JPH0634711B2 - バチルスｓｐ．ｋｋ−４６４５ - Google Patents
バチルスｓｐ．ｋｋ−４６４５Info
- Publication number
- JPH0634711B2 JPH0634711B2 JP61072455A JP7245586A JPH0634711B2 JP H0634711 B2 JPH0634711 B2 JP H0634711B2 JP 61072455 A JP61072455 A JP 61072455A JP 7245586 A JP7245586 A JP 7245586A JP H0634711 B2 JPH0634711 B2 JP H0634711B2
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- Japan
- Prior art keywords
- inulin
- enzyme
- bacillus
- reaction
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、イヌロオリゴ糖生成酵素を産生する新規な
菌、バチルスsp.ＫＫ−４６４５に関するものである。
菌、バチルスsp.ＫＫ−４６４５に関するものである。
［従来の技術］ 従来、イヌロオリゴ糖生成酵素としはアスペルギルス・
ニガー株の産生する酵素が知られている（中村豊彦等、
農化誌、第５２巻 第４号 Ｐ１５９〜１６６、１９７
８年）が、この酵素では一定重合度のイヌロオリゴ糖の
生産は困難であった。
ニガー株の産生する酵素が知られている（中村豊彦等、
農化誌、第５２巻 第４号 Ｐ１５９〜１６６、１９７
８年）が、この酵素では一定重合度のイヌロオリゴ糖の
生産は困難であった。
［発明が解決しようとする問題点］ 近年、ニストース、ケストース等のフラクトオリゴ糖に
ついては、ビフィダス菌増殖因子などの生理特性、物
性、甘味の質など、マルトオリゴ糖とは異なった特性を
持つことで注目され、イヌロオリゴ糖についても、フラ
クトオリゴ糖とほぼ同重合度で、一定重合度のイヌロオ
リゴ糖の生産が必要とされてきた。
ついては、ビフィダス菌増殖因子などの生理特性、物
性、甘味の質など、マルトオリゴ糖とは異なった特性を
持つことで注目され、イヌロオリゴ糖についても、フラ
クトオリゴ糖とほぼ同重合度で、一定重合度のイヌロオ
リゴ糖の生産が必要とされてきた。
［問題点を解決するための手段］ そこで本発明者等は、イヌリンからイヌロオリゴ糖の生
産を目的として、イヌリン分解酵素産生菌を検索し、イ
ヌリンから反応初期に、主としてイヌロテトラオースを
生成する酵素を産生する菌バチルスsp.ＫＫ−４６４５
を見い出した。
産を目的として、イヌリン分解酵素産生菌を検索し、イ
ヌリンから反応初期に、主としてイヌロテトラオースを
生成する酵素を産生する菌バチルスsp.ＫＫ−４６４５
を見い出した。
本菌の産生する酵素をイヌリンに作用させることによ
り、ほぼ一定重合度のイヌロオリゴ糖を得ることができ
る。
り、ほぼ一定重合度のイヌロオリゴ糖を得ることができ
る。
以下、本菌株の菌学的諸性質を述べる。
１．細胞形態 形態：0.5〜0.6μ×４〜５μの桿菌 胞子：形成する 鞭毛：周鞭毛 グラム染色：弱陽性 ２．培養所見 寒天集落：円形、丘状、光沢あり、粘性あり、不透明、
鈍い黄色 寒天斜面：中程度の生育、光沢あり、粘性あり、鈍い黄
色 肉汁ゼラチン：液化する リトマスミルク：不変 ３．生理的性質 好気性 生育温度：30℃で良好な生育を示す、40℃まで生育する 生育pH：pH5.5〜8.0 硝酸塩の還元：あり メチルレッド試験：陽性 Ｖ−Ｐ反応：陽性 硫化水素の生成：あり（システイン添加培地、酢酸鉛試
験紙） クエン酸の利用：なし（クリステンセン培地） カタラーゼの生成：あり 澱粉分解性：あり カゼイン分解性：なし 糖より酸の生成：グルコース、シュクロース、マンニッ
ト、イヌリン、澱粉より酸を生成する、ガスは生成しな
い 上記の諸性質から、バージェイズ マニュアル オブ
デタミネイテイブ バクテリオロジー 第８版により検
索した結果、本菌株はバチルス属に属する。さらに種に
ついては同書によれば、本菌の類縁菌はサーキユラン
ス、ポリミキサ、マセランス、コアギュランス、フィル
ムスであるが、本菌株はこれらの菌の性質とは一致しな
いので、バチルスsp.ＫＫ−４６４５と命名した。本菌
株は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−
８６８９として寄託されている。
鈍い黄色 寒天斜面：中程度の生育、光沢あり、粘性あり、鈍い黄
