JPH0645647B2 - 化学修飾多糖及びその製造法 - Google Patents
化学修飾多糖及びその製造法Info
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- JPH0645647B2 JPH0645647B2 JP950584A JP950584A JPH0645647B2 JP H0645647 B2 JPH0645647 B2 JP H0645647B2 JP 950584 A JP950584 A JP 950584A JP 950584 A JP950584 A JP 950584A JP H0645647 B2 JPH0645647 B2 JP H0645647B2
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は化学修飾多糖及びその製造法に関するものであ
る。
る。
担子菌由来の多糖は、抗腫瘍性を示すことで注目されて
いる。この例としては、シイタケよりのレンチナン，ス
エヒロタケよりのシゾフイランなどが知られている。こ
れらは、いずれも、β−１，３−グルカンを主鎖とし、
β−１，６−結合でグルコースが分岐しているといわれ
ている。
いる。この例としては、シイタケよりのレンチナン，ス
エヒロタケよりのシゾフイランなどが知られている。こ
れらは、いずれも、β−１，３−グルカンを主鎖とし、
β−１，６−結合でグルコースが分岐しているといわれ
ている。
担子菌ブクリョウよりのバキマン、スクレロチウム属の
微生物よりのスクレログルカン、キクラゲ由来の多糖等
も同様の構造を持つといわれている。
微生物よりのスクレログルカン、キクラゲ由来の多糖等
も同様の構造を持つといわれている。
しかしながらこのような類似した構造を持つ多糖であっ
ても、それらの抗腫瘍性には、差が認められるのであ
り、その原因の一つとして、分岐した糖、即ち側鎖の形
態（例えば、側鎖の数や長さ）の違いによることが考え
られる。
ても、それらの抗腫瘍性には、差が認められるのであ
り、その原因の一つとして、分岐した糖、即ち側鎖の形
態（例えば、側鎖の数や長さ）の違いによることが考え
られる。
これらの多糖類はいずれもその起原である菌類から単純
な抽出分離操作を行って得たものか、又はこうして得た
多糖類から酸化や還元等の単純な反応によって誘導され
たものであった。
な抽出分離操作を行って得たものか、又はこうして得た
多糖類から酸化や還元等の単純な反応によって誘導され
たものであった。
本発明は式(I)、 （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位置
を示す）で表されるβ−１，３−グルコピラノシル基単
位を繰り返し単位とする第一の繰り返し単位、並びに式
(II)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ＸはＮ
−ヒドロキシアミノカルボニル基又は（２−ヒドロキシ
エチル）アミノ基を表し、ｍは０ないし２の整数を示
す）で表される第二の繰り返し単位、又はこの第二の繰
り返し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｎは０
ないし２の整数を示す）で表される第三の繰り返し単位
からなり、式(I)のグルコピラノシル基単位100個あたり
第二の繰り返し単位の数が約20ないし約85個、第三の繰
り返し単位の数が、０ないし約30個であり、濃度0.1モ
ル／の塩化ナトリウム水溶液を移動相とするゲル過
高速液体クロマトグラフィにおいて、分子量の値として
約10万ないし約150万を示す化学修飾多糖である。
を示す）で表されるβ−１，３−グルコピラノシル基単
位を繰り返し単位とする第一の繰り返し単位、並びに式
(II)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ＸはＮ
−ヒドロキシアミノカルボニル基又は（２−ヒドロキシ
エチル）アミノ基を表し、ｍは０ないし２の整数を示
す）で表される第二の繰り返し単位、又はこの第二の繰
り返し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｎは０
ないし２の整数を示す）で表される第三の繰り返し単位
からなり、式(I)のグルコピラノシル基単位100個あたり
第二の繰り返し単位の数が約20ないし約85個、第三の繰
