JPH06503097A - 鉄除去のためのヒドロキサメート誘導体を含む製薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 鉄除去のためのヒドロキサメート誘導体本発明は哺乳動物細胞およびヒトを含む 哺乳動物中の病原微生物からの鉄の除去に存用な生物模倣鉄担体に関連するもの である。

鉄はすべての有機体の成長にとって必須の金属である。

というのは鉄は酸素代謝と電子移動反応、核酸合成および種々の酵素触媒のよう ないくつかのきわめて重要なプロセスに関与しているからである。微生物、とく に細菌および真菌は低分子量のシデロフオアーを分泌することによってそれらの 環境から鉄を得る。すなわち、シデロ７ｔアーは高い親和性（Ｋａ＞　１０　” ）でＦｅ（Ｉ［Ｉ）を結合し、細胞表面へ戻ってそこで受容体か媒介する取込み を通じて鉄の引渡しか行われる。

依存性病原体で起こる感染症の治療のための治療用具として重要である（Ｄｉｏ ｎｉｓ、　Ｊ、　Ｂ、　ｅｔ　ａｌ、、１９９１　ＣＲＣＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏ ｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｉｒｏｎ　Ｃｈｅｌａｔｅｓ（ｅｄ、　ｂｙ　Ｇ。

Ｗｉｎｋｅｌｍａｎｎ）、　ＰＰ、　３０９−３３８゜医学における鉄キレート 剤の性能を増進させるための初めの頃の努力は、Ｆｅ（［１１）に対する高い親 和性を有し３価鉄蛋白質から鉄を集めるところの腸内細菌属の類似体を合成する ことに向けられた（ｋｏｎｔｏｇｈｉｏｒｇｈｅｓ、　Ｇ、　Ｊ、　ａｎｄ　Ｅ ｖａｎｓ、　Ｒ，Ｗ、。

１９８５、　ＦＥＢＳＬｅｔｔ、、１８９　：　１４１−１４４　；ｋｏｎｔｏ ｇｂｉｏｒｇｈｅｓ、Ｇ、Ｊ、、　１９８６　、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、２３３　 ：　２９９−３０２　；　Ｋｒｅｔｃｔ＋ｍａｒ、　Ｓ、　Ａ、　ａｎｄ　Ｒａ ｙｍｏｎｄ。

Ｋ、　Ｎ、、１９８６．　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、１０８　：　６２１２ −６２１８　；　Ｔｕｆａｎｏ、　Ｔ、　Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、、ｌ　９８１　、 　Ｂｉｏｃｈｉｍ。

ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ６６８　：　４２０−４２８）　、これらの 主１ノート剤は膜透過性に制限かあること（Ｓｈａｎｚｅｒ、　Ａ。

ａｎｄ　Ｌｉｂｍａｎ、Ｊ、、　１　９　９　１　ＣＲＣＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏ ｆ　ＭｉｃｒｏｂｉａｌＩｒｏｎ　Ｃｈｅｌａｔｅｓ（ｅｄ、　ｂｙ　Ｇ、　Ｗ ｉｎｋｅｌｍａｎｎ）ＰＰ、　３０９−３３８）およびそれらがフェリチンとト ランスフェリン両方からＦｅ（ＩＩＩ）を取り除く傾向があること（Ｔｕｆａｎ ｏ、　Ｔ、　Ｐ。

ｅｔ　ａｔ、、＋　９８１　、　Ｂｔｏｃｈｉｍ、　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　 Ａｃｔａ　６６８　：　４２０−４２８　；Ｈｉｄｅｒ、　Ｒ，Ｃ，１９８４， ５ｔｒｕｃｔ。

ａｎｄ　Ｂｏｎｄ５　：　２５−８４）のためにｉｎ　ｖｉｖｏでの使用につい ては制限がある。他方、鉄キレート療法に天然のシデロフォアーであるデスフェ リオキサミンＢ　（ＤＦＯ）を使用することは大きな成功をおさめたが、これは ヒドロキサメートがフェリチンからの鉄をキレートし、トランスフェリンからの 鉄を比較的ゆっくりとスカベンジすることによる。しかしながら、ＤＦＯは輸注 て投与しなくてはならず、いくつかの副作用をひき起こす（Ｆｏｒｔｅｒ。

Ｊ、１９８９．　巳ｕｒ、Ｊ、Ｈａｅｍａｔｏｌ、　４　３　：　２　７　１　 −　２　８　５　。

赤血球肉寄生体のｉｎ　ｖｉｔｒｏならびにｉｎ　ｖｉｖｏでの生長阻害剤とし そ合成鉄結合体を使用しようという以前の試みはいくらかの成功をおさめた（Ｓ ｃｈｅｉｄｅｌ、　Ｌ、　Ｗ、　ａｎｄＡｌｄｅｒ、　Ａ、（１９８１）Ｍｏ１ ．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０　：２１８−２２３．　ａｎｄ　２２　：１４０ −１４４　；５ｃｈｅｉｂｅ１．　Ｌ、　Ｗ。

ａｎｄ　５ｔａｎｔｏｎ、　Ｇ、　Ｇ、　（１９８６）　Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍ ａｃｏｌ、３０　：　３　６　４　−　３　６　９　；　５ｃｈｅｉｂｅｌ、Ｌ 、Ｗ、ａｎｄ　Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ。

Ｓ、　（１９８９）　ｉｎ　Ｍａｌａｒｉａ　ａｎｄ　ｒｅｄ　ｃｅｌｌ、　Ａ ｌａｎ　Ｒ。

Ｌｉ５ｓ　Ｉｎｃ、２　：　１１９−１４９　：　Ｈｅｐｐｎｅｒ、　Ｄ、Ｇ、 、ｅｔ　ａｌ、。

（１９８８）　Ｂｌｏｏｄ　７２　：　３５８−３６１　；Ｒａｖｅｎｔｏｓ　 −５ｕａｒｅｚ、　Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、　（１９８２）　Ａｍ、　Ｊ、　Ｔｒｏ ｐ、　Ｍｅｄ。

ＨＹｇ、３１　：　（５）　、９１９−９２２　；５ｔａｈｅ１．　Ｅ、、ｅｔ 　ａｌ。

（１９８８）　Ａｍ、　Ｊ、　Ｔｒｏｐ、　Ｍｅｄ、　Ｈｙｇ、３９　：　２３ ６−２４０　；Ｐｏ１ｌａｃｋ、　Ｓ、（１９８３）　Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｊ、　 Ｈａｃｍａｔｏｌ。

５３：１８１−１８３）。しかしながら、しらべた限りの化合物の各クラスがな んらかの欠点をもっていた。合成ジチオカルバメートおよびヒドロキシキノリン は高い透過性を有していることから存効なことがわかったが、それらの抗マラリ ア能が細胞毒性の金属複合体を形成することに依存することからその使用は大き く制限される（Ｓｃｈｅｉｂｅｌ、　Ｌ、　Ｗ、　ａｎｄ　Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ 、　Ｓ、　（１９８９）　ｉｎＭａｌａｒｉａ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｄ　ｃｅ ｌｌ、　Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ　Ｉｎｃ、２　：　１１９−１４９）。特異な 鉄スカベンジャーとして働らき、かつ十分な膜透過性を示す合成の親油性カテコ ール酸塩もまたそれらか血清中鉄プールを涸渇させることがはっきりと示される ことから使用は限られる（　Ｈｅｐｐｎｅｒ、　Ｄ。

Ｇ、、ｅｔａｌ、、　（１９８８）　Ｂｌｏｏｄ　７２　：　３５８−３６１） 。

本発明は上記制限事項を克服するために計画し、以下の性質を示すＦｅ（ＩＩＩ ）担体に関連する・（１）鉄に対する高い選択性、（２）感染赤血球を含めて細 胞膜を通しての透過、（３）天然アミノ酸の鏡像異性体から作られることによる 代謝的抵抗性、（４）上記病原微生物中に存在するシデロフォアー受容体に結合 しないために病原微生物の成長を促進する活性かないこと、および（５）哺乳動 物の鉄担体であるトランスフェリンから鉄を奪いとらないので貧血状態に導くよ うな副作用を起こさせないことなど。

発明の要約 本発明は活性成分として一般式■の化合物を含む製薬組成物を提供する。

Ｒ”Ｃ（ＣＨ，０（ＣＨ，）。ＣＯ（ＮＲ’ＣＨＲ（ＣＨ２）ヨＣＯ〕９ＮＯＨ Ｒ’　ｌ　ａ ここてＲは水素、ＯＲ５，ＳＲ’　、　ＮＲ’Ｒ’　、　ＣＯＲ’、　Ｃ０ＯＲ ’　。

