態が行われる。また基質の変態はこの
生物の変種によってももたらせられるであろう。このよ
うな変種は例えば細胞をＵＶまたはＸ線に曝露すること
のような周知の方法、または例えばアクリジンオレンジ
のような公知の突然変異を起す物質によって容易に得る
ことが出来る。

基質は粉末、またはトウイーン８０（ポリオキシエチレ
ンソルビタンモノステアレート）のような乳化剤中での
スラリーとして、または乳化剤中での溶液として、また
は例えばアセトン、メタノール、エタノール、エチエン
グリコール、あるいはジオキサンのような親水性溶媒中
の溶液として培地に添加され得る。界面活性剤または分
散剤はまた基質の水性懸濁液に添加されることが出来、
あるいは基質に超音波を用いて乳化せられることも出来
る。

例えばシリコンオイル（例えばＵＣＯＮ）、ポリアルキ
レングリコール誘導体、トウモロコシ油、または大豆油
のような一般的な消泡剤は泡の調整に用いられ得る。

基質の変態は例えばＧＬＣ，ＴＬＣ，ＨＰＬＣ，ＩＲ，
そしてＮＭＲのような標準分析手法を用いて監視される
ことが出来る。もし基質の急速な消失が観測されたなら
ば微生物の変態能力を最大にするために更に基質が添加
され得る。該過程は通常基質の殆んどが培地から消失し
た時に終了する。化合物(3)は水性栄養培地から回収さ
れるかまたは水性栄養培地中か回収後かいずれかにおい
てフラン化合物(2)に環化されるであろう。動揺肉汁か
ら化合物(1)または(3)を単離し精製することは濾過また
は遠心分離、溶媒抽出、蒸溜、結晶化等の通常の手法に
よって達成されるであろう。化合物(3)は周知の一般的
環化方法によってフラン化合物(1)に変換されるであろ
う。例えば、キャンビー等によって記載されている方法
（オーストラリア ジャーナル オブ ケミカル １９
７１年第２４巻第５９１頁参照）によるピリジン中０℃
でジオール(3)とトルエン−ｐ−スルホニルクロライド
との反応はこゝに参照として取入れられる。この方法は
変態混合物または回収されたジオール化合物(3)のいづ
れかにおいて任意に用いられるであろう。他の環化方法
の例は「有機合成化学」ジョン ウィリー，１９６５年
第８３８〜８３９頁においてアール．ビー．ワグナーと
エッチ．デー．ツックによって記載されており、それら
はこゝに参照によって取入れられる。

本発明において用いられる微生物はセントラルニュージ
ャージィ，米国から得られた土壌サンプルから単離され
た。この種族は加入番号ＣＢＳ２１４．８３およびＡＴ
ＣＣ２０６２４としてセントラルビューロー ブア シ
ンメルカルチャーとアメリカン タイプ カルチャー
コレクションに寄託されている。

該生物はセントラルビューロー ブア シンメルカルチ
ャーによって研究され特徴づけられた。その集団のピン
ク色と形態学上そして物理化学的に特有な性質を有する
ために、ＣＢＳは本発明の微生物をハイホジーマ・ロセ
オニガー（Hyphozyma roseoniger）と命名した。

この生物は明瞭なイースト形状と糸状形状とを有する。
両方の形状とも同様な生物学的性質を示しそしてこゝに
記載される変態を行なう。

該微生物のイースト相の性質は下記に記述される。

１ 形と寸法 ＹＭアガー上の成長物：ピンク，光輝を有し滑らかな集
団。現在の糸状成長細胞は発芽しかけておりおよそ２×
７μｍまたは時にはそれより大きい円形または円筒状。

