JPH06509065A - 造影剤におけるまたは造影剤に関する改良 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 造影剤におけるまたは造影剤に関する改良本発明は新規な造影剤（ｃｏｎｔｒａ ｓｔ　ａｇｅｎｔ）に関し、詳細には診断用超音波画像化に有用な、新しい微粒 子造影剤に関する。

超音波画像化は、例えば、特にカルジオグラフ診断法での脈管系の検査や、組織 微小血管系の検査に潜在的に可能性を持つ価値ある診断手段である。これによっ て得られる音響像を増強するために、固体粒子の懸濁液、乳化液滴、ガス微小気 泡およびカプセル封入されたガスまたは液体を含めて、各種の造影剤が提案され てきた。容品に圧縮可能な低密度造影剤は、それが発生する音響の後方散乱の点 で特に効率的であることが一般に認められており、従ってガスを含有する系およ びガスを発生する系を製造することに著しい関心がよせられてきた。

生理学的に許容できる物質を心臓内に注入することにより生体内に遊離のガス微 小気泡を発生させることを含む初期の研究により、このような気泡が超音波心臓 検査法での造影剤として効率的である可能性が示されてきた。

しかしながらこのような技術は遊離気泡が直ちに消失するため実用化には著しい 制約がある。従って、超音波心臓検査法および他の超音波検査のためにガス微小 気泡を発生および／または安定化する方法、例えば乳化剤、油、増粘剤または蔗 糖を用いる方法に興味が示されてきた。

超音波造影剤中に糖類を使用する技術は例えば米国特許出願４．６８１．１１９ 号、米国特許出願４．４４２．８４３号および米国特許４．６５７．７６５号に 記載されており、これらには、複数のガス充填空隙および好ましくは微小気泡形 成のための複数の核も有するような粒状固体の使用が開示されている。欧州特許 出願０３２２３５０号、１０８８／　０３３８８号、欧州特許出願０１２３２３ ５号、欧州特許出願０１２２６２４号およびドイツ国特許出願３８３４７０５号 は、シクロデキストリン、単糖類、三糖類または三糖類のような糖類を含有して よい脂肪酸でコーティングされたガス含有微粒子よりなる超音波造影剤を示唆し ている。米国特許出願４．８３２．９４１号は、３成分：（１）多糖類のような 大分子、（２）植物油および（３）可溶外鉄（ＩＩ［）塩の混合物よりなる超音 波造影剤を開示している。欧州特許出願００７７７５２号は、ガス気泡、界面活 性化合物（脂肪酸塩および誘導体を包含する）および増粘物質（単糖類および多 糖類を包含する）よりなる超音波造影剤を開示している。欧州特許出願０３２７ ４９０号は重合体でコーティングされたガス含有アミロース粒子を記載している 。

５ｃｈｌｉｅｆ、　Ｒ，は、「造影剤に関する国際シンポジウム、東京（Ｉｎｔ ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｖｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｃｏｎｔｒａｓｔ　Ｍｅｄ ｉａ。

Ｔｏｋｙｏ）（１９８８）Ｊ　、３２３−３２８ページにおいて、Ｓｃｈｅｒｉ ｎｇ　ＡＧで開発中の糖類を基材とした製品であるＳＨＵ　４５４　（Ｅｃｈｏ −ｖｉｓｔ”）に焦点を当てながら超音波造影剤の概論を述べている。この著者 は、「超音波造影剤の過去と未来（Ｃｏｎｔｒａｓｔ　Ｍｅｄｉａ　ｆｒｏｍ　 ｐａｓｔ　ｔｏ　Ｆｕｔｕｒｅ）　、ベルリンシンポジウム（１９８７）Ｊ　、 １７９−１８７ページにおいて、さらにＳＨＵ　４５４について記載している。

Ｌｏｕｇｈｅｒｙ、ＬＪ、等は、「エコー心臓造影（Ｅｌｉｓｅｖｉｅｒ）（１ ９９０）Ｊ　、２７９−２９２ページにおいて、ＳＨＵ　４５４、ＳＨＵ　５０ ｇ　（Ｌｅｖｏｖｉｓｔ’）および蛋白を基材としたＡｌｂｕｎｅｘ”に焦点を 当てながら心筋造影エコー心臓造影を用いた循環試験に関する検討を行っている 。

５ｃｈｌｉｅｆ、　Ｒ，は、「放射線学（Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ）（１９９１）、 １７８」２１３−２１５ページにおいて、子宮およびファロピーオ管の子宮卵管 造影ソノグラフィーにおけるＳＨＵ　４５４の臨床使用を記載している。ＳＨＯ ４５４は下記の文献にも記載されている。Ｒｏｖａｘ＋　Ｄｌ等、、Ｃ１ｒｃｕ ｌａｔｉｏｎ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　ｍ（１９９０）　８２．　２６ページ； 　Ｂａｒｚｉｌａｉ、Ｂ等、、ＣｉｒｃｕｌａｔｉｏｎＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　 ＩＩＩ（１９９０）　８２．　９６ページ；　Ｖｏｒｖｅｒｋ、　Ｄ、　等、。

Ｕｌｔｒａｓｃｈａｌｌ　ｉｎ　Ｍｅｄ、　（１９９０）、１１．　１４６−１ ４９ページ；　ＷｏｎＢｉｂｒａ、Ｈ，等、、Ｅｕｒ、Ｈｅａｒｔ　Ｊ、（１９ ９０）、１１．　５１１２ページ；　ｆｉｌｋｅｎｓｈｏｆｆ、Ｕ９等、、Ｅｕ ｒ、Ｈｅａｒｔ　Ｊ、（１９９０）　１１゜５１１３ページ；　ＥＩ　Ｍｏｕａ ａｏｕｙ、Ａ、等、、Ｓｕｒｇ、Ｅｎｄｏｓｃ。

（１９９０）　４．　１１４−１１７ページ；　Ｓｍ１ｔｈ、Ｍ、　Ｄ、等、、 ＪＡＣＣ（１９８４）　３．　９９２−９９８ページ；　Ｌａｎｇｅ、Ｌ、等、 、Ａｒｚｎｅｉｍ、−Ｆｐｒｓｃｈ、／Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓ、（１９８６）３６（ ｎ）、１０３７−１０４０ベージ；Ｆｒ１ｔｚｓｃｈ、Ｔｈ、等、、Ｉｎｖｅｓ ｔ、　Ｒａｄｉｏｌ、（１９８８）２３（Ｓｕｌ）ｐ１２）、３０２−３０５ベ ージ；＾ｒｉｓａｗａ、Ｊ、等、、ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｙｍｐｏｓｉ ｕｍ　ｏｎ　Ｃｏｎｔｒａｓｔ　Ｍｅｄｉａ、Ｔｏｋｙｏ（１９８ｇ）、３３１ −３３２ページ；　Ｒｏｖａｉ、Ｄ、等、、ＪＡＣＣ（１９８７）１０．　１２ ５−１３４ページ；　Ｈｅｉｄｅｌｍｅｙｅｒ、　Ｃ，Ｆ、等、、　Ｊ、　Ｃａ ｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ　Ａｎｅｓ−ｔｈｅｓｉａ（１９９０）４．６０−６ ７ベージ；　Ｇｒｕｄｅ、　Ｅ、等、、　Ｚ、　Ｋａｒ−ｄｉｏｌ、（１９８６ ）７５．　３３５−３６２ベージ；　Ｉｉａｙｅｒ−３ｃｈｗｉｃｋｅｒａｔｈ 等、、　Ｕｌｔｒａｓｃｈａｌｌ（１９８６）７．３４−３６ページ；およびＢ ｅｃｈｅｒ。