Ｃ０ＮＲ５Ｒ’または−ＮＨＣ（ＮＲ５Ｒ’）　＝　ＮＲ７，アリル、アラルキ ル、またはへテロアリルで任意に置換したアルキル、Ｒ１、Ｒ２およびＲ２は水 素、アルキル、アラルキル、アリル、Ｃ０ＯＲ’　、Ｃ０ＮＨＲ’およびＣ０Ｎ Ｒ’Ｒ’から成る基から独立に選択される。さらにＲ２はアルコキシ、アルケニ ルオキシまたは一〇−（ＣＨ２）　、　−ＣＯＯＸまたは一〇−（ＣＨ２）　、 　−ＣＯＮＨＸのような基で置換したアルキルであり、ここでｐは１からｌＯま での整数であり、Ｘはアルキル、アラルキル、アリルまたはへテロアリルである 。Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素、アルキル、アラルキル、アリルまたはへテロア リルであるｉｎは１または２；ｍは０．１または２そしてｑはＯまたは１、そし てｍが０のとき、−ＮＲ’ＣＨＲ一部分はピロリジン環、またはそれらの製薬学 的に許容される塩である。

上記化合物のいくつかは米国特許番号４．９６６．９９７に含まれており、そこ での記載によるとそれらは２価の鋼を含む混合物から３価の鉄のような、種々の 陽イオンの分離に効果的な６個の歯状リガンドであるという。そこでＲ２がアル コキシ、アルケニルオキシまたは一〇（ＣＨ２）、　Ｃ０ＯＨあるいは一〇　− （ＣＨ２）　、　Ｃ０ＮＨＸで置換されたアルキルである化合物は、新規のもの であり発明の主要部分をなしている。

本発明により（［）式の化合物は、３価鉄イオンに対する高い結合効率と赤血球 膜を含む細胞膜を通じての良好な透過性を示し、かつ細胞内Ｆｅ（ＩＩＩ）スカ ベンジャーとして効果的であるような生物模倣の鉄担体の新しい属を形成するこ とかわかった。これらの担体は細胞内の鉄をスカベンジすることによってＰｌａ ｓｍｏｄｊｕｍ　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのｉｎ　ｖｉｔｒｏの成長を阻害する。

１式の化合物の化学的デザインは基本的には天然のシデロフォアーであるフェリ クロームを手引きのモデルとして用いた生物模倣である。フェリクロームシゾロ フォア−の鉄結合性は１式の化合物について化学的に再成されるが、感染赤血球 のような哺乳動物細胞中への透過を容易にするためにそれらの親水性エンベロー プは親油性のものに置き換えられる。これら結合体の機能は天然のシデロフすア ーと反対、または逆なことから、それらに対して逆シデロフォア−（Ｒ３Ｆまた はＳＦ）とここでは名づけた。

１式の化合物は、体内のＦｅ（［［［）過剰と関連した病理学的疾患、またはＦ ｅ（ＩＩＩ）−依存性病原体、たとえばＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｆａｌｃｉｐａ ｒｕｍ、クモノスカビ真菌またはシュードモナス属、カンジダ属またはストレプ トミセス属によってひき起こされた病理学的疾患の治療に適している。

図の簡潔な説明 図１は（ａ）三つの突起と鉄キレート空洞をもつ本発明の原型逆シデロフォアー の化学構造を図示したものである。ヒドロキサメートとアミノ酸含有部分の構造 を、申請に用いた異なるアミノ酸誘導体に関して図示した：Ｌ−ｉｌｅｕＳＬ− １ｅｕ　、　Ｌ−ｐｒｏ　、Ｌ−ａｌａおよびＤ−ａｌａ。

図２は逆シデロフォアーの鉄結合性と親油性の組み合わせに対する抗マラリア活 性（Ｉｃ、。値）の相関関係を示す。

図３は薬剤への暴露４８時間にわたって測定した寄生体の成長に対するＤＦＯお よびＳＦＩ　−１１ｅｕの用量反応曲線である。挿入図はＩＣｓ。値（表１）の 導出に用いたデータのディクソンプロットを示す。

図４は寄生体の増殖（栄養型）のキレータ−誘起阻害に対する細胞外鉄の作用を 示す。使用した薬剤濃度は表１に示したＩｃｅ。値である。

図５は異なる増殖段階での寄生体の増殖に対するＤＦＯおよび５Ｆｌ−ｉｌｅｕ の作用を感染細胞の薬剤への暴露時間の関数として示す。定められた時間の後、 増殖培地でくり返し洗滌することによって細胞外薬剤を洗い、ついて増殖培地中 １６時間にわたり〔３Ｈ〕−ヒボキサンチンの取り込みをしらへた。

図６は培養哺乳動物細胞の増殖に対するキレータ−の作用を示す。核酸合成はマ ウスＮＩＨ３７３線維芽細胞およびヒトＨＴ２９結腸がん細胞の培養中、ジメチ ルスルフオキシド（ＤＭＳＯ）中５ｐｌ−ｉ１ｅｕ（白丸）、ＤＦＯ（黒三角） が存在するか、またはＤＭＳＯだけ（対照）（最終く１％）（白三角）の場合に ついて測定した。

図７は種々の条件下で培養したヒト肝がん細胞からの鉄抽出を示す：すなわち８ ０μｇ／ｍｌのキレータ−３Ｆ１−ｉｌｅｕへの１８時間の暴露による鉄奪取（ 白三角、Ｒ３Ｆ−前処理）、無処理での正常な鉄摂取（白四角、対照）または１ ００μＭクエン酸第二鉄アンモニウムによる鉄負荷（黒三角、Ｆｅ−負荷）。鉄 回復は黒丸で示す。

図８は正常および感染赤血球中（それぞれＮＲＣとＩＲＣ）への１Ｆ−担体複合 体の摂取を示す。正常および感染赤血球への”Ｆ−Ｒ３Ｆ　（逆シデロフォアー ）の摂取（図７ａ）および”Ｆｅ−ＤＦＯ（図７ｂ）への摂取。

“逆シデロフオアー”のデザインは三つの突起を有するトボロノーを基礎として おり、これは８面体の結合空洞を作り出し、天然のフェリクロームモデルを真似 たものである（図１）。これらの分子は種々異なる親油性をもつアミノ酸残基を もってモジュール方式で集合している。変更の範囲を広げるのにアミノ酸を用い ることは、分子の親油性を組織的に変可能にするモジュール要素の一つを構成す る。このようなアプローチによって哺乳動物細胞からの最適鉄除去と抗マラリア 活性を得るための組織的な化学修飾を容易になる。

Ｒ，Ｒ’、Ｒ”、Ｒ’およびＲ４は同じこともあれば異なることもある。一つの 態様において、これらはすへて短鎖アルキルである。　”アルキノビという語は 、好ましくは１−６炭素原子から成る短鎖アルキルで、１−１２炭素原子を有す る直鎖または分枝アルキル基を意味する。Ｒ４はより長い鎖をもってもよいし、 １８個までの炭素原子からなるアルキル基でもよい。　“アリル”という語はＣ ，−Ｃ，、の炭素環アリル基、たとえばフェニル、ナフチル、アンスラセニルの 非置換または１個または１個以上のハロゲン、ニトロ、ヒドロキシル、アルキル またはアリル基置換体を意味する。　“アルケニル“という語は直鎖または分枝 Ｃ，−Ｃ，チーＣ。ルラジカルを意味する。　“アラルキル″という語は、ここ で定義したアリルおよびアルキル基を含むラジカルを意味する。

“ヘテロアリル”という語は、ピリジル、キノリニル、アクリジル、イミダゾリ ルまたはインドリルのような１個またはそれ以上の窒素原子を含むモノ−または ポリサイクリック芳香族異環から導れるラジカルを意味する。

式Ｉの化合物の製薬学的に許容しつる塩はナトリウム、カリウム、マグネシウム と類似物およびアミンまたは有機塩基との有機塩を含むか、これらに限るわけで はない。

本発明に従って使用される好ましい化合物はＲ２力☆短鎖アルキル、好ましくは エチルで、ｎかｌまたは２、ｍかＯＳｑが１のもので、Ｒ１は短鎖、好ましくは メチル、Ｒ３は水素かアルキルでＲは−ＮＲ’　−ＣＨＲ−ＣＯ一部分か以下に 示すような天然アミノ酸から得られるようなラジカルであるニゲリシン（Ｒは水 素）、アラニン（Ｒはメチル）、ロイシン（Ｒはイソ−ブチル）、イソロイシン （Ｒはセフ−ブチル）、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジ ン、トリプトファン、スレオニン、リジン、セリン、システィン、メチオニン、 フェニルアラニン、チロシン、プロリンおよびヒドロキシプロリン。

本発明で用いられる化合物の中にはつぎの形のものがあり、 Ｒ，ＣＣＣＨ２０（ＣＨ２）ゎＣ０ＮＨＣＨＲＣＯＮＯＨＲ’）　！ここてＲ， Ｒ’およびＲ２は同じかまたは異なる短鎖アルキルラジカルでｎは１または２で ある。

本発明に従って用いた好ましい化合物の例はｎか２の化合物でつぎのＩａの形を している。

Ｈ，ＣＣＨ２Ｃ（ＣＨｚＯＣＨ２ＣＨ，Ｃ０ＮＨＣＨＲＣＯＮＯＨＣ）Ｉｔ）３ （［ａ）ここでＲはたとえばメチル、イソプロピル、イソブチルまたは２級ブチ ルなとのアルギルで、ここではｎ２サブフアミリーの誘導体と呼ばれ、ここでｎ かｌの形は次式％式％（） ここでＲはたとえばメチル、イソプロピル、イソブチルまたは２級ブチルなとの アルキルで、ここではｎｌザブファミリーの誘導体と呼ばれる。