麦芽抽出アガー上の成長物：２ないし３週間後真菌糸の
形成をともないからまりあった固まりのない光輝あるピ
ンク、時々茶色がかる。

コーンミールアガー上の成長物：明るいオレンジ−ピン
ク，光輝を有する、菌糸体で縁取られた滑らかな集団。

ポテトデキストロースアガーとディフコ麦芽アガー上の
成長物：室温で２〜３週間後ピンク、滑らかな光輝ある
そして時々黒色に変化する。

ＹＰＣＡアガー上の成長物：１０日以内で８mm径に達
し、平担なぬるぬるした淡いオレンジ色（６Ａ３；コー
ネラップス ワンシャー，１９７８年）、シャープない
くらか分裂した縁を有する。

ChAアガー上の成長物：１０日以内に４mm径になる。３
週間後中央部が明かるい茶色（６Ｄ６）から濃い茶色ま
でのオリーブ色になり、最後に粘液集団から延び、濃い
オリーブブラウン（４Ｆ４）集団，局部的に薄いくすん
だ白色の中央斑点を有する、もっと先へ行って淡い菌糸
体の密集した束になる。

該生物はポテトおよび米スライド上で観察される吻合を
有する真菌糸を生産する。そのライフサイクルにおいて
明瞭なイースト相を有するヒホミセット菌であると思わ
れる。

２ 糖での発酵（第１表参照） ３ 炭素化合物の消化吸収（第２表参照） ４ 分裂アルブチン： 正 ５ NH₄NO₃の消化吸収： 正 ６ KNO₃の消化吸収： 正 ７ KNO₂の消化吸収： 正 ８ エチルアミン上の成長物： 正 ９ ビタミン⁻フリー培地上の成長物： 正 10 １２℃における成長物： 正 11 ２６℃における成長物： 正 12 ３０℃における成長物： 正 13 ３７℃における成長物： 負 14 ４５℃における成長物： 負 該生物の糸状形状の性質は下記の例外を除いてはイース
ト相と同一である。

ＹＭアガー上の成長物：ピンクの粗な集団真菌糸を有す
る糸状成長を示す。

麦芽アガーまたはポテトデキストロースアガー上の成長
物：ピンクの粗な集団、室温で２週間後糸状成長を示し
集団は黒色に変化する。

ポテトおよび米スライド上の成長物：吻口を有する真菌
糸を生産する。

ＹＭ肉汁のような液状培地中の成長物：ピンクでイース
ト様成長および時々菌糸体を示す。

ポテト蔗糖アガー上の成長物：イースト相の証拠である
糸状 下記の実施例は本発明を実施するためにこゝに選択され
た本発明の実施の態様を説明するために役立つものであ
るが、本発明の範囲を限定するためのものではない。特
に記述のない場合は重量はグラム、温度はセッ氏、圧力
はmmHgで表わされる。

実施例１ この実施例は基質として２−エテニルデガハイドロ−２
−ハイドロキシ−α，２，５，５，８ａ−ペンタメチル
−１−ナフタレンプロパノール(4)を用いた動揺方法を
説明するものである。

各々に0.1％NH₄NO₃，0.1％H₂KPO₄，0.05％MgSO₄・7H
₂O、痕跡ミネラルおよびビタミンＢ複合体の水性溶液
（１００ｍ）が入っている４個のフラスコは１２０
℃，２０分間殺菌された。デキストロースの５０％水性
溶液（５ｍ）とスクラレオール(4)（１０mg）を含む
ツィーン−８０（0.1ｍ）が各々のフラスコに添加さ
れた。各々のフラスコは３日間成長細胞ＣＢＳ２１４．
８３（ＡＴＣＣ２０６２４）の５容量％により接種され
た。培養物はそれから３〜４日間回転震盪器（２００rp
m）上で２５±１℃で孵置された。初期孵置期間の後、
ツィーン８０（8.0ｇ）中に溶解されているスクラレオ
ールの混合物が次の５日間にわたって少しずつ添加さ
れ、その後更に４日間孵置が継続された。孵置期間の終
わりに４個のフラスコの内容物は一緒にされ酢酸エチル
（３×１００ｍ）によって抽出されそしてNa₂SO₄によ
り乾燥される。溶媒を蒸発して粗抽出物（4.0ｇ）を
得、該粗抽出物はヘキサン／クロロホルムから結晶化せ
られて下記のデカハイドロ−２−ハイドロキシ−２，
５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール(3)
（2.4ｇ）を得る。融点130.5−131.5℃（文献値１３２
−１３３℃）、ＧＬＣ純度１００％、Ｈ−ＮＭＲ（CDCl
₃）δ0.79（６Ｈ，２Ｓ），0.87（３Ｈ，２），（３
Ｈ，２），0.9−２０（１６Ｈ，ｍ），3.41−8.49（１
Ｈ，ｍ），3.72−3.79（１Ｈ，ｍ）、ＩＲ（CHCl₃）ν
_max，３５８０，３３６０，２９５０，１４６０，１３
８０cm^-1、ＭＳｍ／ｅ２３６，２２１，１１７，１３
７，１０９、▲〔α〕²² _D▼＝−16.8°（CHCl₃）、〔文
献値１３２−１３３°Ｃ，▲〔α〕^22.5 _D▼＝−17.3（C
HCl₃）〔M.stoll とM.Hinder、ヘルベチカ，ヒミア，
アクタ，１９５３年，第３６巻，第１９５５頁〜２０８
８頁参照）。

