JPH0638733A - 細胞培養用成型品 - Google Patents
細胞培養用成型品Info
- Publication number
- JPH0638733A JPH0638733A JP3089218A JP8921891A JPH0638733A JP H0638733 A JPH0638733 A JP H0638733A JP 3089218 A JP3089218 A JP 3089218A JP 8921891 A JP8921891 A JP 8921891A JP H0638733 A JPH0638733 A JP H0638733A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molded product
- cell culture
- insoluble carrier
- cytokine
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 不溶性担体の表面にＮ−アシルノイラミン酸
をアミド結合で固定化して成る細胞培養用成型品、及び
組織系細胞を当該細胞培養用成型品と接触させることを
特徴とするインターロイキン−６等のサイトカインの製
造方法。不溶性担体は、スチレンまたはα−メチルスチ
レンを主体とするビニル重合体成型品の表面にアミノメ
チル基を導入したものを使用する。 【効果】 血管内皮細胞の培養などに有用である。
をアミド結合で固定化して成る細胞培養用成型品、及び
組織系細胞を当該細胞培養用成型品と接触させることを
特徴とするインターロイキン−６等のサイトカインの製
造方法。不溶性担体は、スチレンまたはα−メチルスチ
レンを主体とするビニル重合体成型品の表面にアミノメ
チル基を導入したものを使用する。 【効果】 血管内皮細胞の培養などに有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、組織系細胞に作用して
有用物質を産生させ得る細胞培養用成型品に関する。
有用物質を産生させ得る細胞培養用成型品に関する。
【０００２】
【従来の技術】生理活性物質を不溶性担体に固定化した
ものはアフイニテイークロマトグラフ用吸着剤、治療用
血液処理剤、細胞培養用機材、抗菌性材料、その他、分
析用試薬などとして広く利用されており、今後さらに幅
広い応用が期待される重要な物質である。
ものはアフイニテイークロマトグラフ用吸着剤、治療用
血液処理剤、細胞培養用機材、抗菌性材料、その他、分
析用試薬などとして広く利用されており、今後さらに幅
広い応用が期待される重要な物質である。
【０００３】線維芽細胞、血管内皮細胞、皮膚ケラチン
細胞等で代表される組織系細胞はインターフエロン、イ
ンターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−
６（ＩＬ−６）などの有用なサイトカインを産生するこ
とでしられている。特に血管内皮細胞は血管の血液接触
部に存在する細胞であるが、組織プラスミノーゲンアク
チベータ、プロスタサイクリン、アンジオテンシンＩ
Ｉ、レニン、ＩＬ−１、ＩＬ−６などの有用物質を産生
することが知られており、生体外での血管内皮細胞の培
養は、人口血管の製造のほか、これら有用物質の生産を
可能にする意味で、近年、とりわけ注目されている。
細胞等で代表される組織系細胞はインターフエロン、イ
ンターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−
６（ＩＬ−６）などの有用なサイトカインを産生するこ
とでしられている。特に血管内皮細胞は血管の血液接触
部に存在する細胞であるが、組織プラスミノーゲンアク
チベータ、プロスタサイクリン、アンジオテンシンＩ
Ｉ、レニン、ＩＬ−１、ＩＬ−６などの有用物質を産生
することが知られており、生体外での血管内皮細胞の培
養は、人口血管の製造のほか、これら有用物質の生産を
可能にする意味で、近年、とりわけ注目されている。
【０００４】ヒトのさい帯静脈や皮膚毛細血管をマトリ
ゲルを添加したコラーゲン上で培養すると、管形成の起
きることが知られている｛ヤスオ クボタほか、ジヤー
ナルオブ セル バイオロジー，１０７ １５８９（１
９８８）｝。また、体外での血管内皮細胞の培養液に、
ＩＬ−１｛マリナ シロニほか、ザ ジヤーナルオブ
イミユノロジー，１４２，５４９（１９８９）｝やリポ
ポリサツカライド｛フランク Ｒ．ジリクほか、ザ ジ
ヤーナル オブ イミユノロジー，１４２，１４４（１
９８９）｝を加えることによつて、ＩＬ−６の産生が促
進されることが知られている。しかし、これらには、添
加するものが高価な蛋白質であつたり、あるいは、構造
の複雑な有毒物質であつたりする欠点がある。
ゲルを添加したコラーゲン上で培養すると、管形成の起
きることが知られている｛ヤスオ クボタほか、ジヤー
ナルオブ セル バイオロジー，１０７ １５８９（１
９８８）｝。また、体外での血管内皮細胞の培養液に、
ＩＬ−１｛マリナ シロニほか、ザ ジヤーナルオブ
イミユノロジー，１４２，５４９（１９８９）｝やリポ
ポリサツカライド｛フランク Ｒ．ジリクほか、ザ ジ
ヤーナル オブ イミユノロジー，１４２，１４４（１
９８９）｝を加えることによつて、ＩＬ−６の産生が促
進されることが知られている。しかし、これらには、添
加するものが高価な蛋白質であつたり、あるいは、構造
の複雑な有毒物質であつたりする欠点がある。
【０００５】
【発明が解決しようする課題】本発明らは、かかる従来
技術の問題点に鑑み、毒性のない低分子化合物を不溶性
担体に固定化し、これを血管内皮細胞と接触させること
によつて有用なサイトカイン等を産生させられないか検
討した結果、動物細胞中に広く分布するＮ−アセチルノ
イラミン酸を固定化したものが血管内皮細胞にインター
ロイキン−６等のサイトカインを産生させることを見出
し、本発明に到達した。
技術の問題点に鑑み、毒性のない低分子化合物を不溶性
担体に固定化し、これを血管内皮細胞と接触させること
によつて有用なサイトカイン等を産生させられないか検
討した結果、動物細胞中に広く分布するＮ−アセチルノ
イラミン酸を固定化したものが血管内皮細胞にインター
ロイキン−６等のサイトカインを産生させることを見出
し、本発明に到達した。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、以下の（１）
〜（６）の技術的手段から構成される。
〜（６）の技術的手段から構成される。
【０００７】（１）不溶性担体の表面にアシルノイラミ
ン酸をアミド結合で固定化して成る細胞培養用成型品。
ン酸をアミド結合で固定化して成る細胞培養用成型品。
【０００８】（２）不溶性担体の形状が、シヤーレ、び
ん、膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組
み立て品であることを特徴とする請求項１記載の細胞培
養用成型品。
ん、膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組
み立て品であることを特徴とする請求項１記載の細胞培
養用成型品。
【０００９】（３）組織系組織系細胞を請求項１記載の
細胞培養用成型品と接触させることを特徴とするサイト
カインの製造方法。
細胞培養用成型品と接触させることを特徴とするサイト
カインの製造方法。
【００１０】（４）サイトカインが、インターロイキン
−６であることを特徴とする請求項３記載のサイトカイ
ンの製造方法。 （５）不溶性担体がスチレンまたはα−メチルスチレン
を主体とするビニル重合体成型品の表面にアミノメチル
基を導入したものであることを特徴とする請求項１記載
の細胞培養用成型品。
−６であることを特徴とする請求項３記載のサイトカイ
ンの製造方法。 （５）不溶性担体がスチレンまたはα−メチルスチレン
を主体とするビニル重合体成型品の表面にアミノメチル
基を導入したものであることを特徴とする請求項１記載
の細胞培養用成型品。
【００１１】本発明でいう不溶性担体とは、実質上不溶
性で、第１級または第２級アミノ基を有し、Ｎ−アシル
ノイラミン酸をアミド結合で固定することのできる担体
を意味する。該不溶性担体の形状はシヤーレ、びん、
管、膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組
み立て品のいずれでもよいが、とりわけ、これ等に光透
過性があると細胞の観察が容易にでき、細胞の管理がし
やすいので好ましい。
性で、第１級または第２級アミノ基を有し、Ｎ−アシル
ノイラミン酸をアミド結合で固定することのできる担体
を意味する。該不溶性担体の形状はシヤーレ、びん、
管、膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組
み立て品のいずれでもよいが、とりわけ、これ等に光透
過性があると細胞の観察が容易にでき、細胞の管理がし
やすいので好ましい。
【００１２】本発明でいう不溶性担体の具体例をあげる
と、 スチレンまたはα−メチルスチレンの単独重合体もし
くはこれらを主成分とする芳香族ビニル系共重合体をシ
ヤーレ、試験管、管、フイルム、びん、注射筒、カテー
テルなどに成型したものの表面にアミノメチル基を導入
したもの、スチレン／エチレン・ブチレンのＡＢＡブ
ロツクポリマの膜にアミノメチル基を導入したもの、
ポリプロピレン補強ポリスチレン繊維の表面にアミノメ
チル基を導入したもの、ポリスチレンまたはスチレン
・ジビニルベンゼン共重合体ビーズに、アミノメチル基
を芳香核置換基として導入したもの、アミノプロピル
化ガラスビーズなどがあげられるが、これ等に限定され
るものではない。また、これらのなかでも、とが光
透過性が高く、且つ、取り扱いやすいので、特に、好ま
しく用いられる。
と、 スチレンまたはα−メチルスチレンの単独重合体もし
くはこれらを主成分とする芳香族ビニル系共重合体をシ
ヤーレ、試験管、管、フイルム、びん、注射筒、カテー
テルなどに成型したものの表面にアミノメチル基を導入
したもの、スチレン／エチレン・ブチレンのＡＢＡブ
ロツクポリマの膜にアミノメチル基を導入したもの、
ポリプロピレン補強ポリスチレン繊維の表面にアミノメ
チル基を導入したもの、ポリスチレンまたはスチレン
・ジビニルベンゼン共重合体ビーズに、アミノメチル基
を芳香核置換基として導入したもの、アミノプロピル
化ガラスビーズなどがあげられるが、これ等に限定され
るものではない。また、これらのなかでも、とが光
透過性が高く、且つ、取り扱いやすいので、特に、好ま
しく用いられる。
【００１３】の場合、成型品の厚みには特に制限はな
いが、実用に耐える強度を維持するためには、通常、１
００ミクロン以上の厚みを持つものが好ましく用いられ
る。また、その光透過性に関しては該成型品の底面また
は側面の反対側に存在する物質の形を確認可能にするに
十分な光透過性を有することが望ましい。該成型品の光
透過性は主として表面での散乱によつて決まるので、表
面が完全に平滑でなければならない。該成型品の場合、
５００〜７００ナノメーターの波長の光に対する吸光度
が３以下であることが必要である。この吸光度が小さい
ほど該成型品の光透過性が良く、吸光度が１以下であれ
ばさらに好ましい。
いが、実用に耐える強度を維持するためには、通常、１
００ミクロン以上の厚みを持つものが好ましく用いられ
る。また、その光透過性に関しては該成型品の底面また
は側面の反対側に存在する物質の形を確認可能にするに
十分な光透過性を有することが望ましい。該成型品の光
透過性は主として表面での散乱によつて決まるので、表
面が完全に平滑でなければならない。該成型品の場合、
５００〜７００ナノメーターの波長の光に対する吸光度
が３以下であることが必要である。この吸光度が小さい
ほど該成型品の光透過性が良く、吸光度が１以下であれ
ばさらに好ましい。
【００１４】本発明でいうＮ−アシルノイラミン酸と
は、ノイラミン酸のアミノ基をホルミル基、アセチル
基、グリコリル基、プロピオニル基、ブチリル基等で代
表されるアシル基で置換したものを意味する。アシル基
がアセチル基およびグリコリル基であるＮ−アシルノイ
ラミン酸は動物界に広く存在し、抽出・単離されてい
る。また、有機合成の手段でも得ることができる。水酸
基をカルボン酸エステルにしたものも細胞が分泌する加
水分解酵素によつて容易に脱エステル化されるので、同
様に用いることができる。
は、ノイラミン酸のアミノ基をホルミル基、アセチル
基、グリコリル基、プロピオニル基、ブチリル基等で代
表されるアシル基で置換したものを意味する。アシル基
がアセチル基およびグリコリル基であるＮ−アシルノイ
ラミン酸は動物界に広く存在し、抽出・単離されてい
る。また、有機合成の手段でも得ることができる。水酸
基をカルボン酸エステルにしたものも細胞が分泌する加
水分解酵素によつて容易に脱エステル化されるので、同
様に用いることができる。
【００１５】本発明細胞培養用成型品の製造は、不溶性
担体をＮ−アシルノイラミン酸とカルボジイミドの混合
溶液に加えるか、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ルで代表される活性エステルの溶液中に浸漬することに
より容易に達成される。本発明でいうサイトカインと
は、組織プラスミノーゲンアクチベータ、プロスタサイ
クリン、アンジオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、Ｉ
Ｌ−６等を意味する。ＩＬ−６はマクロフアージ、Ｔ細
胞、血管内皮細胞、皮膚ケラチン細胞等が産生する物質
で、最初はＢ細胞分化因子として見出されたが、最近で
は他にいろいろな作用のあることが知られており、特に
血小板に対する造血促進作用があることで注目されてい
る。｛実験医学 ７（１５）（増刊）９０−９５（１９
８９）｝。
担体をＮ−アシルノイラミン酸とカルボジイミドの混合
溶液に加えるか、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ルで代表される活性エステルの溶液中に浸漬することに
より容易に達成される。本発明でいうサイトカインと
は、組織プラスミノーゲンアクチベータ、プロスタサイ
クリン、アンジオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、Ｉ
Ｌ−６等を意味する。ＩＬ−６はマクロフアージ、Ｔ細
胞、血管内皮細胞、皮膚ケラチン細胞等が産生する物質
で、最初はＢ細胞分化因子として見出されたが、最近で
は他にいろいろな作用のあることが知られており、特に
血小板に対する造血促進作用があることで注目されてい
る。｛実験医学 ７（１５）（増刊）９０−９５（１９
８９）｝。
【００１６】血管内皮細胞を本発明の成型品と接触させ
ながら培養すると、血管内皮細胞は活性化されて、実施
例に示すような高濃度のＩＬ−６のほか、同様にして組
織プラスミノーゲンアクチベータ、プロスタサイクリ
ン、アンジオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１等のサイ
トカインを高濃度で産生することが確認された。
ながら培養すると、血管内皮細胞は活性化されて、実施
例に示すような高濃度のＩＬ−６のほか、同様にして組
織プラスミノーゲンアクチベータ、プロスタサイクリ
ン、アンジオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１等のサイ
トカインを高濃度で産生することが確認された。
【００１７】産生されたサイトカインのうち、例えば、
ＩＬ−６はｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでの
白血球増加剤として利用できる。本発明の成型品の利用
として細胞培養用器具、人口血管等への利用があげられ
る。
ＩＬ−６はｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでの
白血球増加剤として利用できる。本発明の成型品の利用
として細胞培養用器具、人口血管等への利用があげられ
る。
【００１８】以下、実施例により本発明をさらに具体的
に説明する。なお、実施例中の評価方法は、以下に従つ
た。 １．芳香族ビニル系重合体成型品の化学的解析 成型品を塩化メチレンでソツクスレー抽出すると不溶性
の膜状物が得られるので、これを真空乾燥し、重量を量
り、赤外線吸収スペクトル測定等を行つた。 ２．赤外線吸収スペクトル 島津フーリエ変換赤外分光光度計ＦＴＩＲ−４３００を
用いＫＢｒ錠剤法で測定した。 ３．成型品の光透過性の測定 島津分光光度系ＵＶ２１００を用い、５００ナノメータ
ーで板状成型品に垂直方向の吸光度を測定した。対照と
して同じ厚さのポリスチレン板状成型品の吸光度を測定
し、両者の差をＡ500 とした。従つて、その値が小さい
ほど成型品の光透過性が高いことになる。 ４．シアル酸の定量 シアル酸の定量法（生化学実験法 ２３ 糖蛋白質実験
法 １７頁 学会出版センター）に基づいて、蛍光標識
１，２−ジアミノ−４，５−メチレンジオキシベンゼン
を反応させ、島津高速液体クロマトグラフイーＬＣ−７
Ａで定量した。 ５．サイトカインの定量 インターロイキン−６はＲアンドＤシステムズ社（ミネ
アポリス、ＵＳＡ）のクウオンテイカイン・ヒト・ＩＬ
−６・ＥＬＩＳＡキツトにより定量した。
に説明する。なお、実施例中の評価方法は、以下に従つ
た。 １．芳香族ビニル系重合体成型品の化学的解析 成型品を塩化メチレンでソツクスレー抽出すると不溶性
の膜状物が得られるので、これを真空乾燥し、重量を量
り、赤外線吸収スペクトル測定等を行つた。 ２．赤外線吸収スペクトル 島津フーリエ変換赤外分光光度計ＦＴＩＲ−４３００を
用いＫＢｒ錠剤法で測定した。 ３．成型品の光透過性の測定 島津分光光度系ＵＶ２１００を用い、５００ナノメータ
ーで板状成型品に垂直方向の吸光度を測定した。対照と
して同じ厚さのポリスチレン板状成型品の吸光度を測定
し、両者の差をＡ500 とした。従つて、その値が小さい
ほど成型品の光透過性が高いことになる。 ４．シアル酸の定量 シアル酸の定量法（生化学実験法 ２３ 糖蛋白質実験
法 １７頁 学会出版センター）に基づいて、蛍光標識
１，２−ジアミノ−４，５−メチレンジオキシベンゼン
を反応させ、島津高速液体クロマトグラフイーＬＣ−７
Ａで定量した。 ５．サイトカインの定量 インターロイキン−６はＲアンドＤシステムズ社（ミネ
アポリス、ＵＳＡ）のクウオンテイカイン・ヒト・ＩＬ
−６・ＥＬＩＳＡキツトにより定量した。
【００１９】
【実施例１】１−ニトロプロパン５００ｍｌと硫酸２７
２ｍｌの混合溶液を０℃に冷却し、２０．４ｇのＮ−メ
チロール−α−クロルアセトアミドを加え、０〜１０℃
で溶解した。
２ｍｌの混合溶液を０℃に冷却し、２０．４ｇのＮ−メ
チロール−α−クロルアセトアミドを加え、０〜１０℃
で溶解した。
【００２０】この溶液を１０℃に昇温したのち、φ３．
５ｃｍ×１．２ｍｍＨのポリスチレン製培養皿（厚み１
ｍｍ）に７ｍｌずつ入れ、室温で１ｈｒ反応させた。反
応液を捨て、培養皿を零下２０℃のメタノールに浸し、
さらにメタノーおよび水で洗つた後、真空乾燥して、内
部表面だけクロルアセトアミドメチル化された成型品Ａ
を得た。この成型品のＡ500 は０．０３０であつた。
５ｃｍ×１．２ｍｍＨのポリスチレン製培養皿（厚み１
ｍｍ）に７ｍｌずつ入れ、室温で１ｈｒ反応させた。反
応液を捨て、培養皿を零下２０℃のメタノールに浸し、
さらにメタノーおよび水で洗つた後、真空乾燥して、内
部表面だけクロルアセトアミドメチル化された成型品Ａ
を得た。この成型品のＡ500 は０．０３０であつた。
【００２１】上記で得た成型品Ａ１個を、塩化メチレン
でソツクスレー抽出したところ、薄膜状の不溶物３．１
ｍｇが得られた。培養皿の反応面は表面積は約２５ｃｍ
2 であるので、反応部の厚みは大体１．２μと考えられ
る。また、この不溶物の赤外線吸収スペクトルでは、１
６５９ｃｍ-1（アミド−Ｉ）、１５２９ｃｍ-1（アミド
−ＩＩ）および３２９７ｃｍ-1（Ｎ−Ｈ）にアミド基の
強い吸収が認められたことからその構造を確認した。
でソツクスレー抽出したところ、薄膜状の不溶物３．１
ｍｇが得られた。培養皿の反応面は表面積は約２５ｃｍ
2 であるので、反応部の厚みは大体１．２μと考えられ
る。また、この不溶物の赤外線吸収スペクトルでは、１
６５９ｃｍ-1（アミド−Ｉ）、１５２９ｃｍ-1（アミド
−ＩＩ）および３２９７ｃｍ-1（Ｎ−Ｈ）にアミド基の
強い吸収が認められたことからその構造を確認した。
【００２２】上記で得た成型品Ａ４０個を、２０００ｍ
ｌの１０％ジメチルアミノエタノール・ジメチルスルホ
キサイド溶液中に浸し、室温で１８ｈｒ静置した後、２
０００ｍｌの１０％ジメチルアミノエタノール水溶液
中、７０℃で２ｈｒ加熱した。成型品を水洗後、乾燥し
てアミノメチル化成型品Ｂを得た。この成型品のＡ500
は０．０５であつた。
ｌの１０％ジメチルアミノエタノール・ジメチルスルホ
キサイド溶液中に浸し、室温で１８ｈｒ静置した後、２
０００ｍｌの１０％ジメチルアミノエタノール水溶液
中、７０℃で２ｈｒ加熱した。成型品を水洗後、乾燥し
てアミノメチル化成型品Ｂを得た。この成型品のＡ500
は０．０５であつた。
【００２３】上記本発明の成型品Ｂ１個を、塩化メチレ
ンでソツクスレー抽出したところ、薄膜状の不溶物２．
３ｍｇが得られた。この不溶物の赤外線吸収スペクトル
では、成型品Ａで認められた１６５９ｃｍ-1（アミド−
Ｉ）および１５２９ｃｍ-1（アミド−ＩＩ）の第一級ア
ミド基の強い吸収ｃｍ-1が完全に消失していたことから
その構造を確認した。
ンでソツクスレー抽出したところ、薄膜状の不溶物２．
３ｍｇが得られた。この不溶物の赤外線吸収スペクトル
では、成型品Ａで認められた１６５９ｃｍ-1（アミド−
Ｉ）および１５２９ｃｍ-1（アミド−ＩＩ）の第一級ア
ミド基の強い吸収ｃｍ-1が完全に消失していたことから
その構造を確認した。
【００２４】上記本発明の成型品Ｂ１０個を５００ｍｌ
の水に浸し、Ｎ／１００−塩酸でｐＨ５〜６に調整した
後、成型品Ｂの内部に０．２ｍｇ／ｍｌのＮ−アセチル
ノイラミン酸水溶液４ｍｌと１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩８ｍｇを
加え、室温で４８ｈｒ静置した。反応液を捨て、水洗し
て、本発明細胞培養用成型品である成型品Ｃを得た。母
液中のＮ−アセチルノイラミン酸の濃度から０．０２２
ｍｇ固定化されたことが確認された。また、成型品上の
Ｎ−アセチルノイラミン酸はＮ／４０−ＮａＯＨで洗浄
しても溶出の無いことを確認した。
の水に浸し、Ｎ／１００−塩酸でｐＨ５〜６に調整した
後、成型品Ｂの内部に０．２ｍｇ／ｍｌのＮ−アセチル
ノイラミン酸水溶液４ｍｌと１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩８ｍｇを
加え、室温で４８ｈｒ静置した。反応液を捨て、水洗し
て、本発明細胞培養用成型品である成型品Ｃを得た。母
液中のＮ−アセチルノイラミン酸の濃度から０．０２２
ｍｇ固定化されたことが確認された。また、成型品上の
Ｎ−アセチルノイラミン酸はＮ／４０−ＮａＯＨで洗浄
しても溶出の無いことを確認した。
【００２５】
【実施例２】正常ヒトさい帯血管内皮細胞（倉敷紡績
（株））を１．２×１０4 個／ｍｌの濃度でウシ脳抽出
液含有低血清血管内皮細胞増殖培地（ＥＧＭ−ＵＶ：倉
敷紡績（株））を含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た
本発明成型品Ｃ（紫外線照射滅菌）に入れて、インキユ
ベーター中（３７℃、５％ＣＯ2 ）で２４ｈｒ培養し
た。
（株））を１．２×１０4 個／ｍｌの濃度でウシ脳抽出
液含有低血清血管内皮細胞増殖培地（ＥＧＭ−ＵＶ：倉
敷紡績（株））を含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た
本発明成型品Ｃ（紫外線照射滅菌）に入れて、インキユ
ベーター中（３７℃、５％ＣＯ2 ）で２４ｈｒ培養し
た。
【００２６】比較として、実施例１で得た成型品Ｂ、お
よび成型品Ｂに３−デオキシ−Ｄ−マンノ−２−オクチ
ユロソン酸（ＫＤＯ）を固定したもの（紫外線照射滅
菌）および市販の細胞培養用皿ＭＳ−１０３５Ｒ（住友
ベークライド（株））で同様に培養した。
よび成型品Ｂに３−デオキシ−Ｄ−マンノ−２−オクチ
ユロソン酸（ＫＤＯ）を固定したもの（紫外線照射滅
菌）および市販の細胞培養用皿ＭＳ−１０３５Ｒ（住友
ベークライド（株））で同様に培養した。
【００２７】各培養上清を取つてその中のＩＬ−６を調
べたところ、Ｎ−アセチルノイラミン酸を固定化した本
発明の皿では１００ｐｇ／皿であつたのに対し、成型品
Ｂでは０ｐｇ／皿、ＫＤＯを固定化した皿では３４ｐｇ
／皿、ＭＳ−１０３５Ｒでは１５ｐｇ／皿であつた。ま
た、４日後の、細胞数を数えてみたところ、本発明の皿
では１．３×１０5 個、ＫＤＯを固定化した皿では１．
２×１０5 個、ＭＳ−１０３５Ｒでは１．５×１０5 個
で、それぞれ５、５、および、６倍に増えていることが
わかつた。
べたところ、Ｎ−アセチルノイラミン酸を固定化した本
発明の皿では１００ｐｇ／皿であつたのに対し、成型品
Ｂでは０ｐｇ／皿、ＫＤＯを固定化した皿では３４ｐｇ
／皿、ＭＳ−１０３５Ｒでは１５ｐｇ／皿であつた。ま
た、４日後の、細胞数を数えてみたところ、本発明の皿
では１．３×１０5 個、ＫＤＯを固定化した皿では１．
２×１０5 個、ＭＳ−１０３５Ｒでは１．５×１０5 個
で、それぞれ５、５、および、６倍に増えていることが
わかつた。
【００２８】この結果から、細胞の増殖支持能は３者で
ほとんど差がないが、ＩＬ−６産生誘導能は本発明の成
型品が著しく優れていることがわかる。また、成型品Ｂ
では６．４×１０3 個と生育阻害が起きていることがわ
かつた。
ほとんど差がないが、ＩＬ−６産生誘導能は本発明の成
型品が著しく優れていることがわかる。また、成型品Ｂ
では６．４×１０3 個と生育阻害が起きていることがわ
かつた。
【００２９】
【実施例３】正常ヒトさい帯血管内皮細胞（倉敷紡績
（株））を１．３×１０4 個／ｍｌの濃度でウシ脳抽出
液含有低血清血管内皮細胞増殖培地（ＥＧＭ−ＵＶ：倉
敷紡績（株））を含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た
本発明成型品Ｃ（紫外線照射滅菌）に入れて、インキユ
ベーター中（３７℃、５％ＣＯ2 ）で３０ｈｒ培養し
た。上清を採取し、２ｍｌのＥＧＭ−ＵＶをいれて培養
を続けた。培地は２または３日毎に交換した。
（株））を１．３×１０4 個／ｍｌの濃度でウシ脳抽出
液含有低血清血管内皮細胞増殖培地（ＥＧＭ−ＵＶ：倉
敷紡績（株））を含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た
本発明成型品Ｃ（紫外線照射滅菌）に入れて、インキユ
ベーター中（３７℃、５％ＣＯ2 ）で３０ｈｒ培養し
た。上清を採取し、２ｍｌのＥＧＭ−ＵＶをいれて培養
を続けた。培地は２または３日毎に交換した。
【００３０】各培養上清中のＩＬ−６の濃度を定量した
ところ、３０ｈｒ後、３日後、６日後、９日後、１２日
後、１５日後のもので、それぞれ、２４０，１７５，２
１５，２００，３００，２６０ｐｇ／ｍｌとＩＬ−６産
生誘導能が持続されることがわかつた。
ところ、３０ｈｒ後、３日後、６日後、９日後、１２日
後、１５日後のもので、それぞれ、２４０，１７５，２
１５，２００，３００，２６０ｐｇ／ｍｌとＩＬ−６産
生誘導能が持続されることがわかつた。
【発明の効果】本発明の細胞培養用成型品は、血管内
皮細胞の培養に用いることができ、有用なサイトカイン
生産に用いることができること、化学的に安定なアミ
ド結合で固定化されているので、溶出の心配がないこ
と、万一、溶出しても無毒な化合物であること、固
定化されているので、分解されることなく、長期に細胞
を活性化できること等の利点を有する。
皮細胞の培養に用いることができ、有用なサイトカイン
生産に用いることができること、化学的に安定なアミ
ド結合で固定化されているので、溶出の心配がないこ
と、万一、溶出しても無毒な化合物であること、固
定化されているので、分解されることなく、長期に細胞
を活性化できること等の利点を有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 11/08 Ｈ Ａ 15/19 (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 須藤 哲央 神奈川県横浜市栄区田谷町１番地 株式会 社バイオマテリアル研究所内 (72)発明者 佐野 恵海子 神奈川県横浜市旭区希望ケ丘212−21
Claims (5)
- 【請求項１】 不溶性担体の表面にＮ−アシルノイラミ
ン酸をアミド結合で固定化して成る細胞培養用成型品。 - 【請求項２】 不溶性担体の形状が、シヤーレ、びん、
膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組み立
て品であることを特徴とする請求項１記載の細胞培養用
成型品。 - 【請求項３】 組織系細胞を請求項１記載の細胞培養用
成型品と接触させることを特徴とするサイトカインの製
造方法。 - 【請求項４】 サイトカインが、インターロイキン−６
であることを特徴とする請求項３記載のサイトカインの
製造方法。 - 【請求項５】 不溶性担体がスチレンまたはα−メチル
スチレンを主体とするビニル重合体成型品の表面にアミ
ノメチル基を導入したものであることを特徴とする請求
項１記載の細胞培養用成型品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3089218A JPH0638733A (ja) | 1991-03-29 | 1991-03-29 | 細胞培養用成型品 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3089218A JPH0638733A (ja) | 1991-03-29 | 1991-03-29 | 細胞培養用成型品 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0638733A true JPH0638733A (ja) | 1994-02-15 |
Family
ID=13964587
