JPH06501477A - 有害生物の生物学的抑制 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 有害生物の生物学的抑制 本発明は、有害生物抑制の生物学的方法に関し、更に詳細にはＢａｃｆｌｌｕｓ 　ｔｈｕｒｉｎｇｆｅｎｓｊｓを用いて農業上、園芸上および公衆衛生上の有害 生物を防除するための方法および組成物に関する。

Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓは、昆虫を殺すことが以前より 知られている胞子形成細菌である。可否ものこの種の単離体（菌株）が報告され ている。これらの単離体の培養体は、米国農務省のアグリ力ルチュアル・リサー チ・サービス（ベオリア、イリノイ州）および多くの他の国際的収集組織によっ て整理記録されて保管されており・研究者は希望すれば入手することができる。

培養体の譲渡には、培養体収集に寄与した者の許諾を必要とするが、はとんどの 場合如何なる条件もなしに入手することができる。これらの単離体の活性のスペ クトルおよび特定の昆虫に対するそれらの効力は、極めて広範囲に変化する。

本発明は、植物や食用菌類に悪影響を与える双翅類の有害生物を抑制する目的で 、Ｂ、　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１を使用 することを特徴とするものである。したがって、本発明は、有害生物を抑制する 方法であって、生長している植物または他の園芸産物に、あるいはそれらが生育 している場所にこの亜種の単離体を適用することによって、農産物および園芸作 物を有害生物から保護する方法を包含している。本発明は、農業、園芸あるいは 公衆衛生用に配合された１種以上のＢ、　ｔｈｕｒｊｎｇｉｅｎｓｉｓ単離体を 含む組成物も包含する。前記の米国培養体収集組織にＨＤ５４１およびＨＤ５７ １として記載されている２種類の単離体は、本発明の目的にとって極めて有望で あることを示していた。

これらは、１９７９年８月（ＨＤ５４１）および１９７９年１２月（ＨＤ５７１ ）から米国培養体収集組織で入手することができ、制限なく利用できる。しかし ながら、これらを継続的に入手できるようにするために、本発明者らは、ブダペ スト条約に基づき１９９１年３月８日１こナショナル・コレクション・オブ・イ ンダストリアル・アンド・マリン・バクテリア（アバディーン、スコツトランド ）にこれらを寄託した。この寄託した菌株には受託番号ＮＣＩＭＢ　４０３７３ 　（ＨＤ　５４１　）およびＮＣＩＭＢ４０３７４　（ＨＤ５７１）が付けられ ている。

Ｂ、　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓの単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１は、双 翅類の昆虫Ａｅｄｅｓ　ａｅｇｙｐｔｉ　（蚊）に作用することが知られている 。しかしながら、この昆虫に対する活性は低く、蚊の抑制に現在用いられている 亜種である　Ｂ、　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｔｓ　１ｓｒａｅｌｅｎｓｊｓの活 性の約１００００分の１である。また単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１を、他 の種類の蚊に対しても試験したが、活性は低過ぎて実用には用いられないことが わかった。今までにわかったことであるが、本単離体は、蚊を除くある種の双翅 類の有害生物、特にギョウレツウジバエ（ｓｃｌａｒＩｄ　ｆｕｎｇｕｓ　ｇｎ ａｔｓ）のような植物やキノコの有害生物に対する極めて強力な殺虫剤である。

本単離体は、英国においてキノコ作物に大きな損害を与え、収穫高を著しく減少 させ、現在のところ主に化学殺虫剤ジフルベンズロンにより防除される有害生物 であるキノコバエ（ａ＋ｕｓｈｒｏｏｉ　５ｃｉａｒｉｄ）　Ｌｙｃｏｒｉｅｌ ｌａ　ａｕｒｉｐｉｌａの幼虫に対して高い活性を有する。同様な種であるり、 　１ｌａｌｆはアメリカ合衆国およびオーストラリアで同じ生態的地位を占めて いる。これらの有害生物に対する前記の単離体の活性例えば、前記の単離体は、 これらの有害生物抑制のために非常に必要とされている新規な薬剤を提供する。

キノコバエの外に、これらの単離体により抑制することができる他のキノコの有 害生物は、キノコノミバエ（ｍｕｓｈｒｏｏＩｌｐｈｏｒｉｄｓ）である。しか しながら、前記の単離体は、キノコノミバエ（ｒＡｕｓｈｒｏｏｍ　ｃｅｃｊｄ ）のような有害生物に対しては余り良好な活性を持たない。農業上重要な他の双 翅類の有害生物には、チチュウ力イミバエが含まれる。

前記のように、本発明は天然の単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１を利用するも のである。本発明は、天然単離体の変異体、組換体、誘導体にも適用することが でき、この単離体は双翅類の有害生物に対して活性である。この誘導体には遺伝 子操作により得られたものを包含する。