実施例２ この実施例は基質として異なった水準のスクラレオール
(4)を用いた動揺方法の効果を説明するものである。

イースト抽出物（0.1ｇ）が痕跡ミネラルとビタミンに
対して置き換えられたこと、およびスクラレオール(4)
がヘキサンから抽出され、粉末にされ、５０−メッシュ
の篩を通され、その後ツィーン−８０の等量と混合され
たこと以外は実施例１に記述されたと同様な方法が用い
られた。４日間の初期孵置期間の後、スクラレオール
(4)とツィーン−８０の混合物は５日間の期間にわたっ
て次第に量を増やしつゝ各々のフラスコに添加され、そ
の後更に４日間孵置された。下記の第３表は各々のフラ
スコに添加されたスクラレオール(4)の量と単離された
ジオール(3)の収率とを示す。各々の生成物は実施例１
において報告されたと同一のスペクトルデーターを示し
た。

実施例３ この実施例は休止細胞（洗浄された）を用いた動揺方法
の効果を説明するものである。

３日間の初期孵置期間の後、培地肉汁の１００ｍから
の細胞が収穫されそして0.3×１０^-4Ｍ燐酸バッファー
（pH＝7.2）（３×２５ｍ）で洗浄されそして遠心分
離されたこと以外は実施例１において記述さたと同様な
方法が用いられた。洗浄された細胞は上記バッファー
（１００ｍ）中に分散されそして７日間回転振盪器
（２００rpm）上で２５±１℃で孵置された。ツィーン
−８０（５ｇ）中に溶解されたスクラレオール（0.5
ｇ）が孵置の最初の４日間において細胞の懸濁液に次第
に量を増やしつゝ添加された。孵置期間の終りにおいて
ＴＬＣ監視は該スクラレオール(4)のすべてがジオール
(3)に変わったことを示した。通常の方法において、浮
上物は９８％収率でそして９９％ＧＬＣ純度でジオール
を提供した。この生成物のスペクトルデーターは実施例
１で報告されたものと同一である。

実施例４ この実施例は基質として化合物(4)から(14)までの各々
を用いてデカハイドロ−２−ハイドロキシ−２，５，
５，８ａ−テトラメチルナフタレン−エタノール(3)を
生成する動揺方法を説明するものである。