り返し単位の数が、０ないし約30個であり、濃度0.1モ
ル／の塩化ナトリウム水溶液を移動相とするゲル過
高速液体クロマトグラフィにおいて、分子量の値として
約10万ないし約150万を示す化学修飾多糖である。
本発明の化学修飾多糖は代表的には以下の様な物理的、
化学的特性を示す。
化学的特性を示す。
(1)分子量 濃度0.1モル／の塩化ナトリウム溶液を移動相とする
ゲル過高速液体クロマトグラフイーで、カラムとして
東洋曹達製Ｇ−6000ＰＷを用い、ゲル過を行うと、分
子量１０万〜１５０万のリテンションタイムの位置に溶
出する。
ゲル過高速液体クロマトグラフイーで、カラムとして
東洋曹達製Ｇ−6000ＰＷを用い、ゲル過を行うと、分
子量１０万〜１５０万のリテンションタイムの位置に溶
出する。
(2)元素分析値 化学式から期待される値と実質的に一致する値を与え
る。即ち式(II)のＸがＮ−ヒドロキシアミノカルボニル
基の場合には Ｃ：32.5％〜43.2％ Ｈ： 4.5％〜 6.2％ Ｎ： 1.9％〜 8.6％ 程度の値を与え、（２−ヒドロキシエチル） アミノ基の場合には Ｃ：35.0％〜43.0％ Ｈ： 5.0％〜 6.2％ Ｎ： 2.0％〜11.0％ 程度の値を与える。
る。即ち式(II)のＸがＮ−ヒドロキシアミノカルボニル
基の場合には Ｃ：32.5％〜43.2％ Ｈ： 4.5％〜 6.2％ Ｎ： 1.9％〜 8.6％ 程度の値を与え、（２−ヒドロキシエチル） アミノ基の場合には Ｃ：35.0％〜43.0％ Ｈ： 5.0％〜 6.2％ Ｎ： 2.0％〜11.0％ 程度の値を与える。
(3)硫酸分解 ２Ｎ−硫酸で、８０℃、１８時間で化学修飾多糖を完全
に加水分解し、ガスクロマトグラフイーで分析すると、
グルコースは認められるが、グリセロールは認められな
い。
に加水分解し、ガスクロマトグラフイーで分析すると、
グルコースは認められるが、グリセロールは認められな
い。
(4)塩酸分解 １Ｎ−塩酸水溶液に、化学修飾多糖を溶解し、煮沸して
も、何らの沈澱をも生じない。
も、何らの沈澱をも生じない。
(5)溶解性 水及びジメチルスルホキシドに可溶で、メタノール、エ
タノール、アセトン、ベンゼンに不溶である。
タノール、アセトン、ベンゼンに不溶である。
(6)赤外吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法による赤外吸収スペクトルを第１図
（式(II)のＸがＮ−ヒドロキシアミノカルボニル基の場
合）及び第２図（同じく（２−ヒドロキシエチル）アミ
ノ基の場合）に示す。
（式(II)のＸがＮ−ヒドロキシアミノカルボニル基の場
合）及び第２図（同じく（２−ヒドロキシエチル）アミ
ノ基の場合）に示す。
(7)メチル化分析 メチル化後加水分解して得られるメチル化糖をアルジト
ールアセテートに誘導し、ガスクロマトグラフイーによ
る分析を行うと、2,4−ジ−Ｏ−メチルグルコース及び
2,4,6−トリ−Ｏ−メチルグルコースが分離同定され
る。2,3,4−トリ−Ｏ−メチルグルコース及び、2,3,4,6
−テトラ−Ｏ−メチルグルコースは分離・同定される場
合と、全く認められない場合がある。
ールアセテートに誘導し、ガスクロマトグラフイーによ
る分析を行うと、2,4−ジ−Ｏ−メチルグルコース及び
2,4,6−トリ−Ｏ−メチルグルコースが分離同定され
る。2,3,4−トリ−Ｏ−メチルグルコース及び、2,3,4,6
−テトラ−Ｏ−メチルグルコースは分離・同定される場
合と、全く認められない場合がある。
本発明の化学修飾多糖は非常に強い抗腫瘍性を有するが
哺乳動物への毒性は極めて低く、マウスに対する急性毒
性はＬＤ５０値で1,500mg/kg以上である。
哺乳動物への毒性は極めて低く、マウスに対する急性毒
性はＬＤ５０値で1,500mg/kg以上である。
本発明の化学修飾多糖は公知の抗腫瘍性多糖と同様、生
理的に許容し得る基剤に溶解または分散させて、皮下、
筋肉内、静脈内などへの注射その他の慣用の方法によっ
て投与することができる。投与量は体重１kg当り約0.1
ないし約１００mg程度好ましくは同約１ないし約２０mg
程度である。
理的に許容し得る基剤に溶解または分散させて、皮下、
筋肉内、静脈内などへの注射その他の慣用の方法によっ
て投与することができる。投与量は体重１kg当り約0.1
ないし約１００mg程度好ましくは同約１ないし約２０mg