本発明はまた、前記の生物由来のデルタエンドトキシンの使用も包含する。

本発明は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｊｅｎｓｉｓのＨＤ５４１または ＨＤ５７１株またはそれらの誘導体若しくは変異体または前記に定義した方法に より生産した菌株から誘導した殺昆虫性物質を提供する。１つの態様では、この 殺昆虫性物質は胞子−結晶複合体である。

本発明はまた、上記に定義したような りａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓのＨＤ　５４１　（ＮＣＩＭＢ 　４０３７３）　またはＨＤ　５７１　（ＮＣＩＭＢ　４０３７４）株またはそ れらの誘導体若しくは変異体から誘導した殺昆虫性物質を、または担体、希釈剤 、界面活性剤または適用促進アジュバントのような農業用アジュバントと一緒に した前記定義の殺昆虫性物質を提供する。この組成物は、肥料、微量栄養素供給 体、植物生長製剤、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、殺バクテリア剤、殺線虫剤や殺 軟体動物剤およびそれらの混合物から選択される別種の生物活性を有する化合物 を含んでもよい。本組成物は、重量で０．１ないし９９％のＢａｃｉｌｌｕｓ　 ｔｈｕｒｉｎｇｌｅｎｓｉｓＨＤ　５４１またはＨＤ５７１あるいはそれらの誘 導体若しくは変異体または殺昆虫性物質、固形若しくは液状のアジュバント１〜 ９９．９重量％、および界面活性剤０〜２５重量％を含むことができる。

本発明は、有害生物を駆除する方法であって、有害生物またはその環境に、有効 量のＢａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｆｎｇｉｅｎｓｉｓ株ＨＤ５４１若しくはＨＤ ５７１またはそれらの誘導体若しくは変異体または前記に定義した殺昆虫性物質 、あるいは前記の菌株、誘導体、変異体または物質を含む組成物を適用すること を特徴とする方法も提供する。

Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｌｎｇｉｅｎｓｉｓＨＤ　５４１またはＨＤ５７１ の菌株またはそれらを含む組成物を、ある種の他の殺虫剤または化合物と共に、 保護を行う植物または作物に効力を失うことなく投与することができる。

これは、はとんどの普通に用いられる他の農業用スプレー原料と相溶性であるが 、極端なアルカリ性スプレー溶液中では用いるべきではない。

これは、微粉（ｄｕｓｔ）　、懸濁液、湿潤性粉体として、または農業上の適用 に好適な任意の他の原料の形態で投与することができる。

Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓが正常に生育した後、発酵によ る製造中に、母細胞は溶解し、胞子および結晶をその生育培地に放出する。この 胞子および結晶を、遠心分離または濾過、噴霧乾燥、真空乾燥、あるいはＤｕｌ ＩＩａｇｅら（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ　Ｐａｔｈ ｏｌｏｇｙ、　１５．１５−２０゜１９７０）により報告されているラクトース 共沈法のような沈殿法により集めることができる。このようにして得られる胞子 −結晶複合体は長期間安定であり、作物に適用するのに好適な製品に配合するこ とができる。

本発明による殺虫性を有する組成物の製造法は、下記のことにより、Ｂａｃｊｌ ｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓのＨＤ５４１または１（Ｄ５７１株を培養 することを特徴とする。

ａ）菌株を凍結乾燥したアンプル中に保存し、ｂ）　この菌株を寒天斜面培地に 接種し、Ｃ）　これらの斜面培地を２０〜４０℃、好ましくは２５〜３３℃で１ 〜５日間インキュベーションし、ｄ）　これらの斜面培地から水性培養基を含む 振盪フラスコに接種し、 ｅ）　この容器を２０〜４０℃、好ましくは３０℃で１〜５日間、好ましくは１ 〜２日間振盪し、所望により別のフラスコ中で少なくとも一回この生育工程を繰 り返し、ｆ）予備培養発酵槽中に工程ｅ）の培養物を含む水性培地を接種し、 ｇ）接種物を含む培地を２０〜４０℃、好ましくは３０〜３５℃の温度で攪拌、 曝気し、所望により別の大きめの容器中でこの予備培養発酵工程を少なくとも一 回繰り返し、 ｈ）工程ｇ〉のインキュベーション液２〜２０重量％を、水性培養基を含む生産 用発酵槽に入れ、Ｉ）　この培養基を２０〜４０℃、好ましくは３０〜３５℃の 温度で攪拌および曝気し、 ｊ）製造用発酵槽中における胞子形成および結晶生成が最大に達した時に、Ｂａ ｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＨＤ　５４１またはＨＤ５７１を採 収し、 ｋ）ａ−ｄ中の寒天およびブロスが少なくとも１種類の窒素源、少なくとも１種 類の炭素源および少なくとも１種類の塩、好ましくはペプトン、グルコースおよ び少なくとも１種類の塩を含むべきである。ｆ−ｊの培地は少なくとも１種類の 窒素源（例えば、ペプトン、酵母エキス、コーンステイープリカー、大豆ミール 、綿実ミール、魚ミール）、少なくとも１種類の炭水化物源（例えば、グルコー ス、ラクトース、スクロース、澱粉またはこれらの成分に冨む原材料）、および 少なくとも１種類の無機塩を含むべきである。この窒素および炭水化物は、でき るだけ同時に消費されてしまうようにバランスを取るべきである。

胞子−結晶複合体またはこれを含む組成物は、他のある種の殺虫剤あるいは化合 物と共に、効力を損なうことなく保護を行う植物や作物に投与することができる 。

前記の胞子−結晶中の胞子を殺すこと（例えば、ガンマ線照射による）または無 胞子性の結晶産出変異体を使用して胞子を生産することによって生育能力のない 生成物製造を避けることが可能である。生育能力のない生成物は、美的理由から バクテリアが広がるのを防止することあるいは有益な昆虫に病気が発生するのを 避けることが望ましい環境では有益でありうる。しかしながら生育能力のない生 成物は、一般的には生きた胞子を含むものほど活性ではなく、更に不利益なこと は、この胞子を殺すのにコストが増大することである。

本発明は、Ｂ、ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ＨＤ　５４１またはＨＤ５７１ま たはそれらの組成物の昆虫を殺すのに有効な量を適用することを特徴とする、作 物の処理法にも関する。

Ｂａｃ目１ｕｓ　ｔｈｕｒｊｎｇｔｅｎｓｉｓＨＤ　５４１またはＨＤ５７１は 、通常は組成物の形態で適用され、処理を行う作物領域に、他の生物活性を有す る化合物と同時にまたは連続して適用することができる。これらの化合物は、肥 料または微量栄養素供給体であるか、または植物の生長に影響を与える他の調合 剤であってもよい。これらはまた、選択性を有する除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、 殺バクテリア剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤またはこれらの製剤の数種類の混合 物であってもよく、所望ならば、他の担体、界面活性剤または配合技術分野で習 慣的に用いられている適用促進アジュバントとともに用いてもよい。好適な担体 およびアジュバントは固形または液状であってもよく、配合技術で一般に用いら れている物質、例えば、天然または再生した無機物質、溶媒、分散剤、湿潤剤、 増粘剤、結合剤または肥料に対応するものである。

配合物、すなわち活性成分としてＢ、　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＨＤ５４１ またはＨＤ５７１またはそれらの組合せを他の活性成分および適当であれば固形 または液状のアジュバントと共に含む組成物、製剤または混合物は、既知の方法 、例えば活性成分を溶媒、固形担体および場合によっては界面活性化合物（界面 活性剤）のようなエキステンダーと均質に混合および／または摩砕することによ って調製される。

好適な溶媒は、芳香族炭化水素類、好ましくは８〜１２個の炭素原子を含む画分 、例えばキシレン混合物または置換ナフタレン、ジブチルフタレートまたはジオ クチルフタレートなどのフタレート、シクロヘキサンまたはパラフィンなどの脂 肪族炭化水素、アルコールおよびグリコール、シクロヘキサノンなど、Ｎ−メチ ル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドなどの 強極性溶媒、並びに植物油あるいはエポキシド化ヤシ浦または大豆油などのエポ キシド化した植物油、または水である。

微粉および分散性粉体などに用いられる固形担体は、方解石、タルク、カオリン 、モントモリロナイトまたはアタパルガイドなどの通常の天然無機充填剤である 。物理的性質を改良するために、高度に分散したケイ酸または高度に分散した吸 収剤ポリマーを添加することも可能である。好適な粒状の吸着性担体は、多孔性 タイプの、例えば軽石、破砕煉瓦、海泡石またはベントナイトであり、好適な非 吸着性担体は方解石か砂などの物質である。

更に、無機または有機性の予備粒状化した材料、特にドロマイトまたは粉砕した 植物残渣を用いることもできる。

配合する活性成分の性質によって、好適な界面活性化合物は、良好な乳化、分散 、湿潤特性を有する非イオン性、陽イオン性およびまたは陰イオン性界面活性剤 となる。「界面活性剤」という語は、界面活性剤の混合物を包含するものとも理 解されるであろう。