実施例２において記述された培地の水性溶液（１００ｍ
）が各々に入っている１１個のフラスコは１２０°，
２０分間殺菌された。各基質の１０mgを含むデキストロ
ース（４ｍ）とツィーン−８０（０．１ｍ）の５０
％水性溶液が各々のフラスコに添加された。各々のフラ
スコはその後ＣＢＳ２１４．８３（ＡＴＣＣ２０６２
４）の３日間成長細胞の５容量％によって接種され、そ
の後培養物は３日間、回転振盪器（２００rpm）上で２
４±１℃で孵置された。初期孵置期間の後ツィーン−８
０中に溶解された基質の混合物（１：７重量比）が孵置
が数日間継続された後各々フラスコに添加された。変態
の進行はＴＣＬによって監視された。孵置期間の終りに
おいて、各々のフラスコの内容物は酢酸エチル（３×７
５ｍ）で抽出され、該抽出物はNa₂SO₄で乾燥され、そ
して溶媒は蒸発された。残渣は溶媒としてヘキサン／イ
ソプロパン（９５／５）を用いてシリカゲル上カラムク
ロマトグラフィーによって別々に精製されそしてジオー
ル(3)の収率が測定された。該１１個の実験のデーター
は第４表に要約される。

実施例５ この実施例は化合物(7)，(8)および(9)を調製するため
の方法を説明するもので、これら化合物は本発明の方法
において基質として用いられるであろう。

メチレンクロライド（４０ｍ）中のスクラレオール
（9.24ｇ，0.03モル）の溶液はピリジニウムクロロクロ
メート（12.93ｇ，0.06モル）、酢酸ソーダ（2.64ｇ，
0.03モル）、およびメチレンクロライド（１００ｍ）
の混合物に少しづつ添加された。該混合物は４時間２５
℃撹拌された。エーテル（２００ｍ）が添加されそし
て上澄はゴム状沈澱物から分離された。該沈澱物はエー
テル（３×５０ｍ）で洗浄された。該エーテル溶液は
シリカゲル６０（４０ｇ）に通されそして溶媒は蒸発さ
れた。該残渣はエタノール（２ｍ）およびエーテル
（４ｍ）中に溶解されそして水（６０ｍ）中重亜硫
酸ソーダ（１５ｇ）の溶液とともに２５℃，３時間撹拌
された。該混合物はエーテル（２×３０ｍ）によって
抽出された。水層は１０％カセイソーダで塩基性にせら
れそしてエーテル（４×５０ｍ）で抽出された。該エ
ーテル抽出物はNa₂SO₄で乾燥されそして溶媒は蒸発せら
れて残渣の2.72ｇを得た。シリカゲル６０上のクロマト
グラフィー（７０ｇ流出液、ヘキサン：酢酸エチル；
４：１）は下記の0.74ｇのトランス−アルデヒド(7)、
0.69ｇのシス−アルデヒド(8)、および0.64ｇの環状ア
ルデヒド(9)を与えた。〔(E)−１Ｒ−（１α，２β，４
ａβ，−８ａα）〕−５−（デカハイドロ−２−ヒドロ
キシ−２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタレ
ニル）−３−メチル−２−ペンテナール(7)融点８３−
８５℃、〔α〕_Ｄ＋14.2°（Ｃ，5.76，CHCl₃）；¹Ｈ−
ＮＭＲ（CDCl₃）δ0.78（６Ｈ，Ｓ），0.86（３Ｈ，
Ｓ），1.17（３Ｈ，Ｓ），2.15（３Ｈ，ブロードＳ），
0.8−2.5（１７Ｈ，ｍ），5.82（１Ｈ，ｄ，ｊ＝８H
z），9.98（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Hz）；ＩＲ（CHCl₃）ν
_max３５７０，３４４０，２９４０，２８５０，１６７
０，１６３０，１４６０，１４４０，１３９０cm^-1；Ｍ
Ｓｍ／ｅ３０６，２９１，２７３，１０９，９５，８
４；ＵＶλ_max（９５％エタノール）２４１nm（計算値
２３１nm）（ε．17,300）；元素分析；Ｃ₂₀Ｈ₃₄Ｏ₂：
計算値Ｃ．78.37，Ｈ．11.18，実測値Ｃ．77.92，Ｈ．1
1.02。〔(Z)−１Ｒ−（１α，２β，４ａβ，−８ａ
α）〕−５−（デカハイドロ−２−ヒドロキシ−２，
５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタレニル）−３
−メチル−２−ペンタナール(8)、融点９１−93.5℃、
〔α〕_Ｄ＋8.9（Ｃ，3.13，CHCl₃）；¹Ｈ−ＮＭＲ（CDC
l₃）δ0.78（６Ｈ，Ｓ），0.87（３Ｈ，Ｓ），1.14（３
Ｈ，Ｓ），1.98（３Ｈ，ブロードＳ），0.9−2.8（１７
Ｈ，ｍ），5.75（１Ｈ，ｄ，ｊ＝８Hz），10.0（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８Hz）；ＩＲ（CHCl₃）３５７０，３４５０，
２９４０，２８４０，１６７０，１６３０，１４６０，
１４４０，１３９０cm^-1；ＭＳｍ／ｅ３０６，２７３，
１０９，９５，８４；ＵＶλ_max（９５％エタノール）
２４２nm（計算値２３１nm）（ε．13,000）；元素分
析；Ｃ₂₀Ｈ₃₄Ｏ₂：計算値Ｃ．78.37，Ｈ．11.18，実測
値Ｃ，78.34，Ｈ，11.02。〔４ａＲ−（４ａα，６ａ
β，１０ａα，１０ｂβ）〕−ドデカハイドロ−３，４
ａ，７，７，１０ａ−ペンタメチル−１Ｈ−ナフト
〔２，１−ｂ〕ピラン−１−アセトアルデヒド(9)、¹Ｈ
−ＮＭＲ（CDCl₃）δ0.78（６Ｈ，Ｓ），0.85（３Ｈ，
Ｓ），1.25（３Ｈ，Ｓ），1.27（３Ｈ，Ｓ），0.9−2.6
（１８Ｈ，ｍ），9.8−10.0（１Ｈ，ｍ）；ＩＲ（フィ
ルム）ν_max２９４０，２８５０，１７２０，１４６
０，１４４０，１３８０，１３７０cm^-1；ＭＳｍ／ｅ
（類似質量の２本のピーク）２９１，２７３，２６２，
２４５，１０９，４３。

