JPH06506447A - Ｅｇｆレセプターチロシンキナーゼを阻害するスチリル置換ヘテロアリール化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＥＧＦＩノセブターチロシンキナーゼを阻害するスチリル置換へテロアリール化 合物 又男の分野 本発明は、細胞増殖の阻害４こ関する。更に詳細には、本発明は、細胞増殖を阻 害するに当たり、有効なプロティンチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）阻害剤である化 合物のようなスチリル置換単環又は二環式へテロアリール化合物を使用すること に関する。

正常な細胞再生は、細胞基質を１種以上の成長因子、例えばインスリン、上皮成 長因子（ＥＧＦ）及び血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）に露出することにより誘 発されると思われる。このような成長因子は、典型的には、細胞膜に取り囲まれ 且つ浸透する対応成長因子レセプターに特異的である。細胞再生の開始は、成長 因子が細胞膜の外面上の対応レセプターに結合する際に生じると思われる。この 成長因子−レセプター結合は、細胞内に存在し且つ細胞内基質又はレセプター自 体のリン酸化、後者は自己リン酸化と呼ばれる、を触媒する酵素として機能する レセプターのその部分の化４特性を変化させる。このリン酸化酵素の例としてチ ロシンキナーゼがあり、これは基質タンパク質のチロシンアミノ酸残基のリン酸 化を触媒する。

多くの疾書は、細胞の制御されない再生を特徴とする。これらの疾患にはいろい ろな種類の細胞を含み、白面病、癌、乾癖、アテローム性動脈硬化症及び再狭窄 障害のような疾磨を包含する。チロシンキナーゼの阻害は、制御されない細胞再 生、即ち、細胞増殖障害の制御に効用があると思われる。

自己リン酸化、即ち、成長因子１ノセプター自体のリン酸化及び細胞内基質宿主 のリン酸化の阻害は、マイトノエネシス及び細胞増殖に関与するある種の生化学 事象である。インスリンレセプターの自己リン酸化及び基質タンノ々り質の他の レセプターによるリン酸化は、最も初期に確認しうるホルモンの生化学応答であ る。

インスリンレセプターのプロティンチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）活性及び上皮成 長因子（ＥＧＦ）レセプターをインスリンとＥＧＦの生成に関与する細胞遺伝物 質の部位特定変異誘発により除去するとレセプターの生物活性を完全に除去する 結果となる。インスリンは細胞増殖に関係しない他の生物機能を行うために体に 必要なものなので、これは特に好ましくない。従って、インスリンレセプターの ＰＴＫ部分を阻害するのに必要とされる濃度より低い濃度でＥＧＦレセプターの ＰＴＫ部分を阻害する化合物が、細胞増殖障害の選択治療に有効な薬剤となるこ とができる。

開光報告 米国特許第４．６７８．７９３号及び同第４．８２６．９８４号には、癌、乾箇 、ざ瘉等を治療する活性薬剤としてスチリル４．４−ジメチル（二環へテロアリ ール）化合物のような医薬組成物か開示されている。米国特許第４．７６９．３ ８４号には、胃及び寸二指腸の潰瘍を治療する活性薬剤としてスチリルベンズイ ミダゾール化合物のような医薬組成物が開示されている。

ＥＧＦレセプターの最も強力な阻害剤は、Ａ４３１／クローン１５細胞のＥＧＦ 誘発増殖を阻害し、他の成長因子により誘発される場合にはその細胞の増殖にほ とんどあるいは全く作用しないことが報告されている。エルブスタチンがＡ４３ １細胞膜のＥＧＦレセプターの自己リン酸化を阻害することも報告されている。

低濃度のエルブスクチンはＥＧＦレセプター自己リン酸化を阻害するのに必要と されているが、かなり高濃度のエルブスタチンは環状アデノシン３’　、５’　 −−リン酸（ｃＡＭＰ）−依存性プロチインキナーゼを阻害するのに必要とされ ている。

光肌Ｑ！約 本発明によれば、細胞増殖障害に罹患している患者において細胞増殖を阻害する 方法であって、プロティンチロシンキナーゼ阻害を示すヘテロアリール基が１又 は２個のへテロ原子を含む単環又は１〜約４個のへゾロ原子を含む二環であるス チリル置換ヘテロアリール化合物を患者に投与することを含み、該化合物は任意 に置換又は多置換され、但し、該環が多置換の場合、置換基は該環に共通の結合 点を有しない方法が提供される。

本発明のもう１つの態様は、ヘテロアリール基の置換基がカルボキシ基又はエス テル基ではない上記タイプの化合物である新規な化合物に関する。

また本発明のもう１つの健梯は、上記タイプの新規な化合物の薬学的に有効な量 を薬学的に許容しうる担体と混合した状態で含む医薬組成物に関する。

本発明の方法の懸様に関して、下記式ｌによって表される化合物は、本発明の実 施に有用な上記スチリル置換ヘテロアリール化合物の種類である一式中、Ｒ，は アルキル、−Ｈｌ−ＣＮ、−０Ｈ１−ＣＯＯＲ１−Ｃ０ＮＲＲ又は−Ｃ３ＮＲｒ マてあり； Ｒはアルキル、−Ｈ又はアラルキルであり；Ｒ７は１又は２１因のＮ、０又はＳ 原子もしくはｌ又は２個のＮ−オキシド基を含む約５〜約７員環の単環アリール 又は１へ・約４個のＮ、０又はＳ原子もしくは１〜約４個のＮ−オキシド基を含 む約８〜約１２員環の二環アリールであり、該環はＩ・〜約３（駆υＲ１基で任 官に置換され、該Ｒ３置換基は該環に共通の結合中を有しない： Ｒ１はアルキル、−比−ＣＮ、−０Ｈｌ−ＣＯＯＲ１−ＣＯＮＲＲｌ−Ｃ５ＮＲ Ｒ又は−ＣＨ２ＣＮてあり： Ｒ−、ＲＳ　、Ｒｓ　、Ｒ□及びＲ５は各々独立してアルキル、−Ｈｌ−ＣＮ、 ）１０、−０Ｒ１−ＣＨＯｌ−ＣＯＯＨｌ−ＮＲＲ又はそのＮ−オキシド、−Ｎ Ｏ２、−ＮＨＣＯＣｌｈ　、　ＳＲ１ＣＦ＋　、　ＣＨ＝ＣＨＣ００Ｈ１−ＮＨ ＣＯ（ＣＨ２ｈＣＯＯＨ，複素ｒＢ又はヘテロアリールであり：各Ｒ９は独立（ ７てアルキル、−ＣＮ、〕Ａ１、−０Ｒ１−ＣＨＯｌ−ＣＯＯＨｌ−ＮＲＲ又は そのＮ−オキシド、−ＮＯ２、−ＮＨＣＯＣＨ，、−８Ｒ１−ＣＦ３、−ＣＨ＝ ＣＨＣ００Ｈ１−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２　Ｃ０ＯＨ，複素環又はヘテロアリノー ル および であり； Ｒ１とＲ１は一緒４こ−ＣＨ２ＣＨ２−１ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−又はＲ１から始 めて−ＣＯＮＨ−であってもよい；又はその薬学的に許容しうる塩。

また、本発明によれば、本発明の化合物及び医薬組成物態様の範囲内の新規な化 合物は、上記式Ｉ： 式中、Ｒ，はアルキル、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ１Ｃ０ＮＲＲ又は−Ｃ３ＮＲＲであ り： Ｒはアルキル、−Ｈ又はアラルキルでありＳＲ２はＩ又は２個のＮ、０又はＳ原 子を含む約５〜約７員環の単環アリール又（まＩ〜約４個のＮ、０又はＳ原子を 含む約８〜約１２員環の二環アリーノしであり、該環は１〜約３個のＲ５基で任 意に置換され、該Ｒｑ！換基は共通の結合点を有しない： Ｒ１はアルキル、−■−■、−ＣＯＯＲ，−ＣＯＮＲＲｌ−Ｃ３ＮＲＲ又（ま− ＣＨ２ＣＮであり； Ｒ４及びＲ５は各々独立してアルキル、−Ｈｌ−ＣＮ、７１０、−０Ｒ１−ＣＨ Ｏｌ−ＣＯＯＨｌ　ＮＲＲ，ＮＯ２、ＮＨＣＯＣＨ３、ＳＲ１ＣＦｉ、　ＣＨ＝ ＣＨＣ００Ｈ１ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ，複素環又はヘテロアリノールで あり； Ｒｓ　、Ｒ７及びＲ６は各々独立してアルキル、−Ｈｌ−ＣＮ、−０Ｒ１−ＣＨ Ｏｌ−ＣＯＯＨｌ　Ｎ）（ＣＯＣＨｉ、　ＳＲ，ＣＦ３、ＣＨ＝ＣＨＣ００Ｈ１ −Ｎ）（ＣＯ（ＣＨｔ）２ＣＯＯＨ，複素環又はヘテロアリールであり；但し、 Ｒ，、Ｒｓ　、Ｒ６、Ｒ，及びＲｓの少なくとも２個は−Ｉ］でなく、Ｒ７又は Ｒ１が−ＯＲである場合、Ｒ＝　、Ｒｓ又はＲ５は−ＯＲであることはできな（ Ｘ；各Ｒ９は独立してアルキル、−ＣＮ、）１０、−０Ｒ１−ＣＨＯｌ−ＮＲＲ １＝ＮＯ＝　、Ｎ１（ＣＯＣＨｘ　、　ＳＲ１ＣＦｓ　、　ＣＨ＝ＣＨＣ００Ｈ １−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）、Ｃｏｏ１４、複素環、へ、テ１１アリール又はＲ１と Ｒｏは一緒に−ＣＨ２ＣＨ，−１−ＣＨ２ＣＨ，ＣＨ，−又ＣまＲｌｈＡら始め て−ＣＯＮ　Ｈ−であってもよい によって表される。

本発明の別の実施態様においては、本発明の化合物及び医蘂組成物の範囲１町の 新規な化合物は下記式１１によって表される。

式中、Ｒはアルキル、−Ｈ又はアラルキルであり；Ｒ２はｌ又は２個のＮ、Ｏ又 はＳ原子を含む約５〜約７＠環の単環ア１ノール又１才１〜約４個のＮ、０又は Ｓ原子を含む約８〜約１２員環の二環７１ノールてあり、該層は１〜約３個のＲ １基で任意に置換され、該Ｒ９置９基シま共通の結合点を有しない： Ｒ５及びＲ１は各々独立して約３〜約６個の炭素原子を有する分岐鎖アルキル、 −ＣＮ、ハロ、−３Ｒ１−ＣＦ、　、複素環又はヘテロアリールであり２Ｒｓ　 、Ｒｙ及びＲ８は各々独立しテアルキル、−Ｈｌ−ＣＮ、−０Ｒ１−ＣＨＯｌ− ＣＯＯＨ，−ＮＨＣＯＣＨ，、−３Ｒ，−ＣＦ）　、−ＣＨ＝ＣＨＣ００Ｈ１− ＮＨＣＯ（ＣＨｘ）ｔ　Ｃ００Ｈ１複素環又はヘテロアリールであり：各Ｒ１は 独立してアルキル、−ＣＮ、ハロ、−０Ｒ１−ＣＨＯ，−ＮＲＲｌ−Ｎｏｔ　、 −ＮＨＣＯＣＨ２、−３Ｒ１−ＣＦ、、−ＣＨ＝ＣＨＣ００Ｈ１−ＮＨＣＯ（Ｃ Ｈ，）ｔ　Ｃ００Ｈ１複素環、ヘテロアリール又は本発明の範囲内の化合物は、 ＥＧＦレセプターのチロシンキナーゼドメインの基質部位に対しても特異親和性 があり、ＰＤＣ；Ｆレセプターを阻害するよりＥＧＦレセプターキナーゼの方を 阻害し、レセプターのＥＧＦ依存性自己リン酸化も効果的に阻害する。

発明の詳細な説明 上記及び本開示を通して用いられる下記用語は、特にことわらない限り、次の意 味を有するように理解される。

“アルキル“は、約１〜約６個の炭素原子を含む直鎖又は分岐鎖であってもよい 飽和脂肪族炭化水素を意味する。

“低級アルキル”は、直鎮又は分枝鎖であってもよい１〜約４個の炭素原子を有 する上記アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル 、イソブチル、５ｅｅ−ブチル又はｔｅｒｔ−ブチルを意味する。

“アルコキシ”は、“アルキル”が上記の通りであるアルキル−オキシ基を意味 する。低級アルコキシ基か好ましい。具体的な基としては、メトキシ、工１−キ シ、ｎ〜プロポキン、ｌ−プロポキシ及びｎ−ブトキシが挙げられる。

“アリール”は、不飽和又は部分的不飽和環系を意味する。好ましいアリ−ノド 基はピリジル及びインドリルである。

“複素環“は、１又は２個のＮ、０又はＳヘテロ原子を含む不飽和環系を意味す る。好ましい複素環基は、モルホリン、ピペリジン及びピペラジンである。

“アシル”は、有機酸から誘導された有機基、その酸ヒドロキシル基を除去した カルボン酸を意味する。好ましいアシル基は、低級アルキルカルボン酸基、例え ばアセチル及びプロピオニルである。ベンゾイルも好ましい。

“ハロ”は、ハロゲンを意味する。好ましい１１０ゲンとしては、塩素、臭素及 びフッ素か挙げられる。

好ましいアラルキル基は、ベンジル及びフェネチルである。

治療的に有効なＰＴＫ阻害化合物は、ＥＧＦレセプターチロシンキナーゼ（ＥＧ ＦＲＫ）の基質と競合し、アデノンン三リン酸（ＡＴＰ）と競合しないと思われ る。ＡＴＰと競合するＰＴＫ阻害剤、ケルセチン及びゲニステインは、他のプロ テインキナーゼを阻害し、結果として高度に細胞毒性である。選択性試験のよう に、インスリ：ルセブターキナーゼ（ＩＲ，Ｋ）及び／又はＰＤＧＦレセブター キナーゼよりＥＧＦＲＫの方を阻害する化合物か著しく有効である。

本発明の化合物の水及び弱練水性溶媒の双方における溶解性が、細胞膜を透過す る確率を高めると理論付けられる。しかしなから、種々の不溶性化合物：よ、試 験管内試験において著しいＥＧＦＲＫ阻害を示した。

本発明の方法態様によれば、本発明の実施に有用なスチリル置換ヘテロア１ノー ル化合物の好ましい種類は下記式１１によって表される。

式中、Ｒはアルキル、−Ｈ又はアラルキルであり；Ｒ７はｌ又は２個のＮ１０も しくはＳ原子又はｌ又は２個のＮ−オキシド基を含む約５〜約７員環の単環アリ ール又は１〜約４個のＮ、０もしくはＳ原子又は１〜約４個のＮ−オキシド基を 含む約８〜約１２員環の二環アリールであり、該層は１〜約３個のＲ９基で任意 に置換され、該Ｒ１置換基は該層に共通の結合点を有しない、 Ｒ，、Ｒ，、ＲｌＲ，及びＲ１は各々独立してアルキル、−Ｈ，−ＣＮ、ハロ、 −０Ｒ１−ＣＨＯｌ−ＣＯＯＨｌ−ＮＲＲ又はそのＮ−オキシド、−’Ｎｏｔ　 、−ＮＨＣＯＣＨ，、−３Ｒ，−ＣＦ、　、−ＣＨ＝ＣＨＣ００Ｈ１ＮＨＣＯ（ ＣＨｔ）ｔＣＯＯＨ，複素環又はヘテロアリールでアリ：各Ｒ１は独立してアル キル、−ＣＮ、ハロ、−０Ｒ１−ＣＨＯｌ−ＣＯＯＨｌ−ＮＲＲ又はそのＮ−オ キシト、−Ｎｏ、　、−ＮＨＣＯＣＨ３、−３Ｒ１ＣＦ　ｓ、−ＣＨ＝ＣＨＣ０ ０Ｈ１−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｔ　Ｃ００Ｈ１複素環、ヘテロアリール又は 本発明の実施に有用な化合物の好ましい種類は、式■で表される化合物を包含し 、ここで： Ｒ冒ま−ＣＮ、−ＣＯＯＲ，−ＣＯＮＲＲ又は−Ｃ３ＮＲＲであり：Ｒは低級ア ルキル、−Ｈ又はアラルキルであり：Ｒｔはｌ又は２個のＮ、　Ｏ又はＳ原子を 含む６員環の単環アリール又は１〜約４個のＮ、０又はＳ原子を含む９又はｌＯ 員環の二環アリールであり、該層は１〜約３個のＲ９基で任意に置換され、該Ｒ １置換基は該層に共通の結合点を有しない： Ｒ３は−Ｈであり。

Ｒ４、Ｒｉ、Ｒｅ　、Ｒｔ及びＲｅは各々独立して低級アルキル、−Ｈ１低級ア ルコキシ又は−ＯＨであり、但し、Ｒ４，Ｒｓ　、Ｒｓ　、Ｒｙ及びＲ８の少な くとも２個は−Ｈでなく、Ｒ１又はＲ，が低級アルコキシである場合、Ｒ＝　、 Ｒｓ又はＲ，は低級アルコキシであることはできない。

Ｒ１及びＲ１はまた各々独立してハロであり：各Ｒ９は独立して低級アルキル、 ハロ、低級アルコキシ、−ＯＨ又はである：又は その薬学的に許容しうる塩。

本発明の実施に有用な更に好ましい化合物は、下記式ＩＩ＋及びＩＶの化合物を 包含する・ ＩＩ 〒ｔａ 式中、Ｒ，は−ＣＮ、−ＣＯＯＲ，−ＣＯＮＲＲ又１；ｔ−Ｃ３ＮＲＲであｉ） ；Ｒは低級アルキル、−Ｈ又はアラルキルであり；Ｒ１はｌ又は２個のＮ、０又 はＳ原子を含む６員環の単環アリール又は１〜約４個のＮ、　Ｏ又はＳ原子を含 む９又は１ｏ員環の二環アリールであり、該層は１〜約３個のＲ１基で任意に置 換され、該Ｒ１置換基は該層に共通の結合点を有しない。

Ｒ３は−Ｈであり； Ｒ４、Ｒｓ　、Ｒｓ　、Ｒｔ及びＲ１は各々独立して低級アルキル、−Ｈ，低級 アルコキシ又は−ＯＨであり、但し、Ｒ４、Ｒｓ　、Ｒｓ　、Ｒｙ及びＲ８の少 なくとも２個は−Ｈでなく、Ｒ７又はＲ１が低級アルコキシである場合、Ｒ％、 Ｒｓ又はＲ６は低級アルコキシであることはできない：Ｒ４及びＲ６はまた各々 独立してハロであり：各Ｒ９は独立して低級アルキル、ハロ、低級アルコキシ、 −ＯＨ又はおよび てあり； Ｒ８゜は−Ｈ１アルキル、アラルキル又は０″ または である、又は その薬学的に許容しうる塩。

更に好ましい化合物は、式ＩＩ＋及びＴＶで表され、ここでＲ１は−ＣＮ、−Ｃ ＯＯＲ又は−ＣＯＮＲＲであり：Ｒ，、Ｒ％、Ｒ，、Ｒ，及びＲ１よ独立して低 級アルキル、−Ｈ，低級アルコキシ又は−ＯＨてあり、但し、Ｒ＝　、Ｒｓ　、 Ｒ％　、Ｒｔ及びＲ１の少なくとも２個は−Ｈでなく、Ｒ１又はＲ１が低級アル コキシである場合、Ｒ，、Ｒｈ又はＲ１は低級アルコキシであることはできない ：Ｒ４及びＲ，はまた各々独立してハロてあり。

Ｒは低級アルキル又は−Ｈてあり。

Ｒ＋置換基はない。

最も好ましい化合物は、式ＩＩによって表され、ここてＲ１は−ＣＮであり、Ｒ １、Ｒ７及びＲ８は各々独立して−Ｈてあり、Ｒ４及びＲ，は各々独立してアル キル、ハロ、−ＯＲ又は−ＣＦ２である。

本発明の別の実施態様においては、化合物の好ましい種類は、上記式ＩＩで表さ れ、ここで Ｒ１は１又は２個のＮ、０又はＳ原子を含む６員環の単環アリール又は１〜４個 のＮ、０又はＳ原子を含む９又は１０員環の二環アリールであり、該層は１〜約 ３個のＲ７基で任意に置換され、該ＲＩＭ換基は核層に共通の結合点を有しない 。

Ｒ４及びＲ６は各々独立して約３〜約４個の炭素原子を有する分枝鎖低級アルキ ル又はハロてあり。

Ｒ５、Ｒ７及びＲ，は各々独立して一■（、約２〜約４個の炭素原子を有する低 級アルキル又はハロてあり。

各Ｒ１よ独立し°Ｃ低級アルキル、ハロ、低級アルコキシ、−ＯＨ又は本発明の 別の実施態様においては、本発明の実施に有用な更に好ましい化合物は下記式Ｖ によって表される。

式中、Ｒ＝　、Ｒｓ　、Ｒｓ　、Ｒ７、Ｒｅ及びＲｏはすぐ上で記載した通りで ある。

本発明の別の実施態様においては、更に好ましい化合物は式Ｖによって表され、 ここでＲ６及びＲｅは各々独立してハロ、イソプロピル、イソブチル、５ｅｃ− ブチル又はｔ−ブチルであり；Ｒｓ　、Ｒ７及びＲ，は各々独立して−Ｈ１ハロ 、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ローブチル、イソブチル、５ｅｃ−ブ チル又はｔ−ブチルであり、Ｒ，置換基はない。

本発明の別の実施態様において最も好ましい化合物は、式Ｖによって表され、こ こてＲ４及びＲ１ま各々独立してハロであり、Ｒ５５Ｒ７及びＲ，は各々独立し て−Ｈである。

本発明の化合物は、遊離塩基として、塩として又は水和物として用いてもよい。

全での形態が本発明の範囲内である。酸付加塩を生成してもよいが、これは単に 使用するのにより便利な形態であり、実際には、塩形態の使用は本質的に塩基形 態の使用になる。酸付加塩を調製するために用いることができる酸は、好ましく は、遊離塩基と組み合わせる場合、薬学的に許容しつる塩、即ち、アニオンが塩 の医薬投与量において動物体に非毒性である塩を製造するものを包含するので、 遊離塩基に固有のを益な特性はアニオンに起因する副作用によって損なわれない 。

該塩基性化合物の薬学的に許容しつる塩が好ましいが、具体的な塩自体が、例え ば塩か精製及び同定の目的にのみ生成される場合又はイオン交換操作により薬学 的に許容しうる塩を調製するに当たり中間体として用いられる場合のように中間 体生成物としてのみ所望されるとしても、全ての酸付加塩が遊離塩基の原料とし て有効である。

本発明の範囲内の薬学的に許容しうる塩としては、次の酸から誘導されるもの： 無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸及びスルファミン酸：及び有機酸、例えば酢 酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸 、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロへキシルスルファミン 酸、キナ酸等が挙げられる。

対応する酸付加塩は、各々次のもの・塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、スルファミン 酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンス ルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロへキシ ルスルファミン酸塩、キナ酸塩を含む。

本発明の化合物の酸付加塩は、適当な酸を含む水性又は水性アルコール溶液又は 他の適切な溶媒に遊離塩基を溶解し、この溶液を蒸発して塩を単離することによ るかあるいは塩が直接分離するか又は溶液の濃縮により得ることができる場合に は、遊離塩基及び酸を有機溶媒中で反応させることにより調製される。

本発明の医薬組成物及び方法態様において在勤な化合物は、既知の方法、例えば 米国特許第３．１４９．１４８号に開示されているようなりネベナゲル縮合反応 により調製することができる。

本発明の化合物は、下記反応順序により調製される。

極性媒体中の置換ベンズアルデヒドと一般式Ｒ，ＣＨＩ　Ｒ，で表される活性メ チレン化合物どをピペリジンのようなアンモニア又はアミンの存在下にタネベナ ゲル縮合し、加熱すると、本発明の生成物を生じる。Ｒ３基の置換が所望される 場合、対応するケトン出発物質が用いられる。２５°Ｃから還流までの範囲の反 応温度及び反応時間は、縮合に用いられる物質により異なる。

本発明の化合物は、市販されているか、文献で既知であるか又は既知の方法によ り製造することができる。例えば、米国特許第４．６００．７１２号には、式Ｉ の例えばＲ１かシアノであり、Ｒｔがピリジルであり、Ｒｓ及びＲ１又はＲ１が クロロである殺真菌剤が開示されている。米国特許第３．３３７．５６５号及び 同第３．３３７．５６８号には、式■の例えばＲ１がシアノ又はヒドロキシであ り、Ｒ８がピリジルであり、Ｒ１がヒドロキシである炭水化物代謝を妨害する化 合物が開示されている。

米国特許第３．１９６．１５８号には、式■の例えばＲ３がシアノであり、Ｒ１ がビリ９ルであり、Ｒ７又はＲ５がハロである副腎皮質阻害剤が開示されている 。米国特許第３．１５７．６６３号には、例えばＲ３がシアノであり、Ｒ１がピ リジルであり、Ｒ１及びＲ７又はＲ，がアミノ又はニトロ基である副腎皮質阻害 剤が開示されている。

Ｂｕｕ−Ｈｏｉ等、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏ ｃｉｅｔｙ　（Ｃ）、　ｐｐ、２０６９−７０（１９６９）■■A１゜ ２−ジアリールアクリロニトリルを２−了り−ル基がＯ−アルコキシ置換基を有 する対応３−アリールクマリンに変換することが開示されている。上記文献には 、本発明の方法態様に従って用いることができる数種の化合物が開示されている が、かかる化合物を細胞増殖を阻害するために使用することは開示されていない 。

フェニル及び複素環の環又は鎖−Ｅの種々のＲＳＲ＋　、Ｒ１、Ｒ４、Ｒｓ　、 Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒ＝及びＲ１置換基は、出発化合物に存在させるか又は縮合生成物 を生成させた後、１つの基を別の基に置換又は変換する当該技術において既知の 方法により加えることができる。置換基自体か反応性である場合には、２換基自 体を当該技術において既知の手法に従って保護することができる。当該技術にお いて既知の種々の保護基か用いられる。多数のこれらの基の可能な例は、“Ｐｒ ｏｔｅｃｔ　１ｖｅＧｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ −、Ｔ、Ｗ、Ｇｒｅｅｎ、　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　１９ W１に見られ る。具体的には１．ニトロ化によりニトロ基を芳香環に付加することができ、こ の二斗ロ基を他の基、例えば還元によりアミ、ノに、またこのアミノ基をジアゾ 化してこのジアゾ基を置換することによりハロに変換することができる。アシル 基は、フリーデル−クラフッアシル化によりアリール基に置換することができる 。次いで、アシル基をつＡルフーギンユナー還元及びクレメンゼン還元のような 種々の方法により対応するアルキル基に変換することができる。アミノ基をアル キル化してモノ及びジアルキルアミノ基を生成させる、：どができ、メルカプト 及びヒドロ４′シ基をアルキル化して対応するエーテルを生成させることができ る。、第一アルコールを当該技術において既知の酸化剤により酸化してカルボン 酸又はアルデヒドを生成させることができ、第二アルコールを酸化してケトンを 生成させることかできる。第三アミノ基は、当該技術において既知の酸化剤、例 えば過酸化水素及び過酸により対応するＮ−オキシトに変換することかできる。

即ち、置換又は改変反応を用いて出発物質、中間体又は最終生成物の分子のどこ にでも種々の置換基を得ることかできる。

本発明の範囲内の化合物は、プロティンチロシンキナーゼ阻害剤としてＥ著な活 性を示し、乾癖、アテローム性動脈硬化症及び再狭窄障害のようなある種症状を 治療するための細胞の抗増殖剤どして治療価値を有する。本発明は、アテローム 性動脈硬化症の治療に特に適用しうろことが予想される。ある種症状、例えばア テローム性動脈硬化症の治療に関して、ある種の人は、例えば遺伝、環境又は組 織因子に基づいて非常に危険であると確認される。そのような症状の発症又は再 発を予防又は遅延させるかあるいはその症状を治療するのに、本発明の範囲内の 化合物を用いることかできる。

本発明の化合物は、使用される投与経路、即ち、経口又は非経口的に適応される 種々の剤形て哺乳動物に投与することができる。これについて非経口投与として は、次の経路による投与が挙げられる　静脈内、筋肉内、皮下、眼内、滑液嚢内 、経上皮経路、例えば経皮、点眼、舌下及びバッカル：局所的にはガス注入及び エアロゾルによる点眼、経皮、眼内、直腸内及び経鼻吸入及び直腸内金％系のよ うな経路。

活性化合物は、例えば不活性希釈剤あるいは同化１，７うる食用担体と経口投与 されるか又は硬又は軟外皮ゼラヂンカプセルに封入されるか又は錠剤に圧縮され るか又は食事の食品と直接混合される。治療用経口投与の場合、活性化合物は賦 形剤と混合され、摂取用錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキ シル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェハー剤等どして用いられる。かがる組成物 及び製剤は、活性化合物を少なくとも０．１％含存しなければならない。組成物 及び製剤の％か異なるのは当然のことであり、単位重量の約２〜約６％とするこ とが便利である。治療的に有効な組成物中の活性化合物の量は、適切な投薬が得 られるようなものである。本発明による好ましい組成物又は製剤は、経口単位剤 形が活性化合物的１〜１０００■を含存するように調製される。

錠剤、トローチ剤、火剤、カプセル剤等は、次のものを含んでもよい：トラガン トゴム、アラビアゴム、コーンスターチ又はゼラチンのような結合剤ニリン酸二 カルシウムのような賦形剤：コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸 等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、及びスクロース、ラク トース又はサッカリンのような甘味剤か添加されるか又はペパーミント、アカモ ノ油又はチェリー味のような香味剤。単位剤形がカプセルである場合、上記タイ プの材料に加えて液体担体を含めることができる。剤皮としであるいは投薬単位 の物理的形を変化させるために、他の種々の材料を存在させることができる。

例えば、錠剤、火剤又はカプセル剤は、シェラツク、砂糖又はその両方で剤皮を 施してもよい。シロップ剤又はエリキシル剤は、甘味剤としてスクロース、保存 剤としてメチル及びプロピルパラベン、チェリー又はオレンジ味のような色素及 び香味剤を含めることができる。単位剤形を調製するのに用いられる任意の材料 は使用される量において薬学的に純粋で実質的に非毒性でなければならない。更 に、活性化合物は、徐放性製剤及び処方に組み込まれてもよい。

活性化合物は、非経口又は腹腔内投与することもできる。活性化合物を遊離塩基 又は薬理的に許容しうる塩として溶解したものは、ヒドロキシプロピルセルロー スのような界面活性剤と適切に混合された水中で調製される。分散液は、グリセ ロール、液状ボリエｆ−１ノングリコール及びその混合液中又は油中でｌｌ製さ れる。

貯蔵及び使用の通常の条件下、これらの製剤には微生物の発生を防止するために 保存剤を含める。

注射用に適切な医薬形態としては、無菌水溶液又は分散液及び無菌注射用溶液又 は分散液の用時調製用の無菌散剤が挙げられる。全ての場合において、無菌でな ければならず且つ容易に注射器に存在させつる程度まで液体でなければならない 。製造及び貯蔵条件下で安定であり、細菌及び真菌のような微生物の汚染作用に 対して保存されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール （例えばグリセロール、プロビレ゛／グリコール及び液状ポリエチレングリコー ル等）、その適切な混合液及び植物油を含む溶媒又は分散媒体とすることかでき る。適当な流動性は、例えばレシチンのようなコーティング剤の使用、分散液の 場合には必要な粒子サイズの維持及び界面活性剤の使用により維持することがで きる。微生物の作用は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブ タノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサル等により防止させることができ る。多くの場合、等張剤、例えば砂糖又は塩化ナトリウムを含めることが好まし い。注射用組成物は、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウ ム及びゼラチンを使用することにより、吸収時間を延長することができる。

注射用無菌溶液は、適切な溶媒中必要な量の活性化合物を必要とされる上記種々 の他の成分と混合し、必要なら次いで滅菌ろ過することにより調製される。一般 的には、分散液は、塩基性分散媒体を含む無菌賦形剤と上記の必要な他の成分に 種々の滅菌有効成分を混合することにより調製される。注射用無菌溶液に調製す るための無菌散剤の場合には、好ましい調製方法は、有効成分と任意の追加所望 成分の粉末をその上記滅菌ろ過溶液から得る真空乾燥及び凍結乾燥法である。

本発明の治療用化合物は、単独で又は上で述へた薬学的に許容しうる担体と組み 合わせて哺乳動物に投与され、その比率は化合物の溶解度及び化学的性質、使用 される投与経路及び探準医薬実施により決定される。

予防又は治療に最も適切な本治療用薬剤の用量は、投与形態、使用される個々の 化合物及び治療される個々の患者の生理的特徴で異なる。一般的には、はじめは 低用量が用いられ、必要な場合には、その状況下で最適効果に達するまで少しず つ増加される。ラットを用いた生理的実験に基づく治療用ヒト用量は、通常、１ 日約０．Ｏ１〜約１００ｗ／ｋｇ体重又は約０．４■〜約１０ｇ又はそれ以上で あるが、１日１回から数回数個の投薬単位で投与される。経口投与は高用量を要 する。

実施例 ヒト及び他の動物において治療活性に関係すると思われる薬理的試験手順の説明 を包含する本発明の実施例及び比較例を下記実施例で述べるがこれらに限定され ない。下記実施例１及び２は、本発明の範囲内の化合物を具体的に説明するもの である。実施例ＩＡ及びＩＢにおいて、２口よシアノであり、Ｒ１はピリジルで あり、Ｒ６とＲ１はクロロである。実施例２において、Ｒｔはピリジルであり、 Ｒ１はシアノであり、Ｒ４とＲｓはクロロである。

実施例ＩＡ トランス−２−（３−ピリジル）−３−（３，５−ジクロロフェニン０−２−プ ロペンニトリル １１．４リツトルの無水エタノール中４００ｇ（２，３モル）の３．５−ジクロ ロベンズアルデヒドの攪拌溶液に２８３．５ｇ（２，４モル）の３−ピリジルア セトニトリルと７２０．９ｇのＫｔ　Ｃｏｔを加えた。Ｋ、Ｃｏ、を加えて２分 以内に固体沈澱が生じた。この反応混合液を約２．５時間攪拌した。この攪拌反 応混合液に水（２２，９リツトル）を加えた。１時間攪拌した後、この混合液を ろ過し、フィルターケークを水洗（１０リツトル）し、乾燥し、イソプロパツー ルで再結晶した。

５３４ｇ　（収率８５％）のトランス−２−（３−ピリジル）−３−（３，５− ジクロロフェニル）−２−プロペンニトリルが得られた、ｍ、ｐ、１５０−１５ １°Ｃ０シス−２−（３−ピリジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−２ −プロペンニトリル ３リツトルのアセトニトリル中、例えば実施例ＩＡで調製したトランス−２〜（ ３−ピリジル）−３−（３，５−ジクロロフェニル）−２−プロペンニトリル（ ２０ｇ）の攪拌溶液を太陽灯（２７５Ｗ）に２４時間照射した。反応混合液を更 に２４時間攪拌し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をヘキサン、５％ＥｔＯ Ａｃ／ヘキサン、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、次に１５％ＥｔＯＡＣ／ヘキサ ンで連続して溶離するシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーで精製し た。得られた黄色固形物を１５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで再結晶して、８ｇ（収 率７４％）の標記化合物を得た、ｍ、ｐ、１１４−１１７°Ｃ０Ｃ０２Ｏ０の無 水エタノール中３ｇ（１７，１ミリモル）の３．５−ジクロロベンズアルデヒド の撹拌溶液に１．８３ｍｌ　（１７，１ミリモル）の３−ビリジルーアセトニト リルと１当量のＫｔ　ＣＯ＋　（２，３６ｇ）を加えた。反応フラスコに還流コ ンデンづ−を取り付け、この攪拌反応混合液を２時間還流し、ろ過し、濃縮した 。得られた残留物を４１の・＼キサン／酢酸エチルで溶離するシリカゲルによる フラッシュクロマトグラフィーで精製して標記化合物を白色固形物として得た、 ｍ、ｐ。

＋３９−１４ビＣ０反応混合液から１量のトランス−２−（３−ピリジル）−３ −（３，５−’Ｊクロロフェニル）−２−プロペンニトリルも得られた。

本発明の化合物を、有効な細胞の抗増殖活性にその結果が関係する種々の生物試 験にかける。これらの試験は、本明細畜で開示しまた化合物のＥＧＦレセプター キナーゼ、ＰＤＧＦレセプターキナーゼ及びインスリンレセプターキナーゼ阻害 活性をめるのに有効である。

ＥＧＦ　ｌ／セブター精製 ＥＧＦ−レセプター精製は、Ｙａｒｄｅｎ及びＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒの手順 に基づいている。

Ａ４３１細胞を８０ｃｍ２びんて集密（１びんにつき２ＸｌＯ’細胞）まで増殖 させる。細胞をＰＢＳて２回洗浄し、１．０ミリモルＥＤＴＡを含むＰＢＳで回 収しく３７”Ｃで１時間）、６００ｇで１０分間遠心する。細胞を２ＸＩＯ’細 胞につｅｌｍｌの可溶化冷バッファー（５０ミリモルへペスバッフ７−１ｐＨ７ ，６，１％トリドア　Ｘ−１００，１５０ミリモルＮａＣ１，５ミリモルＥＧＴ Ａ、１ミリモルＰＭＳＦ、５０ｇｇ／ｍｌアプロチニン、２５ミリモルベンズア ミジン、５μｇ／ｍ１ロイベプチック及び１０　ｕｇ／ｍｌダイズトリブシンイ ンヒビター）に４°Ｃで２０分間可溶化する。ｔｏｏｏｏｏｇで３０分間遠心し た後、上溝をＷＧＡ−アガロースカラム（２Ｘ１０’細胞につき１００μＩの充 填樹脂）に装填し、４°Ｃで２時間振盪する。非吸収物質を除き、樹脂をＨＴＮ バッファー（５０ミリモルヘペス、ｐＨ７，６，０，１％Ｉ・リドンＸ−１００ ，１５０ミリモルＮａＣＩ）で２回、ＩＩＪＮａＣｌを含むＨＴＮバッファーで ２回及びＨＴＮＧバッファー（５０ミリモルヘペス、ｐＨ７，６，０，１％トリ トンＸ−１００，１５０ミリモルＮａＣ１及び１０％グＩＪ（？ＣＩＣルール２ 回洗浄する。ＥＧＦレセプターを０．５ＭＮ−アセチル−Ｄ−グリコサミン（２ ＸＩＯ’細胞につき２００μｌ）を含むＨＴＮＧバッファーを用いてバッチ式で 溶離する。溶離物質を一７０°Ｃで一定分量ずつ貯蔵し、使用前にＴＭＴＮＧバ ッファー（５０ミリモルトリスーメスバッファー、ｐＨ７，６，０，１％トリト ンＸ−１００，１５０ミリモルＮａＣｌ５１０％グリセロール）で希釈する。

ポリ（ＧＡＴ）のＥＧＦＲキナーゼ触媒リン酸化及びその阻害ＷＧＡ−精製ＥＧ ＦＲ（０，２５μｇ／７ツｔ’（）を５ｏミ’）ｃルトＩＪス−ｊスバッファー 、ｐＨ７，６中ＥＧＦ　（０，８５μＭ）テ４’Ｃｉ：おいて２０分間予備活性 化する。Ｍｇ　（ＡＣ）！　（６０ミリモル）、　［７−”Ｐ］　ＡＴＰ　（１ ２５μＭ、２−５ｕ　Ｃｉ　／　了）４：！イ）、ポリ（ＧＡＴＸｏ、　０６２ ５ｍｇ／ｍｌ、０．１２５＋＋＋ｇ／＋ｎｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ）及び阻害剤 の２回実験の６種違度を含む混合液を加えることによりアッセイを開始する。ア ッセイ温度は２２゛Ｃであり、リン酸化コポリマーの生産は２０分まで線状であ ることが見られる。試験されるＰＴＫ阻害剤を水又はエタノールと水の混合液に エタノールの最終濃度が分析溶液中４％を超えないように可溶化する。分析溶液 中４％までＥＧＦＲキナーゼ活性に効果がない。分析溶液中ＥＧＦ（７）濃度は 、最終容量４０　μｌ　テ３００μＭ１’ある。５、ｉｏ又は２０分後、２５ｇ １分量をワットマン３ＩＩＷＩ＋ペーパーカツテイングに加え、次いで０．０１ Ｍピロリバーカッティングを乾燥し、計数してｉｔｐセレンコフ放射線を測定す る。ポリ（ＧＡＴ）　の濃度依存性は、ミカエリスノに、　＝　０．０７６　＋ ０．００７ｍｇ／ｍｌ　又１ｔＧｌｕｓＡ１ａｚＴｙｒ　（ＧＡＴ）単位に対し て計算される場合には０．０６９＋０．００７ミリモルであった。ポリ（ＧＡＴ ）リン酸化に対するＥＧＦ応答をグラフにする。

アッセイ中ＡＴＰに対するに、は２．９μＭであることがわかった。

ＥＧＦレセプター自己リン酸化の時間依存性Ａ４３１細胞のＷＧＡ精製ＥＧＦレ セプター（０，５μｇ／アッセイ）をＥＧＦ（８００ｏＭ）で４°Ｃにおいて２ ０分間活性化する。Ｍｇ（Ａ　ｃ　）ｔ　（６０ミリモル）、トリス−メスバッ ファー、ｐＨ７，６（５０ミリモル）及び［”Ｐ］　ＡＴＰ　（２０μＵ、５μ Ｃｉ／アツセイ）を加えて反応を開始する。反応を４又は１５°Ｃで行い、ドデ シル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）試料バッファー（１０％グリセロール、５０ミリ モルトリス、ｐＨ６，８，５％β−メルカプトエタノール及び３％（ＳＤＳ）を 加えて終結させる。試料を、８％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡ ＧＥ）（３０％アクリルアミド及び０．８％ビス−（アクリルアミド）から調製 し、０．３７５Ｍ１−リス、ｐＨ８，８，０，１％ＳＤＳ、０．０５％ＴＥＭＥ Ｄ及び０．４６％過硫酸アンモニウムを含有）で泳動する。ゲルを乾燥し、＾ｇ ｆａ　ＣｕｒｉｘＲＰ２　Ｘ線フィルムを用いてオートラジオグラフィーを行う 。適切な放射性バンドを切断し、セレンコツ法で計数する。自己リン酸化の高速 相は更に１０分間続ける。１５゛Ｃにおいて最初の１０分で完了するリン酸化の 部分は、全自己リン酸化シグナルの１／３を含み、恐らくレセプターの最初の部 位のリン酸化を表している。従って、次の自己リン酸化実験で使用するのに１０ 分間隔が用いられる。