好適な陰イオン性界面活性剤は、水溶性の石鹸および水溶性の合成界面活性化合 物の両方であることができる。

好適な石鹸は、高級脂肪酸（Ｃ，。−０２゜）のアルカリ金属塩、アルカリ土類 金属塩または未置換若しくは置換アンモニウム塩、例えばオレイン酸またはステ アリン酸、または例えばヤシ油または獣脂から得ることができる天然脂肪酸混合 物のナトリウムまたはカリウム塩である。

他の好適な界面活性剤には、脂肪酸メチルタウリン塩並びに修飾および未修飾の リン脂質もある。

しかしながら、いわゆる合成界面活性剤、特に脂肪スルホネート、脂肪スルフェ ート、スルホン化ベンズイミダゾール誘導体またはアルキルアリール−スルホネ ートが、一層頻繁に用いられる。

脂肪スルホネートまたはスルフェートは、通常はアルカリ金属塩、アルカリ土類 金属塩または未置換若しくは未置換のアンモニウム塩の形態をしており、一般的 にはアシル基のアルキル部分をも有する０８〜ｃ２２アルキル基を含み、例えば 、リグノスルホン酸、ドデシルスルフェート、または天然脂肪酸から得られる脂 肪アルコールスルフェートの混合物のナトリウムまたはカルシウム塩である。こ れらの化合物は、脂肪アルコール／エチレンオキシド付加物の硫酸エステルおよ びスルホン酸の塩も含んでいる。スルホン化ベンズイミダゾール誘導体は、好ま しくは２個のスルホン酸基および約８〜２２個の炭素原子を含む１個の脂肪酸基 を含む。アルキル−アリールスルホネートの例は、ドデシルベンゼンスルホン酸 、ジブチルナフタレンスルホン酸またはナフタレンスルホン酸／ホルムアルデヒ ド縮合生成物のナトリウム、カルシウムまたはトリエタノールアミン塩である。

対応するホスフェート、例えば、ｐ−ノニルフェノールとエチレンオキシド４〜 １４モルとの付加物のリン酸エステル塩も好適である。

非イオン界面活性剤は、脂肪族または環状脂肪族アルコールまたは飽和若しくは 不飽和の脂肪酸およびアルキルフェノールのポリグリコールエーテル誘導体であ って、（脂肪族）炭化水素残部分に３〜３０個のグリコールエーテル基および８ 〜２０個の炭素原子を有し、アルキルフェノール類のアルキル部分に６〜１８個 の炭素原子を含むものである。

他の種類の好適な非イオン界面活性剤は、ポリエチレンオキシドと、アルキル鎖 中に１〜１０個の炭素原子を有するポリプロピレングリコール、エチレンジアミ ノポリプロピレングリコールおよびアルキルポリプロピレングリコールとの水溶 性付加物であって、その付加物は２０〜２５０個のエチレングリコールエーテル 基および１０〜１００個のプロピレングリコールエーテル基を含むものである。

これらの化合物は、通常はプロピレングリコール単位当り１〜５個のエチレング リコール単位を含む。

非イオン界面活性剤の代表例は、ノニルフェノールポリエトキシエタノール、ヒ マシ油ポリグリコールエーテル、ポリプロピレン／ポリエチレンオキシド付加物 、トリブチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリエチレングリコールおよ びオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである。ポリオキシエチレンソル ビタントリオレエートのようなポリオキシエチレンソルビタンの脂肪酸エステル も、好適な非イオン界面活性剤でもある。

陽イオン界面活性剤は、好ましくはＮ−置換基として少なくとも１個のＣ−０２ ２アルキル基を含み、他の種類の置換基として低級未置換またはハロゲン化アル キル、ベンジルまたはヒドロキシル−低級アルキル基を含む第四アンモニウム塩 である。塩類は、好ましくはステアリルトリメチルアンモニウムクロリドまたは ベンジルジ（２−クロロエチル）エチルアンモニウムプロミドのようなハロゲン 化物、メチルスルフェートまたはエチルスルフェートの形態をしたものである。

配合の技術分野で通例用いられている界面活性剤は、例えば、ｒＭｃｃｕｔｃｈ ｅｏｎ’ｓ　Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　ＥｉｕｌｓｊｆｉｅｒｓＡｎｎｕ ａｌＪ　、ＭＣＰｕｂｔ）ｓｈｊｎｇ　Ｃｏｒｐ、リッジウッド、ニューシャー シー、１９７９年；　Ｄｒ　Ｈｅ１ＩＩｕｔ　５ｔａｃｈｅ　ｒ　Ｔｅｎ５ｉｄ Ｔａｓｃｈｅｎｂｕｃｈ　Ｊ　（界面活性剤ハンドブック）　ＣａｒｔＨａｎｓ ｅｒ　ｖｅｒｌａｇ、　ミュンヘン／ウィーンに記載されている。