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3089218A Pending JPH0638733A (ja) | 1991-03-29 | 1991-03-29 | 細胞培養用成型品 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0638733A (ja) |
-
1991
- 1991-03-29 JP JP3089218A patent/JPH0638733A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lee et al. | Preparation of poly (vinyl alcohol)-chondroitin sulfate hydrogel as matrices in tissue engineering | |
| JP5165298B2 (ja) | 新規なヘパリン様硫酸化多糖類 | |
| Linhardt | 2003 Claude S. Hudson Award address in carbohydrate chemistry. Heparin: structure and activity | |
| US4406830A (en) | Regulatory glycoprotein for immune response and the use thereof in the production of T-cell growth factor | |
| Piskin et al. | Polymeric biomaterials | |
| US5532216A (en) | Neutralization of non-lipopolysaccharide compounds by bactericidal/permeability-increasing protein | |
| JPH1129592A (ja) | フッ素原子を含有する構造単位を有するポリマーの固定化されたタンパク質の変質を阻害する材料としての使用及びそれを使用した製品 | |
| JP2834514B2 (ja) | 血液細胞処理剤 | |
| JP2833664B2 (ja) | 血液細胞処理剤 | |
| JP2834532B2 (ja) | 血液細胞活性化剤 | |
| JPH05176761A (ja) | 細胞処理剤 | |
| JPH0471478A (ja) | 細胞培養用容器およびその製造方法 | |
| US4681844A (en) | Process for producing an Interleukin-1 preparation | |
| JPH048295A (ja) | 血液細胞処理剤 | |
| JPH03240485A (ja) | 血液細胞処理剤 | |
| Mizuno et al. | Structural elucidation of the 8‐methoxypsoralen oxidized product that inhibits the chemotactic activity of polymorphonuclear neutrophils toward anaphylatoxin C5a | |
| CN100444942C (zh) | 一种糖基化聚丙烯亲和膜的制备方法及其应用 | |
| JPH0453497A (ja) | 血液細胞処理剤 | |
| JPH088873B2 (ja) | ヒト癌壊死因子の製造法 | |
| Scheler | Synthetic polymers in biology and medicine | |
| Di Cocco et al. | 1H NMR studies of alginate interactions with amino acids | |
| CN1042493C (zh) | 人胎胸腺素的制备方法 | |
| Amborski et al. | Effect of peptides on animal cells in culture: I. Maintenance of beating heart cells | |
| JPH08317785A (ja) | 糖鎖の固定化法及びそれを用いた細胞培養基材 | |
| JPH02181628A (ja) | 生物活性部分の基質への固定方法、生きた細胞の基質への固定方法および細胞培養方法 |