JPH0643169A - 内因性凝固系のイニシエーター - Google Patents
内因性凝固系のイニシエーターInfo
- Publication number
- JPH0643169A JPH0643169A JP5112783A JP11278393A JPH0643169A JP H0643169 A JPH0643169 A JP H0643169A JP 5112783 A JP5112783 A JP 5112783A JP 11278393 A JP11278393 A JP 11278393A JP H0643169 A JPH0643169 A JP H0643169A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- blood
- plasma
- phospholipid
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 血液、血漿又は血液誘導体の内在的凝固系の
イニシエーターを目的とする。 【構成】 本発明のイニシエーターは、スルファチド及
び固形アクチベーター、好ましくはカオリンの混合物を
含有している。
イニシエーターを目的とする。 【構成】 本発明のイニシエーターは、スルファチド及
び固形アクチベーター、好ましくはカオリンの混合物を
含有している。
Description
【０００１】本発明は内因性血液凝固系のイニシエータ
ー、活性化部分トロンボプラスチン時間（aＰＴＴ）を
測定するための試薬、並びに該試薬を調製するための方
法及びaＰＴＴを測定するための方法に関する。血漿試
料の活性化部分トロンボプラスチン時間は、内因性凝固
系における凝固因子の全体的な活性を測定するためのス
クリーニング試験として有益である。凝固経過の障害
は、正常範囲を越えた凝固時間の原因となる。例えばＡ
型血友病で起こるaＰＴＴの増大は、例えば血液凝固第V
III因子の欠乏を示している。さらに、aＰＴＴ試験はヘ
パリン療法を監視するためにしばしば使用される。
ー、活性化部分トロンボプラスチン時間（aＰＴＴ）を
測定するための試薬、並びに該試薬を調製するための方
法及びaＰＴＴを測定するための方法に関する。血漿試
料の活性化部分トロンボプラスチン時間は、内因性凝固
系における凝固因子の全体的な活性を測定するためのス
クリーニング試験として有益である。凝固経過の障害
は、正常範囲を越えた凝固時間の原因となる。例えばＡ
型血友病で起こるaＰＴＴの増大は、例えば血液凝固第V
III因子の欠乏を示している。さらに、aＰＴＴ試験はヘ
パリン療法を監視するためにしばしば使用される。
【０００２】aＰＴＴを測定するための試薬は、活性化
第IX因子が形成されるまでの内因性凝固系のカスケード
を開始させるアクチベーターを含有している。さらに、
第Ｘ因子とプロトロンビンの活性化にはリン脂質が必要
であるので、それらもaＰＴＴ試薬に含有される。この
試薬を血漿試料に接触させ、可能な限り短い規定された
活性化時間の経過後にカルシウムを添加し、フィブリン
凝塊が形成されるまでの時間を測定する。aＰＴＴ試験
系には多くの要件が必要となる。日常的な検査には、a
ＰＴＴ試薬が簡単に操作できることが絶対的な必要条件
となる。さらに、その成分は、長時間の一定の凝固時間
を保証できる程に非常に高い安定性を有していなければ
ならない。これはまた、試薬を廉価に利用できることに
もつながる。一般的な試験としてのaＰＴＴでは、必要
なすべてのパラメーターに対してバランスのとれた感受
性が必須となる。
第IX因子が形成されるまでの内因性凝固系のカスケード
を開始させるアクチベーターを含有している。さらに、
第Ｘ因子とプロトロンビンの活性化にはリン脂質が必要
であるので、それらもaＰＴＴ試薬に含有される。この
試薬を血漿試料に接触させ、可能な限り短い規定された
活性化時間の経過後にカルシウムを添加し、フィブリン
凝塊が形成されるまでの時間を測定する。aＰＴＴ試験
系には多くの要件が必要となる。日常的な検査には、a
ＰＴＴ試薬が簡単に操作できることが絶対的な必要条件
となる。さらに、その成分は、長時間の一定の凝固時間
を保証できる程に非常に高い安定性を有していなければ
ならない。これはまた、試薬を廉価に利用できることに
もつながる。一般的な試験としてのaＰＴＴでは、必要
なすべてのパラメーターに対してバランスのとれた感受
性が必須となる。
【０００３】aＰＴＴを測定するための通常の試薬は、
内因性凝固系のイニシエーターとして表面活性な固形物
を含有している。この表面活性マトリックスを使用する
ことによって最初に第ＸII因子が活性化され、これは生
理的条件に匹敵している。固体アクチベーターとしては
カオリン、セライト及びガラスが使用される。例えばカ
オリンは、aＰＴＴを測定するための市販されている試
薬［PathromtinR, ベーリングベルケ(1990)、又はＰＴ
Ｔ試薬, ベーリンガー・マンハイム(1986)］中に懸濁物
として含有されている。リン脂質としては、ヒト胎盤の
凍結乾燥脂質抽出物又は凍結乾燥セファリンが使用され
ている。しかし、リン脂質は、測定を開始する直前にカ
オリンと混合し、用時調製する。カオリン及びリン脂質
を別々に保存することが必要であるのは主として安定性
の理由からである。
内因性凝固系のイニシエーターとして表面活性な固形物
を含有している。この表面活性マトリックスを使用する
ことによって最初に第ＸII因子が活性化され、これは生
理的条件に匹敵している。固体アクチベーターとしては
カオリン、セライト及びガラスが使用される。例えばカ
オリンは、aＰＴＴを測定するための市販されている試
薬［PathromtinR, ベーリングベルケ(1990)、又はＰＴ
Ｔ試薬, ベーリンガー・マンハイム(1986)］中に懸濁物
として含有されている。リン脂質としては、ヒト胎盤の
凍結乾燥脂質抽出物又は凍結乾燥セファリンが使用され
ている。しかし、リン脂質は、測定を開始する直前にカ
オリンと混合し、用時調製する。カオリン及びリン脂質
を別々に保存することが必要であるのは主として安定性
の理由からである。
【０００４】脂質をカオリンと共に凍結乾燥する場合、
その脂質は大幅に不活化されよう。従って、カオリンと
リン脂質(ブタの脳から抽出)とを普通に凍結乾燥する
と、ＰＴＴ−ＩＭＭＵＮＯ(イムノ)を製造する際には、
５０％までのリン脂質活性の損失が生じる。固体アクチ
ベーターの代替物として、エラグ酸及びその誘導体、又
は可溶化されたスルファチドなどの液体アクチベーター
も使用することができる。しかし、液体アクチベーター
を含有する試験ではヘパリンに対する感受性が劣悪であ
り、従ってその感受性を改善するために種々の添加剤が
提示されている。ＷＯ９１／１６４５３によれば、エラ
グ酸を基礎とするヘパリン感受性の試薬にさらにデキス
トラン硫酸が含有されている。
その脂質は大幅に不活化されよう。従って、カオリンと
リン脂質(ブタの脳から抽出)とを普通に凍結乾燥する
と、ＰＴＴ−ＩＭＭＵＮＯ(イムノ)を製造する際には、
５０％までのリン脂質活性の損失が生じる。固体アクチ
ベーターの代替物として、エラグ酸及びその誘導体、又
は可溶化されたスルファチドなどの液体アクチベーター
も使用することができる。しかし、液体アクチベーター
を含有する試験ではヘパリンに対する感受性が劣悪であ
り、従ってその感受性を改善するために種々の添加剤が
提示されている。ＷＯ９１／１６４５３によれば、エラ
グ酸を基礎とするヘパリン感受性の試薬にさらにデキス
トラン硫酸が含有されている。
【０００５】カオリン及び固体アクチベーター、及びエ
ラグ酸又はその誘導体の一般的な欠点は内因性凝固系の
第１相の活性化時間が長いことであり、これは活性化の
ために少なくとも４分比較的長いインキュベート時間が
必須であることを意味する。さらなる欠点は、カオリン
の存在下、比較的長い凝固時間にある。しかし、試薬中
のカオリン濃度が高ければ高い程、活性化時間は短くな
る。他方、懸濁物から蓄積されるカオリンは、凝固終点
を通常の凝固測定装置で測定すると、凝固時間を増大さ
せ、又は偽の結果(false results)を与える場合があ
る。従って、固体アクチベーターの濃度は可能な限り低
くなるよう維持させるべく注意を払わなければならな
い。
ラグ酸又はその誘導体の一般的な欠点は内因性凝固系の
第１相の活性化時間が長いことであり、これは活性化の
ために少なくとも４分比較的長いインキュベート時間が