殺昆虫性組成物は、通常はＢａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｔｓＨＤ ５４１またはＨＤ５７１あるいはそれらと他の活性成分との組合せ０．１〜９９ ％、好ましくは０．１〜９５％、固形または液体アジュバント１〜９９．９％お よび界面活性剤０〜２５％、好ましくは０．１〜２０％を含む。

商業的生成物は、濃縮物として配合されるのが好ましいが、最終使用者は通常は 実質的に低濃度の希釈配合物を用いる。

この組成物は、安定剤、消泡剤、粘度調整剤、結合剤、増粘剤のような他の成分 並びに肥料または特殊な効果を得るための他の活性成分を含んでもよい。

本発明を、単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１および他のＢ、　ｔｈｕｒｉｎｇ ｉｅｎｓｌｓ単離体の比較試験で得られた実験および実施試験データに関して更 に説明する。

例１　バクテリアの培養 ２５０　ｒｐｉのオービタル・シェーカー（ｏｒｂｉｔａｌｓｈａｋｅｒ）上の ２５０１溝付きフラスコに入れた生育培地５０ＩＩｌｌ中で、バクテリアを３０ ℃で生育させ、１％Ｖ／Ｖの割合で中間対数増殖期の培養物を接種した。典型的 な生育培地は、大豆ミール１０ｇ／Ｉ、ジャガイモ澱粉１０ｇ／ｌ、Ｋ　ＨＰＯ ４５ｇ／Ｉ、微量元素溶液１０ｉ１／ｌを含んでいる。微量元素溶液は、ＣａＣ ｌ　・２Ｈ０８・２　ＨＯ−Ｚ　ｎ　ＣＩ　Ｃｏ　Ｃ１２およびＦ　ｅ　Ｃ１３ ２２ゝ をそれぞれ０．　５　ｇ／ｌ含む。培養物は位相差顕微鏡でモニターし、細胞の 完全な自己消化を認めた時点で採収する。インキュベーション時間は、単離体に より４０〜７２時間にわたる。生育培地の調製および培養物の乾燥粉末へのラク トース−アセトン法による変換は、Ｄｕ　Ｉ　ｍａｇｅらにより記載されている 通りであった（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ　Ｐａｔｈｏｌｏ ｇｙ、　１９７０．１５．１５−２０）。キノコの試験のためのバクテリア産生 は、２リツトルの溝付きフラスコ中でブロス４００１を用い、このブロスは粉末 にはしなかったことを除いて前記と同一であった。

実験室でのバイオアッセイのために、バクテリアの粉末を脱イオン水でホモジナ イズし、適当に希釈し、１０１容をビート二大豆−粉末混合物（２０：　１）４ ０ｇに混合した。次いで、処理した培地を２個のプラスチックポット（ＡＪ、　 Ｇｒｅｇｏｒｙ　Ｌｔｄ、　、ロンドン）に均等に分け、ポット当たり最小限２ ０匹のＬｙｃｏｒｉｅｌｌａ　ａｕｒｉｐｉｌａまたはり、　ｆｆ１ａｌｌの新 生幼虫を入れた。Ｌ、　ａｕｒｉｐｉｌａまたはり、　ｗａｌｌの卵および幼虫 は、Ｂ１ｎｎ５により考案された方法を用いて得た（Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ａｐ ｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、　１９７３゜７３、１１９−１２８）。ポットを ２４℃でインキュベートし、発生してくる成虫を毎日記録した。処理の比較をす るために、Ｂ、　ｔｈｕｒｔｎｇｔｅｎｓｉｓなしの８個の対照ポットからの成 虫の発生を調べた。

すべての単離体は最初、培地１ｇ当りバクテリア粉末１０１ｇの割合で試験した 。死亡率が９５％を上回った菌株は、ある濃度範囲を用いて更に詳細に再試験を 行った。

すべてのデータは、プロビット分析法を用いて分析した。

ほかなり変動し、２２単離体のうち９種が良好〜中位の活性を示した（第１表） 　ｏ　Ｍｏｒｒｉｓｏｎｔ　Ｓｄａｒｍｓｔａｄｉｅｎｓｊｓ。

ｋｙｕｓｈｕｅｎｓｊｓおよび１ｓｒａｅｌｅｎｃｌｓの亜種に属する菌株が最 も活性であった。亜致死量（ｓｕｂ−１ｅｔｈａｌ　ｄｏｓｅｓ）のＢ、　ｔｈ ｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓを含む処理物から発生した／％工は、対照のものよりハ エの段階に至るまで長期間かかった。実験室アッセイで致死率が５０％を上回っ た処理では、発生時間は平均で４日長かった。バイオアッセイデータの統計分析 によれば、ＨＤ５４１とＨＤ５７１は試験した他のいずれよりも有意に活性であ った。

