JPH06500704A - グラム―陽性好アルカリ性微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

グラム−陽性好アルカリ性微生物 本発明は微生物の分野に関連し、より詳細には好アルカリ性微生物の分野に関す るものである。 発明の背景 好アルカリ性細菌は、アルカリ性ｐＨ環境、特にｐＨ８以上、および一般にはｐ Ｈ９〜ｌＯの範囲内の環境で最適の成育性を示す生物体として定義される。好ア ルカリ性細菌は、また１２程度のｐＨをもつ環境で生存し得ることも分かつてい る。偏性好アルカリ性細菌は中性ｐＨでは成育し得ない。 好アルカリ性細菌は幾つかのありふれた環境、例えば庭の土壌に見出すことがで きるが、これは多分アンモニア生産、硫酸塩還元または光合成を包含する生物活 性により生じた一過性のアルカリ条件によるものと思われる。より多様な好アル カリ生物体の豊富な源は天然の安定なアルカリ環境、例えばソーダ湖である。 ソーダ湖および好アルカリ生物体のより詳細な研究は、一般にグランド（Ｇｒａ ｎｔ）、　Ｗ、Ｄ、、ムワサ（Ｍｗａｔｈａ）、　Ｗ、Ｅ、およびジョーンズ（ Ｊｏｎｅｓ）、　Ｂ、Ｂ、のＦＥＭＳ　Ｍｔｃｒ。 ｂｉｏｌｏｇＹ　Ｒｅｖｉｅｗｓ、　１９９０．７５．　Ｉ）ｐ、　２５５−２ ７０に与えられている（その内容を本発明の参考文献とする）。ソーダ湖の例示 はグランド（Ｇｒａｎｔ）、　Ｗ、Ｄ、およびチンダル（Ｔｉｎｄａｌｌ）、　 Ｂ、Ｊ、、　Ｍｉｃｒｏｂｅｓ　ｉｎ　Ｅｘｔｒｅｒｎｅ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅ ｎｔｓ、　Ｒ，九／１−パート（Ｈ■窒ｂ■ ｒｔ）およびＧ、　Ａ、　：Ｉ　ラド（Ｃｏｄｄ　）編、アカデミツクブレス刊 、ロンドン、１９８６．１１１）。 ２２−５４およびチンダル（Ｔｉｎｄａｌｌ）、　Ｂｊ、、　Ｈａｌｏｐｈｉｌ ｉｃ　ｂｃｔｅｒｉａ、　Ｖｏｌ、　１．　Ｆ、ｏドリゲツーバレラ（Ｒｏｄｒ ｉｇｕｅｘ−Ｖａｌｅｒａ）編、ＣＲＣプレス刊、ポカロトン、ＦＬ、　１９８ ８゜１）ｐ、　３１−７０等の刊行物に見出すことができる。これら刊行物を本 発明の参考文献とする。 大多数がバチルス（ｂｃｉｌｌｕｓ）種である好アルカリ性細菌は非−塩水環境 から単離され、またホリコシ（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉ）、　Ｋ、およびアキバ（Ａ ｋｉｂａ）、　Ｔ−によりＡｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇｎｉｓ ＋＋＋ｓ、スブリンガー−７エアラーグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）　 、ベルリン、ハイデルベルグ、Ｎ、Ｙ、、　１９８２において論じられている。 しかし、塩水およびアルカリ性環境、例えば湖からの好アルカリ性細菌はそこで は議論されていない。 アルカリ性、バイパーサリン環境からの偏性嫌気性細菌は、最近シバ（Ｓｈｉｂ ａ）、　Ｉｔ、　Ｓｕｐｅｒｂｕｇｓ、　Ｋ、ホリコシ（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉ　 ）およびｌＤ、グランド（Ｇｒａｎｔ）編、ジャパンサイエンティフィックソサ イエティープレス、東京、スプリンガ一−７エアラーグ、ベルリン、ハイデルベ ルグ、Ｎ、Ｙ、、　１９９１．　ｐｐ、　１９１−２１１において、およびナカ ツガワ（Ｎａｈｔｓｕｇａｗａ）、　Ｎ、、　１ｂｉｄ、　ｐｐ、　２１２−２ ２０に記載された。 世界中の様々な場所に見出すことのできるソーダ湖は、地学的、地理学的および 気候的条件の組み合わせにより生じる。これらは、蒸発を通して形成された大量 の炭酸ナトリウム（またはその錯体）の存在並びにこれに対応する、不溶性塩と して炭酸イオンを除去するであろうＣａ”＋および一２４′に乏しいことにより 特徴ずけられる。他の塩、例えＩｆＮａＣ１等も濃縮されている可能性があり、 これはアルカリ性、かつ塩水の環境をもたらす。 保つ可能性がある。この生物体は好アルカリ性シアノバクテリアから好７１０ア ルカリ性古細菌に及ぶ。更に、世界中の、例えば東アフリカリフトバレー（Ｒｉ ｆｔ　Ｖａｌｌｅｙ）　、米国西部、チベット、中国およびハンガリー等の様々 な広範囲の地域に散在するソーダ湖に生息する好アルカリ性生物体の共通の型を 見出すことは稀である。例えば、ナトロノバクテリア（ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔ ｅｒｉａ）が中国のソーダ湖（ワン（Ｗａｎｇ）、　［１，およびタン（Ｔａｎ ｇ）、　Ｑ、　、中国のソーダ湖からのナトロノバクテリア（Ｎａｔｒｏｎｏｂ ａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｒｏｍ　５ｏｄａ　Ｌａｋｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ）、リ ーセントアドバンスズインマイクロバイアルエコロジー（Ｒｅｃｅｎｔ　Ａｄｖ ａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｅｃｏｌｏｇｙ）　（プロシーデイン グスオブザフイフスインターナショナルシンポジウムオンマイクロノくイアルエ コロジー（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔ ｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉａ戟@Ｅｃ。 １ｏｇｙ））、　Ｔ、ハラトリ（ｌＢｊｔｏｒｉ）等編、ジャパンサイエンティ フィックソサイエティーブレス、東京、１９８９．　ｐ９．６８−７２および米 国西部（モース（Ｍｏｒｔｈ）、　Ｓ、およびチンダル（Ｔｉｎｄａｌｌ）、　 Ｂｊ、、　Ａｐｐ＋、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　１９８５．６．　ｐｐ、　２ ４７−２５０）で単離され同定された。ナトロノバクテリアは、またチベット（ Ｗ、　Ｄ、グランド（Ｇｒａｎｔ）。 未公開の観察）およびインド（ウパサニ（Ｕｐａｓａ口ｉ）、　Ｖ、およびプサ イ（Ｄｅｓａｉ）、　Ｓ。 いる。 好アルカリ性細菌は、既に消費材の製造のためのバイオテクノロジーの応用に強 い影響を与えている。好アルカリ性微生物により生産されたアルカリ耐性酵素は すでに工業的用途が見出されており、カリかなりの経済的な潜在性を有している 。例えば、これらの酵素は洗浄剤組成物および皮革なめしにおいて一般的に使用 され、カリ食品、廃物処理および繊維工業における用途が予想されている。更に 、好アルカリ性細菌およびその生産する酵素は生物変換のために、特に純粋なエ ナンショマーの合成において高い有用性をもつ。また、ここに記載する微生物の 多くは鮮やかに着色されており、天然色素産生に関して高い有用性をもつ。 発明の概要 本発明は新規な好気性、グラム−陽性好アルカリ性バクテリアに関する。これら バクテリアは土壌、水、沈殿物および幾つかの他の源にれらは全てアルカリ性ソ ーダ湖内およびその近傍で採取したものである）の試料から単離したものである 。これらの好アルカリ細菌を、その新規性を確認するために、相互に関連して、 かつ公知のバクテリアの収集群に対して数値的分類法の原理に従って分析した。 更に、化学分類学的マーカーとして機能する脂質成分を分析して、これらノくク チリアの分類群を更に分類した。 本発明は、また微生物を含む試料を得たーの組成に関するデータ並びにその効率 的な単離および培養に必要な培地を与える。かくして、かかる環境を容易に特定 し、かつ本明細書に記載する手順に従って本発明の生物体を単離できる。 アルカリ耐性酵素を生産する微生物を提供することも本発明の目的である。これ らの酵素は、高いｐＨの下でその機能を果たすことができ、これはかかる極端な 条件を必要とする用途に特に適している。例えば、アルカリ耐性酵素は洗浄剤組 成物、皮革なめし、食品、廃物処理および繊維工業で使用でき、また生物変換、 例えば純粋なエナンシコマーの製造および天然色素の製造にに利用できる。 これらのアルカリ耐性酵素をコードする遺伝子を単離し、クローニングし、かつ 適合性のある発現宿主内で発現させて、大量の該酵素製品を製造し、必要ならば より簡単に精製することができ、野性型の菌株が十分な量の所定の酵素を生成で きずあるいは通常の工業的醗酵条件下では十分に達成できない種々の工業的用途 での利用を可能とする。 図面の簡単な説明 第１図は、ゴワー（Ｇｏｗｅｒ）の係数８６および重みを付さない平均連結法に より得たクラスター（フェノン）を示す単純化したデンドログラムであり、第２ 図はシャツカード（Ｊａｃｅａｒｄ）の係数Ｓ、および重みを付さない平均連結 法により得たクラスター（フェノン）を示す単純化したデンドログラムであり、 第３図は単純共有度係数Ｓｓｗと重みを付さない平均連結法により得たクラスタ ー（フェノン）を示す単純化したデンドログラムであり、第４図は誘導された最 小判別テストを使用して、単純共有度係数Ｓｓｗと重みを付さない平均連結法に より得た単純化したデンドログラムである。 発明の詳細な説明 から数百種のバクテリア菌株を単離した。これら試料は３年間に及ぶ研究の一部 として得た。該単離バクテリアは非−光合成真性バクテリアである。現在までの ところ、このようなバクテリアは十分に特徴ずけされていない。 これら試料は滅菌プラスチックバッグに収集した。サンプリングはエルメンテイ タ（Ｂｌｍｅｎｔｅｉ　ｔａ）、ナクル（Ｎａｋｕｒｕ）、ボゴリア（Ｂｏｇｏ ｒｆａ）　、クレータ（ソナチ）［Ｃｒａｔｅｒ（Ｓｏｎａｃｈｔ月、リトルナ イバシ＋（Ｌｉｔｔｌｅ　Ｎａ１ｖａｓｈａ）［オロイジエン（Ｏｌｏｉｄｉｅ ｎ）］およびマガジ（Ｍａｇａｄｉ）の各湖で実施し、これらの湖は全て東アフ リカのケニアに位置する。同様な環境をもつアルカリソーダ湖はチベット、中国 、ハンガリーおよび米国西部にも見出すことができる。各サンプリング場所にお いて、その場所および試料の物理的外観を記載し、かつ物理的パラメータ、例え ばｐＨ１導電性および温度を測定した。該試料の幾つかはそのサンプリングの３ ６時間以内に採取場所で処理したが、大部分はサンプリングの数週間後に採取場 所から離れた位置で調べられた。 表１に、単離した種々の菌株を掲載する。該菌株は該試料を採取した場所および 該試料自体の物理的外観に従って掲載した。 表２は、多くの試料を抽出した時点における該採取場所の湖水の典型的な化学分 析の例を与えた。これらデータは以前の分析結果（グランドおよびチンダルの上 記文献）と一致している。 表３は、数値的分類学的分析の結果に従って配列した単離菌株のリストである（ 第１図）。更に、表３には元の試料の物性、特に温度、導電性およびアルカリｐ Ｈ並びにこれら新規なバクテリアの純粋培養物を得るのに必要な種々の単離培地 を与えた。これらの培地はアペンディックスＡに関連して文字コード化されてい る。 表１．２および３にはサンプリング場所の環境を特定できるデータが与えられて いる。該試料の化学的および物理的分析は、アルカリＤＨの存在並びに低濃度の Ｃａ”および−１と関連する異常に高い―、ＣＯ８濃度の存在を明らかにしてい る。ソーダ湖の基本的な環境がそのｐＨおよびイオン組成に関して安定であるこ とか知られている。その上、これらの場所で見出された微生物密度は著しい安定 性を保っている。従って、本発明のバクテリアを得ることのできる該環境が表１ −３に示されたデータから特定できるものと予想される。 新鮮なソーダ湖水試料を、採取後即座にアルカリ栄養培地（培地Ｍ上に層状に添 加した。このソーダ湖試料の顕微鏡観察はバクテリア型の驚くほどに高い多様性 を示した。この環境の極端に高いアルカリ特性を考慮すると、生菌数は１ｍｌ当 たりｉｏ’−ｔｏ’の範囲内のコロニー形成単位という予想外に高い有機栄養バ クテリア数を示した。これら試料は冷却してまたは周囲温度で保存した。数週間 の保存後に、該試料中で成育したバクテリアの総数は増大し、一方でバクテリア 型の多様性は低下した。 ３Ｅ、　ｉ　ニルメンテイタ湖（東湾曲部）　干上がった温床からの泥ｗＥ１． 　ｗＥ２．　同上　湖岸領域の沈殿物および水Ｅ４ ８０８、４　同上　湖岸領域の泥 ｍｌＯ，ｗＮ１２．ナクル湖北岸、ヒッポ点とニョ　湖岸領域の泥および水ｗＮ １６　四点（Ｈｉｐｐｏ　Ｐｏ１ｎｔ　ａｎｄ　Ｎｊｏｒ。 Ｐａ１ｎｔ）との間 ｄ３　ボゴリア湖の北部干潟　湖岸領域の泥および水６６Ｂ、　４　ボゴリア湖 （西岸）、ロボル　ソーダクラストおよび泥（温泉Ｌｏｂｏｒｕ）デルタ領域　 近傍） ６９Ｂ、　４　ボゴリア湖（南岸）　湖岸領域の水柱および沈殿物１３Ｃ，１， ７ＩＣ，４クレータ−湖（北部地点）　湖岸領域の泥および水７２Ｃ，４ １４ＬＮ、　１．１５ＬＮ、　２リトルレークナイバシヤ　水柱および沈殿物７ ９ＬＮ、４　（南岸） ８０ＬＮ、４．８１ＬＮ、４　同上　水底領域の黒色性２３ｐＬｌ　マガジ湖（ 土手道、上西部　泥および氷期　Ｎａ”　Ｋ”　Ｃａ”　Ｍｇ”　５ｉｆｔ　Ｐ Ｏａ”−ＣＩ−（ｍＭ）　（ｍＭ）　（ｍＭ）　（ｍＭ）　（ａｍ）　（ｍＭ） 　（ｄｌ）工ｈＪンティ９　１９６　３．５８　０．０７　ｂ、１．ｄ、　２． ９１　０．０３　６５．１ｆ−’ｙｈ　３２６　５．６３　０．１５　ｂ、１． ｄ、３．２５　０．１５　５７．５ボゴリｙ　７９６　６．７ｇ　（＋、１９　 ０．Ｏｔ　１．９８　０．１７　１１５．５クレータ−１４０８，９５０，０６ ０，０１２，１３０，０４１２，４リトル　８．７　１７９　０．２＆　０．６ ５　１．０２　０．００３　４．、！ナイバシャ マガジ　２８２６　２６．１　０．０３　０．０１　７．１　０．２３　１１２ ４表２（続き） 湖　ＳＯ，”−Ｃ０−−ＴＯＮ　”　ＴＡ台（ｄｌ）　（ｍ）　（ｍＭ＞　（ｍ Ｍ）エルメンテイタ　２．０　６８．０　０．８　１１９ナクル　０．５　１９ ８．３　１．９　２５９ボゴリア　１．１　５１６．７　０．５　６６９クレー タ−０，８９０，８１，１１３３リトル　ナイバシャ　０．５　＜１０．０　＜ ０．０７　１８マガジ　１２．８　１８１６　５．４　１８０ｂ、１．ｄ、：検 出限界以下。 ＊：　全有機窒素。 ｆｉ：ｍｅｑ／Ｉで表した全アルカリ度。 ＋：　１９８８年１０月。 クラ　菌株　採取場所　ｐＨ温度　導電率　単離スタ　（’Ｃ）　（ｍｓ／ａｍ ）　培地１　３８．１”　エルｉン＋イ９　９．５　３５　２　ＡＩ　？ＩＣ， ４クレータ−１０２６１０，２Ｂ１　８１ＬＮ、４　リトル　ナイバシャ　８． ５−９　３０　１．２　ＤＩ　６０Ｂ、４　エルメンテイタ　１０　３２　１２ ．７　Ｂ１ｗＥ４エルメンテイタ　ｎ、ｔ、ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　Ａ２　６９Ｂ 、４　ボゴリア　１０．５３３　４４　Ｃ２ＲＳＩＩ”　零 ２　Ｒ３１４零 ２８ｘｉｇ、ネ ２　Ｒ３１３本 ３ＩｖＢＩエルメンテイタ　ｎ、ｔ、ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　Ａ３　ｗＮｌｏ　ナ クル　ｎ、ｔ、ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　Ａ３　ｗＮ１２　ナクル　ｎ、ｔ、ｎ、ｔ 、　ｎ、ｔ、　Ａ３　ｗＮＩ６”　ナクル　ｎ、ｔ、ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　Ａ４ 　１３ｃ、ｌ　クレー９−　９．０　３０　１ＯＡ４　２３Ｍ、１　？ガジ　１ １　３６　１００　Ａ４　１４ＬＮ、ｌ　リトル　ナイバシャ　８．５２６１Ａ ４　１５ＬＮ、ｌＣＴ　リトル　ナイバシャ　８．５２６１Ａ−ｗＥ２エルメン テイタ　ｎ−ｔ、ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　Ａ−ｗＢ３　ボゴリア　ｎ、ｔ、ｎ、ｔ −ｎ、ｔ、　Ａ−ＢＧｌ１４　本 ５　６６Ｂ、４　ポゴリア　ｎ−ｔ、ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ−Ｆ５ＡＢ３０　ネ ５　Ｒ３ｌ０ｃＴ＊ ５　Ｒ５１７書 ５ＡＢ４９　本 ５ＡＢ４２　本 ６　ＲＳ７　本 ６　ＲＳ８　ｃ？　参 ６Ｒ３１５零 ６ＲＳ１６　本 −７９ＬＮ、４　１Ｊトｔｋ　ナイハシ＋　８．５−９　３０　１．２　Ｆ−Ｒ ３１２＊ −７２Ｃ，４クレータ−１０２６１０，２Ｂ−８０ＬＮ、４　リトルｆ−イｔ＜ シャ８．５−９　３０　１．２　Ｇ−８ｒ、Ｉｆ　本 −Ｍｉｃｒｏ　零 ｎ、ｔ、コテストせず。 単離培地に与えられた文字コードについてはアペンディックスＡを参照。 星印（ネ）は基準菌株を表し、その同定を以下の表４に与える。 該試料の処理：好アルカリ性バクテリアの富化および単離多岐に渡る富化および 単離法を利用した。該方法の幾つかは、アルカリｐＨにおいて特定の型の酵素活 性を示す好アルカリ性バクテリアの富化および単離のために特別に工夫されたも のであった。より一般的な特徴をもつ他の方法を、好アルカリ性バクテリアの多 様な種の単離のために利用した。幾つかの場合には、バクテリアの単離実験を実 施する場合に、湖において優勢な特定の条件（表２）を考慮した。 これらの新規な好アルカリ性バクテリアの単離のために使用した種々の栄養培地 は培地Ａ〜培地Ｇで示した。使用したこれら種々の培地の組成をアペンディック スＡに示す。 非特異的な好アルカリ性有機栄養バクテリアの単離のために、ソーダ湖水試料ま たはその希釈物をｐＨ１Ｏ−１ｏ、　５　（培地Ａ）のアルカリ性栄養寒天培地 上で画線培養した。より固いコンシスチンシーの、泥、沈殿物等の試料はアルカ リ性栄養寒天培地（培地Ａ）上に展開する前に、先ずアルカリ性栄養ブロス（培 地Ａ）中に懸濁した。該バクテリアを加熱インキュベータ中で、好ましくは３７ ℃にて培養した。幾つかの場合には、該試料をアルカリ性栄養ブロス（培地Ａ） 中に懸濁し、バクテリアコロニーの単離のためにアルカリ性栄養寒天培地（培地 Ａ）上に該ブロスを展開する前に、好ましくは３７℃にて２〜３日間振盪培養し た。 特定の型の酵素活性を呈する好アルカリ性バクテリアを単離するために、特定の 物質、例えばラクトアルブミン、カゼインまたはオリーブオイルを含むアルカリ 性栄養寒天培地上に試料を展開した。幾つかの例においては、該試料中のバクテ リアは、非特異的アルカリ性栄養ブロス、例えば培地Ａ中で１日〜数週間富化し た後、酵素活性、例えば脂肪分解またはタンパク分解活性等を呈するバクテリア の検出のために特異的なアルカリ性栄養寒天培地上に該ブロスを展開した。 分類学的分析 アルカリ湖内およびその近傍から単離したバクテリアの２０種の菌株を、（１） グラム染色反応のドゥソールト（Ｄｕｓｓａｕｌ　ｔ　）の改良（ドゥソールト （Ｄｕｓｓａｕｌｔ）、　）ＬＰ、。 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　１９５５．ユＯ，ｌ）り 、　４８４−４８５）；　（２）　ＫＯＨ感受性テスト（グ１ツガ−セン（Ｇｒ ｅｇｅｒｓｅｎ）、　Ｔ、、　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐ ｐｌｉｅｄ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏ［ｏｇｙ@ａｎｄ 反応（セル＝−（Ｃｅｒｎｙ）、　Ｇ１．　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ 　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１X７ ６、３．　