必須であることを意味する。さらなる欠点は、カオリン
の存在下、比較的長い凝固時間にある。しかし、試薬中
のカオリン濃度が高ければ高い程、活性化時間は短くな
る。他方、懸濁物から蓄積されるカオリンは、凝固終点
を通常の凝固測定装置で測定すると、凝固時間を増大さ
せ、又は偽の結果(false results)を与える場合があ
る。従って、固体アクチベーターの濃度は可能な限り低
くなるよう維持させるべく注意を払わなければならな
い。
【０００６】本発明は、aＰＴＴを測定するための高い
安定性を有する規格化試薬であって、操作性が容易であ
りかつ廉価であり、そして活性化時間が短く、また凝固
カスケードの個々の因子に対する感受性が高い試薬を提
供することを目的とする。本発明の目的は、スルファチ
ド及び固体アクチベーター、好ましくはカオリンの混合
物を含有する、血液、血漿又は血漿誘導体の内因性凝固
系のイニシエーターによって達成される。本発明の試薬
は、内因性凝固系のイニシエーターとしてスルファチド
（例えば、ペンタファルム(Pentapharm)のスルファチ
ド）及び固体アクチベーターの混合物を含有している。
さらに、リン脂質も含有される。第ＸII因子の活性化の
ためにスルファチドを使用する場合のほんの短い活性化
時間は、カオリンと共にスルファチドを使用することに
よっては殆ど増大しない。従って、本発明の試薬を使用
すれば、日常的な検査のために実際的である短いインキ
ュベート時間の操作が可能になる。しかし、固体アクチ
ベーターの使用によって同時にヘパリン感受性も改善さ
れる。
安定性を有する規格化試薬であって、操作性が容易であ
りかつ廉価であり、そして活性化時間が短く、また凝固
カスケードの個々の因子に対する感受性が高い試薬を提
供することを目的とする。本発明の目的は、スルファチ
ド及び固体アクチベーター、好ましくはカオリンの混合
物を含有する、血液、血漿又は血漿誘導体の内因性凝固
系のイニシエーターによって達成される。本発明の試薬
は、内因性凝固系のイニシエーターとしてスルファチド
（例えば、ペンタファルム(Pentapharm)のスルファチ
ド）及び固体アクチベーターの混合物を含有している。
さらに、リン脂質も含有される。第ＸII因子の活性化の
ためにスルファチドを使用する場合のほんの短い活性化
時間は、カオリンと共にスルファチドを使用することに
よっては殆ど増大しない。従って、本発明の試薬を使用
すれば、日常的な検査のために実際的である短いインキ
ュベート時間の操作が可能になる。しかし、固体アクチ
ベーターの使用によって同時にヘパリン感受性も改善さ
れる。
【０００７】本発明のイニシエーターをaＰＴＴ試薬に
使用することにより、意外にも、個々のアクチベーター
両者の不利益が結合することなく、それらの利点が組み
合わされる。これは予期し得ないことであった。むし
ろ、内因性凝固系のアクチベーターとしてカオリンとス
ルファチドとを組み合わせると試薬の活性が低下するの
ではないかと推測されていた。種々の反応メカニズムを
有するアクチベーターを組み合わせると問題が生じかね
ないという専門家達の偏見からすれば、本発明の試薬が
非常に良好に規格化できることは驚くべき事項である。
これは、測定方法の再現性を高くするための前提条件で
ある。
使用することにより、意外にも、個々のアクチベーター
両者の不利益が結合することなく、それらの利点が組み
合わされる。これは予期し得ないことであった。むし
ろ、内因性凝固系のアクチベーターとしてカオリンとス
ルファチドとを組み合わせると試薬の活性が低下するの
ではないかと推測されていた。種々の反応メカニズムを
有するアクチベーターを組み合わせると問題が生じかね
ないという専門家達の偏見からすれば、本発明の試薬が
非常に良好に規格化できることは驚くべき事項である。
これは、測定方法の再現性を高くするための前提条件で
ある。
【０００８】本発明の試薬では、カオリンの量を低く保
持させている。カオリンの蓄積が高くなるのを防止し、
検出装置の操作性の問題を回避している。本発明のイニ
シエーターは、いかなる問題も伴うことなく、廉価な試
薬を得るためにリン脂質と一緒に凍結乾燥することがで
きる。個々の成分のあり得る負の相互作用は取るに足ら
ないものである。このように本発明は、スルファチド及
び固体アクチベーター、好ましくはカオリンの混合物を
内因性凝固系のイニシエーターとして含有し、さらにリ
ン脂質を含有していることを特徴とする、血液、血漿又
は血液誘導体のaＰＴＴを測定するための試薬に関す
る。試薬中のカオリン及びスルファチドの濃度はカオリ
ンについて０．１−０．６重量％、好ましくは０．１−
０．３重量％であり、スルファチドについて０．００１
−０．０３重量％、好ましくは０．００２−０．０１重
量％である。
持させている。カオリンの蓄積が高くなるのを防止し、
検出装置の操作性の問題を回避している。本発明のイニ
シエーターは、いかなる問題も伴うことなく、廉価な試
薬を得るためにリン脂質と一緒に凍結乾燥することがで
きる。個々の成分のあり得る負の相互作用は取るに足ら
ないものである。このように本発明は、スルファチド及
び固体アクチベーター、好ましくはカオリンの混合物を
内因性凝固系のイニシエーターとして含有し、さらにリ
ン脂質を含有していることを特徴とする、血液、血漿又
は血液誘導体のaＰＴＴを測定するための試薬に関す
る。試薬中のカオリン及びスルファチドの濃度はカオリ
ンについて０．１−０．６重量％、好ましくは０．１−
０．３重量％であり、スルファチドについて０．００１
−０．０３重量％、好ましくは０．００２−０．０１重
量％である。
【０００９】本発明の試薬は、規格化混合物中、化学的
に純粋なリン脂質を含有するのが好ましい。この結果、
試験方法の意外に高い再現性が得られることが判明して
いる。リン脂質混合物は例えば、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジルコリン及びコレステロールを含有す
る。この混合物は全リン脂質含量に基づいて５−５０％
のホスファチジルセリン、１５−６０％のホスファチジ
ルコリン、１５−６０％のホスファチジルエタノールア
ミン、０−２０％のコレステロール、及び５−２０％の
ホスファチジン酸を含有するのが好ましい。規格化混合
物としては、例えばホスファチジルセリン０．２mｇ、
ホスファチジルコリン０．８５mｇ、ホスファチジルエ
タノールアミン０．６５mｇ、コレステロール０．１５m
ｇ、及びホスファチジン酸０．１５mｇを１ml 当たり
に、あり得る希釈物中で使用する。
に純粋なリン脂質を含有するのが好ましい。この結果、
試験方法の意外に高い再現性が得られることが判明して
いる。リン脂質混合物は例えば、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジルコリン及びコレステロールを含有す
る。この混合物は全リン脂質含量に基づいて５−５０％
のホスファチジルセリン、１５−６０％のホスファチジ
ルコリン、１５−６０％のホスファチジルエタノールア
ミン、０−２０％のコレステロール、及び５−２０％の
ホスファチジン酸を含有するのが好ましい。規格化混合
物としては、例えばホスファチジルセリン０．２mｇ、
ホスファチジルコリン０．８５mｇ、ホスファチジルエ
タノールアミン０．６５mｇ、コレステロール０．１５m
ｇ、及びホスファチジン酸０．１５mｇを１ml 当たり
に、あり得る希釈物中で使用する。
【００１０】リン脂質は、ポリブレンの存在下に起こり
得る望ましくない沈澱反応を回避できるよう精製するの
が好都合である。本発明の試薬の好ましい態様は、酸化
阻害剤及び感受性プロモーターをさらに含有しているも
のである。酸化阻害剤としては、例えばシステイン、尿
酸、ビタミンＣ又はビタミンＥを利用し、凍結乾燥又は
液体の状態における試薬の保存安定性を増大させる。ア
ミノ酸と一緒にできるアルカリ塩などの添加剤は、試験
の感受性を個々の因子に対して増大させる。適当に希釈
した後に塩化セシウム（５−２５mｇ/ml）及びアルギニ
ン（２．５−２０mｇ/ml）、好ましくはＣsＣl １６．
８mｇ／ml 及びアルギニン１０．５mｇ／ml を含有する
試薬は、個々の因子（第VIII因子）が不足している血漿
試料のaＰＴＴを測定するのに特に適していることが示
された。
得る望ましくない沈澱反応を回避できるよう精製するの
が好都合である。本発明の試薬の好ましい態様は、酸化
阻害剤及び感受性プロモーターをさらに含有しているも