最も好ましい化合物は上の式（Ｉａ）の化合物であり、ここてＲは二級ブチルで 、ここてはＳＦＩ　−１１ｅｕまたはＲ３Ｆ−１ｉ１ｅｕと命名され、これはい くつものレベルで特異性を示すことかわかった：それは感染赤血球に作用してマ ラリア原虫にとって必要な鉄貯蔵を取り除き、２〜３時間以内に寄生体の増殖を 不可逆的に停止させるが、その一方で肝臓およびその他の臓器中の鉄を貯蔵する 蛋白質であるフェリチン中の鉄には実質的に影響しないし、同し！！露待時間後 、血流中の鉄を運搬して体内のいたるところでそれを利用できるようにするトラ ンスフェリン中の鉄にも同じく影響しない：それは非感染細胞が寄生体の増殖を 支える能力に不可逆的な影響を及ぼさない：それは細胞内寄生体に速やかに作用 するか、最も重要な点は、それは種々のタイプの哺乳動物培養細胞の増殖に影響 しないことである。

本発明で用いた逆シデロフオアーは制御可能な親油性／親水性バランス（ＨＨＢ ）の合成鉄担体／キレータ−の一つのクラスであり、これらはＦｅ（ＩＩＩ）結 合に関する高い選択性、最適ＨＨＢの結果としての細胞内への透過および血漿中 の鉄担体との不干渉を示す。Ｒ３Ｆ’　Ｓは遊離のＦｅ（ＩＩＩ）をキレート型 Ｆｅ（［１１）にすることができ、フェリチンやヒト赤血球およびヒト肝がん細 胞（これらはフェリチンを作る）などの細胞内に貯蔵Ｆｅ（ＩＩＩ）を作らせる 。このようにして、これらの薬剤を構成する組成物は地中海貧血、鉄芽球貧血、 形成不全貧血およびその他の慢性貧血などのいくつかのタイプの貧血、など種々 の鉄過負荷疾患と関連した病理的／臨床的状態、輸血のくり返しで起きた障害お よび生物組織の鉄−媒介傷害と関連するいくつかの神経学的および心血管状態の 治療に有用である。

臨床的に用いられているＤＦＯ残基に比べたときのＲ３Ｆ’　Ｓの一つの有利さ は、Ｒ３Ｆ’　Ｓ中の側鎖アミノ酸によって付与された性質によって細胞の鉄プ ールにぐんと近づき易くなって過剰の鉄を除去するための透過性が得られること である。

Ｆｅ（ＩＩＩ）−キレート性を有するＲ３Ｆ’　Ｓの実験テストはＲ３ＦＩ−ｉ ｌｅｕを用いてヒト赤血球溶解産物（正常およびマラリア寄生の）、無傷の細胞 （３７°Ｃで４時間インギュベート）、遊離のウマ膵臓フェリチン（３７℃で４ −１Ｏ時間）およびフェリチン−含１！ｒＨＥＰ−２（ヒト肝がん）細胞（３７ °Ｃで４−１０時間）について実施した。

（＋）式の合成フェリチンの抗マラリア活性は赤血球内のＦｅ（Ｉ［［）をスカ ベンジする能力およびそれらの親油性によってほとんど決まることかわかった。

ＳＦ作用の場所は赤血球内寄生体中であって血清または正常赤血球成分ではない 。これら薬剤は寄生体増殖の全段階に対し、ある。この系列の中で最も強力な薬 剤である５ＦＩ−ｉ　ｌｅｕをあとで例として示すか、このものは培養哨乳動物 細胞に毒性かなく、デスフェリオキサミンに比べて１５倍強力であり２０倍速や かに作用する。全体として、これらの薬剤はマラリア治療薬の新しい系列をなす ものである。

本出願において、逆シデロフオアーの一系列の抗マラリア活性がそれら薬剤の親 油性と鉄結合能と相関することを示す。薬剤の有効性は、−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ）Ｃ Ｏ一部分に含まれるアミノ酸側鎖の疎水的性質によって大半は決まる。

（＋）式の化合物は、慢性の鉄過負荷、急性の鉄毒性および鉄−依存病原体によ って起こる疾患の治療のための製薬組成の活性成分として用いられる。

（［）式の化合物は非天然アミノ酸、とくにその鏡像異性体から作ることができ 、それによって加水分解酵素による代謝的分解に対する抵抗性が高められる。こ のことは経口投与で薬剤を投与するときの利点となる。

本発明の製薬組成物は、（１）式の化合物の有効量を単独で、または製薬的に許 容できる適当な担体、および安定剤のような添加物と一緒に含んでいる。（Ｄ式 の活性化合物は凍結乾燥した形で提供され、投与にあたり水またはなんらか適合 する液体に溶かして使用する。経口投与、静脈注射または筋肉内注射を含めてど んな投与方法でも適当である。マラリア治療に関しては、成人患者に対し１００ から３００ｍｇの範囲内で１日２回、２−５日間投与してよい。

ここで発明を以下の非制限例て示すことにする。

例 諸例において以下の物質と方法が用いられた：ａ、逆シデロフ才アーの合成。逆 シデロフォアーの合成は米国特許番号Ｎｏ、　４，９６６．９９７に記載された 方法、または以下の反応スキームにもとずいた３段階戦略に従って行なった： ！ｔ−Ｃ−（ＣＩＩｘＯＨ）ｓ　Ｃｈｚ−ＮＨＣｍＲＣ口ＯＨここでＲ＝メチル （アラニン）、イソブチル（ロイシン）または２級ブチル（イソロイシン）；Ｄ ＣＣ”’ジシクロへキシルカルボジイミド；Ｅｔ＝エチル；Ｃｂｚ＝ベンジルオ キシカルボニル、およびＰｄ−Ｃ＝炭素上のパラジウム。

第１段階（Ａ）は、活性トリスフェノール酸エステルとしてｌ、１’、１’−ト リスヒドロキシメチル−プロパンから（ｉ）アクリルニトリル処理、（１１）加 水分解および（ｉｉｉ）ペンタクロロフェノールとの縮合によるＣ３−ｉ称アン カーの調製を含む：第２段階（Ｂ）はヒドロキサメートを存する残基とのアミノ 酸ブリッジの調製で、その段階に含まれるのは（ｉ）防護されたアミノ酸を対応 するカルボキシフェノール酸塩への変換、（ｉｉ）そのフェノール酸塩をメチル ヒドロキシルアミンと反応させる、および（ｉｉｉ）防護基の除去である：そし て第３の最終段階（Ｃ）はトリスフェノール酸エステルとアミノ酸残基とのカッ プリングを含む。最終産物をシリカゲル上クロマトグラフ法で精製し、それらの 分析的および分光学的性質により完全に特性を明らかにした。

次式に示す新化合物 ＸＨＮＣＯＣＨ２ＣＨ，ＯＣＨ、Ｃ（ＣＨ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨＲＣＯ ＮＯＨＣＨ！　’）　３の合成は以下に概略を示すように、本質的に４段階方策 を含む　（１）トリスクロロフェノール酸塩■の調製、（ｉｉ）ヒドロキシルー ）ＩＩ（本特許出願中に記載されているすへてのトリスヒドロキサメートの共通 の建築ブロック）を基礎にしたアミノ酸の調製、（ｉｉｉ）　トリスカルボキシ ル酸塩Ｉとアミン［［をカップルさせてトリスヒドロキサメーＨＩ［を作る、そ して（ｉｖ）ベンジル防護基を望みめアルキル、アリル、アラルキルまたはへテ ロアリル基で置き換えてトリスヒドロキサメート［Ｖを作る：！、　ＣＨ２−Ｃ １０ ２、Ｈ拳／ＨｚＯ ３、Ｃｓ２ＣＯ３／ＢｎＢｒ ４−　ＣｇＣｌｓＯＨ ↓ ２−Ｈコ／Ｐｄ ３、　］ＪＩＣＯｎ３′皿 Ｂｎ　Ｗ　ｂｅｎｚｙｌ； Ｂｚ　Ｍ　ｂｅｎｒ；ｏｙＬ； Ｘｘｔｘ　−ｉｍｉムｚｏｌｙｌ ｂ、逆シデロフすアーの物理化学的性質Ｆｅ’″″に対する逆シデロフオアーの 化学量論的鉄結合をＭｅＯＨ水溶液（８０％ＭｅＯＨ−２０％Ｏ，ＩＮ水溶液Ｎ ａ０Ａｃ）中、ＦｅＣ１＋での滴定により４３０１ｍで分光学的に測定した。

すべてのりガントはｌ：ｌ複合体を作ることがわかった。

ＭｅＯＨ水溶液中での複合体の絶対配座は４７０ｎｍ付近と３７０ｎｍてのＣＤ （円二色性）−コツトン効果の絶対符号により決定した。４７０ｎｍ付近の正の コツトン効果と３７０ｎｍての負のコツトン効果はＡ−シス配座であることを示 す。反対符号はΔ−シス配座に対応する。Ｌ−配座のアミノ酸構成体をもつすべ てのリガンドはＡ−シス配座と複合体を作り、Ｄ−アラニンをもつリガンドはΔ −シス配塵とＰｅ”−複合体を作る。

Ｃ９逆シデロフオアーの相対的結合係数（０，７５ｍＭの逆ソデロフオアーとＭ ｅＯＨ水溶液（ＭｅＯＨ−０゜ｌ　Ｎ　Ｎａ０Ａｃ）中の０．１５ｍＭ　Ｆｅ’ ＋をＥＤＴＡ　（０，１５Ｍ）とインキュベートした。終夜平衡化ののち、存在 するソデロフォアーとＦｅ’“の複合体の両分を４３０ｎｍて測と０．３　ｍＭ 　ＦｅＣ１，，０，３ｍＭクエン酸、４０ｍＭ）リス、ｐＨ６，９の水溶液とを 終夜平衡化させることによって実施した。有機層に取り込まれた鉄の量は４３０ ｎｍでの鉄＋複合体の吸収で測定した。Ｒ３Ｆの存在しないクロロホルム中へは 鉄か取り込まれないことかイオンクロマトグラフ法でわかった。

フタノールと生理食塩水の間で終夜平衡化させて得られた。それぞれの相におけ るリガンドの濃度は過剰のＦｅ（ＩＩＩ）を加え、４３０ｎｍで第二鉄複合体を 測定することにより決定した。

ｆ、寄生体培養。実験に使用したＰ、　Ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ株：［ｔＧ２Ｇ１ （ブラジル、Ｄｒ、　Ｌ、　Ｈ，Ｍｉｌｌｅｒより提供）、Ｄ６（Ｗ、アフリカ 、Ｄｒ、　Ａ、　Ｊ、　Ｍ、　０ｄｕｏｌａより提供）、ＦＣＲ−３（ガンビア ン、Ｄｒ、　Ｊ、　Ｂ、　Ｊｅｎｓｅｎより提供）およびＷ２　（インドシナ、 Ｄｒ、　Ａ、　Ｔ、　Ｍ、　０ｄｕｏｌａより提供）は、５ｉｌｆｅｎ　ｅｔ　 ａ！、　（（１９８８）　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３７　：　４２６９−４２７６　）により記載されたＴ ｒａｇｅｒとＪｅｎｓｅｎ法の変法によりヒト赤血球の培養フラスコ中で増殖さ せた。

ｇ、鉄担体抗マラリア活性のバイオアッセイ。抗マラリア活性のアッセイは、感 染赤血球（２，５％へマドクリ・ストと２％寄生虫血）を含む微小培養（２４井 穴、Ｃｏ５ｔａｒ）に濃縮貯蔵溶液（ＤＭＳＯ中）からの化合物を添加すること によって行なった。培養は通常ゼラチン浮遊法と組み合わせて３００ｍＭアラニ ン、１０ｍＭ）リス−Ｃ１中で培養することにより同調させ、栄養型（ｌ−２％ 寄生虫血）または赤血球サイクルのリング段階（４−６％寄生虫血）で用いた。

定められた時間薬剤とインキュベートしたのち、さらに１００容量の増殖培地で ３回洗滌後かあるいはぞの前に、細胞に〔月１〕−ヒボキザンチンまたは（’Ｈ ）　−１１ｅｕ　（Ａｍｅｒｓｈａｎｉ、イングラ：／　ｌ’）　（７）イずれ かを井穴あたり６μＣ１加え、標識された細胞をガラス線維フィルター（Ｔａｍ ａｒ　、　ｌ＋＋ｃ、イエルサレム）中へ採取して放射能をカウントすることに より寄生体の増殖を評価した。

４０培地（無血漿）中の赤血球浮遊細胞（５０６ヘマトクリツト）を培養条件下 で１００μｇ／ｍｌのキレータ−またはＤＭＳＯた（プ（最終濃度く１％）で２ ４−４８時間処理した。細胞をＲＰＭＩで４回洗滌してキレータ−を取り除き、 そのあと３７°Ｃて１時間インキ、ベートした。

上述のようにゲラチン強化分裂体（〉９０％）を加えてのち寄生体の増殖を評価 した。０゛　トナーから得たヒト血漿（２ｍｌ）をＭＥＳでｐＨ５（キレ−ジョ ン効率を高めるため）かまたはｐＨ７，４（ＴＲＩ　Ｓで）に調節し、１００μ ｇ／ｍｌキレータ−またはＤＭＳＯで１８時間処理した。ついて血漿を８００ｍ ＩＯ，１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、および燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ） ｐＨ７，４に対して透析し、そのあと同じ緩衝液４００ｍ１に対して２４時間透 析し、寄生体増殖アッセイのため培地指示濃度のキレータ−を含むＤＭＳＯ溶液 にＦｅＣｌ　３（メタノール中）の量を増やしながら添加することによって前も って第二鉄−担体複合体を調製した。その混合液を室温で１時間インキュベート し、最終濃度３０μｇ／ｍｌ（デスフェリオキサミン）と５μｇ／ｍｌ（逆シデ ロフォアに関して）をもって栄養型段階で微小培養弁穴に添加した。

ｊ、ヒト肝がん（フェリチン含有）細胞株、ＨｅＰ　２、はＤｒ、　５ｈｕｖａ ｌ（Ｈａｄａｓｓａｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　５ｃｈｏｏｌ）から提供されたもので ある。細胞を１％非必須アミノ酸（Ｂｅｔ　Ｈａｅｍｅｋ、イスラエル）、２ｍ Ｍ１−グルタミンおよび１０％牛脂児血清（３６ｊ　ｌａｅｍｅｋ）を加えたＧ ｉｂｃｏ　ＭＥＭ培地中で維持生なるＳＦ誘導体を、担体の３−５モル過剰で１ ５０ｍＭＮａＣｌの０．５ｍＬ　Ｉ　ＯｍＭ　Ｈｅｐｅｓ中で”ＰｅＣ１５（Ａ ｍｅｒｓｈａｍ　。

イングランド）に２０ｍｇ／ｍｌの担体の濃縮貯蔵溶液を加えることによって鉄 と前もって複合体を作らせた。流出を始めるために、生理食塩緩衝液中で前もっ て３回洗滌し、５％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、２．５［１１Ｍクエン酸塩、 ２ｍｇ／ｍｌグルコースを加えた同じ緩衝液中に再懸濁し、２０％へマドクリッ トの最終懸濁液中で放射性６９　ｐ　ｅ−複合体に添加した。３７°Ｃでインキ ュベート後、各時点で７５μの懸濁液の一定量を２個づつ取り、１５ｍ１のプラ スチック製試験管（５ｔａｒｓｔｅｄｔ）にいれて２．５００　ｇで１分間遠心 した。上清を除去してペレットを直ちに氷上に置いた。すべての試料採取か終っ た後５０ｍＭＥＤＴＡを含む水冷緩衝液１５ｍ１中で２回ペレットを洗滌し、蒸 溜水中に溶解した。放射能（ガンマ発光、７００−１３００　Ｋｅｖ）をカウン トして各試料の細胞数を４１０μｍての溶解産物のヘモグロビン吸収から決定し た。

１、キレ−１・可能な鉄の抽出。燐酸緩衝生理食塩水（１０ｍＭＮａ−燐、ｌ　 ５０［１１１１１ＮａＣｌ　、　ｐＨ７，４）中でのＰｅｒＣＯｌｌ　−３％Ｌ −アラニンの段階傾斜から栄養型段階の寄生体を得た。１００９否の寄生止血の 細胞懸濁液を１％へ７トクリツトに調整し、５０ｍＭスクロニスと２０ｍＭグル コースを加えたＲ　Ｐ　Ｍ　Ｉ増殖培地中に置いた。１２μＭの指示ＳＦ誘導体 またはＤＭＳＯで２時間３７゛Ｃで細胞を前処理し、その時点で細胞を１５０ｍ Ｍ　ＮａＣ１，１０ｍＭ　ＨＥ　Ｐ　Ｅ　Ｓと５０ｍＭスクロースを含むｐＨ７ ，４の緩衝液５００×容量で２回洗滌した。つぎに細胞を６．８μＭＮＢＩ）− ＤＦＯ中でさらに３時間インキュΔ、−トシそのあと蛍光プローブを除去するた めに洗滌した。キレ−１・可能な鉄の測定は、Ｌｙｔｔｏｎ、　Ｓ、　Ｄ、　ｅ ｔ　ａｌ、、１９９　ｌＭｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、４０　：　５８４−５ ９０に記載されているように水冷融解分解産物のＴＣＡ可溶分画中で行なった。

例　１ 以下に示す（１）式の化合物を米国特許４．９６６．９９７に記載された方法ま たはここで前に述へた方法（ａ）中に示した３段階反応スキームに従って調製し た。

）１．ＣＣＨ２Ｃ（ＣＨ２０（ＣＨ２）、　Ｃ０ＮＨＣＨＲＣＯＮＯＨＣＨ，） 　。

ここでｎ２誘導体またはＳＦＩと命名する、ｎか２の化合物のサブファミリーの 中で、その中の−ＮＨＣＨＲＣＯ一部分かＬ−ｉｌｅｕ　（ＳＦ　ｌ　−１１ｅ ｕ）　、　Ｄ−ｉｌｅｕ、　Ｌ−ｉｌｅｕ。

