JPH0636735B2 - ワサビから分離された新規ラブドウイルス(Rhabdovirus) - Google Patents

ワサビから分離された新規ラブドウイルス(Rhabdovirus)

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JPH0636735B2
JPH0636735B2 JP1720190A JP1720190A JPH0636735B2 JP H0636735 B2 JPH0636735 B2 JP H0636735B2 JP 1720190 A JP1720190 A JP 1720190A JP 1720190 A JP1720190 A JP 1720190A JP H0636735 B2 JPH0636735 B2 JP H0636735B2
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rhabdovirus
wasabi
horseradish
shaped
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日出男 岸良
浩子 西田
徹 下村
監一郎 匠原
修一 山下
常男 土崎
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日本鉱業株式会社
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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、退化現象の現れたワサビから分離されたラブ
ドウイルス(Pant rhabdovirus)に属する新規ウ
イルス及びその変異株に関する。
本発明のウイルスは、退化現象の原因となるこれらのウ
イルスにワサビが感染しているか否かを検定するための
抗体作製用の抗原として利用することができる。さら
に、これらのワサビウイルス病を予防乃至治療するため
の検体として利用することもできる。
〔従来の技術〕
ワサビ(Wasabia japonica)の多くの品種は実生で増殖さ
れているが、「真妻」等の優良品種は株分けで増殖され
ている。しかし株分けを繰り返すことによって根茎の肥
大が悪くなり、子株もほとんど採れなくなるという、い
わゆる退化現象が現われるので、優良株分け品種は絶滅
の危機に瀕している。この退化現象の主な原因となって
いるのがウイルス感染によるウイルス病と考えられてい
る。〔鈴木春夫ら、静岡農試研法21,55〜66(1976)〕。
ワサビから分離されているウイルスはTMV-W(タバコモ
ザイクウイルスワサビ系)CMV(キュウリモザイクウイ
ルス)及びTuMV(カブモザイクウイルス)の3種が報告
されている〔上掲誌、小室康雄ら、植物防疫20,486〜48
8(1966)、栃原比呂志ら、関東東山病虫研報11,46(196
4)〕。現在のところ、植物に感染しているウイルスを殺
滅し、ウイルス病を治療する農薬はまだ見出されていな
い。ウイルスに感染した植物からウイルスを除去するい
わゆるウイルスフリー化のためのほとんど唯一の方法と
して組織培養技術を利用した茎頂生長点培養法がラン、
ユリ、カーネーション等の花卉、ブドウ、リンゴ、ミカ
ン等の果樹、イチゴ、ヤマノイモ等の野菜、センキョ
ウ、ジオウ等の薬用植物において実用化されている。ワ
サビにおいても茎頂生長点培養法が適用され、メリクロ
ン法や苗条原基法により実用化が進められている。
しかし茎頂生長点培養法により作出した苗が全てウイル
スフリーになるわけではなく、茎頂生長点培養法により
作出した苗のウイルス検定は必須である。ウイルス検定
法には、生物検定法、電子顕微鏡法及び抗血清試験法が
あり、対照とする植物とウイルスの種類により、これら
の方法を組合せて検定することが必要である。ワサビに
おいては前述のごとく3種類のウイルスすなわちTMV-W
CMV及びTuMVにのみ感染していることが知られていたた
め、茎頂培養法により作出した培養苗がウイルスフリー
か否かの検定は当然これら3種類のウイルスのみを対照
として行なわれてきた。しかし、検定の結果、ウイルス
フリーと判断されても実際にはウイルスに感染されてい
ることが見出されている。
〔発明が解決しようとする課題〕
本発明は、ワサビのウイルス検定を確実なものとし、完
全にウイルスフリーなワサビを得ることを目的としてワ
サビに感染する新規なウイルスを検索し、これを獲得し
ようとするものである。そして得られたウイルスは、ワ
サビウイルス検定を行うための抗体作製用の抗原とし
て、またこれらのウイルス病の予防ないし治療のための
検体として利用しようとするものである。
〔課題を解決するための手段〕
本発明者らは、ワサビの新規ウイルスを取得することを
目的として静岡県湯ケ島町のワサビ田から得られたワサ
ビ(品種:真妻)について新規ウイルスの検索を行っ
た。その結果、棒状ウイルス、ひも状ウイルス及び桿菌
状〜弾丸状ウイルスの3種のウイルスが検出された。こ
のうち棒状ウイルスは、300nm×18nmの大きさでTMV-Wの
抗血清とよく反応したので、公知のtabaco mosaic viru
sのワサビ系と同定した。そして、ひも状ウイルス及び
桿菌状〜弾丸状ウイルスについては後述するような検定
の結果、丈献未載の新規のウイルスであることが確認さ
れ、本発明をなすに至った。
本発明は、上記2種のウイルスのうち桿菌状〜弾丸状ウ
イルスであるラブドウイルス(Pant rhabdoviru
s)に属する新規ウイルスに関する。
また、本発明のラブドウイルスは35〜37℃で5〜15日程
度さらす高温処理、亜硝酸、ヒドロキシアミンで処理す
る化学処理及びIn vitro mutagen-esis-reverse geneti
cs法等による遺伝子操作等で変異させることができるが
このような変異株も本発明は包含する。
本発明のウイルスについて採取法及び形態等を示すと次
のとおりである。
a) ウイルスの採取及び検出 静岡県湯ケ島町のワサビ田から得られたワサビ(品種:
「真妻」)を10mm×1mm程度に細切し、さらにそれを切
りきざんだ。スライドグラス上に0.1mo/リン酸
緩衝液を一滴たらし、その中に上記切りきざんだわさび
を入れ、汁液をしみ出させた。
次いで、コロジオン支持膜を張り、カーボン補強した銅
製グリッドの膜面をこのワサビ汁液に接触させ、速やか
に余分の液を濾紙で吸いとり膜面を上にして風乾させ
た。スライドグラス上に0.1mo/リン酸緩衝液に
1%グルタルアルデヒドを溶かした固定液を数滴たら
し、その液面に風乾させたグリッドの試料面を下にして
3〜5分間浮かべ、固定させた。固定させた試料の乗っ
たグリッドを脱イオン蒸留水で3回洗浄した後、染色液
(2%リンタングステン酸水溶液、ドライウェル0.5%
添加pH7.0)で30秒間染色し、濾紙で余分の染色液を吸
いとり、膜面を上にして風乾させて検出のための試料と
した。
b) ウイルスの形態の観察 この様にして作成した試料を透過型電子顕微鏡で検鏡
し、ウイルスの形態を観察した。
その結果、棒状ウイルス、ひも状ウイルス及び桿菌状〜
弾丸状ウイルスの3種のウイルスが検出された。棒状ウ
イルスは300nm×18nmの大きさで、TMV-Wの抗血清とよく
反応したことから既知のTMV-Wと同定した。ワサビに感
染していることが報告されているひも状ウイルスとして
はTuMVがあるが、TuMVの大きさが750nm×11nmであるの
に対し検出されたひも状ウイルスの大きさは650〜700nm
×13nmと大きく異なり、また、TuMVに感染した植物に特
異的に見出される風車状封入体は見出されなかった。さ
らに、TuMVの抗血清と全く反応しなかった。以上のこと
からひも状ウイルスはTuMVとは異なるカルラウイルス(C
arlavirus)に属するウイルスであると判断した。一方、
本発明の桿菌状〜弾丸状のウイルスは約230〜250nm×85
〜90nmで内部に約4.5nmのら旋構造のヌクレオキャプシ
ドと外部に被膜を有することから、このウイルスはラブ
ドウイルス(Pant rhabdovirus)に属するウイル
スであると判断した。
c) 超薄切片法によるウイルスの細胞内所見 グルタルアルデヒドとオスミウム酸による二重固定法に
より固定したワサビ試料をエポキシ樹脂に包理・固化
後、超薄切片を作成した。この超薄切片を銅製グリッド
にのせ酢酸ウランとクエン酸鉛による二重染色法で染色
した。この様に作成した試料を透過型電子顕微鏡で検鏡
し、ウイルスの細胞内存在様式及びウイルス感染細胞の
変化について観察した。
本発明のラブドウイルス(Pant rhabdovirus)に
属する桿菌状〜弾丸状ウイルスは、核、核膜間隙及び細
胞質に見出された。核内にはウイルス粒子と共に被膜を
かぶっていないヌクレオキャプシドが認められた。以上
の所見から、このウイルスは核内増殖型のウイルスであ
ることがわかった。
d) 寄主範囲 本発明のラブドウイルス(Pant rhabdovirus)が
他の植物に感染するかどうかについてアブラナ科植物を
中心に6科29種の植物について接種試験を行った。
すなわち、ラブドウイルス(Pant rhabdovirus)
カルラウイルス(Carlavirus)及びTMV-Wに混合感染して
いる親ワサビ「真妻」(品種名)を接種源としてアブラ
ナ科植物を中心に6科29種の植物に汁液接種した。そ
の結果を第1表および第2表に示す。いずれの植物に対
してもラブドウイルス(P−ant rhabdovirus)も
カルラウイルス(Carlavirus)も感染を認められなかっ
た。ラブドウイルス(P−ant rhabdovirus)がア
ブラナ科植物に感染することはヨーロッパで、ブロッコ
リーネクロティックイエロウス ウイルスとブラジル
で、ラファナスSP.からの2種が報告されているだけで
あり、本発明のラブドウイルス(Pant rhabdovi
rus)は、第1表に示した通り、ブロッコリーにもラファ
ナス(ダイコン)にも感染せず、このことから本ウイル
スは新種のウイルスであることが明らかとなった。
e) 新種ウイルスの現地発生調査 ワサビ栽培現地のウイルス発生調査を行なった。すなわ
ち、ワサビ5品種31検体についてDN法で検定を行なっ
たところ、ラブドウイルス(Pant rh-abdoviru
s)は「真妻」のみから検出され、退化現象による収量低
下が問題となっているこのワサビ品種にとって、このウ
イルスは重要な影響を与えるウイルスであることが明ら
かとなった。
〔発明の効果〕
本発明は、退化現象の現れたワサビから分離されたラブ
ドウイルス(Pant rhabdovirus)に属する新種の
ウイルスを提供するものである。本発明の新種ウイルス
は、栽培中のワサビがこのウイルスに感染しているか否
かの検定あるいは、組織培養により作出した培養体がウ
イルスフリーになっているか否かの検定のための抗体作
製用抗原として利用することができる。また、このウイ
ルスに感染したワサビの治療乃至感染予防のための研究
の検体として利用することもできる。
その結果、ワサビの退化現象を予防し、ワサビの品質を
向上することができる。
【図面の簡単な説明】
第1図は、本発明の微生物ラブドウイルス(Pant
rhabdovirus)の形態を示す電子顕微鏡写真である。
(倍率220,000倍)
フロントページの続き (72)発明者 山下 修一 東京都江東区越中島1―3―16―104 (72)発明者 土崎 常男 茨城県稲敷郡茎崎町城山43―14

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】ワサビから分離され、ダイレクトネガティ
    ヴ法(DN法)で約230〜250×85〜90nmの桿菌状〜弾丸状
    形態を示し、内部にら旋構造のヌクレオキャプシドと外
    部に被膜とを有するラブドウイルス(Rhabdovirus)に属
    するウイルスまたはその変異株
JP1720190A 1990-01-26 1990-01-26 ワサビから分離された新規ラブドウイルス(Rhabdovirus) Expired - Lifetime JPH0636735B2 (ja)

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