■１等、、　Ａｍ、Ｊ、　Ｃａｒｄｉｏｌ、（１９８９）６４．　３７４−３７ ７ページ。

５Ｈ０５０８は下記の文献に記載されている。５ｃｈｌｉｅｆ、Ｒ。

等、、　Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　［１（１９９０）８ ２．２８ページ：５ｃｈａｒｔｌ、　Ｍ、等、、　Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｓ ｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　ＩＩ　（１９９０）８２゜２６１ページ；　Ｆｒ１ｔｚｓ ｃｈ、　Ｔ、等、、　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｒａｄｉｏｌ、（１９９０）２５（Ｓｕ ｐｐｌ）、　１６０−１６１ページ；５ｃｈｌｉｅｆ、Ｒ，等、、　Ｅｃｈｏｃ ａ−ｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ（１９９０）７．　６１−６４ページ；およびＳｍ１ ｔｈ、１１．Ｄ。

等、、　ＪＡＣＣ（１９８９）１３．　１６２２−１６２８ページ。

メチルセルロースの水性懸濁液はＪ、　Ｃ１１ｎ、　Ｕｌｔｒａｓｏｕ−ｎｄ（ １９７８）６．３１５−３２０ページにおいてＷａｒｒｅｎ、　Ｐ、Ｓ、等によ り経口超音波造影剤として評価されている。

カルシウムアルギネートでカプセル化された微小気泡は、近年、Ｂｉｏｍａｔｅ ｒｉａｌｓ（１９９０）１１．　７１３−７１７ページおよびＰｏｌｙｍｅｒｉ ｃ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（ １９９０）６３、　１４４−１４７において、Ｗｈｅａｔｌｅｙ、Ｍ、Ａ、等に より可能性ある超音波造影剤として記載されている。

上記した糖類を基材とした造影剤のような既存の粒状超音波造影剤の一般的な難 点は、それらがｉｎ　ｖｉｖｏでの安定性を比較的に欠いている点である。これ は、肺キャピラリーベッドを通過することができ、好ましくは１つ以上の循環路 について心臓の左側で良好な可視化が可能となるための微小気泡の径が小さいこ と（典型的には約１０１未満、好ましくは約７−富未満）と十分な安定性とを兼 ね備えた進歩した造影剤が必要とされるエコー心臓造影のような用途において特 に問題となる。

本発明は、微小粒状マトリックスの構造を共有結合的に変性させて、例えば安定 化交叉結合基や親油性コーティングを導入することにより、微小粒状超音波造影 剤のｉｎ　ｖｉｖｏ安定性および／またはエコー源性（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉｔ ｙ）が実質的に増強されるという発見に基づいている。共有結合的に結合した安 定化部分は更に生物分解可能な結合を含むように選択してよ（、これにより、造 影剤が使用後短時間で投与対象から迅速に排出され、例えば１ｎｖｉｖｏで４８ 時間未満、例えば１〜１２時間の半減期を有するような、重要な特性を示すよう にしてよい。

即ち、本発明の１つの特徴によれば、ガスまたはその前駆体とともに生物分解可 能なマトリックスを有し、微粒子がマトリックスの共有結合により安定化される ような、微粒子の形態の超音波造影剤が提供される。

生物分解可能なマトリックスの材料は、例えば交叉結合剤のような試薬（いわゆ るゼロ交叉結合剤も包含する）および／または後述するような脂肪の反応性誘導 体と共有結合的に反応できる適切な官能基を有していなければならない。この要 件をみたすことを条件として広範囲の生物分解可能な物質を本発明に従って使用 してよく、これらには、炭水化物（例えばグルコース、フラクトースまたはガラ クトースのようなヘキソース；スクロース、ラクトースまたはマルトースのよう な三糖類；アラビノース、キシロースまたはリボースのようなペントース；α− １β−およびγ−シクロデキストリン；澱粉、ヒドロキシエチル澱粉、ヒドロキ シプロピル澱粉、アミロース、アミドペクチン、グリコーゲン、イヌリン、プル ラン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、デキストランホスフェー ト、ケトデキストランまたはアルギネートのような多糖類；および、アミノまた はアミド基を有する炭水化物、例えばアミノエチルデキストラン、キチン、キト サン、ヒアルロン酸またはヘパリンであるが、ここで用いられる「炭水化物」と いう用語は、糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトールのような アルジトールを包含するものとする）；造影剤（例えば典型的には、メトリシイ ツク酸、ジアドリゾイック酸、イオタラミック酸、イオタラミック酸、イオヘキ ソール、イオペントール、イオパミドール、イオパミド−ル、イオブロミド、メ トリザミド、イオジバミド、メグルミン、イオジバミド、メグルミンアセトリゾ エートまたはメグルミンジアドリゾエートの場合のようにカルボキシル、カルバ モイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、Ｎ−ヒドロキシアルキルカルバモイル、ア シルアミノ、Ｎ−アルキルアシルアミノまたはアシルアミノメチルのような３位 および／または５位の置換基において少なくとも１つの２．４．６−　トリヨー ドフェニル基を有するような、市販のカルボン酸および非イオン系アミドのＸ線 造影剤）；およびポリペプチドおよび蛋白質（例えばゼラチンまたはアルブミン 例えばヒト血清アルブミン）を包含する。

本発明の造影剤の例は、生物分解可能な微粒子の懸濁液および溶液を包含し、こ れは、その結晶構造の空隙内に封入された状態で存在する、および／または、そ の表面に付着したガス；および生物分解可能な物質、例えばカルシウムアルギネ ートのような不溶性多糖類でカプセル化された微小気泡を有する。

本発明の１つの実施態様において、微小粒状の生物分解可能なマトリックスは、 例えば粒径が１〜５０１１例えば５〜１ｈ＊のような粒子の凝集体（例えば凝集 体の大きさは２０〜１２５ｇｍ５例えば３０〜５０β富）の形態で存在する。

このような凝集体は、例えば、ボールミル処理のような、粉砕またはミリングの ような従来の微粒子化方法により調製してよく、表面に吸着し、粒子間の空洞の ような空隙内に、または、クリスタライト間の粒子境界に捕獲された、空気をか なりの量含む傾向を有する。粒径は、例えば、所望の微小気泡径と実質的に適合 するように選択してよい。エコー心臓造影のような用途においては、肺キャピラ リーベッドを通る経路を確保し、これにより、好ましくは１つ以上の循環路につ いて心臓の左側の超音波可視化を増強するためには、粒径は典型的には約１ｈｍ 未満である。

本発明による安定化は、例えば、生物分解可能なマトリックス中に存在する官能 基と反応できるような官能基を少なくとも２つ有する交叉結合剤を用いてガスま たはガス前駆体の導入前、導入中または導入後に生物分解可能なマトリックスを 共有結合的に交叉結合することにより行ってよい。このような相互作用を示す官 能基の対は多く知られており、例えば、Ｂｅａｕｓｅｒｔ等によるＣｒｏｓｓｌ ｉｎ−ｋｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　（Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１ ７２（１９８９）、　５８４−６０９ページ）またはＰｉｅｒｃｅ　Ｈａｎｄｂ ｏｏｋ　ａｎｄ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｃａｔａｌｏｇｕｅ（１９８９）　２８４− ３１１ページに記載されている。