自己リン酸化のＡＴＰ及びＥＧＦ依存性Ａ４３１細胞のＷ　Ｇ　Ａｔｆｊ製ＥＧ Ｆレセプター（０，５μｇ／アッセイ）をＥＧＦ（０，８５ｎλ１）で４”Ｃに おいて２０分間活性化する。アッセイを１５°Ｃで行い、Ｍｇ（Ａ　ｃ　）ｚ　 （６０ミリモル）、トリス−メスバッファー、ｐＨ７，６（５０ミリモル）、　 ［”Ｐ］　ＡＴＰ　（担体を含まない、５μＣｉ／アツセイ）及び増加する濃度 の非放射性ＡＴＰを加えて反応を開始する。１０分後にＳＤＳ試料バッファーを 加えてアッセイを終結させる。試料は、６％ＳＤＳポリアクリルアミドゲルで行 う。ゲルを乾燥し、上記のようにオートラジオグラフィーにかける。適切な放射 性バンドを切断し、セレンコツ法で計数する。この方法でめたＡＴＰのＫ。

は７２℃Ｍであることがわかる。１０分アッセイブロトコールヲ用いて、ＥＧＦ ＲＫ自己リン酸化のＥＧＦ濃度依存性をめる。

Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓに記載されているように生後６週のラットの肝臓からラ ット肝膜を調製する。Ｚｉｃｋ等に従ってＷＧＡ精製インスリンレセプターを調 製する。ＷＧＡ精製ラット肝１ｎｓＲＫ　（１，２５μｇ）を５０ミリモルトリ スーメスバッファー、ｐＨ７，６中３３０ｏＭインスリンを存在させて又はさせ ずに２２°Ｃで３０分間予備インキュベートする。アッセイを２２℃で行い、Ｍ ｇ（Ａ　ｃ　）４　（６０ミリモル）、ＮａＶＯ，（４０℃Ｍ）、　［７−”Ｐ ］　ＡＴＰ　（１２５μＡ１．３−５μＣｉ／アツセイ）及び３種の濃度のポリ （ＧＴ）［ポリ（Ｇｌｕ４Ｔｙｒ）　］を含む混合液を加えて開始する：阻害剤 を試験するときには、適切な濃度で加えられる。アッセイにおけるインス１ルの 最終濃度は１２５ｎｌｊである。アッセイの合計量は４０μｍである。

２０分後、３０μｍ分量をワットマン３ＩＩＷＩＩペーパーに加え、０．０１Ｍ ビロリン酸ナトリウムを含む１０％冷ＴＣＡに浸漬する。−晩洗浄した後、ベー パーを乾燥し、計数してセレンコツ放射線を測定する。ポリ（ＧＴ）のＩｎ５Ｒ Ｋ触媒リン酸化は、ミカエリス−メンテン反応速度論に従う。

ＥＧＦＲ自己リン酸化の阻害 ヒトフィブロネクチン被覆組織培養皿でＡ４３１を集密まで増殖した。水冷ＰＢ Ｓで２回洗浄した後、５００μｌ／皿の溶解バッファー（５０ミリモルヘペス、 ｐＨ７，５，１５０ミリモルＮａＣ１，１，５ミリモルＭｇＣ１ｔ、１ミリモル ＥＧＴＡ、１０％グリセロール、１％トリト：／　Ｘ−１００，１ミリモルＰＭ ＳＦ、１ｍｇ／ｍｌアプロチニン、１　ｍｇ／ｍｌロイペプチン）を加え、４° Ｃで５分をインキュベートして細胞を溶解した。ＥＧＦ刺激（５００μｇ／ｍｌ 　３７°Ｃで１ｏ分）後、免疫沈降を抗ＥＧＦ−Ｒ（Ａｂ　１０８）　で行い、 自己り’７酸化反応（５０μｍ分量、３μｃｉ［γ−″’Ｐ］　ＡＴＰ）試料を ２又はｌＯμＭの化合物の存在下４°Ｃで２分間行った。熱電気泳動試料バッフ ァーを加えて反応を停止させた。５ＤＳ−ＰＡＧＥ分析（７，５％ｅｌｓ）、次 いでオートラジオグラフィーにかけ、Ｘ線フィルムのデンシトメトリー走査で反 応液を定量した。化合物の選択阻害を試験するために、ＥＧＦ刺激の代わりにＰ ＤＧＦ刺激を用いて、この方法を繰り返した。下記で用いられる”ＩＣ５ｏ”は 、阻害剤を含まない媒体と比較して自己リン酸化率を半減する阻害剤濃度（μＭ ）を意味する。ＥＧＦに対するＩＣ６゜値は、ＰＤＧＦより低く、高程度の阻害 化合物のＥＧＦ特異性を示すことが好ましい。本試験の結果を下記表Ｉに纏める 。

表１ １Ｃ１゜（μＭ） ６　２０　＞５０ ７　０．４　３０ これらの結果は、本発明の化合物がＰＤＧＦレセプターキナーゼを阻害するより ＥＧＦレセプターキナーゼの方をよく阻害することを示している。

ＤＮＡ合成阻害で測定される細胞増殖阻害ヒトフィブロネクチンで予備被覆した （１０℃ｇ１０．５ｍｌ／ウェルを用いて室温で３０分間インキュベートする） ２４ウェルコスタ−皿に細胞をｌウェルにっきｌＸｌ０’細胞を播種した。細胞 を２日間集密まで増殖した。培地を０．５子ウシ血清を含むＤＭＥＭに３６−４ ８時間変え、次いで、細胞をＰＤＧＦ、ＥＧＦ（Ｔｏｙｏｂｏ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒ ｋ、ＮＹ）（２０ｏｇ／ｍｌ）又は血清（１０％子ウシ血清、ＦＣＳ）及び異な る濃度の阻害化合物とインキュベートした。１６−２４時間後、［２Ｈ］チミジ ン（ＮＥＮ、　Ｂｏｓ　ｔ　ｏｎ、　＆ｔＡ）を０．５　ｔｔＣｉ／ｍｌで２時 間加えた。ＴＣＡ沈澱しつる物質をシンチレーション計数（Ｃ）で定量した。本 アッセイの結果を下記表１１に纏める。

下記で用いられる“ＩＣ，。”は、阻害剤を含まない媒体と比較して［’Ｈ］チ ミジンの取り込みが半減する阻害剤濃度（ｎｋｌ）を意味する。ＦＣＳが広範囲 の成長因子を含むので、ＰＤＧＦのＩＣ，。値は、ＦＣＳより低く、化合物が一 般の阻害剤として作用しないことを示している。

表１］ 実施例　ｉｃ、、−ＰＤＧＦ　Ｉｃ１．−ＦＣＳ２　３０±１７　１００ ３　１４±１０２７±５％　＠ｌμ入１４　９±２５００ ６　１７　１５％　０１８Ｍ これらの結果は、本発明の化合物が広範囲の成長因子レセプターを阻害しないこ とを示している。

細胞培養 内在性ＥＧＦレセプターを含まないＮＩＨ３Ｔ３細胞（クローン２．２）（Ｃ， Ｆｒｙｌ　ｉｎｇ、　ＮＣ！、　Ｎ［Ｈ）に野生型ＥＧＦレセプターのｃＤＮＡ 構築物又はチロシンキナーゼ活性のない変異ＥＧＦレセプター（ＡＴＰ結合部位 のＬｙｓ７２１がＡｌａ残基で各々置き換えられている）を移入して、ＨＥＲｌ 　４及びに７２１Ａ（＝ＤＫ）と称する細胞を調製した。全ての細胞をｌθ％子 ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ、　Ｌｏｇａｎ。

Ｕｔａｈ）を含むＤＭＥＭ中で増殖した。

上記実験方法で得られた結果は、本発明の範囲内の化合物の有効なプロティンチ ロシンキナーゼ阻害特性を証明している。

比較例 下記比較例は、従来技術の化合物と比較した本発明の化合物の改善された細胞増 殖阻害を具体的に説明するものである。比較例Ｃ−１においては、従来技術の化 合物のＲ１がシアノであり、Ｒ７がピリジルであり、Ｒｓ及びＲ１がクロロであ る標品が記載される。実施例ＩＡ及び２の化合物の阻害活性が、比較例Ｃ−１で 調製される化合物の阻害活性と比較される。

１５０ｍ１の無水エタノール中２．４−ジクロロベンズアルデヒド（５，０ｇ、 ２９ミリモル）と３−ピリジルアセトニトリル（３，０５ｍｌ、　２９ミリモル ）の攪拌溶液に３．９５ｇのＫｓＣＯｚを加えた。約１５分間攪拌した後、反応 混合液から白色固形物か沈澱した。反応混合液を一晩攪拌し、ろ過した。フィル ターケークを無水エタノールで洗浄し、ＣＨｔ　Ｃ１ｔに溶解した。ＣＨｔ　Ｃ １ｔ溶液をろ過し、減圧下で濃縮した。得られた白色固形物を３：２のヘキサン ／酢酸エチルで再結晶して６．０ｇ（７６％）の標記化合物を得た。

実施例ＩＡ及び２の化合物によるＥＧＦＲ自己リン酸化の阻害を実施例Ｃ−１の 従来技術の化合物と比較した。前記と同様の手順を用いて、ＥＧＦＲ自己ＩＪ： ／酸化阻害を評価した。結果を丁記表ＩＩＩに示す。

これらの結果は、実施例ＩＡ及び２の化合物がＣ−１より強力なＥＧＦレセプタ ーキナーゼ阻害剤であることを示している。

国際調査報告 Ｉｎ＋ｖｌＩＩＩＩ１１１１Ｉａｌ　Ａｐｐｌｉｓｍａｅ　Ｈａ、　ＰＣＴＲＪ ａｍＮＲｒＴ・―・ＰＣＴ１０５９１１０７６９８ フロントページの続き （７２）発明者　パージング　ポール　イーアメリカ合衆国　ペンシルバニア州 １９４０６　キング　オブ　プラッシャー　サウス　へンダーソン　ロード　エ イ５０７−（７２）発明者　レヴイツキ　アレクサンダーイスラエル　９１９９ ９　エルサレム　パルマック　ストリート　３６ （７２）発明者　ギロン　ハイム イスラエル　９１９９９　エルサレム　ゲルバー　ストリート　１８ （７２）発明者　ガジット　アヴイヴ イスラエル　９１９９９　エルサレム　ノフハリム　ストリート　１４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．細胞増殖障害に罹患している患者において細胞増殖を阻害する方法であって 、下記式で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩を薬学的に許容しうる 担体と混合した状態で含む医薬組成物の薬学的に有効な量を患者に投与すること を含む方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒはアルキル、−Ｈ又はアラルキルであり；Ｒ２は１又は２個のＮ、Ｏ又 はＳ原子もしくは１又は２個のＮ−オキシド基を含む約５〜約７員環の単環アリ ール又は１〜約４個のＮ、Ｏ又はＳ原子もしくは１〜約４個のＮ−オキシド基を 含む約８〜約１２員環の二環アリールであり、該環は１〜約３個のＲ９基で任意 に置換され、該Ｒ９置換基は該環に共通の結合点を有しない； Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ２は各々独立してアルキル、−Ｈ、−ＣＮ、ハロ 、−ＯＲ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲＲ又はそのＮ−オキシド、−ＮＯ２、 −ＮＨＣＯＣＨ３、−ＳＲ、−ＣＦ３、−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯ（Ｃ Ｈ２）２ＣＯＯＨ、複素環又はヘテロアリールであり；各Ｒ９は独立してアルキ ル、−ＣＮ、ハロ、−ＯＲ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲＲ又はそのＮ−オキ シド、、−ＮＯ２、−ＮＨＣＯＣＨ３、−ＳＲ、−ＣＦ３、−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯ Ｈ、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、複素環、ヘテロアリール又は ▲数式、化学式、表等があります▼ である。 ２．下記式で表される化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒはアルキル、−Ｈ又はアラルキルであり；Ｒ２は１又は２個のＮ、Ｏ又 はＳ原子を含む約５〜約７員環の単環アリール又は１〜約４個のＮ、Ｏ又はＳ原 子を含む約８〜約１２員環の二環アリールであり、該環は１〜約３個のＲ６基で 任意に置換され、該Ｒ９置換基は共通の結合点を有しない； Ｒ４及びＲ６は各々独立して約３〜約６個の炭素原子を有する分枝鎖アルキル、 −ＣＮ、ハロ、−ＳＲ、−ＣＦ３、複素環又はヘテロアリールであり；Ｒ５、Ｒ ７及びＲ■は各々独立してアルキル、−Ｈ、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＣＨＯ、−ＣＯ ＯＨ、−ＮＨＣＯＣＨ３、−ＳＲ、−ＣＦ３、−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ、−ＮＨＣ Ｏ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、複素環又はヘテロアリールであり；各Ｒ９は独立して アルキル、−ＣＮ、ハロ、−ＯＲ、−ＣＨＯ、−ＮＲＲ、−ＮＯ２、−ＮＨＣＯ ＣＨ２、−ＳＲ、−ＣＦ２、−ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２Ｃ ＯＯＨ、複素環、ヘテロアリール又は▲数式、化学式、表等があります▼ である。 ３．細胞増殖障害に罹患している患者において細胞増殖を阻害する医薬組成物で あって、請求項２記載の化合物の薬学的に有効な量を薬学的に許容しうる担体と 混合した状態で含む医薬組成物。 ４．Ｒ２が１又は２個のＮ、Ｏ又はＳ原子を含む６員環の単環アリール又は１〜 ４個のＮ、Ｏ又はＳ原子を含む９又は１０員環の二環アリールであり、該環は１ 〜約３個のＲ９基で任意に置換され、該Ｒ９置換基は該環に共通の結合点を有し ない； Ｒ４及びＲ６が各々独立して約３〜約４個の炭素原子を有する分枝鎖低級アルキ ル又はハロであり； Ｒ５、Ｒ７及びＲ９が各々独立して−Ｈ、約２〜約４個の炭素原子を有する低級 アルキル又はハロであり； 各Ｒ９が独立して低級アルキル、ハロ、低級アルコキシ、−ＯＨ又は▲数式、化 学式、表等があります▼ である請求項２記載の化合物。 ５．下記式で表される請求項４記載の化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ６．Ｒ４及びＲ６が各々独立してハロ、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブ チル又はｔ−ブチルであり； Ｒ５、Ｒ７及びＲ６が各々独立して−Ｈ、ハロ、エチル、ｎ−プロピル、イソプ ロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル又はｔ−ブチルであり；Ｒ９ 置換基がない請求項５記載の化合物。 ７，２−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（３−ピリジル）−２−プロペン ニトリルである請求項６記載の化合物。 ８．細胞増殖障害に罹患している患者において細胞増殖を阻害する方法であって 、請求項２記載の化合物の薬学的に有効な量を該患者に投与することを含む方法 。 ９．乾癬に罹患している患者においてかかる疾患の治療方法であって、請求項３ 記載の組成物を該患者に投与することを含む方法。 １０．アテローム性動脈硬化症に罹患している患者においてかかる疾患の治療方 法であって、請求項３記載の組成物を該患者に投与することを含む方法。