のである。酸化阻害剤としては、例えばシステイン、尿
酸、ビタミンＣ又はビタミンＥを利用し、凍結乾燥又は
液体の状態における試薬の保存安定性を増大させる。ア
ミノ酸と一緒にできるアルカリ塩などの添加剤は、試験
の感受性を個々の因子に対して増大させる。適当に希釈
した後に塩化セシウム（５−２５mｇ/ml）及びアルギニ
ン（２．５−２０mｇ/ml）、好ましくはＣsＣl １６．
８mｇ／ml 及びアルギニン１０．５mｇ／ml を含有する
試薬は、個々の因子（第VIII因子）が不足している血漿
試料のaＰＴＴを測定するのに特に適していることが示
された。
【００１１】さらに好ましい本発明の試薬は、発色物質
をさらに含有しているものであり、それにより要すれ
ば、凝固時間を発色によって分光学的に測定することが
できる。しかし、光りの透過の変化を分光学的に測定す
ることによって、最終産物を測定することも可能であ
る。試薬に安定化剤、好ましくはアルブミン及び／又は
緩衝物質が含有しているものではさらに好都合である。
をさらに含有しているものであり、それにより要すれ
ば、凝固時間を発色によって分光学的に測定することが
できる。しかし、光りの透過の変化を分光学的に測定す
ることによって、最終産物を測定することも可能であ
る。試薬に安定化剤、好ましくはアルブミン及び／又は
緩衝物質が含有しているものではさらに好都合である。
【００１２】本発明の試薬を調製する方法は単純であ
る。リン脂質を含有し、要すればさらに添加剤を含有し
ている固体アクチベーターの水性懸濁液中にスルファチ
ドを混合し、要すれば凍結乾燥する。しかし、この試薬
の調製は、スルファチド、固体アクチベーター、及びリ
ン脂質を混合することによっても行うことができ、次い
で要すれば凍結乾燥し、さらに添加剤を固形状態で含有
させることもできる。本発明の試薬はそれ自体、ヘパリ
ン療法の監視、及び個々の因子、即ち内因性凝固系の凝
固因子又はそのインヒビターの測定を行うのに使用でき
る。本発明はさらに、血液、血漿又は血液誘導体の試料
を本発明の試薬と接触させ、予め決められた活性化時間
後にカルシウムイオンを添加し、凝固時間を測定するこ
とを特徴とする、該試料の部分トロンボプラスチン時間
（aＰＴＴ）の測定方法に関する。ヘパリン中和物質の
添加によって、ヘパリン処理した血漿試料中の凝固因子
の不足も決定できる。例えば、ポリブレンは存在するヘ
パリンを中和するので、本発明の試薬を試料のヘパリン
含量に対して非感受性にさせる。
る。リン脂質を含有し、要すればさらに添加剤を含有し
ている固体アクチベーターの水性懸濁液中にスルファチ
ドを混合し、要すれば凍結乾燥する。しかし、この試薬
の調製は、スルファチド、固体アクチベーター、及びリ
ン脂質を混合することによっても行うことができ、次い
で要すれば凍結乾燥し、さらに添加剤を固形状態で含有
させることもできる。本発明の試薬はそれ自体、ヘパリ
ン療法の監視、及び個々の因子、即ち内因性凝固系の凝
固因子又はそのインヒビターの測定を行うのに使用でき
る。本発明はさらに、血液、血漿又は血液誘導体の試料
を本発明の試薬と接触させ、予め決められた活性化時間
後にカルシウムイオンを添加し、凝固時間を測定するこ
とを特徴とする、該試料の部分トロンボプラスチン時間
（aＰＴＴ）の測定方法に関する。ヘパリン中和物質の
添加によって、ヘパリン処理した血漿試料中の凝固因子
の不足も決定できる。例えば、ポリブレンは存在するヘ
パリンを中和するので、本発明の試薬を試料のヘパリン
含量に対して非感受性にさせる。
【００１３】本発明の方法のさらに好ましい態様は、本
発明の試薬を加える前に試料をポリブレン、硫酸プロタ
ミンなどのヘパリン中和物質と混合することによっても
特徴付けられる。さらに、本発明は、血漿試料を本発明
の試薬に接触させ、予め決められた活性化時間後にカル
シウムイオンを加え、そして凝固時間を測定し、それに
より得られた結果を因子の既知の活性を有する標準試料
と比較することによって、内因性凝固系の因子及びその
インヒビターの活性を測定するために、本発明の方法を
利用することに関する。さらに、ヘパリン又はヘパリノ
イドを含有している可能性のある血液、血漿又は血液誘
導体のaＰＴＴを検定することも、スルファチド及び固
体アクチベーターの混合物を使用しなくても、固体アク
チベーター又は液体アクチベーター又はそれらの組合わ
せ物であれば、それらの内因性凝固系のイニシエーター
に加えてヘパリン中和物質及びリン脂質をaＰＴＴの検
定用試薬中に含有させる場合に実施できることが見いだ
された。
発明の試薬を加える前に試料をポリブレン、硫酸プロタ
ミンなどのヘパリン中和物質と混合することによっても
特徴付けられる。さらに、本発明は、血漿試料を本発明
の試薬に接触させ、予め決められた活性化時間後にカル
シウムイオンを加え、そして凝固時間を測定し、それに
より得られた結果を因子の既知の活性を有する標準試料
と比較することによって、内因性凝固系の因子及びその
インヒビターの活性を測定するために、本発明の方法を
利用することに関する。さらに、ヘパリン又はヘパリノ
イドを含有している可能性のある血液、血漿又は血液誘
導体のaＰＴＴを検定することも、スルファチド及び固
体アクチベーターの混合物を使用しなくても、固体アク
チベーター又は液体アクチベーター又はそれらの組合わ
せ物であれば、それらの内因性凝固系のイニシエーター
に加えてヘパリン中和物質及びリン脂質をaＰＴＴの検
定用試薬中に含有させる場合に実施できることが見いだ
された。
【００１４】本発明の試薬には、ヘパリン中和物質とし
て、特にポリブレン、プロタミン(プロタミン塩)又はヘ
パリナーゼを使用する。使用するヘパリン中和物質の濃
度の大きさは、検定する試料中のヘパリン濃度によって
左右され、通常は、ポリブレンの場合、１−５００mｇ/
ml の範囲である。規格化された方法では、２−１００m
ｇ/ml ポリブレンを使用する。ヘパリン中和物質を含有
する試薬の利点としては、血液又は血漿試料中の個々の
因子及びaＰＴＴの検定を、試料がヘパリン又はヘパリ
ノイドを含有するか否かに関係なく実施できる点が特記
できる。
て、特にポリブレン、プロタミン(プロタミン塩)又はヘ
パリナーゼを使用する。使用するヘパリン中和物質の濃
度の大きさは、検定する試料中のヘパリン濃度によって
左右され、通常は、ポリブレンの場合、１−５００mｇ/
ml の範囲である。規格化された方法では、２−１００m
ｇ/ml ポリブレンを使用する。ヘパリン中和物質を含有
する試薬の利点としては、血液又は血漿試料中の個々の
因子及びaＰＴＴの検定を、試料がヘパリン又はヘパリ
ノイドを含有するか否かに関係なく実施できる点が特記
できる。
【００１５】本発明はさらに、(a) 内因性凝固系のイ
ニシエーター及びリン脂質を含有する、aＰＴＴを検定
するための試薬、及び(b) ヘパリン中和物質、を含有
しているキット(セット)に関する。aＰＴＴは、ヘパリ
ン療法を監視（モニター）するために利用されることが
多いが（ヘパリン感受性が望まれる）、無傷の内因系又
は内因系の因子をヘパリン含量とは無関係に検定しなけ
ればならない場合にも利用される。ヘパリンをこれに含
有させて測定時にaＰＴＴを遅らせれば、凝固因子の一
部が低すぎる場合が模擬されよう。
ニシエーター及びリン脂質を含有する、aＰＴＴを検定
するための試薬、及び(b) ヘパリン中和物質、を含有
しているキット(セット)に関する。aＰＴＴは、ヘパリ
ン療法を監視（モニター）するために利用されることが
多いが（ヘパリン感受性が望まれる）、無傷の内因系又
は内因系の因子をヘパリン含量とは無関係に検定しなけ
ればならない場合にも利用される。ヘパリンをこれに含
有させて測定時にaＰＴＴを遅らせれば、凝固因子の一
部が低すぎる場合が模擬されよう。
【００１６】本発明を以下の実施例によってさらに詳細
に説明する。実施例１ 種々の試薬を用いた場合のaＰＴＴの比較 aＰＴＴを測定するためのイニシエーターとしての検定
試薬には、２００mＭヘペス(Hepes)−グリシン緩衝液(p
Ｈ６．８)中にてスルファチド[Pentapharmのスルファチ
ド]及びカオリンを種々の混合比率で含有させた。さら
に、ホスファチジルセリン４．８μg、ホスファチジル
コリン２０．７μg、ホスファチジルエタノールアミン
１５．９μg、コレステロール３．７μg、及びホスファ
チジン酸３．７μgを１ml 当たりに含有する混合物を試
薬中に存在させた。正常な血漿（ＮＰ）[リファレンス