ｐｐ、　２２３−２２５；　１ｂｉｄ、　１９７８．５．　ｐｐ、　 １１３−１２２）に基いてグラム−陽性バクテリアとして知られる型の範嗜に振 り分けられ、また多（の場合においては、更に（４）コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ ）、　ＩＬＤ、によりバクテリア分類における化学的方法（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　 Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓＸグツド フェロ−（Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ）、　Ｌおよびミニキン（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ） 、　Ｄ、編）、　１９８５．　ｐｐ、　２６７−２８８アカデミツクプレス、ロ ンドンに記載された方法を利用したキノン分析（コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）、 ！ｔＤ、およびジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）、Ｄ、、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉ ｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ、　１９８１．４５．　ｐｐ、　３１６−３５４）に基 ■ た確認も行った。 これら２０種の菌株を２００の特徴についてテストした。その結果を数値的分類 学の原理（スニース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ、Ｌんおよびソカル（Ｓｏｈｌ）、 　Ｒ，Ｒ，、数値的分類学（Ｎｕａｌｅｒｉｃａｌ　Ｔａｘｏｎｏｍｙ）、　Ｗ 、Ｉ（。フリーマン＆コ社、サンフランシスコ、１９７３）を使用して解析した 。これらのテストした特徴およびそのテスト法をアペンディックスＢにまとめた 。また、アペンディックスＣは各特徴を分類学的解析のためにどのようにコード 化したかを記載した。 コントロールとして、１７種の既知のグラム−陽性バクテリアを、適当と考えら れる場合には同一の条件下で、同一の分析にかけた。これらの基準のバクテリア は通性または偏性好アルカリ性種を含むことが知られている属を含んでいた。こ れら１７種の既知のバクテリアを表４に記載したが、これから入手可能な場合に は該公知の種の「基準菌株」を使用したことが理解できる。該菌株の１３種は公 知の表４ニゲラムー陽性基準菌株 （Ｒ３７）　（好アルカリ性）バチルス種ＤＳＭ　２５１４（ＲＳ８）　（好ア ルカリ性）バチルス種ＤＳＭ　２５１５（ＲＳＩＯ）　（好アルカリ性）バチル ス種ＤＳＭ　２５１７（Ｒ３ＩＩ）　（好アルカリ性）バチルス種ＤＳＭ　２５ １８（ＲＳ１２）　（好アルカリ性）バチルス種ＤＳＭ　２５１９（ＲＳ１３） 　（好アルカリ性）バチルス種ＤＳＭ　２５２１（ＲＳ１４）　（好アルカリ性 ）バチルス種ＤＳＭ　２５２３（Ｒ３１５）　（好アルカリ性）バチルス種ＤＳ Ｍ　２５２５（ＲＳ１６）　バチルスアルカロフイルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａ ｌｅａｌｏｐｈｉｌｕｓ”　）ＤＳＭ　４８５（Ｒ３１７）　バチルスアルカロ フイルス亜種ノ１０デユランス（ｈａ　Ｉｏｄｕｒａｎｓ　）ＤＳＭ　４９７ （ＡＢ３０）　（好アルカリ性）バチルス種ＡＴＣＣ２１５９６（ＡＢ４２）　 （好アルカリ性）バチルス種ＡＴＣＣ２１８３３（ＡＢ４９）　（好アルカリ性 ）バチルス種ＡＴＣＣ２１５９１（ｌｉｚｉｇ）　エクシコバクテリウムオーラ ンチアカム（Ｅｘｉｑｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｕｒａｎｔｉａｃｕｍ　”　） 　ＮＣｌｌ１！Ｂ１１７９８（ＢＧ１１４）　アルスロバクタールテウス（Ａｒ ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　１ｕｔｅｕｓ）　ＡＴＣＣ２１５９６（Ｂｒ、ｌｉ）　 プレビバクテリウムリネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｉｎｅｎｓＴ ）ＭＣＩ！ｉ［Ｂ　９９０４ （Ｍｉｃｒｏ）　ミクロコッカスルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅ ｕｓ　Ｔ）　ＮＣＴＣ２６６５零：第１図、第２図および第３図で使用した略号 。 Ｔ：「基準菌株（Ｔｙｐｅ　５ｔｒａｉｎ）　Ｊを意味する。 ２００単位の特徴からなるフェノンデータをアペンディックスＣに示した如（計 算し、ｒｎＸｔＪマトリックスの形に記載する。ここで、を列は類似性を基に組 分けすべきｔ種のバクテリア菌株を表し、またｎ行は単位性状である。該バクテ リア菌株の分類学的類似性は相似度係数により評価された（スニース（Ｓｎｅａ ｔｈ）。 Ｐ、　Ｈ，Ａ、およびソカル（Ｓｏｋａｌ）、　Ｒ，え、　Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ 　Ｔａｘｏｎｏａ＋ｙ、上記のもの、ｐｐ、　１１４−１８７）。生物学的分類 のために多（の異なる係数が使用されているが、微生物学ではその内の僅かのも のが通常使用されている。我々は３種の係数の組み合わせ、即ちゴワー、ジャブ カードおよび単純共有度係数の適用（スニース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ。 庄んおよびソカル（Ｓｏｈｌ）、　Ｒ，Ｒ，、１ｂｉｄ、　ｌ）、　１２９およ びそれ以降）を選択した。 これらはしばしば微生物学的データの解析に応泪されており、これらが厳密な分 類を与えることから当業者には広く受入れられている。 これらのコード化したデータを、英国レイチヱスタ大学のＤＢＣＷＡＸコンピュ ータにより、ＴＡＸＰＡＫプログラムパッケージを使用して解析した（サラキン （Ｓａｃｋｉｎ）。 ＫＪ、、分類並びに同定のためのプログラム（Ｐｒｏｇｒａａｎｅｓ　ｆｏｒ　 ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、　Ｍ ｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１９８７．１９．　ｐｐ、 　４５９−４９４　iＲ，Ｒ，コ ルウェル（Ｃｏｌｗｅｌｌ）およびえグリゴロバ（Ｇｒｉｇｏｒｏｖａ）編）。 ＴＡＸＰＡＫ内のＲＴＢＮＳＩＭプログラムを利用して、オプションとしての許 容ネガティブマツチをもつゴワー係数（Ｓｃ　）を用いて、全ての菌株対に対し て相似度マトリックスを作成した。解析の主な手段およびここに提示する議論の 多（の元となる手段として、相似度マトリックスを得るための他の係数よりも上 位のものとして該ゴワー係数を選択した。というのは、これが全ての型の特徴ま たはデータ、即ち二値性状、多値性状（順序ずけられたおよび定性的）並びに定 量的データに適用可能であるからである。 相似度マトリックスのクラスタ解析は、重みを付さない平均結合法（Ｕｎｗｅｉ ｇｈｔｅｄ　Ａｖｅｒａｇｅ　Ｌｉｎｋａｇｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）としても 知られる、算術平均を使用した重みを付さないペアーグループ法（Ｕｎｗｅｉｇ ｈｔｅｄ　ｈｉｒ　Ｇｒｏｕｐ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　Ａｒ１ｔｌｕｎｅｔ ｉｃ　Ａｖｅｒａｇｅｓ：　ＵＰＧＭＡ）アルゴリズムを使用して、ＴＡＸＰＡ ＫのＳＭＡＴＣＬＳＴサブルーチンを実行することにより達成された。 このクラスタ解析の結果がデンドログラムであり、その簡略化されたバージョン を第１図に与える。このデンドログラムはバクテリア菌株間の相似度のレベルを 示している。該デンドログラムはＴＡＸＰＡＫのＤＢＮＤＧＲプログラムを使用 して得られ多値性状（性状１〜５、Ｉ２．１３：アペンディックスＣ）を省略し 、従って１９３単位の性状からなり、かつ二値標記（正−１、負＝＝０）で計算 したこれらのフェノンデータを、シャツカード係数（ＳＪ　Ｘスネース（Ｓｎｅ ａｔｈ）、　Ｐ、Ｌんおよびソカル（Ｓｏｋａｌ）、　Ｒ，Ｒ，、上記文献、　 ９．１３１）および単純共有度係数（ＳｓＭ）（スネース（Ｓｎｅａｔｈ）、　 Ｐ、ｌＬんおよびソカル（Ｓｏｋａｌ）、　Ｒ，Ｒ，、上記文献、　ｐ、　１３ ２）を利用し、ＴＡＸＰＡＫ内のＲＴＢＮＳＩＭプログラムを実行することによ り再解析した。更に２つのデンドログラムがＴＡＸＰＡにのオプションとしての ＵＰＧＭＡを有するＳＭＡＴＣＬＳＴおよｎＥＮＤＧＲサブルーチンを使用して 得られた。これらデンドログラムの簡略化されたｌく−ジョンをそれぞれ第２図 および第３図に与える。 アルカリ性バクテリアの、ゴワー係数およびＷ法に基くクラスタ解析の結果を、 １４種の好アルカリ性種を含む１７種の公知のグラム−陽性ｌ（クチリアと共に 示したものである。 好アルカリ性バクテリアの６種の天然クラスタまたはフェノンが７９％の相似度 レベルにある。これら６種のクラスタはアルカリ湖から単離した２０種の好アル カリバクテリアの内の１５種を含む。描写（ｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ）のレベル に対する７９％の選択は任意的であると思われるかもしれないが、数値的分類学 における通常の実務と一致している（オースチン（Ａｕｓｔｉｎ）、　Ｂ、およ びブリースト（Ｐｒｉｅｓｔ）、　Ｆ、、　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ 　Ｔａｘｏｎｏｍｙ、　１９８６．　ｐ、　３７．　ファンノストランドレイン ホルド、英国、ウォーキンガム）。描写を低比率に置くことは、定義がデータに より支持されない明らかに関連性の無い生物体の群をも包含することになろう。 ７９％のレベルにおいて、該クラスタの内の３個は、新たに単離された菌株の１ ３種を代表する新規な好アルカリ性バクテリアを包含し、これらは新たな分類群 を表す可能性がある。 予想されるように、このクラスタ解析は該コントロールｌ（チルス種を３種の別 々のクラスタに紙分けし、数組は本発明の新規な好アルカリ性）（クチリアとは 区別される。これらの結果は、フリッツエ（Ｆｒｉｔｚｅ）、　Ｄ、等（Ｉｎｔ ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔ ｅｒｉｏｌｏｇｙ、　１９９０．４０．　ｐｐ、　９２−９７）により報告され た好アルカリ性バチルス菌株の分類学的解析と略一致する。公知の生物体の何れ も、新規なグラム−陽性好アルカリ性バクテリアの３つのクラスタの何れに対し ても有意には関連していない。これらクラスタ間の明らかな識別が、最小判別テ スト（以下を参照のこと）の概念および化学分類情報（以下を参照のこと）を使 用することにより可能である。 このレベルでのクラスタ化の有意性は、ＴＥＳＴＤＥＮプログラムの結果により 支持される。このプログラムは、二乗ユークリッド距離、あるいはその測度とし ての補足物（ｃｏｍｐｌｅａｉｅｎｔ　）により、ＵＰＧＭＡにより得られたデ ンドログラムにおけるクラスタのあらゆる二叉状対（ｄｉｃｈｏｔｏｍｏｕｓ　 ｐａｉｒｓ）の有意性をテストするものであるが、ここでは該クラスタは超球で あると仮定している。臨界的重なりは０．２５％に設定した。表５から理解され るであろうように、該クラスタの分離性は高度に有意である。 １　２　Ｐ＝０．９９ ２　３　０、９９＜Ｐｒｏ、　９５ ３　４÷畦２　Ｐ＝０．９９ ５　６　Ｐ＝０．９９ コ７エネテイツク相関は０．８０４であり、これは該デンドログラムが真の分類 上の構造を表していることに関する高い信頼性を表す（スネース（Ｓｎｅａｔｈ ）、　Ｐ、Ｌんおよびソカル（Ｓｏｋａｌ）、　Ｒ，Ｒ，、上記文献、　ｐｐ、 　２７７−２８０．３０４）、更に、シャツコード係数（第２図および以下の記 載）および単純共有度係数（第３図および以下の記載）を使用して得たクラスタ パターンはここで誘導した結論を支持する。 る。しかし、新規な好アルカリ性菌株の５種は該主クラスタの範囲外にある。そ の２種、ｄ２およびｗＥ３は新規好アルカリ性バクテリアの主な群を表すクラス タ群の周辺部で関連している。菌株７９ＬＮ、　４およびその関連対７２Ｃ，４ および８０ＬＮ、　４も非クラスタ性（ｎｏｎ−ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）である 。これらの相関関係の定義は更に一層難しいが、恐らく現時点では記載されてい ない新たなフェノンを表す。 ＳＪ／ＵＰＧＭＡおよびＳ、１刈に鵬法Ｓ、係数はＳ。係数におけるフェノンを 検出するのに使用できるので該Ｓｃ係数に対する有用な補佐役である。これは有 力で本質的な定性的データに不当な重みを付したためのネガティブマツチまたは 歪に基いている。結局、該ＳＪ係数は初めにＳｃ係数の使用により規定したクラ スタの妥当性を確認するのに有用である。該シャツコード係数は、特に生化学的 に非反応性の生物体を比較するのに有用である（オースチン（Ａｕｓｔｉｎ）、 　Ｂ、およびブリースト（Ｐｒｉｅｓｔ）、　Ｆ、Ｇ、上記文献。 ｐ、　３７）。ネガティブ性状状態の適合の許容性に関連する疑問があるかもし れない（スネース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ、Ｈ，んおよびソカル（Ｓｏｋａｌ） 、　ＬＬ、上記文献、　ｐ、　１３１）。 この場合には、代わりに単純共有度係数が広く利用されている。 概して、該Ｓ、／ＵＰＧＭＡ法により得られるクラスタの全て（特に、該新規な バクテリアのクラスタ）はＳＪ／ＵＰＧＭＡ法（コフエネティック相関＋　０． ７９５；第２図）およびＳＳＭ／ＵＰＧＭＡ法（コフェネティック相関：　０． ８１４；第３図）により作成されたデンドログラム中に再度見出される。これら 変換の主な効果は、単一の大きなりう化するのに役立つ。 ＤＮＡ、リポソームＲＮＡ、タンパク、細胞壁および膜の分析は、例えば分類学 的関係に有益な識見を与えることができ、分類のためのあるいは微生物の該分類 の立証のための別の手段として利用できる（グツドフェロ−（Ｇｏｏｄｆｅｌｌ ｏｗ）、　ｌ＋Ｌおよびミニキン（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）、　Ｄ、Ｅ、、　Ｃｈｅ ａ＋１ｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　５ｙｓｔｅａｓａ ｔｉモ刀A　１９８ ５、１）＋７．１−１５．グツドフェロ−およびミニキン編、アカデミツクプレ ス、ロンドンおよびオーランド、ＰＬ）。しかし、与えられた分類に対してどの 型の化学的情報が最も有益かを先験的に決定することが常に可能であるわけでは ない。両極性脂質、主な呼吸系キノン類、バクテリア膜中に局在する脂肪酸類お よｎＮＡ塩基組成全ては、種々のバクテリアの分類のための分類学的有意性を有 する（レチェバリア（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）、　Ｈ，およびレチェバリア、 　Ｍ、Ｐ、、　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｌｉｐｉｄｓ、　１９８８゜Ｖｏｌ、　１ ．　ｐｐ、　８６９−９０２．ラドレッジ（Ｒａｔｌｅｄｇｅ）、　Ｃ，および ウィルキンソン（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ）、　Ｓ、Ｇ、編、アカデミツクプレス、 ロンドンおよびサンジエゴ、ＣＡ）。 極性脂質類 バクテリアからの極性脂質の抽出およびその二次元薄層クロマトグラフィー（２ Ｄ一孔Ｃ）による分析は特性決定値のパターンを与える可能性がある。静止剤に ある細胞をｌ：ｌ（ｖ／ｖ）　ＣＨＣｌ５：ＣＨｓＯＨで抽出し、ロス（Ｒｏｓ ｓ）、　Ｈ，ＮＪＬ、グランド（Ｇｒａｎｔ）。 Ｗ、　Ｄ、およびハリス（Ｈａｒｒｉｓ）、　Ｊ、Ｂ、、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　 Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｓｙｓｔｅｍ■ ｉｃｓ、グツドフェロ−およびミニキン編、アカデミツクプレス、ロンドンおよ びオーランド、ＰＬ、　１９８５．　ｐｐ、　２８９−３００により記載された ようにして２Ｄ−ＴＬＣにより調べた。クロマトグラム上に存在する脂質の型を 種々の識別染色を利用して可視化した（ロス（Ｒｏｓｓ）、　）ＬＮＪＬ等の上 記文献、　９．２９１およびトリンコン（Ｔｒｉｎｃｏｎｅ）。 ん等、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 　１９９０．１３６．　ｐｐ、　２３２７−２３３１）。 グラム−陽性好アルカリ性細菌の代表的な菌株に関するこの分析の結果を表６に 示す。該結果は任意の１種のクラスタを識別する極性脂質パターンを全（示さな かったが、ホスファチジルエタノールアミンが多くのバチルス種に特徴的なリン 脂質であることを立証した（オレアリー（０’　Ｌｅａｒｙ　）、　Ｗ、ＰＬお よびウィルキンソンｆｆ１ｌｋｉｎｓｏｎ）、　Ｓ、Ｇ、、　Ｍｉｃｒｏｂｉａ ｌ　Ｌｉｐｉｄｓ、上記のもの、　Ｖｏｌ、　ｌ、　Ｉ）、　１５７）、しかし 、驚くべきことに我々は該バクテリアの多くのものが１種または数種の糖脂質を 含むことを見出した。従来、糖脂質が好アルカリ性バクテリア中に存在すること は立証されていなかった（クルルビッヒ（Ｋｒｕｌｗｉｃｈ）、　Ｔ、ん等、　 ＣＲＣＣｒ１ｔｉｃａｌ　Ｒロマトグラフィーによって判定したところ、全ての 糖脂質−含有菌株は、ソーダ湖から単離したグラム−陰性好アルカリ細菌中にも 見出された１！Ｉ脂質をも含有していた。他の糖脂質の幾つかは、グラム−陽性 好アルカリ性細菌の幾つかのクラスタに共通であるように思われる。従って、該 糖脂質の化学的構造が、一般的に多（の偏性好アルカリ性細菌に対する、および 特に特異的群に対する化学分類マーカーである可能性がある。 ２　６９Ｂ、　４　＋　３＋ ＩＮＩＱ　＋　＋　＋　＋　＋ ２３１１　４＋＋　＋　３＋ ５　６６Ｂ、４　＋　＋　＋　＋　＋　＋８０ＬＮ、４　＋　＋　＋　４　３＋ （ＰＧ）：ホスファチジルグリセロール（ＤＰＧ）ニジホスファチジルグリセロ ール（ＰＧＰ）：ホスファチジルグリセロホスフェート（ＰＩ）：ホスファチジ ルイノシトール（ＰＥ）：ホスファチジルエタノールアミンにンヒドリン反応正 のアミノ脂質）（ＧＬ）：未確認糖脂質、α−ナフトール反応正（カラム中の数 カｃｒ１．ｃプレート上の正のスポットの数を与える）。 イソプレノイドキノン類 イソプレノイドまたは呼吸系キノン類は、好気性バクテリアの形質膜の特徴的な 成分である。ノナキノン類およびユビキノン類の２種が存在する。分類学上の基 準としてのイソプレノイドキノン類の値はそのポリプレニル側鎖の長さおよび飽 和度の変動にある（コリンズ（Ｃｏｆｆｉｎｓ）、　ＬＤ、およびジョーンズ（ Ｊｏｎｅｓ）、　Ｄ。 上記文献、　１９８１）。 乾燥された。静止剤にあるバクテリア細胞を、コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）、　 ＬＤ、にょる改良法（上記文献、　Ｃｈｅｍｊｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　 ｈｅｔｅｒｉａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｔｉｃｓ、　ｐｐ、　２６７−２８４）を利用 して、ｌ：ｌ　（ｖ／ｖ）　ＣＨＣｂ：ＣＨｓＯＨ”ｔ’５０℃ニｒ１６時間抽 出した。これらキノンをコリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）、　ＩＬＤ、により記載さ れた（上記文献）逆相薄層クロマトグラフィーにより調べた。 グラム−陽性好アルカリ性細菌の代表的な菌株のキノン分析の結果を表７に示す 。しかし、該クラスタの区分に該キノン組成が有益であることを示唆する証拠は 何等見られなかった。但し、該データはこれら菌株がグラム−陽性であることの 確認のためには役立っている。更に、好アルカリ性菌株を包含するバチルス種の 主なイソプレノイドグ（ｉｓｏｐｒｅｎｏｌｏｇｕｅ）としてのＭＫ−７も確認 された（レシエバリｚ（Ｌｅｃｈｅｖａｌｔｅｒ）、　Ｈ，およびレシェバリエ （Ｌｅｅｈｅｖａｌｉｅｒ）、ｊｔＰ、の上記文献、ｐ、８８１）。本発明の多 くの新規なグラム−陽性好アルカリ性バクテリアは、明確なパターンを示さない が、短い分子、特にＭＫ−４およｘ−６を含む。 表７二グラムー陽性好アルカリ性バクテリアのメナキノン成分１　３Ｂ、１ｃＴ ３４ ７１Ｇ、４　４　５　５Ｈｘ　６ ８１ＬＮ、　＋　４　７ ６０８．４　３　４　ｇ 宵Ｅ４　４　５ ２　６９Ｂ、４　４　６７　９ ｗＮ１０　６ ｗＮｌ２　６　７ ２３Ｍ、１　４ １４ＬＮ、ｌ　４　６　７　８８Ｈ！９５　６６Ｂ、４　４　６７ ６ＲＳ７　４５　７８ 脂肪酸 脂肪酸プロフィールの分析は、バクテリアの分類、特にグラム−陽性バクテリア およびアクチノマイセーテス（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）との間の属および 種の振り分けにおいて多大な影響を与えた（クロッペンシュチット０［ｒｏｐｌ ）ｅｎｓｔｅｄｔ）、　Ｒ，ＩｉＬ、　Ｃｈ団山２１　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　 Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｔｉｃｓ、　Ｍ、グツドフェロ−（Ｇｏｏｄ ｆｅＪ　Ｊｏｙ）および１Ｅ、ミニキン（Ｍｉｎｎｉｎｋｉｎ）編、アカデミツ クプレス、ロンドンおよびオルランド、ＦＬ、　１９８５．　ｐｐ、　１７３− １９９ルシエバリ！（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）、　Ｌおよびレシェバリエ（Ｌ ｅｃｈｅｖａｌ　１ｅｒ）、ＮＬ　Ｐ、の上記文献）。 凍結乾燥した静止剤の細胞（２００−３００■）を７５℃にて１６時間トルエン ／メタノール／濃硫酸（２，５ｍｌ／２．５ｍ１１０．２ｍｌ　）で抽出し、冷 却した後肢脂質をヘキサン中に分配させた（１ｍｌで２回）。残留酸をＮＨ，Ｈ ＣＯ３で除去した。脂質抽出物を０．を含まないＮ、雰囲気下で濃縮し、３００ μｌのへキサン中に溶解し、分取シリカゲルプレート（メルク（Ｍｅｒｃｋ）　 Ｆ２５４．　タイプ（Ｔｙｐｅ）　Ｔ）に適用した。このプレートをヘキサン／ ジエチルエーテル（８５：１５　（ｖ／ｖ））中で展開させ、脂肪酸メチルエス テルを掻き取り、ヘキサンで抽出し、０．を含まないＮ、気流下で濃縮した。 該脂肪酸メチルエステルをヘプタンに溶解し、火炎イオン化検出器を備えたパラ カード（Ｐａｃｋａｒｄ）モデル４３９クロマトグラフを使用したガスクロマト グラフィーにより分析した。これら試料をサンプル分配器により分割し２本のカ ラム、即ちＣＰ−５ｒＬ−８８（クロムパック（Ｃｔ＋ｒｏｇｙａｃｋＸ長さ５ −：内径０．２２ｍｎ））およびウルトラ（Ｕｌｔｒａ）−２（ヒユーレットパ ラカード（Ｈｅｗｌｅｔｔ　ＰａｃｋａｒｄＸ長さ５０ｍ；内径０．２２１１！ ｌ））で同時に分析した。キャリヤガスは窒素であり、注入温度は１２０℃であ り、温度勾配２．５℃／分で２４０℃まで昇温し、２４０℃にて３０分間等温状 態においた。脂肪酸メチルエステルを、既知の標準混合物に照らして割当てた。 幾つかのピークの同一性が、ＣＰ−３ＩＬ−８８カラム（長さ５０ｍ；内径０． ２２ｆｆｌ）を備えたカルｏエルバ（Ｃａｒｌｏ　Ｅｒｂａ）　［ＧＣ５１６０ メガ（Ｍｅｇａ）シリーズガスクロマトグラフを使用したガスクロマトグラフィ ー／マススペクトル分析により確認された。該分析において、キャリヤガスとし てはヘリウムを使用し、試料をＡＭＤ　４０３マススペクトル分析機に直接注入 した。 各グラムー陽性好アルカリ性バクテリアの脂肪酸組成を表８に示す。表９は個々 のクラスタの固有の脂肪酸プロフィールを示す。クラスタ５および６は、分枝Ｃ １５：０およびＣ１７：０脂肪酸優越性をもつバチルス種に典型的なものである 。数値的分類により示されたクラスタ４の均一性にもかかわらず、脂肪酸プロフ ィールは明らかにバクテリアの２種の亜属（４Ａおよび４Ｂという）がこのクラ スタ内に存在することが立証された。これらのプロフィールは、アクチノマイセ ーテスのコリネ型−マイコバクテリウムーノカルディオ型（Ｃｏｒｙｎｅｆｏｎ ｏ−Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ−Ｎｏｅａｒｄｉｏｆｏｒｍ：　ＣＭＮ）群の 幾つかに対して典型的であり（ペナン（Ｂｅｎｎａｎ）、　Ｐ、Ｊ、、　Ｍｉｃ ｒｏｂｉａｌ　Ｌｉｐｉｄｓ、上記のもの、　ｐｐ、　２０３−２９８）、これ は該微生物の特徴的な細胞挙動およびジヒドロノナキノン類の出現により支持さ れる。更に、多（のアクチノマイセーテスの鮮明な黄色は、しばしば光により誘 発されるカロチノイド色素の蓄積により生ずる。これらカロチノイドの多くは固 有のものであり、分類学的に重要である。これら群の更なる化学分類学的マーカ ーは分岐Ｃ１９：０脂肪酸を含み、これは！０−メチルオクタデカン酸（ラベル クロステアリン酸）であり、バクテリアの師群の分類における重要な基準となる 。分岐、不飽和脂肪酸もこれらのバクテリア中に見出された。クラスタ３および ４中に見出された分岐Ｃ２０：０脂肪酸は幾つかのグラム−陽性球菌の成分であ る。コリネ型群のコントロールバクテリも厳密には関連しない。しかし、バクテ リアのＣＭＮの組の公知の偏性好アルカリ性細菌はあまり特徴ずけされていない が、本発明の新規なグラム−陽性アルカリ性細菌とは明らかに異なっている。 ＣＩ２：０　０．４　０．４　１．０　０．９　０．５　ｔ　Ｏ，２０，２ＣＩ ４：０　３．４　３．２　５．９　６．０　４．３　１．５５．３　１．８Ｃ１ ４：０イソ　０．７　−　−　−　０．７　０．２　−　０．５Ｃ１５：Ｏｏ、 ｓ　Ｏ，２０，４０，５０，４１，１０，４０，２ＣＩ５：０イソ　３．２　０ ．８　０．３　０．３　１．９　７．６　０．２　１．４Ｃ１５：０アンチイソ ２７．６　１５．２　０．６　０．１　８．２　１？、５　０．１　１１．２Ｃ １６：０　１７．６　２１．２　２８．１　３０．６２６．２２２．９３０．８ 　９．８Ｃ１６：０イソ５．１　０．５　０．１　−　０．７　１．１　−１３ ．０Ｃ１６：ｌ　−−−−−＋　−− Ｃ１６：ｌｂｒ　−−−−−−−１，８Ｃ１７：０　０．４　０．４　０．７　 ０．７　０．６　１．０　Ｇ、６　３．８Ｃ１７：０イ’／　１．４　０．６　 −　−　０．３　０．７　−　１．６Ｃ１７：０７ンテイソ１４．２　１３．４ 　−　−　１．２　４．７　−４０．９ＣＩ７：ｌ　−−”−”−−−− Ｃ１８：０　１２．９　２２．２　３１．１　３１．２　２８．０　２８．５３ ０．５　６．７Ｃ１８：１ｃｉｓ／１ｒａｎｓ　６．６　４．４　１３．９　６ ．３　４．９　５．２　６．６　２．７Ｃ１８：２　１．５　０．９　６．０　 ２．８　１．５°　２．３”　３．２”　１．１”未知　０．５ Ｃ１９：Ｏｂｒ　−−−−−−−− Ｃ２０：０　３．１　９．８　７．７　１Ｎ、９　１２．１　０．８　１２．７ 　１．７Ｃ２２：Ｏｔ、ｓ　６．２　４．２　＆２　８．２　５．１　８．８　 ０．９Ｃ２３：０　−　−　−　−−−−０．２Ｃ２４：Ｏｔ　Ｏ，４ｔ　Ｏ， ６０，５−０，６ｔｔ・痕跡；　零：　Ｃ１８：２および／またはまたはｂ「ｂ ｒ二分技；＋：全脂肪酸の％として ＣＩ２：ＯＯ，４０，７０，５ｔ　Ｏ，３０，５１，２１，０ＣＩ４：０　３． ５　５．１　３．１　２．９　３．９　３．６　７．４　６．９Ｃ１４：０イソ 　−　−１，３０，９０，３０，２０，１−Ｃ１５：０　０．９　０．４　０． ６　θ、６　０．５　０．３　０．５　０．４Ｃ１５：０イソ　−０，２１３， １１３，２１，！１．９　３．Ｉ　Ｑ、５　０．４Ｃ１５：０アンチイソ　−０ ，１２２，４１３，１６，７１０，１３，５１，８ＣＩ６・０　２９．４　２８ ．４　１５．１３　２２．３　２５．５　２３．０　３０．６　３０．７Ｃ１６ ：０イソ　−−６，４６、ｌ　１．４　０．４　１．０　０．７Ｃ１７：０　３ ．３　０．８　０．７　０．６　０．４　０．５　０．６　０．６Ｃ１７：０イ ソ　−　−３，４８，１６，３１，１−−Ｃ１７：０アンチイソ　−　−１０， ４１２，３４、ｌ　５．４　３．１　１．４Ｃ１７：１　２．６　−　−０．２ 　−　−　−　−Ｃ１８コ０１８．７３０．１１Ｎ、３１０．７１６．８２８． ５２５．０２８．４Ｃ１８：１ｃｉｓ／１ｒａｎｓ　１９．９　７．６　５．５ 　１．９　４．１　４．７　９．３　１１．７Ｃ１８：２　０．９°　４．１” 　１．４　０．３　０．５　０．９　５．９°　５．０゜未知　０・２ Ｃ１９：Ｏｂｒ　３．２　０．４　−　−　−　−　−　−Ｃ２０：０　１？、 １　１２．５　２．７　４．１　５Ｊ　１０．８　７．４　９．ＩＣ２２：０　 ５．７　９．０　１．６　２．７　３．８　６．８　３．９　５．５Ｇ２３：０ 　−　−　−−０．３−　−　−Ｃ２４：０　０．３　０．６　ｔ　Ｏ，２０， ２０，３−−ｔ＝痕跡；　ネ：　Ｃ１８：２および／またはＣ２０：Ｏｂｒｂ「 ：分枝；＋：全脂肪酸の％として 支配的脂肪酸　Ｃ１５：０アンチイソ　Ｃ１６：ＯＣＩ６：ＯＣ１５：０アンチ イソ（〉１０％）　Ｃ１６：ＯＣ１８：ＯＣ１８：ＯＣ１６：０Ｃ１７二〇アン チイソ　Ｃ２０：ＯＣ１７：０アンチイソＣ１８：０ 叶飽和　４０−６５％　＋１Ｏ−９０Ｘ　６Ｏ−９ｎ　”＝、２５Ｋｎ−不飽和 　＜　１０％　１０−２０％　＜１０％　＃５％イソ　ｌ−１０！％　＜　１％ 　＜　１０％　＃Ｉ５％アンチイソ３０−４０％　〈１％　０−２０％　＃５０ ％余分技　３０−５０％　〈１％　０−３０％　＃７０％偶数Ｃ原子数　５Ｏ− ７（１％　＞　９５％　７０−９９％　＃４０％奇数Ｃ原子数　３０−５０％　 〈５％　１−３０％　＃６０％付ＦＩｖ−カー　Ｃ２０：Ｏｂｒ　Ｃ１６：１　 ｂｒｂｒ：分枝　Ｃ２０：Ｏｂｒ 支配的脂Ｈａ　Ｃ１６：ＯＣＩ５：Ｏイア　ＣＩ５：Ｏｂｒ（〉１０％）　Ｃ１ ８：ＯＣ１５：０７ンテイソＣ１６：０Ｃ１６：ＯＣ１８：０ Ｃ１７：０アンチイソ Ｃ１８：Ｏ ｎ−飽和　７０−９０％　３５−４５％　５５−７５％ｎ−不飽和　１０−３０ ！％　＜　１０！％　＝　５％イソ　＜　１％　２０−３０！％　５−３０％ア ンチイソ＜　１％　２５−３５％　１０−１５％全分技　〈５％　５０−６０３ 　２０−４０％偶数Ｃ原子数　＞９０％　＝ｓｏ％　６０−８０％奇数Ｃ原子数 　＜　１０ｙｉ’＝；５０％　２０−４０％付随マーカー　Ｃ１９：Ｏｂｒ Ｃ２０：Ｏｂｒ ｂｒ：分技 ＤＮＡ塩基組、成 組成は生物体の成長条件により影響されず、また適当な解析により該生物体の分 類学的位置を確認し、かつその誤りを明らかにすることができる。染色体ＤＮＡ は個々の菌株の塩基組成（Ｇ＋Ｃｍｏｌｅ％）の決定により解析できる。グアニ ン＋シトシン（Ｇ＋Ｃｍｏｌｅ％）組成は任意の与えられた生物体について一定 である。密接に関連した生物体は類似のＧ＋Ｃ組成を有する。しかし、Ｇ＋Ｃの 結果は独立の分類学的データの内容の範囲内で解釈されねばならない。というの は、異なる生物体由来のＤＮＡ試料の同様なＧ＋Ｃｌｌｌｏｌｅ％それ自体は生 物学的な関連性を意味しないからである。 培彫−中で指数増殖期まで成長させた細胞から、クロロホルム：フェノール法に より抽出し、エタノールで沈殿させた。塩基組成を熱変性法により（マーマー（ Ｍａｒｍａｒ）、　Ｊ、およびトーチイー（Ｄｏｔｙ）、　Ｐ、、　Ｊ、　Ｍａ ｔ、　Ｂｉｏｌ、、　１９６２．３．　ｐｐ、　５８５−５９５）、プログラム 化した温度で、フィリップス（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ）％デルＰｖ８７６４分光光度 計で測定した。第二の方法は、該ＤＮＡをヌクレアー−ｔＦＰｌおよびアルカリ ホスファターゼで処理した後、ベブクマンウルトラスフエア（Ｂｅｃｋｍａｎ　 ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　００Ｓカラムおよび溶離液として０．０４Ｍリン酸 二水素カリウム＋アセトニトリル（９＋ｌ。 ｖ／ｖ　）を使用したベブクマンシステムゴールド（Ｂｅｃｋｍａｎ　ｓｙｓｔ ｅｍ　ｇｏｌｄ）上でのＨＰＬＣ分析を含んでいた。 これら分析の結果を表ＩＯに示した。これらの結果は、数値的分類法による分析 により定義されたバクテリアの組分けと一致した。新規な好アルカリ性バクテリ ア（クラスタ１．３および４）に対するＧ＋Ｃｍｏｌｅ％の値は、２９％（３４ ，１−６３，５ｍｏｌｅ％）の範囲をカバーする。しかし、これらのクラスタ内 において、変動は１５ｍｏｌｅ％以下であり、このことはあるクラスタ内の菌株 が該クラスタ外の菌株に対するよりも一層密接に相互に関連していることを確証 している。更に、高４４＋Ｃ含有率（５２，３−６３，５ｍｏｌｅ％）をもつク ラスタ！および４内の新規菌株は、クラスタ２（３５゜０−３９．６ａ：ｌｋｅ ％　）、５　（３６，１−４２，８ｅｏｌｅ％）および６　（３６，５−４３， ６ｍｏｌｅ％）内の公知の／＜％／戟^ ％）の新規菌株は、明らかに池の化学分類学的データによればバチルスとは区別 される。 １　３Ｂ、１ｃＴ５２．３ ｗＢ４　６３．１ ２　Ｒ３ＩＩｃＴ３５．０　３５．２ Ｒ３１４３９，６ Ｒ３１３３７，２ ３ｗＢｌ　４９．３ ｗＮ１０　３４．１ ｗＮｌ２　４０．１　３６．６ ｗ１ｌｌ１６ｅＴ４６．０　４０．２ ４　２３隨１　６３．０ １５ＬＮ、　ｌ”　６３．５ ５　６６Ｂ、４　４２．１ Ｒ３ＩＯｃ？３９．５ ＲＳ１７　４２．５ ＡＢ４９　４２．１　４２．８ Ａ８４２　３６．１ ６　Ｒ３７４３，２ ＲＳ８　ｃＴ３９．９　４３．６ Ｒ５Ｉ５　４３．５ ＲＳ１６　３６．５ １）フリッツエ（Ｆｒｉｔｘｅ）、　Ｄ、、フロスドルフ（Ｆｌｏｓｓｄｏｒｆ ）、　Ｄ、およびクラウス（Ｃ１ａｕｓ）、　Ｄ、、　ｒｒ＋ｔ、　Ｊ、　Ｓｙ ｓｔｅｍｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　１９９（１，４０，ｐｐ、　９ ２−９７゜代表的菌株の決定 Ｓｃ／ＩＪＰＧＭＡ法により得られた各個々のクラスタのセントロイドをＴＡＸ ＰＡＸ中のＲＧＲＯＵＰＳプログラムを使用して計算した。起上間に投影された 実際の生物体を表す点のクラスタのセントロイドは仮想的平均生物体を表す。こ のセントロイドはたとえあったにせよ、真の生物体を表すことは稀である。従っ て、該クラスタのセントロイドからの該クラスタの各構成員のユークリッド距離 を、どの生物体がこの仮想的平均生物体に最も近接するかを設定するために計算 した。このセントロイドに最も近接する生物体を「セントロタイプ生物体（ｃｅ ｎｔｒｏｔｙｐｅ　ｏｒｇａｎｉｓｍ）」と呼ぶ（肩付き符号℃ｒで示した）。 このセントロタイプ生物体は、各特定のクラスタの本質的かつ識別性の特徴を最 も厳密に表す「基準菌株」であると考えることができる。このセントロタイプ菌 株を表１１に記載した。 表１１＝セントロタイプ菌株 クラ　クラス　セントロイドから　標準　セントロイプスタ　タ中の　の菌株の 平均ユ　菌　セントロイドからの番号　菌株数　−クリッド距離　偏差　株　ユ ークリッド距離１　５　６．２４　０．６５　３Ｂ、１　４．４５２　５　６． ０２　０．２３　Ｒ３ＩＩ　４．５３３　４　６．８１　０．９６　胃Ｎ１６　 ４．２６４　４　６．４０　０．５７　１５ＬＮ、１　４．４０５　６　６．４ ４　０．２７　Ｒ５ｌ０　５．０１６　４　６．５０　０．７２　ＲＳ８　４． ０にれらの生物体を、以前に公知かつ記載された全ての他のバクテリアから区別 し得るように、新規なバクテリアを包含するクラスタからのセントロタイプ生物 体の各々を説明する。更に、各クラスタを定義するための識別テストの最小数を 算出したが、その結果として、これらの新規なバクテリアを包含するクラスタが 相互に、かつ全ての他の公知のバクテリアから容易に区別し得ることが理解でき よう。 好気性、グラム−陽性球菌状バクテリアである。その細胞は殆ど球状で、寸法０ 、５−１．５μｍで、通常は対として、場合によっては４個組となり、細胞６個 分までの短い鎖を形成し、もしくは不規則なりラスタ状態にある。 運動性は観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐＨ約ｌＯにおいて最適に成長する。 アルカリ性寒天（培地Ｍ上で、不透明な、マット状の橙色のコロニーを形成する 。この発色は光により影響され、クリーム色から始まって、黄色を介して橙色を 発現する。該コロニーは円形で、凸状の金縁型で、径は１〜２Ｉである。 アルカリブロス（培地Ａ）中で成育は緩慢（３７℃）であり、均一に混濁し、沈 殿物の形成を伴うが、表面皮膜の形成はない。 最適成育温度は約３０℃である。１５℃および４０℃にて緩慢に成育する。４５ ℃では成育しない。 ＫＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト：　負 オキシダーゼ反応性：　負 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣ１耐性：　０−１２％；　１５％において成育せずゼラチン加水分解：　 正 澱粉の加水分解：　弱いが止 車な極性脂質 成分：ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファ チジルグリセロールホスフェート。３種の糖脂質（α−ナフトール　正）成分が 存在する。 主なメナキノンｌｉ　：　ＭＫ−３，ＭＫ−４主な脂肪酸類：　Ｃ１５：０アン チイソ、　Ｃ１６：０．　Ｃ１７：０アンチイソ、　Ｃ１ｇ：０Ｇ＋Ｃ：　５２ ．３１ｌｏｌｅ％（ＨＰＬＣ）化学有機栄養菌。複合基質、例えば酵母抽出液お よびペプトン類上で成育。単純な糖および有機酸上での成育は極めて制限される 。グルコース、アセテート、幾つかのアミノ酸およびピリミジンヌクレオチド類 により成長が刺激される。 な桿状で、１．５−２．５　ｕ！ｌＸ０．７５−１．０μｍ＋で、単独でまたは 対として、ｔ、ｉｆｔ、Ｉｆ細胞４（［分までの短い鎖状態で存在する。 胞子は観測されなかった。運動性は観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐＨ８以下において成育しない。 アルカリ性寒天（培地Ｉ上で滑らかなりリーム−黄色のコロニーを形成する。 該コロニーは１約ｔｏｎの小さな円形で、全線型で凸状である。 アルカリブロス（培地Ａ）中で成育は緩慢（３７℃）であり、均一に混濁し、沈 殿物を形成するが、表面皮膜の形成はない。 ２０−４０℃でよく成育する。１０℃にて緩慢に成育し、４５℃では成育しなＬ ｌｏＫＯＩ（テスト　負 アミノペプチダーゼテスト：　負 オキシダーゼ反応性：　負 カタラーゼ反応性：　負 ＮａＣ１耐性：　０−１０％ ゼラチン加水分解：　正 澱粉の加水分解：　正 主な極性脂質 成分：ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファ チジルグリセロールホスフェート、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジ ルエタノールアミン。 主なノナキノン類：ＭＫ−４，ＭＫ−６，ＭＫ−１１主な脂肪酸類：Ｃ１６：Ｏ ，Ｃ１８：０．　Ｃ２０：０　（偶数炭素原子数の脂肪酸含有率〉９５％、分岐 脂肪酸含有率く１％） Ｇ＋Ｃ：　４（１，２ｍｏｌｅ！％（Ｔｙ　）−４６，０ＡＬＥＳ　（ＨＰＬＣ ）化学有機栄養菌。複合基質、例えば酵母抽出液、ある範囲の糖、アミノ酸およ び有機酸上で成育。 菌株１５ＬＮ、　ＩＣＴ（クラスタ４）好気性、グラム−陽性バクテリアである 。その細胞は初め不規則な球状または細長型で、しばしばウェッジ型で、１．５ −２．０μｍ　Ｘｏ、７５−１μＩであるが、成長して短く、厚く僅かに湾曲し た桿状（ｌ−３μｍ　Ｘｏ、５−１μｍ）となる。細胞はしばしば対として出現 する。この特徴的な細胞分割の折れ曲がった形状のために、この細胞はしはしＩ ｆｖ−字型を形成するある角で見出され、あるいはパリセード（ｐａｌｌｉｓａ ｄｅ）の外観をもつ細胞のクラスタとして見出される。 胞子は観測されなかった。運動性は観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐ）１７．５以下において成育せず、最適ｐＨ範 囲は約９〜ｌＯである。 アルカリ性寒天（培地Ｍ上で滑らかなりリーム−鮮明に着色した滑らかな輝きの あるコロニーを形成する。該コロニーは初めの橙色から赤色となる。色の発現は 光により影響される。該コロニーは円形で、凸状全線型で、不透明で、径１〜２ 膿を有する。 アルカリブロス（培地Ａ）中で成育は緩慢乃至僅か（３７℃）であり、凝集性で あり、沈殿物および表面リングまたは皮膜を形成する。 ２０−４０℃でよく成育する。１０℃および４５℃にて緩慢に成育し、５０℃で は成育しない。 にＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト：　負 オキシダーゼ反応性：　負 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣｌ耐性：Ｏ−８％ ゼラチン加水分解：　負 澱粉の加水分解：　正 主な極性脂質 成分：ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファ チジルグリセロールホスフェート、ホスファチジルイノシトール。４種の糖脂質 （α−ナフトール　正）成分が存在。 主なノナキノン類：ＭＫ−５，ＭＫ−６，ＭＫ−７，ＭＫ−８（Ｈ，）主な脂肪 酸類・Ｃ１６：０．　Ｃ１８：０．　Ｃ２０：０　（偶数炭素原子数の脂肪酸含 有率〉９５％、分岐脂肪酸含有率〈１％） Ｇ＋Ｃ：　６３．５　ＩＤｏｌｅ！％　（ＨＰＬＣ）化学有機栄養菌。複合基質 、例えば酵母抽出液およびペプトン上で成育。単純な機上での成育は極めて制限 される。アミノ酸および脂肪酸により成育が刺激される。 非−クラスタ菌株 ここに定義したクラスタに含まれない菌株も、以前に知られておらず、かつ文献 未載の新規なバクテリアである。これらの菌株、即ちｄ２、ｗＢ３．７２Ｃ，４ ，７９ＬＮ、　４および８０ＬＮ、　４とコード化した菌株は好アルカリ性バク テリアの稀な変種を表す可能性がある。これら菌株の幾つか、例えばｖＩＢ２お よびｗＢ３は、ここで定義した密接に関連する（かつ起上閣内で近接して配置さ れた）クラスタ同志の間に入る中間的形態を表す可能性がある。他の菌株、７２ Ｃ，４，７９ＬＮ、４および８０ＬＮ、　４は現時点では定義されていない新規 な属または種を表すバクテリアのクラスタの構成員であろう。これらの生物体を 以前に公知カリ記載された全ての他のバクテリアから区別し得るように、これら の「非−クラスタ」菌株を説明する。 菌−Ｅ２ 好気性、グラム−陽性バクテリアである。その細胞は不規則な、主として卵形の 球状細胞で、ｌ−２μａ＋Ｘ０．５−１μ麿で、あるいは極短い桿状で場合によ り対として、あるいは僅かに湾曲した短い桿状の細胞である。細胞分割のこの特 徴的な折れ曲がった形状のために、該細胞はしばしくａ−字型を形成する角度を もつ状態で見出される。 胞子は観測されなかった。運動性も観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐＨ８以下において成育しない。 アルカリ性寒天（培地υ上で、不透明な、橙色の点状のもしくは円形のコロニー を形成し、これは凸状またはドーム状の盛り上がり部および金縁を有し、径は１ ｆｆｌｌまでである。 アルカリブロス（培地Ａ）中で成育は遅く、僅か乃至中程度（３７℃）であり、 凝集物による濁りがあり、沈殿物および表面リングの形成を伴う。 温度＝３０℃以上で最適成長し、１０℃にて緩慢に成育し、４０℃で成育しない 。 ＫＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト：　負 オキシダーゼ反応性：　負 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣｌ耐性：　０−１０％；　１２Ｘｊ、：おいて成育せずゼラチン加水分解 ：　負 澱粉の加水分解：　負 主な極性脂質 成分：ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファ チジルグリセロールホスフェート、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジ ルエタノールアミン。２種の糖脂質（α−ナフトール　正）成分が存在する。 主なノナキノン類：　ＭＫ−７ 化学有機栄養菌。複合基質、例えば酵母抽出液、ペプトン類および炭水化物（デ キストリン）上で成育。種々の糖、有機−１脂肪−およびアミノ−酸により成長 が刺激される。 ＷＮｆｈｔＥ２はクラスタ４に関連する中間体形状であると思われる。 かに湾曲した桿状で、ｌ−２，５μｍＸ０．５μｍで、しばしば対で存在する。 細胞分割のこの特徴的な折れ曲がった形状のために、該細胞はしばし１ｆＶ−字 型を形成する角度をもつ状態で見出される。 運動性は観測されなかった。胞子も観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐＨ８以下において成育しない。 アルカリ性寒天（培心）上で、不透明な、黄色／オークル色で、円形の、凸状の 金縁コロニーを形成し、その径は２画である。 アルカリブロス（培地Ａ）中で成育は僅か乃至中程度（３７℃）であり、均一な 濁りを有し、沈殿物の形成を伴うが、表面皮膜は形成しない。 成長温度範囲：　１０−４０℃。４５℃で成育しない。 ＫＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト：　負 オキシダーゼ反応性：　負 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣｌ耐性：　０−１２℃％、　１５％において成育せずゼラチン加水分解： 　正 澱粉の加水分解：　負 主なメナキノン：　ＭＫ−４，ＭＫ−５主な脂肪酸類：Ｃ１６：０．　Ｃ１８： ０　（偶数炭素原子数の脂肪酸含有率＞９０％、分校脂肪酸含有率〈１０％） 化学有機栄養菌。複合基質、例えＩｆ＃母抽出液上で成育。簡単な基質（糖等） 上での成長は極制限される。アセテートおよびグルコースにより成長が刺激され る。菌ａｗＢ３はクラスタｌに関連する中間体形状であると思われる。 菌株７９ＬＮ、　４ 好気性で、運動性のグラム−陽性バクテリアである。その細胞は直線状のまたは 僅かに湾曲した桿状で、寸法は１．５−５μｍＸ０１５−１μｍで、しばしば対 で存在し、２〜４個の細胞の短い鎖を形成することがある。 胞子は観測されなかった。運動性も観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐＨ７，５以下において成育しない。 アルカリ性寒天（培地Ｍ上で、不透明な、クリーム色のコロニーを形成し、その 径は２閣である。このコロニーは円形で、正面に突起を有し、成長に伴って波形 （ｕｎｄｕｌａｔｅ）となる全朦を有する。 アルカリブロス（培地Ａ）中での成育は中程度乃至激しく（３７℃）、均一な濁 りを有し、沈殿物の形成を伴い、場合によっては表面リングを形成する。 温度範囲：　２０−４０℃で良好に成育。１０℃および４５℃で緩慢に成育し、 ５０℃では成育しない。 ＫＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト：　負 オキシダーゼ反応性コ　弱い正 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣ１耐性：　０−１５％ ゼラチン加水分解二　正 澱粉の加水分解：　正 化学有機栄養菌。複合基質、簡単な糖、有機−、アミノ−および脂肪−酸、並び にピリミジンヌクレオチド上で良好に成育する。 菌株７２Ｃ，４ 好気性の、グラム−陽性バクテリアである。その細胞は明らかな球状−桿状の発 育サイクルをもつように見える。初め、該細胞は球状または不規則な球桿菌状の 形状にあり、これは成長して短い桿状の、寸法１−２．５μｅｒｒ　ｘｏ、　５ −０．７５μｍとなる。場合により、より長い３−４μｍＸ１μｍのものも見ら れる。しばしば対で存在する。細胞分割のこの特徴的な折れ曲がった形状のため に、該細胞はしばし１ｆＶ−字型を形成する角度をもつ状態で見出される。 運動性は観測されなかった。胞子も観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ＤＨ８以下において成育しない。 アルカリ性寒天（培地Ｍ上で、円形で、凸状の金縁型のコロニーを形成し、その 径は１−２ｏｏである。このコロニーの色は、初めの橙色が成長に伴ってかつ光 の影響により濃いサーモンピンクとなる。 アルカリブロス（培地Ａ）中での成育は中程度であり（３７℃）、均一な濁りを 有し、沈殿物の形成を伴うが、表面皮膜を形成しない。 温度範囲＋　２０−３７℃で良好に成育する。１０℃で緩慢に成育し、４０℃で は成育しない。 ＫＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト＝　正 オキシダーゼ反応性：　負 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣｌ耐性、　０−１２％ ゼラチン加水分解：　正 澱粉の加水分解：　負 主な極性脂質 成分：ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファ チジルグリセロールホスフェート、ホスファチジルイノシトール。３種の糖脂質 （α−ナフトール　正）成分が存在。 主な脂肪酸類：　Ｃ１６：０．　Ｃ１８：０　（偶数炭素原子数の脂肪酸含有率 〉９５％、分校脂肪酸含有率〈５％） 化学有機栄養菌。複合基質（例えば、酵母抽出物）および種々の糖、有機酸およ びアミノ酸上で良好に成育する。 状の形状にあり、これは成長して短い桿状の、寸法１−２μｍ　Ｘ　Ｏ，５−０ ，７５μｍとなる。場合により、より長いものも見られる。この細胞はしばしば 対として存在する。 運動性は観測されなかった。胞子も観測されなかった。 偏性好アルカリ性細菌であり、ｐＨｌ１ｉにおいて成育しない。 アルカリ性寒天（培地Ｍ上で、円形で、凸状乃至突起を有する金縁型の不透明な コロニーを形成し、その径は１−２ｍ＋＋である。このコロニーの色は、初めの 橙色が成長に伴ってかつ光の影響により濃いサーモンピンクとなる。 アルカリブロス（培地Ａ）中での成育は中程度であり（３７℃）、均一な濁りを 有し、沈殿物および表面皮膜の形成を伴う。 温度範囲：　２０−３７℃で良好に成育する。１０℃で緩慢に成育し、４０℃で は成育しない。 ＫＯＨテスト：　負 アミノペプチダーゼテスト：　正 オキシダーゼ反応性、　負 カタラーゼ反応性：　正 ＮａＣ１耐性：　０−ｆ２Ｘ；　１５％において僅かに成育する。 ゼラチン加水分解：　正 澱粉の加水分解：　負 主な極性脂質 成分：ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファ チジルグリセロールホスフェート、ホスファチジルイノシトール。３種の糖脂質 （α−ナフトール　正）成分が存在。 化学有機栄養菌。複合基質（例えば、酵母抽出物）および種々の糖、有機酸およ びアミノ酸上で良好に成育する。 識別テストのｆ・小数の計算によるクラスタの定義およびグラム−陽性好アルカ リ数値的分類研究の目的の−一つは、選択された相似度レベルにおけるクラスタ を規定する該フェノンデータを、未知の菌株の指定または同定のために利用する ことにある。この分類テストデータは、７９％（Ｓｃ）相似度レベルにおける該 クラスタを規定し、かつ個々のクラスタに対して最も診断性（予測性）の高いこ れらの性状を同定するのに必要とされる最小の組のテスト数を決定するために使 用できる。即ち、未知の生物体を高い予想可能性で、予め定めたクラスタに割当 るのに必要とされるテストの最小数を決定するために使用できる。 この最小識別テストから、確率マトリックスを、未知の菌株の同定のために作成 できる。この分析はＭＣＩ（ＤＩＳＲプログラム（ＴＡＸＰＡＫにはないが、英 国のレイチェスター大学からデータメイルにより入手できる）を補充し、ＴＡＸ ＰＡ、に中のＣＨＡＲ３ＥＰプログラムとＤＩＡＣ）！ＡＲプログラムとの組み 合わせを使用することにより達成される。この同定マトリックスの評価はｍｓｍ Ｐ、ｏ■ＲＭＡＴおよｎＴＩＤＢＮプログラムを使用することにより与えられる 。バクテリアの確率的同定用のこれらプログラムを使用した実際の例はウィリア ムス（Ｗｉｌｌｉｕ＋ｓ）、　Ｓ、Ｔ、等、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ ｒａｔ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１９８３゜１２９．　ｐｐ、　１８１５ −１８３０；およびプリース）（Ｐｒｉｆ！ｓｔ）、　Ｆ、ＧB およびアレクサンダー（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ）、　Ｂ、、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ ｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１９８８、　１３４．　ｐ ｐ、　３０１１−３０１８；　１ｂｉｄ、　１９９０．１並、　Ｉ］ｐ、　３６ ７−３７６により公開されている。 テストデータから、二値性状を使用して“ｎＸｔ”表を作成した。即ち、二値標 記（正＝ｌ：負・０）で計算した性状６〜１１および１４〜２００（アペンディ ックスＣ）を使用した。 このデータマトリックスを、先ず分離インデックスを計算する該ＣＨＡＲ３ＥＰ プログラムを使用して調べ、かくしてクラスタ間の識別のための個々の性状の診 断値を調べる。２５％より大きなりＳＰインデックス〔（４×分散）Ｘ菌株の潜 在性〕をもつ性状−状態（テスト）（スネース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ、　Ｈ， ん、　Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ　ａｎｄ　ＧｅｏｓｃｉＢｎｃｅｓ、　１９７９．５ ．　ｐｐ、　３４９−３５７）を受理し、低診断値（ＶＳＰ　（２５Ｎ）を有す る性状をはねる。最大のｖＳＰインデックスを有する性状を採択する。但し、Ｉ ＨＡＣＨＡＲプロダラムおよびにＨＯ［ＳＥプログラムにおける基準も満たす必 要がある。この例において、６３種のテストがｖＳＰインデックス〉２５％を有 し、最終的に選択された３２性状中の１６の性状がＶＳＰインデックス〉５０％ を有する（表１２）。 このデータマトリックスは、次いで該クラスタ各々の最も診断性の高い性状状態 を決定するＤＩＡＣＨＡＲプログラムにより再変調べられる。性状状態の数は１ ２に設定した。この結果は該クラスタ間の相互の排他的性状状態の選択を可能と する。 出来る限り多（のこれらテストが、最小謳５リテストの最終同定マトリックスに 残され、この場合にはクラスタ当たり４〜ＩＯ診断性状の範囲内である。残りの 使用されなかったテストも記録し、同定の確認の目的で、付随的なテストとして 使用できる（表１３）。 ＭＣＨＯＩＳＥプログラムは、ＭＤＥＮＤサブルーチンを使用してデンドログラ ムとして表示できる群に、該テスト群をランクずけする。抜群は同様な識別値を 有するテストを同定し、かくして有意なａｌｌをなし得ないテストの排除を可能 とし、また等価なもしくは極類似する診断値を有するテスト間の選択を可能とす る。 表１４は、該クラスタを規定するのに必要とされる最小のテスト数であり、また 未知の菌株の指定のために使用できる３２テストの組を示す。更に、表１４は、 該３２の最小識別テストを基に該クラスタを規定する正の性状の百分率からなる 同定マトリックスを示す。これはＩＤＭＡＴプログラムにより計算された。 ［１０〕　ゼラチン　３０．６ ［１４］　フマレート　３５．４ ［１５１フルクトース　３５．２ ［１９）　ガラクトース　３４．８ ［２４Ｉ　Ｎ−アセチルグルコースアミン　５８．１［２７］　Ｄ−サブ力ロー ス　７４．１［２８］　マルトース　７０．７ ［３２］　アセテート５６．８ ［３６］　Ｄ−グルコース　６３．１ 〔３７］　サリシン　５Ｉ７３ ［３８］　Ｄ−メリビオース　４５．０［４２１プロピオネート７２．４ ［４４］　バレレート　３１，７ ［４８］　グリコーゲン　８５．３ ［５０１Ｌ−セリン　３８．ｌ ［６３１キモトリプシン　４４．４ １７０］　β−グルコシダーゼ　６７、ｌ［７４］　セリン　５８．６ ［７７］　アルギニン　６５．３ ［８０］　メチオニン　５４６０ ［９０Ｊ　ペニシリン（３５５，９ ［９４Ｊ　メチシリン　５６．５ ［９６］　ストレプトマイシン　２８．５［９７］　テトラサイクリン　５１． ８［１０５］バシトラシン　３２．８ ［１１２］　Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコースアミン　３２．８［１１６］セロビ オース　４５，０ ［１３７］ツラノース　５５．５ ［１３９１メチルピルベート　４１．１［１４０１モノ−メチルサクシネート　 ３９．１［１９２］チミジン　３４．９ ［１９７］グリセロール　３４．０ 〔１０１ゼラチン加水分解　［２４］　Ｎ−アセチルグルコースアミン［９０１ ペニシリンＧ　［２７］　Ｄ−サブ力ロース［９４１メチシリン　［３７ｊ　サ リシン［１０５］バシトラシン　［３８］　Ｄ−メリビオース［４２１プロピオ ネート ［４８］　グリコーゲン ［５２］　３−ヒドロキシブチレート ［８０Ｊ　メチオニン ［８３］　バリン ［１１６１セロビオース ［１０１ゼラチン加水分解　［２４］　Ｎ−アセチルグルコースアミン［１５１ フルクトース　［４２］　プロピオネート［２８１マルトース　［４４１バレレ ート［３７］　サ’Ｊシン［５０１Ｌ−セリン〔７０］　β−グルコシダーゼ　 ［８９１トリメトプリム（Ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）［７４］　セリン　［１ ２３］　ｌ１ｌ−イノシトール［８０］　メチオニン　［１９７）グリセロール ［８６１アンピシリン ［９４］　メチシリン ［９６］　ストレプトマイシン ［１０５１バシトラシン ［１０］　ゼラチン加水分解　〔２８１マルトース［１９］　ガラクトース　［ ３２１アセテート［７０ｊ　β−グルコシダーゼ　［３６］　Ｄ−グルコース［ ７７１アルギニン　［３８］　Ｄ−メリビオース［１０５］バシトラシン　［４ ２〕　プロピオネート［１１２］　Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコース　［４４］　 バレレートアミン　［４８］　グリコーゲン ［１１６］セロビオース　［７４１セリン［１９０１イノシン　［８６］　アン ピシリン［１９１１ウリジン　［９０］　ペニシリンＧ［９４Ｊ　メチシリン ［９７ｊ　テトラサイクリン ［１３９］メチルピルベート ［１４０１モノメチルサクシネート ［１５５］α−ケト酪酸 ［７７ｊ　アルギニン　［１（ＩＩ　ゼラチン加水分解［８０］　メチオニン　 ［１４１フマレート［８２〕　グリシン　［］５〕　フルクトース［８３］　バ リン　［１９］　ガラクトース［９４１メチシリン　［２７］　Ｄ−サッカロー ス［９７］　テトラサイクリン　［３８］　Ｄ−メリビオース［１０５］バシト ラシン　［４８１グリコーゲン［１０６］α−シクロデキストリン　［５０］　 Ｌ−セリン［１０９］ツイーン４０　［７０１β−グルコシダーゼ［１３９］メ チルピルベート［１１２１Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコースアミン［１４０１モノ メチルサクシネー１−　［１１６］セロビオース［１５１１β−ヒドロキシ酪酸 　［１３４］　Ｄ−ソルビトール［１６５１ブロモ−コハク酸　［１３６］　Ｄ −トレハロース［１３７］ツラノース クラスタ５　ベージュまたはくすんだクリーム色のコロニー：線状桿菌型細胞［ ｌＯ］　ゼラチン加水分解　［１４０］モノメチルザクシネート［２４１Ｎ−ア セチルグルコースアミン　［１５７］α−ケトバレリン酸［２７］　Ｄ−サッカ ロース ［２８］　マルトース ［３２］　アセテート ［３６］　Ｄ−グルコース ［４８１グリコーゲン ［６３］　キモトリプシン ［８６］　アンピシリン ［９４］　メチシリン ［９７］　テトラサイクリン ［ｌＯ］　ゼラチン加水分解　［１９］　ガラクトース［■５］　フルクトース 　［６３］　キモトリプシン［２４１Ｎ−アセチルグルコースアミン　［７４］ 　セリン［２７］　Ｄ−サッカロース　［７５］　プロリン［２８］　マルトー ス　［７７］　アルギニン［３２］　アセテート　［９６］　ストレプトマイシ ン［３６］　Ｄ−グルコース　［９９１オレアンドマイシン［３７］　サリシン 　［１０５］バシトラシン［３８］　Ｄ−メリビオース　［１１６］セロビオー ス［４２］　プロピオネート［１４０１モノメチルサクシネート［４５］　シト レート　［１９２］チミジン［４８］　グリコーゲン ［５（ｌコ　Ｌ−セリン ［６６］　α−ガラクトンダーセ ［６７１β−ガラクトシダーゼ ［６８１β−グルクロニダーセ 〔７０１β−グルコシダーゼ ［＋２３１クーイノシトール ［１３７］ツラノース ［１９７］グリセロール 注：性状状態に先行する角括弧内の数値は、アペンディックスＢおよびＣにおけ る性状状態および単位テストを表す。 表１４ 同定マトリックスニア９％（ＳＣ）レベルにおけるグラム−陽性好アルカリ性バ クテリアのクラスタを定義する正のｔｉｊｌＪ性状の百分率［１０１セラチン　 １００　１００　１００　０　１００　１００［１４］　フマレート　２０　２ ５　７５　０　８３　５０［１５］　フルクトース　６０　１００　７５　０　 ８３　１００［Ｉ９］　ガラクトース　２０　２５　１００　０　１７　０［２ ４］　Ｎ−アセチルグルコ−００５０２５１００１００スアミン ［２７］　Ｄ−サッカロース　０　７５　２５　０　１（１０１００［２８１マ ルトース　２０　１００　０　２５　１００　１００［３２ｊ　アセテート　２ ０　２５　０　７５　１００　１００［３６］　Ｄ−グルコース　２０　７５　 ０　２５　１００　１００［３７Ｊ　サリシン　０　１００　５０　２５　６７ 　１００［３８］　Ｄ−メリビオース　ｏ　ｓｏ　ｏ　ｏ　５ｏｉｏ。 ［４２］　プロピオネート　０　０　０　７５　８３１００［４４］　バレレー ト　２０　０　０　５０　８３　５０［４８１グリコーゲン　Ｏ７５００１００ １００［５０］　Ｌ−セリン　４０　０　２５　０　１７　１００［６３１キモ トリプシン　４０　２５　７５　２５　１００　０［７０１β−グルコシダーゼ 　２０　１００　１００　０　３３　１００［７４］　セリン　０　１００　０ 　７５　５０　０［７７１アルギニン　０　５０　１００　１００　３３　０〔 ８０Ｊ　メチオニン０　１ｆｌＯｎｃ　Ｉｆ）０　３３　２５［９０１ペニシリ ンＧ　１００　７５　０　５０　ｇ３　０Ｃ９４１メチシリン　１００　１００ 　０　１００　１００　２５［９６］　ストレプトマイシン　４０　１００　５ ０　７５　６７　０［９７〕　テトラサイクリン　８０　７５　０　１００　１ ００　２５［１０５］バシトラシン　ｉｏｏ　ｉｏｏ　ｉｏｏ　１００　８３　 ０［１１２］　Ｎ−アセチル−トグル　４０　２５　１００　０　５０　５０コ ースアミン ［１１６］セロビオース　０　５０　１００　０　５０　０［１３７］ツラノー ス　４０　１００　２５　０　１００　１００［１３９］メチルピルベート　６ ０　７５　０　１００　３３　７５［１４０１モノーメチルサク　４０　２５　 ０　１００　０　Ｇシネート ［１９２］チミジン　８（］　２５　５０　５０　８３　０［１９７］グリセロ ール　８０　０　５０　２５　３３　１００ｎｃ＝計算せず。 該識別テストの評価および同定の信頼性の査定該識別テストの評価は２つの局面 をもつ。先ず、該テストの妥当性は実際の例を使用して分析でき、これを更に統 計的理論を使用して評価することができ、あるいは該テストを直接統計的方法を 利用した理論的査定にかけることも可能である。 例１：該１四１１テストの実際の評価 多（の研究者は、選択されたクラスタの代表の性状状態を再測定することによっ てのみ該識別テストの精度を査定している。本発明では、この方法をセントロタ イプの菌株に対して利用した（以下の記載参照）。殆ど適用されないより一層厳 密な方法は、元の数値的分類法的分析で使用した全ての菌株を検討することであ る。最小識別テストの誘導された組から得られたデータのみを使用してクラスタ 解析した場合、再度作成されたデンドログラムは元のものと比較することができ る。前に記載した３２個の識別テスト（表１４）のみを使用した場合、新規なグ ラム−陽性好アルカリバクテリアの２０種全ておよび１３種の日本の研究者によ り単離された公知の好アルカリバチルス種に対するデータ（二値−状態、二値形 式）をＳ、／ＩＪＰＧＭＡ法（この場合にはＳ３．、ＭＩＧＭＡ法と等価である ）によるクラスタ解析に付した。再構築されたデンドログラムを第４図に再掲し た。この再構築されたデンドログラムは元のデンドログラム（第１図および第２ 図参照）と首尾よく匹敵する。 クラスタの位置の幾分かの再配置があったが、その構成は大幅には変更されず、 本発明の新規な好アルカリバクテリアのクラスタと好アルカリバチルス種との間 の明確な分離が見られた。 この証拠は、該数値的分類学的解析および化学分類学的データにより与えられた 統計的データと共に、新規なグラム−陽性好アルカリバクテリアの３つの主群を 同定するしっかりした分類を示す。 例２：該１しリテストの理論的評価 例１　（上記の）で得られた見掛は上明確なりラスタ分離の有意性を、同定マト リックス中の分類群間のクラスタの重なりを査定するＯＶＥＨＭＡＴプログラム を使用して評価できる。このプログラムは、選択された性状状態に対する正の百 分率値から作成された該マトリックスを、臨界的重なり値に対して検証する。こ の検証はセントロイドとクラスタ径（該クラスタの菌株の該セントロイドからの 距離の自乗平均の平方根）の座標により規定されるクラスタを考察することによ り行われる。これらクラスタ間に有意の重なりがあった場合、未知の菌株はその 任意のものに対して十分な確証をもって同定することはできない（スネース（Ｓ ｎｅａｔｈ）。 Ｐ、）Ｌんおよびソカル（Ｓｏｋａｌ）、　［Ｌえの上記文献、　ｐｐ。３９４ −４００）。２．５％という選択された臨界的重なりにれは殆どの研究者により 使用されているものよりも一層厳密な条件であり、これについては例えばプリー スト（Ｐｒｉｅｓｔ）　Ｆ、Ｇ、およびアレクサンダー（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ） 、　Ｂ、の上記文献、　１９８８；およびウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍ）。 Ｓ、Ｔ、等の上記文献を参照のこと）において、殆どのクラスタ間に有意の重な り（９９ｘの信頼度で）は見られなかった（表１５）。１％の臨界的重なり値に おいてさえ、クラスタ２とクラスタ５との間を除き有意のクラスタの重なりは見 られなかった（表１６）。これら２種のクラスタは何れもバチルス菌株を表し、 このことは本発明の新規なグラム−陽性好アルカリ細菌の正確な同定に対しては 実際的な意味をもたないと考えられる。 ５９５＜９０　９９　９９ 例３：同定の信頼度の理論的査定 仮想的メジアン生物体（ＨＭＤ）は、クラスタ中の「平均的」生物体のもう一つ の推定値である（スネース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ、Ｈ，んおよびソカル（Ｓｏ ｋａｌ）、　Ｒ，Ｒ−の上記文献、ｐｐ、　１９５以降）。鷲は真の菌株ではな いが、各性状の最も共通した状態を有する仮想的生物体である。上記！［５Ｔｒ ＹＰプログラムは該同定マトリックス中の各クラスタに対する閣を算出し、次い でこれらを同定する。換言すれば、ＭＯＳＴｎＴは、該クラスタに対する最も典 型的な菌株の同定スコアを算出することにより同定マトリックスを評価するため のプログラムである。良好な同定マトリ・ンクスは亀〔を再度それ自体のクラス タに割り当てる高い確率を与えるはずである。 この解析の結果は極めて満足なものであった。各ＨＭＯは、ウィルコックス確率 （Ｗｉｌｌｃｏｘ　ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ）（ウィルコックス（Ｗｉｌｌ ｃｏｘ）、　Ｗ、Ｒ，等、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｅｒ ｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１９７３．７７、　ｐｐ、　３１７−３３０）１．０００ でその元のクラスタに再度割り当てられた。これらの分類学的距離は全て低く、 カリ該分類学的距離の標準誤差は全て負であり、このことは抜出０が、クラスタ に対する平均よりも該クラスタのセントロイドにより近接していたことを意味す る（表１７）。 １　１．０００　０．２２９　−３．０８６２　１．０００　０．２２１　−３ ．２００３　１．０００　０．２４２　−２．２８８１、０００　０．２０７　 −３．０９０５　１．０００　０．２５１　−２．７０１６　１．０００　０． １７７　−２．６９０を使用して達成される。このプログラムは、％正の性状の 同定マトリックス内で順次各クラスタに対して、未知の菌株に対する存在−不在 データを比較する。同定係数を算出し、即ちウィルコックス確率、分類学的距離 およびその標準誤差を算出する。この結果を表示し、該表示は得られた同定スコ アを最良のクラスタおよび次に最良の２つの別のクラスタに対して示す。更に、 非定型の結果（「逆の性状」）を記録する。真の菌株のデータを使用した解析に おいて、該セントロタイプはウィルコックス確率１．０００でその元のクラスタ に再度割り当てられた（表１８）。該分類学的距離は低く、一般的には閣と同一 の範囲内にあワた。その標準誤差は全て負であり、このことは、該セントロタイ プがクラスタの平均よりも該クラスタのセントロイドにより近接していたことを 意味する。例外はバチルス基準菌株Ｒ３ｌ０であったが、これは＋３．０という 十分に許容できる限界内にあった（スネース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ、）Ｌんの 上記文献、　１９７９．　ｐｐ−１９５−２１３）。 クラスタ　菌株　クラスタ　ウィルコツ　分類学的　Ｄの標準への割当　クス確 率　距離（Ｄ）　誤差１　３Ｅ、ｌ”　１　１．０００　０．２８９　−１．０ ８８２　Ｒ３ＩＩ”　２　１．０００　０．２７３　−０．５８４３　ｗＮ１６ ”　３　１．０００　０．２２９　−１．７６７４　１５ＬＮ、１ｃＴ４　１． ０００　０．２１７　−０．５１９５　Ｒ３ｌ０”　５　１．０００　０．４２ １　＋１．６７８６　Ｒ３８ｅＴ６　１．０００　０．２２１　−２．４６８例 ５：未知の単離体の同定 この同定マトリックスを、ここで定義した該クラスタに未知のグラム−陽性好ア ルカリ細菌を割当る能力について査定した。上首尾の同定のための基準は以下の 通りであった。 （ａ）東アフリカソーダ湖と同様な生息地であるが、地理的には別々の生息地か ら単離したバクテリア： （ｂ）分類学的距離に関して０．９５よりも大きなおよび小さなウィルコックス 確率およびその標準誤差（＜３）　； （Ｃ）最良のクラスタに対する同定スコアが次に最良の２つの別のクラスタに対 するスコアよりも有意に大きい； （ｄ）該最良のクラスタの「逆の性状」は０または小さな数であるべきである。 未知の微生物を表１４に掲載した最小テストを使用して調べることができる。そ の性状状態を決定し、ＭＡＴＩＤＩＥＮプログラムを使用して同定スコアを得た ２、−のプログラムは該未知の微生物の性状状態と、予め定めたクラスタの全て に対して決定された同定マトリックスと比較し７、最良の適合を計算し、該未知 の微生物をその最も適したクラスタに割り当てる。 ウィルコックス確率を同定の許容性を決定するために計算した。０．８５および ０゜９５なるウィルコックス確率が上首尾の同定のための基準として受け入れら れている（ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）、　Ｓ、Ｔ、等の上記文献、　１ ９８３；ブリースト（Ｐｒｉｅｓｔ）＜Ｆ、Ｇ、およびオースチン（Ａｕｓｔｉ ｎ）、　Ｂ、の上記文献、　１９８８）。該未知の微生物の該クラスタセントロ イドからの分類学的距離を算出し、該クラスタの半径と比較することができる。 この分類学的距離の標準誤差はスネース（Ｓｎｅａｔｈ）、　Ｐ、　Ｈ，Ａ、　 （１９７９゜ＰＰ、　１９５−２１３）により示唆された上限値（３，０よりも 小さいはずである。更に、物理学的特徴、付随的生化学データおよび化学分類学 マーカーを使用して、特定のクラスタ中の該未知の微生物の同一性を更に確認で きる。 アルカリ耐性酵素の産生並びに用途 本発明の好アルカリ性微生物は種々の酵素を生産する。これらの酵素は、その機 能を極端に高いｐＨにおいて果たすことができ、従って高いｐＨ３！境または反 応条件における使用に特に適したものとなる。 アルカリ耐性酵素の種々の用途の例は洗浄剤組成物、皮革なめし、食品処理、廃 物処理および繊維工業等である。これらの酵素は、また生物転換、特に純エナン シ３マーの調製においても有用である。 該好アルカリ性細菌は、アペンディックスＢに記載の方法を利用して、脂肪分解 、タンパク分解および／または澱粉分解活性を有するアルカリ耐性酵素の産生に つき容易にスクリーニングできる。 好アルカリ性バクテリアを培養するブロスは、典型的には１種以上の型の酵素活 性を有する。ｌまたは複数の酵素を含む該ブロスは、そこから例えば遠心分離ま たは濾過等の手段によりバクテリアを分離した後、直接所定の工程で使用できる 。 必要ならば、該培養濾液を、透析の前またはその後に凍結乾燥することによりあ るいは限外濾過により濃縮できる。これらの酵素は、また沈殿および濾過により 回収できる。更に、該ブロス中に含まれるｌまたは複数の酵素は、所定の工程で 使用する前に、例えばクロマトグラフィ一手段またはゲル電気泳動法により単離 かつ精製することができる。 興味あるアルカリ耐性酵素をコードする遺伝子をクローニングし、かつ該所定の 酵素を純粋なまたは容易に回収できる形状で発現することのできる生物体中で発 現させることが可能である。 一態様においては、該酵素処方物を洗浄テストで使用して、その酵素活性の有効 性を測定することができる。 該好アルカリ性バクテリアからの酵素処方物は、例えばプロティン−１脂質−お よび／または澱粉含有成分で汚れたコツトン小片を使用した、特別に開発された ミニ−ウォッシュテストｍｉｎｉ−ｗａｓｈ　ｔｅｓｔ）でテストできる。この 洗浄テストに先立って、この小片をアニオン性界面活性剤、過硼酸ナトリウムお よび漂白活性剤（ＴＡＥＤ）を含有する溶液で前処理することができる。この処 理の後、該テスト用小片を流動する脱イオン水で濯ぎ、風乾する。この処理は該 汚れを固定し、その除去を更に困難なものとする。 この洗浄テストは、該テスト用小片の存在下で、特定の洗浄剤組成物＋特定量の 酵素活性成分とを使用して実施できる。洗浄後、該小片を流動する脱イオン水で 濯ぎ、風乾する。このテスト用小片の反射率を光度計で測定する。 以下の実施例は、本発明を更に説明するために与えられるものであり、本発明を 何等制限するものではない。 実施例１：未知単離体の同定 菌株ＭＬ２０７ａは、米国力リホルニア州に存在する／＼イノく−サＩＪン、ア ルカ１ノ湖であるモルレーク（Ｍｏｎｏ　Ｌａｋｅ）から、１９９０年５月に採 取した泥および水試料を培地Ａ（アペンディックスＡ）に塗布することにより単 離したグラム−陽性好アルカリ性バクテＩＪ７である（シェーバ−（Ｊａｖｅｒ ）、　Ｂ、、　Ｈｙｐｅｒｓａｌｉｎｅ　Ｅｎｖｉｒｏｔｕｅｅｎｔｓ、　１９ ８９、　ｐｐ、　３０３−３０５．　スブリンガーーフエアラーグ、ベル１ノン およびノ＼イデルベルグ）。菌株１ａ２０７ａは球菌であり、アルカリ栄養寒天 培地（培地Ａ）上で明るＧ）黄色−橙色の、円形、金縁の凸状コロニーを形成す る。 この菌株ＭＬ２０７ａを表１４に掲載した２２の最小テストを使用して調べた。 性状状態を決定し、同定スコアをＭＡＴ　ＩＤＢＮプロティンを使用して得た。 結果を表１９ｉこまとめた。これらの結果は、該最小識別テストからの３２の性 状状態の内の２２のみを指定したにも拘らず、菌株ＭＬ２０７ａの極めて満足な りラスタｌへの同定を示した。 ０、９９９７なるウィルコックス確率が算出され、これは設定した限界０．９５ よりも（ｉるかに有意に高い。上首尾の同定のための基準として１よ、０．８５ および０．９５なるウィルコックス確率が受入れられている（ウィリアムスＳ、 　Ｔ、等の上記文献、　１９８３゜プリーストＦ、　Ｇ、およびオースチンＢ、 の上記文献、　１９８８）。０．４２３と０う該クラスタのセントロイドからの 分類学的距離は許容できるものであり、０．５３９（９９％レベル）に規定した 該クラスタ半径内にある。２．０７６の該分類学的距離の標準誤差Ｉｔスネース Ｐ、！Ｌん（上記文献、１９７９．　ｐｐ、　１９５−２１３）をこより示唆さ れた上限値＋３．０よりも小さい。更に、菌株ＭＬ２０７ａの球菌状の細胞およ び黄色−橙のコロニー色（よ、同様にクラスタ１の諸特徴（表１３）と一致する 。 ［ｌＯ］　ゼラチン　ｎ、ｔ、　９９　１［１４］　フマレート　２０　１ ［１５］　フルクトース　６０　１ ［１９］　ガラクトース　＋　２０　１［２４１Ｎ−アセチルグルコ−１２５ スアミン ［２７１Ｄ−サッカロース　ｌ　１ ［２８１マルトース　２０２５ ［３２］　アセテート　２０７５ ［３６］　Ｄ−グルコース　２０２５ ［３７１サリシン　ｌ　２５ ［３８］　Ｄ−メリビオース　１　１ ［４２］　プロピオネート　１　７５ ［４４］　バレレート　２０５０ ［４８］　グリコーゲン　１　１ ［５０］　Ｌ−セリン　＋　４０　１ ［６３］　キモトリプシン　＋　４０２５［７０］　β−グルコシダーゼ　２０ 　１［７４］　セリン　÷　１　７５ ［７月　アルギニン　ｎ、　ｔ、　１　９９［８０］　メチオニン　Ｌ　ｔ、　 １　９９［９０］　ペニシリンＧ＋　９９　５０［９４１メチシリン　＋　９９ ９９ ［９６］　ストレプトマイシン　＋　４０７５［９７］　テトラサイクリン　８ ０９９［１０５］バシトラシン　＋　９９９９［１１２］　Ｎ−アセチル−Ｄ− グル　ｎ、ｔ、　４０　１コースアミン ［１１６］セロビオース　ｎ、ｔ、１　１［１３７］ツラノース　ｎ、ｔ、　４ ０　１［１３９］メチルピルベートｎ、　ｔ、　６０　９９［１４０１モノーメ チルサク　ｎ、ｔ、　４０　９９シネート ［１９２］チミジン　ｎ、ｔ、　８０　５０［１９７］グリセロール　＋ｕ、　 ８０　２５ｎ、ｔ、＝テストせず。 表１９：（続き） ・単、ＩＩＭＬ２０７ａの最良同定はクラスタ１０・係数のスコア：ｌ　（ウィ ルコックス確率）、２（分類学的距離）、３扮類学的距離の標準誤差） クラスタｌ　Ｏ，９９９７０，４２３２，０７６クラスタ２　０．２６１　Ｘｌ ０−ｓＱ、５００　５．５５クラスタ３　０．４０　ｘｌＯ−’　０．５４０　 ６．６０逆性状　クラスタ１ 分類群中の％　未知菌株中の値 ［１９］　ガラクトース　２０＋ ［７４１セリン　ｌ　＋ ［９７］　テトラサイクリン　８０− クラスタ４からクラスタ１を分離するのに役立つ付随的性状クラスタ１−＞クラ スタ４ ％　％ ［ｌＯ］　ゼラチン　９９　１ ［８０１メチオニン　１９９ カリｐＨにて平衡させた培地中でタンパク分解酵素の産生につきテストした。こ れらの実験はバッフルを備えた２１の振盪フラスコ内で実施した。各フラスコは ４００ｍ１の培地Ｓを含んでいた。この培地Ｓはｇ／ｌ単位で表した以下の如き 組成を有する：新鮮な酵母８．２５．グルー１−Ｘｌ、３２；　ＫｔＨＸ　１． ６；　ＣａＣ１ｔ　Ｏ，０５；　Ｍｇ５Ｏａ　−７０ｔ００．０５；　ＦｅＳＯ ４０，００５；　ＭｎＳＯ４０，００６６；　ＮａＣ１４０，０，この培地を１ ２１　’Ｃにて２０分間滅菌し、無菌４０％Ｎａ　ｔＣｏｘ溶液〕Ｈを１Ｏ１５ に調節した。これらのフラスコを２８Ｏｒｐｍ＋で回転するオービタル（ｏｒｂ ｉｔａｌ）インキュベータ内で、３７℃の一定温度に維持した。培養培地の試料 を０〜５．７日の間隔で該フラスコから取り出して、酵素含有率を測定し、これ を米国特許第４．００２．５７２号に記載された如（アルカリデルフト単位（Ａ ｌｋａｌｔｎｅ　Ｄｅｌｆｔ　Ｕｎｉｔｓ：　ＡＤＵ）で表示した。 表２０は、酵素レベルの測定を実施した時点における該培養培地中の酵素収率お よび該培地のｐＨを示す。 採取　ＡＤＯＡＤＵ　ＡＤＯＡＤＵ　ＡＤＯ旦−／ｍｌ　ｐＨ々ｌ　ｌ）Ｈ々Ｌ 且　渾−１）Ｈ匠」Ｌｏ　０１０．５　Ｑ　１０．５　０　１０．５　０　１０ ．５　０　１０．５１　１３７　９．５　２　１０　１６　１０　０　！０．５ 　２　１０２　２　９．５１８１０　０１０ ９　５８１０．５　５　１０　１４　１０　５　１０　３　１０このテストの結 果は、アペンディックスＥに示した結果と共に、明らかに本発明の好アルカリ性 バクテリアにより培養ブロス中で生成されたタンパク分解酵素の存在を示してい る。 実施例３：タンパク分解酵素を使用した洗浄能力テスト該好アルカリ性バクテリ アからの酵素処方物をミルク、血液およびインキで汚染させた小片（スイス、セ ントガレンのＥＭＰＡから入手）を使用して、特別に開発したミニ−ウォッシュ テストによりテストした。２種の型の織物、即ち１００％綿（ＥＭＰＡ　１１６ と命名されたもの）およびポリエステル（３５％）／綿（６４℃％ＸＥＭＰＡ　 １１７と命名）をテストした。これらのテスト小片を前処理（「予備酸化」）と 共にまたは該前処理なしに該ミニ−ウォッシュテストにかけた。この前処理は、 アニオン性界面活性剤、過硼酸ナトリウムおよび漂白活性化剤（ＴＡＢＤ）を含 む溶液内に該小片を入れ、周囲温度にて１５分間攪拌することからなる。この処 理の後、該テスト小片を流動する脱イオン水で濯ぎ、風乾した。この処理は残留 する汚れの固定化をもたらす。 この洗浄テストは、特定の洗浄剤組成物３０ｍ１＋テストすべきプロテアーゼ３ ００ＡＤＯ（米国特許第４．００２．５７２号で使用されたアルカリンデルフト 単位）を含む、ノくッフルを備えた１００　ｉ＋１の三角フラスコ中で実施した 。各フラスコには２個のＦ３１ＰＡテスト小片を入れた。これらのフラスコを往 復動振盪水浴（２ｃｍストローク）中に入れ、２００ｒｐｍにて攪拌した。この テストは４０℃にて３０分間行った。洗浄後、該小片を流動する脱イオン水で１ ０分間濯ぎ、風乾した。該テスト小片の両側の反射率を、緑色フィルタを備えた 光電池光度計（モデル５７７）で、波長６８０ｒＬｍにて測定した。 欧州型粉末洗剤中での、数種の好アルカリ性バクテリア培養物の上澄画分の洗浄 性能を上で特定した方法に従って測定した。該上澄画分は限外濾過により濃縮し くミリポアＣＸアジテータ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　ＣＸ　Ａｇ１ｔａｔｏｒ）ま たはアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）　Ｒ＾２０００スパイラル限外濾過器）、少な（ とも３００　ＡＤＵ／ｍｌで酵素を含む処方物を製造した。 １００　ｍｌ三角フラスコを、１５°ドイツ硬度の標準的な水道水に溶解した粉 末洗剤ＩＥＣで満たして、標準的水道水中の最終濃度４ｇ／ＩまたはＩＥＣ（３ ，２ｇ／ｌ　）十過硼酸ナトリウム（０，７４ｇ／Ｉ）およｒＪＴＡＥＤ（０， ６ｇ／ｌ　）とした。 該粉末洗剤ＩＥＣの組成は以下の通りである。 成分　量（ｗｔ％） 線状ナトリウムアルキルベンゼンスルホネート６．４エトキシル化タローアルコ ール　２・３ナトリウム石鹸　２．８ トリポリリン酸ナトリウム　３５．０ 珪酸ナトリウム　６．０ 珪酸マグネシウム　１．５ カルボキシメチルセルロース　１．Ｏ 硫酸ナトリウム　１６．８ その他の成分十水　１００まで 標準的水道水は脱イオン水中に０．２９１　ｇ／ｌのＣａＣ１ｇ　−２Ｈ１Ｏ， ０，１４０ｇ／ｌのＭｇＣ１−６Ｈ，Ｏおよび０．２１０ｇハのＮａＨＣＯｓを 含む。 各フラスコに、２個のテストＥＭＰＡ小片を添加し、かつ最終活性を３００ＡＤ Ｕとするのに十分な量の酵素−含有処方物を添加した。この石鹸水の最終的な体 積は３０ｍ１であった。比較のために、１つのフラスコは酵素処方物を含まず、 これを滅菌バクテリア培養培地で置換した。結果を以下の表２１および２２に示 す。 対　酵素処　改善性　対　酵素処　改善性小片　照　刀物　（ｘ）　照　刀物　 （％）ＥＭＰＡ　１１６　２２．７　３４．３　５１．０ＨＭＰＡ　１１６　（ 酸化）　１２．５　１２．９　３．２　１２．０　１２．７　５．８ＨＭＰＡ１ １７　２０．２　４１１　１３８．２鵬ツ＾１１７（酸化）　１２．８　１４． ５　１３．３　１３．０　１３．１　１．０轟荏：応用：洗浄試験：好アルカリ バクテリア８１ＬＮ、４からのタンパク分解酵素対　酵素処　改善性　対　酵素 処　改善性小片　照　万物　（％）　照　万物　（％）ＥＭＰＡ　１１６　２０ ．３　２５．９　２７．９ｇＭＰＡ　１１６　（酸化）　１１．４　１３．７　 １９．７蒼＾１１７　１８．８　３１．１　６５．２２ＢＭＰＡ　１１７　（酸 化）　１２゜４　１３、ｏ５，３これらの試験の結果は、本発明の菌株により生 産されたタンパク分解酵素の洗浄剤組成物中での有効性を立証しており、改善さ れｌ；洗浄性能が得られた。 実施例４：澱粉分解酵素の産生 ３種の好アルカリ菌株（６０Ｂ、　４、ｄ１２およびｗＮ１６）を、アルカリｐ Ｈにて平衡化させた澱粉を含む培地上で、澱粉分解酵素の産主につきテストした 。 これらの実験は１０ｍ１のアルカリ培地Ｙを充填した沸騰管（２ｇ２０ｃｍ）中 で実施した。培地Ｙは脱イオン水ｌｌ当たりのｇ数で表した以下の組成を有して いた。即ち、酵母抽出物（ディフ：ｙ（Ｄｉｒｃｏ））　１．０；　ＫＮＯｓ　 １０．０；　ＤｔＰＯ＜　１．０：　Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ，００，２；　ＮａｙＣ Ｏｓ　１０．０；　ＮａＣ１４０，０；可溶性澱粉（メルク（Ｍｅｒｃｋ））　 ２０．０．鉄管に、３７℃にて培地Ａ（アペンディックスＡ参照）上Ｔ−２４時 間成長させた細胞を接種（５％）した。対照として、同様な澱粉を含まないアル カリ培地を充填した管にも接種した。 これら管を２８Ｏｒｐｍで回転させたオービタル（ｏｒｂｉｔａｌ）振盪インキ ュベータ中に、３７℃の一定温度にて７２時間入れた。該酵素を含有する流体を 、４０００　ｒＩｎにて１０分間遠心処理することにより該細胞から分離した。 上澄画分の酵素活性を、ワックス状のトウモロコシ澱粉からグルコースとして遊 離される還元糖を測定し、レーバー（Ｌｅｖｅｒ）、　ｔ　（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 　Ｍｅｄ、、　１９７３．　７゜１）Ｉ）、　２７４−２８１）の方法に基く方 法を利用して、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジドにより定量することによりア ッセイした。この反応混合物（１，０ｍ１）は、ｐｎｔｏのＯ，１Ｍ炭酸ナトリ ウムバッファーおよび酵素−含有上澄（０，１ｍ＋１）中に懸濁した０、２５％ （Ｗ／Ｖ）のワックス状のトウモロコシ澱粉を含んでいた。これらのアッセイは ２５℃にて３０分間実施し、該反応を３ｍｌのｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジ ド試薬を添加することにより停止させた。５分間の沸騰後、分光光度計で４１０ ｎｍにおける吸収率を測定した。該還元糖は標準カーブからグルコース等個物と して測定した。 １１１位の澱粉分解酵素活性を、Ｉ）ＨＩＯおよび２５℃において１分当たりか つ１ｍｌ当たり遊離されるグルコースとして測定された還元糖ｌｕｇと定義する 。 得られた澱粉分解酵素単位数を表２３に示す。 表２３：澱粉分解酵素の産生 酵素単位／ｌ 培地Ｙ　Ｍｌｌ＆６０Ｂ、　４　ａ株−１２７１Ｍ株−１６＋澱粉　３３，３３ ３　９．０８８　６．１５８澱粉添加なし　４０４　１４０　２４６アペンデイ ツクスＥに示した結果と共に、該テストの結果は明らかに本発明の好アルカリ性 バクテリアにより生産された澱粉分解酵素の存在を示している。 実施例５：洗浄剤中での澱粉分解酵素の安定性菌株６０Ｅ４およびｗＮ１２から の澱粉分解酵素の洗浄剤に対する抵抗能（これは織物の糊抜きでの応用について 本質的なものである）を立証する。 バッフルを備えた１００ｍ１の三角フラスコを、各々０．１２ｇのドデシル硫酸 ナトリウム（４ｇ／ｌに等しい）を含ｔｗＨ１０，１の０．　ＩＭ　ｋｘωａ／ ＮａＨＱ）ｓバー）　７７−３０ｍ１で満たした。これらフラスコの半分に０． ３ｇのジャガイモ澱粉（１％に等しい）を添加した。 各フラスコをテスト菌株からの酵素−含有上澄を０．５．１．０または２．０ｍ ｌ添加することにより該酵素投与した（表２４参照）。対照として、該上澄液を １．Ｏｎ＋１の水で置換した。該酵素の添加直後に、０．１ｍｌの試料を取り出 しく時間０）、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド法を使用して酵素活性を測定 した。 これらのフラスコを振盪しつつ、２５℃にて２．５時間インキュベートし、この 時点において第二の試料０．１ｍｌを取り出し、酵素活性を測定した。 験を繰り返した。 酵素活性は還元糖法を利用して測定し、上記のｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジ ド法により定量した。 結果を以下の表２４に示す。 ＳＯＳ＋澱粉　００ じ ６０Ｂ４　０．５　ＳＤＳ十澱粉　〈１３２１、ＯＳＤＳ＋澱粉　１３７７ ＳＤＳ＋澱粉　３６　１３２ ２．０ ６６Ｂ４　０．５　ＳＤＳ十澱粉　３３３１．０　ＳＯＳ＋澱粉　６６５ ２、ＯＳＤＳ十澱粉　１３　１１９ 標準９）　ＳＤＳ　２７　２７ 標準９）　ＳＤＳ＋澱粉　２９４８ 零：　１ｍｌの水で置換。 ９　）　２５０　ＴＡＵマキサミルアミラーゼ（ｌ　ＴＡＵ、即ちサーモフィル アミラーゼ単位は、ｐＨ６，６および３０℃にて、１分当たり１■の澱粉を生成 物に転化する酵素の量として定義され、該生成物はヨウ素と反応させた場合に、 １００　ｍｌの脱イオン水中に２５ｇのＧｏＣＩ　・６）１ｇＯ，３，８４ｇの ＫｔＣｒｔＯｔおよび１ｍｌのＨＣＩを含有する溶液と等しい６２０ｕにおける 吸収率をもつものである。 このテストの結果は、洗浄剤の存在下で、本発明の好アルカリ性酵素により生産 された澱粉分解酵素の安定性を明らかに示している。 グルコース　１０．０　ｇｌ　−’ ペプトン（ディフコ：米国、Ｍｌ州、デトロイト）　５．０ｇ１−’酵母抽出液 （ディフコ）　５．０ｇピ１ＫｔＨＰＯ４１，Ｏｇｌ　−’ ＭｇＳＯ４自ＴＨｔ０　０．２　ｇｌ　−’ＮａＣ１４０，０ｇｌ　−’ ＮａｔＣＯｓ　ｉｏ、ｏ　ｇｌ　−’ ＊　寒天　２０．０　ｇｌ　−’ ＊：（固体培地が必要とされる場合） 培地Ｂ グルコース　１０．０　ｇｌ　−’ ペプトン（ディフコ）　５．０　ｇｌ　−’酵母抽出液（ディフコ）　５．０ｇ １−’に２）ｌＰ０４１．０　ｇｌ　−’ ｂｓｏ、・ｙＨｔｏ　０．２　ｇｌ　−’ＦＪａＣ１４０，０ｇｌ　−’ Ｈａｔ（ＸＪｓ　１０．Ｏｇｌ　−’ ラクトアルブミン　ｉｏ、ｏ　ｇｔ　−’寒天　２０．０　ｇｌ　−’ グルコース　１０．０　ｇｌ　−’ ペプトン（ディフコ）　５．０ｇｌ” 酵母抽出液（ディフコ）　５．０ｇｌ”ＫＪ類　１．０　ｇｌ　” Ｍｇ５Ｏａ　’　７Ｈｔ０　０．２　ｇｌ　−’ＮａＣ１４０，Ｏｇｌ　−’ Ｎａ、Ｃｏ、　１０．０　ｇｌ　−’ カゼイン　２０．０ｇ１−寡 寒天　２０．０　ｇｌ　” 培地り 可溶性澱粉　１０．０　ｇｌ　” ペプトン（ディフコ）　５．０ｇ１−’酵母抽出液（ディフコ）　５．０ｇ１− ’ＫＩＨＰＯ４１，Ｏｇｌ　−’ Ｍｇ５Ｏａ　−７ＨｔＯｏ、２　ｇｌ　−’ＮａＣｌ　４０．Ｏｇｌ　−’ ＮａｔｃＯｓ　ｉｏ、　Ｏｇｌ　−’ ラクトアルブミン　１０．０　ｇｌ　−’寒天　２０、Ｏｇｌ　−’ 培地Ｅ 可溶性澱粉　１０．０　ｇｌ　−’ ペプトン（ディフコ）　５．０ｇ１−’酵母抽出液（ディフコ）　５．０ｇｌ” ＫｔＩｆＰＯ４１，０ｇｌ　−’ ＭｇＳＯ４・７Ｈｔ０　０・２　ｇｌ　−’ＮａＣｌ　４０．Ｏｇｌ　” ＮａｔＣＯｓ　ＩＱ、Ｏｇｌ　−’ カゼイン　２０．０　ｇｌ　−’ 寒天　２０、ｏ　ｇｌ　−を 培地Ｆ オクスビル（Ｏｘｂｉｌｅ：オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）　、英国、ベーシン　１ ０．０　ｇｌ　−’ゲストーク （ＮＨ＊）ｚｓＯ４５，Ｏｇｌ　−’ Ｍｇ５ｏ４・７Ｈ＊０　０．２　ｇｌ　−’酵母抽出液（ディフコ）　０．５ｇ ｌ”ラクトアルブミン　１θ、Ｏｇｌ　−’寒天　２０．０　ｇｌ　−’ ５０％ＮａｔＣＯｓ溶液によりｐＨｓ、　ｓニ調製。 培地Ｇ オクスビル（Ｏｘｂｉｌｅ）　１０．０　ｇｌ　−’（ＮＨ４）ｔｓＯ４５，０ ｇｌ　” ＭｇＳＯ４’　７Ｈｚ０　０．２　ｇｌ　−’酵母抽出液（ディフコ）　０．５ ｇ１−’カゼイン　２０．０　ｇｌ　−’ 寒天　２０．０　ｇｌ　−’ ｓｏ％　ＰａａｔＣＯｓ溶液によりｐＨ８，５に調製。 バクテリアの懸濁液をアルカリ栄養寒天培地（培地Ａ）上に展開し、３７℃で培 養した。コロニーを４８時間後に調べた。 ２３　性状局、６および７：細胞形態、グラム菌株反応アルカリ栄養ブロス培地 （培地Ａ、寒天を含まず）中で２４時間成長させたｌくクチリア細胞を遠心分離 機内で沈降させ、少量のアルカリ栄養ブロス中に再懸濁させ、顕微鏡スライド上 で風乾した。あるいは、バクテリアをアルカリ栄養寒天培地（培地Ａ）上で２４ −４８時間培養してコロニーを形成させた。該ノくクチリアコロニーを生理塩水 中に懸濁し、その数滴を顕微鏡スライド上で風乾した。対比染色としてサフラニ ンを使用し、ドユソールト（Ｄｕｓｓａｕｌ　ｔ　）の改良法（ドユソールト（ Ｄで実施した。 ３、性状Ｎｏ、８ニオキシダ一ゼ反応性Ｎ、　Ｎ、　Ｎ’　、　Ｎ’−テトラメ チル−ｐ−フェニレンジアミンの１％水性溶液で湿潤させた濾紙またはオキシダ ーゼ同定ディスク（バイオメリュ−（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）；フランス国シャ ルポニエールーレーパン）に、アルカリ栄養寒天培地からの未成熟のノくクチリ アを塗り付けた。正反応としては、１分以内に紫色が記録された。対照としてこ のテストは診断テストストリップバクチデント（Ｂａｅｔｉｄｅｎｔ；商標）ア ミノペプチダーゼ（１３，メルク（Ｍｅｒｃｋ）、ドイツ、ダルムシュタート） を使用して実施した。正反応としては、３０分以内に黄色が記録された。 ５、性抛ｏ、１０：ゼラチン加水分解 チャーコール−ゼラチンディスク（バイオメリュー（ｂｉｏＭｅｒｆｅｕｘ）） または「チャーゲル（ｃｈａｒｇｅｌｓ）；オキソイド（Ｏｘｏｉｄ））をアル カリ栄養ブロス培地（培地Ａ）中でバクテリアと共に３７℃にてインキュベート した。正反応では、黒色の沈殿物の形成を示した。 ６、性ｎｏ、　１１　ニスキンミルクテスト以下の成分（蒸留水１ｉ！中のｇ数 で表示）：酵母抽出液１．０；　ＫＮｌｓ　１０．０；　ＫｔＨＰＯ４１、Ｑ； 　ＭｇＳＯ４−７Ｈ１００，２；　ｈｃｌ　４０．０；　ＮａｔＣＯｓ　ｔｏ、 ｏ；寒天２０．０を含有する最小培地に、オートクレーブ処理により滅菌したス キンミルク粉末５．０ｇ／ｌを補充し、ベトリ皿に注入した。バクテリアを接種 し、３７℃にてインキュベートした。バクテリアコロニーの回りの透明な寒天領 域（それ以外は不透明）の存在を正反応として記録した。 非好アルカリ性の参考菌株を、同一の組成をもつが、ｐＨを６．８−７．０とす るためにＮａ２ＣＯｓを含まない培地を使用して、同様な方法でテストした。 ７、性淵ｏ、　１２　：　ＮａＣ１耐性２つの方法を適用した。 （ａ）０％、４％、８％、１２％または１５％（胃／Ｖ）のＮａＣｌを含むアル カリ栄養寒天培地（培地Ａ）上で３７℃にてバクテリア菌株を培養した。これら の寒天プレートを４８時間後にバクテリアの成育につき調べた。 （ｂ）　０％、４ｘ、８％、１２％　、　１５％　ｔ、り１ｆ２５％（ｗ／ｖ） ノＮａｃｌヲ含ムフルカ＋）栄養１ａス培地（培地Ａ）中で、３７℃にてバクテ リア菌株を培養した。０．１２．２４．４８．７２および１４４時間に、クレッ トメーター（Ｋｌｅｔｔ　ｍｅｔｅｒ：緑色フィルタ装備）を使用して光学密度 測定によりバクテリア成長を監視した。 ８、性秋漬ｏ、１３：最低成育１）Ｈ ｐＨ６，８−７，０の栄養寒天培地（培地Ａ、　ＮａｔｃＯｓを含まない）を方 形のペトリ皿に注いだ。固化した寒天のストリップ←端から取り出し、３．６Ｘ （ｗ／ｖ）のＮａｔＣＯｓおよび０．８％（Ｗ／Ｖ）のＮａＯＨを含む４％（Ｗ ／Ｖ）溶融寒天で置換した。該プレートを横切るｐＨ１Ｏ，５からｐＨ７までの ｐＨ勾配を一夜に渡り適用した。バクテリアを該ｐＨ勾配に沿って画線接種法に より接種し、３７℃にて４８時間培養した。バクテリアの成長が停止した点にお けるｐＨを、フラットヘッド電極および「アルカライト（Ａｌｋａｌｉｔｅ）Ｊ ｐＨストリップ（メルク（！Ａｅｒｃｋ）：ドイツダルムシュタット）で測定し た。 ９、　性ｎｏ、　１４〜２２：炭水化物の利用以下の成分（蒸留水１１中のｇ数 で表示）：酵母抽出液１．０；　ＫＮｏｓ　ｔｏ、ｏ；　Ｋｔ）［ＰＯａ　１． ０：　Ｍｇ５（Ｌ・７Ｈｔ００．２；　ＮａＣｌ　４０．０；　ＮａｔＣＯｓ　 ｌＯ，Ｑ；寒天２０．０を含有する最小培地に、テストすべき炭水化物２．０ｇ ／ｌを補充し、方形のペトリ皿に注いだ。アルカリ栄養ブロス培地（培地Ａ）中 で４８時間培養したバクテリア懸濁液１．Ｏｍｌから２５ポイントのマルチポイ ント接種装置を使用してバクテリアを接種した。該寒天プレートを３７℃にて４ ８時間インキュベートした。結果を、テストすべき炭水化物を含まない最小培地 上での成長と、炭水化物を補充した最小栄養培地上での成長とを比較することに より記録した。 非好アルカリ性の参考菌株を、同一の組成をもつが、ｐＨを６．８−７．０とす るためにＮａ、ＣＤ、を含まない培地を使用して、同様な方法でテストした。 １０、性ａＮｏ、　２３〜５４　：炭素基質上での成長市販品として入手できる テストストリップＡＴＢ　３２　ＧＮ（ＡＰＩ−／＜イオメリｘ　（ｂｉ。 Ｍｅｒｉｅｕｘ）：フランス国、ラバルムレグロット）を使用した。該ストリッ プは製造業者の指示に従って使用したが、与えられた基本培地のバイアルに、４ ％のＮａＣ１および１％のＮａ　ｘ　ＣＯｓを含む溶液１ｍｌを添加した。該ス トリップを３７℃にて４８時間イン非好アルカリ性の参考菌株を該標準的な基本 培地中でインキュベートした。 １１、性ａｏ、ｓｓ〜７３：酵素活性 市販品として入手できるテストストリップＡＰＩＺＹＭ（ＡＰＩ−バイオメリュ ー（ｂｉＯＭｅｒｉｅｕｘ））を使用した。該ストリップは製造業者の指示に従 って使用したが、好アルカリ性バクテリア細胞をアルカリ栄養ブロス培地（培地 Ａ）中に懸濁した。該ストリップを３７℃にて２４時間インキュベートした。 １２、性ｔＡＩｏ、　７４〜８３　：炭素および窒素源としてのアミノ酸テスト １４−２１と同様の技術を利用した。但し、最小栄養培地か６曙０．を除去した 。 （培地Ａ）の表面に展開し、乾燥させた。市販品として入手できる抗生物質感受 性テストディスク（オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）またはマストラボラトリーズ（Ｍ ａｓｔ　Ｌａｂ。 ｒａｔｏｒｉｅｓ）：英国、マーセイダイド）を該寒天表面上に適用した。バク テリアを３７℃にて４８時間培養した。該抗生物質ディスクの回りの透明な領域 で感受性が示される。 １４、性撚ｏ、　１０６〜２００：バイオロッグ（Ｂｉｏｌｏｇ）　ＧＮ装置市 販品として入手できるバクテリア同定装置、ＧＮマイクロプレート（Ｍｉｃｒｏ ｐｌａｔｅｓＸ商標）（バイオロッグ社、米国、カリホルニア州、ヘイワード） を使用したがこれは９５種の炭素源の利用反応の実施を可能とする。該プレート を製造業者の指示に従って使用した。但し、好アルカリ性バクテリアを、ＮａＣ １４０，０およびＫＮｏ。 １０（ｇ／ｌ単位）を含み、４０％（ｗ／ｖ）＋７）ＮａｔＣＯｓ溶液″ｃ′ｐ Ｈを８．５〜！０１：調製し、濾過により滅菌した流体中に懸濁した。これらの バクテリア細胞懸濁液を、モデル９００−３クレツトーサマージン（Ｋｌｅｔｔ −３ｕｍｍｅｒｓｏｎ）光電比色計（緑色フィルタ装備）上で光学密度５ｏ−ｔ ｏｏ単位（マツクファーランド（ＭａｃＦａｒｌａｎｄ）スケールでほぼ２に等 しい）に調節した。これらのプレートにバクテリアを接種し、かつ湿潤チャンバ ー内で３７℃にてインキュベートした。該プレートを６および２４時間において 読み取り、結果を肉眼観察およびマイクロプレートリーダー（アンソス（Ａｎｔ ｈｏｓ）モデル２００１（６２０ｔｕｇで）またはダイナチック（Ｄｙｎａｔｅ ｃｈ）モデルＭＲ６００（５７０ｎｍ））により記録した。 て培養しまた他の全ての菌株は３７℃にて培養した。 アペンディックスＣ：数値的分類法による解析のための単位テストＩ、コロニー の色　白　＝１　使用せず黄色　・４ 橙色　・５ ピンク　；６ 褐色　＝７ 赤　＝８ ２、コロニー形状　円形　：ｌ　使用せず不夫費Ｊ１リ　＝２ 点状　・３ ３、コロニー隆起　凸状　＝１　使用せず隆起　＝２ 突起状　：３ 平坦　；４ ４、コロニー縁部　金縁　＝１　使用せず波状　＝２ 裂片状　＝３ ６、細胞形態　棒状　；ｌ＝０ 球状桿菌　＝１；０ 球菌　・２　＝１ ７、グラム−染色性　正　・ｌ　＝０ 負　＝２＝１ ８、オキシダーゼ反応性　正　＝１＝０負　＝２＝１ ９、アミノペプチダーゼ反応性　正　＝１　＝０負　＝２＝１ １０、ゼラチン加水分解　正　＝１＝０負　＝２　＝１ １１、　スキンミルクテスト　正　＝ｌ：０負　＝２＝１ １２、ＮａＣ１耐性　０−４％で成育　＝１　使用せず０−８ｘで成育　＝２ ０−１２％で成育　＝３ ０−１５％で成育　＝４ ０ｘでのみ成育　＝５ ４−１５％でのみ成育　＋６ １３、栄養寒天上での最低　ｐＨ７，０＝７　使用せず成育ｐＨｐＨ７，５＝　 ７．５ ｐＨ８，０＝８ ｐＦｌ　ｓ、ｓ　＝　８．５ ｐＨ９，０＝９ ｐＨ９，５＝　９．５ ｐＨ１０、ｏ＝ｉ。 １４．７マレート　増強された成長　＝２＝１１５、フルクトース　成長に変化 なし　＝１＝Ｏ１６、サクシネート　阻害された成長　＝０　＝０１７、　ホル メート １８、ラクトース １９、ガラクトース ２０、キシロース ２１、ピルベート 二犯！見−一一−−一−−−一一−−一−−□−２４、Ｎ−アセチルグルコース アミン ２５、Ｄ−リポース ２６、イノシトール ２７、Ｄ−サッカロース　正　８１　２０２８、マルトース　負　＝２＝１ ２９、イタコネート ３３、　ＤＬ−ラクテート ３６、Ｄ−グルコース ３７、サリシン ３８、Ｄ−メリビオース ３９、Ｌ−フコース ４０、Ｄ−ソルビトール ４１、　Ｌ−アラビノース ４２、プロピオネート ４６、ヒスチジン ４７．５−ケトグルコネート ４８、グリコーゲン ４９．３〜ヒドロキシベンゾネート ５０、Ｌ−リジン ５１．２〜ケトグルコネート ５２．３−ヒドロキシブチレート ５３．４−ヒドロキシベンゾエート ５５、アルカリホスファターゼ ５６、エステラーゼ（Ｃ４） ５７、エステラーゼ：リパーゼ（Ｃ８）５８、リパーゼ（Ｃ１４） ５９、ロイシンアリールアミダーゼ ６０、バリンアリールアミダーゼ ６１、　シスチンアリールアミダーゼ ６２、トリプシン　正　＝１　＝０ ６３、キモトリプシン　負　＝２　・１６４、アシッドホスファターゼ ６５、ナフトール−ＡＳ−Ｂｌ−ホスホヒドロラーゼ６６、α−ガラクトシダー ゼ ６７、β−ガラクトシダーゼ ６８、β−グルクロニダーゼ ６９、α−グルコシダーゼ ７０、β−グルコシダーゼ ７１、Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ７２、α−マンノシダーゼ ７３、α−フコシダーゼ ７４−８３炭素源および窒素源としてのアミノ酸７４、セリン ７５、プロリン ７６、アスパラギン ７７、フルギニン　増強された成長　；２＝１７８、アラニン　成長に変化なし 　＝１＝０７９、リジン　阻害された成長　＝０　・０８４−１０５　抗生物質 感受性 ８４、ゲンタマイシン　１０８ｇ ８５、ニトロフラントイン　５０μｇ ８６、アンピシリン　２５μｇ ８７、ナリジキシン酸　３０μｇ ８８、サルファメトキサゾール　５０μｇ８９、トリメトプリム　２．５μｇ ９０、ペニシリンに　ｉ　ｔｕ ９１、クロラムフェニコール　２５μｇ９２、エリスロマイシン　５μｇ　抗生 物質感受性９３、フシジン酸　ｔｏＢ　成長阻害　・２　・１９４、メチシリン 　１０μｇ　抗生物質感受性９５、ノボビオシン　５μｇ　成長阻害なし＝１； ０９６、ストレプトマイシン　ｌＯμｇ ９７、テトラサイクリン　２５μｇ ９８、サルファフラジール　１００μｇ９９゜オレアンドマイシン　５μｇ １００、ポリミキシン　３００１Ｕ １０１、リファンピシン　２μｇ １０２、ネオマイシン　３０μｇ １０３、パイコマイシン　３０μｇ １０４、カンマイシン　３０μｇ Ｉ０５．バシトラシン　＋０１０ １０６−２００バイオログ（Ｂｉｏｌｏｇ）　ＧＮ系１０６、α−シクロデキス トリン １０７、デキストリン ＋０８．グリコーゲン １０９、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）　４０１１０、　ツイーン８０ Ｉｌｌ、　Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトースアミン１１２、　Ｎ−アセチル−Ｄ −グルコサミン１１３、アドニトール １１４、　Ｌ〜アラビノース １１５、０−アラビトール １１６、セロビオース １１７、ｔ−エリスリトール １１８、０−フルクトース １１９、　Ｌ−フコース １２０、０−ガラクトース １２１、ゲンチオビオース　負　＝ｌ：０１２２、α−Ｄ−グルコース　正　＝ ２；１１２３、　ｍ−イノシトール　弱い正　；３＝ｌ１２４、α−ラクトース １２５、ラクツロース １２６、マルトース １２７、Ｄ−マニトール １２８、０−マンノース １２９、０−メリビオース １３０、β−メチルグルコシド １３１、ブシコース １３２、０−ラフィノース １３３．　Ｌ−ラムノース １３４、　Ｄ−ソルビトール １３５、スクロース １３６、　Ｄ−トレハロース １３７、ツラノース １３８、キシリトール １３９、メチルピルベート １４０、七ノーメチルサクシネート １４１、酢酸 １４２、　ｃｉｓ−アコニツト酸 １４３、クエン酸 １４４、蟻酸 １４５、　Ｄ−ガラクトン酸ラクトン １４６、０−ガラクツロン酸 １４７、　Ｄ−グルコン酸 １４８、０−グルコサミン酸 １４９、０−グルクロン酸 １５０、α−ヒドロキシ酪酸 １５１、β−ヒドロキシ酪酸 １５２、γ−ヒドロキシ酪酸 １５３、　ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸１５４、イタコン酸 １５５、α−ケト酪酸 １５６、α−ケトグルタル酸 １５７、α−ケトバレリン酸 １５ｇ、　ＤＬ−乳酸 １５９、マロン酸 １６０、プロピオン酸 １６１、キナ酸 １６２、０−糖酸 １６３、セバシン酸 １６４、コハク酸 １６５、プロモーコハク酸 １６６、サクシンアミド酸 １６７、グルクロンアミド １６８、アラニンアミド １６９、　Ｄ−アラニン １７０、　Ｌ−アラニン １７１、　Ｌ−アラニルグリシン １７２、　Ｌ−アスパラギン １７３、　Ｌ−アスパラギン酸 １７４、　Ｌ−グルタミン酸 １７５、グリシル−し−アスパラギン酸１７６、グリシル−し−グルタミン酸 １７？、　Ｌ−ヒスチジン １７８、ヒドロキシし一プロリン １７９、　Ｌ−ロイシン １８０、　Ｌ−オルニチン ｉｓｔ、　ｔ−フェニルアラニン １８２、　Ｌ−プロリン １８３、　Ｌ−ピログルタミン酸 １８４、０−セリン １８５、　Ｌ−セリン １８６、　Ｌ−スレオニン １８７、　ＤＬ−カルニチン １８８、γ−アミノ酪酸 １８９、ウロカニン酸 １９０、イノシン １９１、ウリジン １９２、チミジン １９３、フェニルエチルアミン １９４、プトレッシン １９５、２−アミノエタノール １９６、２．３−ブタンジオール １９７、グリセロール １９８、　ＤＬ−α−グリセロールホスフェート１９９、グルコース−１−ホス フェート２００、グルコース−６−ホスフェート［６１細胞形態　６０　０　０ 　０　０　０［７］グラム−染色　１００　１００　１００　１００　１００　 １００［８１才キシダーゼ反応　２０　６０　０　２５　８３　７５

〔９〕アミ ノペプチダーゼ　４０　０　０　２５　０　０［ｌＯ］ゼラチン　１００　１０ ０　１００　０　１００　１００川］スキンミルク　２０　６０　５０　０　４ ０　２５［１４］フマレート　２０　２０　７５　０　８３　５０［１５１フル クトース　６０　８０　７５　０　８３　１００【１６］サクシネート　６０　 ２０　１００　５０　５０　７５［１７１ホルメート　００２５００２５［１ｇ ］ラクトース　０　２０　０　０　１７　０［１９１ガラクトース　２０　２０ １００　０　１７　０［２０］キシロース　０　４０　０　０　１７　２５［２ １〕　ピルベート　４０　４０　７５　０　５０　５０［２２］澱粉　８０　１ ００　７５　７５　１００　１００［２３］ラムノース　２０　２０　０　Ｑ　 １７　７５［２４］　Ｎ−アセチルグルコース　０　２０　５０　２５　１００ 　１００アミン ［２５］　Ｄ−リボース　０　２０　２５　０　６７　７５［２６１イノシトー ル　２０　４０　２５　０　３３　７５［２７］　Ｄ−サッカロース　０　８０ 　２５　０　１００　１００［２８］マルトース　２０　１００　０　２５　１ ００　１００［２９］イタコネート　０　２０　０　０　０　０［３０］スベレ ート４０　２０　０　０　５０　５０［３１］マロネート　６０　２０　０　２ ５　６７　２５［３２］アセテート２０　４０　０　７５　１００　１００［３ ３］　ＤＬ−ラクテート６０　４０　２５　２５　８３　１００［３４］　Ｌ− アラニン　２０　２０　０　２５　８３　５０［３５１マニトール　２０　６０ 　２５　Ｑ　８３　１００［３６］　Ｄ−グルコース　２０　８０　０　２５　 １００　１００［３７］サリシン　０　１００　５０　２５　６７　１００［３ ８］　Ｄ−メリビオース　０　４０　０　０　５０　１００［３９］　Ｌ−フコ ース　０　２０　０　０　０　２５［４０］　Ｄ−ソルビトール　２０　２０　 ２５　０　１？　７５［４１１Ｌ−アラビノース　０　２０　０　０　５θ　７ ５［４２］プロピオネート　０　０　０　７５　８３　１００［４３］カプレー ト　ｏ　ｏ　ｏ　ｏ　ｓｏ　ｓ。 ［４４］バレレー）　２０　０　０　５０　８３　５０［４５］　シトレート　 ２０　２０　０　２５　８３　１００［４６１ヒスチジン　０　０　０　２５　 ５０　０［４７１５−ケトグルコネート　０　０　０　０　１７　５０［４８］ グリコーゲン　０　８０　０　０　１００　１００［４９］　３−ヒドロキシベ ンゾエート　２０　０　０　０　０　０［５０１Ｌ−リジン　４０　０　２５　 ０　１７　１００［５１１２−ケトグルコネート　２０　２０　０　０　６７　 ７５［５２］　３−ヒドロキシブチレート　０　４０　０　５０　６７　７５［ ５３］　４−ヒドロキシベンゾエート　２０　２０　０　０　０　０［５４］　 Ｌ−プロリン　４０　４０　Ｑ　２５　８３　１００［５５１アルカリホスフア ターゼ　８０　１００　１００　１００　８３　１００［５６Ｊエステラーゼ（ Ｃ４）　１００　１００　１００　１００　１００　１００［５７］エステラー ゼ；リパーゼ（Ｃ８）　１００　１００　１００　１００　１００　１００［５ ８］リパーゼ（Ｃ１４）　０　２０　０　５０　０　０［５９Ｊロイシンアリー ルアミダーゼ　４０　８０　１００　１００　３３　１００［６０］バリンアリ ールアミダーゼ　２０　２０　５０　７５　０　０［６１７シスチンアリールア ミダーゼ　θ　０　２５　５０　１７　０〔６２〕トリプシン　２０　０　５０ 　２５　０　７５Ｌ６３〕キモトリプシン　４０　２０　７５　２５　１００　 ０［６４］アシツドホスフアターゼ　１００　６０　１００　１００　１００　 １００［６５］ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−ホスホ　２０　６０　５０　５０　５ ０　１００ヒドロラーゼ ［６６］α−ガラクトシダーゼ　２０　６０　２５　０　１７　１００［６７１ β−ガラクトシダーゼ　４０　２０　２５　０　５０　１００［６８Ｊβ−グル クロニダーゼ　２０　２０　０　０　１７　１００［６９］α−グルコシダーゼ 　１００　８０　７５　１００　８３　１００［７０〕β−グルコシダーゼ　２ ０　１００　１００　０　３３　１００［７１１Ｎ−アセチル−β−ゲルコサ　 ２０　２０　０　０　０　７５ミニダーゼ Ｃ７２１α−マンノシダーゼ　Ｑ　４０　２５　θ　０　７５［７３］α−フコ シダーゼ　ｏ　ｏｏ　ｏ　ｏ　。 Ｃ７４〕セリン　０　１００　０　７５　５０　０［７５］プロリン　８０　８ ０　１００　１００　８３　０［７６１アスパラギン　６０　４０　１００　１ ００　５０　０［７７］アルギニン　０　４０　１００　１００　３３　０［７ ８］アラニン　４０　４０　２５　７５　３３　５０〔７９］リジン　２０　６ ０　５０　７５　５０　２５［８０］メチオニン　０　１００　ｎｃ　１００　 ３３　２５［８１］フエニルアラニン　８０　６０　１００　１００　５０　２ ５［８２］グリシン　２０　６０　０１００　３３　０［８３］バリン　０　６ ０　２５１００　１７　０［８４Ｊゲンタマイシン　６０　０　５０　５０　５ ０　２５［８５］ニトロフラントイン　５０　２０　０　５０　０　０［８６１ アンピシリン　８０　１００　０　１００　１００　２５［８７］ナリジキシン 酸　０　２０　０　０　０　０〔８８コサルフアメトキサゾール　ｏ　ｏ　ｏｏ 　ｏ　。 ［８９］トリメトプリム　２５　０　２５　５０　８３　５０［９０］ペニシリ ンＧ　１００　６０　０　５０　８３　０［９１］クロラムフエニコール　ｇｏ 　ｓｏ　ｔｏｏ　ｔｏｏ　１００　７５〔９２〕エリスロマイシン　１００　１ ００　１００　１００　１００　２５［９３］フシジン酸　ｉｏｏ　ｔｏｏ　ｓ ｏ　ｔｏｏ　１００　７５［９４１メチシリン　１００　１００　０　１００　 ｉｏｏ　２５（９５］ノボビオシン　０　２５　０　０　０　２５［９６］スト レプトマイシン　４０　８０　５０　７５　６７　０［９７Ｊテトラサイクリン 　８０　６０　０　１００　１００　２５［９８］サルフア７ラゾール　２５　 ２５　ｎｃ　１００　３３　２５Ｆ９９］オレアンドマイシン　１００　１００ 　１００　１００　８３　０［１００１ポリミキシン　４０　２０　０　０　０ 　０［１０１１リフアンピシン　ｉｏｏ　ｉｏｏ　ｉｏｏ　ｔｏｏ　ｔｏｏ　ｔ ｏ。 ［１０２１ネオマイシン　０００５０１７０［１０３］バイコマイシン　１００ 　８０　１００　１００　１００　５０［１０４］カンマイシン　０　０　０　 ０　１７　０［１０５］バシトラシン　１００　１００　１００　１００　８３ 　０［１０６１α−シクロデキストリン　０　２０　２５　１００　１７　２５ ［１０７］デキストリン　１００　６０　７５　７５　１００　７５［１（１８ ］グリコーゲン　６０　１１ｉ（＋　５０　７５　８３　７５［１０９］ツイー ン（Ｔｗｅｅｎ）４０　０　０　０１００　０　０［１１０１ツイーン８０　０ ００７５００［１１１１Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクト−ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 スアミン ［１１２］　Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン　４０　４０　１００　０　５０ 　５０［１１３］アドニトール　０　２０　５０　０　０　０［１１４］　Ｌ− アラビノース　０　２０　５０　０　１７　０［１１５］　Ｄ−アラビトール　 ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１１６］セロビオース　０　４０　１００　０　５０　０［１１７］　ｉ−エ リスリトール　００２５５０００［１１８］　Ｄ−フルクトース　１００　１０ ０　１００　１００　１００　１００［１１９］　Ｌ−フコース　Ｑ　６０　５ ０　２５　３３　７５［１２０１Ｄ−ガラクトース　２０　Ｑ　５０　０　１７ 　２５［１２１］ゲンチオビオース　４０　６０　１００　２５　６７　１００ Ｅ１２２１α−Ｄ−グルコース　１００　１００　１００　１００　８３　１０ ０［１２３］　ｍ−イノシトール　０　０　５０　０　３３　１００［１２４］ α−ラクトース　０　０　０　０　１７　０［１２５］ラクツロ〜ス　ｏ　ｏ　 ｏｏ　ｏ　。 ［１２６］マルトース　１００　１００　１００　５０　１００　１００［１２ ７］　Ｄ−マニトール　０　４０　５０　０　３３　５０［１２８］　Ｄ−マン ノース　１００　１００　１００　２５　１００　１００［１２９］　Ｄ−メリ ビオース　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１３０１β−メチルグルコシド　０　４０　７５　０　３３　０［１３１］プ シコース　８０　８０　５０　５０　８３　１００［１３２］　Ｄ−ラフィノー ス　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１３３］　Ｌ−ラムノース　ｏ　ｏ　ｓｏ　ｏ　ｏ　。 Ｃ１３４］　Ｄ−ソルビトール　６０．　５（１７５０８３１００［１３５］ス クロース　１００　８０　１００　２５　８３　５０［１３８１Ｄ−）レバロー ス　１００　１００　１００　０　１００　１００［１３７］ツラノース　４０ 　８０　２５　０　１００　１００［１３８］キシリトール　０　２０　０　０ 　０　０［１３９］メチルピルベート６０　８０　０１００　３３　７５［１４ ０］モノ−メチルサクシネート　４０　２０　０１００　０　０［１４１］酢酸 　１００　６０　２５　７５　５０　７５［１４２］　ｃｉｓ−アコニット酸　 ０　０　０　０　０　０［１４３］クエン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１４４］蟻酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１４５］　Ｄ−ガラクトン酸ラクトン　０　０　２５　０　０　０［１４６］ 　Ｄ−ガラクツロン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１４７］　Ｄ−グルコン酸　０　０　５０　０　０　０［１４８］　Ｄ−グル コサミン酸　ｏ　ｏ　ｓｏ　ｏ　ｏ　。 ［１４９］　Ｄ−グルクロン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１５０１α−ヒドロキシ酪酸　０００５０００［１５１］β−ヒドロキシ酪酸 　０　０　２５１００　１７　０［１５２］　γ−ヒドロキシ酪酸　０　４０　 ５０　７５　ＩＴ　２５［１５３］　１）−ヒドロキシフェニル酢酸　０　０　 ００　０　０［１５４］イタコン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１５５］α−ケト酪酸　１００　６０　０　１００　８３　７５［１５６］α −ケトグルタル酸　０００２５００［１５７］　α−ケトバレリン酸　８０　２ ０　０　７５　０　０［１５８］　ＤＬ−乳酸　６０　２０　０　５０　１７　 Ｇ［１５９］マロン酸　０００２５００ ［１６０］プロピオン酸　１００　６０　５０　７５　６７　７５［１６１］キ ナ酸　０　０　０　０　０　２５［１６２１Ｄ−糖酸　ｏ　Ｏ（１０ｏ　。 ［１６３］セバシン酸　０００２５００［１６４］　コハク酸　０　０　２５　 ７５　１７　０［１６５］プロモーコハク酸　ｏ　ｏ　０１００　１７　Ｑ［１ ６６］サクシンアミド酸　４０　０　２５　７５　１７　２５［１６７］グルク ロンアミド　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１６８］アラニンアミド　８０　０　０　０　３３　０［１６９］　Ｄ−アラ ニン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１７０１Ｌ−アラニン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１７１］Ｌ−アラニルグリシン　０　０　２５　０　０　０［１７２］　Ｌ− アスパラギン　０　０　２５　０　１７　２５［１７３］　Ｌ−アスパラギン酸 　０　０　２５　０　１７　０［１７４］　Ｌ−グルタミン酸　０　０　０　０ 　１７　０［１７５］グリシル−し−アスパラギン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１７６］グリシル−し−グルタミン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１７７］　Ｌ−ヒスチジン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１７８］　ヒドロキシし一プロリン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１７９］　Ｌ−ロイシン　２０　０　０　０　０　０［１８０１Ｌ−オルニチ ン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１８１１Ｌ−フェニルアラニン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１８２］　Ｌ−プロリン　０　０　０　０　０　２５［１８３］　Ｌ−ピログ ルタミン酸　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１８４］　Ｄ−セリン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１８５］　Ｌ−セリン　０　０　００　０　０［１８６］　Ｌ−スレオニン　 ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１８７］　ＤＬ−カルニチン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１８８］γ−アミノ酪酸　００２５００Ｇ［１８９］ウロカニン酸　ｏ　ｏ　 ｏｏ　ｏ　。 ［１９０１イノシン　４０　２０　１００　０　３３　０［１９１１ウリジン　 ６０　４０　１００　Ｑ　５０　０［１９２］チミジン　８０　２０　５０　５ ０　８３　０［１９３］フエニルエチルアミン　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１９４）プトレッシン　ｏ　ｏ　ｏｏ　。 ［１９５］　２−アミノエタノール　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ［１９６１２，３−ブタンジオール　０　０　２５　０　０　０［１９７］グリ セロール　８０　２０　５０　２５　３３　１００［１９８］　ＤＬ−α−グリ セロールホス　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 フェート ［１９９］グルコース−１−ホスフェート　０　０　００　０　０［２００］グ ルコース−６−ホスフェート　ｏ　ｏ　ｏｏ　ｏ　。 ７１Ｇ、　４　ｎ、　ｔ、　＋＋＋ ８１ＬＮ、４　＋　ｎ、ｔ、　＋ ６０８、４　＋　ｎ、　ｔ、　＋　＋ ６９Ｂ、４　ｎ、ｔ、　＋　＋　＋　＋Ｒ３ＩＩ”　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　 ＋Ｒ５１４ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　＋ Ｒ５１３ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　＋　÷ｗＮｌＯ＋　＋ ｗＮ１２　＋　＋ ６６Ｂ、４　＋　ｎ、ｔ、　＋　＋ ＡＢ３０　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　ｎ−ｔ、　ｎ、ｔ。 Ｒ５ｌ０ｃ？ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　＋Ｒ５ｌ７ｎ、ｔ、ｎ、ｔ、＋＋ ＡＢ４９　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ。 Ｒ３７ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　＋ ＲＳ８”　ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　÷　＋Ｒ３１５ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　＋ Ｒ３１６ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　− ７９ＬＮ、４　＋　ｎ、ｔ、　＋　＋ Ｒ５１２ｎ、ｔ、　ｎ、ｔ、　＋　＋ ７２Ｃ，４ｎ、ｔ、　＋　＋　＋ ８０ＬＮ、４　ｎ、ｔ、　＋　＋　− ｎ、ｔ、：テストせず。 国際調査報告 −ＰＣＴ／ＭＬ　９２１００１０９ 、　、、　ＰＣＴ／ＩＩＬ　９２１００１０９フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃｌ２Ｒ１：０１） （Ｃ１２Ｎ　１／２０ Ｃ１２Ｒ１：０７） （Ｃ１２Ｎ　９／２０ Ｃ１２Ｒ１：０１） （Ｃ１２Ｎ　９／２４ Ｃ１２Ｒ１：０１） （、Ｃ１２Ｎ　９１５２ Ｃ１２Ｒ１：０１） （７２）発明者　グランド　ウィリアム　ダンカンイギリス　レスター　エルイ ー５５テイーキユー　セント　フィリップス　ロード（７２）発明者　コリンズ 　ナディーン　フレアイギリス　サリー　アールエイチ４　３キユーダブリユー 　トーキング　ウェストコツト　ワトソン　ロード　２５

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが以下の諸特性を有する好気性で、グラムー陽性の、球状偏性好アルカ リ性バクテリアであることを特徴とする上記培養物：ａ）橙色の円形コロニーを 形成し、 ｂ）ｐＨ約１０において最適成長し、 ｃ）以下のテストに関して正の応答を与え、１）ゼラチン加水分解 ２）ペニシリンＧ ３）メチシリン ４）バシトラシン ｄ）以下のテストに関して負の応答を与える１）Ｎ−ルアセチルグルコースアミ ン ２）Ｄ−サッカロース ３）サリシン ４）Ｄ−メリビオース ５）プロピオネート ６）グリコーゲン ７）３−ヒドロキシ酪酸 ８）セリン ９）アルギニン １０）メチオニン １１）バリン １２）セロビオース。
2. ２．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが以下の諸特性を有する好気性で、グラムー陽性の、短い、不規則な桿 状の偏性好アルカリ性バクテリアであることを特徴とする上記培養物：ａ）タリ ームー黄色の、小さな円形のコロニーを形成し、ｂ）ｐＨ８以上において最適成 長し、 ｃ）以下のテストに関して正の応答を与え、１）ゼラチン加水分解 ２）ガラクトース ３）β−グルコシダーゼ ４）アルギニン ５）バシトラシン ６）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコースアミン７）セロビオース ８）イノシン ９）ウリジン ｄ）以下のテストに関して負の応答を与える１）マルトース ２）アセテート ３）Ｄ−グルコース ４）Ｄ−メリビオース ５）プロピオネート ６）バレレート ７）グリコーゲン ８）セリン ９）アンピシリン １０）ペニシリンＧ １１）メチシリン １２）テトラサイクリン １３）メチルピルベート １４）モノ−メチルサクシネート １５）α−ケト酪酸。
3. ３．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが以下の諸特性を有する好気性で、グラムー陽性の、コリネ型の偏性好 アルカリ性バクテリアであることを特徴とする上記培養物：ａ）成熟コロニーは 輝いた鮮明な橙／赤色であり、ｂ）ｐＨ約９〜１０の範囲内において最適成長し 、ｃ）以下のテストに関して正の応答を与え、１）アルギニン ２）メチオニン ３）グリシン ４）バリン ５）メチシリン ６）テトラサイクリン ７）バシトラシン ８）α−シクロデキストリン ９）ツイーン４０ １０）メチルピルベート １１）モノ−メチルサクシネート １２）β−ヒドロキシ酪酸 １３）ブロモ−コハク酸 ｄ）以下のテストに関して負の応答を与える１）ゼラチン加水分解 ２）フマレート ３）フルクトース ４）ガラクトース ５）Ｄ−サッカロース ６）Ｄ−メリビオース ７）グリコーゲン ８）Ｌ−セリン ９）β−グルコシダーゼ １０）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコースアミン１１）セロビオース １２）Ｄ−ソルビトール １３）Ｄ−トレハロース １４）ツラノース。
4. ４．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが本質的に以下の諸特性を有する好気性の、グラムー陽性の、球菌また は短い桿歯状の偏性好アルカリ性バクテリアからなることを特徴とする上記培養 物： ａ）細胞はしばしば対として見出され、Ｖ−字型の配列を与える細胞分割の特徴 的な折れ曲がった形状を呈し、 ｂ）ｐＨ８以下において成長せず、 ｃ）アルカリー寒天培地上で、不透明な、笹色の点状または円形のコロニーを形 成し、 ｄ）アルカリーブロス中で、成育（３７℃）は凝集性で、沈殿物および表面リン グの形成を伴い、 ｅ）約３０℃以上で最適に成育し、４０℃以上で成育せず、ｆ）０−１０％の範 囲内のＮａＣ１濃度の下で成育し、１２％ＮａＣ１濃度において成育せず、 ｇ）酵母抽出物、ペプトンおよび炭水化物上で成育し、ｈ）カタラーゼ反応テス トに関して正の応答を与え、ｉ）以下のテストに関して負の応答を与える：１） ＫＯＨ ２）アミノペプチダーゼ ３）オキシダーゼ ４）ゼラチン加水分解 ５）澱粉加水分解。
5. ５．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが本質的に以下の諸特任を有する好気性の、グラムー陽性の、直線状ま たは僅かに湾曲した桿状の偏性好アルカリ性バクテリアからなることを特徴とす る上記培養物： ａ）細胞はしばしば対として見出され、Ｖ−字型の配列を与える細胞分前の特徴 的な折れ曲がった形状を呈し、 ｂ）ｐＨ８以下において成長せず、 ｃ）アルカリー寒天培地上で、不透明な、黄色／オークル色の円形のコロニーを 形成し、 ｄ）１０〜４０℃の範囲内で成育し、４５℃にて成育せず、ｅ）０−１２％の範 囲内のＮａＣ１濃度の下で成育し、１５％ＮａＣ１濃度において成育せず、 ｆ）酵母抽出物上で成育し、 ｇ）以下のテストに関して正の応答を与え、１）カタラーゼ反応 ２）ゼラチン加水分解 ｈ）以下のテストに関して負の応答を与える：１）ＫＯＨ ２）アミノペプチダーゼ ３）オキシダーゼ ４）澱粉加水分解
6. ６．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが本質的に以下の諸特性を有する好気性の、グラムー陽性の、直線状ま たは僅かに湾曲した桿状の偏性好アルカリ性バクテリアからなることを特徴とす る上記培養物： ａ）細胞はしばしは対として、時には２〜４個の細胞の短い鎖として見出され、 ｂ）ｐＨ７．５以下において成長せず、ｃ）アルカリー寒天培地上で、円形の、 クリーム色のコロニーを形成し、ｄ）１０〜４５℃の範囲内で成育し、５０℃に て成育せず、ｅ）０−１５％の範囲内のＮａＣ１濃度の下で成育し、ｆ）以下の テストに関して正の応答を与え、１）カタラーゼ反応 ２）オキシダーゼ反応 ３）ゼラチン加水分解 ４）澱粉加水分解。 ｄ）以下のテストに関して負の応答を与える：１）ＫＯＨ ２）アミノペプチダーゼ。
7. ７．アルカリ耐性酵素の製造のために有用な純バクテリア培養物であって、該バ クテリアが本質的に以下の諸特性を有する好気性の、グラムー陽性の、偏性好ア ルカリ性バクテリアからなることを特徴とする上記培養物：ａ）細胞は初め球状 で、発育して短い桿状となり、Ｖ−字型の配列を与える細胞分割の特徴的な折れ 曲がった形状を呈し、ｂ）ｐＨ８以下において成長せず、 ｃ）アルカリー寒天培地上で、円形、凸状、全縁型の不透明な、橙乃至濃いサー モンピンク色のコロニーを形成し、ｄ）１０〜３７℃の範囲内で成育し、４０℃ にて成育せず、ｅ）酵母抽出物上で成育し、 ｆ）０−１２％の範囲内のＮａＣ１濃度の下で成育し、ｇ）以下のテストに関し て正の応答を与え、１）カタラーゼ反応 ２）アミノペプチダーゼ ３）ゼラチン加水分解 ｈ）以下のテストに関して負の応答を与える：１）ＫＯＨ ２）オキシダーゼ ３）澱粉加水分解。
8. ８．請求の範囲第１項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バク テリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
9. ９．請求の範囲第２項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バク テリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
10. １０．請求の範囲第３項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バ クテリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
11. １１．請求の範囲第４項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バ クテリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
12. １２．請求の範囲第５項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バ クテリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
13. １３．請求の範囲第６項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バ クテリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
14. １４．請求の範囲第７項に記載のバクテリアを適当な培養培地中で培養し、該バ クテリアを該培地から分離し、 該培養培地から酵素活性を回収する、 工程を含むことを特徴とするアルカリ耐性酵素の調製方法。
15. １５．請求の範囲第８項に記載の酵素の実質的に純粋な処方物であって、該酵素 かタンパク分解、脂質分解および澱粉分解活性からなる群から選はれる活性を有 することを特徴とする上記処方物。
16. １６．請求の範囲第９項に記載の酸素の実質的に純粋な処方物であって、該酵素 がタンパク分解、脂質分解および澱粉分解活性からなる群から選ばれる活性を有 することを特徴とする上記処方物。
17. １７．請求の範囲第１０項に記載の酵素の実質的に純粋な処方物であって、該酵 素が脂質分解および澱粉分解活性からなる群から選ばれる活性を有することを特 徴とする上記処方物。
18. １８．請求の範囲第１１項に記載の酸素の実質的に純粋な処方物であって、該酵 素が脂質分解活性を有することを特徴とする上記処方物。
19. １９．請求の範囲第１２項に記載の酵素の実質的に純粋な処方物であって、該酵 素がタンパク分解および脂質分解活性からなる群から選ばれる活性を有すること を特徴とする上記処方物。
20. ２０．請求の範囲第１３項に記載の酵素の実質的に純粋な処方物であって、該酵 素がタンパク分解、脂質分解および澱粉分解活性からなる群から選ばれる活性を 有することを特徴とする上記処方物。
21. ２１．請求の範囲第１４項に記載の酵素の実質的に純粋な処方物であって、該酵 素がタンパク分解、脂質分解および澱粉分解活性からなる群から選ばれる活性を 有することを特徴とする上記処方物。