実施例６ この実施例は化合物(10)を調製するための方法を説明す
るものであり、該化合物(10)は本発明の方法において基
質として用いられる。

水素化ソーダの懸濁液（５０％懸濁液の0.72ｇ，0.015
モル，ヘキサンによって洗浄してミネラルオイルを除去
された）に対して、１０分間にわたってエチルジイソプ
ロピルホスホノノアセテート（3.78ｇ，0.015モル）の
ジメトキシエタン（３０ｍ）中溶液が添加された。水
素の発生が終った後〔１Ｒ−（１α、２β，４ａβ，８
ａα）〕−４−（２−アセチロキシ−デカヒドロ−２，
５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタ−レニル）−
２−ブタノン（3.22ｇ，0.01モル，ジェー．エー．バー
トロップ等によりジャーナル オブ ケミカルソサエテ
ィー，１９６０年，４６１３中に記述されるようにして
調製される）が一度に全部添加された。該混合物は２１
時間加熱還流されその後冷却されそして氷水（１００ｍ
）上に満たされた。該混合物は６Ｎ塩酸で酸性化さ
れ、ヘキサン／酢酸エチル（４：１，４×１０ｍ）で
抽出された。該有機抽出物は水（２×１０ｍ）、重炭
酸ソーダ飽和溶液（２×１５ｍ）で洗浄され、そして
Na₂SO₄で乾燥された。溶媒は蒸発せられそして残渣はク
ロマトグラフィー（シリカゲル６０；流出液，ヘキサ
ン：酢酸エチル，９：１）にかけられて無色粘濶油とし
て3.02ｇのエチル〔（Ｅ，Ｚ）−１Ｒ−（１α，２β，
４ａβ，８ａα）〕−５−（２−アセチロキシ−デカヒ
ドロ−２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフレテ
レニル）−３−メチル−２−ペンテノエートが得られ
た。