程度である。
本発明の化学修飾多糖は式(I)、 （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位置
を示す）で表されるβ−１，３−グルコピラノシル基単
位を繰り返し単位とする第一の繰り返し単位、並びに式
(IV)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｍは０
ないし２の整数を示す）で表されるカルボニル基を有す
る繰り返し単位、又はこのカルボニル基を有する繰り返
し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｎは０
ないし２の整数を示す）で表される第三の繰り返し単位
から成るアルデヒド型−β−１，３−グルカンであっ
て、式(I)のグルコピラノシル基単位100個あたり、式(I
V)で表されるカルボニル基を有する繰り返し単位の数が
約20ないし約85個、式(III)で表される第三の繰り返し
単位の数が、０ないし約30個である多糖を、ヒドロキシ
尿素又は２−ヒドラジノエタノールと反応させてシッフ
塩基を形成させ、これを還元することによって製造する
ことができる。
を示す）で表されるβ−１，３−グルコピラノシル基単
位を繰り返し単位とする第一の繰り返し単位、並びに式
(IV)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｍは０
ないし２の整数を示す）で表されるカルボニル基を有す
る繰り返し単位、又はこのカルボニル基を有する繰り返
し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｎは０
ないし２の整数を示す）で表される第三の繰り返し単位
から成るアルデヒド型−β−１，３−グルカンであっ
て、式(I)のグルコピラノシル基単位100個あたり、式(I
V)で表されるカルボニル基を有する繰り返し単位の数が
約20ないし約85個、式(III)で表される第三の繰り返し
単位の数が、０ないし約30個である多糖を、ヒドロキシ
尿素又は２−ヒドラジノエタノールと反応させてシッフ
塩基を形成させ、これを還元することによって製造する
ことができる。
この方法（以下本発明の方法と云う）で出発物質である
アルデヒド型β−１，３−グルカンの式(IV)で表わされ
るカルボニル基を有する繰り返し単位は以下の反応式に
従って式(II)で表わされる繰り返し単位に変換される。
アルデヒド型β−１，３−グルカンの式(IV)で表わされ
るカルボニル基を有する繰り返し単位は以下の反応式に
従って式(II)で表わされる繰り返し単位に変換される。
本発明の方法で出発物質として用いるアルデヒ型β−
１，３−グルカンは、例えば特開昭５５−25409号公報
に開示されている方法と同様にして、ただし、最後の還
元処理及び酸加水分解をすることなく得ることができ
る。すなわち、キクラゲ(Auricularia auriculajudae)
子実体を、アルカリ性水溶液で抽出し、そのアルカリ性
水溶液に溶解しない部分（以下アルカリ不溶部と云う）
を過ヨウ素酸塩で分解することによって調製することが
できる。
１，３−グルカンは、例えば特開昭５５−25409号公報
に開示されている方法と同様にして、ただし、最後の還
元処理及び酸加水分解をすることなく得ることができ
る。すなわち、キクラゲ(Auricularia auriculajudae)
子実体を、アルカリ性水溶液で抽出し、そのアルカリ性
水溶液に溶解しない部分（以下アルカリ不溶部と云う）
を過ヨウ素酸塩で分解することによって調製することが
できる。
本発明の方法で、アルデヒド型β−１，３−グルカンと
ヒドロキシ尿素又は２−ヒドラジノエタノールからシッ
フ塩基を形成させる反応は、水性媒体中前者１ｇに対し
て後者約0.001ないし約0.5モル、好ましくは0.01ないし
0.1モルを添加することによって行うことができる。そ
の際のアルデヒド型β−１，３−グルカンは水性媒体中
によく分散させる。アルデヒド型β−１，３−グルカン
に対する水性媒体の量は重量比で約１０ないし約1.000
倍量、好ましくは約３０ないし３００倍量程度である。
反応の際の液性はpH約５ないし約１０、好ましくは約６
ないし約８とする。液性調整のために酸、例えば塩酸、
又はアルカリ、例えば水酸化ナトリウム等を使用するこ
とができる。
ヒドロキシ尿素又は２−ヒドラジノエタノールからシッ