別の試験では、単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１は亜種ｋｙｕｓｈｕｅｎｓ　 ｉｓに属する他の単離体より１．ａｕｒｉｐｉｌａに対し有意に活性であること が判明した。

Ｌ、　＠ａｌｉに対する単離体ＨＤ５７１とＩＰＳ８２のガンマ線照射試料の活 性を比較した。Ｂ、　ｔｈｕｒ１ｎｇｉｅｎｓｉｓ単離体ＨＤ５７１は、Ｂ、　 ｔｈｕｒｉｎｇｌｅｎｓｉｓ　１ｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ単離体Ｉ　Ｐ　Ｓ　８２ 　（Ｌ　Ｃ５０値は１００μｇ／ｇより大）よりも有意に活性（ＬＣ５０は４４ ．４μｇ／ｇ、信頼限界は２７．４０〜５８．７５）であることがわかった。

例３　キノコの試験 菌糸が広がったキノコのコンポストを４８および２５ｃ１ｍのプラスチックポッ トに２．５ｋｇ／ポットの割合で入れた。等容量のビートと白亜から成る湿った ケーシング混合物を、このコンポストの表面に１．５　ｋｇ／ポットの割合で加 えた。この適用の前に、ケーシングを未処理のままにし、標準的な商業用対照化 合物および割合のジフルベンズロンを３０ｍｇ活性成分（ａ、ｉ、　）　／ｋｇ で処理し、または菌株のブロス培養物または配合物をＨＤ５４１についてはグー ２２フ１ ０または５０１およびＨＤ５７１についてはグー２２フ１で処理した。６種の処 理をそれぞれ８回繰り返した。

それぞれの処理からの６個のポットを、任意に木製のキノコトレー（０．９ｘ０ ．６ｍ）に並べ、キノコチャンバーに入れた。全部で８枚のトレーがあり、４枚 づつ２層積み重ねた。多数のり．　ａｕｒｔｐ！Ｉａ成虫をチャンバーに入れた 。７日後に合成ピレスロイドを空中散布して成虫を殺し、それ以上産卵がないよ うにした。処理して１１日後に粘着性のトラップをケーシングの最上部に置き、 発生した成虫を捕えた。次いでハエを通さないポリエステルネットで個々に覆っ た。このトラップのハエを処理後１８．２２．２８．および３３日ロー調べた。

本実験中チャンバー内の気温を２０℃に保った。

単離体ＨＤ５４１およびＨＤ５７１のブロス培養物をキノコ試験のケーシング層 に添加したところ、その後のり．　ａｕｒｆｐｉｌａ成虫の発生は未処理の対照 に比し有意に減少した（第２表（ａ）　＋　（ｂ）　）　、５　０　ｔｌ／　ｋ ｇのＨＤ５４１および１０ｍ１／ｋｇを上回る濃度のＨＤ５７１は、ジフルベン ズロン処理したものに比較しつるレベルの抑制を示（すべてパーセントは重量バ ーセント）ＨＤ５４１またはＨＤ５７１　２５％　５０％　７５％リグノスルホ ン酸ナトリウム　５％　５％　−ラウリル硫酸ナトリウム　３％　５％ ジイソブチルナフタレン スルホン酸ナトリウム　−　６％　１０％オクチルフェノールポリエチ レングリコールエーテル（エ チレンオキシド７ー８モル）　２％　−高度に分散したケイ酸　５％　１０％　 １０％カオリン　６２％　２７％　− Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＨ　Ｄ　５　４　１またはＨＤ ５７１をアジュバントと十分に混合し、この混合物を好適なミルで十分に摩砕す ると、湿潤性粉末を生じ、これは水で希釈して所望の濃度の懸濁液を生成するこ とができる。

またはＨＤ５７１　１０％ オクチルフェノールポリエチ レングリコールエーテル（エ チレンオキシド４〜５モル）　３％ ドデシルベンゼンスルホン酸 カルシウム　３％ ヒマシ油ポリグリコールエー チル（エチレンオキシド３６ モル）　４％ シクロへキサノン　３０％ キシレン混合物　５０％ 任意の必要な濃度のエマルジョンを、この濃縮物を水で希釈して得ることができ る。

Ｄ５４１またはＨＤ５７１　５％　８％タルク　９５％　− カオリン　−　９２％ この活性成分を担体と混合し、混合物を好適なミルで摩砕することによって、使 用準備のできた微粉が得られる。

４、押出機粒状化物 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｌｎｇｉｅｎｓ！ｓＨＤ　５４１またはＨＤ５７１ 　１０％ リグノスルホン酸ナトリウム　２％ カルボキシメチルセルロース　１％ カオリン　８７％ 活性成分または組合せをアジュバントと混合して摩砕した後、この混合物を水で 湿らせる。混合物を押し出し、粒状化した後、気流中で乾燥する。

またはＨＤ５７１　３％ ポリエチレングリコール（分子量２００）’　３％カオリン　９４％ 微細に粉砕された活性成分または組合せを、混合機中でポリエチレングリコール で湿らせたカオリンに均一に適用する。このようにして、非微粉性のコーティン グした粒状化物が得られる。

またはＨＤ５７１　４０％ エチレングリコール　１０％ ノニルフェノールポリエチレングリコールエーテル（エチレンオキシド１５モル ）　６％リグノスルホン酸ナトリウム　１０％ カルボキシメチルセルロース　１％ ３７％ホルムアルデヒド水性溶液　０．２％７５％水性エマルジョンの形態をし た シリコーン油　０．８％ 水　３２％ 微細に粉砕された活性成分または組合せを、アジュバントと十分に混合して、懸 濁液濃縮物を得て、これを水で希釈することにより任意の必要な濃度の懸濁液を 得ることができる。

例５　配合物：効力試験 例４に記載の方法により単離体ＨＤ５７１の多くの配合物を調製し、キノコ試験 でのり、　ａｕｒｊｐｉｌａの抑制用の配合なしの培養ブロスおよび配合なしの 噴霧乾燥ブロスと比較した。ジフルベンズロン処理したポットで観察した有害生 物抑制のパーセントで表わした結果を第３表にまとめた。活性の程度は製剤の種 類によって変化するが、単離体ＨＤ５７１のすべての製剤は、Ｌ、　ａｕｒｉｐ ｉｌａに対し活性を示す。これらは、はんのわずかの有効な配合物の例であるが 、他の多くの有効な配合物の調製が当業者に知られることになるであろう。

第１表 コード　亜　種　ＬＣ５ｏ　信頼限界 μｇ　Ｂｔ／ｇ培地 ＩＰＳ−１ｔ２　１ｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ　Ｌ３０．４　９５．９−１８０．０ ＨＤ８５７　〃１５４．４　１０３．４−２２３．８ＨＤ２４０　ｇａｌ　１ｅ ｒｉａｅ　２０２７．６　９９８．８−４５３０．８ＰＧ１４　ｍｏｒｒｉｓｏ ｎｉ　１１７．９　８１１！−１５６，９）ＩＤ７５３　ｄａｒｍｓｔａｄｉｅ ｎｓｉｓ　１４４．０　８４．９−２１６．５ＨＤ７５４　”　３３０．２　２ ２５；８−５３７．５）ＩＤ５７３　ｖｕｈａｎｅｎｓｉｓ　２３０４．９　１ ５７５．４−３０８４．０ＨＤ５４１　ｋｙｕｓｈｕｅｎｓｉｓ　３１．４　２ ０．９−４２．３ＨＤ５７１　〃１２．５　９．２−１１３．９１１種類の他の 亜種を含む１３個の単離体は、はとんどあるいは全く活性がなかった（Ｂ、　ｔ ｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ粉末１０．０００μｇ／ｇ培地の極めて高い投与量で の致死率はＯ〜７７％）。

第２表 ２種類のＢａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｆｎｇｆｅｎｓｆｓの菌株およびジフルベ ンズロンの処理ケーシングから発生するＬｙｃｏｒｌｅｌ　Ｉａａｕｒｌｐｌ　 Ｉａの総数に及ぼす影響（ａ）　菌株ＨＤ５４１ 処理　Ｄ５４１　Ｄｉｆ”　対照 割合〜　０．４　２．０　１０．０　５０．ロ　３０．０　−総数　１６０２　 １３０１　９０１　１９２　１９３　２０７１闇％　７７．４　６２．８　４３ ．５　９．３　９．３　ＬＯｏ、０（ｂ）　菌株ＨＤ５７１ 処理　Ｄ５７１　Ｄｉｆ”　対照 割合〜　４．０　１０．０　２５．０　Ｇ２．５　３０．０　−総数　３１３　 ！ＩＩ　３１　１０　２２　７５４閤％　４．１．５　１０．７　４．Ｌ　Ｌ、 ３　２．９　１００．０＊　２５％湿潤性粉末として配合されたジフルベンズロ ン。

〜　ＨＤ５７１とＢＤ５４１ニブロスの１数／ケ一シングｋｇ；ジフルベンズロ ンは活性成分（ａ、ｉ、）の１ｇ数／ｋｇ 第３表 ＨＤ５７１配合物の活性 製剤　活性１ 培養ブロス　１００ 噴霧乾燥培養ブロス　８５ １　ジフルベンズロンによって得られる抑制の％で表示した活性。配合物はケー シングに０．６２５ｇ／ｋｇ（または当量）で添加した。