Ｌ−ｖａｌ　、　Ｌ−ｐｒｏ　、　Ｌ−ａｌａおよびＤ−ａｔから導かれるよう な化合物を調製した。ｎｌ誘導体のサブファミリーの中では、その中の−ＮＨＣ ＨＲＣＯ一部分がＬ−１ｅｕ、Ｌ−ｉ　ｌｅｕおよびＬ−ｖａｌから導かれた化 合物を調製した。

逆シデロフオアーおよびそれらのＦ　ｅ　（ＩＩＩ）複合体の物理化学的性質を 方法の中で記載したように決定して表１と２に要約した。

表　１ 逆シデロフォアー（ＳＦ）の物理化学的性質と抗マラリＤＦＯ１００３０ ＳＦＩ−ｐｒｏ　１４　３８　０．６５　１．５　＞１００ＳＦＩ−Ｌ−ａｌａ 　１０８　８８　０．５３　１．０　４０ＳＦＩ−Ｄ−ａｌａ　１０８　８８　 ０．５３　１．０　４５３ＦＩ−Ｌ−１ｅｕ　１０　３５　１２．５　３．５　 １７ＳＦＩ−Ｌ−ｉｌｅｕ　２５　５２　＋４．０　５．０　２疎水性の値はア ミノ酸側鎖（Ｔａｎｆｏｒｄ　／　Ｓｅｇｒｅｔ’　ｓスケール）に関してり、 　Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、（１９８４，５ ３：５９５）によって与えられた。

ＩＣ，、値は培養細胞（Ｐ、　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの栄養型、Ｉｔ０２Ｇ１株 ）をそれぞれの化合物に４８時間暴露して、方法（ｇ）で記述したように増殖の 最後の２４時間中に核酸に取り込まれた〔３Ｈ〕−ヒボキサンチンを測定するこ とによって得られた。

オクタツールと生理食塩水との間の分配を測定して得られた親油性はアミノ酸側 鎖の疎水性と高い相関性を示した。

合成されたすべてのＳＦは鉄に対して高い結合親和性を示し、天然のシデロフォ アーについてみられるものと同じ鉄との１＝１化学化学量論的体を形成した。そ の複合体の絶対配座は天然Ｌ−アミノ酸を用いたときは圧倒的に左廻りで、Δ− シス型であり、Ｄ−アミノ酸を用いたときは右廻りの、八−構造であった。Ｆ　 ｅ　（ＩＩＩ）スカベンジャーおよび担体としてのこれら薬剤の機能は水相から 第二鉄イオンを抽出して有機相に移す能力によってはっきりと示され、これは生 体膜の疎水領域に似ている。

表　２ 逆シデロフォアー（Ｓ−Ｆ　’Ｉの物理化学的性質と抗マラリ（Ｌ−ｉｌｅｕ） 　２　８．２　０．２９　２．４　３±２（Ｄ−ｉｌｅｕ）　２　８．２　０． ２９８　２．４　９±３（Ｌ−１ｅｕ）　２　７．４　０．１２　０．９　２２ ±４（Ｌ−ｖａｌ）　２　２．１　１．３１　２．８　６±２（Ｌ−ｐｒｏ）　 ２　０．４　０．１６　０．０６　＞１００（Ｌ−ａｌａ）　２　０．３　１． ２５　０．３７　６２±１０ＣＤ−ａｌａ）　２　０．３　１．２５　０．３７ 　７０±１３（Ｌ−１ｅｕ）　１　１７．０　０．２３　３．８６　５±２（Ｌ −ｉｌｅｕ）　１　９．０　１．０　９．３　３±１（Ｌ−ｖａｌ）　Ｉ　１． ０　１．０　１．０　４±ＩＤＦＯ＜０．０５６　１．１６　０．０６５　４０ 上８表２において、種々のアミノ酸置換体を育するＤＦＯおよび逆シデロフォア ー（Ｒ３Ｆ’　Ｓ）を以下のことを基にして比較した：（ａ）分配係数（Ｐ　ｃ ａｅｌＴ　ｎ−オクタノール／生理食塩水）；（ｂ）相対結合係数（メタノール 水溶液中、０．７５　ｍＭヒドロキサメート、０．１５ｍＭＥＤＴＡおよび０． １５ｍＭ　Ｆｅ３＋においてＥＤＴＡと競合させることにより分光学的に決定） ；　（ａ”　ｂ）相対分配係数とＦ　ｅ　（ｌ［［）結合能との積。（ｃ）ＩＣ ，。値は栄養型について行った３−４回の実験の平均で、薬剤に４０時間暴露し 、そのうちの最後の２４時間か３Ｈ−ヒボキサンチンの取り込みである。Ｐ　ｃ ｏ＊ｌｌの値は１．０の値をもつＬ　−ｖａｌ−ｎｌに対する相対値として与え られる。遊離Ｒ３Ｆ　１ｌｅｕ、２（Ｓ　Ｆ　Ｉ　−１１ｅｕと同じ）および１ ｅｕａｚのＰ、。ａｌｌに関する値とこれら化合物のそれぞれのＦｅ（ＩＩＩ） 複合体に関する値は同じである（表示せず）。鉄−結合親和性は、Ｌ−ｖａｌｎ ｌに関する値かｌになるように１．１６の値を任意に与えたＤＦＯに対する相対 値である（ＤＦＯの値の８６％）。

これらの結果に従って、サブファミリーのいかんにかかわらず、分配係数の大き さとして測定したＲＳＦ親油性は同類のものの阻害力と相関することが示された 。すへての誘導体はＤＦＯに比へて相対的に高いＦ　ｅ　（ｒ［［）結合親和性 を示し、したがってこのパラメータはこれらＲ３Ｆ’　Ｓシリーズの抗マラリア 活性の差を決定するに当って先験的に二次的役割を演するようにみえる。

Ｉ　Ｃｓ。値と物理化学的性質と最も良い相関は相対Ｆ　ｅ　（ＩＩＩ）結合能 と分配係数（Ｐｃ、、、、　）の積に対してＩＣ６ｏをプロットしたときに得ら れる（図２）。ｎｌ（白印）とｎ２（魚卵）の誘導体はアミノ酸置換体の疎水性 に従って曲線上にある。ｎ２サブフアミリーにおいては、強力な抗マラリア活性 、ＩＣ，。く５のためには相対Ｆ　ｅ　（ＩＩＩ）結合能とＰｃ。ｍｌｆの積に ついての最小値は２〜３か必要であるのに対して、ｎ１サブフアミリーのＬ−ｖ ａｌは積の値ｌを示し、これは高い活性、Ｉ　Ｃｓ。＝４を出すのに十分のよう にみえる。

例　２ 化合物ＸＨＮＣＯＣＨ，ＣＨ２０ＣＨ，Ｃ（ＣＨ２０−ＣＨ，ＣＨ，Ｃ０ＮＨＣ ＨＲＣＯＮＯＨＣＨ，）３でＸがキノリル、ＲがｉＢｕのものを以下のごとく方 法（ａ）に述へた４段階法で調製した。

ａ、トリスフェルレートＩの合成 １３、４　ｇのペンタエリスリトールを４０％ａｑ、　ＮａＯＨと２２ｍ１アク リロニトリルで終夜室温で処理した。ついでその混合液をｌ　Ｎ　ａｑ、Ｈｃｌ でｐＨ７に中和し、エチルアセテートを添加、有機相を水で洗滌してＭｇ５Ｌ上 で乾燥、真空濃縮して残渣をシリカゲル６０上でクロマトグラフしてテトラニト リルを得た。１．２７ｇのテトラニトリルを１．８ｍｌのａＨｃｌで１１０°Ｃ ４時間加熱した。冷却後、残渣を３００ｍ１酢酸エチルで希釈し、水で２回洗滌 、ＭｇＳＯ４上で乾燥して真空濃縮した。残りのテトラ酸、４２４ｍｇ、を５　 ｍｌ　ＭｅＯＨ−ＨｚＯ（９−１）に溶解してＩＮａｑ、　Ｃ５ｚＣＯｚの１． Ｏｍｌで１時間処理した。ついで混合液を濃縮しＰ２Ｏ６の存在下真空中で数時 間乾燥した。乾燥残渣を３ｍｌ　ＤＭＦに溶解し１００°Ｃで２日間０．１２ｍ １のベンジルブロマイドで処理した。混合液を濾過し、濾液を濃縮してクロロホ ルムに溶かし、ａｑ、Ｈｃｌで洗滌し、乾燥濃縮してモノベンジルエステルを得 た。モノベンジルエステル１５０ｍｇを３ｍｌのアセトニトリルに溶かし２３０ ＋Ｈのペンタクロロフェノールと１２６ｍｇのジイソブロピルカルボ９イミドで ２日間室温で処理した。真空濃縮とクロマトグラフ法により全体の収率的２０％ でトリスフ（ＣＤＣＩ＝）５．１　（ｓ、　０ＣＲ＝Ｐｈ）　、　３．７５　（ ｔ、　−０ＣＨ２−）　−３，４（ｓ、　Ｃ−ＣＨｚ−）　、　２．８ｐｐｍ（ ｔ、　ＣＨ２Ｃ０））。