フ塩基を形成させる反応は、水性媒体中前者１ｇに対し
て後者約0.001ないし約0.5モル、好ましくは0.01ないし
0.1モルを添加することによって行うことができる。そ
の際のアルデヒド型β−１，３−グルカンは水性媒体中
によく分散させる。アルデヒド型β−１，３−グルカン
に対する水性媒体の量は重量比で約１０ないし約1.000
倍量、好ましくは約３０ないし３００倍量程度である。
反応の際の液性はpH約５ないし約１０、好ましくは約６
ないし約８とする。液性調整のために酸、例えば塩酸、
又はアルカリ、例えば水酸化ナトリウム等を使用するこ
とができる。
反応は、通常温度約５ないし約８０℃、好ましくは約１
０ないし約５０℃程度で行なう。反応時間は通常約１０
時間ないし５日間程度、好ましくは２日間程度である。
０ないし約５０℃程度で行なう。反応時間は通常約１０
時間ないし５日間程度、好ましくは２日間程度である。
こうしてシッフ塩基を形成させたのち還元を行う。還元
剤としては強い還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウ
ム、シアノ化水素化ホウ素ナトリウムなどを用いる。特
にシアノ化水素化ホウ素ナトリウムが好ましい。還元剤
の量は出発物質として用いたアルデヒド型β−１，３−
グルカン中のカルボニル基に対して当量以上である。還
元剤の濃度は限定的ではないが約0.001モル濃度以上、
例えば約0.001ないし約0.1モル程度を例示することがで
きる。反応温度は約０ないし約８０℃、好ましくは約１
０ないし約５０℃程度、反応時間は通常数時間ないし５
日間程度、好ましくは２日間程度である。
剤としては強い還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウ
ム、シアノ化水素化ホウ素ナトリウムなどを用いる。特
にシアノ化水素化ホウ素ナトリウムが好ましい。還元剤
の量は出発物質として用いたアルデヒド型β−１，３−
グルカン中のカルボニル基に対して当量以上である。還
元剤の濃度は限定的ではないが約0.001モル濃度以上、
例えば約0.001ないし約0.1モル程度を例示することがで
きる。反応温度は約０ないし約８０℃、好ましくは約１
０ないし約５０℃程度、反応時間は通常数時間ないし５
日間程度、好ましくは２日間程度である。
これらの反応によって水溶性の本発明の多糖は水性媒体
中へ溶出される。水性媒体中へ溶出した本発明の多糖は
遠心分離などの慣用の方法で不溶性画分を除去したの
ち、透析、凍結乾燥等の常法によって単離することがで
きる。
中へ溶出される。水性媒体中へ溶出した本発明の多糖は
遠心分離などの慣用の方法で不溶性画分を除去したの
ち、透析、凍結乾燥等の常法によって単離することがで
きる。
以下本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。
実施例１ 容量２５０mlのフラスコに原料調製例１で得たアルデヒ
ド型β−１，３−グルカン１ｇをとり、これにヒドロキ
シ尿素0.1モルを加え蒸留水を加えて全量１００mlとし
た。アルデヒド型β−１，３−グルカンをデイスパーザ
ーでよく分散させた後、塩酸でpH７に調整し、２日間マ
グネチックスターラーで攪拌した。
ド型β−１，３−グルカン１ｇをとり、これにヒドロキ
シ尿素0.1モルを加え蒸留水を加えて全量１００mlとし
た。アルデヒド型β−１，３−グルカンをデイスパーザ
ーでよく分散させた後、塩酸でpH７に調整し、２日間マ
グネチックスターラーで攪拌した。
そのあと塩酸でpH6.5に調整した後、シアノ化水素化ホ
ウ素ナトリウム1.16ｇを加え、攪拌しながら、さらに２
日間反応させた。反応終了後、けん濁物を含んだ反応液
を、遠心分離，ロ過し、水溶性画分を、水道水で流水透
析した。透析チューブ内容液を凍結乾燥して目的とする
化学修飾多糖７２mgを得た。（収率7.2％）。得られた
化学修飾多糖の分析結果は以下の通りであった。
ウ素ナトリウム1.16ｇを加え、攪拌しながら、さらに２
日間反応させた。反応終了後、けん濁物を含んだ反応液
を、遠心分離，ロ過し、水溶性画分を、水道水で流水透
析した。透析チューブ内容液を凍結乾燥して目的とする
化学修飾多糖７２mgを得た。（収率7.2％）。得られた
化学修飾多糖の分析結果は以下の通りであった。
分子量 濃度0.1モル／の塩化ナトリウム水溶液を移動相とす