色 肉汁ゼラチン：液化する リトマスミルク：不変 ３．生理的性質 好気性 生育温度：30℃で良好な生育を示す、40℃まで生育する 生育pH：pH5.5〜8.0 硝酸塩の還元：あり メチルレッド試験：陽性 Ｖ−Ｐ反応：陽性 硫化水素の生成：あり（システイン添加培地、酢酸鉛試
験紙） クエン酸の利用：なし（クリステンセン培地） カタラーゼの生成：あり 澱粉分解性：あり カゼイン分解性：なし 糖より酸の生成：グルコース、シュクロース、マンニッ
ト、イヌリン、澱粉より酸を生成する、ガスは生成しな
い 上記の諸性質から、バージェイズ マニュアル オブ
デタミネイテイブ バクテリオロジー 第８版により検
索した結果、本菌株はバチルス属に属する。さらに種に
ついては同書によれば、本菌の類縁菌はサーキユラン
ス、ポリミキサ、マセランス、コアギュランス、フィル
ムスであるが、本菌株はこれらの菌の性質とは一致しな
いので、バチルスsp.ＫＫ−４６４５と命名した。本菌
株は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−
８６８９として寄託されている。
上記類縁菌は本菌と類似しているので、培養条件によっ
ては、イヌロオリゴ糖生成酵素を産生する可能性もあ
る。
ては、イヌロオリゴ糖生成酵素を産生する可能性もあ
る。
本菌株を、イヌリン及び／またはイヌリン含有植物の抽
出液を炭素源とし、ペプトンを窒素源とした培地に培養
すれば、高活性のイヌリン分解酵素が得られる。培養温
度は25〜30℃が適当である。また、培養時間は24〜72時
間が適当である。培養後の培養液をそのまま、あるいは
集菌して洗浄し、pH６〜７の緩衝液に菌体を懸濁したも
のをイヌリン溶液及び／またはイヌリン含有植物の抽出
液に加えて反応させると、反応初期に主としてイヌロテ
トラースが生成される。また反応時間の長短により、種
々の組成のイヌロオリゴ糖が生成される。例えば72時間
反応した後加熱して酵素を失活し、過、脱色、脱塩等
の方法を用いて精製すれば、各種重合度のイヌロオリゴ
糖を含む製品も得られる。すなわち、反応条件によりフ
ラクトースからイヌロテトラオースを主成分とする混合
物の生産も可能である。
出液を炭素源とし、ペプトンを窒素源とした培地に培養
すれば、高活性のイヌリン分解酵素が得られる。培養温
度は25〜30℃が適当である。また、培養時間は24〜72時
間が適当である。培養後の培養液をそのまま、あるいは
集菌して洗浄し、pH６〜７の緩衝液に菌体を懸濁したも
のをイヌリン溶液及び／またはイヌリン含有植物の抽出
液に加えて反応させると、反応初期に主としてイヌロテ
トラースが生成される。また反応時間の長短により、種
々の組成のイヌロオリゴ糖が生成される。例えば72時間
反応した後加熱して酵素を失活し、過、脱色、脱塩等
の方法を用いて精製すれば、各種重合度のイヌロオリゴ
糖を含む製品も得られる。すなわち、反応条件によりフ
ラクトースからイヌロテトラオースを主成分とする混合
物の生産も可能である。
イヌロテトラオース生成酵素トフラクトース生成酵素の
存在部位については、前者が細胞壁、後者が細胞質内で
あり、細胞を破砕して細胞壁を集めた画分を用いれば、
イヌロテトラオース含量の多い製品が得られる。一方フ
ラクトース高含量製品を得たい場合は、菌体破砕物の全
体を用いればよい。したがって酵素材としては、目的に
応じて菌体そのまま又は従来法により固定化したもの、
菌体を破砕処理したもの又は細胞壁を取り出したものを
用いることもできる。
存在部位については、前者が細胞壁、後者が細胞質内で
あり、細胞を破砕して細胞壁を集めた画分を用いれば、
イヌロテトラオース含量の多い製品が得られる。一方フ
ラクトース高含量製品を得たい場合は、菌体破砕物の全
体を用いればよい。したがって酵素材としては、目的に
応じて菌体そのまま又は従来法により固定化したもの、
菌体を破砕処理したもの又は細胞壁を取り出したものを
用いることもできる。
さらに高純度のイヌロオリゴ糖を得るには、精製した糖
液を活性炭カラムクロマトグラフィ、市販の充填剤を用
いたゲル過カラムクロマトグラフィ、種々の膜を用い
た膜分離濃縮などを行なえばよい。
液を活性炭カラムクロマトグラフィ、市販の充填剤を用
いたゲル過カラムクロマトグラフィ、種々の膜を用い
た膜分離濃縮などを行なえばよい。
つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する
が、これに限定されるものではない。
が、これに限定されるものではない。
実施例 市販イヌリン１％、ＮＺアミン（シェフィールド社製ペ
プトン）３％、塩化アンモニウム0.2％、リン酸二カリ
ウム0.05％を含んだ培地50mlをpH７に調製し、120℃で1
5分間蒸気滅菌する。この滅菌した培地に、バチルスsp.