エチル〔（Ｅ，Ｚ）−１Ｒ−（１α，２β，４ａβ，８
ａα）〕−５−（２−アセチロキシ−デカヒドロ−２，
５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタレニル）−３
−メチル−２−ペンタノエート（2.19ｇ，0.00557モ
ル），イソプロパノール（６５ｍ），水（１０ｍ）
およびカセイカリ（1.47ｇ，0.0223モル）の混合物は２
４時間加熱還流された。該混合物は２０ｍに濃縮さ
れ、水（５０ｍ）が添加され、そして該混合物はエー
テルで抽出された。水相は６ＮＨＣｌで酸性化されそし
てエーテル（５×２０ｍ）で抽出された。該エーテル
抽出物はブラインで洗浄されNa₂SO₄で乾燥せられ、そし
て溶媒が蒸発せられて1.781ｇの粗生成物が得られた。
シリカゲル６０上のクロマトグラフィー（展開溶媒、ヘ
キサン：イソプロパノール，９：１）はシスーイソマー
の0.455ｇとトランスイソマー(10)の1.223ｇを与えた。
ヘキサン／酢酸エチルからの再結晶は〔(Z)−１Ｒ−
（１α，２β，４ａβ，８ａα）〕−５−（デカヒドロ
−２−ハイドロキシ−２，５，５，８ａ−テトラメチル
−１−ナフタレニル）−３−メチル−２−ペンテノイッ
クアシドの下記の分析化学的試料を与えた。融点１４７
−１４９℃；〔α〕_Ｄ＋62.96°）Ｃ．4.66，CHCl₃）：
¹Ｈ−ＮＭＲ（CDCl₃）δ0.81（６Ｈ，Ｓ），0.88（３
Ｈ，Ｓ），1.21（３Ｈ，Ｓ），1.92（３Ｈ，ブロード
Ｓ），0.9−2.4（１７Ｈ，ｍ），5.72（１Ｈ，ブロード
Ｓ）6.8−7.3（１Ｈ，Ｖ．ブロードＳ）；ＩＲ（CHC
l₃）ν_max３５００，３４００，２９４０，２５５０，
１６９０，１６４０，１４６０，１４４０cm^-1；ＭＳｍ
／ｅ３２２，３０４，２８９，２７６，１０９；ＵＶλ
_max（９５％EtOH）２２８nm（計算値２１７nm）（ε，
７３００）；元素分析、 Ｃ₂₀H₃₄O₃：計算値Ｃ，74.49，Ｈ，10.63，実測値Ｃ．7
4.20，Ｈ．10.40。〔(E)−１Ｒ−（１α，２β，４ａ
β，８ａα）〕−５−（デカハイドロ−２−ヒドロキシ
−２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタレニ
ル）−３−メチル−２−ペンテノイックアシド、融点１
５１−１５３℃、〔α〕_Ｄ9.44°（Ｃ．4.83，CHC
l₃）：¹Ｈ−ＮＭＲ（CDCl₃）δ0.79（６Ｈ，Ｓ），0.87
（３Ｈ，Ｓ），1.15（３Ｈ，Ｓ），2.17（３Ｈ，ブロー
ドＳ），0.9−2.4（１７Ｈ，ｍ），5.70（１Ｈ，ブロー
ドＳ）5.8−6.1（１Ｈ，ブロードＳ）；ＩＲ（CHCl₃）
ν_max３６５０，３４００，２９４０，２５５０，１６
９０，１６４０，１４６０，１４４０cm^-1；ＭＳｍ／ｅ
３２２，３０４，２８９，２７６，１０９；ＵＶλ_max
（９５％EtOH）２３０nm（計算値２１７nm）（ε，５７
００）；元素分析、Ｃ₂₀H₃₄O₃：計算値Ｃ，74.49，Ｈ，
10.63、実測値Ｃ，74.12，Ｈ，10.52 実施例７ この実施例は化合物(11)を調製するための方法を説明す
るものであり、該化合物は本発明の方法において基質と
して用いられる。