るゲル過高速液体クロマトグラフイーで、カラムとし
て東洋曹達工業（株）製Ｇ−６０００ＰＷを用い、ゲル
過を行なうと、分子量２１万のリテンションタイムの
位置に溶出した。
るゲル過高速液体クロマトグラフイーで、カラムとし
て東洋曹達工業（株）製Ｇ−６０００ＰＷを用い、ゲル
過を行なうと、分子量２１万のリテンションタイムの
位置に溶出した。
元素分析値 Ｃ：36.7％ Ｈ： 5.1％ Ｎ： 4.2％ 赤外吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法による赤外吸収スペクトルを第１図
に示す。
に示す。
メチル化分析 メチル化分析の結果から 式(II)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） 82.5個 式(III)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） ０個 実施例２ 原料調製例２で得たアルデヒド型多糖を用いて実施例１
と同様にして化学修飾を行い、化学修飾多糖を得た。
（収率5.1％）。実施例１と同様にして行った分析の結
果は以下の通りであった。
と同様にして化学修飾を行い、化学修飾多糖を得た。
（収率5.1％）。実施例１と同様にして行った分析の結
果は以下の通りであった。
分子量 分子量９５万のリテンションタイムの位置に溶出した。
元素分析値 Ｃ：39.1％ Ｈ： 5.2％ Ｎ： 3.5％ メチル化分析 メチル化分析の結果から 式(II)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） ７４個 式(III)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） 8.5 実施例３ ヒドロキシ尿素0.1モルに代えて２−ヒドラジノエタノ
ール0.1モルを用いた以外は実施例１と同様にしてアル
デヒド型β−１，３．−グルカンの化学修飾を行ない目
的とする化学修飾多糖８３mgを得た。（収率8.3％）。
実施例１と同様にして行った分析の結果は以下の通りで
あった。
ール0.1モルを用いた以外は実施例１と同様にしてアル
デヒド型β−１，３．−グルカンの化学修飾を行ない目
的とする化学修飾多糖８３mgを得た。（収率8.3％）。
実施例１と同様にして行った分析の結果は以下の通りで
あった。
分子量 分子量２１万のリテンションタイムの位置に溶出した。
元素分析値 Ｃ：38.3％ Ｈ： 5.4％ Ｎ： 4.6％ 赤外吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法による赤外吸収スペクトルを第２図
に示す。
に示す。
メチル化分析 メチル化分析の結果から 式(II)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） 82.5個 式(III)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） ０個 実施例４ 原料調製例２で得たアルデヒド型多糖を用いて実施例３
と同様にして化学修飾を行い、化学修飾多糖を得た。
（収率5.2％）。実施例１と同様にして行った分析の結
果は以下の通りであった。
と同様にして化学修飾を行い、化学修飾多糖を得た。
（収率5.2％）。実施例１と同様にして行った分析の結
果は以下の通りであった。
分子量 分子量９５万のリテンションタイムの位置に溶出した。
元素分析値 Ｃ：40.5％ Ｈ： 5.8％ Ｎ： 3.1％ メチル化分析 メチル化分析の結果から 式(II)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） ７４個 式(III)で表わされる繰り返し単位の個数 （式(I)１００個当り） 8.5個 実施例５ ＩＣＲマウス群で、本発明の化学修飾多糖のザルコーマ
１８０固形腫瘍に対する効果を試験した。ＩＣＲマウス
１匹につき、ザルコーマ１８０腹水癌細胞６×１０６個
をそけい部皮下に接種した。実験群は１群６匹とした。
癌細胞移植後、翌日より１０日間、１日１回薬剤を腹腔
内に0.1mlずつ投与した。試験群には、本発明の化学修
飾多糖（実施例１で得たもの）を５mg/kg・dayの投与量
になるようにして用い、対照群には生理食塩水のみを投
与した。腫瘍移植後３５日目に腫瘍を摘出してその重量
を測定した。各群の腫瘍抑制率は次式により算出した。
１８０固形腫瘍に対する効果を試験した。ＩＣＲマウス
１匹につき、ザルコーマ１８０腹水癌細胞６×１０６個
をそけい部皮下に接種した。実験群は１群６匹とした。
癌細胞移植後、翌日より１０日間、１日１回薬剤を腹腔
内に0.1mlずつ投与した。試験群には、本発明の化学修
飾多糖（実施例１で得たもの）を５mg/kg・dayの投与量
になるようにして用い、対照群には生理食塩水のみを投
与した。腫瘍移植後３５日目に腫瘍を摘出してその重量
を測定した。各群の腫瘍抑制率は次式により算出した。
ここでＣ：対照群の平均腫瘍重量 Ｔ：試験群の平均腫瘍重量 結果を第１表に示す。
本発明で原料として用いたアルデヒド型β−１，３−グ
ルカンは以下の様にして調製した。
ルカンは以下の様にして調製した。
原料調製例１ アルカリ不溶部の調製 市販の乾燥させたキクラゲ５０４ｇを、１％塩化ナトリ
ウム水溶液６で、家庭用ミキサーにより十分粉砕し、
一昼夜静置、浸漬した。このあと１％塩化ナトリウム水
溶液３を加え、さらに６０℃、６時間、攪拌しながら
加熱し、キクラゲを十分膨潤させた。さらにキクラゲを
微細化するため、ホモジナイザーで粉砕した後、１２０
℃、２０分間オートクレーブで熱水抽出を行い遠心分離
して熱水抽出画分を除いた。残査画分について、もう一
度熱水抽出操作を同様にして行った。
ウム水溶液６で、家庭用ミキサーにより十分粉砕し、
一昼夜静置、浸漬した。このあと１％塩化ナトリウム水
溶液３を加え、さらに６０℃、６時間、攪拌しながら
加熱し、キクラゲを十分膨潤させた。さらにキクラゲを
微細化するため、ホモジナイザーで粉砕した後、１２０
℃、２０分間オートクレーブで熱水抽出を行い遠心分離
して熱水抽出画分を除いた。残査画分について、もう一
度熱水抽出操作を同様にして行った。
このようにして得られた残査画分に水９と水酸化ナト
リウム３２４ｇを加え（この時全容量は１２となっ
た）、６０℃、４時間、窒素雰囲気下でアルカリ抽出を
行った。遠心分離を行ないアルカリ抽出画分を除き、ア
ルカリ抽出残査を得た。このアルカリ抽出残査に水８
と水酸化ナトリウム１５６ｇを加え（この時全容量は９
となった。）、再び同様にしてアルカリ抽出操作を行
った。
リウム３２４ｇを加え（この時全容量は１２となっ
た）、６０℃、４時間、窒素雰囲気下でアルカリ抽出を
行った。遠心分離を行ないアルカリ抽出画分を除き、ア
ルカリ抽出残査を得た。このアルカリ抽出残査に水８
と水酸化ナトリウム１５６ｇを加え（この時全容量は９
となった。）、再び同様にしてアルカリ抽出操作を行
った。
アルカリ抽出残査に水１０を加え洗浄、遠心分離及び
再懸濁の操作を懸濁液のpHが約９になるまで繰り返し
た。懸濁液に希塩酸を加えpHを７に調整した。
再懸濁の操作を懸濁液のpHが約９になるまで繰り返し
た。懸濁液に希塩酸を加えpHを７に調整した。
次にこの懸濁液に水５を加え、ホモジナイザー処理
し、アルカリ抽出残査をさらに細分化した。懸濁液にさ
らに水を加えて凍結乾燥し、１４６ｇのアルカリ不溶部
を得た（収率２９％）。このものは実質的に式(I) （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わす）で表
わされるβ−１，３−グルコピラノシル基単位を繰り返
し単位とする第一の繰り返し単位と式(III) （式中Glu及び数字は前記同様の意味を表わす）で表わ
される繰り返し単位からなり、式(I)の繰り返し単位１
００個当り式(III)の繰り返し単位の数が約82.5個であ
る多糖であった。ｎの値は平均値で約0.1であった。
し、アルカリ抽出残査をさらに細分化した。懸濁液にさ
らに水を加えて凍結乾燥し、１４６ｇのアルカリ不溶部
を得た（収率２９％）。このものは実質的に式(I) （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わす）で表
わされるβ−１，３−グルコピラノシル基単位を繰り返
し単位とする第一の繰り返し単位と式(III) （式中Glu及び数字は前記同様の意味を表わす）で表わ
される繰り返し単位からなり、式(I)の繰り返し単位１
００個当り式(III)の繰り返し単位の数が約82.5個であ
る多糖であった。ｎの値は平均値で約0.1であった。
アルデヒド型多糖の調製 内容量５の細口かっ色びんに、アルカリ不溶部２５ｇ