ＫＫ−４６４５（ＦＥＲＭ Ｐ−８６８９）を一白金耳
接種し、30℃で２日間振盪培養を行なう。培養終了後、
遠心分離機で集菌し、pH７の緩衝液で２〜３回洗浄す
る。ここで湿潤菌体約１ｇが得られる。この湿潤菌体の
酵素としての温度安定性は３０℃迄、反応至適温度は４
０℃、至適pHは７、pH安定性はpH5.5〜7.0の範囲で安定
である。この湿潤菌体を緩衝液５mlに懸濁させ、５％イ
ヌリン水溶液１０mlに本懸濁液１mlを加え、30℃で15時
間反応させる。反応液中のイヌロオリゴ糖の生成比率を
高速液体クロマトグラフィ及びペーパークロマトグラフ
ィを用いて求めると、イヌリンから全オリゴ糖の生成率
は５６％、全オリゴ糖中のそれぞれのオリゴ糖の組成
は、イヌロビオース７％、イヌロトリオース２７％、イ
ヌロテトラオース４７％、イヌロペンタオース１４％、
イヌロヘキサオース以上５％である。反応時間５時間で
のオリゴ糖組成は、イヌロテトラオース８０％にも達す
る。
プトン）３％、塩化アンモニウム0.2％、リン酸二カリ
ウム0.05％を含んだ培地50mlをpH７に調製し、120℃で1
5分間蒸気滅菌する。この滅菌した培地に、バチルスsp.
ＫＫ−４６４５（ＦＥＲＭ Ｐ−８６８９）を一白金耳
接種し、30℃で２日間振盪培養を行なう。培養終了後、
遠心分離機で集菌し、pH７の緩衝液で２〜３回洗浄す
る。ここで湿潤菌体約１ｇが得られる。この湿潤菌体の
酵素としての温度安定性は３０℃迄、反応至適温度は４
０℃、至適pHは７、pH安定性はpH5.5〜7.0の範囲で安定
である。この湿潤菌体を緩衝液５mlに懸濁させ、５％イ
ヌリン水溶液１０mlに本懸濁液１mlを加え、30℃で15時
間反応させる。反応液中のイヌロオリゴ糖の生成比率を
高速液体クロマトグラフィ及びペーパークロマトグラフ
ィを用いて求めると、イヌリンから全オリゴ糖の生成率
は５６％、全オリゴ糖中のそれぞれのオリゴ糖の組成
は、イヌロビオース７％、イヌロトリオース２７％、イ
ヌロテトラオース４７％、イヌロペンタオース１４％、
イヌロヘキサオース以上５％である。反応時間５時間で
のオリゴ糖組成は、イヌロテトラオース８０％にも達す
る。
フロントページの続き (72)発明者 本坊 慶吉 鹿児島県鹿児島市薬師１丁目７番33号 (72)発明者 門間 充 茨城県新治郡桜村吾妻２丁目1506番地809 −307 (72)発明者 貝沼 圭二 茨城県新治郡桜村並木３−619
Claims (1)
- 【請求項１】イヌリンを加水分解して、反応初期に主と
してイヌロテトラオースを生成する酵素を産生する新規
な菌、バチルスsp.ＫＫ−４６４５。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61072455A JPH0634711B2 (ja) | 1986-04-01 | 1986-04-01 | バチルスｓｐ．ｋｋ−４６４５ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61072455A JPH0634711B2 (ja) | 1986-04-01 | 1986-04-01 | バチルスｓｐ．ｋｋ−４６４５ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62232380A JPS62232380A (ja) | 1987-10-12 |
| JPH0634711B2 true JPH0634711B2 (ja) | 1994-05-11 |
Family
ID=13489794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61072455A Expired - Fee Related JPH0634711B2 (ja) | 1986-04-01 | 1986-04-01 | バチルスｓｐ．ｋｋ−４６４５ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0634711B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9829041B2 (en) | 2013-05-28 | 2017-11-28 | Ntn Corporation | Rolling bearing |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0385361B1 (en) * | 1989-02-28 | 1994-05-04 | Mitsubishi Kasei Corporation | A novel exo-type hydrolase and a method of manufacturing inulotriose and/or inulotetrose |
| CN108949857B (zh) * | 2018-07-26 | 2020-09-04 | 江南大学 | 一种以菊糖为底物合成菊二糖的方法 |
-
1986
- 1986-04-01 JP JP61072455A patent/JPH0634711B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9829041B2 (en) | 2013-05-28 | 2017-11-28 | Ntn Corporation | Rolling bearing |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62232380A (ja) | 1987-10-12 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |