JPH06507644A - 抗癌剤としての２’−フルオロ−２−置換アデニニルアラビノシド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

抗癌剤としての２°−フルオロ−２−置換アデニニルアラビノノド本発明は、１ ９８９年５月２３日に出願された米国特許出願第０７／３５５゜３５８号の一部 継続出願である。 本発明の発見を導いた研究は一部、米国の保険福祉省の基金により資金が提供さ れた。したがって、米国政府は、３７ＵＳＣ２００以下の下に、本発明に対し法 律上の一定の権限をもつ。 有効な抗癌剤の開発は多くの理由により複雑な問題であるが、第１には、動物ま たはヒト由来であれ、正常および悪性腫瘍細胞の間に識別し得、利用できる生化 学的差異がないことである。 新規の抗癌剤を開発するために最も単純で最も利用できる方法は、実験上の探求 Ｉこよるものであり、これは有用な抗腫瘍抗生物質を発見するのに最も成功した 。 合成した化合物の間での先導化合物の研究は、少し異なり、厳密にランダムなス クリーニングから臨床的に有用な試薬はほとんど得られなかった。有機化学の事 情および多くの場合、どのような理由についても合成学者が興味を示したものが 反映しているため、実際は厳密にランダムな研究ではない。実際、臨床活性をも つことが発見された多くの合成物が、ある理由のために、スクリーニングされた 。 主な例は、最初の臨床的に有用な試薬、ニトロジエン・マスタードであり、それ は、化学戦争計画において発見された血液因子への効果のために試験された。発 見の方法に関係なく、抗癌剤は５つの広いグループに分は得る。 Ａ　抗代謝物 グルタミン・アゴニスト ／ヒト０葉酸レダクターゼ阻害剤 プリンおよびピリミジン同族体 ヌク１ノオノドニリン酸阻害剤 Ｂ　核酸複合体 アクナノマイノン類 アントラシフリン類 プレオマイシン類 ネオカルジノスタチン アントラマイシン類 Ｃ０化学的反応化合物 スルホネート類 トリアゼン類 ニトロソウレア類 プロカルバジン類 ノスーブラチナム Ｄ　有糸分裂阻害剤 ビンカ・アルカロイド ポドフィリウム誘導体 プロゲストジエン類 グルココルチコイド類 種々の合成 これらの分類から、有用性が証明された抗癌剤は細胞分裂の１工程または他の工 程を妨げ、癌細胞は分裂するかまたは結局は死滅するから、それらは腫瘍細胞に 対しである程度の特異性をもった細胞毒性剤であることが明らかになった。すな わち、新規な先導化合物の追究は、１つまたは他の細胞分裂型を妨害する新規な 構造形に焦点をしぼることが論理的であるように思える。これらで最も近付きや すい物は、酵素阻害剤である。プリンおよびピリミジンヌクレオチドの新規合成 において、その相互変換において、核酸への重合化において、およびいわゆるサ ルベージ経路で少なくとも８５種の酵素反応が含まれる。これらの８５種の酵素 の内、約１４種がそれらの代謝同族体または同化物により阻害されることが知ら れている。これらの阻害は、これらの化合物の抗癌活性に相当するものか、少な くとも一因となると考えられる。 このような２種の化合物は、式 ［式中、Ｂはアデニニ／またはシトノンを示す〕で示される、アラピアノフラノ ノルヌクレオシド類、９−β−Ｄ−アラビノフラノノルアデニンおよび１−β− Ｄ−アラビノフラノシルントンンであり、既知の抗ウィルス（Ｂ−アデニン）お よび抗癌（Ｂ−シトノン）活性をもつ。加えて、水酸基以外で２′−置換された 他のアラビノフラノシルヌクレオシド類はまた利用可能な生物学的作用をもつ。 これらのヌクレオシド類のすべては、活性化するためには反応（リン酸化）を必 要とし、一般的に、これは対応するリボフラノシルヌクレオノド類より種々の酵 素によって行われる。 加えて、多くの２′−置換−９−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２−ノ＼ロアデ ニン頚［ジャーナル・オブ・メゾインナル・ケミストリー、３１巻４０５頁（１ ９８８）およびツヤ−ナル・オブ・メゾインナル・ケミストリー、２９巻２３８ ９頁（１９８６）参昭］はまたこの一般的な設計に沿って開発された。９−β− り一アラヒノフラノシルー２−フルオロアデニン−リン酸は、例えば、慢性リン パ腺白血病に選択的な薬である。および２−クロロ−２′−デオキシアデノシン はＴ−細胞腫瘍に対する第１相試験、および既知の処置では難治性であるＢ−細 胞由来の慢性リンパ腺白血病およびヘリ−細胞白血病に対する第２相試験で、幾 つかの有望性を示した。しかしながら、よりよいおよびより有効な抗癌化合物の 追及は続いている。 すなわち、本発明に関しては、これらの先行化合物のプリン環の２−ハロ置換の 導入が、特にアデノシンデアミナーゼの基質として働（能力を減少させることに よって、アデニンヌクレオノドの代謝を著しく変える。アラビノ配置におけるＣ −２゛において、フッ素を置換することがこれらの誘導体をリン酸化分解に高度 に抵抗させる。同じ分子内のこれらの２つの変化の組み合わせは、最終化合物の 生物学的および抗癌活性を促進することが判明した。 本発明は一般式 ［式中、Ｒは同一または異なって水素または、アルカノイル保護基または封鎖基 のようなアシル保護基、例えばベンゾイル、およびＺはＦ、ＣＩおよびＢｒの群 からなる群から選ばれるハロゲンである。］で示される新規ヌクレオチド化合物 の一部、およびそれらの生理学的に許容可能な塩に関する。本発明の一つの態様 として、Ｒがアシルの場合、ヌクレオシド化合物は化合物のイン・ビボでの寿命 を延長するプロドラッグとして働く。 さらに詳細には、本発明の多くの好ましい化合物は式：［式中、ＹＩｉＦＳＣｌ 、またはＢｒを意味する］で示される化合物またはそれらの薬理学的に許容可能 な塩である。 本発明のこのおよび他の態様は、本発明の範囲を限定する意図はなく、明確にす る目的で提供する下記の討論および記載で明確になるであろう。 最も広い記載の中で、２“−置換プリンアラビノヌクレオシド類は、ジャーナル ・オブ・〆ディシナル・ケミストリー、３１巻４０５頁（１９８８）記載の方法 にしたがって、２−ハロアデノシンからそれらの３゛、５°−０−（テトライソ プロピルンノルオギザノ−２’−０−１−リフレート誘導体を経由して調製する 。この先の研究で２°−フルオロアラビ、ノヌクレオシド類を合理的な収率で製 造することに失敗したため、これらの化合物は適当にブロックした２゛−フルオ ロ糖（化合物］）を２．６−ノクロロプリンと反応させ、続いてプリンの修飾に より調製しなければならなかった［ツヤ−ナル・オブ・メゾイノナル・ケミスト リー、２９巻２３８９頁参明（１９８６）］。 同一の一連の操作はまた２−ブロモアデニンヌクＬノオソドの調製のための２゜ ６−ジブロモプリン（化合物２）にもまた適用した。ブロックした２′−フルオ ロ糖は、４Ａモレキユラーノーブの存在下、１．２−ジクロロエタン還流中で、 ２゜６−ジブロモプリンと縮合させた。化合物３ａのアノマー型および置換位置 は、’ＨＮＭＲにより化合物３Ｃと比較して決定した。Ｌり、ノール性アンモニ ア中での化合物３ａおよび３Ｃの活性化および脱保護は、目的生成物および５° −ベンゾイル保護化合物の混合物とし、て生成した。この残った保護基は、所望 により１７ｉ０ＨのＭ　ｅ　ＣＮ−Ｈ、Ｏ溶液て処理することにより除去し得、 化合物３ｂまたは３ｄの何れかを得る。 第３級−イチルｎ　ト１）　ｌ−の６０％フッ化水素／ピリジン溶液、−２０℃ での化合物３ｅの非水性ノアゾ什反応は、２−フルオロ化合物３ｆを生成する。 化合物３ｆの脱ア／ノを化はＬｉＯＨのＭｅＣＮ−＝Ｈ２０溶液中で行い、いか なる副産物もブよく、化合物３ｇを合理的な収率で得た。 ノブオキ２・化合物４ｂを調製するｊＳめに、化合物３ｒの３″−アセチルは最 初にＮ　ａ　ＨＣＯ３のＭｅＯＴ（溶液で選択的に除去した。得られた生成物、 化合物３ｈは千４−カルボニルンイミダゾールて処理し、続いてトリーｎ−ブチ リンヒドライトて還虻、（−１化合物４ａを得た。ついで、化合物４ａの５°− ベンゾイル保護基Ｉ′１ｉｌ−，ｉ　（−）　Ｈて除去し、化合物４ｂを製造し た、。 本発明の化Ｎ物がそれにより製造し７得る方法を充分に述べる明確な目的で、以 下に実施例を提供する。しかしながら、これらの実施例は、いかなる方法も限定 上ず、修飾および添加は他の紅路を提供

【２．得、それは所望の化合物の合成に ついて、本発明の範囲内に含まれると考えられる。 実施例Ｉ ２．６−；イワモー９−＜　３−０−アセチル−５−０−ベンジル−２−チオキ シ−２−フルオローβ−Ｄ−アラビノフラノｒンル）−９Ｈ−プリン（化合物３ ａ）４００　Ｑｌｌ−の乾燥／クロロエタン中の３−アセチル−５−ベンゾイル −２−デオキ、・−２−フルオローアラビノフラノソルブロミド（３３２ミリモ ル）溶液を、１０分間４Ａモレキユラーシーブと撹拌した後２，６−ジブロモプ リン（９，３ｇ。 ３３　、５　ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を高架撹拌器で強く撹拌して、予め加 熱した１００℃の油液槽に入れた。加熱を、全てのブロモ糖を消費するまで、３ ２時間続けた。（検出のために４−（４−ニトロベンジル）ピリジンスプレーを 使って、ＴＬＣ２１シクロヘキサン−酢酸エチルを行う。）混合物を室温まで冷 却１ノだ後、セライトを通して濾過した。固形物をジクロロエタンで洗浄し、結 合した濾過物を乾固するまで真空で蒸発した。残留物（１６，５ｇ）は、２１の シクロヘギサ二ノー酢酸エチルを溶離溶媒として使った１５０ｇのシリカゲル（ ２３０−４００メソ／ユ）フラッシュクロマトグラフイーによって分離した３種 のヌクＬ／オツド類の混合物であった。純粋な留分を合わせることによって、目 的の化合物を、クロマ１−グラフィーでは均質であるが、結晶化し、ないガラス ３．６４ｇ（１９，７％）として得た。不純な留分について成された第２のカラ ムＣ１総収１１３１．６９（に対して２．２　］、　ｇ（１１，９％）のより純 粋な生成物を得た。 