・プラズマ１００％、イムノ(Immuno)]又は不正常な血
漿（ＡＰ）[イムノコントロール・プラズマ・アブノー
マル、イムノ]０．１ml を試薬０．１ml と混合した。
３７℃で２分間インキュベートした後、０．０２５Ｍ
ＣaＣl2溶液０．１ml を加え、凝固する時点までの時間
をSchnitger−Gross−凝固測定装置[Amelung製]によっ
て測定した。以下の表１から分かるように、試薬中にス
ルファチドが存在すると正常血漿（ＮＰ）の凝固時間が
短くなる。さらに、試薬中にカオリンが存在すると感受
性が改善され、これはＡＰ及びＮＰの凝固時間の比率に
よって表される(表２を参照のこと)。
に説明する。実施例１ 種々の試薬を用いた場合のaＰＴＴの比較 aＰＴＴを測定するためのイニシエーターとしての検定
試薬には、２００mＭヘペス(Hepes)−グリシン緩衝液(p
Ｈ６．８)中にてスルファチド[Pentapharmのスルファチ
ド]及びカオリンを種々の混合比率で含有させた。さら
に、ホスファチジルセリン４．８μg、ホスファチジル
コリン２０．７μg、ホスファチジルエタノールアミン
１５．９μg、コレステロール３．７μg、及びホスファ
チジン酸３．７μgを１ml 当たりに含有する混合物を試
薬中に存在させた。正常な血漿（ＮＰ）[リファレンス
・プラズマ１００％、イムノ(Immuno)]又は不正常な血
漿（ＡＰ）[イムノコントロール・プラズマ・アブノー
マル、イムノ]０．１ml を試薬０．１ml と混合した。
３７℃で２分間インキュベートした後、０．０２５Ｍ
ＣaＣl2溶液０．１ml を加え、凝固する時点までの時間
をSchnitger−Gross−凝固測定装置[Amelung製]によっ
て測定した。以下の表１から分かるように、試薬中にス
ルファチドが存在すると正常血漿（ＮＰ）の凝固時間が
短くなる。さらに、試薬中にカオリンが存在すると感受
性が改善され、これはＡＰ及びＮＰの凝固時間の比率に
よって表される(表２を参照のこと)。
【００１７】
【表１】 aＰＴＴ(秒) カオリン（％） ０ ０．１５ ０．３０ スルファチド（％） ＮＰ ０ Ｘ ７８．１ ７０．１ ＮＰ ０．００５ ３４．４ ３８．４ ３８．６ ＮＰ ０．０１ ３９．１ ４１．１ ４１．８
【００１８】
【表２】 aＰＴＴの比率（ＡＰ／ＮＰ） カオリン（％） ０ ０．１５ ０．３０ スルファチド（％） ０ Ｘ ２．２０ ２．１２ ０．００５ ２．００ ２．１１ ２．２１ ０．０１ ２．０１ ２．１５ ２．２３
【００１９】実施例２ ヘパリンに対する感受性 実施例１にて製造した試薬を使用し、正常血漿(実施例
１を参照のこと)及びヘパリン処理した正常血漿(ヘパリ
ン０．３７Ｕ／ml)を検定した。下記の表３では、正常
血漿に対するヘパリン処理正常血漿のaＰＴＴの比率を
種々の試薬について示している。ヘパリンに対する感受
性は、試薬中のカオリン含量を高めることによって改善
される。
１を参照のこと)及びヘパリン処理した正常血漿(ヘパリ
ン０．３７Ｕ／ml)を検定した。下記の表３では、正常
血漿に対するヘパリン処理正常血漿のaＰＴＴの比率を
種々の試薬について示している。ヘパリンに対する感受
性は、試薬中のカオリン含量を高めることによって改善
される。
【表３】 aＰＴＴの比率（＋／−ヘパリン） カオリン（％） ０ ０．１５ ０．３０ スルファチド（％） ０ Ｘ １．５０ １．６６ ０．００５ １．１８ １．２８ １．３７ ０．０１ １．２３ １．３１ １．４１
【００２０】実施例３ 第VIII因子に対する感受性 実施例１にて製造した試薬を使用し、正常血漿(実施例
１を参照のこと)及びコントロール・プラズマ(Control
Plasma)［イムノ製、正常血漿の第VIII因子含量(１００
％)に基づき＜３０％の第VIII因子を含有している］を
検定した。下記の表４では、正常血漿に対するコントロ
ール・プラズマのaＰＴＴの比率を種々の試薬について
示している。第VIII因子に対する感受性は、カオリン含
有試薬中のスルファチドの含量によって改善される。
１を参照のこと)及びコントロール・プラズマ(Control
Plasma)［イムノ製、正常血漿の第VIII因子含量(１００
％)に基づき＜３０％の第VIII因子を含有している］を
検定した。下記の表４では、正常血漿に対するコントロ
ール・プラズマのaＰＴＴの比率を種々の試薬について
示している。第VIII因子に対する感受性は、カオリン含
有試薬中のスルファチドの含量によって改善される。
【表４】 aＰＴＴの比率 コントロール・プラズマ(第VIII因子／正常血漿の＜３０％) カオリン（％） ０ ０．１５ ０．３０ スルファチド（％） ０ Ｘ １．４８ １．５１ ０．００５ １．６６ １．７５ １．７４ ０．０１ １．７１ １．７２ １．７０
【００２１】実施例４ 第VIII因子−較正曲線 第VIII因子に関する較正曲線を作成するため、リファレ
ンス・プラズマ１００％(Reference Plasma 100%)[イム
ノ製]を３．４ｇ／ｌ イミダゾール、５．８５ｇ／ｌ
ＮaＣl pＨ７．４のイミダゾール緩衝液で１：５に希釈
した。この希釈物０．１ml をリン脂質−カオリン−ス
ルファチド試薬［実施例１のリン脂質の組成； ２００
mＭ Ｈepes−グリシン−緩衝液(pＨ６．８)中、０．３
％カオリン及び０．０１％スルファチド］０．１ml と
混合し、３７℃で４分間インキュベートした。同時に塩
化セシウム(２５mＭ)０．１ml を加え、ストップウォッ
チをスタートさせ、凝固の終点までの時間をSchnitger
−Gross−凝固測定装置[Amelung製]によって測定した。
前もって希釈しておいた血漿(１：５)は第VIII因子１０
０％に相当している。さらなる希釈物を幾何学的な希釈
系列に従って試験した(１：１＝１００％−１：１２８
＝０．７８％)。以下の表５に測定結果を示す。
ンス・プラズマ１００％(Reference Plasma 100%)[イム
ノ製]を３．４ｇ／ｌ イミダゾール、５．８５ｇ／ｌ
ＮaＣl pＨ７．４のイミダゾール緩衝液で１：５に希釈
した。この希釈物０．１ml をリン脂質−カオリン−ス
ルファチド試薬［実施例１のリン脂質の組成； ２００
mＭ Ｈepes−グリシン−緩衝液(pＨ６．８)中、０．３
％カオリン及び０．０１％スルファチド］０．１ml と
混合し、３７℃で４分間インキュベートした。同時に塩
化セシウム(２５mＭ)０．１ml を加え、ストップウォッ
チをスタートさせ、凝固の終点までの時間をSchnitger
−Gross−凝固測定装置[Amelung製]によって測定した。
前もって希釈しておいた血漿(１：５)は第VIII因子１０
０％に相当している。さらなる希釈物を幾何学的な希釈
系列に従って試験した(１：１＝１００％−１：１２８
＝０．７８％)。以下の表５に測定結果を示す。
【００２２】
【表５】 第VIII因子（％） 凝固時間（秒） １００ ７８．５ ５０ ９１．０ ２５ １０１．７ １２．５ １１５．３ ６．２５ １２８．９ ３．１３ １３９．９ １．５６ １４８．６ ０．７８ １５９．４
【００２３】実施例５ ポリブレンを添加し、及び添加していない種々の組成の
ＰＴＴ試薬を用いたaＰＴＴの検定 ヘパリン中和物質を添加し、及び添加していない５つの
異なる試薬を、aＰＴＴを検定するための本実施例で使
用した。これらの試薬は以下の組成を有している（重量
％）：試薬Ａ ： イニシエーターとしての０．０７５％カオリ
ン及び０．０１％スルファチド(Pentapharm製)、及び高
度に精製されたリン脂質（１７％ホスファチジルセリ
ン、４４％ホスファチジルコリン、２９％ホスファチジ
ルエタノールアミン、５％コレステロール、及び５％ホ
スファチジン酸） 蒸留水２ml を用いる再構成によって用時調製の試薬を
製造する（リン脂質の濃度： ６５μｇ/ml）。
ＰＴＴ試薬を用いたaＰＴＴの検定 ヘパリン中和物質を添加し、及び添加していない５つの
異なる試薬を、aＰＴＴを検定するための本実施例で使
用した。これらの試薬は以下の組成を有している（重量
％）：試薬Ａ ： イニシエーターとしての０．０７５％カオリ
ン及び０．０１％スルファチド(Pentapharm製)、及び高
度に精製されたリン脂質（１７％ホスファチジルセリ
ン、４４％ホスファチジルコリン、２９％ホスファチジ
ルエタノールアミン、５％コレステロール、及び５％ホ
スファチジン酸） 蒸留水２ml を用いる再構成によって用時調製の試薬を
製造する（リン脂質の濃度： ６５μｇ/ml）。
【００２４】試薬Ｂ： ０．００１７％のスルファチド
しか含有していない試薬Ａ同様の試薬。試薬Ｃ ： ０．５％カオリン、ブタ粘膜由来の脂質抽出
物（ホルモンケミエ(Hormonchemie)のTachostypta
nR）。蒸留水２ml を用いる再構成によって用時調製の
試薬を製造する。試薬Ｄ ： ボクスター(Boxter)のAktin FSR（イニシエ
ーターとしてエラグ酸を含有し、また大豆由来のリン脂
質を含有している）試薬Ｅ ： ベーリング(Behring)のPathromtinR（イニシ
エーターとして脂質懸濁液中、０．５％カオリンを含有
し、さらにヒト胎盤由来の脂質抽出物(ｌｙｏ)を含有し
ている）。このカオリン懸濁液に脂質抽出物を溶解して
用時調製の試薬を製造する。
しか含有していない試薬Ａ同様の試薬。試薬Ｃ ： ０．５％カオリン、ブタ粘膜由来の脂質抽出
物（ホルモンケミエ(Hormonchemie)のTachostypta
nR）。蒸留水２ml を用いる再構成によって用時調製の
試薬を製造する。試薬Ｄ ： ボクスター(Boxter)のAktin FSR（イニシエ
ーターとしてエラグ酸を含有し、また大豆由来のリン脂
質を含有している）試薬Ｅ ： ベーリング(Behring)のPathromtinR（イニシ
エーターとして脂質懸濁液中、０．５％カオリンを含有
し、さらにヒト胎盤由来の脂質抽出物(ｌｙｏ)を含有し
ている）。このカオリン懸濁液に脂質抽出物を溶解して
用時調製の試薬を製造する。
【００２５】０．４Ｕヘパリン／ml (ＨＰ１)又は１．
０Ｕヘパリン／ml (ＨＰ２)を含有するヘパリン処理正
常血漿又は正常血漿（ＮＰ；イムノのイムノコントロー
ルプラズマ・ノーマル(Immunocontrolplasma)）を血漿
試料として使用した。血漿試料０．１ml を試薬０．１m
l と混合した。３７℃で２分間インキュベートした後、
０．０２５Ｍ ＣaＣl2溶液０．１ml を混合し、凝固点
までの時間をSchnitger−Gross−凝固測定装置[Amelung
製]によって測定した。以下の表６は得られた結果を示
しており、１列目は正常血漿（ＮＰ）の凝固時間(秒)
を、２列及び３列目はヘパリン処理血漿（ＨＰ１及びＨ
Ｐ２）の凝固時間を、４列及び５列目はヘパリン処理血
漿及び正常血漿間の凝固時間の比率をそれぞれ表してい
る。
０Ｕヘパリン／ml (ＨＰ２)を含有するヘパリン処理正
常血漿又は正常血漿（ＮＰ；イムノのイムノコントロー
ルプラズマ・ノーマル(Immunocontrolplasma)）を血漿
試料として使用した。血漿試料０．１ml を試薬０．１m
l と混合した。３７℃で２分間インキュベートした後、
０．０２５Ｍ ＣaＣl2溶液０．１ml を混合し、凝固点
までの時間をSchnitger−Gross−凝固測定装置[Amelung
製]によって測定した。以下の表６は得られた結果を示
しており、１列目は正常血漿（ＮＰ）の凝固時間(秒)
を、２列及び３列目はヘパリン処理血漿（ＨＰ１及びＨ
Ｐ２）の凝固時間を、４列及び５列目はヘパリン処理血
漿及び正常血漿間の凝固時間の比率をそれぞれ表してい
る。
【００２６】
【表６】 試薬Ａ NP(秒) HP1(秒) HP2(秒) HP1/NP比 HP2/NP比 ポリブレン無し 34.0 52.9 214.1 1.56 6.30 25mg/lポリブレン 32.4 36.1 39.1 1.11 1.21 試薬Ｃ NP(秒) HP1(秒) HP2(秒) HP1/NP比 HP2/NP比 ポリブレン無し 52.4 123.1 253.4 2.35 4.84 25mg/lポリブレン 68.0 75.8 80.3 1.11 1.18 試薬Ｄ NP(秒) HP1(秒) HP2(秒) HP1/NP比 HP2/NP比 ポリブレン無し 43.1 99.8 283.4 2.32 6.58 25mg/lポリブレン 65.9 67.6 59.1 1.03 0.90 試薬Ｅ NP(秒) HP1(秒) HP2(秒) HP1/NP比 HP2/NP比 ポリブレン無し 34.1 76.1 210.1 2.23 6.16 50mg/lポリブレン 46.6 50.9 96.2 1.09 2.06
【００２７】上記の結果は、ポリブレンが存在していな
いヘパリン処理血漿では、aＰＴＴが明らかに増大し、
従って偽り値又は曲解の値であることを明確に示してい
る。ポリブレンが存在すれば、ヘパリン処理血漿でも試
験したすべての試薬を用いてaＰＴＴを検定することが
できた。ヘパリン処理血漿と正常血漿との凝固時間の比
率は理想的には１であるが（即ち、凝固時間は正確に同
じである）、ポリブレンを含有しない試薬を用いた試験
では理想値１から大幅に掛け離れており、他方ポリブレ
ンが存在した場合の凝固時間の比率は１に近かった。
いヘパリン処理血漿では、aＰＴＴが明らかに増大し、
従って偽り値又は曲解の値であることを明確に示してい
る。ポリブレンが存在すれば、ヘパリン処理血漿でも試
験したすべての試薬を用いてaＰＴＴを検定することが
できた。ヘパリン処理血漿と正常血漿との凝固時間の比
率は理想的には１であるが（即ち、凝固時間は正確に同
じである）、ポリブレンを含有しない試薬を用いた試験
では理想値１から大幅に掛け離れており、他方ポリブレ
ンが存在した場合の凝固時間の比率は１に近かった。
【００２８】実施例６ ポリブレンを添加し、又は添加していない種々の組成の
ＰＴＴ試薬を用いた第VIII因子−較正曲線 これらの較正曲線を作成するため、参考血漿（イムノの
リファレンス・プラズマ１００％）を使用した。このリ
ファレンス・プラズマを蒸留水１ml（ＲＰ）及び１Ｕ／
ml ヘパリン［イムノ］を含有する蒸留水１ml（ＨＰ）
に溶解した。血漿をイミダゾール緩衝液（３．４ｇ／ｌ
イミダゾール、５．８５ｇ／ｌ ＮaＣl、pＨ７．４）
により前もって１：５に希釈した。これは１００％の第
VIII因子に相当している。さらなる希釈物を幾何学的な
希釈系列に従って調製した(１：１＝１００％−１：１
２８＝０．７８％)。試料０．１ml を試薬１ml と混合
し、３７℃で４分間インキュベートした。次いで、０．
０２５Ｍ 塩化セシウム溶液０．１ml を混合し、凝固時
点までの時間をSchnitger−Gross−凝固測定装置によっ
て測定した。得られた結果を以下の表７−表１０に示
す。
ＰＴＴ試薬を用いた第VIII因子−較正曲線 これらの較正曲線を作成するため、参考血漿（イムノの
リファレンス・プラズマ１００％）を使用した。このリ
ファレンス・プラズマを蒸留水１ml（ＲＰ）及び１Ｕ／
ml ヘパリン［イムノ］を含有する蒸留水１ml（ＨＰ）
に溶解した。血漿をイミダゾール緩衝液（３．４ｇ／ｌ
イミダゾール、５．８５ｇ／ｌ ＮaＣl、pＨ７．４）
により前もって１：５に希釈した。これは１００％の第
VIII因子に相当している。さらなる希釈物を幾何学的な
希釈系列に従って調製した(１：１＝１００％−１：１
２８＝０．７８％)。試料０．１ml を試薬１ml と混合
し、３７℃で４分間インキュベートした。次いで、０．
０２５Ｍ 塩化セシウム溶液０．１ml を混合し、凝固時
点までの時間をSchnitger−Gross−凝固測定装置によっ
て測定した。得られた結果を以下の表７−表１０に示
す。
【００２９】
【表７】試薬Ａ ポリブレン無し ２５mｇ/ml ポリブレン第VIII因子（％） ＲＰ ＨＰ ＲＰ ＨＰ １００ ５４．７ ８２．０ ４０．０ ４２．２ ５０ ６５．２ ７８．６ ４８．６ ４７．６ ２５ ７３．５ ８２．１ ５２．０ ５２．１ １２．５ ８１．７ ８６．６ ５８．３ ５８．０ ６．２５ ９０．７ ９２．６ ６４．５ ６４．６ ３．１３ ９８．１ １０４．１ ７０．６ ７１．６ １．５６ １０７．２ １０８．６ ７８．６ ７８．６ ０．７８ １１５．１ １１７．６ ８３．６ ８３．６
【００３０】
【表８】試薬Ｃ ポリブレン無し １２．５mｇ/ml ポリブレン第VIII因子（％） ＲＰ ＨＰ ＲＰ ＨＰ １００ ８１．６ １２９．１ ９０．１ ８７．６ ５０ ９１．３ １０５．６ ９９．６ ９９．６ ２５ １０４．５ １０２．１ １１３．１ １１０．６ １２．５ １１０．６ １０９．１ １２３．１ １２７．６ ６．２５ １２１．５ １２０．１ １３８．１ １３４．６ ３．１３ １３０．５ １３２．１ １５０．１ １５１．１ １．５６ １４１．６ １４３．１ １６３．１ １６３．１ ０．７８ １５０．５ １５１．６ １７７．５ １７５．１