２５０％Ｂ、　ｔｈｕｒｔｎｇｉｅｎｓｉｓＨＤ　５７１を含有し、例４に記載 の方法により調製した湿潤性粉体。

３　例４に記載の方法により調製した懸濁液濃縮物。

４　例４に記載の方法により調製した懸濁液濃縮物。

国際調査報告 １＋＋１−ａ＊ｍ−５ｓ　Ｎ、Ｐｃｔｌ圓９１７０１９５７：ｍ二”Ｌ　ｍＬフ −−二；：；“：：＋ｍ二３７．ａ：；フ：ｏｍｃ＊　Ｆａ二：；マｒｄ顧“− °゛”パ°″゛′°フ１１１；グ１：；Pπ−ｍｌ　ｍ−１ ’ｎｍ＃ｍｒａｐｍ−１ｐｓ＋ｅｍｍｎｗＩＩ１ｍＭｌ−噌１１−１基ｍ−１ｅ ＋１−１−−１■四ｒ１ふｃｗ書暑啼−１＋＋＋ｋｌｅｋｆ堰|一−レ１１１φ ｙ＠ｈｗａａｋｗ＋に＠ｐｍｒ１−ｌＨ−・−１肉−■−−―−−−−−−Ｉ喝 １゜フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ、　＋ＤＫ、ＥＳ、　ＦＲ，Ｇ Ｂ、　ＧＲ，ＩＴ、　ＬＵ、　ＮＬ、　ＳＥ）、　ＡＵ、　ＣＡ、　ＨＵ、ＪＰ 、　ＫＲ，ＰＬ、　ＲＯ，ＳＵ、　ＵＳ く ニア２）発明者　ホワイト、フィリップ　フランシスイギリス国ウェスト、サセ ックス、ニヤー、チチェスター、オールディンバーン、フック、レーン、セント 、ヘリアー（番地なし） １７２）発明者　ペシイブリッジ、ニコル　ジェーンイギリス国ウェスト、サセ ックス、ラスチイントン、コンバー、アベニュ、２０

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．蚊以外の有害生物である双翅類の生物学的抑制法であって、Ｂａｃｌｌｕｓ 　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ単離体ＨＤ５４１（ＮＣＩＭＢ　４０３７３）ま たはＨＤ５７１（ＮＣＩＭＢ　４０３７４）、またはその変異体、組換体若しく はその誘導体、またはそれらから誘導される殺虫性物質を有害生物またはその環 境に適用することを特徴とする、方法。
2. ２．殺虫性物質がデルタエンドトキシンを含む、請求の範囲第１項に記載の方法 。
3. ３．有害生物の双翅類が植物および食用菌類に影響を及ぼすものである、請求の 範囲第１項または第２項に記載の方法。
4. ４．有害生物の双翅類がキノコの有害生物である、請求の範囲第１〜３項のいず れか１項に記載の方法。
5. ５．有害生物の双翅類がＳｃｉａｒｉｄａｅまたはＭｙｃｅｔｏｐｈｉｌｉｄａ ｅ科の糸角類である、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の方法。
6. ６．有害生物の双翅類がＬｙｃｏｒｉｅｌｌａ属の一種である、請求の範囲第１ 〜５項のいずれか１項に記載の方法。
7. ７．有害生物の双翅類がＬｙｃｏｒｉｅｌｌａ　ａｕｒｉｐｉｌａまたはＬ．ｍ ａｌｉである、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の方法。
8. ８．蚊以外の有害生物である双翅類を生物学的に抑制するための組成物であって 、Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ単離体ＨＤ５４１またはＨＤ５７１またはそ れらから誘導される殺虫性物質を、担体、希釈剤、界面活性剤または適用促進ア ジュバントと共に含んで成る、組成物。
9. ９．肥料、微量栄養供給剤、植物生長製剤、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、殺バク テリア剤、殺線虫剤および軟体動物駆除剤およびこれらの混合物から選択される 生物学的に活性な化合物も含有する、請求の範囲第８項に記載の組成物。
10. １０．Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＨＤ５４１またはＨＤ５ ７１またはこれらの変種若しくは変異体または殺虫性物質０．１〜９９重量％、 固形または液状のアジュバント１〜９９．９重量％および界面活性剤０〜２５重 量％を含む、請求の範囲第８項に記載の組成物。
11. １１．蚊以外の有害生物である双翅類を生物学的に抑制するためのＢ．ｔｈｕｒ ｉｎｇｉｅｎｓｉｓ単離体ＨＤ５４１またはＨＤ５７１またはこれらから誘導さ れる殺虫性物質の使用。