テトラヒドロフラン（９０ｍ）中ジイソプロピルアミ
ン（8.484ｇ，0.084モル）の溶液に０℃においてｎ−ブ
チルリチウム（2.2Ｍヘキサン溶液の38.2ｍ，0.084モ
ル）が２０分間にわたって滴下された。テトラヒドロフ
ラン（２０ｍ）中の酢酸（2.52ｇ，0.042モル）溶液
が１５分間にわたって添加された。該混合物はその後５
０℃，４５分間加熱された。該混合物は２５℃に冷却さ
れそしてテトラヒドロフラン（３５ｍ）中の〔１Ｒ−
（１α，２β，４ａβ，８ａα）−４−（２−アセチロ
キシ−デカヒドロ−２，５，５，８ａ−テトラメチル−
１−ナフタレニル）−２−ブタノン（4.508ｇ，0.014モ
ル），ジェー．エー．バールトロップ等によりジャーナ
ル オブ ケミカル ソサエティー，１９６０年，４６
１３中に記述されるようにして調製される）が１０分間
にわたって添加された。該混合物は２５℃，１７時間撹
拌されそしてその後３０分間加熱還流された。該混合物
は２５℃に冷却されその後水（４０ｍ）とカセイカリ
（５ｇ）が添加された。該混合物は４時間加熱還流され
その後冷却され水（１００ｍ）に添加され、そしてヘ
キサン／酢酸エチル（４：１）（３×３０ｍ）によっ
て抽出された。水層は０℃に冷却され、６ＮＨＣｌによ
り酸性化され、そしてヘキサン／酢酸エチル（４：１，
４×５０ｍ）によって抽出された。合一された抽出物
はブラインによって洗浄され、Na₂SO₄により乾燥され、
その後溶媒は蒸発されて粗生成物の2.071ｇを得た。シ
リカゲル６０上のクロマトグラフ（展開溶媒，ヘキサ
ン：酢酸エチル：酢酸，（１０：１０：0.1）は酸(11)
の1.434ｇを与えた。ヘキサン／酢酸エチルからの結晶
化は下記の分析化学的試料を与えた。融点１３６−137.
5℃，¹Ｈ−ＮＭＲ（CDCl₃）δ0.76（６Ｈ，Ｓ），0.85
（３Ｈ，Ｓ），1.16と1.19（３Ｈ，２Ｓ），1.28（３
Ｈ，Ｓ），0.8−1.9（１６Ｈ，ｍ），2.4−2.8（２Ｈ，
ｍ），6.1−6.6（２Ｈ，ブロードＳ）；ＩＲ（CHCl₃）
ν_max３５５０，２９３０，２７００，１７１０，１４
５５，１３８５cm^-1；ＭＳｍ／ｅ３４０，３０４，２８
９，１０９，９５，４３、元素分析、Ｃ₂₀H₃₆O₄：計算
値Ｃ，70.54，Ｈ，10.66，実測値Ｃ．70.99，Ｈ．10.6
3、 実施例８ この実施例はα−エテニル−デカヒドロ−２−ハイドロ
キシ−α，２，５，５，８ａ−ペンタメチル−１−ナフ
レテレンプロパノール(4)のドデカヒドロ−３ａ，６，
６，９ａ−テトラメチルナフト〔２，１−ｂ〕フラン
(1)への２段階工程を用いた変換を説明するものであ
る。

７個のフラスコが用いられたこと、各フラスコにはスク
ラレオール(4)の総計が添加されそして孵置期間が変え
られたこと（第５表をみよ）を除いては実施例２におい
て記述されたと同様な方法が用いられた。孵置が完了し
た時、フラスコは別々に浮遊せられて粗ジオール(3)の
７個のサンプルが得られた。各サンプルは別々にキャン
ビー等の方法（オーストラリア ジャーナル オブ ケ
ミカル，１９７１年，第２４巻，第５９１頁をみよ）に
よってピリジン中でトルエン−ｐ−スルホニルクロライ
ドと反応せられ、そして各反応生成物はクゲルロール蒸
溜されてフラン(1)を与えた。¹Ｈ−ＮＭＲ（CDCl₃）δ
0.83（６Ｈ，２Ｓ），0.88（３Ｈ，Ｓ），0.9−1.8（１
３Ｈ，ｍ），1.9−2.0（１Ｈ，ｍ），3.77−3.92（２
Ｈ，ｍ）；ＩＲ（メルト）ν_max２９４０，１４６０，
１３８５，１３６５cm^-1；ＭＳｍ／ｅ２３６，２２１，
２０４，１７７，１３７，９７ 該７個の実験のデータは第５表に要約される。