ｂ、トリスヒドロキサメー）［［１（Ｒ＝　ｉ　Ｂ　ｕ）の合成４４０ｍｇのト リスフェルレート■を５ｍｌの乾燥メチレンクロライドに溶解して３ｍｌのメチ レンクロライド中２２０ｍｇのアミンＩｆ（Ｒ＝　ｉ　Ｂ　ｕ）と２０ｍｇのヒ ドロキシサクシンイミドの溶液で終液処理した。粗反応混合液を濃縮してシリカ ゲル上でクロマトグラフにかけてトリスヒドロキサメー）　ＩＩＩを得た。

２８２ｍｇ量のトリスヒドロキサメートＩＩＩを８ｍｌのクロロホルムに溶かし 、冷却下３７ｍｇのＤＭＡＰ　（ジメチルアミノピリジン）、１０１ｍｇのトリ エチルアミンおよび１４０ｍｇの塩化ベンゾイルで１時間処理した。ついで混合 液をクロロホルムで希釈し、ＩＮ　ａｑ、ＮａＨｃＯｚで２回、ついで水で洗滌 し、そして乾燥してトリス安息香酸塩−モノベンジルエステル４７４ｍｇを得た 。これをフラッシュカラムクロマトグラフにより精製した。トリ安息香酸塩の３ ００ｍｇ量をＰｄ／ｃ（５％）の存在下大気圧のもと２００ｍ１酢酸エチルに溶 解し、トリス安息香酸モノカルボン酸２１０ｍｇを得た。１６０ｍｇのこの化合 物を５ｍｌの乾燥ＴＩ（Ｆに溶解し、冷却下３０分間４２ｍｇのカルボニルジイ ミダゾルで処理し、その場合４２ｍｇの６−アミノ−キノリンを添加した。混合 物を室温で終夜反応させ、ついで最終産物［Ｖを分離し予備薄層クロマトグラフ 法で精製した。基本的な中間体■からの最終産物］■の５　（ｓ、　ＡｒＨ＞、 　８．８０　（ｄ、　Ａｒ）ｆ）、　８．４８　（ｓ。

ＡｒＨ）、　８．１５　（ｄ、　ＡｒＨ）、　７．９８　（ｄ、　Ａｒｃ）、　 ５゜２３　（ｍ、　Ｃ−Ｈ，３，２−３，４（未解読シグナル、−ＣＨｚ−０− ＣＨ２−）、　３．２４　（ｓ、　ＮＣＨｔ）　２．２−２．８　（未解読シグ ナル、−ＣＨ，−Ｃｏ−）および０．９５ｐｐｍ　（２ｄ。

−ｃａ（ＣＨｔ）ｚ））。

例　３ 異なるキレータ−の抗マラリア活性ははじめの頃は異なる濃度のキレータ−に２ ４時間暴露した栄養型の培養について評価した、その期間ののち、〔３Ｈ〕−ヒ ボキサンチンまたは（”Ｈ）−１ｉｅｕを添加して２４時間後に寄生主車および 高分子物質中への標識の取り込みを測定した。

図３は薬剤への４８時間暴露の間に測定した寄生体増殖に対するＤＦＯとＳ　Ｆ 　１−１１ｅｕの用量反応曲線を示す。

挿入図はＩＣ，。値の計算に用いたデータのＤｉｘｏｎプロットを示す。ＳＦＩ 　−１１ｅｕの種々の構造的同族体に関するこれらの値を集めて表１に示す。

薬剤の作動性は主としてそれぞれのオクタツール／生理食塩水分配係数またはア ミノ酸側鎖の疎水性と相関し、すへての薬剤について相対的に高くなっている鉄 結合効率との相関は二次的なものに過ぎないことが明らかである。このシリース の中で最も強力な同族体である、ＳＦｌ　−１１ｅｕを含む薬剤は、表３に示す ように抗マラリア薬に対して広いスペクトラムの薬剤耐性を示す種々の株の寄生 体に２４−４８時間の暴露期間で投与したとき、ＤＦＯよりも約６−１３倍効果 的であった。種々のキレータ−の抗マラリア活性は、方法（ｇ）に述べたように 感染ＩｔＧ２Ｇ１はクロロキン−感受性株を示す。

アーの抗マラリア活性 Ｄ６　４０±９　６±２ ＩｔＧ２Ｇ１　３５±３　５±２ Ｗ２　３１±６　４±１ ＦＣＲ３３２±７　３±１ １Ｃ，。値は栄養型培養を種々異なる濃度の薬剤に４８時間暴露し、方法（ｇ） に述べたように〔３Ｈ〕ヒボキサンチンの存在下で最後の２４時間についてのも のである。

例　４ 血漿および非感染赤血球を比較的高濃度（１００μｇ／ｍｌ）のキレータ−で別 々に処理して、親油性キレータ−の作用位置か血漿および／または非感染赤血球 の成分と関連するかどうかを評価することを試みた。血漿または赤血球細胞をＳ Ｆ　１−１１ｅｕ　Ｉ　Ｃｓ。の４０倍高濃度に２４時間暴露してのち遊離の薬 剤を洗滌または透析した場合、血漿または細胞が寄生体増殖を支える能力には有 意の影響はないことがわかった（データは示さず）。この知見から親油性鉄キレ ータ−による阻害は感染細胞のレベルで起こることを示している。また、ＳＦＩ 　−１１ｅｕのような親油性キレータ−は赤血球細胞内に容易に滲透することが できることが観察されたが、このことはこれらの薬剤の抗マラリア活性か赤血球 内の鉄または寄生体の鉄とキレート形成することと関連することを強く示唆しい る。

この点を評価するため、毒性鉄複合体の形成に比べて、逆シデロフォアーが鉄を 奪うことによって（感染赤血球細胞のレベルでの抽出）増殖阻害をひき起こすか とうがをしらべ、第二鉄塩の量を増やしがらその存在下での栄養型培養に対する キレータ−の作用をしらべた。図４は寄生体増殖（栄養型）に対するキレータ− 誘起阻害に及ぼす細胞外鉄の作用を示す。使用した薬剤の濃度は表１に示したＩ 　Ｃｓ。値である。図３に示した結果は明らかにＤＦＯの作用モード（Ｈｅｒｓ ｈｋｏ、　Ｃａｎｄ　Ｐｅｔｏ、　Ｔ、　Ｅ、　（１９８８）Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅ ｄ、１６８　：　３７５−３８７）に類似して、ＳＦにＦ　ｅ　（ＩＩＩ）を化 学量論的に添加した場合その抗マラリア活性を完全に失わせることを示している 。

鉄のもつこの予防的作用は滲透できない第二鉄シデロフォアー複合体形成によっ てひき起こされるのではない。

というのはこの複合体は非感染および感染細胞いずれに対しても滲透することが 証明されたからである。この複合体は寄生体に対し２て明らかに非毒性であり、 したがって他の鉄キレータ−に関して提案されている抗マラリア活性の機構、す なわち薬剤の作用はキレート鉄で媒介された脂質過酸化ということは除外される 。ＳＦｓの抗マラリア作用についての最もありそうな解釈は、シデロフオアーの 媒介によって鉄の非常に重要なソース、すなわち酵素から鉄を引き離すこと（Ｂ ｕｌｌｅｎ、　Ｊ、　Ｊ、　ａｎｄＧｒｉｆｆｉｔｈｓ、　Ｅ、（１９８７）　 Ｉｒｏｎ　ａｎｄ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　；Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ、　Ｐｈｙｓｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ。

Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｕｓ　Ｌｔｄ、、　Ｌｏｎｄｏｎ　ＰＰ、 　１−２７　）またはヘモグロビンの破壊である（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、　Ｄ、Ｅ 、　ｅｔ　ａｌ、。

（１９９０）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、８７ 　：　２９阻害に対して最も敏感な寄生体の増殖段階をしらへるために、ＤＦＯ （８０μｇ／ｍｌ）のそれと比較しながらＳ　Ｆ　１−１１ｅｕ　（１０ｕ　ｇ ／ｍｌ）の阻害作用の時間依存性をリングの同調培養および栄養型の培養の両者 について評価した。培養条件下、細胞を指定濃度の薬剤に暴露し、指定時間（０ −４時間）後に試料を取って、細胞外の薬剤を洗い流して、最後の試料の薬剤と のインキュベーションが終ったのち〔３Ｈ〕ヒボキサンチンの取り込みに関して 評価した。