即ち、例えば、炭水化物のような生物分解可能なマトリックス中のヒドロキシル 基は３Ｒ，５ｔｕａｒｔ　Ｔｉｐｓｏｎ　ａｎｄＤ、Ｈｏｒｔｏｎ　（１９７６ ）版の［＾ｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ 　ａｎｄ　ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　（１９７６）、３３巻　１１−１０９ ページ（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）に記載のように 、交叉結合してよい。この目的のための適切な官能基の例は、例えば、アルカノ イルまたはスルホニルハライドのようなアシルハライドの形態の塩素または臭素 のようなハロゲン原子；スルホネートエステル基、例えばメシルオキシ基のよう なアルキルスルホネートエステルおよびトシルオキシ基のような芳香族スルホネ ートエステル；α−ハロメチルエステルおよびケト基；活性カルボキシル基、例 えば対称または混合酸無水物；活性ヒドロキシル基；活性アルケン類、例えばα 、β−不飽和ケトン、アミドおよびエステル、例えばアクリレートおよびメタク リレートエステル；共役ジインおよびエンイン系；エポキシ基；および、アセタ ール形成アルデヒドおよびケトン基およびその誘導体、例えばエノールエステル またはアセタールまたはケタール基を包含する。炭水化物マトリックスを安定化 するために有用な交叉結合剤の例は、エピクｏｏヒドリン（例えば５ｔａｒｋｅ （１９８５）３７．２９７−３０６ページにおいてＫａｒｔｈａ、　Ｋ、Ｐ、Ｒ ，等が記載したもの）およびその他のエポキシド誘導体（例えば米国特許出願４ ．１２６．６６９号に記載のもの）およびトリメタリン酸ナトリウム（例えば１ １０８９／　０３６７４号に記載のもの）を包含する。

カルボキシル基を有する生物分解可能なマトリックスは、例えば、ヒドロキシル 、メルカプト、アミノまたはジアゾのような官能基との反応により交叉結合して よい。

蛋白質性の、または、その他の生物分解可能なアミノ基含有マトリックスととも に使用するための交叉結合剤は、例えば、活性カルボキシル基を有する化合物、 例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジル、イミドエステル、ニドロアリールハラ イド、ニトレン前駆体基を有する化合物、例えばフェニルアジド、カルベン前駆 体（例えばジアゾ化合物およびジアジリン）、ケトン、イソシアネート、イソチ オシアネート、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド、エポキシド、フェノ ールエステル（例えばニトロフェノールエステル）、アシルアジドおよびヒドラ ジン、ハロホルメートおよびアシルハライド（例えばアルカノイルクロリドまた はスルホニルクロリド例えばメシルまたはトシルクロリド）を包含する。ジアル デヒドは蛋白質性のマトリックスとともに使用する交叉結合剤の好ましい種類で ある。

スルフヒドリル基は、例えば、マレイミド、スルホン化マレイミド、α−ハロメ チルカルボニル誘導体（例えばエステル、アミドまたはケトン）、アルキルまた はアラルキルハライド、ニトロソ尿素、Ｓ−トリアジン、アジリジンおよびピリ ジルジスルフィドのような官能基と反応させてよい。

上記したとおり、ゼロ交叉結合剤もまた使用してよい。

即ち、例えば、アミノ酸含有支持体を縮合剤（例えばジシクロへキシルカルボジ イミドのようなカルボジイミド）で処理してカルボキシル基とアミノ基の分子内 反応を起こし、アミド基を形成してよい。

交叉結合剤は、特にマトリックスそのものが容易に生物分解されないような場合 に、適切な程度の安定性を有する１つ以上の生物分解可能な結合を有するか、生 物分解可能なマトリックスとともにこれを形成できるように選択してよい。適す る生物分解可能な結合は、例えば、アミド、イミド、イミン、エステル、無水物 、アセタール、カーバメート、カーボネート、カーボネートエステルおよびジス ルフィド基を含む。少なくとも１つのこのような基が交叉結合基中に好都合に存 在してよい。

一般的に、何れかのエステル、特に、基−ＣＯ，Ｏ−または−ｏ、　ｃｏ、　ｏ −を含むものが生物分解可能である。

特に有用な種類の生物分解可能なエステル基の１つは、従来の脂肪族エステルと 同等の加水分解安定性を示すがｉｎ　ｖｉｖｏでは極めて容易に酵素的に分解さ れるものであり、これは、下記（■）： 〔式中各Ｘは同じかまたは異なっていて一〇−−Ｓ−および−ＮＲ−から選択さ れ、ここでＲは水素原子または有機性の基を示し；各Ｙは同じかまたは異なって いて、カルボニル、チオカルボニル、スルホニルまたはホスホリル（即ち下記式 ： く式中Ｒ３は水素原子または有機性の基である〉の基）または同様の酸形成基で あり；各Ｚは同じかまたは異なっていて、−〇−１−Ｓ−および−ＮＲ−から選 択され、ここでＲは水素原子または有機性の基を示し；ｍおよびｎは同じかまた は異なっていて各々０または１であり；そしてＲ１およびＲ１は同じかまたは異 なっていて各々、水素原子、−価の有機性の基および上記した式Ｘ、Ｙ、　（Ｚ ）ｍ−の基から選択されるか、またはＲ１およびＲ１は一緒になって２価の基を 形成する〕の構造を有する。

Ｒ，Ｒ’、　Ｒ”およびＲ３で示される有機性の基は、例えば、各々がヒドロカ ルビルまたは、例えば炭素原子１〜２０個、例えばアルキルまたはアルケニル基 のような脂肪族基を有するヘテロ環基（好ましくは炭素原子１０個までを有する もの）、シクロアルキル基（好ましくは炭素原子１０個までを有するもの）、ア ラルキル基のような芳香脂肪族基（好ましくは炭素原子２０個までを有するもの ）、アリール基（好ましくは炭素原子２０個までを有するもの）または炭素原子 ２０個までおよび酸素、イオウおよび窒素から選択される１つ以上のへテロ原子 を有するヘテロ環基であってよく；このようなヒドロカルビルまたはヘテＯｆｌ 　基１；！、ハｏケン［子ｔタハ式−ＮＲ’Ｒ’−１−ＣＯＮＲ４Ｒ’。

−０Ｒ６、−ＳＲ６および−ＣＯＯＲ’　（式中Ｒ４およびＲ５は同じかまたは 異なっていて、Ｒ，Ｒ’、　Ｒ１およびＲ３で定義した水素原子、アシル基また はヒドロカルビル基であり；Ｒ６は水素原子またはアシル基またはＲ，Ｒ１，Ｒ ”およびＲ３で定義した基であり：そしてＲ７は水素原子またはＲＳＲ’ＳＲ１ およびＲ３で定義した基である）の基のような１つ以上の置換基を有していてよ い。Ｒ１およびＲ２が二価の基を示す場合は、これは、アルキレン、アルケニレ ン、アルキリデンまたはアルキリデン基（好ましくは炭素原子１０個までを有す るもの）であってよく、これらは、上記したように１つ以上の置換基を有してい てよい。一般的に、Ｒ１１、Ｒ１およびＲ３は好ましくは水素または自〜Ｃ４ア ルキル基のような小さい基である。

脂肪族基Ｒ１Ｒ１，Ｒ１およびＲ８は直鎖または分枝鎖、飽和または不飽和であ ってよく、そして、例えばメチル、エチル、イソプロピル、ブチルおよびアリル のようなアルキルおよびアルケニル基を包含する。芳香脂肪族基はベンジルのよ うな（重炭素環アリール）アルキル基を包含する。アリール基は、フェニル、ト リルおよびナフチルのような単環および２環の基を包含する。ヘテロ環基は、フ リル、チェニルおよびピリジルのような、好ましくは１個のへテロ原子を有する ５員または６員の環を包含する。

ヒドロカルビル基Ｒ，Ｒ１，Ｒ”およびＲ３における考えられる置換基は、ヒド ロキシル、エーテル化ヒドロキシル（例えばメトキシのようなＣ１〜Ｃ，アルコ キシ）、エステル化ヒドロキシル（例えばアセトキシのような０１〜Ｃ６アシル オキシ）、エーテル化チオール、Ｎ　（Ｃ＋〜Ｃ６アルキル）アミノ、Ｎ　（Ｃ ｒ〜Ｃ６アシル）アミノ、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６アシル）−Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキ ル）アミノ、カルバモイル、Ｎ（（１＋〜Ｃ６アルキル）カルバモイルおよびハ ロゲンを包含する。芳香族環は例えばトリル基の場合のように、Ｃ３〜Ｃ６アル キル基を有していてよい。置換基は組合せで存在してよく、即ち、例えばＮ−ア シルおよびＮ−アルキル基がヒドロキシルまたはエーテル化またはエステル化ヒ ドロキシル基を有していてよい。

本発明に従って生物分解可能なマトリックスを安定化するための適当な交叉結合 剤は、下記式：Ａ−Ｍ−Ｂ 〔式中Ｍは交叉結合する２価の基であり、基ＡおよびＢは同じかまたは異なって いて、場合によりそれらが結合している基と一緒になって、前記したように生物 分解可能なマトリックスに対して反応性を有する官能基である〕の化合物を包含 する。

基Ｍは、より高度な交叉結合を得るために、マトリックスに対して反応性を有す る別の基を有してよい。

好ましくは、基Ｍは５０原子を超える、より好ましくは３０原子を超える長さの 鎖を有してはならず、そして、例えばアルキレンまたはアルケニレン基（メチレ ンまたはエチレンのような、例えば３０個まで、例えば１０個までの炭素原子を 有するもの）、シクロアルキレン基（例えば３０個まで、例えば１０個までの炭 素原子を有するもの）、アリーレン基（例えば３０個まで、例えば２０個までの 炭素原子を有するもの）またはへテロ環基（例えば３０個まで、例えば２０個ま での炭素原子および酸素、窒素およびイオウから選択されるヘテロ原子少なくと も１個を有するもの）であってよい。

生物分解可能な基Ｍは、例えば下記式：％式％ 〔式中Ｒ８およびＲ９は同じかまたは異なっていて、場合によりヘテロ原子１つ 以上で中断された、モして／またはそのようなヘテロ原子を含む置換基１つ以上 を有する（例えばマトリックスに対して反応性を有する基および／または別の不 活性の基を有する）ような２価の有機性の基を示し、そして基Ｅは、例えば式− 〇、　ＣＯ−または−ｏ、　ｃｏ、　ｏ−のエステル基、または上記したような 式（Ｉ）のジエステルまたはジアミド基である〕の形態のものであってよい。

１つの有用な種類の交叉結合剤は、下記式：（式中、ＡｌＢ、Ｒａ、Ｒ９、Ｘ５ ＹＳＺ、ｍおよびｎは上記したものであり、　Ｒｌａおよびトｌは、これらが基 −Ｘ、Ｙ、　（Ｚ）ｍ−ｔ’ｌｔす＜基−Ｘ、　Ｙ、　（Ｚ）、、　Ｒ”、　Ａ 、まタハ−Ｘ、　Ｙ、　（Ｚ）ｎ、　Ｒ”、　Ｂを示すことを除いてＲ１および Ｒガニついて定義したとおりである）により示すことができる。

第２の有用な種類の交叉結合剤は、下記式：（式中、Ｘ、　Ｙ、　Ｚ、　ｍ、　 Ｒｌａ、　Ｒ’ａ、　Ｒ８オ、Ｊ−ヒＡｌ！上記した意味を有し、そしてＬは除 去される基である）により示すことができる。このような化合物は、下記式：％ 式％（） （式中、Ｘ１ＹＳＺおよびｎは上記したものであり、モしてＲＩＯは水素原子ま たは有機性の基を示す）の化合物、またはその適切な反応性誘導体（例えば酸で ある式（ＩＶ）の化合物のアルカリ金属塩）と反応させて式（Ｉ）の生物分解可 能な結合を形成してよい。

ＲＩＧは、例えば化合物（ＩＩＩ）が反応して式（ＩＩ）の化合物またはその前 駆体を形成するような有機性の基であってよい。あるいは、基Ｒ１１１は交叉結 合されるべき支持体を示してよ＜　；　−（Ｚ）ｎ、　Ｙ、　Ｘ、　１１置換基 またはその反応性誘導体に加えて、このような支持体もまた、式（Ｉ［Ｉ）の− ＾または−Ｒ８Ａに対して反応性を有する官能基を有する。

上記式における２価の有機性の基Ｒ８およびＲ９は、例えば、アルキレンおよび アルケニレン基（例えば炭素原子２０個まで、好ましくは１０個までを有するも の）、シクロアルキレン基（好ましくは炭素原子１０個までを有するもの）、ア リーレン基（芳香族環１つ以上を有し、好ましくは炭素原子２０個までを有する もの）、アラルキレン基（好ましくは炭素原子２０個までを有し、アリールおよ び／またはアルキル部分を介して結合しているものであり、そのようなアラルキ レン基は、例えばアルキレン鎖で結合した了り−ル基２つを有するようなもの） 、および、ヘテロ環基（好ましくは酸素、窒素およびイオウから選択されるヘテ ロ原子１つ以上を有し、好ましくは炭素原子２０個までを有するもの）から選択 してよい。基は、例えばＲ，Ｒ１，Ｒ’およびＲ３について上記したような置換 基、および／またはオキソまたはチオ基のような置換基を有してよい。炭素鎖は 、例えばオキソ置換基と一緒に、酸素、窒素、イオウまたはリンのようなヘテロ 原子で中断され、エステル、チオエステルまたはアミド基のような結合部を形成 してよい。ジスルフィド結合の存在はまた、その固有の生物分解性の点からも有 利である。

基Ｒ８および／またはＲ１＋は、式（Ｉ）の基１つ以上を包含するように選択さ れ、そして、式（Ｉ［［）における基−Ｈａ、＾は、式（Ｉ）の生物分解可能な 結合を発生することのできる下記： 〔式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍ、ＲＩａ、ＲｌａおよびＬは上記シタとおりである〕の 基を末端としてよいものとする。

式（ｍ）の化合物の離脱基りは、塩素または臭素のようなハロゲン原子およびメ シルオキシまたはトシルオキシのようなスルホニルオキシ基を包含する。

式（Ｉ［）および（ｍ）の交叉結合剤は従来の方法の何れかにより調製してよい 。即ち、例えば、下記式：％式％（） 〔式中、ＸＳＹ、Ｚ、ｍ、Ｒ”およびＡは上記したものであり、所望によりＡお よび他の反応性の基は保護される〕の化合物またはその官能性誘導体（例えば塩 、例えば酸である化合物（Ｖ）のカリウム塩またはセシウム塩のようなアルカリ 金属塩）１モルまたは２モルを下記式： 〔式中、Ｒｌａ、　ｇｌａおよびＬは上記したとおりである〕の化合物１モルと 反応させて式（ｍ）の化合物および式（ｎ）の対称化合物をそれぞれ得てよい。

あるいは、式（ｎ）の非対称化合物が必要である場合は、例えば等モル量の式（ Ｖ）の化合物またはその官能性誘導体および下記式：〔式中、Ｘ％　Ｙ％　Ｉ　 ｎ５Ｒ１ａＳＲ１ａ、　Ｆｌ”ｓ　ＢオヨヒＬｌ！上記したものであり、所望に よりＢおよび他の反応性の基は保護される〕の化合物を反応させてよい。このよ うな反応は、通常は例えばジメチルホルムアミドのような極性溶媒中の溶液で行 う。

Ｒｌａが水素原子であり、ｍおよびｎが０であり、各Ｙがカルボニル基であり、 各Ｘが−Ｏ−であるような式（ｎ）の対称化合物はまた、塩酸のような酸触媒の 存在下、下記式： ％式％（） 〔式中、ＡおよびＲ８は上記したものであり、所望によりＡおよび他の反応性の 基は保護される〕の化合物を下記式： ％式％（） 〔式中、Ｒｌａは上記したものである〕のアルデヒドと反応させることにより調 製してよ（、所望により水を共沸蒸留により反応混合物から除去してよい。

Ｌがハロゲン原子であるような式（ｍ）の化合物はまた、上記したとおり、式（ Ｖ）の化合物、特に、Ｙがカルボニル基でありＸが一〇−であるような化合物を 、例えばピリジンのような塩基の存在下ジメチルホルムアミドのような極性溶媒 中、下記式： 〔式中、Ｒ１８およびＲｌａは上記したとおりであり、Ｒ１１はフェニルのよう なアリール基である〕のアリールチオエーテルと反応させ、下記式： 〔式中、全ての符号は上記したとおりである〕の化合物とし、このチオエーテル を、例えば、ジクロロメタンのような溶媒中スルフリルクロリドと、または、四 塩化炭素のような溶媒中臭素と反応させてＬがそれぞれ塩素または臭素であるよ うな化合物（Ｉ［Ｉ）とすることにより調製してよい。

あるいは、式（ｍ）の化合物は、上記したとおり、式（Ｖ）の化合物を、例えば 、５ｙｎｔｈ　Ｃｏ５ｔ　１４（９）（１９８４）８５７−８６４ページに記載 されているＲｉｎｄｅｒｕｐ等の方法を用いて、下記式： 〔式中、Ｒ１１ｌｌ、　ＲｌａおよびＬは上記したとおりであり、Ｌは好ましく は塩素である〕のクロロスルフェートと反応させることにより調製してよい。

ＡおよびＢおよびその他の存在する反応性の基に対して用いられる保護基は、例 えば、当該分野で従来用いられているものであってよい。即ち、例えば、カルボ キシル基はベンジルのような還元分解可能なエステル基を用いて保護してよく、 そしてヒドロキシル基はトリフェニルメチルのような酸分解可能なエーテル化基 を用いて保護してよい。

Ａ、Ｒ８−（および／または場合により−Ｒ’、Ｂ基）のための前駆体を有する 式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物を調製し、その後このような前駆体基を所 望の反応性の基に変換してよい。即ち、例えば、Ａおよび／またはＢがエポキシ ド基であるような化合物は、適切な部位（例えば末端）にエチレン性不飽和結合 を有する前駆体を（例えばメタクロロバー安息香酸のような酸化剤を用いて）酸 化するか、または、適切な部位にヒドロキシル基（例えばフェノール性ヒドロキ シル基）を有する化合物をエビクロロヒドリンのような試薬と反応させることに より調製してよ（、Ａ、Ｒ８−および／または−Ｒ’、　Ｂがエノールエーテル 基であるような化合物は、例えば、相当するアセタールまたはケタールから酸触 媒除去を行うことにより調製してよい。ヒドロキシル基含有前駆体はまた、例え ば、メシルまたはトシルクロリドのようなスルホニルクロリドとの反応によりメ シレートまたはトシレートのような反応性の除去される基を形成するか、または アクリロイルクロリドのようなα、β−不飽和アルケノイルハライドとの反応に よりα、β−不飽和エステルを形成することにより活性化してよい。

Ｌがハロゲン原子であるような式（■）の化合物は、例えば、式： および式： Ｈａｌ、　Ｙ、　（Ｚ）ｎ、　Ｒ’、　Ｂ　（Ｘ　ｍ　）〔式中、１ｌｌａ１は ハロゲン原子であり、その他の記号は上記した意味を有する〕の化合物を、例え ばピリジンのような塩基の存在下、反応させることにより調製してよい。

ある範囲の式（Ｉｆ）および（ｍ）の交叉結合剤の調製は状状の国際特許出願Ｐ ＣＴ／ＥＰ９２１００７１７号に詳細に記載されており、その内容を参照によっ て本明細書に加入する。

本発明の更に別の実施態様においては、超音波造影剤は、所望によりコーティン グの形態の生物分解可能なマトリックスに共有結合的に結合した親油性の基およ び／または分子を有する。即ち、例えば、溶解度を低下させることなどによりそ の安定性を制御可能な様式で増大させるために、脂肪を、ガラクトース、ガラク トース／澱粉混合物またはキシロースのような炭水化物のガス含有粒子のような 製品またはイオヘキソール、イオヘキソ−ルまたはメトリザミドのようなＸ線造 影剤に共有結合されつる。

この目的のために有用な脂質は脂肪酸の誘導体（例えば、好ましくは炭素原子１ ０〜５０個、例えば１０〜３０個を有する長鎖アルカン酸またはアルケン酸、例 えば、カプリン酸、バルミチン酸、ステアリン酸、リルン酸、ベヘン酸、トコサ ンジオイック酸またはメリシック酸）、アルアルカン酸（例えば２−フェニル酪 酸のようなフェニル低級アルカン酸）、コレステロール誘導体（例えば５β−コ ラン酸のようなコラン酸）、および１つ以上の官能性の基、例えば、酸ハロゲン 化物または無水物基またはヒドロキシル基のような置換基に共有結合可能な活性 化アルケン基を有するその他の生物適合性の脂質を包含する。即ち、例えば、ボ ロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）のような界面活性剤をエステル化して、炭水 化物のような生物許容性（ｂｉｏｔｏｌｅｒａｂｌｅ）を有するマトリックス中 に存在するヒドロキシル基と共有結合反応するアクリロイル基のようなα９β− 不飽和低級アルケノイル基を導入してよい。

親油性の基および／または分子は、交叉結合剤としても作用してよく；このよう な基は、例えば、適切な２官能性または多官能性の脂質誘導体との反応により導 入してよい。

空気のほかに、または空気の代わりに、生物適合性のガス、例えばチッソ、酸素 、水素、−酸化窒素、二酸化炭素、ヘリウム、アルゴン、６フツ化硫黄およびメ タン、アセチレンまたは四フッ化炭素のような低分子量の場合によりフッ素化さ れた炭化水素を本発明の造影剤中に用いてよい。本明細書で使用する「ガス」と いう用語は、３７℃で気体であるような全ての物質を包含する。ガスは、使用前 には製品は造影作用を示さないが、例えば可溶性のマトリックスが溶解するにつ れて、ガスが微小気泡を発生する結果、投与後に有効となるような方法で、造影 剤中に含有されてよい。即ち、微小気泡の発生速度は、例えば、適切な交叉結合 度または脂肪結合を選択することにより制御してよい。

