JPH06505488A - セルロースエーテルを使用した血液コレステロールレベルの低下 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 セルロースエーテルを　した コレステロールレベルの 発明ヱ８乞野 本発明は、哺乳動物中の総血漿コレステロールレベルを低減するために有用な方 法および食料品に関する。さらに詳細には、本発明は、水溶性セルロースエーテ ルを使用することによりコレステロールレベルを低減する方法に関する。

良胛鬼背ｌ 総血漿コレステロール（ＴＰＣ）レベルは、血清コレステロールレベルとも称さ れており、上昇したＴＰＣレベルが、冠状動脈心疾患の発生の重要な要因である ことが確固として認められている。したがって、ＴＰＣレベルを低減する方法を 発見し、開発することにはかなり高い関心が寄せられている。血清コレステロー ルを有意に低減し得る薬剤が現在入手可能であるが、これらの全てではなくとも 大部分には、望ましくない副作用がある。

健康および疾患に対する食物繊維の作用に関して多くの研究が行われてきた。種 々の起源による繊維の、コレステロールに対する効果を比較する各研究により、 異なる起源の繊維が、哺乳動物中のＴＰＣレベルに対して各々異なる影響を与え るという結論が得られた。これらの研究によれば、セルロースなどの繊維は、哺 乳動物においては、低コレステロール血症性ではない。Ｄ、　Ｋｒ１ｔｃｈｅｖ ｓｋｙおよびＪ、Ａ、　５ｔｏｒｙらノＣＲＣＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｄｆｅ ｔａｒ　Ｆｉｂｅｒ　ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎｓ　ｒ　Ｉｎｆｌ ｕｅｎｃｅＯｆ　Ｄｉｅｔａｒｙ　Ｆｉｂｅｒ　Ｏｎ　Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ 　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　Ｉｎ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ａｎｉ＋ｏａｌｓ Ｊ、第４．３章（１９８６Ｇ、　５ｐｉｌｌｅｒ編）を参照されたい。

セルロース誘導体に関しては、Ｄ、Ｌ、　Ｔｏｐｐｉｎｇらが、Ｊ、　Ｎｕｔｒ 、、　５９．２１　（１９８８）において、低粘度、中粘度および高粘度（２％ の溶液で２５〜１５００　ｃｐｓ）のメチルセルロースの、ラット中でのコレス テロール低下効果を試験した。Ｄ、Ｌ、　Ｔｏｐｐｉｎｇらは、炭水化物および 脂肪酸の代謝における変化を記録し、そして、これらの変化が、小腸における栄 養素の消化および吸収の速度が遅くなったことに起因すると推測した。しがし、 血漿および肝臓コレステロール濃度は、これらの物質によって変化することはな かった。

したがって、血漿コレステロールレベルを低減し得る因子が、必要とされ続けて いる。

ル肌旦１皿 本発明は、哺乳動物、即ちヒトの血液中の総血漿コレステロール（ＴＰＣ）のレ ベルを低下させる治療方法を提供する。この総血漿コレステロールレベルは、有 効な量の水溶性セルロースエーテルを哺乳動物に投与することによって、有意に 低減され得る。本方法の実施に有効な非常に多くの種類のセルロースエーテルは 、市販されているか、あるいは従来の有機合成法により容易に得られ得る。これ らの物質は、各々の投薬量で毒性が無く、そして、一般的に味が無く、しかも本 質的にカロリーが無い。

セルロースエーテルは、乳化、テクスチャー保持もしくは水分保持などのある種 の機能特性を向上させるために種々の食料品に使用されているが、しがし、その 使用量は、通常、食料品の０．５％未満である。これらのレベルは、非常に低い ために、本発明の基礎となるコレステロール低下効果などの重要な生理的効果を もたらすことはない。

したがって、本発明は、さらに、ヒトに摂取されるように意図された加工食料品 を提供する。この加工食料品は、１種類もしくはそれ以上の水溶性セルロースエ ーテルを含有しており、この水溶性セルロースエーテルの量は、ある量の食料品 が、単独で摂取された場合に、あるいは被験体の１日当りノカロリー必要量を満 足させるべく使用される他の食物との組み合わせで摂取された場合に、ＴＰＣを 低下させるために有効な量である。加工食料品中に従来使用されていた僅がな量 とは対照的に、本発明の主題である食料品は、好ましくは約２〜２０重量％の１ 種類もしくはそれ以上の水溶性セルロースエーテルを含有し、そして好ましくは 約５〜１５重量％の１種類もしくは複数種類のセルロースエーテルを含有する。

これらのレベルでは、哺乳動物、即ちヒトは、１日当りに消費する１０００キロ カロリーの総置物に対して１日当り約１〜３０　ｇ、好ましくは約２〜１０　ｇ の割合のセルロースエーテルを摂取する。したがって、本方法によって有用なコ レステロール低下効果（≧５〜１０％）を得るためには、成人男子は１日当り約 ２．５〜１０　ｇ。

好ましくは約４〜８ｇのセルロースエーテルを摂取し、そして成人女子は、１日 当り約２〜８　ｇ、好ましくは約３〜７．５ｇのセ／Ｉ／　Ｏ−スｘ−ｆ　／ｌ ／　ヲＭ　取する。このセルロースニーテルハ、例えば中粘度から高粘度のヒド ロキシプロピルメチルセルロースなとである。しかし、非常に上昇したＴＰＣを 有するヒト患者に対しては、１日当り３０〜３５　ｇもの高い投与量を指示し得 る。

の　な看　日 図１は、セルロース（ａ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロースのインビ トロでの粘度と、ハムスター中の血漿総コレステロールとの関係を示すグラフで ある。

図２は、セルロース（ａ）およびＨＰＭＣの半ビボでの内容物の粘度と、ハムス ター中の血漿総コレステロールとの関係を示すグラフである。

ましい　、　の１日 本発明のセルロースエーテル化合物は、好ましくは、低級アルキルオキシ（例え ばＣ＋からＣ４）置換基もしくはヒドロキシ（低級（アルキルオキシ））置換基 、特にメトキシル基およびヒドロキシプロピルオキシル基を含有する。このタイ プのセルロースは、米国特許第４．９００．５７３号、第４．７３４．２８５号 および第４．７０４．２８５号、ならびにＫｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ−Ｃｏｎｃｉ ｓｅ　Ｅｎｃ　ｃｌ。

ｅｄｉａ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏ　ＳＭ、　Ｇｒａｙｓｏ ｎ編、Ｗｉ　ｌｅｙ−１ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ　ＮＹ　（１９８５）の２３１ 〜２３２ページに記載されており、これらの開示内容は、本明細書中に参考とし て援用される。本発明に使用する代表的なセルロースエーテルは、メチルセルロ ース、２−ヒドロキシプロピルメチルセルロース、２−ヒドロキシエチルメチル セルロース、２−ヒドロキシブチルメチルセルロース、２−ヒドロキシエチルエ チルセルロース、２−ヒドロキシプロピルセルロース、メチルエチルセルロース およヒ２−ヒドロキシエチルセルロースである。高粘度水溶性２−ヒドロキシプ ロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）が特に好ましい。

本明細書中に報告されている粘度は、１重量％もしくは２重量％のセルロースエ ーテル水溶液中で２０°Ｃで回転粘度計を用いて測定され、センチポアズ（ｃｐ ｓもしくはｃＰ）単位で表される。本発明に使用される２％のセルロースエーテ ル水溶液の粘度は、望ましくは５０〜２００，０００　ｃｐｓの範囲であり、好 ましくは７５〜１００．　（１００・ｅｐｓの範囲であり、そして最も好ましく は１００〜１０．０００　ｃｐｓの範囲である。「高粘度」セルロースエーテル は、少なくとも約１０，０００　ｃｐｓの粘度を有する。

この用途に使用するための「水溶性」とは、２グラムの粉末状のセルロースエー テルを、０°Ｃ〜１００°Ｃの間の温度で１００グラムの水中に加えて攪拌する ことにより分散させて、これによって、実質的に透明な、安定した水性組成物も しくは分散系（この分散系の温度を２０℃にした場合）が得られ得ることを意味 する。

セルロースエーテルは、セルロースパルプをカセイソーダ存在下で種々の化学反 応物と反応させることによって、生成され得る。例えば、メチルセルロースエー テルは、化学反応物としてクロロメタンを使用することによって、生成され得る 。）ＩＰＭｃは、反応物としてプロピレンオキシドおよびクロロメタンを使用す ることによって、生成され得る。例えば、Ｃ０Ｒ，Ｎｏ１ｌｅｒのＣｈｅｍｉｓ ｔｒ　ｏｆ　Ｏｒ　ａｎｉｃ　Ｃａｎ　ｏｕｎｄｓｘ　Ｗ、Ｂ、５ａｕｎｄｅｒ ｓ　Ｃｏ、、Ｌｏｎｄｏｎ　（第２版１９５７）の４０４〜４０５ページを参照 されたい。

本発明のセルロースエーテル化合物の水溶液の見掛は粘度は、この化合物の分子 量もしくは鎖長に比例する。哺乳動物中のＴＰＣレベルを低下させるために有用 な水溶性高粘度セルロースエーテルの数平均分子量は、望ましくは少なくとも約 １０ｏ、　ｏｏｏダルトンであり、そして好ましくは１００．０００ダルトンか ら２５０．０００ダルトンまでの範囲である。重量平均分子量は、数平均分子量 の３〜１０倍である。

本発明に使用されるセルロースエーテルは、さらに、毒性が無く、非イオン性で 、カロリーが無く、生物学的に不活性であり、しかも食用に適するという特徴を 有する。

本発明による哺乳動物の血液中のＴＰＣレベルを低減する方法は、有効な量の水 溶性セルロースエーテルを哺乳動物の消化管に投与する工程を包含する。一つの タイプの水溶性セルロースエーテル、もしくは複数種類のセルロースエーテルの 混合物を、投与し得る。好ましくは、１種類もしくは複数種類のエーテルを、薬 学的に受容可能な担体との組み合わせで、即ち、錠剤、ゼラチンカプセル、摂取 量を予め計量した溶液などの、１種類もしくはそれ以上の薬学的な単位投与剤型 で投与する。投与方法には種々のものがあり得るが、セルロースエーテルは、望 ましくは経口投与され、そして好ましくは毎日の食事の一成分として、即ち、水 、乳状液、植物油、ジュースなどの液体媒体との組み合わせで、ヒトに摂取され る。

アルイハ、セルロースエーテルは、摂取可能な固体もシ＜ハキ固体マトリックス 中に加えられて、例えば従来の成形賦形剤との組み合わせで、摂取されるか、ま たは、ポリエチレングリコール、天然ゲルなどのカプセル充填剤中に加えられて 摂取される。

セルロースエーテルは、直接（好ましくは溶液の状態で）もしくは粉末の形態で 投与され得るか、または、他の食物成分と組み合わされ得る。セルロースエーテ ルに対して一般的に適合性を有する多くの食料品は、Ｍ、に、　Ｗｅｉｂｅｌら （米国特許第４．９２３．９８１号）によって開示されている。この開示内容番 よ、本明細書中に参考として援用されている。例えば、セルロースエーテルを、 シェイク（即ちミルクセーキ）、朝食用飲料、ジュースおよび味付は飲料、ヨー グルト、プディング、アイスクリーム、アイスミルク、フローズンヨーグルト、 チーズケーキフィリング、グラノーラ（ｇｒａｎｏｌａ）ノ望−およびフル−ツ バ−などの「健康食バー」を含むキャンデーツク−、ガム、ハードキャンデー、 フルーツフイリングなどのペーストリーフィリング、シリアル、ノくン、調理済 みの詰め物、およびインスタントポテトなどの食物中に混合し得る。有効な量の 本発明のセルロースエーテルはまた、サラダドレッシング、糖衣、スープ、ソー ス、グレーピー、マヨネーズおよび他のスプレッド中の脂肪の代用物としても使 用され得る。さらに、セルロースエーテルは、錠剤、顆粒剤、カプセルなどとし て処方され得る。したがって、「食物成分」は、この用語が本明細書中で使用さ れているように、上記の食料品の調理法において一般に使用される成分を含む。

これらの成分には、穀粉、果物、乳状液、卵、澱粉、大豆タンパク質、砂糖、砂 糖シロップ、植物油、バター、レシチンなどの乳化剤などが含まれる。

好ましくは、水溶性セルロースエーテルを、経口摂取の前に、部分的に、もしく は完全に水和させる。例えば、セルロースエーテルを、十分な量の水中に分散さ せることにより、シロップ状の液体を生成し得る。次に、このシロ・ノブ状の液 体を、穀粉および他の穀物製品などの１種類もしくはそれ以上の食物成分と混合 することによって、ペーストもしくは練り粉（ｄｏｕｇｈ）を得る。これを、次 いで、ベーキング、押し出し加工などの既知の食物調製法で処理することにより 、食用に適した食料品を得る。着色料および調味料は、当然、添加され得る。こ れらの添加は、食料品の好ましさを向上させるために適切であり得る。セルロー スエーテルが組み合わされ得る食物成分は、代謝可能であり、しかも所定のカロ リー値を有する。そして、使用されるこのような食物成分の量は、そのカロリー 含有量により測定され得る。

機能的に有効な量のセルロースエーテルを使用する。この量は、少なくとも、哺 乳動物、例えばヒトの血液中のＴＰＣレベルを有意に低減するために必要な最少 量である。したがって、規定食中に含まれるべき水溶性セルロースエーテルの所 望の投与量もしくは量は、ヒト患者の体型および性別、ならびに患者のＴＰＣレ ベルによって異なる。

例えば、上記の食料品は、典型的には、２％から２０％までの総セルロースエー テル含有量を有するように処方され、そしてこの含有量は、使用するセルロース エーテルの粘度グレードおよび食料品のタイプに依存する。濃度および粘度の組 み合わせは、ある程度実験に基づいて決定されなければならない。例えば、ミル クセーキもしくはプディングでは、重量％は１０〜２０％となり得る。しかし、 焼き食品類の場合は、製品のレオロジー特性に有害な影響を及ぼすことの無い状 態では、僅か２〜５重量％の範囲が可能となり得る。薬学的な単位投与剤型中に 組み込まれるセルロースエーテルの量は、当然これよりもはるかに多い。なぜな らば、味およびレオロジーは、主たる問題ではないからである。この場合は、例 えば、約２０〜９８％、好ましくは約５０〜８０％のセルロースエーテルを使用 し得る。

大部分の環境下では、１日当りに消費される１、　０００キロカロリ（ｋｃａｌ ）の総合物に対して約２グラムから約３０グラムまでの摂取が適切である。好ま しくは、１日当り、１，０００　ｋｃａｌに対して１０グラムから２０グラムま でが消費される。

本発明を、これを限定するものではない以下の実施例により、さらに説明する。

支監興上 ハムスターの総血漿コレステロールレベルを低下させる高粘度および低粘度ＨＰ ＭＣ調製物の能力を測定した。この測定は、ＨＰＭＣＭ製物を含有する規定食を 与えた動物の総血漿コレステロールレベルを、高粘度および低粘度グアーガム調 製物を含有する規定食を与えた動物の総血漿コレステロールレベルと比較するこ とによって、行われた。

得られたＨＰＭＣは、２％の水溶液の状態で２０°Ｃで回転粘度計を用いて測定 したところ、約１００，０００　ｃｐｓの粘度を有していた。

Ｗｅｌｌｓ−Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ　Ｖｉｓｃｏｎ＋ｅｔｅｒモデルＬＶＴＤ、 円錐平板法を用いた。これは、Ｄ、Ｄ、　Ｇａ１ｌａｈｅｒらのｒＴｈｅ　Ｅｆ ｆｅｃｔ　Ｏｆ　ＤｉｅｔａｒｙＦｉｂｅｒ　Ｔｙｐｅ　Ｏｎ　Ｇｌｙｃａｔｅ ｄ　Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　Ａｎｄ　Ｒｅｎａｌ　Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ　Ｉ ｎ　Ｔｈｅ　Ａｄｕｌｔ　Ｄｉａｂｅｔｉｃ　Ｒａｔｊ、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　 Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１０．１３１１〜１３２３　（１９９Ｇ＞に記載の通りに 行われた。この文献の教示内容は、本明細書中に参考として援用される。

本実施例で使用した高粘度ＨＰＭＣは、Ｔｈｅ　Ｄｏｔ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃ ｏｗｐａｎｙから入手した（ＭＥＴ）ＩＯＣＥＬ”　Ｋ１００ＬＶプレミアムグ レード、ロット番号ＭＭ９００４１３２１に、塩化ナトリウム含有量０．６重量 ％）。

低粘度）ＩＰＭｃは、２％の水溶液の状態で２０℃でＶｅｉｌｓ−Ｂｒｏｏｋｆ ｉｅｌｄ　Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒを用いて上記のように測定したところ、約１０ ０ＣｐＳの粘度を有していた。

グアーガムは、市販されており、本来粘性を有する。本実施例で使用した高粘度 グアーガムは、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙから入手した。

この高粘度グアーガムは、２重量％の水溶液の状態で２０”Ｃで上記のように測 定したところ、約１００．０００　ｃｐＳの粘度を有していた。

本発明で使用した低粘度グアーガムは、Ｔｈｅ　Ｄｏｗ　ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ ｍｐａｒ＋ｙから入手した。その粘度（２重量％の水溶液の状態で２０℃の場合 ）は、Ｗｅｌｌｓ−Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ　ＶｉｓｃｏｍｅｔｅｒモデルＬＶＴ Ｄを使用したところ、６／秒のずり速度で約６４　ｃｐｓであった。低粘度グア ーガムは、周知の酸加水分解法に従って限定的に酸加水分解することにより天然 グアーガムの粘度を低減して、調製された。

ＨＰＭＣおよびグアーガムの高粘度および低粘度調製物を、各々、以下に記載の 動物用規定食の他の種々の成分とＨｏｂａｒｔ　Ａ−１２０ｖｅｒｔｉｃａｌ　 ｍ１ｘｅｒ中で混合した。上記の調製物を含有する規定食を、１組当り１６体の 雄ゴールデンシリアンノ＼ムスターを含む４組に対して６週間与えた。これらの ７１ムスターの重量は、７９グラムから１２１グラムまでの範囲であった。

使用した現定食は、以下の表１に記載の成分を含有するものであった。

（以下余白） 表」− 購入したカゼイン、８５％のタンパ’；”ｉｔ　ｚｏ。

ＨＰＭＣもしくはグアーガム　５゜ バーム油　１００ ＡＩＮミネラル混合物’　３５ ＡＩＮビタミン混合物２１゜ 重酒石酸コリン　２ １　ミネラル混合物の混合比（％）　：　ＣａＨＰＯａ、　５０．０；　ＮａＣ １゜７．４；にクエン酸塩！ＬＨ２０，２２，０；　Ｋ２ｓＯ４，５，２；　Ｍ ｇＯ，２，４；第一マンガンＣＯ３，０，３５；クエン酸第二鉄、　０．６０； 　ＺｎＣ０：＋、　０．１６；ＣｕＣ０ｑ、　０．０３；　ＫＩＯ３，０，００ １；　Ｎａ２５ｅＯ３ｉ５Ｈ２０，０，００１；　ＣｒＫ（ＳＯ４ｈｉ１２１ｈ Ｏ，０，０５５；粉末状のスクロース、　１１．８゜種々の起源のタンパク質に おける、規定食中の総カルシウム量および総リン量は、各々概数で（規定食１０ ０グラム当りの量（ｍｇ））　：粗カゼイン、６５６および６２０；精製カゼイ ン、５２０および５６０；単離された大豆タンパク質、５５８および５５２゜２ 　ビタミン混合物１ｋｇ当りの量（ｇ）：　チアミ７ＨＣ１，０，６；リボフラ ビン、０．６；ピリドキシンＨＣＩ、　０．７；ナイアシン、３．０；Ｃａパン トテン酸塩、１．６；葉酸、０．２；ビオチ：／、　ｏ、ｏｚｏ；ビタミンＢ　 １２．　ｌ　ＩＩｇ；　ビタミンＡ、　４００，０００１０；　ビタミンＥ、ｓ 、ｏｏｏ　１０：　ピタミ７Ｄ３．　２．５　ｍｇ；　とタミ７に、　５．０　 ｍｇ；以上のものと合計して１，０００　ｇとなる量の粉末状のスクロース。

各ハムスターは、１日当り約８ｇのこの飼料を摂取した。６週間後にこれらのハ ムスターを屠殺することにより、血漿試料を得た。ＴＰＣレベルを酵素により測 定した。この測定には、Ｃ，Ａ、Ａ１１ａｉｎらのｒＥｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｄｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｓｅｒｕｍ　Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒ ｏｌＪ、Ｃｈｉｎ、　Ｃｈｅｍ、、　２０．４７０　（１９７４）に記載の方法 を改変したものを使用した。この文献の教示内容は、本明細書中に参考として援 用される。簡潔に記載すれば、試料中のコレステロールエステルを、コレステロ ールエステラーゼにより加水分解してコレステロールを得て、次いでこのコレス テロールをコレステロールオキシダーゼにより酸化することによって、コレスト −４−エン−３−オンおよび過酸化水素を得た。次いで、この過酸化水素を、ペ ルオキシダーゼ存在下で、色素原である４−アミンベンゼンスルホネートと結合 させることにより、キノンイミン染料を得た。このキノンイミン染料の最大吸光 度は、５００　ｒｖである。得られる色の強度は、試料中の総コレステロール濃 度に正比例する。

肝臓中の遊離コレステロールエステルの量を、次のように計算した。各肝臓の一 部を重量１ｇ分だけ採取し、そしてこれを、クロロホルムとメタノールとを混合 した溶剤（２：１）と混合することにより、脂質を抽出した。この脂質の抽出に は、周知の脂質抽出法を用いた。この混合物を濾過し、濾液の各アリフートを乾 燥し、非イオン界面活性剤中に入れて、そして乾燥し、次いでコレステロールレ ベルを酵素により測定した。

試料中の遊離コレステロールレベルを測定するために、上記の酵素アッセイを、 Ｃ１１ｎ、　Ｃｈｅｗ、、　２ｇ、１３７９　（１９８２）に記載の方法に従っ て改変することにより、試料をエステラーゼと結合させる工程を省略した。その 他の手順は変更されなかった。得られる色の強度は、試料中の遊離コレステロー ル濃度に正比例する。

コレステロールエステルのレベルを測定するために、肝臓試料の総コレステロー ルレベルを、上記の方法に従って測定した。試料中に存在するコレステロールエ ステルの濃度は、総コレステロール濃度から遊離コレステロール濃度を減算する ことによって、決定された。

これらの結果を表２により以下に示す。

（以下余白） 一部にニし に’ｌ負　ｋ’Ｊ　（ｍｇ／ｄｉ）　解＠　（／ｙｌｌｌｖｔ４菫＊ｔ−ｓ＞） ｒ＋＋＋＋＋１６　Ｃ１ｉｎｋ　ＣＣ工２ｒ＋Ｌ−ＬＧ　２１４．５＊１０．２ ”　２．８±０．２１ｂ２０．２ｔ２．２”ＬＭ　２２３．３±１１．７’　３ ．２±０．３”　２０．２±１．８１ＨＧ　１７０．１±７．８５　２．４±０ ．１ｂ１３．２±１．４ｂＨＭ　１５１．９＊７．９ｂ２．４ｔ０．１ｂ４．８ ＝０．６ｅ低粘度グアーガムおよび低粘度ＨＰＭＣのグループに比較して、高粘 度グアーガムおよび高粘１ｉＨＰＭＣのグループにおける総血漿コレステロール は、統計的には有意に低かった。肝臓コレステロールエステルでは、高粘度ＨＭ のグループが最も低く、次いで高粘度グアーガムのグループが低かった。同様に 、肝臓中の遊離コレステロールは、高粘度化合物を摂取した動物中において、よ り低かった。

支去五ｌ 々の　庶グレードの）ＩＰＭｃの 最初の重量が８０〜１００ｇの雄ゴールデンシリアンハムスター（Ｈａｒｌａｎ 　Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｖｌｅｙ　Ｉｎｃ、、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ ）　を１　ステンレススチールメ、／ユケージに１体づつ入れて、市販のラット 用規定飼料（ｒａｔ　ｒａｔｉｏｎ）　（Ｒｏｄｅｎｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ 　Ｃｈｏｗ　５００１、　Ｐｕｒｉｎａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｆｅｓ）および任 意の量の水を３日間与えることにより、環境に適応させた。精製した実験用規定 食を、実施例１に従って調製したが、ただし、この場合には、セルロースおよび ４つの異なる粘度グレードを有するヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰ ＭＣ）　（Ｔｙｐｅ　Ｋ　ＭＥＴＨＯＣＥＵ■、　Ｄ。

ｗ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　Ｍｉｄｌａｎｄ、　Ｍｌ）　（１９〜２４％のメトキシ ；４〜１２％のヒドロキシプロポキシ）を、食物繊維の起源として用いた。

ＨＰＭＣ剤型を、次のようにして規定食中に混合した：極めて高い粘度の（ＥＶ ）　ｌ（ＰＭＣは、Ｋ１００Ｍ　（１００，０００ｃｐｓの粘度）であった。高 粘度ノ（ＨＶ）　ＨＰＭＣを、６０重量％のＫ１００Ｍと４０％ノに１５Ｍ（１ ５，０００ｃｐｓの粘度）との混合物から生成した。中粘度の（ＭＹ）ＨＰＭＣ を、６５重量％のに１５Ｍと３５％のに４Ｍ（４，０００ｃｐｓの粘度）との混 合物から生成した。そして、低粘度の（ＬＶ）　）ＩＰＭＣは、！［１００ＬＶ 　（１００ｃｐｓの粘度）であった。ＭＥＴＨＯＣＥＬＯ製品の市販名は、ＭＥ ＴＨＯＣＥＬ［Ｆ］を２％の濃度で溶解した水中で２０°Ｃで測定した粘度値（ ±２０％）に基づいている。粘度を、水中に１％の濃度で溶解した溶液で３７° Ｃで再度測定したく以下参照）。実験プロトコールでは、ハムスターを無作為に ５つの処理グループに分けた。食物摂取量および体重の概算を毎週出（−だ。食 物摂取量に関しては、こぼれた量だけ補正を行った。

３週間任意に食物を与えた後に、腸管内容物の粘度および総血漿コレステロール 濃度を測定した。見掛は粘度の測定は、ＡＳＴＭモノグラフＤ１３４７およびＤ ２３６３　（ＤＯＷ　Ｕ、Ｓ、Ａ、）に基づいて行った。高温水（８０〜９０℃ ）を）ＩＰＭｃ粉末に加えることにより、１％の溶液を生成した。この溶液を１ ０分間攪拌し、水浴中に入れて、攪拌し、そして４０分間水浴中に保持すること により、水和および溶解が確実に完了するようにした。この溶液を遠心分離する ことにより、溶液中に閉じ込められていた空気を排出した。溶液の温度を３７° Ｃに調整し、そして、Ｗｅｌｌｓ−Ｂｒｏ。

ｋｆｉｅｌｄ円錐平板粘度計（Ｂｒｏｏｋ４ｉｅｌｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ 、　Ｓｔｏｕｇｈｔ。

ｎ、　ＭＡ）を用いて数種類のずり速度で粘度を測定した。ＨＰＭＣの水溶液は 、ずり速度の増加に従って見掛は粘度が低下するという偽塑性流動作用を呈する 。対数一対数用紙上に作成したずり速度対粘度のグラフは、はぼ直線であった。

したがって、このグラフを、あるずり速度における粘度を予測するために使用し 得た。比較のために、推測によって所定のずり速度における各値を得た。

規定食を３週間与えた後に、ハムスターにエーテルで麻酔をかけて、そして、心 臓穿刺により血液を試験管に採集した。

各試験管中には、総血漿コレステロール分析（Ｓｉｇｍａ　Ｄｉａｇｎ。

５ｔｉｅｓ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）を行うために、エチレンジアミン 四酢酸（ＥＤＴＡ）　（血液１　ｍｌ当り１　ｍｇ）が入っていた。小腸および 盲腸を取り出し、盲腸の重量を計った。小腸を、注意深く剥離して（ｓｔｒｉｐ ｐｅｄ）、その内容物を採集した。この内容物を、ＪＡ２０．１０−ターを使用 したＪ２−２１高速遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、５ｐｉ ｎｃｏ　Ｄｉｖ、　Ｐａ１ｏ　Ａｌｔｏ、　ＣＡ）中で３０．０００　ｘ　ｇで ３０分間４°Ｃて遠心分離した。上澄みの体積を記録して、この上澄ミ液（非ニ ユートン液体であると推定される）の粘度を上記のように測定した。粘度を、セ ンチポアズ（。Ｐ）単位で表した。各値を、分散分析法（−元装置）によって分 析した。各平均値の差異を、ダンカン（Ｄｕｅａｎ）のマルチプルレインジテス トを用いて調べた。平均値は、ｐ＜　０．０５において有意であると考えられた 。

セルロースおよびＨＰＭＣの各々の水溶液（１％）の見掛は粘度を、表３に示す 。

果　３゜ ４盲し賀う、ｆ、ｆｒｏ　憤り　の　見壬紮トｌｒＣイ〉ビ’ｆ−Ｄ　ｉ漬）’ ＃；ｔ：更　７こＦ襲“東り馬隻用木ｐ定實−ｔ’ｒＬ丁−６６１升め　ｉ％ｔ ’？＃宿−γ勿−半どホ”　ｔ”の　溶りと虻１１、ｔｌ　２％；１處 ３ＬＶ＝低粘度ヒドロキシプロピルメチルセルロ−スｂＭＶ＝中帖度ＨＰＭＣ， 　ｃ）ＩＶ−高粘度）ＩＰＭｃ、および、’ＥＶ＝極めて高い粘度のＨＰＭＣ． 　１％のＨＰＭＣ水溶液の粘度（よ、製造業老により提供された値である。セル ロースのインビトロでの粘度（よ、任意である。腸管内容物粘度（半ピボ）の値 は、１０〜１２の試料（２、３の試料は貯蔵されたもの）の平均値±ＳＥＭを示 す。右端の列中の、異なる上付き文字を有する各平均値には、ｐ＜Ｏ．Ｇ５にお いて有意な差異がある。

）ＩＰＭＣのインビトロでの粘度と半ビボでの粘度との間には、正の（　ｐｏｓ ｉｔｉｖｅ）線形関係があることが判明した（ｒ”＝０．９５２）。これによっ て、この実験の条件下では半ピボでの粘度をインビトロでの粘度から予測し得る ことが示唆される。

）ＩＰＭＣは、膨潤し、次いで水和することにより水中に溶解する炭水化物ポリ マーである。予想どおりに、腸管内容物の液体体積は、半ビボでの粘度の増加に 伴って増加した。半ビボでの粘度が約２５０　ｃＰを超えると、液体体積は、プ ラトーに達すると思われる。内容物と共に測定した盲腸の重量については、高粘 度ＨＰＭＣを与えたハムスターにおける盲腸の方が重いという傾向にあった。

総血漿コレステロールに対するセルロースおよびＨＰＭＣのインビトロおよび半 ビボての粘度の効果を、各々図１および図２に示す。図１中の各点は、表３に示 した１％のセルロースもしくは肝ＭＣ溶液のインビトロでの粘度（ｃＰ＝センチ ポアズ）、および規定食を３週間与えた後の血漿総コレステロール濃度（Ｉ１ｇ ／１００　Ｉｌｌ）を示す。各血漿総コレステロール濃度値は、１２〜１３体の 動物の平均値±ＳＥＭを示す。共通の上付き文字を有さない各血漿コレステロー ル平均値には、有意な差異がある（ｐ＜００５）。

図２中の各点は、腸管内容物の粘度（半ビボ）、および規定食を３週間与えた後 の血漿総コレステロール濃度（ｌａｇ／ｄｉ）を示す。各血漿総コレステロール 濃度値は、１２〜１３体の動物の平均値±ＳＥＭを示し、そして半ビボでの各粘 度値は、１０〜１２体の動物の平均値±ＳＥＭを示す。共通の上付き文字を有さ ない各血漿コレステロール値には、有意な差異がある（ｐ＜０．０５）。

これらの二つの図は、非常に類似した関係を示している。

なぜならば、インビトロでの粘度と半ビボでの粘度との開に高い相関関係がある からである。この発見により、これらの条件下では、インビトロでの粘度が、セ ルロースエーテルのコレステロール低下能力を予測するために有用であり得るこ とが示唆される。ＨＰＭＣ処理を行った全ての場合における総血漿コレステロー ルは、セルロースヲ用いたコントロール（各図において上付き文字ａを有する点 ）と比較して、著しく低　゛かった。

総血漿コレステロール低下効果については、高粘度のＨＰＭＣの方が幾分大きい ようであったが、しかし、ＬＶ　ＨＰＭＣとＭＹ　ＨＰＭＣとの差異のみが、統 計的に有意であった。総血漿コレステロールは、１％溶液の半ビボでの粘度が増 加して約１５０　ｃＰに達するまでは、その増加に従って著しく減少した。半ビ ボでの粘度がさらに増加しても、低コレステロール血症反応がさらに進行するこ とはなかった。

これらのデータを対数目盛上にグラフとして表すと、血漿コレステロールと半ビ ボでの粘度との間には、高い線形関係が存在する（ｒ２＝０．９８２）　（デー タは不図示）。

以上引用した全ての特許、特許出願および公報は、本明細書中に参考として援用 される。本発明の好ましい実施態様について記載してきたが、本発明の意図およ び添付の請求の範囲から逸脱することなく、この実施態様に対して種々の変更、 改作および修正を行い得ることを理解されたい。

ＦＩＧ、１　４ｋｒｆ（ｃＰ） ＦＩＧ、　２　内７糊ず椿　（ｃＰ） 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成５年９月６日ｉ

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒト中の総血漿コレステロールレベルを低減する治療方法であって、該ヒト が、このような治療を必要としており、そして、有効な量の水溶性セルロースエ ーテルを該ヒトに投与する工程を包含する、方法。
2. ２．前記水溶性セルロースエーテルが、２重量％の水溶液の状態で２０℃で測定 した場合に少なくとも約５０ｃｐｓの粘度を有する、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記セルロースエーテルの粘度が、約１００〜５０，０００ｃｐｓである、 請求項２に記載の方法。
4. ４．前記セルロースエーテルが、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロ ース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシ プロピルメチルセルロースからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
5. ５．前記セルロースエーテルを、薬学的に受容可能な担体との組み合わせで投与 する、請求項１に記載の方法。
6. ６．前記投与の形態が、経口摂取である、請求項１に記載の方法。
7. ７．前記セルロースエーテルを、液体媒体中に分散させるか、もしくは溶解する 、請求項６に記載の方法。
8. ８．１日当りに消費される１０００キロカロリーの食物に対して約１ｇから約３ ０ｇまでの間のセルロースエーテルが摂取される、請求項６に記載の方法。
9. ９．前記セルロースエーテルが粉末である、請求項１に記載の方法。
10. １０．前記セルロースエーテルを、少なくとも部分的に水和させる、請求項１に 記載の方法。
11. １１．哺乳動物中の総血漿コレステロールレベルを低減し得る栄養食料品であっ て、２重量％の水溶液の状態で２０℃で測定した場合に少なくとも約５０ｃｐｓ の粘度を有する約２〜２０重量％の水溶性セルロースエーテルと、所定のカロリ ー含有量を有する別個の代謝可能な食物成分との混合物を含有する、栄養食料品 。
12. １２．前記セルロースエーテルが、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル ロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースもしくはヒドロ キシプロピルメチルセルロースである、請求項１１に記載の食料品。
13. １３．前記セルロースエーテルが、２％の水溶液の状態で２０℃で測定した場合 に少なくとも約１００ｃｐｓの粘度を有する、請求項１１に記載の食料品。
14. １４．前記セルロースエーテルが、２％の水溶液の状態で２０℃で測定した場合 に約１００ｃｐｓから５０，０００ｃｐｓまでの粘度を有する、請求項１１に記 載の食料品。
15. １５．前記食料品が、前記セルロースエーテルに水分を与えて膨張させる程の十 分な量の水を含有する、請求項１１に記載の食料品。
16. １６．哺乳動物中の総血漿コレステロールレベルを低減し得る栄養食料品であっ て、２重量％の水溶液の状態で２０℃で測定した場合に少なくとも約５０〜１０ ０，０００ｃｐｓの粘度を有する粉末状の水溶性高粘度セルロースエーテルを十 分な量の水と結合させて該セルロースエーテルを膨張させることにより形成した 約２〜１５重量％のセルロースエーテルと、所定のカロリー含有量を有する別個 の代謝可能な食物成分との混合物を含有しており、これによって、該食料品が摂 取された場合に、１日当りに消費される１，０００ｋｃａＩの総食物に対して２ グラムから１０グラムまでの割合の該セルロースエーテルが提供される、栄養食 料品。
17. １７．ある量の水溶性セルロースエーテルを薬学的に受容可能な担体との組み合 わせで含有する薬学的な単位投与剤型であって、該セルロースエーテルの量が、 ヒトに該単位投与剤型を投与した場合に該ヒトの総血漿コレステロールレベルを 低下させるために有効な量である、薬学的な単位投与剤型。
18. １８．前記水溶性セルロースエーテルが、２重量％の水溶液の状態で２０℃で測 定した場合に少なくとも約５０ｃｐｓの粘度を有する、請求項１７に記載の薬学 的な単位投与剤型。
19. １９．前記セルロースエーテルの粘度が、約１００〜５０，０００ｃｐｓである 、請求項１８に記載の薬学的な単位投与剤型。
20. ２０．前記薬学的に受容可能な担体が液体である、請求項１７に記載の薬学的な 単位投与剤型。
21. ２１．前記液体が水である、請求項２０に記載の薬学的な単位投与剤型。
22. ２２．錠剤もしくはカプセルを含有する、請求項１７に記載の薬学的な単位投与 剤型。
23. ２３．前記セルロースエーテルが、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル ロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキ シプロピルメチルセルロースからなる群より選択される、請求項１７に記載の薬 学的な単位投与剤型。
24. ２４．前記セルロースエーテルが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである 、請求項２２に記載の薬学的な単位投与剤型。