JPH06511006A - 溶血予防 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 溶血予防 発明の分野 本発明は、血球、特に赤血球の損傷の予防に広く関する。さらに詳細には、本発 明は、溶血活性な薬理学的薬剤の存在または非存在下で、血球の望ましくない溶 血を予防するためのアニオンオリゴ糖の使用に関する。本発明は、また、このよ うなアニオンオリゴ糖を含む新規な非溶血性組成物、血液保存組成物および血液 製品にも関する。

発明の背景 溶血、ヘモグロビンの損失を生しる赤血球の構造の損傷は、一般に望ましくない ものである。溶血は、ある疾病状態の結果として、またはある治療剤の投与によ りｉｎ　ｖｉｖｏで生じ得る。ｉｎ　ｖｉｔｒＯては、血液、血液成分または溶 液、赤血球を含む組織または器官を操作中および保存中に溶血が誘導されうる。

種々の化学薬品または医薬品、並びにシリカ、クレー、アスベストなどの物質が 、それぞれ赤血球と接触して溶血を生じ得る。その溶血性により、望ましい薬理 学的性質を有するであろう多くの化合物および医薬品の使用が投与量において制 限され、または同時の使用が妨げられ得る。例えば、フェノチアジン化合物は０ ．１ｍＭのオーダー以上の濃度で溶血を誘導することが知られている。フェノチ アジン系の神経弛緩薬であるクロロプロマシンは０．５ｍＭ以上の濃度で溶血性 を示す。それ故、クロロプロマシンの医薬的使用は、より高濃度で生じるであろ う溶血副作用を避けるために、投与量が制限される。

β−シクロデキストリン１．０ｍＭを同時に使用するとクロロプロマシンの溶血 作用が抑制されることが以前に報告されている（Ｋ、　Ｕｅｋａｍａ　ｅｔ　ａ ｌ、　ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの薬物−誘導溶血に対するシクロデキストリンの保護 作用、クロロプロマシン誘導溶血および中枢神経系反応に対するシクロデキスト リンの作用、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｐｈａｒｖａｃｏｌ、、　３３ニア０７−７ ］０（＋９８１））　。薬物の溶血作用からの保護は、環状のドーナツ型のシク ロデキストリン分子の空洞中に対抗する分子を包接するンクロデキス）・リンの 能力のおかげで得られることが示された。このシクロデキストリンの内部錯体形 成能力は広く認識されていて（例えば、Ｌ　Ｓａｅｎｇｅｒ、　Ａｎｇｅｗ、　 Ｃｈｅｍ、Ｉｎｔ、　［！ｄ。

Ｅｎｇｌ、、　１９．３４４−３６２１９８０を参照されたい）、そしてそれに より可溶化された医薬化合物の移送に適用されている（例えば、Ｋ。

Ｕｅｋａｍａ、Ｆ、Ｈｉｒａｙａｍａ、Ｋ、Ｅｓａｋｉ、Ｍ、　Ｉｎｏｕｅ、Ｃ ｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、、　３７．７６−７０．１９７９を参照された い）。このような錯体形成のおかげで、含まれている薬物の外部の溶液濃度を減 少させ、そして、十分量の７クロデキストリンの存在下では、溶血に有効な臨界 濃度以下に減少できる。

溶血を抑制するシクロデキストリンの同様の使用が、他の医薬品について報告さ れている。以下の論文に例が記載されている；シクロデキストリン錯体形成によ る、チアムリン（Ｔｉａｒｎｕｌｉｎ）の筋肉内注射により誘導される局所刺激 の改善、Ｙ、　５ａｔｏ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｙａｋｕｇａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ、 　＋０２：９８４−８８０　（１９８２）；　ｉｎ　ｖｉｔｒｏでのフェノチア ジン神経弛緩薬により誘導される溶血に対するβ−シクロデキストリンの保護機 構、Ｔ、　Ｉｒ１ｅ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｄｙｎ、、　６： 　４０８−４１４　（１９８３）；およびフルルビプロフェン（Ｆｌｕｒｂｉｐ ｒｏｆｅｎ）の水性製剤により誘導される局所刺激に対するシクロデキストリン の保護効果、Ｋ、　Ｍａｓｕｄａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｙａｋｕｇａｋｕ　Ｚａｓ ｓｈｉ、１０４：１０７５−１０８２（１９８２）。

しかしながら、溶血を抑制するためのβ−シクロデキストリンの使用は制限され る。今や、β−シクロデキストリン自身が約２−３ｍＭ以上の濃度て溶血を生じ ることが良く認識されている。β−シクロデキストリンのある誘導体はさらに低 い濃度でさえ溶血を誘導する。例えば、ヒドロキシル基を０−メチル基で置換す る場合は、β−シクロデキストリン１ｍＭ以下のレベルで溶血が観察される（Ｔ 、１ｒｉｅ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊｒ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｄｙｎ、、　５ニア４ｌ −７４４（１９８２））。

シクロデキストリンの１モル量は、多くても１モル量、しかし一般に１モル量以 下の医薬ゲスト（ｇｕｅｓｔ）分子を包接することができるか、またはホスト（ ｈｏｓｔ）となることができることが当分野で良く知られている（上記のＳａｅ ｎｇｅｒとＵｅｋａｍａの文献を参照されたい）。保護され得る医薬品の量は、 それ故、シクロデキストリン濃度による溶血の開始により制限される。事実、前 述の文献で、医薬品の溶血活性を抑制すると報告されたβ−シクロデキストリン の有益な効果は、一様に１．５ｍＭ、および最も頻繁には１．０ｍＭ以下のβ− ７クロデキストリン濃度に基づいている。

溶血抑制剤としての使用とは別に、シクロデキストリンは特有の包接能力と水へ の溶解性のために、溶解性が制限されている医薬品と包接錯体を形成することに より、このような薬剤の溶解度を増加させるのに有用である。非常に低い溶解度 の医薬品または化学薬品の可溶化のためのシクロデキストリン包接の適用もまた 、もちろん、たとえ薬剤自身は溶血活性ではなくても、必要とするシクロデキス トリンの高濃度での溶血の開始により、達成できる可溶化の量において制限され る。

本発明の目的 従って、本発明の目的は、溶血刺激物質を含む媒体中で、赤血球に対する溶血作 用を防止する方法を提供することである。

本発明のもう１つの目的は、ヒトを含む哺乳類に投与する、溶血性の医薬的に活 性な薬剤を含む非溶血性組成物を提供すること度を有する化学薬品を含み、その 化学薬品の溶血活性が減少し、かつ、可溶化が増加している組成物を提供するこ とである。

さらに、本発明のもう１つの目的は、比較的非溶血性で、血液または血液含有製 品の貯蔵および保存に有用な組成物を提供することである。

本発明のこれらの、および池の目的、態様および有利な点は、以下の記載および 添付の請求の範囲を参照することにより、当業者には明らかとなろう。

発明の要約 今回、ヒドロキシル基をポリアニオン置換したシクロデキストリンは高い水性濃 度でち溶血活性を示さないことが見出された。

さらに驚くべきことに、これらの物質は、多種多様の溶血活性医薬品、ノリ力な との他の刺激物質、およびシクロデキストリン自身を含む非常に広範囲の溶血活 性物質の溶血作用から赤血球を保護することが発見された。

この発明は、血液または血液含有製品の保存および／または操作において生じ得 るような溶血を典型的に誘導する種々の薬剤の溶血作用から赤血球を保護する方 法を提供する。好ましい方法は、全血、血液溶液、血液含有製品、組織または器 官のいずれかに含まれる赤血球を、アニオンオリゴ糖を含む保護剤と接触させる 工程を含む。高度に好ましい実施態様によると、接触工程は、赤血球を、ポリア ニオンオリゴ糖を含む保護剤を含む等張溶液と接触させることを含む。

本発明は、さらに、溶血の可能性がある医薬品で治療する必要がある患者に投与 するための非溶血性組成物を提供し、この組成物は：（１）アニオンオリゴ糖お よび（２）上記の医薬品を含む。血液および／または血液含有製品の保存および 操作に典型的に付随する溶血誘導剤の作用から赤血球を保護するための組成物も また提供される。このような組成物は、好ましくはポリアニオンオリゴ糖および 血液保存に有用な１種以上の添加剤を含む。ある実施態様によると、このような 組成物は好ましくはポリアニオンシクロデキストリンとしてβ−シクロデキスト リンテトラデカスルフェートを含む。

発明の詳細な説明 本発明は、２つの重要な特性・（１）種々の溶血誘導剤により生じる溶血作用の 予防または実質的に抑制する能力、そして（２）固有の溶血活性の実質的な非存 在、を有する比較的単純で合成で良好に再現可能なオリゴ糖の発見に、少なくと も部分的に基づいている。特に、アニオンオリゴ糖および好ましくはポリアニオ ンオリゴ糖が一般にこれらの有益な特性を有していることが見出された。

ここで使用する場合、用語「アニオンオリゴ糖」は少なくとも１個のアニオン置 換基を有するオリゴ糖を意味し、そして用語［ポリアニオンオリゴ糖」は１分子 当たり２個以上のアニオン置換基を有するオリゴ糖を意味する。オリゴ糖は好ま しくは約５−約１０個の糖単位の糖であり、無置換の場合、約６５０−約１３０ ０の分子量を持つ。本発明のアニオン置換基を、既知で入手可能なアニオン置換 基の巨大な群から選択できることを意図するが、アニオン置換基はスルフェート 、カルボキシレート、ホスフェートおよびこれらの２個以上の組み合わせから成 る群より選ぶことが一般に好ましい。アニオン置換基もまた、糖単位当り約１． ５−約３個の置換基の範囲で分子中に存在するのが好ましい。特に好ましい組成 物は、糖単位当り約２個のスルフェート置換基を有するオリゴ糖に基つくもので ある。池の好ましい組成物は、置換基がスルフェートおよび／またはホスフェー ト置換基を含む、糖単位当り約２−約３個の置換基を有するオリゴ糖に基づいて いる。

オリゴ糖が一般にシクロデキストリンを意味するものが特に好ましい。それらは 、環またはトロイド形分子を形成し、それ故末端基を有さない一般に約６−約８ 個のグルコース単位の環状構造により特徴付けられる。

オリゴ糖は、グリコンド酸素原子を介して結合している、グルコース単位なとの 数個の糖単位の鎖である。ここで使用する場合、接頭語「オリゴ」は、一方で１ 個の、またはスクロースのように多くとも２個の単量体の糖単位、および１．他 方で２０個以上の糖単位で高分子量の多糖と比較して、糖または糖類単位の中程 度の数を意味する。全てのこのようなオリゴ糖は本発明の範囲内で機能できると 考えられるが、このオリゴ糖は好ましくは分子当り約５−約１０個の糖類単位を 有する。この範囲は約６５０−約１３００の範囲の分子量を有する無置換糖類に 相当する。分子当り約５＝約ｌθ個の糖類単位を有するオリゴ糖は、ここではし 、ばしば「単純」または「低分子量」オリゴ糖と呼ばれる。オリゴ糖は通常、広 範囲の大きさのオリゴ糖断片を生しる、デンプンまたはセルロースの分解手順に より得る。

生物学的に重要な、ある程度関連する族（ｆａＩ！ｆｌｙ）の物質はグリコサミ ノグリカンである。それらは、窒素、硫黄および酸素原子を含む多種の置換基に より修飾されていて、グルコサミン、イズロネート、グルクロネートなどの種々 のセグメントを含む多糖骨格を含む構造である。その構造はコンドロイクン、デ ルマタン、ヒアルロン酸、ヘパランスルフェートおよびヘパリンなどの、同一の 名前の群の異なる試料間で変化できる。各族は不均質、すなわち組成物の混合物 であることが知られている。その分子量は一般に１０．０００−２５．０００の 間の範囲である。多くの生物学的機能が、しばしばムコ多糖とも呼ばれている種 々のこのような物質に起因している。溶血の抑制の一例が、ヘパリンについて観 察されたと報告されているニアドリアマイシン−誘導ｉｎ　ＶｉｔｒＯ溶血のヘ パリン抑制、Ｆｏｌｌｅｚｏａ、　Ｊ、　Ｙ、、　Ｂｉｚｏｎ、　Ｍ、Ｇｉｃｑ ｕｅｌ、　Ｊ、　Ｂｉｏｍｅｄ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ、、　３６．３２ ６−３２８．１９８２゜今回、アニオン置換オリゴ糖、および特にアニオン置換 基を持つ単純な低分子量オリゴ糖が、赤血球を溶血作用から保護する著しい有効 性を有することが見いだされた。スルフェート化シクロデキストリンなどのアニ オン置換オリゴ糖の保護活性の発見は、シクロデキストリン自身と試験した多く のその誘導体がそれ自身溶血活性であることがが示されているので、特に驚くべ きことであった。

この発見の説明と本発明の背景として、図１は、非−置換オリゴ糖β−シクロデ キストリン（β−ＣＤ）および１４メチル基置換基を持つ非−アニオン置換オリ ゴ糖β−ＣＤ（β−ＣＤ−１４Ｍ）の、約０．４７％クエン酸ナトリウムを添加 した新鮮なヒト血液に対する溶血作用を図示する。溶血の開始はβ−ＣＤについ ては約６　ｍｇ／ｍｌ付近であり、β−ＣＤ−１４Ｍについては約２　ｍｇ／ｍ ｌ付近である（溶解度により制限される限界は２０℃で約１３−１８ｍｇ／ｍｌ 以下であるので、１３　ｍｇ／ｍｌ付近のβ−ＣＤのデータは信頼できない）。

図２はポリアニオン置換シクロデキストリン、β−シクロデキストリン−テトラ デカスルフェートナトリウム（β−ＣＤ−１４ｓ）と比較して、２種のヒドロキ シアルキル置換シクロデキストリンである、２−ヒドロキシエチル−β−シクロ デキストリン（Ｂ−ＣＤ−４−Ｅｔ）および２−ヒドロキシプロピル−β−シク ロデキストリン（Ｂ−ＣＤ−４Ｐｒ）の約０．４７％クエン酸ナトリウムを添加 した新鮮なヒト血液に対する溶血作用を図示する。図２に示すように、β−ＣＤ −１４ｓは数百ｍｇ／ｍｌの濃度でさえ望ましくない溶血性を示さない。試験し た高濃度での溶血の非存在を正確に示すために、β−ＣＤ−１４ｓについてのデ ータを報告するのに対数目盛りの使用が必要であったことに注目されたい。

比較的均一であることと化合物の製造の容易さ故に、少なくともある程度、アニ オン置換シクロデキストリンが好ましい。いずれの特定の操作理論にも拘束され 、または限定されることを意図するものではないが、鎖一様デキストランの可撓 性に比較してその構造の剛性のため、特に、糖加水分解が末端基で最も速い生物 学環境では寿命を増す末端基の欠如のために、本発明のアニオンオリゴ糖、特に 単純な低分子量アニオンオリゴ糖が特に有効であると考えられる。ヒドロキシル 基の代わりに約２個のアニオン基、好ましくはスルフェート基の添加後、それぞ れ、６．７および８グルコ一ス糖単位の環を有するシクロデキストリンを意味す る、接頭語α−１β−およびγ−を付して称されているシクロデキストリンが特 に好ましい。生じた好ましいポリアニオン置換オリゴ糖は約１６０〇−約４００ ０の分子量を有する。

本発明の方法と組成物が、β−ＣＤ−１４Ｍ　、β−ＣＤ−４−Ｂｔおよびβ− ＣＤ−４Ｐｒなとの溶血誘導シクロデキストリン組成物化合物自身の溶血作用を 予防し、それ故、そうでなければ溶血作用を生じるであろう濃度でこのようなシ クロデキストリンが他の有用な機能を果たすことがてきることが意外にもそして 重要にも発見された。さらに、特に、シクロデキストリン（ＣＤｓ）は薬理学的 および治療学的適用への使用が増大している。ＣＤｓは、６．７または８グルコ ビラノ一ス単位（それぞれα−１β−およびγ−シクロデキストリン）の環状ド ーナツ型オリゴ糖である。周辺に局在している多数のヒドロキシル基（グルコー ス単位当り３個）は水への溶解性を提供する。中心の空洞は疎水性で、包接によ り疎水性分子要素を錯体形成できる。このシクロデキストリンの構造を有利に使 用して、水に可溶の包接化合物を形成し２、それにより、制限されている溶解度 のために、そうでない場合に達成できるより多くの医薬品を水溶液中に保存、溶 解そして移送する方法を提供する。しかしながら、錯体を形成し、そして移送で きる薬剤の量は、これまで組成物中のホストンクロデキストリンの量により制限 されてきた。すなわち、これまで使用してきたＣＤｓは、溶解強化剤としてのそ の有用性を厳しく制限する溶血活性をそれ自身が有していた。

これまで使用してきたＣＤｓは、約２−３　ｍＭを上まわる濃度で溶血を起こす ことが分かっている。それ故、ＣＤｓの適用の可能性に関心が増しているにもか かわらず、溶血の誘導が、赤血球との接触を含むすべての目的に対する、その有 用性を制限するものであるとこれまで考えられてきた。非−アニオンβ−Ｃｄｓ の溶血作用を図１および２に図示する。図１に示すように、β−ＣＤおよびその メチル置換β−ＣＤ誘導体（β−ＣＤ−１４Ｍ）は、両者共、比較的低濃度、す なわちβ−ＣＤでは約６ｍｇ／ｍｌ　、モしてβ−ＣＤ−１４Ｍでは約２　ｍｇ ／ｗ＋１で赤血球の溶血を誘導する。ヒドロキシアルキル基は加水分解的溶血活 性を低下できるが排除できない。

図２は２種の他の非−アニオンＣｄｓ　、β−ＣＤ−Ｅｔおよびβ−ＣＤ−４Ｐ ｒの溶血作用をポリスルフェート化ＣＤ、β−ＣＤ−１４ｓのものと比較した研 究結果を図示する。エチルおよびプロピル置換弁−アニオンＣＤｓは低濃度て溶 血を誘導した。これに比べて、β−ＣＤ−１４ｓについては約３００　ｍｇ／ｍ ｌの高濃度でさえ、実質的に溶血は観察されなかった。

それ故、図２に示すように、ポリアニオンシクロデキストリンなどのポリアニオ ンオリゴ糖は実質的に溶血活性を示さないことが発見された。さらに、アニオン 置換オリゴ糖および好ましくはポリアニオン置換シクロデキストリンは、他の薬 剤により生じる溶血を抑制できることが発見された。それ故、本発明の組成物お よび方法により、溶解性の乏しい薬剤の移送に対する、シクロデキストリンの前 述の適用などの、非−アニオン置換シクロデキストリンの使用の改善または進展 が可能となる。

このことおよび以下の記載から、アニオンオリゴ糖および特にポリアニオンシク ロデキストリンなどのポリアニオンオリゴ糖は、血液および血液製品を望ましく ない溶血から保護する有効な手段を提供することが明らかであろう。

１、　方法 本発明の方法は、少なくともある程度は、ポリアニオンβ−シクロデキストリン などのアニオンオリゴ糖は、そうしなければ溶血を誘導する多数の薬剤の溶血作 用から赤血球を保護するのに有用であるという発見に基づいている。ここで使用 する場合、溶血誘導剤という用語は、赤血球の溶解を生しる傾向のあるすべての 化合物または組成物を意味する。当業者には知られているように、クロロプロマ シンおよび他のフェノチアジン、ペラジン（ｐｅｒａｚｉｎｅ）、チアムリン、 フルルビプロフェンなどの、ある治療剤および他の多くのものが溶血誘導剤であ る。血液および血液製品もまた、疾病状態、または、例えば、正常の血液保存に より生じるかもしれない外部刺激物質の侵入のために、血液内に存在する付随的 な刺激物質なとの他の溶血誘導剤と接触することがある。

それ故、本発明は、赤血球を溶血から保護するために、アニオンオリゴ糖および 好ましいポリアニオンオリゴ糖を使用する方法を提供する。本方法の１つの実施 態様によると、溶血誘導剤に晒された結果として溶血される赤血球を、溶血誘導 剤の溶血作用を減少させるのに有効な量のアニオンオリゴ糖および好ましくはポ リアニオンオリゴ糖に接触させる。他の実施態様では、本方法は溶血誘導剤を、 溶血誘導剤の溶血活性を減少させるのに有効な量のアニオンオリゴ糖および好ま しくはポリアニオンオリゴ糖に接触させることを必要とする。

本方法に起因する溶血の減少は、溶血誘導剤の特定の型と量なとのいくつかの因 子により、その範囲内で広く変化できることを意図する。し、かじながら、アニ オンオリゴ糖は、溶血誘導剤により生じる溶血を実質的に減少させるのに有効な 量で存在することが一般に好ましい。ある好ましい実施態様では、アニオンオリ ゴ糖は、本発明のオリゴ糖の非存在下て溶血誘導剤により生じる溶血に比較して 、溶血誘導剤により生じる溶血を少なくとも３０％減少させるのに有効な量で存 在する。

本発明のある好ましい実施態様では、本方法の接触工程は、赤血球をアニオンオ リゴ糖および好ましくはポリアニオンオリゴ糖を含む等張溶液と接触させること を含む。このような溶液中のアニオンオリゴ糖の濃度は、使用する溶血誘導剤の 型と量などの因子により、本発明の範囲内で広く変化できることを意図する。し かしながら、等張溶液中のアニオンオリゴ糖の濃度は約５　ｍｇ／ｍ！−約２０ ０１１１ｇ／ｍ１以上であることが好ましく、さらに好ましくは約２０ｍｇ／ｍ ｌ　−約１００ｍｇ／ｍｌである。

適切なポリアニオンオリゴ糖は、分子当り複数のアニオン、好ましくは糖単位当 り約２個以上の置換基で置換されているものを含む。以前に示したように、置換 基は好ましくはスルフェート、ホスフェート、カルボキシレートまたはそれらの 組み合わせを含み、スルフェートが好ましい。β−シクロデキストリンが、目下 、この目的のために好ましいオリゴ糖である。他の置換基もまた、好ましいアニ オンに加えて存在する。

！＋、組成物 本発明は、溶血誘導剤の溶血作用を予防するのに有用な組成物を提供する。さら に、本組成物は実質的に溶血活性を持たない。

これらの望ましい特性は、比較的高濃度で存在する場合でさえ実質的に溶血活性 が無いことにより特徴付けられる保護剤のその中への包接と、溶血誘導剤の溶血 活性を予防または実質的に抑制する能力により、本組成物に授けられたものであ ることが発見された。好ましい保護剤はアニオンオリゴ糖を含むことが発見され た。

ここに含まれる開示の観点から、当業者には、一般に保護剤、そして特にアニオ ンオリゴ糖は多種多様の適用に有益な効果を有しているであろうことが理解され よう。それ故、本発明の組成物は、各適用の特別な状況により、多数の変化した 形態を取れることを意図する。保護剤は固体火剤または液体溶液中に混合できる 。

さらに、保護剤を種々の方法で利用し、または投与できることが理解されよう。

例えば、保護剤を、溶血誘導剤を含む同一の組成物中に含ませることができ、ま たは別の組成物中に包含させ、溶血誘導剤と同時投与できる。それ故、一般に、 本発明の組成物は、好ましくは保護剤および前記保護剤のための適切な無毒性の 生理学的に許容できる担体を含む。ここで使用する場合、担体という用語は、溶 血の抑制のための本組成物の投与または使用を促進する物質を広く意味する。あ る実施態様では、保護剤と溶血誘導剤を同一の担体に包含させる。他の実施態様 では、担体成分は保護される血液を含んでもよい。このような実施態様では、保 護剤は、後に血液に導入されうる溶血剤から血液を保護するために存在できる。

全てのこのような担体を含む組成物は本発明の範囲内にある。

（本頁以下余白） Ａ、非溶血性組成物 本発明は、ヒトを含む哺乳類への投与に適した、少なくとも１種の水溶性で医薬 的に活性な溶血誘導剤およびポリアニオンオリゴ糖（好ましくは、シクロデキス トリンである）を含む、非溶血性組成物を提供する。上記のオリゴ糖は、好まし くは、そのような溶血誘導剤の溶血作用を実質的に減少させるのに有効な量で組 成物中に存在する。一般に、上記の組成物は、アニオンオリゴ糖の非存在下での 該薬剤の溶血活性に対して、少なくとも約３０％溶血を減少させるのに有効な量 でアニオンオリゴ糖を含む。

また、本発明は、水溶性に乏しく医薬的に活性な薬剤およびアニオンオリゴ糖を 含み、組成物の溶血活性を増加させることなく、該薬剤の溶解度を改善するため の組成物を提供する。このような組成物は、随意に、他の溶解度強化剤を含んで もよい。非アニオンシクロデキストリンのような、溶血活性を有する溶解度強化 剤を含有する組成物については、アニオンオリゴ糖が、組成物の溶血活性を実質 的に減少させる（例えば、アニオンオリゴ糖の非存在下での該組成物の溶血活性 に対して少なくとも約３０％）のに有効な量で、存在することが好ましい。

上記したように、本発明の有効な組成物は、水や通常生理食塩溶液のような、無 毒性で生理的に許容できるに違いない適当な担体中でよく投与される。活性な薬 剤の混合物を含有する組成物を用いることもてきる。使用するポリアニオンオリ ゴ糖の量は、減少させるべき溶血活性のレベルに依存するであろう。しかし、担 体が水溶液を含む組成物については、上記の量は、好ましくは約５〜約２００＋ ｎｇ／ｍｌ、より好ましくは約ｌＯ〜約１００ｍｇ／ｍｌの溶液濃度となるよう なものであろう。

シクロデキストリンは、好ましいオリゴ糖である。特に、そのアニオン生成物の 有効性や、シクロデキストリン出発原料が比較的人手しやすいことから、β−シ クロデキストリンが好ましい。

最も有効で、それ故事も望ましいアニオンシクロデキストリンは、分子当たり少 なくとも約１０個のスルフェート基を有する（糖中位当たり１．４個以上のスル フェート基に相当する）ものである。

β−シクロデキストリンテトラデカスルフェートは、本発明の目的においてまた 本発明の目的のために、好ましくかつ望ましい物質である。それは、単位当たり 平均約２個のスルフェート基を有する７個の糖単位を持つ環状オリゴ糖を表す。

Ｂ、血液および血液製品製剤の保存に有用な組成物本発明のもうひとつの実施態 様に従って、本アニオンオリゴ糖の非溶血性を利用して、赤血球を含有する物質 の溶血を予防するか、または、実質的に抑制するのに有用な組成物を提供する。

例えば、本組成物は、血液含有製品、組織または器官の保存や操作の関連におい て有用である。本発明の血液保存組成物は、好ましくは、ポリアニオンオリゴ糖 および少なくとも１種の血液保存添加剤を含む。このような組成物は、好ましく は、アニオンオリゴ糖を該アニオンオリゴ糖の非存在下で組成物の有効寿命に対 して少なくとも約２０％血液保存組成物の有効寿命を延長するのに有効な量で含 む。ポリアニオンシクロデキストリンは好ましいオリゴ糖である。

本発明の血液製品は、赤血球およびアニオンオリゴ糖を含む。

このような血液製品は、さらに、血液保存添加剤を含んでもよい。

血液保存添加剤は、一般に、抗凝固剤および栄養成分を含む。典型的な添加剤と しては、塩化ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、グルコース、燐酸二 水素ナトリウム、グリセリン、葉酸エマルジョン、アデニンおよびＬ−アスコル ビン酸ホスフェートが挙げられるが、当業者に知られているいがなる添加剤も意 図される。組成物中の血液保存添加剤の濃度は、血液製品の量や添加剤または使 用されるそれらの組み合わせの性質を含むファクターの組み合わせに依存する。

例えば、クエン酸ナトリウムを含有する溶液中で保存される１バインドの体積の 血液については、約ｌＯ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度が適当である。このような 添加剤の有効量を決定は、当業者の範囲内でよ（考慮される。適当な好ましいポ リアニオンシクロデキストリンは、前記したものと同じである。

ＩＩｌ、実施例 以下の実施例により本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例により限定さ れるものではない。他に明言しない限り、溶血活性は１．　Ｊｏｄａｌ　ら、　 Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ ｎａｌＳｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ、　０．　Ｈｕ ｂｅｒおよびＪ、　５ｚｅｊｔｌｉ、　Ｅｄｓ、。

４２１−４２５．　Ｋｌｕｗｅｒ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、 　Ｂｏｓｔｏｎ　（１９８８）に記載の方法により測定した。上記文献は、参考 のため本明細書に包含されるものとする。

以下の実施例の各々について、クエン酸ナトリウム約０．４７％を研究室の健康 な職員から採取した新鮮なヒト血液に添加した。遠心分離（１０分間、４００Ｘ Ｇ）して他の血液成分から赤血球を分離した後、上清の赤血球画分を再遠心分離 し、等張なリン酸緩衝液で２回洗浄し、た。この赤血球をその緩衝液で１０％へ マクリット値まで希釈しで、赤血球懸濁液を得た。試験物質および赤血球を以下 のようにして混合した。約３．６．１．８および０．９ｍｌの試験物質溶液を、 それぞれ、約０．４．０．２およびＯ，１ｍｌの赤血球懸濁液と混合し、その後 、各々約３７℃で約１５分間インキュベートし、次いで、各々を約４０００　Ｇ で２分間２回遠心分離した。得られた上清の５４３ｎｍにおける吸光度をＧｌｌ ｆｏｒｄ分光光度計を用いて測定した。

溶血％は、２つの対照試料を参照して決定した。第１試料は、赤血球および等張 な塩化ナトリウム水溶液を含んでいた。この第１試料をゼロブランクとした。第 ２試料は、第１試料と同じであったが、　１００％の溶血値を与えるように超音 波処理した。

Ａ、実施例１〜９ 以下の実施例は、フェノチアジン誘導体および神経弛緩薬であるクロロプロマン ン（ＣＰ　Ｚ）の強い溶血作用を例証する。

実施例１〜４は、ＣＰＺの強い溶血活性を例証するものであり、この活性からす ると、ＣＰＺの濃度が０．５　ｍｇ／ｍｌに達すると完全な溶血が導かれる。

実施例５〜９は、実施例１〜４における知見とは対照的に、β−シクロデキスト リンポリスルフェート（１分子当たり１４個のスルフェート基を有するＣＤ）を 添加した場合、どれ程のより高いＣＰＺ濃度が許容されるかを示す。

表２ ＣＰＺ濃度　ＣＤＳ濃度　溶血 実施例　＃　Ｂ／ｍｌ　ＩＩＩｇ／＋ｎｌ　％５　１、０　５０　５．９ ６　２、０　５０　９０ ７　２、０　６０　７３ 約７０ｍｇ／ｍｌのＣＤＳの使用は、約２．０　ｍｇ／ｍ！濃度のｃｐｚの使用 で溶血作用を無視てきるようにするのに十分であるようだが、ＣＤＳの添加がな い場合は、このＣＰＺ濃度の約１７５でほぼ完全な溶血が起こる（実施例４）。

Ｂ、　実施例１０−１３ これらの実施例は、未置換のβ−シクロデキストリン（ＣＤ）自体の約１５ｍｇ ／ｎｌの溶液に対する増加する量のβ−ＣＤ−１４ｓの溶血抑制作用を例証して いる。表３に示されるように、５０＋ｎｇ／ｎｌの濃度で、β−ＣＤ−１４ｓは 、溶血レベルを約４１％減少させ、１５０　ｍｇ／ｍｌの濃度で溶血を約９０％ 近くから約３％に、すなわち、約３０倍減少させた。

＋０　１５　０　９０ Ｃ１実施例１４〜■に れらの実施例は、７５＋ｎｇ／ｍｌ　ヒドロキノプロピルシクロデキストリン（ Ｐｒ　０Ｈ−ＣＤ）の溶液に対する増加する量のβ−ＣＤ−１４ｓの溶血抑制作 用を例証している。表４に示されるように、１００ｍｇ／ｍｌのβ−ＣＤ−１４ ｓの濃度で、わずか３％の溶血が観察された。β−ＣＤ−１４ｓの非存在下で、 ６４％の溶血が観察されたことと比較すると、少なくとも２０倍の改善、すなわ ち、溶血の減少が示された。

実施例１〜９は、スルフェート化したオリゴ糖、β−シクロデキストリンポリス ルフェート（ＣＤＳ）が、溶液中の医薬品により生じる溶血を抑制する能力を例 証した。実施例１０〜１３は、ポリアニオンオリゴ糖の、未置換のシクロデキス トリンにより誘導された溶血を抑制する類似の能力を例証し、実施例１４〜１６ は、溶血が非アニオン置換シクロデキストリンにより生じたときの同じ抑制を例 証した。

以下の実施例は、全く異なる族の溶血刺激物質、すなわち、分散として存在する 固体の非溶解性の粒子により誘導される溶血に対する、本発明のアニオン糖によ る保護の類似の能力を例証する。

溶血刺激物質としては、シリカ、シリケート、クレー、アスベスト等が最もよく 知られている。

実施例１７〜１９は、クレー粒子に対する保護能力を例証する。これらの実施例 で使用したクレーはモンモリロン石（ミネラルコロイドＢＰ、　５ｏｕｔｈｅｒ ｎ　Ｃ１ａｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製、ゴンザール、テキサス州）である。モンモ リロン石を選択したのは、Ｄ、　Ｌ　０ｓｃａｒｓｏｎらにより、”Ｌｙｓｉｓ 　ｏｆ　Ｅｒ１ｔｈｒｏｃｙｔｅｓ　ｂｙ　５ｉｌｉｃａｔｅ　Ｍｉｎｅｒａｌ ｓ、”　Ｃ１ａｙ　ａｎｄＣｌａｙ　Ｍｉｎｅｒａｌｓ、　Ｖｏｌ、　３４．　 ｐａｇｅｓ　７４−８０　（１９８６）に例示されるように、それが典型的な高 い溶血活性を有することが知られているからである。

（本頁以下余白） 表５ クレー　ＣＤＳ　溶血 実施例　＃　ｍｇ／ｍｌ　ｍｇ／ｍｌ　％（＊）１４　１７　１．５　０　６４ ．　６６、　７６１５　１８　１．５　２５　４４，５４．５３１６　１９　１ ．５　５０　２２，２０．２０（＊）３セツトの実行から得たデータ 実施例１−１９に例証された知見を合わせると、組成的に全く異なる種々の溶血 刺激物質に対する本発明においてもたらされた保護作用の有効性が実証された。

事実、上記のデータをよく調べると、実質的に溶血を減少させる本発明の保護薬 剤の有効濃度の量的規模は、多岐にわたる刺激物質すべてについて極めて同程度 であることが示されている。このことは、本発明の材料の作用は赤血球に対する ものであって、刺激物質の特定の化合物構造に対する特定の作用であるようには 思われない。

理論に拘泥したり、また、ある種の刺激物質についての例外の可能性を退けるこ とは望まないが、本発明のオリゴ糖の使用について観察される最も有効な濃度は 、約５〜約２００＋ｎｇ／ｎｌ、好ましくは、約２０〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃 度の使用である。

さらに以前に指摘したように、それらの分子錯体形成や包接能力の利点により、 シクロデキストリンおよびその誘導体のいくつかを使用して、水溶液に対して溶 解性の低い医薬品を保持させた。

また、その際、それらが溶血作用を有するとしても、その溶血作用に対して限ら れた保護が提供された。その原理の適用は、担体または保護剤として採用された そのシクロデキストリンの既知の溶血作用により、濃度において限定されるもの ではない。このことは、特に、以下の実施例２０〜２３によって例証される。

２０　０．５　１．５　５．０　４．０　２．７　６．５２１　０．７５　２． ２５　７．５　６．０　２．７　２１２２　１．０　３．０　１０　８．０　２ ．７　８０２３　１、０　３．　Ｏ＋　５０　ｍｇ／ｍｌ　ＣＤ５−　８．５０ 、５　ｍｇ／＋ｎｌのｃｐｚは１００％近い溶血を引き起こすので、β−シクロ デキストリン（ＣＤ）は、ＣＰＺによる加水分解からのかなりの保護作用を呈す ることが実施例２０かられかる。従来技術によると、この保護作用は、過剰モル 量のβ−シクロデキストリンにおける錯体形成および包接によりもたらされる。

実施例２１および２２は、上記したように、保護剤はそれ自体、溶血活性となる から、より高濃度で試みると、これと同じ保護作用が喪失することを示している 。しかし、実施例２３は、薬剤（ＣＰ　Ｚ）および本発明のアニオン保護剤（Ｃ ＤＳ）の両方の最も高い濃度において、どの程度その組成物が実質的に溶血活性 を減少させるかを示している。

これらの結果および例証から、ポリアニオンオリゴ糖を血液に接触する組成物に 添加することは、種々の理由による溶血作用↓こ対する赤血球の保護に有効であ ることが明らかである。従って、溶血が起こりうる種々の適用において、例えば 、医薬目的、溶解性または溶解性の乏しい医薬品（そのような薬剤の溶解度や他 の性質を助ける添加剤を用いる場合も用いない場合も）の移送目的、あるいは、 赤血球の貯蔵および保存のための組成物の働き（こお０て、および、溶血の抑制 がもたらされるような他の適用にお０て、本発明を溶血に対する保護のために使 用すること力（意図される。

本発明における好ましい物質は、約５〜約ｌＯ糖単位の第１ノゴ糖である。アニ オン置換の好ましい程度は、糖単位当たり少なくとも約１．５のアニオン置換で ある。この目的のために好ましく１糖ｃｔ環状オリゴ糖である。好ましい型のイ オン置換はスルフェートおよびホスフェートである。使用濃度は、一般に、約５ 〜約２００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、約２０〜約１００ｍｇ／ｎｌであろう。好 まし０具体的な物質は、シクロデキストリン１分子当たり少なくとも約ｌＯのア ニオン置換、好ましくは、スルフェートを有するβ−シクロデキストリンである 。

ｍｇ／ｍｔ 補正書の写しく翻訳文）提出書 （特許法　第１８４条の７第１項） 平成６年　３月２２日

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. １．赤血球をアニオンオリゴ糖と接触させる工程を含む、赤血球の溶血を予防す る方法。
2. ２．アニオンオリゴ糖がポリアニオンオリゴ糖を含む、請求の範囲第１項記載の 方法。
3. ３．ポリアニオンオリゴ糖が約５〜約１０個の糖単位を有する、請求の範囲第２ 項記載の方法。
4. ４．オリゴ糖が糖単位当たり約１．５〜約３．０個のアニオン基を有する、請求 の範囲第１項記載の方法。
5. ５．アニオン成分が、スルフェート、カルボキシレート、ホスフェートおよびこ れらの２種以上の組み合わせから成る群より選択される、請求の範囲第１項記載 の方法。
6. ６．ポリアニオンオリゴ糖が、分子当たり少なくとも約１０個のホスフェート基 の置換基を有するβ−シクロデキストリンポリスルフェートである、請求の範囲 第２項記載の方法。
7. ７．接触工程が、約５〜約３００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポリアニオンオリ ゴ糖を含有する等張溶液と赤血球を接触させることを含む、請求の範囲第２項記 載の方法。
8. ８．ポリアニオンオリゴ糖が約２０〜約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請 求の範囲第７項記載の方法。
9. ９．溶血活性であることが知られている少なくとも１種の医薬品およびアニオン オリゴ糖を含む、ヒトを含む哺乳類への投与に適した組成物。
10. １０．組成物が等張溶液を含み、アニオンオリゴ糖が約２０〜約１５０ｍｇ／ｍ ｌの濃度で存在する、請求の範囲第９項記載の組成物。
11. １１．アニオンオリゴ糖が、分子当たり少なくとも約１０個のスルフェート置換 基を有するシクロデキストリンである、請求の範囲第１０項記載の組成物。
12. １２．少なくとも１種の医薬的に活性な薬剤および該薬剤と錯体形成するのに適 したアニオンオリゴ糖を含む、組成物。
13. １３．アニオンオリゴ糖がシクロデキストリンである、請求の範囲第１２項記載 の組成物。
14. １４．組成物が等張溶液を含み、アニオンオリゴ糖が約１０〜約２００ｍｇ／ｍ ｌの濃度で存在する、請求の範囲第１２項記載の組成物。
15. １５．アニオンオリゴ糖を含む、血液または赤血球含有血液製品。
16. １６．塩化ナトリウム、塩化カリウム、シトレート、クエン酸、サッカリン、グ リセリン、アデニン、有機酸ホスフェートおよびこれらの混合物から成る群より 選択される血液保存添加剤をさらに含む、請求の範囲第１５項記載の血液または 血液製品。
17. １７．アニオンオリゴ糖がシクロデキストリンである、請求の範囲第１５項記載 の血液または血液製品。
18. １８．アニオンオリゴ糖が分子当たり少なくとも約１．５個のスルフェート置換 を有し、約１０〜約２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求の範囲第１５項記 載の血液または血液製品。
19. １９．アニオンオリゴ糖および該アニオンオリゴ糖に対する生理的に許容できる 担体を含む組成物。
20. ２０．組成物が実質的に非溶血性の組成物であり、担体が血液または血液含有製 品を含む、請求の範囲第１９項記載の組成物。
21. ２１．組成物が溶血誘導剤の赤血球に対する溶血作用を予防するか、または実質 的に抑制するためのものであり、該組成物がさらに溶血誘導剤を含む、請求の範 囲第１９項記載の組成物。
22. ２２．担体が等張溶液を含む、請求の範囲第２１項記載の組成物。
23. ２３．担体が血液または血液含有製品を含む、請求の範囲第２１項記載の組成物 。
24. ２４．担体が等張溶液を含み、溶血誘導剤が医薬品を含む、請求の範囲第２１項 記載の組成物。
25. ２５．アニオンオリゴ糖が、該アニオンオリゴ糖の非存在下での溶血誘導剤の溶 血活性に対して少なくとも約３０％該溶血誘導剤の溶血活性を減少させるのに有 効な量で存在する、請求の範囲第２１項記載の組成物。
26. ２６．アニオンオリゴ糖が、該アニオンオリゴ糖の非存在下での溶血誘導剤の溶 血活性に対して少なくとも約２５％該溶血誘導剤の溶血活性を減少させるのに有 効な量で存在する、請求の範囲第２２項記載の組成物。
27. ２７．アニオンオリゴ糖が約１０〜約２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求 の範囲第２２項記載の組成物。
28. ２８．アニオンオリゴ糖がポリアニオンシクロデキストリンを含む、請求の範囲 第１９項記載の組成物。