実施例９ この実施例は水性栄養培地から分離することなく変態生
成物デカヒドロ−２−ハイドロキシ−２，５，５，８ａ
−テトラメチルナフタレンエタノール(3)をドデカヒド
ロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト〔２，１
−ｂ〕フラン(1)へ直接環化することを説明するもので
ある。

発酵肉汁の１００ｍ中の基質としてスクラレオール
（2.0ｇ）を用いて実施例２に記述されたと同様な方法
が用いられた。１４日の全孵置時間の後、フラスコの内
容物は反応容器に移されそして撹拌、加熱還流せられ
た。トルエン−ｐ−スルホニルクロライド（2.48ｇ）、
カセイソ−ダペレット（２５ｇ）およびテトラヒドロフ
ラン（２００ｍ）が添加されそして混合物は２０℃で
撹拌された。５時間後トルエン−ｐ−スルホニルクロラ
イド（1.50ｇ）が更に添加せられそして該反応混合物は
一晩撹拌された。次の日、該混合物は３０分間加熱還流
され、冷却され、そして酢酸エチル（３×１００ｍ）
で抽出された。合一された抽出物はNa₂SO₄で乾燥され
た。該溶媒は蒸発されそして残渣はクーゲルロール蒸溜
されて固形分の1.38ｇを与え、該固形分は機器分析によ
れば８５％のドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テト
ラメチルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1)を含んでい
た。

実施例１０ この実施例は水性栄養培地から分離することなくして変
態生成物デカヒドロ−２−ハイドロキシ−２，５，５，
８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール(3)をドデカ
ヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト−
〔２，１−ｂ〕フラン(1)に直接環化するための改変さ
れた方法を説明するものである。

発酵肉汁の１００ｍ中の基質としてスクラレオール
（2.0ｇ）を用いて実施例２において記述されたと同様
な方法が用いられた。１４日間の全孵置時間の後、フラ
スコの内容物は反応容器に移され撹拌および加熱還流せ
られた。発酵肉汁は６Ｎ塩酸で酸性化され（約pH１）、
酢酸エチル（１００ｍ）が添加され、そして該混合物
は６時間撹拌、加熱還流された。冷却後、酢酸エチル層
は分離され、中性になるまで洗浄され、そして乾燥され
た。該溶媒は蒸発されそして残渣はクーゲルロール蒸溜
されて1.4ｇの固形分を与え、該固形分は機器分析によ
れば３８％のドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テト
ラメチルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1)を含んでい
た。

実施例１１ この実施例は水性栄養培地から分離することなくして変
態生成物デカヒドロ−２−ハイドロキシ−２，５，５，
８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール(3)をドデカ
ヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト
〔２，１−ｂ〕フラン(1)に直接環化するための改変さ
れた方法を説明するものである。

イオン交換樹脂ドウェックス５０×２４００（１０ｇ）
が６Ｎ塩酸の代りに発酵肉汁へ添加されたことを除いて
は実施例８において記述されたと同様な方法が用いられ
た。浮遊、そしてクーゲルロール蒸溜は13.2ｇの固形分
を与え、該固形分は化合物(1)の３７％を含んでいた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明における重要な化合物のいくつかのもの
の構造を示すものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 フイリツプ エイ．クリステンソン アメリカ合衆国 07432 ニユージヤージ ー，ミドランド パーク，バステイード ドライブ 118

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の構造 を有するジオールを および ここにＲは である。 からなるグループからの化合物を水性栄養培地中で好気
   性下に変化させることによって回収可能な量で製造する
   ことが出来る寄託番号ＡＴＣＣ２０６２４の微生物ハイ
   ホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseoniger）