JPH06505981A - 造影剤におけるまたは造影剤に関する改良 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 造影剤におけるまたは造影剤に関する改良本発明は新規な造影剤（ｃｏｎｔｒａ ｓｔ　ａｇｅｎｔ）に関し、詳細には診断用超音波画像化に有用な、ガスを含有 するまたはガスを発生する新規な造影剤に関する。

超音波画像化は、例えば、特にカルジオグラフ診断法での脈管系の検査や、組織 微小血管系の検査に潜在的に可能性を持つ価値ある診断手段である。これによっ て得られる音響像を増強するために、固体粒子の懸濁液、乳化液滴、ガス気泡お よびカプセル封入されたガスまたは液体を含めて、各種の造影剤が提案されてき た。容易に圧縮可能な低密度造影剤は、それが発生する音響の後方散乱の点で特 に効率的であることが一般に認められており、従ってガスを含有する系およびガ スを発生する系を製造することに著しい関心がよせられてきた。

生理学的に許容できる物質を心臓内に注入することにより生体内に遊離ガス気泡 を発生させることを含む初期の研究により、このような気泡が超音波心臓検査法 での造影剤として効率的である可能性が示されてきた。しかしながらこのような 技術は遊離気泡が直ちに消失するため実用化には著しい制約がある。従って、超 音波心臓検査法および他の超音波検査のためにガス気泡を安定化する方法、例え ば乳化剤、油、増粘剤または蔗糖を用いる方法に興味が示されてきた。

１０８０１０２３６５号は超音波画像化を増強するためにゼラチンカプセルに封 入されたガスの微小気泡の使用を開示している。しかしながらこのような微小気 泡は、カプセル封入用被覆が極端に薄いことからみて、超音波心臓検査法で使用 するのに好ましい寸法（１〜１０ａｍ）では十分な安定性を発揮しない。

ヨーロッパ特許第３２７．４９０号は、遊離型または結合型のガスまたは揮発性 液体（つまり６０℃以下の沸点をもつもの）を含有する、微細粒状で生分解性の 合成ポリマー（例えばヒドロキシ炭酸ポリエステル、ポリアルキルシアノアクリ レート、ポリアミノ酸、ポリアミド、ポリアクリル化サツカライド、またはポリ オルトエステル）からなる超音波造影剤を特に開示している。

米国特許第４．７７４．９５８号は変性されたプロティン例えばヒトの血清アル ブミン中にカプセル封入することにより安定化された微細気泡分散物の使用を開 示している。

このような系は例えば２〜５Ｆ雪の寸法を有する微細気泡系の製造は可能である が、それでもなお左心および心筋の効率的な可視化には使用できない。

カプセル化剤としてプロティンを使用するこの他の超音波造影剤も文献中に述べ られており、例えばＥＰ第０３５９２４６号（ｉｌｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｓ ｙｓｔｅｓｓ）　、ＵＳ第４．８３２．９４１号（曹ａｘ−Ｐｌａｎｃｋ　Ｇｅ ５ｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ）　、ＵＳ第４．８４４．８８２号（Ｍｏｌｅｃｕｌａ ｒ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｗｓ）、ＷＯ第８４１０２８３８号（Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ ）、ＵＳ第４．５７２．２０３号（Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ）、ＥＰ第００７７７５ ２号（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、ＵＳ第４．７４７．６１０号（Ｔｈｅ　Ｒｅｇｅｎ ｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）、Ｗ Ｏ第８０１０２３６５号（Ｒａｓｏｒ）、ＵＳ第４．７７４．９５８号（Ｆｅｉ ｎｓｔｅｉｎ）、ＵＳ第４．７１８．４３３号（Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ）、ＥＰ第 ０２２４９３４号（Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ）などである。

商業的に開発されたプロティンをベースにした唯一の超音波造影剤は、アルブミ ン溶液の超音波処理により調製されたアルブネックス［相］という、ガス充填ア ルブミンの懸濁液からなる。

アルブミンをベースとした超音波造影剤は以下の各文献中でも述べられている： Ｂａｒｎｈａｒｔ氏他、Ｃｏｎｔｒａｓｔ　Ｍｅｄｉａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ（１ ９８９）、Ｈｅａｒｔ　Ｊ、　１１．２６１（１９９０）、Ｔｅｎｃａｔｅ氏他 、Ｅｕｒ　Ｈｅａｒｔ　Ｊ。

しかしながら、前記のようにガスを充填したプロティンの微小球体をベースにし た超音波造影剤は生体内で不安定であり、このような製品を改良する余地がある 。

Ｓｅｇａｒ氏他は、＾ｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈ ｙ　（９月号、２１〜２２．１９８９）中で、バッチ、混合圧、混合時間および 媒体のすべてが、このようなプロティンベースの製品による左心房のコントラス トに影響すると結論している。

Ｆｅｌｎｓｔｅｉｎ氏他は、Ｊ、＾−，Ｃｏ１１．Ｃａｒｄｉｏｌ　１６．３１ ６（１９９０）中で、投与グループに関係な（アルブミン微小球体による空洞の 不透明化は注射液の８８％が右心室内にそして注射液の６３％が左心室内に認め られたと発表している。５ｈａｎｄａｓ氏他は、Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　８２ ．９５　（１９９０）中で、ガス充填したアルブミン微小球体の圧力に関連した 安定性について問題を提起し、また５ｈａｐｉｒｏ氏他は最近Ｊ、＾■。

ルブミンの投与後の心筋の超音波コントラスト強化の不足を発表している。

Ｆｅｌｎｓｔｅｉｎ氏はＥＰ第０２２４９３４号の第４および８頁並びに請求項 ９、ＵＳ　４，７１８，４３３号の第３と５１ＩＩｌおよびＵＳ第４、７７４． ９５８号の第３と５欄中で、アルブミンのガス気泡を安定化するための化学的変 性について以下のように提案している： ［また、５％のアルブミンから形成した微小気泡は、プロティンおよびその誘導 体を化学的に変性または「固定」する各種の化学薬剤で処理することにより、商 業的に、また臨床的に利用しつる造影剤を作るために安定化することができる。

プロティン（または誘導体）の化学的変性は、グルタルアルデヒドのようなプロ ティン−反応性のアルデヒドにプロティンを結合することによっても達成するこ とができる。発明に係わる微小気泡造影剤を安定化する後者の手順として、微小 気泡をｐＨ４，５でプロティン１ｇ当り５０％の水性グルタルアルデヒド０．２ ５　ｑと６時間反応させることができる。この処理済み造影剤をおだやかにかつ 充分に水洗して未反応のグルタルアルデヒドをできる限り多く除く。」 プロティンのための種々の変性用薬剤または架橋剤は文献中に記述されている（ 例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙ■ｏｌ山、５８４　（１９８９）およびＣｈ ｅｍｉｃａｌ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ＰｒｏｔｅｉｎＭｏｄｉｆｉｃａｔ ｉｏｎ、Ｖｏｌ、Ｕ、第１２３頁、ＣＲＣブレス社刊、などを参照）。

いかなる造影剤も使用後に被験者から速やかに除去されるべきで、例えば好まし くは４８時間未満の半減期をもつことが重要である。グルタルアルデヒドまたは ホルムアルデヒドによる架橋は、超音波による画像化中の安定性と迅速な除去と の適切なバランスを得るのに、必ずしも効果的ではない。ヒト血清アルブミンで あるプロティン自体は血管系酵素により速やかに分解されず、またグルタルアル デヒドのような試薬はプロティンと生物分解性の結合を容易には形成しない。

本発明は微小気泡のプロティンシェルを架橋して生物分解性の結合基を導入し、 かくして超音波造影剤に超音波による画像化中の適切な安定性と続いて速やかな 除去を可能とするに充分な生物分解性を付与するという概念に基づいている。

そこで、本発明によれば、生物分解性の架橋基によつて架橋されたプロティンの シェル中に封入されたガスまたはガス前駆体からなる超音波造影剤が提供される 。

使用することのできる生物分解性の結合にはアミド、イミド、イミン、エステル 、無水物、アセタール、カルバメート、カルボネート、カルボネートエステルお よびジサルファイド基が含まれる。好ましくは少なくともこのような基が１個架 橋基中に存在すべきである。一般的に、任意のエステル、特に−〇〇−〇−また は−ｏ−ｃｏ−ｏ−の基を有するエステルは生物分解性である。生物分解性エス テル基の特に有用な１つは次の構造をも有する。

−（Ｙ）、−ＣＯ−０−Ｃ（ＲＩＲ重）−０−ＣＯ−（Ｚ）、−（式中、ＹとＺ とは同じでもまたは異なってもよ＜、−０−１−Ｓ−または−ＮＲＩ−であり； 記号ｎは同じでもまたは異なってもよく、０または１であり、Ｒ１とＲＩとは同 じでもまたは異なってもよく、水素原子または炭素結合した一価の基であるかま たは一緒になって炭素結合した二価の有機基を示し；そしてＲ３は水素原子また は有機基であり、好ましくはＹとＺは−０−である）。このような基は一般に分 解して化合物ＲＩ　Ｒ’ＣＯを除去しモして残基上のカルボキシル基を形成する か、またはカルボネートエステルの場合は、二酸化炭素を除去して残基上のヒド ロキシ基を形成することができる。

ｇｌ、ＨｚおよびＲ３はそれぞれ例えばＣ６〜２゜のヒドロカルビルまたはへテ ロ環基であり、たとえばアルキルまたはアルケニル基（好ましくは１０個までの 炭素原子を有する）、シクロアルキル基（好ましくは１０個までの炭素原子を有 する）、アラルキル基（好ましくは２０個までの炭素原子を有する）、アシル基 （好ましくは２０個までの炭素原子を有する）または２０個までの炭素原子とＯ ，ＳおよびＮから選択された１個またはそれ以上のへテロ原子とをもつヘテロ環 基である。かかるヒドロカルビルまたはへテロ環基は１個またはそれ以上の官能 基、例えばハロ’ｆ　ンＲ子＊　ｔ：　＋ｔ　式−ＮＲ’Ｒ’、　−ＣＯＮＲ’ Ｒ’、−ＯＲ’、−３Ｒ８オヨヒ−ＣＯＯＲ？　（ここでＲ４とＲ８とは同じで もまたは異なってもよく、水素原子、Ｒ１とＲ２について定義したようなアシル 基またはヒドロカルビル基であり−Ｒｅは水素原子またはＩＩまたはｇｔについ て定義したようなアシル基または基であり、そしてＲ７は水素原子またはＲ１ま たはＲ＝について定義した基である）。Ｒ１とＲ１が二価の基を表す場合、これ は例えば前に定義したような１個またはそれ以上の官能基を有することのできる アルキレンもしくはアルケニレン基（好ましくは１０個までの炭素原子を有する ）であることができる。一般にＲＩとＲ２とは好ましく水素であるかもしくはＣ ３〜４のアルキル基のような小さい基である。

プロティン成分は任意のプロティンまたはポリアミノ酸を含むその誘導体でもよ い。アルブミン、ゼラチンおよびγ−グロブリンが代表的な化合物である。プロ ティン例えばアルブミンは、ヒトまたは動物の血液のような生物原料から得るこ とができるか、あるいは組換え技術を用いて下等生物より生成することもできる 。発酵によりヒト血清アルブミンを調製する典型的な方法は１０第９００２８０ ８号（Ｄｅｌｔａ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌｔｄ、）中で述べられてい る。

本発明の更なる特徴によれば、ガスまたはガス前駆体が生物分解性の架橋基によ って架橋されるプロティン中に封入されている、微小気泡超音波造影剤の調製方 法が提供される。

プロティンの架橋はカプセル封入の前、その間または後で行うことができる。例 えば、まず微小気泡を形成することによりカプセル封入しそして次に架橋を行う のが好ましい。

架橋剤は式（Ｉ） ＾１−Ｘ−＾！　（■） （式中Ｘは１個またはそれ以上の生物分解性結合を有する連結基でありそして基 Ａ１とＡ２は同じものでもまたは異なってもよく、プロティンと反応性の官能基 である）の化合物であることができる。

基Ｘはプロティンと反応性の別の基を有し、架橋の度合を大きくすることもでき る。

好ましくは、基Ｘは３０個以上の原子鎖長をもつべきではない。

従って、基Ｘは下記の形態をとる。

−Ｒ”Ｅ、Ｒ”− （式中Ｒ８とＲ９は同じでもまたは異なってもよく、二価の有機基、例えばＣｌ −１１のアルキレンまたはアルキリデン基であり、これはプロティンと反応性の 基および／または不活性な基をさらにもつことができ、そして基Ｅはエステル基 、例えば前に定義した式−０−ＣＯ−１−ｏ−ｃｏ−ｏ−または−（Ｙ）　、− ＣＯ−０−Ｃ（Ｒ’　Ｒ”）−０−Ｃｏ−（Ｚ）　、−ナトテアル）。

下記の式 ％式％ （式中Ａ１、＾！、Ｒ１、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ９、ｎＳＹおよびＺは前記の意味をも つ）の架橋剤は式ＡＩ−Ｒ”−（Ｙ）、−Ｃｏ−０１１の酸またはその一形態（ ここでＡおよびその他のいずれの反応基も保護されている）（またはその官能性 誘導体）を式Ｌｌ−Ｃ（ＲＩＲ’）−Ｌ’（ここでＬＬはハロゲン原子またはメ シルオキシあるいはトシルオキシのような離脱基でありそしてＬ！はＬＩで定義 したような基（対称ジエステルを生成する）または式−〇−ＣＯ−（Ｚ）、−Ｒ ”−Ａ２の基またはその保護された一形態である）の化合物と反応させ、必要で あれば後で脱保護することにより製造することができる。この酸の官能性誘導体 は塩、例えばカリウム塩である。反応は普通溶液中で、例えばジメチルホルムア ミドのような極性溶剤中で行われる。ＪｌとＡ２のための保護基は当該技術にお ける慣用のものであってよい。アルデヒドのための好ましい保護基にはアセター ル、例えばジオキソランのような環状アセタールが含まれる。

化合物Ｌｌ−Ｃ（ＲＩＲ”）−０−Ｃｏ−（Ｚ）　、−Ｒ１−Ａ”　（、ｍ　、 ｍ　テＬＩ　ｌｉハロゲンである）は、ピリジンのような塩基の存在下に式ｔｌ ａｊ！−ＣＯ−（Ｚ）、−Ｒ’−Ａ”　（ここでＨａｌはハロゲン原子を示す） の化合物との反応によりＲ’Ｒ’−ＣＯから製造することができる。

アルデヒド基は好ましいが、この他に基＾１およびＡ２は、Ｎ−ヒドロキシサク シンイミジル基（特に水溶性が増強されたスルホン化Ｎ−ヒドロキシサクシンイ ミジル誘導体）のような活性化されたカルボキシル基、イミドエステル、ハロー ニドロアリール基、アトジフェニルのようなニトレン前駆体基、カルベン前駆体 基、ケトン基、イソチオシアネート基、などであってもよい。

任意の生物学的に適合性のガス、例えば空気、窒素、酸素、水素、亜酸化窒素、 二酸化炭素、ヘリウム、アルゴン、６フツ化イオウおよび低分子量の場合により フッ素化されたヒドロカーポ類、例えばメタン、アセチレンまたは４フツ化炭素 などを本発明の造影剤中で使用することができる。ガスは微小気泡内で遊離であ ることもできるし、また含有する物質内に捕捉されるかあるいは混ぜ合わされて いることもできる。ここで用いた「ガス」という用語は３７℃で気体形態である 全ての物質も含むものである。

ガス前駆体には炭酸塩および重炭酸塩、例えば重炭酸ナトリウムまたはアンモニ ウムおよびアミノマロネートエステル類が含まれる。

超音波心臓検査での応用としては、肺器管を自由に通過可能にしそして約０．１ 〜１５１１Ｈｚの好ましい画像化周波数との共鳴を行うために、０．１〜１０〆 ■、例えば１〜７０の平均サイズを有する、微小気泡を用いるのが好都合である 。しかしながら、実質的により大きな、例えば５００ｊｍまでの平均サイズをも つ気泡も、他の応用例えば胃腸の画像化または子宮あるいはファロビーオ管（卵 管）の検査などに有用である。

前記のように、微小気泡はカプセル封入ガスとともに粒子状の物質をとり入れる ことにより安定化することができる。かかる粒子には例えばシリカや酸化鉄が含 まれる。このような安定化粒子として好ましい粒子サイズは、微小気泡のサイズ によって、１〜５００ｎｍの範囲内ノモノである。粒子はミセルを分散させるた めに使用した流体媒体により部分的に湿っているだけでなければならない。

つまり粒子の物質と流体間の接触角が約９０６でなければならない。

この安定化粒子はプロティンと相互作用して共有結合またはその他の結合を形成 する官能基をもっことができる。コロイド状のシリカ粒子は５〜５０ｎ■の範囲 の粒子サイズをもち、表面上にシラノール基を有している。これらの基は水素結 合または共有結合形成によりプロティンと相互作用しうる。

プロティンは液体媒体とガスまたはガス前駆体系との間の界面に単一層を形成す ることにより、もしくはガスまたはガス前駆体を含有する１つまたはそれ以上の 二重層からなるベシクル形成することにより、ガスまたはガス前駆体を安定化す る。

単一層またはベシクル形成による系の安定化は、文献中でも十分に述べられてい るように、適切な媒体中でプロティン材料混合物の一様な振盪または超音波処理 により活性化することができるか、またはベシクルは通常のりボゾーム／ベシク ル形成原理により形成させることができる。

安定化した微小気泡は乾燥または冷凍乾燥させることができるか、あるいは非− 水性相を蒸発させることができる。得られる乾燥系は生理食塩水またはリン酸塩 バッファーのような生理的に許容しうる溶剤中に、場合により懸濁剤または乳化 剤を用いて再懸濁することができる。

ガス捕捉系はガス前駆体を用いて得ることもできるしまたガス自体を捕捉するこ ともできる。ガスは空気の存在下に単に混合物を激しく振盪することにより両親 媒性混合物中に捕捉される。すなわちＵＳ−Ａ第４６８４４７９号中で述べられ ているように液中−ガスのエマルシコンを生成する。別の十分に確定された、す なわちＵＳ−＾第４７７４９５８号中で述べられているガス含有気泡を生成する 方法は、空気の存在下に混合物を超音波処理することによるものである。良く知 られた別の方法は注射器からガスをプロティンと液体の混合物中に送りこむこと である。ＵＳ−＾第３９００４２０号中で述べられているように、微小ガスエマ ルジョンはガスを流れの速い液体中に急速に導入する装置を使用して生成するこ とができる。プロティン材料を含む液体中に低圧の領域が形成される。つぎにガ スをこの低圧領域に導入し、液体を系に供給することにより液中−ガス系を得る 。

電気分解の原理を用いることにより、プロティン材料を含む容器内で直接捕捉さ れるガスを発生させることが可能である。電気分解に必要な電解質はプロティン 材料をさらに安定化する助けをする。電解質を含む水溶液は陰極で水素ガスおよ び陽極で酸素ガスを発生する。両電極は塩橋により分離される。ヒドラジンを加 えることにより、窒素ガスを陽極で発生させることができる。コルベ反応を使用 し、電気分解を用いてカルボン酸からｃｏ！を発生させることもできる。

前述のように、微小気泡は１つまたはそれ以上の二重層からなるベシクルまたは りボゾームを形成することにより得られる。これらのベシクルはガスがベシクル 中に捕捉されるような方式において高圧条件で形成することができる。

本発明による一つの方法では、カプセル封入は水性媒体中でプロティンを撹拌ま たは超音波処理をしてプロティンの泡を生成させ、この泡を乾燥した後プロティ ンの泡を湿らせることのできる極性有機溶剤（例えば、ジメチルスルホキサイド のようなスルホキサイド）中の架橋剤の溶液中に懸濁することにより行われる。

以下の各実施例は説明のためにのみ示されるものである。

出発材料のジオキソラン保護アルデヒドメチルα−ホルミルアセテートの調製は 、Ｔ、Ｈｏｓｏｋａｗａ等によりＪ。

Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｔ　Ｓｏｃ、　５２．　（１９８７）１７５８〜１７６４で述 べられている。この保護アルデヒド（６，０９，３，７５ミリモル）を、２Ｎの 水性水酸化カリウムとテトラヒドロフランの２０＝８０（ｖ／ｖ）混合物と、還 流温度で８時間処理した。ｐｎを希釈したｌＩＣ４を用いて８に調整し、混合物 を蒸発乾固した。

この固体を新たに蒸留し乾燥したジメチルホルムアミド１０（１＋／と混合し、 ６０℃で３０分後に不溶解物を濾別する。

ショートメタン（１５０＊ＪＳ１．８７ミリモル）を、ＷＯ８９１００９８８（ ＮＹＣＯ蓋ＥＤ　ＡＳ）の第１３頁中で述べられているように、６０℃でこの溶 液に対して５分間に滴加した。４日間撹拌後に沈殿を濾過により除き、溶剤を減 圧で除去した。ジオキソラン保護はＰ、＾、　Ｇｒｉｅｃｏ等によりＪ、＾ｍ、 Ｃｈｅｗ、　Ｓａｃ。

９９、　（１９７７）５７７３〜５７８０で述べられているようにして除去し、 残渣はテトラヒドロフラン（６０ｔｊ’）中に溶解し、５％の水性ＩＣ！（２０ ミリ）を添加しそして混合物を周囲温度で２０時間撹拌した。反応混合物を減圧 下に蒸発乾固し表記化合物を得た。

水酸化カリウム溶液（１，ＯＯＭ　、　４０．００ｍ１）を０℃でメタクリル酸 （３，４４９，４０，００ミリモル）に添加し、溶液を１６時間凍結乾燥した。

乾燥ジメチルホルムアミド（２３０＠Ｊ）を加え、懸濁液は乾燥窒素雰囲気下６ ０℃に加熱する。ショートメタン（１，６１票Ｎ、　２０．００ミリモル）を１ ０分間に２回に分けて添加し、反応混合物を６０℃で４日間放置した。

溶剤を減圧（０，０５■■Ｈｇ）下に除去し、飽和水性炭酸水素ナトリウム液（ ５０ｍ１）と水（５０震りを添加した後ジエチルエーテル（１４０ｓ＋１）を添 加した。水性層をジエチルエーテルで抽出（６Ｘ　６０ｓ＋／）　シ、合体した エーテル抽出液を水で洗い（４Ｘ　５Ｔｏ／）　、乾燥しくｗｇｓｏ、）、そし て蒸発させて表記化合物２．６３　ｑ　（７２％）を得た。’１１　ＮＩＲ（６ ０ＭＨｚ。

ＣＤＣ１’ｓ）＋　６１．９７　（２ＸＣＨｓ、ｍ）、５．６３（２ｘＦＩ−Ｃ −、ａ＋）、５．８８（Ｃｕｔ、　Ｓ）、　６．１８　（２ｘトＣ＝、　ｍ）。

ＩＲ（７イＪＬｔム、　ｃｍ−重）＝２９８７（ｗ）、２９６２（ｗ）、２９３ ０（ｗ）、１７３２　（ｓｔｒ）　、１６３８（ｗ）　。

１４５４（ｗ）、１３１５（ｖ）、１２９５（ｗ）、１１５８　（ｗ）、１１０ ０　（ｓｔｒ）　。

１０１２（■）、　９８９（■）。この生成物は本発明に従い、例えばアクリル アミドポリマーの架橋に用いることができる。

水酸化カリウム溶液（１，ＯＯＭ、４０．　ＯＯｉ＋１）を０℃でアクリル酸（ ２，８８ｙ、４０．００ミリモル）に添加し、この溶液を１６時間凍結乾燥した 。乾燥ジメチルホルムアミド（２００ｍｊりを加え、懸濁液は乾燥窒素雰囲気下 ６０℃に加熱した。ジョＦメ９　ンＣ１，６１ｍ１．２０．００　ミリモル）を １０分の間に２回に分けて添加し、反応混合物を６０℃で４日間放置した。

溶剤を減圧（０，０５ｍｍ１ｇ）下に除去し、飽和水性炭酸水素ナトリウム液（ ５０Ｔ１１）と水（５０ｍ１）を添加した後ジエチルエーテル（１４０ｍ／）を 添加した。水性層をジエチルエーテルで抽出しく　６　Ｘ　６０ｍ１）　、合体 したエーテル抽出液を水で洗い（４Ｘ　５０＋＋Ａ’）　、乾燥しく１１ｇ５ｏ ４）、そして蒸発させて表記化合物の１．０６　ｙ　（３４％）を得た。’ｌ’ ｌ　ＮＩＩＲ（６０）ｌＨｚ。

ＣＤＣら）：６５．８１〜６．６１（２Ｘ　ＣＨ＊＝ＣＩ’ｌ−、ｍ）、　５． ８４（Ｃｕｔ、　ｓ）。

この生成物は本発明に従い、例えばアクリル酸およびメチルアクリレートポリマ ーの架橋に用いることができる。

調製例　４ ピリジン（０，８９ｍ／、　１１．００ミリモル）を、ジクロロメタン（１２ｍ ／）中のクロロメチルクロロホルメート（０，８９ｍ１゜１１．００ミリモル） と２−ヒドロキシエチルメタクリレート（１，２２ｍ１．１０．００ミリモル） との溶液に、０℃で乾燥窒素雰囲気下に滴加した。２０℃で２１時間後に、反応 混合物を塩酸（１，００Ｍ、　１０■ｌ）、飽和水性炭酸水素ナトリウム液（１ （１＋ｌ）および水（１０ｍ／）で洗った。有機相を乾燥しくＩｇｓｏ、）そし て減圧（１０ｓｓＨｇ）下に溶剤を蒸発させて表記化合物の１．９７　ｑ　（８ ８％）を得た。ＩＩＴ　Ｎｉ１Ｒ（６０蓋Ｈｚ、　ＣＤＣら）：６１．８８（Ｃ Ｉ’ｌ、、ｄ’、Ｊ＝２　ｆｌｚ）、４．３５（０−ＣＯ，−Ｃ１ｆｔ−０，ｗ ）、５．４７ＣＨ−Ｃ＝、■）、　５．６３（Ｃ［ｌ、−（Ｊ、　ｓ）、　６． ００（トＣ＝、■）。

水酸化カリウム溶液（１，ＯＯＭ　、　５．００ｔｊ’）をメタクリル酸（０， ４３ｇ、５．００ミリモル）に０℃で添加し、この液を１６時間凍結乾燥した。

乾燥ジメチルホルムアミド（５０＋＋／）を加え、得られた懸濁液にクロロメチ ル（２−メタクリロイルオキシ）エチルカーボネート（１，１１ｑ、５．００ミ リモル）を添加した。触媒として１８−クラウン−６（０，０６６す、０．２５ 　ミリモル）を加え、反応は乾燥窒素雰囲気下に放置して進めた。２０℃で２４ 時間と４℃で６日間の後、減圧（０，０５１■ｌ１ｇ）下に溶剤を除去し、そし てジエチルエーテル（３０ｍ１）と水（２０ｍ１）とを添加した。水性層をジエ チルエーテルで抽出しく３　Ｘ　２０ｓ＋ｉり、そして合体したエーテル抽出液 を水で洗い（２０麿ｌ）、乾燥しく菖ｇｓＯ４）そして蒸発させて表記化合物の １．２６９　（９３％）を得た。Ｉｔｌ　ＮＩＩＲ（６０１１Ｈｚ、　ＣＤＣら ）：６１．９７（２ｘｃＨｓ、　ｍ）、　４．３８（ｏ−ｃｕｔ−ｃｕｔ−ｏ。

Ｗ）、５．５３（２ｘＨ−Ｃ＝、ｍ）、５．７７（ＣＨｚ、ｓ）、６．０７（２ ｘＨ−Ｃ＝。

■）。

ピリジン（０，８９ｍ／、　１１．００ミリモル）を、ジクロロメタン（１（１ ＋１）中のクロロメチルりロロホルメート（１，３２肩１１１４．８３ミリモル ）とエチレングリコール（０，２８１Ｉ１１５．００ミリモル）との溶液に、７ ℃で乾燥Ｎ２雰囲気下によ（撹拌しながら滴加した。７℃で１５分と２０℃で６ 時間の後、反応混合物をジクロロメタン（１０ｔｊ’）の助けによって分液ロー トに移した。反応混合物は塩酸（１，００Ｍ、　１０ｍＪ）、飽和水性炭酸水素 ナトリウム液（１０ｍ／）および水（ｌｏｗ／）で洗った。有機層を乾燥しく１ １ｇ５ｏ４）そして減圧下に溶剤を蒸発して表記生成物の１．１２９　（９０％ ）を得た。’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ＣＤＣＪ、）　：δ４．４８　（ｓ、 　０−Ｃ１１ｔＣＨｔ−０）　、　５．７５（ｓ、　２　Ｘ　Ｃ／−ＣＨｚ−０ ）。”ＣＮＩＩＲ（７５１１Ｈｚ、　ＣＤＣ１’ｓ）　：δ６５．８（０−Ｃ１ １ｔＣＨｔ−０）、　７２．２（２ｘ　（Ｊ−Ｃｕｔ−０）、　１５３．０（２ Ｘ　Ｃ＝Ｏ）。

−チル ピリジン（０，８９■ｌ、１１．００ミリモル）を、ジクロロメタン（１０ｍ１ ）中のクロロメチルクロロホルメート（１，３２ｍ１．１４．８３ミリモル）と ジエチレングリコール（０，４１ｍ１゜５、００　ミリモル）との溶液に７℃で 乾燥Ｎ、雰囲気下によ（撹拌しながら滴加した。７℃で１０分と２０℃で６時間 の後、液ロートに移した。反応混合物は塩酸（１，００Ｍ、　ｔｏ■ｌ）、飽和 水性炭酸水素ナトリウム液（１０ｇ＋ｌ）および水（１０ｍｌ）で洗った。有機 層を乾燥（１ｇＳ０４）　シ、そして減圧（１０ｍ＊［Ｉｇ）下に溶剤を蒸発し て表記化合物の１．２６　ｑ　（８６％）を得り。’ＩＩ−ＮＩＲ（３００ＭＨ ｚ、　ＣＤ（Ｊ’ｓ）　：　６３．７２（ｍ、　２ＸＣ［Ｉｔ−０）。

４．３４（ｍ、２Ｘ　Ｃ，Ｈｔ−０−Ｃ＝０）、　５．７１（ｓ、２ｘ　Ｃｆ− Ｃｕｔ−０）。　ｌ５ｃＮＩＲ（７５１１Ｈｚ、ＣＤ（Ｊ３）：　６６７．６（ ２ｘＣＨｔ−０）、６８．５（２ＸＣＨ！−０−Ｃ＝０）、　７２．１（２ｘ　 Ｃｌ−Ｃ０！−０）、１５３．２（２Ｘ　Ｃ＝０）。

ピリジン（０，８９ｓｔ’１１１．００ミリモル）を、ジクロロメタン（１２ｍ ｌ）中の１−クロロエチルクロロホルメート（１，２０ｍ１．１１．００ミリモ ル）と２−ヒドロキシエチルメタクリレート（１，２２ｍ１’、　１０．００ミ リモル）との溶液に、３℃で乾燥Ｎ！雰囲気下に滴加した。３℃で１５分と２０ ℃で１７時間の後、反応混合物をジクロロメタン（ｌｏｔｌ）の助けによって分 液ロートに移した。反応混合物は塩酸（１，ＯＯＭ　ＳｌｏｗＪ）、飽和水性炭 酸水素ナトリウム液（１０ｍ１）および水（２×１０ｍ／）で洗った。有機相を 乾燥（ＩｇＳＯ，）　シ、そして減圧下に溶剤を蒸発して表記生成物の１．７６ ９　（７４％）を得た。

’Ｂ　ＮＩＲ（６０ＭＨｚ、　ＣＤＣｊｓ）　：δ１．８５（３■、　ｄ、　Ｊ ＝６　［１ｚ、　ＣＨｓ−ＣＨ）、　１．９６（３１１，ｄ、　Ｊ＝２　Ｈｚ、 　ＣＨｓ−Ｃ＝）、５．５５（ＩＨ，ｍ、側＝）。

クロロメチル４−アクリロイルオキシブチルカーボネート ピリジン（０，８９＋＋＃、　１１．００ミリモル）を、ジクロロメタン（１２ 璽ｊり中のクロロメチルりロロホルメート（０，９８厘！１１１．００ミリモル ）と４−ヒドロキシブチルアクリレート（１，３８ｍ１．１０．００ミリモル） との溶液に、３℃で乾燥Ｎ、雰囲気下に滴加した。３℃で１５分と２０℃で１７ 時間の後、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍ１）の助けによって分液ロート に移した。反応混合物は塩酸（１，ＯＯＭ　、　１０＊／り、飽和水性炭酸水素 ナトリウム液（１０ｍ１）および水（２Ｘ１０＋＋ｊ）で洗った。有機層を乾燥 （ｌＩｇｓＯ４）　Ｌ／、減圧下に溶剤を蒸発して表記生成物の１．７６９　（ ７４％）を得た。’ＨＮＩＩＲ（６０麗Ｈｚ、ＣＤＣ／３）：　δ　１．８２（ ４Ｂ、ｙｇ、ＣＬ−Ｃ１ｌｔ）、４．２７（４Ｈ。

■、２ＸＣｔ１ｇ−０）、５．７７（２１，ｓ、　ＣＪ−ＣＨｚ−０）、　５． ８〜６．７（３Ｈ。

−、Ｃｌ”ＣＨｚ）。

ピリジン（０，８ｈ＋１ＳＩＬ、ＯＯミリモル）を、ジクロロメタン（１２ｍ１ ）中の１−クロロエチルクロロホルメート（１，２０ＷＺ、　１１．００ミリモ ル）と４−ヒドロキシブチルアクリレート（１，３８震ｌ、１０．００ミリモル ）との溶液に、３℃で乾燥Ｎ！雰囲気下に滴加した。３℃で１５分と２０℃で１ ７時間後に、反応混合物をジクロロメタン（１０ＷＺ）の助けによって分液ロー トに移した。反応混合物は塩酸（１，００Ｍ、　１１）＋り、飽和水性炭酸水素 ナトリウム液（１０ＷＺ）および水（２×１（１＋Ｊ）で洗った。有機層を乾燥 （ＩｇＳＯｓ）　シ、減圧下に溶剤を蒸発して表記生成物の２．２６９　（９０ ％）を得た。Ｉｎ　ＮＭＲ（６０１１Ｈｚ、ＣＤＣｊ’ｓ）：　δ１．８０（４ Ｈ，ｗ、ＣＦｌｚ−ＣＩＨｚ）、１．８６（３１゜ｄ、　Ｊ＝５■ｚ、　ＣＨｓ ）　、　４．２４　（４８，＠、　２ＸＣＨｔ−０）、　５．７〜６．６（４■ 、■、　Ｃｌ＝ＣＨ，およびＣｕ）。

調製例８で述べたようにして作った１−クロロエチル２−メタクリロイルオキシ エチルカーボネート（１，１８３９，５，０Ｏミリモル）を、ジメチルホルムア ミド（５０＋＋１）中の凍結乾燥したメタクリル酸カリウム（０，６８３ｙ、５ ．５０ミリモル）と１８−クラウン−６（０，０６６９，０，２５ミリモル）と の懸濁液に乾燥Ｎ！雰囲気下に添加した。２０℃において５日後に溶剤を減圧下 に除去し、残渣はジクロロメタン（６０＊／）と水（３０＋＋ｌ）とを加えて溶 解した。相を分離した後、水性層はジクロロメタン（３Ｘ　３ｔ）＋ｉ’）によ り抽出し、そして合体した有機相を飽和水性炭酸水素ナトリウム液（５０ｍ１） で洗った。有機相を乾燥（１ｇＳ０４）　シ、減圧下に溶剤を除いて表記生成物 の１．１０９　（７７％）を得た。

’ＨＮＩＲ（６０Ｍｔｌｚ、ＣＤ（Ｊ’ｓ）：　δ１．６３　（３１，ｄ、Ｊ＝ ５　Ｈｚ、ＣＨｓ−Ｃ［Ｉ）、　１．９８（６１，ｓ、　２ＸＣＨｓ）、　４． ４２（４Ｈ，５，０−Ｃｕｔ−ＣＩ’１ｚ−０）。

５．６２（２１，園、ＣＨ＝）、６．１５（２１，−、ＣＩす、６．８４（ＩＩ Ｉ、ｋ、Ｊ＝５　Ｈｚ、　ＣＦＩ−ＣＨｓ）。

調製例９で述べたようにして作ったクロロメチル４−アクリロイルオキシブチル カーボネート（１，１８３ｑ、５．００ミリモル）を、ジメチルホルムアミド（ ５０■ｌ）中の凍結乾燥したアクリル酸カリウム（０，６０６９，５，５０ミリ モル）と１８−クラウン−６（０，０６６ｇ、０．２５ミリモル）との懸濁液に 乾燥Ｎ、雰囲気下に添加した。２０℃において５日後に溶剤を減圧下に除去し、 残渣はジクロロメタン（６０ｍｌ）と水（３０ＷＺ）とを加えて溶解した。相を 分離した後、水性層はジクロロメタン（３Ｘ　３０ＷＺ）により抽出し、そして 合体した有機相を飽和水性炭酸水素ナトリウム液（５（１＋４）で洗った。有機 相を乾燥（ＩｇＳＯ，）　Ｌ、減圧下に溶剤を除いて表記生成物の１．２４９　 （９１％）を得た。’ＨＮＩＩＲ（６６曹Ｈｚ、ＣＤ（Ｊ３）：　δ　１．８２ （４１１，ｍ、Ｃｕｔ−ＣＨｔ）、４．２３　（４Ｈ，ｍ。

２ｘＣＨ，−０）、　５．８８（２Ｈ，ｓ、　０−ＣＬ−０）、　５．７〜６． ８　（６１１，２ＸＣｌ零〇Ｈり。

調製例　１３ 調製例１０で述べたようにして作った１−クロロエチル４−アクリロイルオキシ ブチルカーボネート（１，２５３ｑ、５．００ミリモル）を、ジメチルホルムア ミド（５０ｍｊり中の凍結乾燥したアクリル酸カリウム（０，６０６９，５，５ ０ミリモル）と１８−クラウン−６（０，０６６９，０，２５ミリモル）との懸 濁液に乾燥Ｎ、雰囲気下に添加した。２０℃において５日後に溶剤を減圧下に除 去し、残渣はジクロロメタン（６０＋＋／）と水（３０ｍ１）とを加えて溶解し た。相を分離した後、水性層をジクロロメタン（３Ｘ　３０ｍ１）により抽出し 、合体した有機相を飽和水性炭酸水素ナトリウム液（５０ｔｊ’）で洗ワた。有 機相を乾燥（１１ｇＳ０４）シ、減圧下に溶剤を除いて表記生成物の１．２８９ 　（８９％）を得た。’ＦＩ　ＮＩＲ（６０ＭＨｚ。

ＣＤＣ４，）：　δ１．５８（３８，ｄ、Ｊ−５Ｈｚ、ＣＨｓ−ＣＩ）、１．８ ０（４Ｂ、ｔｓ。

ｃＩｌｌ、−ｃｏ鵞）、　４．２４　（４１，ｍ、　２ｘＣＨ，−０）、　５． ７〜６．７（６８，閣。

セシウム３．３−ジメトキシプロピオネート（１９，９５す、７５ミリモル）を 乾燥ＤＩＦ（１０００ｍ／）に添加した。この懸濁液にショートメタン（１０， ０４９，３７，５ミリモル）を加え、反応混合物は乾燥Ｎ２雰囲気下に６０℃で ２日間撹拌した。

ＤＩＦは減圧下（０，０１■ｓａｇ）に除去した。この残渣にジエチルエーテル （５００ｍ１）を加え、次いでこれを飽和水性炭酸水素ナトリウム液（２５０＋ ＋Ｊ）で洗った。水性層はジエチルエーテル（５Ｘ　７５＊＋Ｊ）で抽出した。

合体したエーテルを水（２Ｘ　１００ｍＪ）で洗い、乾燥（菖ｇｓＯ４）　Ｌ、 そして蒸発させて生成物の７．１　（Ｆ　（７２％）を得た。’ＨＮＭＲ（３０ ０ＭＨｚ。

ＣＤＣＺ、）　：δ２．６１（ＣＨｔ、　ｄ）、　３．２６（ＣＨｓ、　Ｓ）。

ｂ）メチレンビス（３−メトキシプロペノエート）（ａ）で述べたようにして作 ったメチレンビス（３，３−ジメトキシプロピオネート）（１４，０１ｖ、５０ ミリモル）と触媒量のｐ−）ルエンスルホン酸とをトルエン（２５０ｍ／）に加 えた。反応をＮ、雰囲気上加温して行い、メタノールを除去した。反応の完了時 にトルエンを減圧下に留去した。

ジエチルエーテル（２５（１ｍ／）を添加し、混合物を飽和水性炭酸水素ナトリ ウム液（５Ｘ５０■りと水（３Ｘ　５０ｍＪ）で洗った。有機層を乾燥（ＩｇＳ Ｏｓ）　Ｌ、蒸発させて生成物の８、５２　ｑ　（７９％）を得た。’ＨＮＩＲ （３００ＭＴＩｚ、　ＣＤＣＪｓ）　：δ３．６５（２ＸＣＨｓ、　ｓ）、　５ ．２（２ＸＣＨ，ｄ）、　５．８（０−Ｃｕｔ−０）、　７．６５（２ＸＣ１ｌ 、、　ｄ）。

１Ｏ−ウンデシレン酸（１２，７５９，７５ミリモル）を水１００ｍ１に溶解し た。この混合物に炭酸セシウム（１３，０４９，４０ミリモル）を添加した。減 圧下に水を除き、そして塩は真空中で２時間乾燥した。このセシウム塩を１５０ ｍ１のＤＩＩＦと混合し、この液にショートメタンを添加した。反応はＮ、雰囲 気下に６０℃で３日間撹拌して行った。次いで減圧下にＤ）ＩＦを除去した。残 渣は溶離液としてヘキサン／エチルアセテート（８：　２）によりシリカゲルを 通じて精製した。溶剤を蒸発させて生成物７．１８　ｑ　（５４％）を得た。

’ｔｌ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ（Ｊｇ）：　δ１．２〜１．４　（ＩＯＸ ｃ■、、ｍ）。

１、６（２Ｘ　Ｃｌ１１．■）、　２．０　（２ＸＣＨｔ、　ｍ）、　２．１９ 　（２ＸＣＪ、　ｔ）。

４．９（２ＸＩＩ、　Ｃ＝、■）、　５．８８（０−ＣＪ−０，ｓ）、　５．９ （２ＸＣ）Ｉｔ）。

７９．０４　（０−Ｃｆｌ、−０）、　１１４．１８（＝ＣＩｌり、　１３９． １１（＝Ｃ１１）、　１７２．４８（ａ）で述べたようにして作ったメチレンビ ス（１０−ウンデカノエート）（８，８ｇ、２５ミリモル）を、メチレンクロラ イドにＮ、雰囲気下で添加し０℃に冷却した。５５％のメタクロロ過安息香酸（ １５，７５ｇ、５０ミリモル）をメチレンクロライド（１５０■ｌ）に加え、有 機層を分離して乾燥（ＭｇＳＯｓ）させた。このメタクロロ過安息香酸を次にジ エステルに滴加した。添加完了後に温度を２５℃に上昇する。５時間後に反応は 完了した。混合物は飽和水性亜硫酸ナトリウム液（７５ｍ１）と飽和水性炭酸水 素ナトリウム液（２Ｘ　７５ｍＪ）とで洗った。有機層は中性の酸化アルミニウ ム上で精製した。溶剤を減圧下に除いて生成物の８．４５９　（８２％）を得た 。’ＨＮＩＩＲ（３００１１Ｈｚ、　ＣＤＣＪｓ）　：δ１．２〜１．７（１４ Ｘ　Ｃ１１！。

冒）、２．３５（２ｘＣＨ，Ｃｏ、ｔ）、２．４５（２ｘＣｔ１．　ｑ）、２． ７５（２ｘＣＬｑ）、　２．９０（２ＸＣＢ、　ｍ）、　５．７５（０−Ｃ［Ｉ ！−０）。”ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ。

ＣＤＣら）：６２４．５８　（Ｃｕｔ）、　２５．９９　（ＣＩｌり、　２８． ９４　（ＣＩＩＩｔ）　。

２９．０９（Ｃ１ｌり、２９．３２（２ｘＣＩ’ｌｔ）、３２．４５（ＣＨｔ） 、３３．９２（ＣＨり。

４７．０６　（Ｃｕｔ−０）、５２．３６（ＣＨ−０）、７９．０６（０−Ｃｕ ｔ−０）、１７２．２メタクロロ過安息香酸（１５，６８ｑ、５５％、５０ミリ モル）をメチレンクロライド（２００ｍＪ）中に溶解した。水を分離し有機層を 乾燥（ｌ１ｇｓＯ４）させた。得られたメタクロロ過安息香酸溶液を、メチレン クロライド（５０ｍ１）中に溶解したメチレンビス（４−ペンタノエート）（４ ゜１０ｇ、１９ミリモル）に滴加した。混合物は窒素下に周囲温度で１２時間撹 拌し、その後反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム液（５０票ｌ）と水（５ （１＋／）で洗い、乾燥（１ｇＳＯ４）　シ、そして蒸発させて結晶性生成物と して表記化合物の３．６１ｇ（７８％）を得た。’ｆｌ　ＮＩＩＲ（３００菖Ｈ ｚ、　ＣＤ（Ｊｓ）　：δ１．７０〜１．８５　（２ＸＣＨ，ｍ）、　１．９５ 〜２．１０　（２ｘＣＨ，”）ｌ　２，５０〜２．５５（２ＸＣ１’ｌ、　ｚｘ ｃｎ、、■）、　２．７５（２ＸＣＬ　ｔ）、　３．０（２ｘＣＨ，■）。

５．８（０−ＣＨ，−０，ｓ）。”ＣＮＩＩＲ（７５ＭＨｚ、　ＣＤＣＡ’ｓ） 　：δ２７（２ＸＣＨＩ）、　３０（２Ｘ側ｔ）、　４７　（２ＸＣＨｔ）、　 ５１　（２ＸＣＨ）、　７９．８（０−ＣＨｔ−０）、　１７１．８（２Ｘ　Ｃ ＝０）。

調製例　１７ メチレンビス（２−ブテノエート） ビニル酢酸（４，３ｙ、５０ミリモル）を水性の炭酸セシウム液（５０ｍ／）に 添加した。混合物を５分間撹拌し、次いで蒸発させ残渣を真空下で２時間乾燥し た。得られたこのセシウム塩とショートメタンとをジメチルホルムアミド（２０ ０ｍ１）に加え、混合物を窒素下に５０℃で２４時間撹拌し、その後減圧下にジ メチルホルムアミドを除去した。

残液はジエチルエーテル（１０（１＠４）中に溶解し、そして飽和水性炭酸水素 ナトリウム液（２５ｓ＋／）と水（２５ｍ＋７りとで洗った。有機層を乾燥（１ ｇＳＯ４）　シ蒸発させて生成物１．３２ｇ（２９％）を得た。’ＩＩ　ＮＩＲ （３００ＭＨｚ、　ＣＤＣＪｇ）　：δ１．９（２ＸＣＩＩｔ、ｌＩ）、　５． ８〜５．９（２ＸＣＨ，ｍ）、５．９（ＯＣＩｂＯ，ｓ）、７．０〜７．１（２ ｘ　ＣＨ，■）。

調製例　１８ メチレンビス（クロロアセテート） メチレンクロライド（１５冨ｌ）に無水クロロ酢酸（１２，７５す、７５ミリモ ル）、バラホルムアルデヒド（２，２５９，７５ミリモル）および濃硫酸（１５ 滴）を添加した。この混合物を窒素下に５０℃で２４時間撹拌し、その後反応混 合物は飽和水性炭酸カリウム液で炭酸ガスの発生が終わるまで抽出した。有機層 を乾燥（ＭｇＳＯ４）　シ、蒸発乾固し残渣を蒸留（８０℃、０．１５園曽ｔ１ ｇ）　Ｌ、て生成物のｌ０１２９（５７％）を得た。

’ＦＩ　ＮＩＲ（２００１１Ｈｚ、ＣＤＣ４３）：　δ４．１　（２ｘＣＨｔ（ Ｊ、ｓ）、５．９（ＣＨｆｆｉ、　ｓ）。”ＣＮＩＲ（２００１１Ｈｚ、　ＣＤ ＣＪｇ）　：δ４１．１（ＣＩ’ｌ、（Ｊ’）。

８１．４（０−Ｃｕｔ−０）、１６６．４（Ｃｏ）。

調製例　１９ メチレンビス（４−オキソペンタノエート）４−オキソペンタン酸（１１，６１ Ｆ、ｔｏｏミリモル）をアセトニトリル（１０ｍ１）中に溶解し、モしてアセト ニトリル（３０冒りで希釈した１、８−ジアザビシクロ（５，４，０）ウンデ− ７−セン（１５，２５ｑ、１００ミリモル）を添加した。ショートメタン（１３ ，４ｇ、５０ミリモル）を一度に加え、反応混合物を窒素雰囲気下に還流した。

２時間後に、ガスクロマトグラフはショートメタンがすべて消費されたことを示 した。溶剤を真空下に除去し、残った褐色の油状物をエチルアセテート（２００ ｍｊりと水（７５ｇｉりにより分液ロートに移した。有機層をＩＭの重炭酸ナト リウム（２５ｍｌ）と水（３Ｘ　２５ｍＡ’）で洗い、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、 そして溶剤を真空下で除いて表記化合物（１０ｇ）を得た。Ｉ■ＮＭＲ：δ２、 １９（２ｘＣＨｓ、　ｓ）、　２．７６０〜２．８０４（２ｘｃｌｌｔ、　ｔ） 、　２．６００〜２、６４５（２Ｘ　Ｃｕｔ、ｔ）、　５．７３５（Ｃｕｔ架橋 、　ｓ）。

調製例　２０ メチレンビス（スクシンイミジルアゼレート）■−（３−ジメチルアミノプロピ ル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１，４９ｑ、７．７１ミリモル）を、 乾燥ジメチルホルムアミド中のメチレンビス（水素アゼレート）　（１，００ｑ 、２．５７ミリモル）とＮ−ヒドロキシサクシンイミド（０，８９す、７．７１ ミリモル）の撹拌されている溶液に、周囲温度で少しずつ添加した。２０時間の 撹拌後に、反応混合物で氷水中に注入し、生成物を油状に沈殿させた。この無色 の油状物をジエチルエーテル（５（１＋＋ｊ’）中に溶解し、水（３Ｘ　ｉｔ） ＋／）で洗いそして１１ｇ５Ｏ，上で乾燥した。

溶剤を減圧下に除去し、この油状生成物にヘキサン（５ｍ／）を加えた。４℃に 保存して７日後に、この油状物は白いロウ状固体に結晶化した。収量−１，５０ ９（６９％）。

融点：４５〜４７℃。”ＣＮＩＲ（７５１１Ｈｚ、　ＣＤＣ１ｇ）δ：２４．４ ２゜２４．４６．２５．５９．２８．４８．２８．６３．３０．８５．３３．８ ２．７９．６１゜１６８．６．１６９．３０．１７２．３４゜ジメチルホルムア ミド（Ｉｔ）＋１’）中にメチレンビス（水素アゼレート）　（０，３８９，１ ミリモル）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドナトリウム塩（０，４８ｇ、２．２ ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（０，４５す、２．２ミリモ ル）を溶解した。この懸濁液を窒素雰囲気下に周囲温度で一晩撹拌した。反応混 合物を濾過し、モして溶離液として水／アセトニトリル（１：　１）による逆相 クロマトグラフ（ＲＰ−８）で精製して表記化合物を得た。

テトラヒドロフランと水の混合物（３：１ｖ／ｖ）の４００ｍ／中に、Ｎ−メチ ルモルホリン−Ｎ−オキシド（１３，５９，１１ミリモル）と調製例１５（ｂ） からのメチレンビス（１０−ウンデカノエート）（１９９，５ミリモル）とを溶 解した。触媒量の四酸化オスミウムを加え、そして溶液を周囲温度で２０時間撹 拌した。ＴＬＣにより出発材料がすべて消費されていることが示された。次いで この反応混合物に過剰量の亜硫酸水素ナトリウムと食塩とを添加した。生成物は エチルアセテ−）　（４００＋１’）により反応混合物から抽出し、水性層はエ チルアセテート（３Ｘ　５０＋＋１）で洗った。

合体した有機層を乾燥し、蒸発し、そして生成物はテトラヒドロフランから再結 晶し、白色固体状の生成物１４．５９（６８％）を得た。”ＣＮＩＲ（４５１１ Ｈｚ）ＣＤ、００　：δ２４．６〜３４．０（１６ＸＣＩＴり、　６６．６　（ ２ＸＣＨ！ＯＲ）、　７２．３（２ＸＣＨＯＨ）、　７９．２（０−ＣＦＩ、− ０）、　１７４．０（２ＸＣ＝Ｏ）。

ｂ）メチレンビス（１０−オキソデカノエート）メチレンビス（１０，１１−ジ ヒドロキシウンデカノエート）（２，２４９，５ミリモル）を１５０■ｌのテト ラヒドロフラン中に溶解した。メタ過ヨード酸ナトリウム（２，０６ｇ、１０ミ リモル）を１５０ｍ１の水に溶解し、そしてテトラヒドロフラン溶液に滴加した 。ＴＬＣは６０分後にジオールがすべて消費されたことを示し、そこで２つの相 が分離するまでこの反応混合物に食塩を添加した。水性相はジエチルエーテル（ ３Ｘ　５０＋＋ｌ）で抽出した。合体した有機相は硫酸マグネシウムで乾燥し、 そして蒸発させて油状の表記生成物の１．４３　ｇ　（７４％）を得た。”ＣＮ ＩＲ（４５ＭＢ２）ＣＤＣら：δ２１．９〜４３．９（１６ｘ　ＣＬ）、　７９ ．１（０−Ｃｕｔ−０）、１７３．０（２Ｘ　Ｃ＝０）。

２０２、６（２ｘ　Ｃｌ０）。

実施例　１ １．ガス充填されたアルブミンの微小球体をＥＰ−Ａ第０３５９２４６号により 調製し、バイアルローラー上でおだやかに回転して一様に再懸濁した。

２、　２５ｍ１の懸濁液を’１５ｍ１の分液ロート中に入れ３０分放置した。下 部の２（ｈｌを廃棄する。

３、　残る５ｍｌにリン酸塩バッファー液（２０ｄのＮａＰＯ４、ｐｉ７、０） ２０■ｌを加え、得られた懸濁液を隔膜キャップを有するバイアルに入れる。

４、　バイアルをひっくり返し１７０Ｘ９で５分間遠心分離する。

５、　微小球体層の下の液を注射筒を用いて抜き取り、そして微小球体を１０分 間おだやかに回転することにより２５ｍ１のリン酸塩バッファー中に再懸濁する 。

６．４と５を２回繰り返す。

７、　得られる懸濁液を４のように遠心分離し、そして微小球体が１ｍｌ当り約 ５Ｘ１０＠粒子の最終濃度となるようリン酸塩バッファー中に再懸濁させる。

８、　調製例１中で述べたようにして作った、架橋化剤のメチレンビス（α−ホ ルミルアセテート）をこの懸濁液に添加し、そしておだやかな回転下に架橋化反 応を所要時間（普通３０〜６０分）進行させる。

９、　１．５Ｍのトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８，８）を０．２５Ｍの最終 濃度となるまで加え、懸濁液は１０分間おだやかに回転させる。

１０、バイアルを４のように遠心分離し、そして微小球体層下側の液を５のよう にして取り除く。

１１、微小球体をリン酸塩バッファー中に再懸濁しく９での最終量と同量）、そ して懸濁液を１０分間回転させる。

１２、１０と１１を２回繰り返す。

１３、得られる懸濁液を４のように遠心分離し、そして微小球体が１■ｌ当り約 ５Ｘ１０”粒子の最終濃度となるまでリン酸塩バッファー中に再懸濁する。

１４、この架橋化したガス／アルブミン微小球体の最終懸濁液は４℃で保存する 。

実施例　２〜２２ 実施例１の方法を、調製例２〜２２で述べたようにして作った架橋化剤を用いて 繰り返したが、工程３〜７によるガス充填アルブミン微小球体の処理の際に、ジ メチルスルホキサイドをリン酸塩バッファーの代わりに使用し、また架橋化剤は ジメチルスルホキサイド溶液として工程８で添加した。

生成物の粒子数とそのサイズ分布とはクールターカウンター（ＣｏｕＨｅｒ　ｃ ｏｕｎｔｅｒ）解析器により測定した。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年９月２８日 １、国際出願の表示 ＰＣＴ／ＥＰ　９２１００７１６ ２、発明の名称 造影剤におけるまたは造影剤に関する改良３、特許出願人 住所　ノールウェー国エンー０４０１オスロ４．ピー・オー・ポ′ンクス４２２ ０トルショヴ、ニュコヴエイエン２名称　ニュコメド・イメージング・アクシエ セルカペト４、代理人 住所　東京都千代田区麹町３丁目２番地（相互第一ビル）５、補正書の提出年月 日　１９９３年４月１３日６、添付書類の目録 補正書の翻訳文（請求の範囲）　１通 請求の範囲 １、　プロティンシェル中にカプセル封入されたガスまたはガス前駆体の微小気 泡からなり、該プロティンが生物分解性結合を有する架橋基によりて架橋されて いることを特徴とする、診断用超音波検査に用いるための造影剤。

２、　架橋基がアミド、イミド、イミン、エステル、無水物、アセタール、カル バメート、カルボネート、カルボネートエステルおよびジサルファイド基から選 ばれた生物分解性結合を含む、請求項１に記載の造影剤。

３、　架橋基が式 ％式％（） （式中、ＹとＺは同じでもまたは異なってもよく、−〇−１−８−または−ＮＲ ”−であり、Ｒ１とＲ”ｌｉ同じでもまたは異なってもよく、水素原子または炭 素結合した一価の有機基であるかまたは一緒になって炭素結合した二価の有機基 を示し、ｌｌは水素原子または有機基であり；そして記号ｎは同じかまたは異な ってもよく、０または１である）の生物分解性結合を含む、請求項２に記載の造 影剤。

４、　プロティンがアルブミン、ゼラチンまたはγ−グロブリンである、前記請 求項のいずれかに記載の造影剤。

５、　プロティンがヒト血清アルブミンである、請求項４に記載の造影剤。

６、　さらに無機の粒状安定剤を含む前記請求項のいずれかに記載の造影剤。

７、　ガスまたはガス前駆体をプロティン中にカプセル封入し、そしてカプセル 封入の前、その間または後で生物分解性結合を有する架橋基によりプロティンを 架橋することからなる、請求項１に記載の造影剤の調製方法。

８、　架橋がカプセル封入の後でなされる、請求項７に記載の方法。

９、　架橋が式 ％式％（） （式中、Ｘは請求項２または３で定義された１個またはそれ以上の生物分解性結 合を含む結合基であり、モして＾簸とＡＩは同じでもまたは異なってもよく、プ ロティンと反応性の官能基である）の架橋剤を使用して行われる、請求項７また は８に記載の方法。

１０、　ＡＩとＡ！が共にアルデヒド基である、請求項９に記載の方法。

１１、　カプセル封入が水性媒体中でプロティンを撹拌または超音波処理してプ ロティンの泡を得、この泡を乾燥した後極性有機溶剤中の架橋剤溶液中に懸濁す ることにより行われる、請求項８〜１０のいずれかに記載の方法。

１２、架橋剤が請求項９で定義した式（■）（式中、＾ｌと＾２はいずれも〇− 結合したスルホン化Ｎ−ヒドロキシサクシンイミデイル残基である）の化合物で ある、請求項１１に記載の方法。

国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　ストラーネ、ベル ノールウェー国エン−０７５５オスロ、ノルデングヴエアイ　エン　７８アー

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．プロテインシェル中にカプセル封入されたガスまたはガス前駆体の徴小気泡 からなり、該プロテインが生物分解性架橋基によって架橋されていることを特徴 とする、診断用超音波検査に用いるための造影剤。
2. ２．架橋基がアミド、イミド、イミン、エステル、無水物、アセタール、カルバ メート、カルボネート、カルボネートエステルおよびジサルファイド基から選ば れた生物分解性結合を含む、請求項１に記載の造影剤。
3. ３．架橋基が式 −（Ｙ）ｎ−ＣＯ−Ｏ−Ｃ（Ｒ１Ｒ１）−Ｏ−ＣＯ−（Ｚ）ｎ−（式中、ＹとＺ は同じでもまたは異なってもよく、−Ｏ−、−Ｓ−または一ＮＲ３−しであり； Ｒ１とＲ２は同じでもまたは異なってもよく、水素原子または炭素結合した一価 の有機基であるかまたは一緒になって炭素結合した二価の有機基を示し；Ｒ３は 水素原子または有機基であり；そして記号ｎは同じかまたは異なってもよく、０ または１である）の生物分解性結合を含む、請求項２に記載の造影剤。
4. ４．プロテインがアルブミン、ゼラチンまたはγ−グロブリンである、前記請求 項のいずれかに記載の造影剤。
5. ５．プロテインがヒト血清アルブミンである、請求項４に記載の造影剤。
6. ６．さらに無機の粒状安定剤を含む前記請求項のいずれかに記載の造影剤。
7. ７．ガスまたはガス前駆体をプロテイン中にカプセル封入し、そしてカプセル封 入の前、その間または後で生物分解性架橋基によりプロテインを架橋することか らなる、請求項１に記載の造影剤の調製方法。
8. ８．架橋がカプセル封入の後でなされる、請求項７に記載の方法。
9. ９．架橋が式 Ａ１−Ｘ−Ａ２（Ｉ） （式中、Ｘは請求項２または３で定義された１個またはそれ以上の生物分解性結 合を含む結合基であり、そしてＡ１−とＡ２は同じでもまたは異なってもよく、 プロテインと反応性の官能基である）の架橋剤を使用して行われる、請求項７ま たは８に記載の方法。
10. １０．Ａ１とＡ２が共にアルデヒド基である、請求項９に記載の方法。
11. １１．カプセル封入が水性媒体中でプロテインを撹拌または超音波処理してプロ テインの泡を得、この泡を乾燥した後極性有機溶剤中の架橋剤溶液中に懸濁する ことにより行われる、請求項８〜１０のいずれかに記載の方法。
12. １２．架橋剤が請求項９で定義した式（Ｉ）（式中、Ａ１とＡ２はいずれもＯ− 結合したスルホン化Ｎ−ヒドロキシサクシンイミデイル残基である）の化合物で ある、請求項１１に記載の方法。