を入れ、蒸留水５を加え、マグネチックスターラーで
アルカリ不溶部をよく分散させた後、アスピレーターを
用い脱気した。そのあとメタ過ヨウ素酸ナトリウム６６
ｇを加え、溶解させた後、攪拌しながら、室温で７日間
反応させた。反応が終了後水洗と遠心分離を３回繰り返
して行い、生成したギ酸及び残存のメタ過ヨウ素酸ナト
リウムを除去した。固相に水を加え、凍結乾燥して20.5
ｇのアルデヒド型多糖を得た（収率８２％）このアルデ
ヒド型多糖は実質的に式(I)で表わされる繰り返し単位
と式(IV)で表わされる繰り返し単位からなるβ−１，３
−グルカンであった。式(IV)のｍの値は平均値で約0.1
であった。また式(I)で表わされる繰り返し単位１００
個当りの式(IV)で表わされる繰り返し単位の個数は82.5
個であった。このアルデヒド型多糖の窒素の含有量は定
量限界以下であった。
を入れ、蒸留水５を加え、マグネチックスターラーで
アルカリ不溶部をよく分散させた後、アスピレーターを
用い脱気した。そのあとメタ過ヨウ素酸ナトリウム６６
ｇを加え、溶解させた後、攪拌しながら、室温で７日間
反応させた。反応が終了後水洗と遠心分離を３回繰り返
して行い、生成したギ酸及び残存のメタ過ヨウ素酸ナト
リウムを除去した。固相に水を加え、凍結乾燥して20.5
ｇのアルデヒド型多糖を得た（収率８２％）このアルデ
ヒド型多糖は実質的に式(I)で表わされる繰り返し単位
と式(IV)で表わされる繰り返し単位からなるβ−１，３
−グルカンであった。式(IV)のｍの値は平均値で約0.1
であった。また式(I)で表わされる繰り返し単位１００
個当りの式(IV)で表わされる繰り返し単位の個数は82.5
個であった。このアルデヒド型多糖の窒素の含有量は定
量限界以下であった。
原料調製例２ 原料調製例１のアルデヒド型多糖の調製で用いたメタ過
ヨウ素酸ナトリウムの量を13.2ｇとした以外は同調製例
と同様にして原料調製を行い、アルデヒド型多糖を得
た。このアルデヒド型多糖は実質的に式(I)で表わされ
る繰り返し単位と式(III)で表わされる繰り返し単位及
び式(IV)で表わされる繰り返し単位からなるβ−１，３
−グルカンであった。式(III)のｎ、式(IV)のｍの値は
ともに平均値で約0.1であった。また式(I)で表わされる
繰り返し単位１００個当りの、式(III)で表わされる繰
り返し単位の個数は8.5個、式(IV)で表わされる繰り返
し単位の個数は７４個であった。
ヨウ素酸ナトリウムの量を13.2ｇとした以外は同調製例
と同様にして原料調製を行い、アルデヒド型多糖を得
た。このアルデヒド型多糖は実質的に式(I)で表わされ
る繰り返し単位と式(III)で表わされる繰り返し単位及
び式(IV)で表わされる繰り返し単位からなるβ−１，３
−グルカンであった。式(III)のｎ、式(IV)のｍの値は
ともに平均値で約0.1であった。また式(I)で表わされる
繰り返し単位１００個当りの、式(III)で表わされる繰
り返し単位の個数は8.5個、式(IV)で表わされる繰り返
し単位の個数は７４個であった。
第１図及び第２図は、本発明の化学修飾多糖の赤外吸収
スペクトルを示す図である。
スペクトルを示す図である。
Claims (3)
- 【請求項１】式(I)、 （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位置
を示す）で表されるβ−１，３−グルコピラノシル基単
位を繰り返し単位とする第一の繰り返し単位、並びに式
(II)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ＸはＮ
−ヒドロキシアミノカルボニル基又は（２−ヒドロキシ
エチル）アミノ基を表し、ｍは０ないし２の整数を示
す）で表される第二の繰り返し単位、又はこの第二の繰
り返し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｎは０
ないし２の整数を示す）で表される第三の繰り返し単位
からなり、式(I)のグルコピラノシル基単位100個あたり
第二の繰り返し単位の数が約20ないし約85個、第三の繰
り返し単位の数が、０ないし約30個であり、濃度0.1モ
ル／の塩化ナトリウム水溶液を移動相とするゲル過
高速液体クロマトグラフィにおいて、分子量の値として
約10万ないし約150万を示す化学修飾多糖。 - 【請求項２】式(I)、 （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位置
を示す）で表されるβ−１，３−グルコピラノシル基単
位を繰り返し単位とする第一の繰り返し単位、並びに式
(IV)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｍは０
ないし２の整数を示す）で表されるカルボニル基を有す
る繰り返し単位、又はこのカルボニル基を有する繰り返
し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表し、ｎは０
ないし２の整数を示す）で表される第三の繰り返し単位
から成るアルデヒド型−β−１，３−グルカンであっ
て、式(I)のグルコピラノシル基単位100個あたり、式(I
V)で表されるカルボニル基を有する繰り返し単位の数が
約20ないし約85個、式(III)で表される第三の繰り返し
単位の数が、０ないし約30個である多糖を、ヒドロキシ
尿素又は２−ヒドラジノエタノールと反応させてシッフ
塩基を形成させ、これを還元することを特徴とする、式
(I)、 （式中Ｇｌｕは及び数字は前記同様の意味を表す）で表
されるβ−１，３−グルコピラノシル基単位を繰り返し
単位とする第一の繰り返し単位、並びに式(II)、 （式中Ｇｌｕ、ｍ及び数字は前記同様の意味を表し、Ｘ
はＮ−ヒドロキシアミノカルボニル基又は（２−ヒドロ
キシエチル）アミノ基を表す）で表される第二の繰り返
し単位、又はこの第二の繰り返し単位及び式(III)、 （式中Ｇｌｕ，ｎ及び数字は前記同様の意味を表す）で
表される第三の繰り返し単位からなり、式(I)のグルコ
ピラノシル基単位100個あたり、式(II)で表される第二
の繰り返し単位の数が約20ないし約85個、式(III)で表
される第三の繰り返し単位の数が、０ないし約30個であ
り、濃度0.1モル／の塩化ナトリウム水溶液を移動相
とするゲル過高速液体クロマトグラフィにおいて、分
子量の値として約10万ないし約150万を示す化学修飾多
糖の製造法。 - 【請求項３】出発物質として用いるアルデヒド型−β−
１，３−グルカンがキクラゲ子実体のアルカリ不溶部分
を過ヨウ素酸で酸化して得たものである特許請求の範囲
第２項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP950584A JPH0645647B2 (ja) | 1984-01-24 | 1984-01-24 | 化学修飾多糖及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP950584A JPH0645647B2 (ja) | 1984-01-24 | 1984-01-24 | 化学修飾多糖及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60155203A JPS60155203A (ja) | 1985-08-15 |
| JPH0645647B2 true JPH0645647B2 (ja) | 1994-06-15 |
Family
ID=11722099
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP950584A Expired - Lifetime JPH0645647B2 (ja) | 1984-01-24 | 1984-01-24 | 化学修飾多糖及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0645647B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6284885B1 (en) * | 1997-09-01 | 2001-09-04 | Seikagaku Corporation | Process for preparing (1→3)-β-D-glucan from fungi |
-
1984
- 1984-01-24 JP JP950584A patent/JPH0645647B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60155203A (ja) | 1985-08-15 |
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