本発明の造影剤中で有用なガス前駆体は、炭酸塩および重炭酸塩（例えば重炭酸 ナトリウムまたは重炭酸アンモニウム）およびアミノマロネートエステルを包含 する。

エコー心臓造影に適用する際には、肺系を通る自由経路を確保し、約０．１〜１ ５ＭＨｚの好ましい造影周波数で共鳴を得るためには、平均粒径０．１〜ｌｏａ ｍ、例えば１〜７＃■の微小気泡および微粒子を使用するのが好都合であり；平 均粒径１〜２Ｉの微粒子を使用して平均粒径４〜７μ翼の微小気泡を発生するの が一般的に有利である。しかしながら、かなり大きい気泡および粒子、例えば、 平均粒径５００μ冒までのものは、その他の用途、例えば胃腸造影に有用である 。

以下の限定しない実施例により本発明を更に説明する。

〔調製１〕 ミリングされたＤ−（＋）−ガラクトース市販のＤ−（＋）−ガラクトース（Ｒ ｅｉｎｓｔ　ｐｈ、Ｎｅｄ。

Ｍｅｒｃｋ）　２０９を２時間、３　Ｘ　１．５ｃｍ直径のアルミニウムボール を用いてアルミニウムボールミル中でボールミリングした。得られた粉末混合物 は粒径１〜１００μ層（光分散蓋ａｌｖｅｒｎ　Ｎａ５ｔｅｒｓｉｚｅｒで測定 ）のガラクトースの結晶および凝集体よりなるものであった。

〔調製２〕 ミリングされたＤ−（＋）−ガラクトース／澱粉市販のＤ−（＋）−ガラクトー ス（Ｒｅｉｎｓｔ　ｐｈ、Ｎｅｄ。

１１ｅｒｃｋ）　５９を市販の澱粉（Ｒｅｐｐａｌ　ＰＳＭ　７０．　Ｒｅｐｐ ｅ　ｇｌｙｃｋｏｓ。

Ｓｗｅｄｅｎ）　５　ｙと混合し、１０分間５Ｑｍｌの粉砕カップおよび３Ｘ２ ０ｍｓ＋のボールを有するステンレス鋼のボールミル（Ｒｅｔｓｃｈ遠心分離ボ ールミル、Ｓｌ）で粉砕した。

〔調製３〕 ミリングされたキシロース 市販のＤ−（＋）−キシロース（ＢＵＤ）　ｌｈを１０分間５０厘ｌの粉砕カッ プおよび３Ｘ２０ｍ−のボールを有するステンレス鋼のボールミルで粉砕した。

〔調製４〕 バルミチン酸炭酸モノイソブチルエステル混合無水物パルミチン酸（５，０９， １９，５ミリモル）を窒素下トリエチルアミン（１２，９７ｇ、１９．５ミリモ ル）とともに乾燥アセトニトリル中に懸濁した。懸濁液は１時間の撹拌の後、濃 厚なスラリーとなった。イソブチルクロロホルメート（２，６６ｖ、１９５ミリ モル）を−回で添加し、その間氷／水浴中で冷却した。３０分後、反応液を室温 で一夜撹拌した。

得られた懸濁液を濾過し、桃色の濾液を３０℃で蒸発乾固させ、桃色／白色の固 体を７．８ｇ得た。’　３Ｃ−ＮＭＲによれば、混合無水物であることが確認さ れた。

〔調製５〕 ５−β−コラン酸炭酸モノイソブチルエステル混合無水物 ５−β−コラン酸（Ｓｉｇ謙ａ、３．６ｇ、１０ミリモル）をジエチルエーテル （１００＋＋／）に溶解した。トリエチルアミン（１，３ｈＬ　１０　ミリモル ）を添加し、反応混合物を０℃に冷却した。イソブチルクロロホルメート（１， ３７９，１０ミリモル）を２分間かけて激しく撹拌しながら滴下添加した。大量 の沈殿が生じたのち、ジエチルエーテル（１００■ｌ）を添加した。撹拌を４０ 分間０℃で継続し、水浴を外し、撹拌を更に６０分間継続した。

沈殿を濾過して除去し、濾液を抽出漏斗に移し、飽和中成酸ナトリウム（２５ｇ ／）および水（２Ｘ　２５ｍ１）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶 媒を真空下に除去し、半固体のワックス状物質を８０％収率で得た。生成物をＩ 　３Ｃ−ＮＭＲで特性化した。ＣＯ−酸：　１６８．３７ｐｐ■、ＣＯ−カーポ ネー）　：　１４９．３６ｐｐ議。

〔調製６〕 メリシック酸炭酸モノイソブチルエステル混合無水物メリシック酸（Ｓｉｇｍａ 、　０．５９．１．１ミリモル）をジエチルエーテル（２５ｇ＋／）に溶解した 。トリエチルアミン（１５１−ｌ、１．１ミリモル）を添加し、反応混合物を０ ℃に冷却した。イソブチルクロロホルメート（１５ｂｌ、１．１ミリモル）を２ 分間かけて激しく撹拌しながら滴下添加した。

反応混合物を調製５の場合と同様に処理し、生成物を”　Ｃ−ＮＩＲで特性化し た。ＣＯ−酸：　１６８．５９６ｐｐ＋ｓ、　ｃｏ−力−ボネート：　１４９． ７２８ｐｐ−０ 〔調製７〕 トコサンジオイック酸ビス（炭酸モノイソブチルエステル混合無水物） トコサンジオイック酸（Ｆｌｕｋａ、１　ｑ、２．７ミリモル）をジエチルエー テル（２５＋＋Ｊ）に溶解した。トリエチルアミン（７４７＋ｌ、２．７ミリモ ル）を添加し、反応混合物を０℃に冷却した。イソブチルクロロホルメート（７ ４３μ１１２．７ミリモル）を２分間かけて激しく撹拌しながら滴下添加した。

反応混合物を調製５の場合と同様に処理し、生成物を’　”Ｃ−Ｎ１１Ｒで特性 化した。ＣＯ−酸：　１６８．０４９ｐｐ■、ＣＯ−カーボネー）　：　１４９ ．３５９ｐｐ−０〔調製８〕 ビスアクリロイルブルロニックＦ６８ プルロニックＦ６８　（Ｆｌｕｋａ、８．３５９．１ミリモル）をトルエン（５ ０ｍ／）に溶解し、窒素下５０℃に加熱した。トリエチルアミン（１，４真！１ １０ミリモル）を添加した。トル工：’　（１０ｍ１）中アクリロイルクロリド （Ｆｌｕｋａ、　０．９４９．１０ミリモル）を撹拌しながら１０分間かけて添 加した。撹拌を５０℃で継続し、ＴＬＣでモニターしたところ、２時間後には出 発物質が完全に消費された。沈殿を濾過して除去し、濾液を激しく撹拌しなから ジエチルエーテル（７５０寓り中に注ぎ込んだ。沈殿を濾過して回収し、加熱し ながらトルエン（３０ｍ１）中に再溶解し、激しく撹拌しなからジエチルエーテ ルとペンタンの１：１混合物（５０ｗ／）に滴下添加した。得られた混合物を一 夜冷蔵庫に保存し、その後、沈殿生成物を濾過して回収し、真空下に乾燥した。