実施例■ ２−ブロモ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル ）−９Ｈ−プリン−６−アミン（化合物３ｂ）４００■Ｌの実施例■の化合物（ ５，８４ｇ、１０．５ミリモル）のエタノール性アンモニア（０℃で飽和された ）溶液をガラスで内張すされたステンレス・スチールのボンベ中に封入し、室温 に３日装置いた。溶液を蒸発乾固【７、エタノールでアンモニアを除去するまで 蒸発させた。目的の物質および５゛−ベンノイル化合物を含む残留物を４４０■ Ｌのアセトコトリルおよびｉ２ｏｍｔ、の水の中に溶解した、。 水酸化リチウム−水和物（８８１ｍｇ、２１ミリモル）を加え、溶液を室温で１ ６時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー（５：　ＩＣＨＣｌ５　ＭｅＯＨ）が 反応完結を示した。冷却した溶液を慎重に氷酢酸で中和し、蒸発乾固した。白色 固体残留物を水から再結晶させた。生成物を真空で乾燥し室温で１００℃で２時 間乾燥した。２．１．５　ｇ（５９，２％）。Ｍｐ２０９−２１０℃。 実施例ｍ ２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル ）−９Ｈ−プリン−６−アミン（化合物３ｄ）３Ｃ［ジャーナル・オブ・メゾイ ノナル・ケミストリー、２９巻、２３８９頁（１９８６）参照］　（５，１ｇ、 　］、　０．９ｍ＋５ｏｌ）の無水アンモニア（１００糺）で飽和された（０℃ ）エタノール溶液を、ガラス張りのステンレス・スチールのボンベ中に入れ、室 温に３日装置いた。薄層クロマトグラフィー（２：１シクロヘキサン−酢酸エチ ルおよび５　：　ＩＣＨＣｌ５　ＭｅＯＨ）は出発物質が無いことを示した。 しかしながら、２つの主な生成物が存在した。即ち、目的化合物およびそれの５ ゛−ベンゾイル類似物である。溶液を蒸発乾固し、アセトニトリルで共蒸発させ た。残留物をアセトニトリル（１００ａＬ）中に溶解し、水（６９ｍＬ）で希釈 し水酸化リチウム−水和物（９１５ｍｇ、　２１．８ｍｍｏ１．）を加えた。溶 液を室温で３時間撹拌したが、そのとき薄層り【コマトグラフィ・（５：　１． ＣＨＣＩｓ　ＭｅＯＨ）は反応完結を示した。溶液を冷却し、酢酸で中和し、蒸 発乾固した。水からの３回の再結晶で純粋な化合物を得た。１．４　ｇ（４２， ３％）：Ｍｐ２２５−２２６℃。 実施例■ ２−フルオロ−９−（３−０−アセナル−５−〇−ベンゾイルー２−デオキシー β−アラビノフラノシル）−９８−プリン−６−アミン（化合物３ｆ）ノアミノ 化合物３ｅ［ツヤ−ナル・オブ・メゾイノナル・ケミストリー、２９巻、２３８ ９頁（１９８６）参照］　（７００ｍｇ、　１．６３ｍｍｏｌ）を−２５℃で３ ．２のＨＦ−ビリ、〉ン（１５ｍＬ）に溶解し、第３級ブチルニトリル（２７１ μｍ、２．２８ｍｍｏｌ）て処理した。−２０℃で１時間後に、反応が不完全で あることが薄層クロマトグラフィーによって示さｔｌた。さらに第３級ブチル− トリル（７０μＬ　０゜５９ｍｍｏｌ）を加え、反応を一２０℃でさらに２時間 続けた。冷反応溶液を氷を含む飽和Ｎ；１Ｈｃｏ、水（ＩＬ）に滴下して加えた 。発泡混合物を２０分間強く撹拌し、−）ぎ＋′、ＣＨＣｈ（３００ａＬ、）で 希釈した。層を分離し、水性層をより多くのＣＩＣｌ３（２Ｘ１７５１１１１、 ）℃抽ｌルた。有機抽出物を合わせて水（３Ｘ　１７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し 、（Ｍ　ｇ　Ｓ　ｏｌ：＋、、蒸発乾固した。ＣＨＣｌ、中の残留物をＣＨＣｌ 、を溶離剤としてシリカゲル（２３０−４００メツシユ）を含むフラッシュカラ ムにかけた。両分を結合して本質的に純粋な３ｆ、５００＋＊ｇ（７０％）を得 た。ＥｔＯＨからの小サンプルの結晶化によって、純粋な（１ｆ）を得た。Ｍｐ ２０８−２０９℃。 実施例■ ２−フルオロ−９−（２−チオキシ−２−フルオローβ−Ｄ−アラビノフラノシ ル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（化合物３ｇ）１　：　ＩＭｅＣＮ　ＨｔＯ （４０ｍＬ）中の実施例■の生成物の懸濁液（４３０ｍｇ、０９９ｍｍｏ１）４ 固形水酸化リチウム−水和物（１２５■ｇ、２．９７關ｏ１）で−挙に処理した 。室温で２０分間撹拌した後、反応物は透明な溶液になった。３時間で、薄層ク ロマトグラフィーはアリコートが脱保護が完結したことを示した。米酢＃（５７ μｍ）を加え、溶液を白色の固体が沈澱するまで蒸発させた。冷却した後、固体 を集め、冷水で洗浄し、真空中で室温で乾燥し、粗固体（２５２ｍｇ）を得た。 この固体を４０ｍＬの水に溶解し、水平衡５Ｍ−４バイオ・ビーズカラム（１， ５Ｘ３２ｃ＋ｎ）に適用した。水での最初の溶離の後、生成物を階段勾配　水中 の５％〉２０％のＥｔＯＨで溶離した。結合し、蒸発したカラム留分からの残留 物を２５ｍ１、の沸騰水から次処理後結晶化し、真空中で５６℃で１６時間乾燥 し、純粋な生成物１７８ｍｇ（５９％）を得た。Ｍｐ２０７−２０９℃。 実施例■ ２−フルオロ−Ｌ−（５−０−ベンゾイル−２−チオキシ−２−フルオローβ− Ｄ−アラビノフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミン（化合物３ｈ）ＭｅＯＨ （２５ｍＬ）中の実施例■の生成物（３１２ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の懸濁液 を固形ＮａＨＣＯ３（］、　８１．ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）で処理した。室温 で２．５時間撹拌した後、反応を氷酢酸（１７０μｍ）加えて停止し、蒸発乾固 した。熱ＥｔＯＨ中の残渣は２つの７リカゲル厚プレート（アナルテック、ＧＦ 、２００μ園）に入れ、次に、９：Ｉ　ＣＨＣｌ５　ＭｅＯＨで展開させた。生 成物は熱ＥｔＯＨで抽出し、蒸発乾固し、実質的に純粋な生成物を得た：　２０ ８＋ｎｇ（７４％）。 実施例■ ２−フルオロ−９−（５−０−ベンゾイル−２，３−ジデオキシ−２−フルオロ −β−丁）−アラビノフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミン（化合物４ａ） 実施例■に従って製造し、た化合物１９１ｍｇ（０，４９＋ｕ＋ｏｌ）を乾燥ア セトニトリル（２０ｍｌ、）ＬＸ：　４５℃で溶解し、次に１．］］゛−ヂオカ ルボニルンイミダゾール３９ｍＢ、１　、７ｍｍｏｌ）で処理し、た。得られた 黄濁色溶液をＮ、下４５℃で２４時間撹拌し２、その時の薄層り゛ロマトゲラー フイー分析（ＥｔＯＡｅ）では、１種の主要生成物が示された。反応物は蒸発乾 固（ッ、残渣を乾燥トルエン（１５ｍＬ）に溶解した。 Ａ　Ｉ　ＢＮ（１３，７ｍｇ、０　、０８　ｍｍｏｌ）およびトリーローブチリ ンハイドライド（１゜３ｍ１１．４　、　”／　ｍｍｏｉ）ｔユよる処理により 、黄色混合物を製造し、それを直接１２０℃の浴に１、ｉｔ′１′：。澄［１， ｔｌな溶液が還流５分後観察され、１時間後、薄層クロマトグラフィーに、十り Ｎに、が重子【２．たこきが示された。溶媒を、次に、真空で除去し、得し・れ た　１−＋７ブを−Ｋｉ＝ｔＯＨと共蒸発した。この残渣の石油エーテル（５０ ｍＬ）での粉を化に、より白色固体を製造（２５、それを回収し、新鮮な溶媒で 洗浄し、２１４ｍｇの粗固体をｉ！１７−０このｊ！！ＥｔＯＨ中の物質を２個 のアナルテック（ＧＦ、２（１（１０ｔｉｍ’）層ブＬ／−ｌ・ｆコ入れた。９ 　：　Ｉ　ＣＨＣｉｓ　ｋｉｅＯＨの３回の展開のｉ（、佳代物のバニド苓沸騰 Ｅ　１．　（丹］で抽出しまた。合わせた抽出物の蒸発残渣を沸騰ＥｔＯＨから 再結晶し１、充分純粋な生成物１６０ｍｇ（８７％）を得た；Ｍｐ２１５−２１ ７℃６゜ さならる精製は行わずに、この物質を実施例■の脱保護基の工程に使用した。 実施例■ ２−フルオロ−９−（２，３−ノデオキシー２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフ ：）５ノンル）−９８−プリン−６−アミン（化合物４ｂ）３　：　］　］Ｍｅ ＣＮ−−ＨｔＯ中実施例の化り物（１３５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｉ）の懸濁ｉＦ ｊ’ｚ、室温て固体Ｌ１０Ｈ−Ｈ２０（３８ｆｆ１ｇ１０９ＩｌｌＩＩｏｌ）で 、−挙に処理した。撹拌混合物は１７２時間後に透明な溶液になった。７時間後 に、アリコートのＴＬＣ（５：　Ｉ　ＣＨＣＩ３　ＭｅＯＨ）試験により、実施 例■の化合物がないことが示された。氷酢酸（３５μｌ）を添加し、反応物を蒸 発乾固した。熱アセトニトリル中のこの残渣を１個のシリカゲル厚プレート（ア ナルテック、ＧＦ、２０００μ鳳）にかけた。プレートを５：Ｉ　ＣＨＣＩｓ− ＭｅＯＨで３回展開した後、精製物のバンドを沸騰ＭｅＣＮで抽出した。この抽 出物の蒸発により、僅かに不純な物質が得られ、それを上記の３個の調整済プレ ート（アナルテック、ＧＦ、１０００μｍ）でクロマトグラフィーを行った。得 られた残渣をＥ　ｔ　ＯＨ（０、５１ｆ−）を含む沸騰Ｈ２０（２５＋１１Ｌ） から結晶化した。冷却後白色結晶を回収し、冷Ｈ，Ｏで洗浄し１、真空で５０℃ で１６時間乾燥し、純粋な生成物７１ｍｇ（７３％）を得た１Ｍｐ２４９−２５ ０℃。 既に報告されている２°−置換−９−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２−ハロア デニンと対照的に、２°−フルオロ化合物は、３種のヒト細胞系、Ｈ，Ｅｐ、− ２、ＣＣＲＦ−ＣＥＭおよびに５６２およびマウス白血病細胞系、Ｉ、１２１０ に対してかなりの細胞毒性であった１、事実、それらは、対応する９−β−Ｄ− アラビノフラノシルー２−ハロアデニンよりも非常に細胞毒性であり、２′−デ オキシ−２−ハロアデノンンに非常によく似ている（表Ｉ参照）、。 明らかに、抗癌剤として有用であるには、本発明のヌクレオシドが、イン・ビト ロでの細胞死滅能力を示さなければならない。表１の結果は、非処置対照の細胞 増稙を５０％阻害するのに要する濃度を示し、ており、これらのヌクレオシドが 相応の濃度で細胞を死滅させ得ることを示している。細胞系の１種（Ｌ、１２１ ０）は、マウス白血病細胞であるのに対し、他の３種は、ヒト腫瘍である。長年 の実験に基づき、我々は、該化合物は、肝臓による活性化を必要とせず、約１１ −１ＯＩＩまたはそれ以下のＩＣ９゜を持ち、イン・ビボでの動物モデルおよび ヒトにおいて有用な活性を示すはずであると考える。今日、多くの人々がヒト細 胞系に対する毒性の重要性を強調している。 ２−ハロアデニンヌクレオシドの細胞毒性［Ｉ　Ｃ，・（ｊＭ）　として］Ｘ＝ ＯＨ９３０，４０，１５ Ｘ＝ＨＯ，２０，９０，２ Ｘ＝Ｆ　Ｏ，３４０，３８０，１４０，３Ｙ＝Ｃ１の時 Ｘ＝ＯＨ３＜３　１０ Ｘ＝ＨＯ，０３０，０７０，００３ Ｘ＝Ｆ　Ｏ，０１２０，２３０，０５０，００３Ｙ＝Ｂｒの時 Ｘ＝ＯＨ４３ Ｘ＝ＨＯ，０２０，９０，０２ Ｘ＝Ｆ　Ｏ，２２０，２６０，０２０，０５表１のデータ（μＭ量で与える）は 、明らかに本発明の化合物の腫瘍細胞死滅能力を立証するものである。 続いて、これらの化合物の加リン酸分解をイー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）プリンヌ クレオシドホスホリラーゼにより比較した。アラビノおよび２″−デオキシリボ ヌクレオシドはこの酵素で素早く分解されるが、２゛位でＣＩ、Ｎ、、またはＮ Ｈ２で置換されたアラビノヌクレオシドは殆ど全く分解されない。２゛−フルオ ロ化合物は、分解に対し抵抗性が低く、アラビノおよび２°−デオキシヌクレオ シドのおおよそ３分の１の速度で分解される。分解速度におけるこの減少は、は 乳類細胞のリン酸化はかなり速いので、医薬的目的の場合、許容され得るもので ある。 更に具体的には、０．５ｍＭヌクレオシド基質、５０ｍＭ、ｐＨ８，０リン酸緩 衝液およびプリンヌクレオシドホスホリラーゼから成る酵素反応混合物を最終容 量１．０ｍｌで、３０分、６０分、１２０分、１８０分および２４０分間インキ ュベートさせ、未反応ヌクレオシドおよび基質の量をＨＰＬＣで検定した。実験 の結果を表にし、以下の表ＩＩに示す。 表ＩＩ ヌクレオシドの加リン酸分解 Ｄ−アラヒノフラノ／ルアデニン　９９２−クロロ−２゛−デオキシアデノシン 　〉９９２−フルオロ−２゛−デオキシアデノシン　〉９９我々の研究の最近の 報告Ｃキャンサー・リサーチ５１：２３８６０９９１年、３月１日）、全体的に この明細書に組み込んでいる］では、本発明の化合物３ｄは、リボヌクレオチド レダクターゼ活性の阻害およびＤＮＡポリメラークーによるＤＮＡＭの伸長の阻 害によって、ＤＮＡ合成を阻害すると指摘している。化合物３ｄによるリボヌク レオチドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼα酵素のこれらの阻害は、癌性 に５６２細胞の発生には重要であった。この知見は、９−β−Ｄ−アラビノフラ ノンルー２−フルオロアデニンおよび２−クロロ−２゛−デオキシアデノシンの 観察結果に類似しているが、これらのヌクレオシド類似体の５゛−トリホスフェ ートによるこれらの酵素の阻害度は、かなり異なっている。２−クロロ−９−（ ２−チオキシ−２−フルオローβ−Ｄ−アラビノフラノシル）−アデニン−５゛ −トリホスフェートによるリボヌクレオシドレダクターゼの阻害は、２−クロロ −２”−チオキシアデノノン−５°−トリホスフエートで見られるものと同様で あり、２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ〜β−Ｄ−アラピノフラ ノシル）−アデニン−５゛−トリホスフェートによるＤＮＡポリメラーゼの阻害 は、９−β−Ｄ−アラビノフラノンルー２−フルオロアデニン−５゛−トリホス フェートで見られるものと同様である。反対に、９−β〜Ｄ−アラビノフラノン ルー２−フルオロアデニン−５゛−トリホスフェートは、２−クロロ−２°−デ オキシアデノンンー５°−トリホスフェートまたは２−クロロ−９−（２−チオ キシ−２−フルオローβ−Ｄ−アラビノフラノシル）−アデニン−５′−トリホ スフェートのいずれよりも強力なりホヌクレオチドレダクターゼの阻害剤ではな く、また２′−デオキシアデノシンヌクレオチド類似体の全てがＤＮＡポリメラ ークーによる２゛−チオキシアデノノン−５゛−トリホスフエートのＤＮＡへの 取込みを阻害し、ポリメラーゼに対し、より有効な基質であったが、ＤＮＡポリ メラークーによる２−クロロ−２°−デオキシアデノシン−５°−モノホスフエ ートのＤＮＡへの取込みは、９−β−Ｄ−アラヒノフラノシルー２−フルオロア デニン−５°−モノホスフェートまたは２−クロロ−９−（２−デオキシ−２− フルオローβ−Ｄ−アラヒ゛ノフラノノル）−アデニン−５′−モノホスフェー トのいずれかの取込みで見られる程度のＤＮＡ鎮の更なる伸長を阻害しなかった 。 これらの結果は、２−クロロ−９−（２−チオキシ−２−フルオローβ−Ｄ−ア ラヒノフ→ノノル）−アデニン（化合物３ｄ）が９−β−Ｄ−アラビノフラノン ルー２−フルオロアデニンおよび２−クロロ−２゛−デオキシアデノシンの両方 の特性を１個の化合物に取り込んでいることを指示していた。更に、細胞におい てこれらのヌクレオシド類似体によるＤＮＡポリメラークーの阻害は、［２’− デオキシアデノシン−５°−トリホスフェ−日に対する［類似ヌクレオシドトリ ホスフェート］の比の関数である。９−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２−フル オロアデニン−５°−トリホスフェートは、リボヌクレオチドレダクターゼの阻 害を２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノ シル）アデニン５′トリホスフエートで要する濃度に比べて１０倍の高濃度で阻 害するため、２−クロロ−９−（２〜デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビ ノフラノシル）−アデニン処置細胞では９−β−Ｄ−アラビノフラノシルー２＝ フルオロアデニンを等モル濃度処置した細胞より、トリホスフェートに均等に転 化すると仮定すれば、２°−デオキシアデノシン−５°−トリホスフェートブー ルは低く、ＤＮＡポリメラークーの阻害は大きいはずである。これらの代謝的特 徴は、本発明の化合物３ｄ［２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ− β−Ｄ−アラビノフラノシル）−アデニン］かに５６２細胞生長を強力に阻害す るのに貢献し得る。加えて、この化合物では、そのより大きな溶解性と高い有効 性のため、９−β−Ｄ−アラビノフラノンルー２−フルオロアデニンの投与に伴 う溶解性の問題も起こらないはずである。 ２°−フッ素原子が連鎖伸長を中断させる理由は、２°−炭素が反応に含まれて おらずフッ素が水素原子より少し大きい原子半径を有するので、明らかでない。 立体障害はアラビノフラノシルヌクレオチドの場合に存在すると考えられるより も少ないと予想される。フッ素の電子吸引性が３′−ヒドロキシの反応性及び／ 又はＤＮＡ鎖の三次元構造に影響し、それによりポリメラーゼによって２°−フ ルオロアデニンドで終了しているＤＮＡ鎖の伸長が阻害される可能性がある。 マウスのＰ３８８白血病細胞についての研究（表■参照）は、本発明の最も有効 な化合物が式３ｄの化合物、即ち２−クロロ−２°−フルオロ置換ヌクレオチド であることを示す。このことは、２−フルオロアデニンに比べ、より低毒性の開 裂生成物、２−クロロアデニンと結合し、本化合物を本発明の好ましい化合物と する。以下の表■はワウド等のプロトコール（キャンサー・リサーチ５０、３２ ３２（１９９０））による、０日での１０’Ｐ３８８白血病細胞を腹腔内に移植 したＣＤ２Ｆ１マウスでのＰ３８８白血病細胞系に対する９−（２−フルオロ− ２−デオキシーβ一Ｄ−アラビノ７ラノノル）−２−ハロアデニン類のインビボ 活性の要化合物　最適　１’１ノ】Ｊ　中央値　ＬＯｇｉｏ　無腫瘍腹腔内投与 　％ＩＬＳ　変化　生存数 （死亡マウスのみ） ３ｄ　１００　ｑｄｌ−５　→−３８　−０．３　０／５２００　ｑｄｌ−５　 ＋５９　−１．６　０／３２０　ｑ３ｈｘ８　＋２２０　−６．６　１／６２５ 　ｑ３ｈｘ８　＋８１　−０．１　０／６上記の表において、最適投与量はｍｇ ／　ｋｇ／　ｄｏｓｅ　（≦ＬＤ，。）で示す、ＩＬＳは寿命の増加を示し、ｌ ｏｇ変化は、死亡した動物の死の中央日に基づき、治療の開始での生存腫瘍細胞 数と比較した治療終了時の存腫瘍細胞数の変化を示す。本表Ｔのデータは、試験 薬物に関するサ・ナショナル・キャンサー・インスティテユーｌ・活性基準に従 って表し、そこでは２０−７４％のＩＬＳが中程度の活性とみなさオ１、７５％ 又はそれ以上のＩＬＳが良好な活性とみなされる。 上記に加えて化合物５ｂとして示された２、３−ジデオキシヌクレオシドは、培 養においてＣＥＭ又はＭＴ細胞系のいずれでもＨＩｖ（ＩＩＩＢ株）に対してわ ずかな活性を示した。 同様の試験で、化合物３ｄを経口投与し、ｉｐＰ３８８白血病細胞に対する抗腫 瘍活性を評価した。表■のデータが示すように、腹腔内投与した化合物に関する 最適投与計画は、Ｊ、５及び９日に５分割投与量であり、同様のスケジュールを 本化合物の経口投与に選択した。この一連の実験で、１、５及び９日にＱ６ｈｘ ４で与えられた６　７ｍｇ／ｋｇ／投与の経口投与は１．７１ｏｇｌ６単位の腫 瘍重荷の減少に影響を与え、図は、１ｐ薬物投与を用いる研究で得られたものよ り約２　．．　５１ｏｇ１　６単位小さかった。 本発明化合物は、その細胞傷害効果に有用であり、従って、所望の癌細胞に対し その細胞傷害効果をもたらすのに十分な量投与するとき、噛乳動物の癌細胞の処 置において、抗癌性化合物として有用である。化合物は、１日当り約１０ｍｇか ら約］０００ｍｇにわたる広範囲の投与計画で投与しつる。これらの投与計画は 、単一用量として又は、拡大した期間にわたる連続投与量として化合物を与える よう計画しうるし、投与計画は最適治療応答を与えるよう適用しつる。例えば、 幾つかに分けた投与量を１日に投与しうるし、投与量を治療情況の必要性により 示されるように比例して減少し又は増加しつる。本発明の化合物は、遊離のプリ ンヌクレオシドの形で、又はその無害の製薬上許容しうる塩として投与しうるし 、本発明の化合物を、単独で又は一又はそれ以上を付加的な製薬上活性な化合物 と組合せて投与しうる。 本発明の活性化合物は、非経口的に、例えば皮下、筋肉又は静脈注射により投与 しつる。製薬上許容しうる塩として活性化合物の溶液又は懸濁液を、適当な緩衝 剤及び投与のだめの添加剤を含む水又は食塩水中で調製できる。注射用に適した 製剤形は、無菌の水溶液又は分散液及び無菌の注射溶液又は分散液を直ちに調製 するための無菌粉末を含む。全ての場合に、剤形は無菌でなければならず、又、 容易に注射剤としての適性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）を与える程度に液体 でなければならない。そわは製造及び保存の条件下で安定でなければならず、又 、微生物、例えば細菌及びノＪビの汚染作用に対し保存されなければならない。 担体は、例えば水、ポリオール（例えばグリセリュノ、プロピレングリコール、 及び液体ポリエチレングリコール）及びその適当な混合物を含む溶媒又は分散液 媒体でありうる。 筋肉又は静脈注躬に適した組成物は、強度を調整し、ｐＨを緩衝化するため少量 の塩、酸及び塩基を含みつる。 本発明の化合物は、又、例えば不活性希釈剤と共に、又は同化性食用担体と共に 経口投与するのに適しうるし、又はそれらはハード又はソフト殼ゼラチンカプセ ルに刺入し、又は錠剤に打錠しうる。経口治療投与には、化合物は、例えば七味 料や防腐剤のような経口製薬調剤に普通通に用いられる賦形剤と混合しうる。 さらに、本発明の化合物は、他のルート、例えば局所軟膏、クリーム又はサーブ での投与、座薬又はドロップに許容しうる製剤処方技術により処方しつる。 従，，て、我々の発明の好ましい実施態様を例示し、記載するが、本発明は変形 及び修飾が可能てあることを理解すべきであり、それゆえ、我々は記載した通り の範囲に限ることを希望せず、種々の取扱い及び条件に本発明を適用しうる変更 及び改変に利用されるよう希望する。そのような変更及び修飾の中に、例えば、 開示したプリンヌクレオシドの製薬上許容しうる塩の使用があるが、これに限定 されず、これらは本発明によってプリンヌクレオシドを細胞傷害作用にかかつて いる細胞に本発明の活性ヌクレオシドへのいかなる小さな置き換えまでも適用す るよう設射され、その結果、記載されたプリンヌクレオシドの活性から修飾した ヌクし・オンドの活性に不利てない効果をもたらすか、又は先の開示によって記 載されたプリンヌク１、７オ／トに見られるのと同様の又は実質的に同様の活性 をもたらし、本発明によるヌクレオシドの投与の特定のルートによりなされた処 方の変更、及び本発明によるヌクレオシドの特定の塩形成のためのヌクレオシド 分子又は組成物処方になされた変更をもたらす。 そオ］ゆえ、かかる変更、改変及び修飾は間違いなく完全な均質の範囲内、従っ て、以丁の請求の範囲の範囲内にあることを意味する。 従って、我々の発明及びその製造法及び使用法を、全ての当業者が製造及び使用 に関係し、又は最も近《関連しうるように完全、明瞭、簡潔そして正確な用語で 記載した。

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．医薬用途のための、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは、それぞれ、同一または異なっていてもよく、水素または保護基で あり：Ｚは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒからなる群から選ばれるハロゲンである］で示 されるプリンヌクレオシドおよび医薬学的に許容され得るそれらの塩。
2. ２．Ｒが水素である、請求項１記載の医薬用途のためのプリンヌクレオシド。
3. ３．Ｒが保護基である、請求項１記載の医薬用途のためのプリンヌクレオシド。
4. ４．ＺがＣｌである、請求項１記載の医薬用途のためのプリンヌクレオシド。
5. ５．２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノ シル）−９Ｈ−プリン−６−アミンである、請求項１記載の医薬用途のためのプ リンヌクレオシド。
6. ６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは、それぞれ、同一または異なっていてもよく、水素または保護基で あり：Ｚは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒからなる群から選ばれるハロゲンである］で示 される化合物および医薬学的に許容され得るそれらの塩を含み、経口、局所また は非経口投与のための医薬学的に許容され得る添加物と組合せられている医薬活 性組成物。
7. ７．Ｒが保護基である、請求項６記載の医薬活性組成物。
8. ８．Ｒが水素である、請求項６記載の医薬活性組成物。
9. ９．ＺがＣｌである、請求項６〜８のいずれか１項記載の医薬活性組成物。
10. １０．化合物が２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラ ビノフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミンである、請求項６記載の医薬活性 組成物。
11. １１．哺乳動物の癌性細胞を、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは、それぞれ、同一または異なっていてもよく、水素または保護基で あり：Ｚは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒからなる群から選ばれるハロゲンである］で示 される化合物を含む、上記癌性細胞に細胞毒効果をもたらすに有効な量の医薬活 性組成物に接触させ、哺乳動物の癌性細胞に細胞毒効果を生じさせる方法。
12. １２．哺乳動物の癌性細胞を、請求項１１に記載の医薬活性組成物（Ｒが保護基 である）に接触させるものである、請求項１１記載の哺乳動物の癌性細胞に細胞 毒効果を生じさせる方法。
13. １３．哺乳動物の癌性細胞を、請求項１１に記載の医薬活性組成物（Ｒが水素で ある）に接触させるものである、請求項１１記載の哺乳動物の癌性細胞に細胞毒 効果を生じさせる方法。
14. １４．哺乳動物の癌性細胞を、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の化合物 （ＺがＣｌである）に接触させるものである、請求項１１記載の哺乳動物の癌性 細胞に細胞毒効果を生じさせる方法。
15. １５．哺乳動物の癌性細胞を、化合物２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フ ルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミンに接触させ るものである、請求項１１記載の哺乳動物の癌性細胞に細胞毒効果を生じさせる 方法。
16. １６．哺乳動物の細胞を、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは、それぞれ、同一または異なっていてもよく、水素または保護基で あり：Ｚは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒからなる群から選ばれるハロゲンである］で示 される化合物および医薬学的に許容され得るそれらの塩を含む組成物の有効量と 接触させ、上記組成物中の上記化合物に上記細胞のリボヌクレオチドレダクター ゼおよびＤＮＡポリメラーゼαを阻害させ得ることを含む、哺乳動物細胞のリボ ヌクレオチドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼの阻害方法。
17. １７．哺乳動物の細胞を、請求項１６に記載の化合物（Ｒが保護基である）を含 む組成物の有効量と接触させるものである、請求項１６記載の哺乳動物細胞のリ ボヌクレオチドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼの阻害方法。
18. １８．哺乳動物の細胞を、請求項１６に記載の化合物（Ｒが水素である）を含む 組成物の有効量と接触させるものである、請求項１６記載の哺乳動物細胞のリボ ヌクレオチドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼの阻害方法。
19. １９．哺乳動物の細胞を、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の化合物（Ｒ が水素である）を含む組成物の有効量と接触させるものである、請求項１６記載 の哺乳動物細胞のリボヌクレオチドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼの阻 害方法。
20. ２０．哺乳動物の細胞を、化合物２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオ ロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミンを含む組成物の 有効量と接触させるものである、請求項１６記載の哺乳動物細胞のリボヌクレオ チドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼの阻害方法。