【００３１】
【表９】試薬Ｄ ポリブレン無し ２５mｇ/ml ポリブレン第VIII因子（％） ＲＰ ＨＰ ＲＰ ＨＰ １００ ６０．６ １０７．２ ７０．１ ６５．６ ５０ ７１．７ ８４．１ ２５ ７９．０ ８２．６ １００．１ ９３．６ １２．５ ８８．１ ８９．６ ６．２５ ９８．１ １００．１ ３．１３ １０９．１ １０９．１ １４０．６ １３８．６ １．５６ １１８．１ １１８．２ ０．７８ １２７ １２６．６ １６４ １６０．５
【００３２】
【表１０】試薬Ｅ ポリブレン無し ５０mｇ/ml ポリブレン第VIII因子（％） ＲＰ ＨＰ ＲＰ ＨＰ １００ ５４．９ １２７．５ ７２．１ ６８．１ ５０ ６１．２ ９８．５ ７８．４ ７５．１ ２５ ６７．４ ９６．４ ８７．９ ８２．６ １２．５ ７４．２ １０２．４ ９４．９ ９２．１ ６．２５ ８３．４ １１２．６ １０６．２ １０５．１ ３．１３ ８９．９ １２０．６ １１３．２ １１５．６ １．５６ ９７．１ １３１．６ １２１．１ １２５．５ ０．７８ １０２．４ １４０．９ １２７．６ １３１．６
【００３３】上記の結果は、正常な場合（ヘパリンを含
有しない血漿；ＲＰ、ポリブレンを含有しない試薬）で
は、凝固時間と第VIII因子濃度とに相関性が認められ、
第VIII因子の濃度が低くなる程に、凝固時間が長くなる
ことを示している。ヘパリン含有試料（ＨＰ、ポリブレ
ンを含有しない試薬）を測定すると、明らかな相関性は
認められず、測定値は、凝固時間及び第VIII因子濃度に
直線で帰属できない無用の第VIII因子較正曲線を与え
た。試薬中にポリブレンが存在する場合にのみ、ヘパリ
ン含有試料（ＨＰ、１２．５／２５／５０mｇ/ml ポリ
ブレンを含有する試薬）中の第VIII因子濃度を測定する
ことができる。得られた測定結果は、本発明の試薬を用
いた場合、ヘパリン、そしてポリブレンが存在したとし
ても偽の結果ではなかった。これは、ポリブレンを含有
する試薬及び含有しない試薬を用いてＲＰの測定値を比
較した場合、並びにポリブレンの存在下、ＲＰとＨＰの
凝固時間を比較した場合、の両方で明らかになった(こ
れらの指数は常に、極めて１に近かった)。
有しない血漿；ＲＰ、ポリブレンを含有しない試薬）で
は、凝固時間と第VIII因子濃度とに相関性が認められ、
第VIII因子の濃度が低くなる程に、凝固時間が長くなる
ことを示している。ヘパリン含有試料（ＨＰ、ポリブレ
ンを含有しない試薬）を測定すると、明らかな相関性は
認められず、測定値は、凝固時間及び第VIII因子濃度に
直線で帰属できない無用の第VIII因子較正曲線を与え
た。試薬中にポリブレンが存在する場合にのみ、ヘパリ
ン含有試料（ＨＰ、１２．５／２５／５０mｇ/ml ポリ
ブレンを含有する試薬）中の第VIII因子濃度を測定する
ことができる。得られた測定結果は、本発明の試薬を用
いた場合、ヘパリン、そしてポリブレンが存在したとし
ても偽の結果ではなかった。これは、ポリブレンを含有
する試薬及び含有しない試薬を用いてＲＰの測定値を比
較した場合、並びにポリブレンの存在下、ＲＰとＨＰの
凝固時間を比較した場合、の両方で明らかになった(こ
れらの指数は常に、極めて１に近かった)。
【００３４】実施例７ ヘパリナーゼを添加し、及び添加していない試薬Ｂを用
いたaＰＴＴの検定 イムノコントロールプラズマ・ノーマル［イムノ］を、
０、０．５又は１Ｕ／ml ヘパリンを含有する蒸留水１m
l 中に溶解した。試薬Ｂを、０、０．７４、０．２２、
０．０７及び０．０２Ｕ／ml ヘパリナーゼ［ＩＢＥ
Ｘ、カナダ］を含有する蒸留水１ml に溶解した。ＰＴ
Ｔ検定を実施例５に記載のようにして行った。得られた
測定結果を以下の表１１に示す。
いたaＰＴＴの検定 イムノコントロールプラズマ・ノーマル［イムノ］を、
０、０．５又は１Ｕ／ml ヘパリンを含有する蒸留水１m
l 中に溶解した。試薬Ｂを、０、０．７４、０．２２、
０．０７及び０．０２Ｕ／ml ヘパリナーゼ［ＩＢＥ
Ｘ、カナダ］を含有する蒸留水１ml に溶解した。ＰＴ
Ｔ検定を実施例５に記載のようにして行った。得られた
測定結果を以下の表１１に示す。
【表１１】 血漿中ヘパリン ヘパリナーゼＵ／ml U/ml 0 0.02 0.07 0.22 0.74 0.0 33.6 33.6 33.1 33.6 38.3 0.5 52.4 45.8 41.8 37.7 41.4 1.0 85.8 65.6 50.8 47.3 42.3 これらの結果は、ヘパリナーゼ含有試薬がヘパリン処理
血漿のaＰＴＴ検定に極めて良好に適合していることを
示している。
血漿のaＰＴＴ検定に極めて良好に適合していることを
示している。
Claims (34)
- 【請求項１】 スルファチド及び固体アクチベーターの
混合物を含有する、血液、血漿又は血液誘導体の内因性
凝固系のイニシエーター。 - 【請求項２】 該固体アクチベーターがカオリンである
請求項１に記載のイニシエーター。 - 【請求項３】 内因性凝固系のイニシエーターとしてス
ルファチド及び固体アクチベーターの混合物を含有し、
さらにリン脂質を含有している、血液、血漿又は血液誘
導体のaＰＴＴを測定するための試薬。 - 【請求項４】 該固体アクチベーターがカオリンである
請求項３に記載の試薬。 - 【請求項５】 該リン脂質が規格化混合物中の化学的に
純粋なリン脂質である請求項３に記載の試薬。 - 【請求項６】 該リン脂質混合物が全リン脂質含量に基
づいて５−５０％のホスファチジルセリン、１５−６０
％のホスファチジルコリン、１５−６０％のホスファチ
ジルエタノールアミン、０−２０％のコレステロール、
及び５−２０％のホスファチジン酸を含有している請求
項５に記載の試薬。 - 【請求項７】 少なくとも１つの酸化阻害剤及び感受性
プロモーターをさらに含有している請求項３に記載の試
薬。 - 【請求項８】 アルカリ塩をさらに含有している請求項
３に記載の試薬。 - 【請求項９】 アミノ酸をさらに含有している請求項８
に記載の試薬。 - 【請求項１０】 凝固時間を発色によって分光学的に測
定できるようにする発色物質をさらに含有している請求
項３に記載の試薬。 - 【請求項１１】 少なくとも１つの安定化剤及び緩衝物
質をさらに含有している請求項３に記載の試薬。 - 【請求項１２】 安定化剤の１つがアルブミンである請
求項１１に記載の試薬。 - 【請求項１３】 凍結乾燥状態にある請求項３に記載の
試薬。 - 【請求項１４】 血液、血漿又は血液誘導体のaＰＴＴ
を測定するための試薬を調製する方法であって、スルフ
ァチドを入手し、固体アクチベーターの水性懸濁液を入
手し、リン脂質を入手し、該スルファチドを該固体アク
チベーターの水性懸濁液中で該リン脂質と混合するこ
と、を特徴とする方法。 - 【請求項１５】 別の添加剤を入手し、そして該固体ア
クチベーターの水性懸濁液中で該スルファチドと該別の
添加剤とを混合することをさらに包含する請求項１４に
記載の方法。 - 【請求項１６】 該試薬を凍結乾燥することをさらに包
含する請求項１４に記載の方法。 - 【請求項１７】 血液、血漿又は血液誘導体のaＰＴＴ
を測定するための試薬を調製する方法であって、スルフ
ァチドを入手し、固体アクチベーターを入手し、リン脂
質を入手し、そして該スルファチド、該リン脂質、及び
該固体アクチベーターを固体の状態で混合すること、を
特徴とする方法。 - 【請求項１８】 該スルファチド、該固体アクチベータ
ー及び該リン脂質を、それらを混合する前に凍結乾燥す
ることをさらに包含する請求項１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 別の添加剤を入手し、そして該別の添
加剤を混合することをさらに包含する請求項１７に記載
の方法。 - 【請求項２０】 血液、血漿又は血液誘導体の部分トロ
ンボプラスチン時間（aＰＴＴ）を測定するための方法
であって、 試料を入手し、 内因性凝固系のイニシエーターとしてスルファチド及び
固体アクチベーターの混合物を、及びリン脂質を含有し
ている試薬を入手し、 該試料を該試薬と予め決められた活性化時間だけ接触さ
せ、 該予め決められた活性化時間経過後にカルシムイオンを
混合し、そして該試料の凝固時間を測定することを特徴
とする方法。 - 【請求項２１】 ヘパリン中和物質を入手し、そして該
試料を該試薬に接触させる前に該ヘパリン中和物質を該
試料と混合することをさらに包含する請求項２０に記載
の方法。 - 【請求項２２】 内因性凝固因子及びそのインヒビター
の活性を測定するために使用される請求項２０に記載の
方法であって、血漿試料を該試薬と接触させ、予め決め
られた活性化時間経過後にカルシムイオンを混合し、そ
して凝固時間を測定してある結果を入手し、得られた結
果を、因子の活性が知られている標準試料の結果と比較
することを特徴とする方法。 - 【請求項２３】 内因性凝固系のイニシエーターを含有
している血液、血漿又は血液誘導体のaＰＴＴを測定す
るための試薬において、該試薬がヘパリン中和物質及び
リン脂質成分を含有していることを改良点としている試
薬。 - 【請求項２４】 該血液、血漿又は血液誘導体がヘパリ
ンを含有している請求項２３に記載の試薬。 - 【請求項２５】 該血液、血漿又は血液誘導体がヘパリ
ノイドを含有している請求項２３に記載の試薬。 - 【請求項２６】 ヘパリン中和物質がポリブレン、プロ
タミン塩及びヘパリナーゼからなる群の中から選ばれる
請求項２３に記載の試薬。 - 【請求項２７】 該リン脂質成分が全リン脂質含量に基
づいて５−５０％のホスファチジルセリン、１５−６０
％のホスファチジルコリン、１５−６０％のホスファチ
ジルエタノールアミン、０−２０％のコレステロール、
及び５−２０％のホスファチジン酸を含有している請求
項２３に記載の試薬。 - 【請求項２８】 血液、血漿又は血液誘導体の部分トロ
ンボプラスチン時間（aＰＴＴ）を測定するための方法
において、 試料を入手し、 内因性凝固系のイニシエーター、ヘパリン中和物質及び
リン脂質を含有する試薬を入手し、 該試料を該試薬と接触させ、 カルシムイオンを入手し、 該カルシムイオンを混合し、そして該試料の凝固時間を
測定することを改良点としている方法。 - 【請求項２９】 血液、血漿又は血液誘導体の該試料が
ヘパリンを含有している請求項２８に記載の方法。 - 【請求項３０】 血液、血漿又は血液誘導体の該試料が
ヘパリノイドを含有している請求項２８に記載の方法。 - 【請求項３１】 内因性凝固因子及びそのインヒビター
の活性を測定するために使用される請求項２８に記載の
方法であって、血液、血漿又は血液誘導体の試料を該試
薬と接触させ、予め決められた活性化時間経過後にカル
シムイオンを混合し、そして凝固時間を測定してある結
果を入手し、得られた結果を、因子の活性が知られてい
る標準試料の結果と比較することを特徴とする方法。 - 【請求項３２】 血液、血漿又は血液誘導体の該試料が
ヘパリンを含有している請求項３１に記載の方法。 - 【請求項３３】 血液、血漿又は血液誘導体の該試料が
ヘパリノイドを含有している請求項３１に記載の方法。 - 【請求項３４】 (a) 内因性凝固系のイニシエーター
及びリン脂質を含有するaＰＴＴを測定するための試
薬、及び(b) ヘパリン中和物質を含有するキット。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT99892A AT398983B (de) | 1992-05-15 | 1992-05-15 | Reagens zur bestimmung der aptt |
| AT998/92 | 1993-04-30 | ||
| AT84193A AT402074B (de) | 1993-04-30 | 1993-04-30 | Reagens zur bestimmung der aptt |
| AT841/93 | 1993-04-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0643169A true JPH0643169A (ja) | 1994-02-18 |
Family
ID=25594074
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5112783A Pending JPH0643169A (ja) | 1992-05-15 | 1993-05-14 | 内因性凝固系のイニシエーター |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0570356B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0643169A (ja) |
| AT (1) | ATE176822T1 (ja) |
| CA (1) | CA2096212A1 (ja) |
| CZ (1) | CZ87993A3 (ja) |
| DE (1) | DE59309374D1 (ja) |
| DK (1) | DK0570356T3 (ja) |
| ES (1) | ES2130244T3 (ja) |
| FI (1) | FI932195A7 (ja) |
| HU (1) | HU216882B (ja) |
| MX (1) | MX9302831A (ja) |
| NO (1) | NO310126B1 (ja) |
| SK (1) | SK48793A3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011133396A (ja) * | 2009-12-25 | 2011-07-07 | Sysmex Corp | 活性化部分トロンボプラスチン時間測定試薬、活性化部分トロンボプラスチン時間測定方法、及び血液凝固抑制物質の有無の判定方法 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4337278C2 (de) * | 1993-11-02 | 1996-09-05 | Wolf Dr Bertling | Kit zur individuellen Kontrolle einer Antikoagulantientherapie |
| GR1002776B (el) * | 1996-12-02 | 1997-09-26 | . | Εξουδετερωση της αντιπηκτικης δρασης του συμπλεγματος της αντιθρομβινης-ιιι/ ηπαρινης, νεα δοκιμασια αποκαλυψης θρομβοφιλικων καταστασεων |
| AT405692B (de) * | 1997-03-27 | 1999-10-25 | Immuno Ag | Reagens zur bestimmung der aptt |
| CA2382143C (en) * | 1999-09-03 | 2005-10-18 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent and test cartridge for determining clotting time |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| CN107356769A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-11-17 | 宁波艾科生物科技有限公司 | 一种液体即用型活化部分凝血活酶时间的检测试剂 |
| CN107356768A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-11-17 | 宁波艾科生物科技有限公司 | 一种液体即用型凝血酶原时间检测试剂 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1213198A (en) * | 1982-09-29 | 1986-10-28 | James E. Hughes | Diagnostic activated partial thromboplastin reagent |
| DE3311287A1 (de) * | 1983-03-28 | 1984-10-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur fotometrischen bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit und reagenz dazu |