図５は種々異なる増殖段階での寄生体増殖に対するＤＦＯおよび５ＦＩ−ｉｌｅ ｕの作用を示す。そこてみられるように、５ＦＩ−ｉｌｅｕの主要な阻害作用は 、リングまたは栄養型段階のいずれでも薬剤との０．５時間インキュベーション の後にすでにはっきり起こっている。大部分の最大阻害は薬剤との２時間インキ ュベーションの後に得られ、これはリングについては約７０％、栄養型に関して は９０％である。両段階とも薬剤とのインキュベーションをもっと長くすると（ ２０時間く）寄生体増殖を９５％以上阻害するようになる。他方、ＤＦＯの濃度 を８倍にすると、６時間の暴露で物凄い作用がみられ、僅か２０時間の暴露の後 に殆んど完全な阻害がみられた。

例　６ 逆シデロフォアーが培養哺乳動物細胞に作用する可能性を培養中の寄生体に関し て用いたのと同じ条件下で評価した。図６は培養哺乳動物細胞の増殖に対するキ レータ−の作用を示す。ＤＭＳＯ中間じ濃度のＳＦＩ　−１１ｅｕ（白丸）、デ スフェリオキサミン（ＤＦＯ）（黒三角）の存在下またはＤＭＳＯのみ（対照） （く１％最終濃度）中で、マウスＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞およびヒトＨＴ２９結 腸かん培養細胞の核酸合成を測定した。集密状態の培養細胞を２４時間キレータ −に２４時間暴露した；ｉ！！初の３時間は放射標識なし、あとの２１時間は〔 ３Ｈ〕−ヒボキサンチン６μＣｉ／ｍｌの存在下において、細胞外ヒボキサンチ ンをＰＢＳで数回洗滌して除去し、細胞を５％ＴＣＡで５°Ｃ，１５分間処理し て熱い２゜５９６３　Ｄ　Ｓに溶かした。放射能測定と蛋白質測定（ＢＣＡ、　 Ｐｉｅｒｃｅ）用に試料を採取した。データはｄｐｍ／　ｕ　ｇ蛋白質およびＳ Ｄ（二重試料）として与えた。分散分析（ＡＮＯＶＡＲ）の結果く１％Ｉ／ベル ５ｎｅｃｏｄｏｒ’ｓ　Ｆ検定において群間に有意の差はみられなかった。作用 かみられる濃度範囲と暴露時間において、ＳＦＩ　−１１ｅｕとＤＦＯのどちら も、核酸合成（図６）または蛋白合成（（’Ｈ）　１ｌｅｕ取り込み、データは 示さず）によって測ったマウスＮＩＨ３Ｔ３またはヒトＨＴ２９細胞の増殖に対 して影響しなかった。

例　７ 細胞全体系で鉄抽出をモニターした。プラスチックフラスコ（Ｎｕｎｃｌｏｎ） 中で増殖したＨｅｐ２細胞を、キレータ−処理による鉄剥奪状態か１２０μＭの クエン酸第二鉄アンモニウム（Ｓｉｇｍａ）による鉄増強状態、あるいは何も加 えない状態においた。細胞をＰＢＳ中で洗滌し、以下のような低張緩衝液中で分 解した；　１．５ｍＭ　ＭｇＣ１５，１０ｍＭ　ＮａＣ１，１０ｍＭ　ＨＥＰＥ ＳＳｐＨ７，４でプロテアーゼ阻害剤２０μｇ／ｍｌ　ＴＬＣＫ、−２０μｇ／ ｍｌ　ＴＰＣＫ、２０μｇ／ｍｌベンツアミジン、および２５８ｇ／ｍ１のフェ ニルメチルスルホニル−クロライドを含む。分−解産物をＤｏｕｎｃｅ　Ａホモ ジナイザーでホモジナイズし、はげしく渦動させ、そして４℃で１０，０００ｇ Ｘ１５分間遠心した。上清を４°Ｃで冷却してフェリチン量をウサギ抗−フエリ チン抗体（ＢｉｏＭａｋｏｒ、　Ｒｅｈｏｖｏｔ）およびヤギ抗−ウサギ抱合β −ガラクトシダーゼ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いてＥＬＩＳＡ法で測定した。

図７はヒトＨｅｐ２肝がん細胞からの鉄の抽出を示す。

肝がん細胞を種々の条件下で培養した；すなわち８０μｇ／ｍｌのキレータ−Ｒ ＳＦ−１への１８時間の暴露による鉄の剥奪、無処置下での正常な鉄摂取（白四 角）または１００μＭのクエン酸第二鉄アンモニウムによる鉄負荷（黒三角）な どの条件である。ＰＢＳ中での洗滌と１００１．１．Ｍのクエン酸第二鉄アンモ ニウムを含む培地で鉄剥脱細胞に鉄を補給した（黒丸）。鉄のモニターはＬｙｔ ｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、　（１９９１）　Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、４０ 　：　５８４に記載されているように、ＮＢＤ−ＤＦＯ（ＮＢＤは４−クロロ− ７−二トロベンツー２−才キサー１，３−ジアゾールを示す）の蛍光を測定する ことによって行なった。

ヒト肝がん細胞株が選ばれたのはフェリチンを発現することと、鉄剥奪の條件下 、正常血清鉄摂取、鉄補給または鉄欠損環境で増殖したのちの鉄の回復といった 条件で培養できる可能性があるからである。２．８　ｎｍｏｌｅｓ　Ｆｅ／ｍｇ 全蛋白質および大体それと同じ量の鉄が“鉄−回復“細胞の細胞質ゾルから除去 されるのが観察された。

反対に、まず細胞を親油性か高くて非−毒性ヒドロキサム酸塩を基にした鉄担体 、５ＦＩ−ｉｌｅｕに前もって暴露したときはキレート可能な細胞質ゾル鉄は減 少することが示された（図７）。獲得可能な鉄の当初の濃度は鉄回復処置後に完 全に取り戻すことができる細胞質ゾル画分からの鉄抽出の時間依存性から、反応 論的に区別できる二つの成分が存在することをはっきりと示している。速度が早 くてほとんど瞬間的にみられる成分は低分子量の獲得可能な鉄プールであること は殆んど間違いないし、一方比較的低速度の成分は遊離フェリチンの成分にふさ れしい。抗−ヒトまたは抗−フェリチン抗体を用いたＥＬＩＳＡ測定はヒトＨｅ ｐ２細胞中のフェリチンのかなりの量を陽性的に同定する（データは示さず）。

例　８ Ｒ３Ｆ’　ＳはＤＦＯよりもはるかに大きな親油性を有する事実から、それらは より速やかに滲透し、それゆえ短時間の暴露ののち、より効果的に細胞内鉄をキ レートする。正常および感染赤血球細胞中へのＲ３Ｆ’　Ｓの透過を、感染およ び非感染細胞中へのＲＳＦ’　Ｓ−”Ｆｅ（［［）複合体の取り込みをモニター することによって見積り、それをＤＦＯと比較した。外側膜への吸着てはなく　 Ｆｅ−Ｒ３Ｆｉｌｅｕ、ｚの実際の取り込みであることを確かめるために、細胞 を十分に洗滌して分解産物を８０，０００ｇで２０分間遠心分離した。総カウン トの９０％以上が細胞質ゾル画分に見出された（結果は示さず）。

図８は正常および感染赤血球細胞へのｐ　ｅ　Ｇ　９−担体複合体の取り込みを 示す。”Ｆｅ−Ｒ３Ｆ　（図８ａ）および”Ｆｅ−ＤＦＯ（図８ｂ）の正常（０ 印）オヨヒ感染（魚卵）赤血球細胞（６０％寄生体虫血、〉９０％栄養型）への 取り込みを示したものである。外部に５μＭＦｅＣ１ｇ　（メタノール貯蔵溶液 からの）を有するＤＭＳ　Ｏ中で担体を”ＦｅＣ１＊に対して４：１の割合で複 合体を作らせた。ついで放射性複合体を２０％へマドクリット細胞懸濁液に添加 し、流出を測定した。比活性はＲ３ＦとＤＦＯの取り込みについてそれぞれ４８ ５０００ｃｐｍ／ｎｍｏｌｅと３６９０００　ｃｐｍ／ｎｍｏｌｅであった。細 胞数は４１０ｎｍでの分解産物のヘモグロビンの吸収から決定した。

図８は正常および感染赤血球細胞いずれについてもＲＳ　Ｆ−ｉｌｅｕ、ｚ　（ Ｓ　Ｆ　１−１１ｅｕ）　Ｆ　ｅ　（ＩＩＩ）複合体がｊ＋ｚｔ＝２　３で速や かに透過することを示している。

最大取り込みは１０−１５分後に得られ、その時点で４＊ｍｏｌｅｓ／　１０　 ”細胞の濃度はほぼ５μＭの外部Ｆｅの平衡濃度に等しい（図８ａ）。同様な取 り込みの反応論がＲＳ　Ｆ　−１ｅｕ、＋についても得られた。同じプロフィル 複合面負荷細胞についても得られた（データは示さず）。

反対に、遊離型での相対Ｐ　ｅｏｓ）ＩがＩｅｕまたは１ｌｅｕ同族体よりもは るかに小さい、より親水性のＲ３ＦＩ−ａ　Ｉ　ａ　＠　２は（表２）、感染細 胞への最初の４０分間の暴露の期間中なんら存意な取り込みを示さなかった。８ 時間のインキュベーションの後、それの細胞内濃度は外部濃度の１／１０以下で あった（図８ａ）。

図８ｂは８時間のタイムコースにわたる正常および感染赤血球細胞へのＤＦＯ− Ｆｅの取り込みを比較したものである。感染赤血球への取り込みの傾向は近似的 に正常赤血球へのそれの約２倍であるが、８時間後の細胞内Ｆｅ−ＤＦＯの取り 込みの濃度は１０分後にＲ３Ｆ’　Ｓによって得られた濃度の２０分の１しかな いことを示している（図８ａ）。

Ｆ　ｅ　（Ｉ［［）複合体の透過が遊離のリガンドの透過の尺度にもなるという 仮定は、おそらく疎水性Ｆ　ｅ　（ＩＩＩ）　−Ｒ３Ｆ複合体にも適用できる。

このことをもとに、図８４に示した結果は遊離のＲＳＦリガンドの透過性を反映 しており、このことは細胞内への遊離リガンドの透過はまた細胞からのＦ　ｅ　 （ＩＩＩ）の抽出と培地中への流出をももたらすに違いないことを示している。

感染赤血球細胞からのキレート可能な鉄の剥奪は２時間のＲ３Ｆ処置の後に起こ った（表４）。キレート可能な鉄のアッセイは蛍光プローブＮＢＯ−ＤＦＯを用 いた蛍光鉄消光／酸−ＥＤＴＡ脱消光を含む。表４は栄養型をＲＳ　Ｆ　１ｌｅ ｕ−ｚで前処理するとキレート可能な鉄の量を５−１Ｏ倍減少させるという実験 結果を示している。非感染赤血球細胞中に検出されるキレート可能な鉄の量は寄 生体感染赤血球細胞中に比べて約５倍低かった。

表　４ 正常および感染赤血球細胞からのキレート可能な鉄の抽出 ＮＲＣ＜０．１　０．７　＜０．１　ＮＤＩＲＣ４，６０，９２，９０，３ 鉄の抽出は１２μＭ　Ｒ３Ｆｎ２−ｉｌｅｕで３７℃２時間処理（イエス）また は非処理（ノー）の細胞懸濁液について実施した。非感染（ＮＲＣ）および寄生 体感染（ＩＲＣ）赤血球細胞中のキレート可能な鉄の蛍光アッセイはＬｙｔｔｏ ｎ　ｅｔ　ａｌ、、　（１９９１）　Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、４０：５ ８４に記載された通りに行なった。

静置（内容に変更なし） ＦＩＧ、１ し−ｐｒｏ、Δ　し−ｏｌａ　、Δ　Ｄ　−ｏｌｏ　、ΔＦＩＧ、２ 相対鉄結合能ｉｐ、１ ＦＩＧ、３ ＦＩＧ、４ ０　５　ｒＯｒ５　２０　２５　３０ 日？濃度（１−４ｇ／ｍＬ） ＦＩＧ、５ 暴露時間（ｈｒｓ） 栄養型 暴露時間（ｈｒｓ） ＦＩＧ、６ ０　グ０　２０　３０　４０　５０ ＦＩＧ、７ 前処理細胞 ＦＩＧ、８ １θ　２θ　３θ　４θ　５θ　５θ　８ｈｒ時間（ｈｒｓ） 手続補正書泪発） １、事件の表示 イエダ　リサーチ　アンド　テ゛ベロツブメント　カンパニー　リミテッド６、 補正により増加する請求項の数 ７−補正の対象 明細書、請求の範囲及び要約書翻訳文 ８−補正の内容　別紙のとおり 明細書、請求の範囲及び要約書翻訳文の浄書（内容に変更なし）′　ゝ　１　１ 　°一方式〕 特許オ長−ｇや　平成・５年１２月２日ｊ１−事件の表示 イエダ　リサーチ　アンド　デベロップメント　カンパニー　リミテッド（ほか 　２名） ４、代理人 ６−補正により増力口する請求項の数 ７−補正の対象 代理権を証明する１面 国際調査報告 国際調査報告 ＥＰ　９２０１４７４ Ｓ＾　６２５６３ フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３１／４７　 ９３６０−４ＣＣＯ７Ｄ　２０９１０４　９２８４−４Ｃ２１３／７５　６７０ １−４Ｃ ２１５／３８　７０１９−４Ｃ ２３３１５４９３６０−４Ｃ （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ 、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ ）、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、Ｃ３，ＦＩ、ＨＵ、ＪＰ。

ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　Ｎｏ、　ＰＬ、　ＲＯ，ＲＵ 、ＳＤ、ＵＳ ＦＩ （７２）発明者　リブマン、ジャックリーヌイスラエル国７６　１００　レホポ ト、モスコビッツ　ストリート　１３ （７２）発明者　シャンツアー、アブラハムイスラエル国７６　１００　レホポ ト、メオノット　ウォルフソン　３．ワイズマン　インスチチュート　オブ　サ イエンス　気付（７２）発明者　カバントチツク、ゼット０．イオアブイスラエ ル国９１　９９９　イエルサレム、ラベヌ　ポリティ　ストリート　６

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．Ｉ式の化合物を活性成分として含む製薬組成物：Ｒ２Ｃ｛ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ ）ｎＣＯ［ＮＲ３ＣＨＲ（ＣＨ２）ｍＣＯ］ｏＮＯＨＲ１｝３（Ｉ） （ここでＲは水素、ＯＲ５，ＳＲ５，ＮＲ５Ｒ６，ＣＯＲ６，ＣＯＯＲ６，ＣＯ ＮＲ５Ｒ６，−ＮＨＣ（ＮＲ５Ｒ６）＝ＮＲ７，アリル、アラルキル、またはヘ テロアリルで任意に置換したアルキル；Ｒ１，Ｒ２およびＲ３は水素、アルキル 、アラルキル、アリル、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＨＲ４およびＣＯＮＲ４Ｒ４から成 る基から独立に選択される；さらにＲ２はアルコキシ、アルケニルオキシまたは −Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＸまたは−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＮＨＸのような 基で置換したアルキルであり、Ｘはアルキル、アラルキル、アリルまたはヘテロ アリルである；Ｒ４，Ｒ５およびＲ６は水素、アルキル、アラルキル、アリルま たはヘテロアリルである；ｎは１または２；ｍは０，１または２そしてｑは０ま たは１、そしてｍが０のとき、−ＮＲ３ＣＨＲ−部分はピロリジン環、またはそ れらの製薬学的に許容される塩である）。
2. ２．式Ｉの化合物において、Ｒ１とＲ２は同じかまたは異なるより短鎖のアルキ ル、ｎは１または２、ｍは０、ｑは１で−ＮＲ３−ＣＨＲ−ＣＯ−部分はα−ア ミノ酸から得られる、請求の範囲第１項の製薬組成物。
3. ３．−ＮＲ３−ＣＨＲ−ＣＯ−部分は天然のα−アミノ酸から得られる、請求の 範囲第２項の製薬組成物。
4. ４．−ＮＲ３−ＣＨＲ−ＣＯ−部分は非天然アミノ酸から得られる、請求の範囲 第２項の製薬組成物。
5. ５．活性成分として次式の化合物： Ｒ２Ｃ［ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＣＨＲＣＯＮＯＨＲ１］３（ここでＲ、 Ｒ１およびＲ２は同じかまたは異なる短鎖アルキル基でｎは１または２である） を含む請求の範囲第１項の製薬組成物。
6. ６．活性成分として次式の化合物： Ｃ２Ｈ５Ｃ（ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨＲＣＯＮＯＨＣＨ３）３（ここ でＲはメチル、イソプロピル、イソブチルまたは二級ブチルである）を含む請求 の範囲第５項の製薬組成物。
7. ７．活性成分として以下の化合物： Ｃ２Ｈ５Ｃ（ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨＲＣＯＮＯＨＣＨ３）３（ここ でＲは二級ブチルである）を含む請求の範囲第５項の製薬組成物。
8. ８．凍結乾燥型での式Ｉの化合物を含む、請求の範囲第１項から第７項のいずれ かの製薬組成物。
9. ９．Ｆｅ（ＩＩＩ）過負荷と関連する病理的疾患の治療のための、請求の範囲第 １項から第７項のいずれかの製薬組成物。
10. １０．Ｆｅ（ＩＩＩ）−依存有機体によってひき起こされた病理的疾患の治療の ための、請求の範囲第１項から第７項の製薬組成物。
11. １１．マラリア治療のための請求の範囲第１０項の製薬組成物。
12. １２．特許請求の範囲１で定義された式Ｉの化合物であって、そこでのＲ２はア ルコキシ、アルケニルオキシ、または基−Ｏ（ＣＨ２）ｐＣＯＯＸまたは−Ｏ（ ＣＨ２）ｐＣＯＮＨＸで置換したアルキルであり、そこでのｐは１から１０まで の整数でＸはアルキル、アラルキル、アリルまたはヘテロアリル、およびＲ，Ｒ １，Ｒ３，ｍ，ｎおよびｑは特許請求の範囲１で定義された通りである化合物。
13. １３．Ｒ２は−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ−キノリルである請求の範囲第１ ２項の化合物。