JPH06510031A - ヒトタンパク質を含有する注入用又は注射用医薬製剤の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒトタンパク質を含有する注入用又は注射用医薬製剤の製造方法本発明は、十分 に許容される形態にある、注入又は注射溶液として使用するためのヒトタンパク 質を含有する医薬製剤の製造方法に関する。

本発明の意味においては、ヒトタンパク質は、例えば、ｔ−ＰＡ（組織プラスミ ノーゲン活性化因子）、Ｇ−Ｃ３Ｆ　（顆粒球コロニー刺激因子）、ストレプト キナーゼ、ウロキナーゼ、インターフェロン又はＥＰＯ（エリトロポエチン）及 び薬学的特性が概して類似しているか又は匹敵するそれらの組換え的に生産した 誘導体の如き治療目的に使用される少量しか存在しない内因性タンパク質である 。

アミノ酸の添加によって既知の投与形態と比較してより良好な生物学的利用能を 有しかつより十分に許容される皮下又は筋肉内投与用のヒトタンパク質含有医薬 製剤が、ヨー口・７／々特許出願ＥＰ　Ｏ４３０２００に記載されている。

中でも尿素及び種々のアミノ酸を含有する、安定化されたヒトタンパク質含有医 薬製剤がＥＰ　Ｏ３０６８２４より既知であり、そこては特にＥＰＯ及びＧ−Ｃ ３Ｆがヒトタン（り質の例として挙げられている。

更に、ＥＰ　Ｏ４５６１５３には、６〜８のｐＨ値を有し安定化用に専らリン酸 アルカリ金属又は）１０ゲン化アルカリ金属を含有する皮下又は筋肉内投与用の 注射製剤を製造するためのＥＰＯのガレン水性製剤が記載されている。

遺伝子工学による上記ヒトタンパク質の製造は、例えば、次の特許出願から既知 である。即ち、遺伝子工学によりｒｈ−ＥＰＯ（組換えヒトエリトロポエチン） を製造する方法がＰＣＴ出願Ｗ０８５１０２６１０及びＷｏ　８６１０３５２０ に記載されている。更に、エリトロポエチン様作用を有するポリペプチドの製造 がＥＰ　０４０９１１３　；ＥＰ　０３５７８０４　、ＷＯ８６１０２１００及 びＷＯ９１１０５８６７に記載されている。更に、他の組換えタンパク質を製造 する方法が先行技術より既知であり、例えば、プラスミノーゲン活性化因子様作 用を有するポリペプチドを製造する方法がＷＯ９０１０９４３７、ＥＰ　Ｏ２２ ７４６２、ＥＰ　Ｏ４００５４５又はＥＰ　０４４０７６３より既知である。Ｇ −ＣＳＦ様作用を有するポリペプチドの製造は、例えば、ＨＰ　９１１０７４２ ９．２及びＰＣＴ／ＥＰ　９１１００１９２より既知である。

ＥＰＯは、骨髄内でのヘモグロビン及び赤血球の形成を刺激する糖タンパク質で ある。このリポタンパク質は主として腎臓内で形成され、血清中に非常に少量だ け存在し、生理的条件下で尿中に排泄される。

しかしながら、異なる製造業者からのヒトタンパク質含有注射又は注入溶液は、 ガレン製剤における異なる組成のために又は該タンパク質のアミノ酸配列若しく はグリコジル化パターンに関する該活性物質の僅かな構造的差異のために別様に 許容されたということが確認されている。先行技術より既知の溶液は大きな問題 なしに十分に許容される筈の本質的に等強性の溶液であるが、それらを投与した ときに好ましくない副作用が認められた。例えば、ＥＰＯ含有注射溶液を投与す ると、患者が投与中及び投与後に起こる注射部位における痛みを訴えることが多 い。使用する個々のガレン製剤に依存して、特にヒト血清アルブミン及び安定化 用添加剤としてクエン酸緩衝剤を含有する注射溶液を使用したときに、焼けるよ うな痛みが多くの患者に頻繁に起こった。場合によっては、患者は、高温、高血 圧、尊麻疹、背中病、悪心及びシヨツクをも呈した。

更に、比較的低含有量の活性物質を有する注射溶液は適切に安定化され得ないと いうことが分かった。かくして、例えば、ヒトタンパク質としてＥＰＯを例えば ５００〜２０．０００Ｕの量で含有する医薬製剤は十分安定ではない。幾らかの ガレン製剤は、特に長期間貯蔵した場合に望ましくないヒトタンパク質の集合物 （ａｇｇｒｅｇａｔｅ）又は凝集物（ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｅ）を形成し易いと いうことを示すことができた。その結果として、かかる製剤を使用する場合には 、免疫学的問題が浮上し得る。

先行技術より既知の従来のヒトタンパク質含有医薬製剤は、いわゆる−凹没薬製 剤（ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）又は−凹没薬容器（ｓ ｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ　ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）の形で一般に一回投与用に用いら れるので、普通は保存剤を含有しない製剤である。対照的に、いわゆる複数回投 薬ユニット（ｍｕｌｔｉ−ｄｏｓｅ　ｕｎｉｔｓ）又は複数回投薬容器（ｍｕｌ ｔｉ−ｄｏｓｅ　ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ）は、あらゆる望ましい分量の活性物質 の複数回投与に適している。そのために、かかる投与形態の安定性及び貯蔵性に 関して、特に該溶液の無菌性に関して格別な要求がなされる。このことを理由と して、即投与可能なように調製された注射又は注入溶液内での微生物の成育を阻 止するために、かかる溶液に保存剤が使われている。

しかしながら、保存処理されたヒトタンパク質含有医薬製剤の製造は難しいこと が証明されている。保存剤を使用すると、該医薬製剤を長期間貯蔵した場合にこ れらが安定性の問題を起こすことが分かってきた。この過程でヒトタンパク質は 不活性となり、注射溶液への不許容性が認められる原因になり得る凝集物を形成 する。保存処理された注入用又は注射用医薬製剤のこの通常の製造方法は、活性 ヒトタンパク質成分の場合には、１２１’ｃで２０分間のオートクレーブ中での 無菌化条件下で該活性物質が不活性化し、それらの構造が破壊されるので用いる ことができない。また、医学分野において用いられる通常の保存剤は活性ヒトタ ンパク質成分と反応してこれらが不活性化することも知られている。

このことを理由として、従来、静脈内又は皮下用製剤は、この場合に使用されて いた保存剤を用いることなしに無菌条件下で一回投薬製剤として製造された。

かくして、上記の欠点を有さない医薬製剤を製造することのできる、注射又は注 入用の保存処理されたヒトタンパク質含有医薬製剤の製造方法を見出すという課 題が生まれたのである。このようにして製造したこれら医薬製剤を、できるだけ 痛みのない投与を確実に行いかつ無菌であるような再現性ある十分に許容できる やり方で投与することは可能な筈である。更に、無菌でありかつ良好な許容性で 投与され得る複数回投薬投与形態（複数回投薬容器）が提供されるべきである。

本発明の目的は、注射用又は注入用のヒトタンパク質含有医薬製剤の製造方法に おいて、２％（容量％に対する重量％、Ｗ／Ｖ）まで、特に０．０１−１％又は ０．１−０．３％の濃度で保存剤を添加し、所望により貯蔵可能な医薬製剤の製 造前にこれらを除去することにより達成される。非常に低いアレルギー率を有す る保存剤を選択することによって、貯蔵可能な医薬製剤中にかかる保存剤を残留 させることも更に可能であり、選択的な除去が絶対的に必要であるとは限らない 。

このようにして製造した医薬製剤は保存処理されて（する。即ち、それらは保存 剤を含有しているか又はそれらを製造して０る間の少なくとも一部の時間保存剤 が存在していた。殺菌作用を有する全ての物質を保存処理に用いることができる 。用０た保存剤１、充填中に製剤に入り込んだ微生物の成育を阻害するか又はそ れらを殺しもする。

本発明による方法においては、貯蔵可能な医薬製剤の製造の最終工程のうちの１ 工程において容易に除去することのできる保存剤を使用するときに特に有利であ る。このことは、投与可能な医薬製剤が許容性に影響するあらゆる保存剤を含な ま（１と（１う手１１点を有している。このために特に有利な揮発性保存剤（こ ｉｔ、クロレトン（クロロブタノール、１，１．１−）ジクロロ−２−メチル− ２−プロパツール）、ベンジルアルコール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾール及び一 般式Ｒ−０−ＣＯ−０−Ｃｏ−０−Ｒ（式中、ＲζよＣ１〜Ｃ６アルキル基、特 にメチル、エチル、プロピル又？；！ｔｅｒｔ−ブチルである）のピロ炭酸ジア ルキルエステルが含まれる。

しかしながら、保存剤を一緒に投与する場合でさえ、許容性に関する作用を最小 限にすることができる。同じ保存作用を有する異なる保存剤が異なるアレルギー 率を有するということ力く確認されているのであるから、該物質を適切に選ぶこ とにより許容性を向上させることができる。低いアレルギー率を有する保存剤Ｃ よ、特にクロロブタノール、ベンジルアルコール及び塩化ベンザルコニウムであ る。塩化ベンザルコニウムは、一般式（Ｈｓ　Ｃｓ　ＣＨｔ−Ｎ“（ＣＨ５）ａ Ｒ）　Ｃｌ　（式中、ＲはアルキルＨ　ｓｔを表す）の塩化アルキルベンジルジ メチルアンモニウム型の４級アンモニウム化合物（クォーツ）、例え（ｆ、塩化 ベンゾドデシニウム又は塩化セタルコニウムの混合物を表す（キルクーオス？　 −　（Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ）　２：　６３３　ｆｆ；　１９：　５６２　ｆ ｆを参照）。

更に、これら保存剤は、溶液中に存在するヒトタンノ（り質を不活性化しないと いう利点を有している。保存剤の濃度をできるだけ低くすることによって許容性 も向上させること力（できる。とりわけ、医薬溶液中の個々の保存剤の含有量は 、１０ｍｇ／−の値を越えるべきではない。５ｍｇ／ｌｎｔまでの保存剤を該医 薬溶液（こ用０るのが好ましい。

いろいろな手段により必要な濃度を最小限にすること力くできる。

例えば、できるだけ大きな程度まで保存剤へよるヒトタンノくり質の不活性化を 防ぐことにより最小限にすること力くできる。これ（ま、注射溶液の安定性が増 すという更なる利点を有する。該不活性イヒは、低反応性の点から保存剤を選択 すること（こよって防く゛こと力（できる。該不活性化は、ヒトタンノくり質と 保存剤との間の接触力（できるだけ短時間である場合に更に低くなる。溶液中の 保存剤の必要濃度も、溶液が接触する材料、例えば、ゴムへの吸収を防く゛こと によって低くすることができる。

用いる保存剤の種類は、許容性に重要な役割を果たす。全ての保存剤は多かれ少 なかれアレルギー率を有して０る。し力１しな力（ら、微生物がいないことを保 証するためには、それらの使用をさけることが常に可能であるとは限らない。本 特許出願の基礎となった研究によれば、最大限に微生物がいないようにするのみ ならず保存剤の副作用も殆ど完全に排除するような方法で、注射溶液の製造にお いて保存剤を使用することは可能である。

添加した保存剤が多かれ少なかれヒトタンパク質と反応してそれらを不活性化す るという事実にも拘らず、多くの場合において、保存剤の添加を完全に省略する ことは可能ではない。というのは、例えば、充填工程の間に微生物は溶液に入る おそれがあり、又、複数回投薬容器中で無菌の凍結乾燥体から注射溶液を調製し た場合にはこれを完全に使い終わるまで微生物から保護しなければならないから である。

凍結乾燥の間に蒸発するか又は昇華するような保存剤を選択した場合には、保存 剤の添加は該製剤の製造において問題にならない。適当な揮発性を有する保存剤 は、例えば、クロレトン及びベンジルアルコールである。

本発明の方法の一態様によれば、ヒトタンパク質を必要な補助剤と共に水中に溶 解させ、必要量の保存剤（最大６％まで）を添加し、そして、必要に応じて、問 題のヒトタンパク質が安定性に関して耐えることができ不活性化されることのな い温度に加熱する。溶液が実質的に無菌になるまで長時間、即ち、約４時間まで 、好ましくは１０分〜２時間保存剤を効かせる。その後、活性物質の該溶液をビ ンに小分けして凍結乾燥する。一般に、保存剤は凍結乾燥の間に昇華又は蒸発す る。このようにして得られた凍結乾燥体は、通常の溶媒で戻すと無菌の注入又は 注射用溶液になる。

ヒトタンパク質注射溶液の良好な許容性は、とりわけｐＨ値、緩衝能、滴定酸度 及び該溶液中に存在する緩衝物質の適切な選択によって影響を受ける。

ヒトタンパク質はアルカリ域では安定でないので、該溶液のｐＨ値の上限は実質 的に中和点（血液のｐＨ値は７．２〜７．４である）を越えるべきではない。静 脈内投与用には、該溶液は約４．５〜７゜４のｐＨ値を有するのが好ましい。約 ６〜７．４のｐＨ値を有する溶液は皮下投与に好ましい。静脈内では、血液及び 血液中に存在する緩衝物質の静脈内流入のために、生理的ｐＨ条件への調節が皮 下で起こるよりもより速やかにできるので、静脈内投与と皮下投与とは異なる。

皮下及び静脈内投与の場合における該調節速度も最低限の緩衝能及びできるだけ 低い滴定酸度により上昇し得るので、該溶液のｐＨ値の許容できる最低値もこれ らパラメーターに依存する。この場合、即投与可能な溶液の緩衝能は０〜１０ｍ Ｖａｌ／Ｉであり、滴定酸度は０〜２０　ｍｅａｌ／　ｌである。特に、即投与 可能な溶液の緩衝能は６　ｍｅａｌ／　Ａ’を越えるべきではなく、滴定酸度は ｌ　ＯｍＶａｌ／　１を越えるべきではない。

緩衝能は、一般に、１１容量の溶液のｐＨ値を１ｐＨ単位だけ変化させるのに必 要な酸又はアルカリの当量（Ｖａｌ）として定義される。１塩基酸又は塩基を滴 定に使用した場合には、該使用した酸又は塩基についての規格Ｖａｌ／　１　（ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｖａｌ／ｌ）はこの酸のモル量、つまりモル／Ｉ に対応する。本発明の場合には、使用する溶液は酸性域のｐＨ値を有しているの で、その緩衝能は、ＩＡ’容量の溶液のｐＨ値をｌｐＨ単位だけ上昇させるのに 必要な、例えば０．１規定ＮａＯＨ溶液の量として択一的に定義することができ る。ヒトタンパク質含有医薬溶液は、緩衝能の測定の間、通常用いられている医 薬用の補助物質及びビヒクルを含有している。

ヒトタンパク質含有医薬製剤の緩衝能の測定は、活性物質自体に加えて実際の医 薬品製造に慣用されている補助物質及び添加剤を含有する即投与可能な注射又は 注入溶液に関して行う。一般に、該溶液はタンパク質の安定化のために酸性ｐＨ 値を有している。

該溶液のｐＨ値を１ｐＨ単位だけ上昇させるのに必要な塩基の相当量は、塩基で 滴定することによって測定する。

静脈内投与用の注入又は注射溶液における緩衝能についての好ましい範囲は、０ ．１規定水酸化ナトリウム溶液２．４ｄまで、好ましくは０．５−までである。

これは、０．２４ミリモル又は０．０５ミリモルのアルカリの量に相当する。皮 下投与については、０．１規定ＮａＯＨ溶液１ｒｎｌまで、特に０．１規定Ｎａ ＯＨ溶液０．２−までを用いるのが好ましい。これは、０．１ミリモルまで又は ０．０２ミリモルまでのアルカリの量に相当する。

更に、即投与可能な注射又は注入溶液ができるだけ低い滴定酸度、つまり５ｍＶ ａｌ／Ａ’までの滴定酸度を有する場合が有利であることが分かった。

静脈内投与用の注入又は注射溶液の滴定酸度についての好ましい範囲は、ｏ、　 ｉ規定ＮａＯＨ溶液ＩＯ−まで、好ましくは５−１３−又はｌ−まてである。こ れは、１ミリモル／ｌまで又は０．３ミリモル／ｌ又は０．１ミリモル／ｌまで の滴定酸度に相当する。

皮下投与については、０．１規定ＮａＯＨ溶液５ｒｎｌまで、特に２ｄまで又は ０．５−までを使用するのが好ましい。この場合、滴定酸度は０．５ミリモル／ ｌ又は０．２ミリモル／ｌ又は０，０５ミリモル／ｌまてである。

滴定酸度又は塩基度は、一般に、Ｉｆ容量の溶液のｐＨ値を血液のｐＨ値（約７ ．２〜７．４）に調節するのに必要なアルカリ又は酸の量として定義される。本 発明の場合には、１１の溶液のｐＨ値を血液のｐＨ値（約７．３）に上昇させる のに必要な、例えば０゜１規定ＮａＯＨ溶液の量として択一的に定義することが できる。

ヒトタンパク質含有医薬溶液は、緩衝能の測定の間、通常の医薬用の補助物質及 び添加剤を含有している。滴定酸度の測定方法は、即投与可能な注射又は注入溶 液で始めて、該溶液のｐＨ値を約７に調節するのに必要な塩基の量を測定するこ とにより、緩衝能の測定方法と類似の方法で行われる。

注入又は注射溶液に適用可能なｐＨ域及び実質的に痛みを伴わないで投与するこ とのできるｐＨ域は、用いる個々のヒトタンパク質に依存して酸性又は中性域で ある。該注入又は注射溶液は約２〜７．４のｐＨ値を有する。該溶液は好ましく は約３．８〜７．４のｐＨ値で使用され、それによってｐＨ値４．５〜６．０、 好ましくは５．５〜６．０がより低い範囲と特に考慮される。該溶液のｐＨ値は 、好ましくは、血液のｐＨ値に近いｐＨ域を上限として用いられる。

６〜７．４、特に６．８〜７．２のｐＨ値を有する溶液は、好ましくは静脈内投 与に用いる。６．５〜７．２、特に７．０〜７．２のｐＨ値を有する溶液は、好 ましくは皮下投与に用いる。

ヒトタンパク質の天然存在型に加えて、適当な突然変異タンパク質も使用できる 。“突然変異タンパク質”という用語は、そのアミノ酸配列が少なくとも１アミ ノ酸だけその天然配列と相違しているタンパク質として一般に理解されている。

これら相違は、例えば、天然配列におけるｌ又は２以上、好ましくは１〜１０の アミノ酸が他のアミノ酸によって置換されているもの、又はｌ又は２以上のアミ ノ酸がＮ−又はＣ−末端に付加しているか若しくは脱落しているものであっても よい。これをＮ−若しくはＣ−末端延長又はＮ−若しくはＣ−末端欠失という。

上記の起こり得る変異は、所望により相互に組み合わさってもよい。即ち、天然 配列のＮ−末端が例えば延長される一方で、同時にそのＣ−末端が短縮されても よく、所望により、同時に１又は２以上のアミノ酸が他のアミノ酸により置換さ れていてもよい。特に指摘すべきことは、このようにして得られた断片は、天然 のヒトタンパク質と実質的に同じ基本的治療特性と作用を有さなければならない ことである。

一般に“組換え体”という用語は、組換えＤＮＡ技術を用いて産生ずるヒトタン パク質のことを言う。これら方法は、特定のヒトタンパク質をコードする遺伝子 のクローニング、例えば細菌性プラスミドの如き適当なベクターへの適当なｃＤ ＮＡ又はゲノミックＤＮＡの挿入、及び適当な宿主細胞へのこれら組換えプラス ミドの形質転換を包含する。次いで、クローン化した遺伝子を宿主細胞内で発現 させて対応するヒトタンパク質を既知の方法で単離する。

液体医薬製剤又は凍結乾燥した医薬製剤も、所望により、安定剤又は有機親水性 ポリマーの如き通常の医薬補助物質を含有してもよい。例えば、約１０，０００ 〜２，０００．０００の分子量を有するスクロース、テ１−ラロース、ラクトー ス、デキストランの如きオリゴ糖は安定剤として適している。有機親水性ポリマ ーは、親水性モノマー単位から構成される炭素主鎖を有し、所望により、ポリエ チレングリコール又はポリビニルピロリドンの如き極性側基を有する高分子であ る。

該医薬製剤は、リン酸アルカリ（リン酸ナトリウム又はカリウム又はそれらの水 素又は２水素塩）、有機若しくは無機酸の塩又はアミノ酸の如き通常の医薬緩衝 剤を更に含有する。該製剤中における種々の緩衝物質の組成は、即投与可能な注 射又は注入溶液の緩衝能ができるだけ低くなるように選ぶ。これは、できるだけ 少ない量の緩衝物質を使用することによって達成することができ、そうするには 緩衝剤の総量は該医薬溶液中で特に１００ミリモル／ｌの濃度を越えるべきでは ない。緩衝物質は、好ましくはｌＯ〜ｌＯＯミリモル／ｌ、特に２０〜６０ミリ モル／１の濃度で用いる。また、個々の緩衝物質を、主として酸又は塩基緩衝域 におけるそれらの作用をお互いに補うように選択することも可能である。この場 合、緩衝物質の総量は、最終の投与可能医薬製剤中において２００ミリモル／１ までであってもよい。

凍結乾燥医薬製剤は、好ましくは更に、水溶液が凍結するときに結晶マトリック スを形成し、また、その後の凍結乾燥の間及び種々の外部条件下で長期間該凍結 乾燥体を貯蔵する間も構造的な安定性を維持する構造形成剤を含有する。この意 味において、適当な構造形成剤としてマンニトール及びグリシンが考慮される。

このようにして製造した医薬製剤は好ましくは凍結乾燥体の形で販売される。そ れらを−回投薬製剤として使用してもよく、その場合、特定量のヒトタンパク質 が注射ビン、アンプル又はカプセル内に入っており、適当量の戻し溶液を加える ことによって凍結乾燥体を溶解する。該戻し溶液は、注射溶液のｐＨ値を望まし い値に調節するのに必要な量のアルカリを既に含有していてもよい。加えて、通 常の等張添加剤も用いることができる。一方、該凍結乾燥体は、戻しを注射用蒸 留水で本質的に行えるような有利なｐＨ域に設定するのに必要な量の塩基性試薬 を全体的に又は部分的に含有してもよい。更に、該凍結乾燥体並びに戻し溶液は 、確実に等張溶液を生成させる物質を含有してもよい。

次いで、戻した溶液を注射器に吸い上げて患者に直接投与することができる。い わゆる−回投薬製剤は、例えば、５００〜２０゜０００Ｕ、好ましくは１．　Ｏ ＯＯ１２，０００，５，０００，１０，０００又は１５，０ＯＯＵＯ量のｒｈ− ＥＰＯを含有する。比例的に増量したヒトタンパク質を使用する場合には、複数 回投薬製剤を製造することも可能である。この場合、より大きな容量（約５〜１ ０ｍ１）の戻し溶液を使用し、次いでこの溶液を用いて数回投与する。この場合 、投与されるヒトタンパク質の量は個別的に医師が決めてもよく、また、異なる 患者に複数回投与するために使用してもよい。

注射又は注入溶液の製造に使用するＥＰＯＯ比活性は、好ましくは２８０ｎｍに おける吸光単位当たり約１６０，０ＯＯＩＵである（ＥＰ　Ｏ２０９５３９を参 照）。

ヒトタンパク質含有注射溶液は、活性物質に加えて、先に上げた安定剤、緩衝剤 の他に、水に溶解させた錯生成剤及び湿潤剤を含む通常の補助物質を含有する。

緩衝剤は約１〜約１００ミリモル／ｌの濃度で使用される。該溶液の使用可能な ｐＨ値は、静脈内投与の場合は約４，５〜約７．４であり、皮下投与の場合は約 ６．０〜約７，１である。上限は血液のｐＨ域（７，２〜７．４）である。ヒト タンパク質は通常アルカリ性域で安定ではないので、より高いｐＨ値は避けるべ きである。

以下に実施例に基づいて本発明の詳細な説明する。それぞれの場合において、活 性物質としてｒｈ−ＥＰＯ及びＧ−Ｃ８Ｆをヒトタンパク質の種類の代表として 使用する。しかしながら、他のヒトタンパク質も同じようにして使用することが できる。

本発明で使用することのできる注射溶液を製造するために、攪拌器を装備した無 菌Ｖ２Ａ二重ジャケットタンク内で補助物質を水中に溶解させる。必須の補助物 質は、緩衝剤、錯生成剤、安定剤及び湿潤剤である。静脈内及び皮下使用のため に生理学的に最適な範囲の設定に適する緩衝剤は、特に、グリココール、クエン 酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸−水素ナトリウム、炭酸塩及びア ミノ酸の塩、並びにリンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸及びアスパラギン 酸のナトリウム及びカリウム塩、及びこれら物質の組み合わせである。緩衝剤は 、約１〜約１００ミリモル／ｌ溶液の濃度で使用する。活性物質をその溶液に添 加し最終容量に合わせて攪拌する。該バッチ溶液を０．２μｍの気孔サイズを有 するメンブランフィルタ−で濾過して滅菌する。このようにして得られた溶液を ０．５−の小容量で無菌条件下で注射ビンに小分けし、続いて凍結乾燥装置内で 乾燥する。

上記の製剤は、即注射可能な溶液としても安定である。それらの製造においては 、得られる溶液は凍結乾燥されていないので、例えば、容器当たりｌ−の容量で アンプル又は注射ビンの中に直接小分けする。

ヒトタンパク質を含有する医薬投与形態を製造するために通常の医薬補助物質又 は添加剤を使用する。塩基性アミノ酸であるアルギニン、リソン又はオルニチン の如き安定剤又は可溶化剤も添加することができる。グリシン、ロイシン、イン ロイシン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、アミノ酢酸、フェニルアラ ニン並びにヨーロッパ特許出願ＨＰ　０４３０２００及びＥＰ　０３０６８２４ に挙げられた更なるアミノ酸も、特に該タンパク質を安定化又は可溶化するのに 役立つアミノ酸として使用され、加えて緩衝物質としても使用することができる 。投与形態は、凍結乾燥体として又は即使用可能な注入若しくは注射溶液として も販売することができる。

本発明による注射溶液を保存処理する場合、製剤が一回投薬容器のためのものか 複数回投薬容器のためのものか区別しなければならない。

医薬分野において通常使用される保存剤はヒトタンパク質と反応してそれらを不 活性にするので、静脈内及び皮下投与用製剤は、保存剤を使用する本発明の方法 を用いずに、無菌条件下で一回投薬製剤として製造されることが多い。しかしな がら、充填工程中に製剤の中に微生物が入るのを避けることが常に可能であると は限らない。微生物が入ると、保存剤の添加によりそれらの成育が阻害されない か又はそれらが殺されないなら、被害のもとになり得る。保存剤がヒトタンパク 質を不活性化するのを防ぐか又は投与したときにアレルギーを起こすのを防ぐた めに、本発明に従い、製剤を貯蔵する前に溶液の凍結乾燥の間に除かれる保存剤 、即ち、蒸発又は昇華される保存剤を一回投薬製剤の場合に使用する。かかる保 存剤は、例えば、クロレトン、ベンジルアルコール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾー ル及びピロ炭酸ジエチルであり、それらのうち最初のもの及び後者を用いるのが 好ましい。使用可能な濃度は、０．１〜約２．０、好ましくはｏ、１〜約０．３ ％である。正確な濃度は活性物質の濃度に依存し、当業者に周知の方法によりそ の場その場で決定される。

静脈内及び皮下投与用の複数回投薬容器内の製剤は適切に保存処理されていなく てはならない、即ち、規定された貯蔵期間の最終日でさえも、保存作用は依然と して十分な程度でなければならないという法的要件がある。この要件を満たすた めには、注射可能な形態にあるヒトタンパク質溶液は保存剤を含有しなければな らない。これは、上で述べたように保存剤がヒトタンパク質と反応して患者にお いて免疫感作を誘発するので問題を起こす。活性物質との反応は、一方では活性 物質の活性の減少をもたらし、他方では保存作用の減少をもたらす。この保存作 用は、ゴム製ストッパーへの保存剤の吸収により更に減少する。

本発明によれば、全くと言っていいほどヒトタンパク質と反応せずかつ免疫感作 作用を殆ど有さない保存剤を使用し、ヒトタンパク質と保存剤との起こり得る接 触を最も短くしようと努め、そして保存剤の消費に寄与する要因を排除すること によって、これら困難を克服する。

反応性及び免疫感作がより少ない保存剤の例は、クロロブタノール、ベンジルア ルコール、塩化ベンザルコニウム及びこれら物質の組み合わせである。これら保 存剤を別々に使用するときは、次の濃度を採用する：クロロブタノール＝２．０ 〜５．０ｍｇ／、７、好ましくは３．０〜４．０　ｍｇ／ｍ／　；ベンジルアル コール：　１．０〜５．０　ｍｇ／−１好ましくは２．０〜３．０　ｍｇ／　ｍ ｌ　；塩化ベンザルコニウム：０゜０１〜０．０５　ｍｇ／　ｍｌ、好ましくは ０．０２〜０．０３　ｍｇ／１ｙｔｌ。

別々の保存剤を組み合わせて使用することが特に有利であることが分かった。よ り良好な保存はこの手法で達成され、ヒトタンパク質との不利な相互作用は最小 限になる。単一の保存剤を使用した場合、場合によっては使用したヒトタンパク 質に依り、必要な製剤安定性を達成することは可能ではなかった。最高に保存作 用を示す濃度で塩化ベンザルコニウムを使用すると、例えば、ヒトタンパク質の 不活性化をもたらし得る。冷蔵温度でヒトタンパク質の集合化をもたらさない濃 度でクロロブタノールを使用すると、一定の情況下で保存作用が不十分となり得 る。保存に十分な量のベンジルアルコールを使用すると、物理的不適合及び該医 薬溶液の混濁化をもたらし得る。これら欠点は、別々の保存剤を組み合わせるこ とによって回避できる。好ましい組み合わせは、特にベンジルアルコール／塩化 ベンザルコニウム、ベンジルアルコール／クロロブタノール又はクロロブタノー ル／ベンジルアルコール／塩化ベンザルコニウムを含有する溶液である。この場 合、好ましくは、クロロブタノールは１０ｍｇ／、Ｊまで、ベンジルアルコール は１０ｍｇ／−まで、そして塩化ベンザルコニウムは０．１　ｍｇ／−まで、特 に０．ＯＩ〜０．０５　ｍｇ／−の濃度で使用する。ベンジルアルコールと塩化 ベンザルコニウムを組み合わせて使用するのが特に有利であり、この場合、医薬 溶液中におけるベンジルアルコールの濃度は好ましくは３〜６　ｍｇ／−であり 塩化ベンザルコニウムの濃度は好ましくは０．０１〜０．０２５ｍｇ／−である 。

反応性が低くかつ免疫感作の程度が低い保存剤を使用すること及び接触時間の短 縮は、ヒトタンパク質を不活性化したときの保存剤の分解を最小限にするので、 既に保存剤の必要量を少なくするのに役立っている。

所望により保存剤を凍結乾燥中に除去した後の凍結乾燥体型又は濃厚液型（上記 を参照）の製剤を無菌条件下で貯蔵し、その注射型を調製するまで保存剤を添加 しないことで、起こり得る接触の期間を確実に最短にすることができる。なお、 それによって該注射溶液を３０日以内に消費しなければならない。

凍結乾燥体を選ぶ場合は、該医薬包装単位は更に戻しに必要な溶媒を含んでもよ い。一般に、これらは、混合することで本発明による特性を有する注射溶液が得 られるよう、対応する凍結乾燥体に適合したものである。該凍結乾燥体は、本質 的に注射用蒸留水で戻せるように既に必要量の保存剤を全体的に又は部分的に含 有することができる。一方、一般原則として、保存処理された注射可能な医薬溶 液を得るために、該戻し溶液に必要量の保存剤を含有させることも可能である。

複数回投薬製剤の場合にはこれは好ましい態様である。

医薬包装単位の製造においては、その注入又は注射溶液により十分に許容されか つ痛みのない投与が可能になる旨の説明を特に含む包装折り込みと共に投与の形 態を規定するのが普通である。

本発明による複数回投薬容器のためのヒトタンパク質溶液及びそれらの製造をよ り詳しく説明するために以下の実施例を用いる。

問題の溶液は、ヒトタンパク質としてＥＰＯ又はＧ−Ｃ３Ｆを含む溶液である。

しかしながら、他のヒトタンパク質も同じようにして使用することができる。製 造した製剤は、約＋４〜約＋８８Ｃで冷蔵庫中に貯蔵した場合に数年間安定なま まの凍結乾燥体として又は液体製剤として存在する。

以下の補助物質を攪拌器を装備した無菌１００　ＡＶ２Ａ二重ジャケットタンク 内で溶解させた。

尿素　７００．０ｇ　７０．０ｇ　０ｇ塩化ナトリウム　７０．０ｇ　７０．０ ｇ　７０．０ｇツイーン２０　７．Ｏｇ　７．０ｇ　７．０ｇクロレトン　７０ ．０ｇ　７０．０ｇ　７０．０ｇリン酸二水素ナトリウム・　３８．４ｇ　３８ ．４ｇ　３８．４ｇリン酸−水素二ナトリウム・　３５０．０ｇ　３５０．０ｇ 　３５０．０ｇＨ２０ 塩化カルシウム・２　Ｈ＋０　８．４ｇ　０．４２ｇ　−グリシン　１０５．０ ｇ　１０５．０ｇ　１０５．ＯｇＬ−ロイシン　１４０．０ｇ　１４０．０ｇ　 １４０．ＯｇＬ−イソロイシン　１４０．０ｇ　１４０．０ｇ　１４０．ＯｇＬ −スレオニン　３５．０ｇ　３５．０ｇ　３５．ＯｇＬ−グルタミン酸　３５． ０ｇ　３５、Ｏｇ　３５．ＯｇＬ−フェニルアラニン　７０．０ｇ　７０．０ｇ 　７０．０ｇ注射用水を加えて　７０．０１　７０．０１　？０．０７２１４０ ．０００ユニット／ｌ−のＥＰＯ力価を有する２１４．３ｍ／のエリトロポエチ ン粗原料バッチを３０４２のこの補助物質溶液に添加し、次いで３５１の最終容 量に合わせて攪拌する。濾過システムを残りの補助物質溶液で濯ぎ洗いする。該 バッチ溶液を０．２μｍ気孔サイズのメンブランフィルタ−での濾過により滅菌 する。

該滅菌濾過溶液を無菌条件下で１−の小容量で注射ビンの中に小分けし、凍結乾 燥装置の中で凍結乾燥する。

この実施例に記載した製剤は、凍結乾燥体としてのみならず注射溶液として貯蔵 した場合でも安定である。

（本頁以下余白） 実施例２・　ＥＰＯ凍結乾燥体１０００ユニット（３５，０００ビエリトロポエ チン　２３３．３３−・３．５００万ユニツト塩化ナトリウム　ｌｏｏ、ｏｇ　 ＩＯｏ、０ｇ　１００．０ｇツイーン２０　１２．Ｏｇ　１２．０ｇ　１２．０ ｇピロ炭酸ジエチル　２１０．０ｇ　２１０．０ｇ　２１０．０ｇリン酸二水素 ナトリウム・　１４０．０ｇ　１４０．０ｇ　１４０．０ｇリン酸−水素二ナト リウム・　５０．０ｇ　５０．０ｇ　５０．０ｇＨ２０ 塩化カルシウム・２　Ｈ２Ｏ１０，Ｏｇ　０．５ｇ　＝尿素　７００．０ｇ　Ｏ ，Ｏｇ　Ｏ，０ｇグリシン　１０５０．０ｇ　１０５０．０ｇ　１０５０．Ｏｇ Ｌ−ロイシン　９２．Ｏｇ　９２．０ｇ　９２．０ｇグルタミン酸　１０３．０ ｇ　１０３．０ｇ　１０３．０ｇフェニルアラニン　１１５．５ｇ　１１５．５ ｇ　１１５．５ｇ注射用水を加えて　７０．０　Ｚ　７０．０１　７０．０１該 補助物質を７０１の注射用水に溶解させてから、３５１ずつに２分割する。必要 量のＥＰＯ活性物質を１番目の３５４２に添加する。２番目の３５１は濾過シス テムを濯ぎ洗いするのに用いる。

該バッチ溶液を０．２μｍ気孔サイズのメンブランフィルタ−での濾過により滅 菌する。該滅菌濾過溶液を無菌条件下で１−の小容量で注射ビンの中に小分けし て実施例１と同じ基準で凍結乾燥する。その間にピロ炭酸ジエチルは蒸発する。

このようにして白色の多孔性凍結乾燥体を得る。これは２−の水に容易に溶解し 、活性を大きく低下させることなく冷蔵庫中で３年間又は室温で１年間貯蔵する ことができる。

Ｇ−Ｃ３Ｆ及びｒＰＡ溶液も、例えば、同じようにして製造することができるが 、溶液成分の溶解及び滅菌濾過は窒素を通しながら行う。

（本貫以下余白） 実施例３：　ＥＰＯ凍結乾燥体５０００Ｕ及び１０，０ＯＯＵ成分： エリトロポエチン　５００００　１０，０ＯＯＵ塩化カルシウム・２８２０　０ ．１５１ｍｇ　ｏ、　３０２ｍｇ塩化ナトリウム　２．５００ｍｇ　５，０００ ｍｇポリソルベート２０　０．２５０ｍｇ　２．５００ｍｇリン酸二水素ナトリ ウム・Ｈ２ｏ　１．１９０ｍｇ　２．３８０ｍｇリン酸−水素二ナトリウム・２ ８２０　９．９６５ｍｇ　１９．９３０ｍｇアミノ酢酸　３７．５００ｍｇ　７ ５．０００ｍｇ１、−０イシン　５．０００ｍｇ　ｉｏ、０００ｍｇＬ−イソロ イシン　５．０００ｍｇ　ｌｏ、０００ｍｇＬ−スレオニン　１．２５０ｍｇ　 ２，５００ｍｇＬ−グルタミン酸　１．２５０ｍｇ　２．５００ｍｇＬ−フェー ルアラニン　２．５００ｍｇ　２．５００ｍｇ注射用水を加えて　２．１４−　 ４．１８−５１３Ｗ　１０．７０ｍ／ 凍結乾燥前にこの溶液を１ｒｎｌビンではなく０．５１ｎｌビンに分配したこと 以外は、実施例１に記載した操作と同じようにして凍結乾燥体の製造を行う。

使用前に、保存剤つまり５．０ｍｇクロロブタノールを含有する十分に許容性の ある戻し溶液でこれら凍結乾燥体を溶解し、注射用水を加えて１．０−にする。

一方、塩化ベンザルコニウム（約０．Ｏ１〜０．０５　ｍｇ／葱）を加えたベン ジルアルコール（約４〜５　ｍｇ／−）の溶液を使用することもてきる。

実施例４：　即注射可能なＥＰＯ溶液 成分：　１００ＯＵ　２０００Ｕ　５００００　１０，０ＯＯＵ／アンプル　／ アンプル　／アンプル　／アンプルＥ　Ｐ　Ｏ１００００２０００Ｕ　５０００ Ｕ　１０，００００尿素　５．００ｍｇ　５．００ｍｇ　５゜００ｍｇ　５．０ ０ｍｇポリソルベート２０　０．　ＩＯ＋ｎｇ　Ｏ，１０ｍｇ　Ｏ，ＩＯ＋ｎｇ 　Ｏ，’ｌＯｎ＋ｇＮ　ａ　ＣＩ　０．５０ｍｇ　０．６０ｍｇ　０．６０ｍｇ 　０．６０ｍｇＮａＨ２ＰＯ＋　・　２Ｈ２００，３１ｍｇ　０．６２ｍｇ　０ ．６２ｍｇ　０．６２ｍｇＮａ　２ＨＰＯ＊１２Ｈ２０５，０３ｍｇ　ＩＯ，０ ６ｍｇ　Ｉｏ、０６ｍｇ　ｉｏ、０６ｍｇＣａＣ１２・　２Ｈ＋ＯＯ，０４ｍｇ 　０．０８ｍｇ　０．０８ｍｇ　０．０８ｍｇアミノ酢酸　７．５０ｍｇ　１５ ．ＯＯ＋ｎｇ　１５．００ｍｇ　１５．ＯＯｍｇＬ−グルタミン酸　０．２５ｍ ｇ　０．５０ｍｇ　０．５０ｍｇ０，５０ｍｇＬ−イソロイシン　１．００ｍｇ 　２．００ｍｇ　２．００ｍｇ　２．ＯＯｍｇＬ−ロイシン１．００ｍｇ　２． ００ｍｇ　２．００ｍｇ　２．ＯＯｍｇＬ−フェニルアラニン　０．５０ｍｇ　 １．ｏＯｍｇ　１．００ｍｇ　１．ｏｏｍｇＬ−スレオニン　０．２５ｍｇ　０ ．５０ｍｇ　０．５０ｍｇ　０．５０ｍｇ注射用水を加えて　Ｉｎ／　１ｍ／　 Ｉｉ　１ｍ／製造方法は、得られた溶液を凍結乾燥しないでアンプル又は注射ビ ンに容器当たり０．５−の量で直接小分けすることだけが実施例３て用いた製造 方法と異なる。

使用前に、保存処理した十分に許容性のある次の組成の溶液０゜５ｄ又は１．０ ４でこれら注射溶液を希釈する：　５．　Ｏｍｇベンジルアルコール；　１．Ｏ ｄにするための注射用水。一方、塩化ベンザルコニウム（約０．Ｏ１〜０．０５ 　ｍｇ／ｉ）を加えたベンジルアルコール（約４〜５ｍｇ／ｍ／）の溶液を使用 することもてきる。

（来貢以下余白） 実施例６：　ｐＨ２，５のｒｈＧ−Ｃ８Ｆ溶液ｒｈＧ−Ｃ８Ｆ　Ｏ，１７５ｍｇ 塩化ナトリウム　１．５００ｍｇ ポリソルベートｓｏ　０．０５０ｍｇ アミノ酢酸　５．７５０ｍｇ 分析品質 １、−ｏイレン０．５００ｍｇ Ｌ−イソロイシ’、ｙ　０．５００ｍｇＬ−スレオニン　０．１２５ｍｇ Ｌ−グルタミン酸　０．１２５ｍｇ Ｌ−フェニルアラニン　０．２５０ｍｇ０、１モルＨＣ１０，０００ｍｇ 注射用水　＋４９３．０２５ｍｇ ０．５−の注射用水中に戻した溶液ＯｐＨ値：２．５使用前に、保存処理した十 分に許容性のある次の組成の溶液０゜５−又は１．０４でこれら注射溶液を希釈 する：　５．　Ｏｍｇベンジルアルコール、１．０−にするための注射用水。一 方、塩化ベンザルコニウム（約０．０１〜ｏ、　０５　ｍｇ／ｄ）を加えたベン ジルアルコール（約４〜５ｍｇ／＋＋＋／）の溶液を使用することもできる。

（来貢以下余白） 実施例７：　ｐＨ４，５のＧ−Ｃ５Ｆ製剤０．１モルＮ　ａ　ＯＨを加ＸＴ　ｐ Ｈ４，ａｔ−ｖ、　−−−−−（本頁以下余白） ｒ　ｈＧ−Ｃ８Ｆ　０．１７５ｍｇ 塩化ナトリウム　１．５００ｍｇ ポリソルベート８０　０．０５０ｍｇ アミノ酢酸　５，７５０ｍｇ 分析品質 り一ロイシン０．５００＋ｎｇ Ｌ−イソロイシン０．５００ｍｇ Ｌ−７，レオニン０．１２５ｍｇ Ｌ−グルタミン酸　０．１２５加ｇ Ｌ−フェニルアラニン　０．２５０ｍｇυ、１　−Ｃ／Ｖｎ　Ｌ、Ｅ　”Ｃ／Ｊ ｕ／し　ＬｐＨ３，８〜４．０に　°°°°“。

０．５−の注射用水中に戻した溶液のｐ　Ｈ値：３．９゜使用前に、保存処理し た十分に許容性のある次の組成の溶液０．５ｉ又は１．０−でこれら注射溶液を 希釈する：　５．　Ｏｍｇベンジルアルコール、１゜０−にするための注射用水 。一方、塩化ベンザルコニウム（約０゜Ｏ１〜０．０５　ｍｇ／　−）を加えた ベンジルアルコール（約４〜５ｍｇ／、ｄ）の溶液を使用することもできる。

緩衝能：　５．８　ミリモル／１ＮａＯＨ（５８ｍ／　Ｏ，Ｉ規定Ｎ　ａ　ＯＨ ）滴定酸度：１０ミリモに／１ＮａＯＨ（ｌ　ＯＯｙｄ　０．１規定Ｎａ０Ｈ） 実施例９・　ｐＨ値４のＧ−Ｃ８Ｆ製剤ｒ　ｈ　Ｇ　−ＣＳ　Ｆ　０．１７５ｍ ｇ　０．１７５ｍｇ　０．１７５Ｂ尿素　２．５００ｍｇ　０．２５０ｍｇ　Ｏ ，０００ｍｇ塩化ナトリウム　１．５００ｍｇ　１．５００ｍｇ　１．５００ｍ ｇポリソルベート８０　０．０５０ｍｇ　０．０５０ｍｇ　０．０５０ｍｇアミ ノ酢酸　３．７５０ｍｇ　５．５５０ｍｇ　５．７５０ｍｇ分析的に純粋 Ｌ−０イシン　０．５００ｍｇ　０．５００ｍｇ　０．５００ｍｇＬ−イソロイ ン：／　０．５００ｍｇ　０．５００ｍｇ　０．５００ｍｇＬ−スレオニン　０ ．１２５ｍｇ　０．１２５ｍｇ　Ｏ，１２５ｍｇＬ−グルタミン酸　０．１２５ ｍｇ　０．１２５ｍｇ　Ｏ，Ｉ２５ｍｇＬ−フｘニルアラニン　０．２５０ｍｇ 　０．２５０ｍｇ　０．２５０ｍｇ注射用水　＋４９２．５２５ｍｇ　＋４９２ ．９７５ｍｇ　４４９３．０２５ｍｇ滴定酸度・１０ミリモル／ｆＮａＯＨ（１ ００ｙｎｌ　０．１規定Ｎａ０Ｈ） 実施例１〜９に記載した製剤は、凍結乾燥体としてのみならす注射溶液としても 貯蔵に関して安定である。

国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　マークル、ハシス　ジェルクドイツ連邦共和国　ディー−６７ ０１エラースタット　アオフ　デア　クレー　６ （７２）発明者　ヴインター、ゲルハルトドイツ連邦共和国　ディー−６９１５ ドッセンハイム　ヤーンシュトラーセ　２０イー。

（７２）発明者　デムマー、フリッッ ドイツ連邦共和国　ディー−６９４５ヒルシュベルク／ロイターシャオセン、カ スタニーンヴエーク　２１

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．注射又は注入溶液として使用するためのヒトタンパク質を含有する保存処理 された医薬製剤の製造方法であって、該医薬製剤の製造中に少なくとも１種の保 存剤を２％までの濃度で添加し、所望により除去してもよい方法。
2. ２．保存剤が、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム 及びこれら物質の組み合わせの群から選ばれる、請求項１記載の方法。
3. ３．低いアレルギー率を有する保存剤であって、貯蔵可能な医薬製剤中に残存す るものを添加する、請求項１記載の方法。
4. ４．複数回投薬製剤を製造するための請求項３記載の方法。
5. ５．該医薬製剤の製造の過程で添加した保存剤を、貯蔵可能な医薬製剤を製造す る前に除去する、請求項１記載の方法。
6. ６．除去可能な保存剤が、クロロブタノール、ベンジルアルコール、ｐ−クロロ −ｍ−クレゾール、ピロ炭酸ジアルキル又はこれら物質の組み合わせの群から選 ばれる、請求項５記載の方法。
7. ７．保存剤とヒトタンパク質との間の接触が短時間である、請求項５又は６記載 の方法。
8. ８．ヒトタンパク質としてＥＰＯ又はＧ−ＣＳＦを用いる、請求項１〜７のいず れか１項に記載の方法。
9. ９．保存剤を約０．１〜約０．３％の濃度で用いる、請求項１〜８のいずれか１ 項に記載の方法。
10. １０．即投与可能な医薬製剤のｐＨ値が約２．０〜約７．４である、請求項１〜 ９のいずれか１項に記載の方法。
11. １１．医薬製剤の緩衝能を１０ｍＶａｌ／ｌまでの値に調節する、請求項１〜１ ０のいずれか１項に記載の方法。
12. １２．即投与可能な医薬製剤の滴定酸度を１５ｍＶａｌ／ｌまでの値に調節する 、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
13. １３．グリココール；クエン酸ナトリウム；リン酸アルカリ；炭酸アルカリ；ア ミノ酸の塩；リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸のアル カリ塩；又はこれら物質の組み合わせの群からの十分に許容性のある緩衝物質を 添加する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. １４．十分に許容性のある保存剤を０．０１〜２％の濃度で含有する、静脈内又 は皮下投与のためのヒトタンパク質を含有する医薬製剤。
15. １５．保存剤が、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウ ムであるか又はこれら物質の組み合わせからなる、請求項１４記載のヒトタンパ ク質を含有する医薬製剤。
16. １６．十分に許容性のある注射又は注入溶液の製造のための、請求項１〜１３記 載の方法で製造されたヒトタンパク質を含有する医薬製剤の使用。