| CH678892A5 (en) * | 1989-04-04 | 1991-11-15 | Pentapharm Ag | Heparin-sensitive reagent for measuring activated thromboplastin - contains cephalin, sulphate and additive, e.g. lidocaine, modifying sensitivity to heparin or lupus anticoagulant |
| ATE140034T1 (de) * | 1990-04-17 | 1996-07-15 | Analytical Control Syst Inc | Koagulationsassays und reagenzien |
| US5314695A (en) * | 1990-11-13 | 1994-05-24 | Corvas International, Inc. | Tissue factor based prothrombin time reagent |
-
1993
- 1993-05-12 ES ES93890099T patent/ES2130244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-12 DE DE59309374T patent/DE59309374D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-05-12 DK DK93890099T patent/DK0570356T3/da not_active Application Discontinuation
- 1993-05-12 AT AT93890099T patent/ATE176822T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-05-12 CZ CZ93879A patent/CZ87993A3/cs unknown
- 1993-05-12 EP EP93890099A patent/EP0570356B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-13 CA CA002096212A patent/CA2096212A1/en not_active Abandoned
- 1993-05-14 MX MX9302831A patent/MX9302831A/es unknown
- 1993-05-14 SK SK487-93A patent/SK48793A3/sk unknown
- 1993-05-14 HU HU9301400A patent/HU216882B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-05-14 JP JP5112783A patent/JPH0643169A/ja active Pending
- 1993-05-14 NO NO931774A patent/NO310126B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-05-14 FI FI932195A patent/FI932195A7/fi unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011133396A (ja) * | 2009-12-25 | 2011-07-07 | Sysmex Corp | 活性化部分トロンボプラスチン時間測定試薬、活性化部分トロンボプラスチン時間測定方法、及び血液凝固抑制物質の有無の判定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO310126B1 (no) | 2001-05-21 |
| NO931774L (no) | 1993-11-16 |
| CA2096212A1 (en) | 1993-11-16 |
| ES2130244T3 (es) | 1999-07-01 |
| DK0570356T3 (da) | 1999-09-20 |
| HUT75667A (en) | 1997-05-28 |
| FI932195L (fi) | 1993-11-16 |
| CZ87993A3 (en) | 1994-02-16 |
| HU216882B (hu) | 1999-09-28 |
| EP0570356A1 (de) | 1993-11-18 |
| MX9302831A (es) | 1994-05-31 |
| ATE176822T1 (de) | 1999-03-15 |
| EP0570356B1 (de) | 1999-02-17 |
| SK48793A3 (en) | 1993-12-08 |
| DE59309374D1 (de) | 1999-03-25 |
| NO931774D0 (no) | 1993-05-14 |
| FI932195A0 (fi) | 1993-05-14 |
| FI932195A7 (fi) | 1993-11-16 |
| HU9301400D0 (en) | 1993-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU650941B2 (en) | Method to determine the concentration of anticoagulants | |
| JP4999613B2 (ja) | 血液凝固測定用試薬及び血液凝固時間測定方法 | |
| US20050221414A1 (en) | Kit for measuring the thrombin generation in a sample of a patient's blood or plasma | |
| AU705596B2 (en) | Method for specifically detecting a coagulation factor V which has an increased stability toward activated protein C in the activated state | |
| JPH0643169A (ja) | 内因性凝固系のイニシエーター | |
| JPH0365958B2 (ja) | ||
| US7148067B2 (en) | Thromboplastin reagents | |
| US5506112A (en) | Reagent used for determining factor VIII activity | |
| EP0972203B1 (de) | REAGENS ZUR BESTIMMUNG DER aPTT | |
| CA2244654C (en) | Use of annexins as a lupus anticoagulant control or standard in clotting tests | |
| JPH05180835A (ja) | ループスアンチコアグラントの測定方法 | |
| JP4921359B2 (ja) | 高感度血液学的アッセイ及び試薬 | |
| US5627038A (en) | Factor IX chromogenic assay | |
| CA2065370C (en) | Factor viii:ca chromogenic assay | |
| JPH07270406A (ja) | 合成燐脂質試薬 | |
| JPH04350560A (ja) | プロテインｓ活性の機能的測定方法 | |
| EP0677171B1 (en) | Tetrahydroxyquinone as an activator component for activated partial thromboplastine time test of blood coagulation and as a detector of blood coagulation disorders | |
| JPH08220101A (ja) | 欠損凝固ｖ因子を検出する試験方法で使用するためのキャリブレータ | |
| WO1999066939A1 (en) | Phospholipid vesicle-tissue factor complex preparations and methods of making and using same | |
| JPH07134129A (ja) | 組織因子の活性測定用試薬 |