収量ニアｇ。生成物をＦＴ−ＩＲで特性化した。

ＣＯ−１７２４ｃｍ−’、０トの消失３５００ｃｍ−’。

〔実施例１〕 バルミチン酸に共有結合した、ミリングされたＤ−（＋）−ガラクトース 密封可能な２５ｍ／容のフラスコに窒素下、調製１で記載したとおり調製したミ リングガラクトース１．００９を入れ、そして、窒素下、乾燥塩化メチレンｌＯ 諺１中に溶解した調製４で記載のとおり調製したパルミチン酸炭酸モノイソブチ ルエステル混合無水物６露９をフラスコに添加した。

密封したフラスコを雰囲気温度で１８時時間中かに振とうした。固体針を濾過し て単離し、塩化メチレンで数回洗浄し、２４時間５Ｑｍｂａｒのデシケータ中、 雰囲気温度で、塩化カルシウム上で乾燥した。得られた生成物は白色の固体であ り、出発物質と同様の外観を有していた。重量：約１ｇ。

［実施例２〜２１］ 表１に示す酸誘導体を示された量で使用しながら実施例１の方法を反復した。

５　無水２−フェール酪酸（Ｆｌｕｋａ）　０．０５６０．５ ７　無水リルン酸（Ｓｉｇｍａ）　０．０５８０．５ ９　無水ステアリン酸（Ｓｉｇｍａ）　０．０５ＩＱ　０．５ 表　１（続き） １１　無水ステアリン酸（Ｓｉｇｍａ）　５１２　無水カプリン酸（Ｓｉｇｓａ ）　０．０５１３　９．５ １４　無水ベヘン酸（Ｓｉｇｓａ）　０．０５〔実施例２２〜２４〕 調製２で記載のとおり調製したミリングＤ−（＋）−ガラクトース／澱粉を、実 施例１の方法を用いて、表２に記載された物質の記載された量と反応させた。

表　２ 〔実施例２５〕 調製３に記載のとおり調製されたミリングキシロースを、実施例１の方法を用い て０．２％ｖ　／　ｗ　無水ベヘン酸（Ｓｉｇｍａ）と反応させた。

〔実施例２６〕 調製１に記載のとおり調製されたミリングＤ−（＋）−ガラクトース（６，ｈ） をアセトン中に懸濁し、カルボニルジイミダゾール（Ｆｌｕｋａ、　７，３２９ ．４５．１ミリモル）を添加した。雰囲気温度で３０分間撹拌した後、固体を濾 過し、フィルター上で乾燥アセトン（３Ｘ　５１）＋／）で洗浄した。

固体を乾燥塩化メチレン（５０ｍ／）に再懸濁し、乾燥塩化メチレン（３０ｍｊ り中のジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（Ｈａｆｓｌｕｎｄ　Ｎｙ ｃｏｗ＋ｅｄ　Ｐｈａｒｍａ、＾ｕｓｔｒｉａ。

１、００９、■、４３ミリモル）の溶液を添加した。密封した反応フラスコを７ ２時間雰囲気温度で振とうした。固体を濾過し、フィルター上で、塩化メチレン （３Ｘ　５０ｍ１）で洗浄した。僅かに黄色の固体（５，５９）を塩化カルシウ ム上、デシケータ−中に保持した。

〔実施例２７〕 ６−０−バルミトイル−Ｄ−ガラクトピラノース（Ａ）６−０−バルミトイル− １，２，３，４−ジイソプロピリデン−Ｄ−ガラクトピラノース １、２．３．４−ジイソプロピリデン−Ｄ−ガラクトピラノース（Ｓｉｇ曹ａ、 　１３．４９．５１．３ミリモル）およびトリエチルアミ：／　（７，１５ｍＬ 　５１．３ミリモル）を塩化メチレン（１５Ｔｏｌ）に溶解し、０℃に冷却した 。塩化メチレン（１００ｍ／）に溶解したバルミトイルクロリド（＾１ｄｒｉｃ ｈ、　１４．１ｇ、５１．３ミリモル）を１時間かけて撹拌しながら滴下添加し た。

冷却バスを外し、反応混合物を一夜撹拌した。沈殿を濾過して除去し、濾液を分 液漏斗に移し、水（３Ｘ　５（１＋／）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し 、溶媒を真空下に除去した。残存物は明茶色の油状物であり、これは固化してワ ックス状の結晶になった。粗生成物収量＝２３ｇ。

粗生成物は更に精製することなく用いた。少量を再結晶シテ特性化した。ＦＴ− ＩＲ：　ＣＯ−１７２３ｃｍ−’、　”Ｃ−ＮＩＩＲ：　ＣＯ−エステル１７２ ．７９、融点１２４〜１２７℃。

（Ｂ）６−０−バルミトイル−Ｄ−ガラクトピラノース６−０−バルミトイル− １，２，３，４−ジイソプロピリデン−Ｄ−ガラクトピラノース（６９）を酢酸 （２５■ｌ）に溶解し、６時間窒素下１００℃に加熱した。その後室温まで冷却 する間、生成物は溶媒から析出し、これを−夜室温で放置した。結晶を濾過して 回収し、真空下に乾燥した。収量：　３．３９゜生成物をＦＴ−ＩＲで特性化し た。ｃｏ−１７３４ｃｍ−’　；　０１１−３４６４ｃｓ＋−’。

〔実施例２８〕 ６−０−バルミトイル−Ｄ−ガラクトピラノース／ガラクトース混合物 （Ａ）　Ｄ−（＋）−ガラクトース（２ｇ）を精製水（２，８７９）に溶解し、 滅菌濾過した。実施例２７で記載の通り調製した６−０−バルミトイル−Ｄ−ガ ラクトピラノース（０，２５９）をエタノール（３ｇ）に溶解し、滅菌濾過した 。

バルミトイル−ガラクトピラノースの溶液を撹拌しながらガラクトース溶液に添 加し、全混合物を真空下に乾固させた（　１０ｔｏｒｒ、　５９℃）。生成物を 一夜デジケーター中で乾燥した。

（Ｂ）　エタノール（６ｇ）中に溶解した６−０−バルミトイル−Ｄ−ガラクト ピラノース（０，５０ｇ）を用いて（Ａ）の方法を反復した。

〔実施例２９〕 バルミチン酸で官能性付与されたイオヘキソール密封可能な２５ｍ１容のフラス コにイオヘキソール（Ｉｏｈ−ｅｘｏｌ、　ＮＹＣＯＭＥＤ）　１．００９を入 れ、窒素下、調製１の記載のとおりボールミル処理した。フラスコに、窒素上塩 化メチレン１０ｍ１に溶解したパルミチン酸炭酸モノイソブチルエステル混合無 水物（調製４に記載のとおり調製）３５すを添加し、密封したフラスコを雰囲気 温度で１８時時間中かに振とうした。固体を濾過して単離し、塩化メチレンで数 回洗浄し、２４時間５０■ｂａｒ雰囲気温度でデシケータ−中、塩化カルシウム 上で乾燥した。得られた生成物は白色の固体であり、出発物質と同様の外観を有 していた。

重量：約１ｇ。生成物の試料を顕微鏡下水に添加したところ、多（のガス気泡が 観察された。

〔実施例３０〕 バルミチン酸で官能性付与されたイオヘキソ−ル調製１で記載のとおりボールミ ル処理されたイオヘキソ−ル１．００９を、実施例２９の方法を用いてバルミチ ン酸炭酸モノイソブチルエステル混合無水物（調製４に記載のとおり調製）　１ ２１＋９と反応させた。出発物質と同様の外観を有する白色固体的１ｇが回収さ れた。実施例２９の場合と同様、顕微鏡観察により、生成物を水に添加した場合 にガス気泡の発生が観察された。

〔実施例３１〕 バルミチン酸で官能性付与されたメトリザミド調製１で記載のとおりボールミル 処理された３ｍ１ｐａｑｕｅ１、　ｏａｔを、実施例２９の方法を用いてパルミ チン酸炭酸モノイソブチルエステル混合無水物１５Ｉ１ｇと反応させた。出発物 質と同様の外観を有する白色固体的１ｇが回収された。顕微鏡観察によれば、生 成物を水に添加した際に複数のガス気泡の発生が観察された。

〔実施例３２〕 メチレンジアクリレートと交叉結合したＤ−（＋）−ガラクトース （Ａ）　メチレンジアクリレート 水酸化カリウムの溶液（１，００菖、４０．００諺りを０℃でアクリル酸（２， ８８ｇ、４０．００ミリモル）に添加し、溶液を１６時間凍結乾燥した。乾燥Ｄ ＭＦ　（２００■ｌ）を添加し、懸濁液を窒素雰囲気下５０℃に加熱した。ショ ートメタン（１，６１ｍ１．３０．００ミリモル）１０分間２回に分けて添加し 、反応混合物を６０℃で４日間放置した。溶媒を減圧（０，０５ｇｍＨｇ）下に 除去し、ジエチルエーテル（１４０ｍｌ）　、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（ ５０■１）および水（５０ｔＪりを添加した。水層をジエチルエーテル（６Ｘ　 ６０ｔ／）で抽出し、合わせたエーテル抽出液を水（４Ｘ　５０ｍＡ’）で洗浄 し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、蒸発させて生成物１．０６ｇ（３４％）を得 た。’Ｈ−ＮＭＲ（６０１１Ｈｚ、　ＣＤＣｔ’ｓ）　：　５．８１−６．６１ 　（２ｘｃＩｌｔ＝ＣＲ−１ｍ）　、　５．８４　（Ｃｔｌｔ、ｓ）。

（Ｂ）　メチレンジアクリレートと交叉結合したミリングされたＤ−（＋）−ガ ラクトース 密封可能な２５＊／容のフラスコに、窒素下、調製１に記載したとおり調製した ミリングされたＤ−（＋）−ガラクトース１．００ｑを入れ、このフラスコに、 窒素下、乾燥塩化メチレン（１０ｔＪ）中に溶解したメチレンジアクリレート（ ５００＋＋ｇ）を添加した。密封されたフラスコを雰囲気温度で１８時時間中か に振とうした。固体分を濾過して単離し、数回塩化メチレンで洗浄し、２４時間 ５　ｍｂａｒ雰囲気温度でデシケータ−生塩化カルシウム上で乾燥した。得られ た生成物は白色の固体であり、出発物質と同様の外観を有していた。重量：約０ ．９６ｅ。

〔実施例３３〕 １ｎｖｉｔｒｏのエコー原性 水中５％デキストロース９（１＋ｊ！と混合したプロピレングリコール１０■ｌ を担体液体として使用し、実施例の生成物のエコー原性を測定した。試験するべ き各生成物１．０ｇを担体液体３．０ｍ／に分散し、１５秒間振とうした。得ら れた混合物を測定セル内の５％ヒト血清アルブミン注入溶液５２ｍ１に添加し、 パルス反射法で５１１Ｈｚブロードバンド変換器を用いて試料を通る音伝達を測 定することにより、生成物の音響作用を調べた。測定セル内の温度は３７℃で安 定させ、液体の循環は一定速度で撹拌することにより維持した。試料を通る超音 波の伝達を３９０秒の期間に亘り、時間の関数として測定した。結果は、５％ヒ ト血清アルブミン注入溶液５５ｍ１よりなる対称試料に対する測定値に標準化し た。

多（の例示生成物の結果および調製１に記載のとおり調製した未変性のミリング されたＤ−（＋）−ガラクトースに対する比較結果を添付の図に示す。本発明の 生成物はｉｌ　ｖｉｔｒｏで超音波減衰に対する強力な作用を示し、その作用は 数分間持続したことが明らかである。

国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続き （３１）優先権主張番号　９２００４０９．２（３２）優先臼　１９９２年１月 ９日 （３３）優先権主張国　イギリス（ＧＢ）（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、 ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ 、ＦＩ、ＪＰ、Ｎｏ、ＵＳ（７２）発明者　ストラーネ、ベル ノールウェー国エン−０７５５オスロ、ノルデングヴエアイエン　７８アー

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．生物許容性マトリックスの共有結合により微粒子を安定化させることを特徴 とする、ガスまたはその前駆体とともに生物許容性マトリックスを含有する、微 粒子の形態の超音波造影剤。
2. ２．生物許容性マトリックスが炭水化物である請求項１記載の超音波造影剤。
3. ３．炭水化物がガラクトースであるような請求項１記載の超音波造影剤。
4. ４．生物許容性マトリックスがＸ線造形剤であるような請求項１記載の超音波造 影剤。
5. ５．粒径５〜１０μｍの微粒子の３０〜５０μｍの凝集サイズを有する凝集体の 形態で微粒子が存在する上記請求項の何れかに記載の超音波造影剤。
6. ６．上記凝集体がポールミリングにより調製された請求項５記載の超音波造影剤 。
7. ７．交叉結合基の存在により微粒子が安定化される上記請求項の何れかに記載の 超音波造影剤。
8. ８．交叉結合基が、アミド、イミド、イミン、エステル、無水物、アセタール、 カーバメート、カーボネート、カーボネートエステルおよびジスルフィド基から 選択される生物分解可能な結合を有する請求項７記載の超音波造影剤。
9. ９．交叉結合基が、下記式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中各Ｘは同じかまたは異なってい て−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−から選択され、ここでＲは水素原子または有機 性の基を示し；各Ｙは同じかまたは異なっていて、カルボニル、チオカルボニル 、スルホニル、ホスホリルまたは同様の酸形成基を示し；各Ｚは同じかまたは異 なっていて、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ−から選択され、ここでＲは上記した とおりであり；ｍおよびｎは同じかまたは異なっていてそれぞれ０または１であ り；Ｒ１およびＲ２は同じかまたは異なっていて、各々、水素原子、一価の有機 性の基、および上記定義による式Ｘ．Ｙ．（Ｚ）ｍ−の基から選択されるか、ま たは、Ｒ１およびＲ２は一緒になって２価の有機性の基を形成する〕の生物分解 可能な結合を有するような請求項８記載の超音波造影剤。
10. １０．微粒子が、それに共有結合した親油性の基および／または分子を有するこ とにより安定化される請求項１〜６の何れかに記載の超音波造影剤。
11. １１．微粒子が、それに共有結合した、脂肪酸、アルアルカン酸またはコレステ ロール、ポロキサマーまたはリン脂質誘導体から誘導された親水性の基を有する ことにより安定化される請求項１０に記載の超音波造影剤。
12. １２．上記親水性の基が、カプリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン 酸、ベヘン酸、ドコサンジオニック酸、メリシック酸、フェニル酪酸、５β−コ ラン酸、ピス（アクリロイル）プルロニックＦ６８またはジオレイルホスファチ ジルエタノールアミンから誘導される請求項１１記載の超音波造影剤。