JPH0653674B2 - 傷治癒 - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/30—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
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- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は傷の治癒に関する。
背景技術 成長因子は標定細胞の定義された集団を刺激するポリペ
プチドホルモンである。成長因子の例としては血小板由
来成長因子(PDGF)、インシュリン様成長因子(IGF-I)、
トランスホーミング成長因子ベータ(TGF−β）、トラン
スホーミング成長因子アルファ(TGF−α）、上皮成長因
子(EGF)および線維芽細胞成長因子(FGF)が挙げられる。
プチドホルモンである。成長因子の例としては血小板由
来成長因子(PDGF)、インシュリン様成長因子(IGF-I)、
トランスホーミング成長因子ベータ(TGF−β）、トラン
スホーミング成長因子アルファ(TGF−α）、上皮成長因
子(EGF)および線維芽細胞成長因子(FGF)が挙げられる。
TGF−βは多くの型の細胞で合成され、PDGFと同様の量
ヒトの血小板に隠れている多機能制御ポリペプチドであ
る。TGF−βの生物体外での生物効果は他の成長因子の
存在に依存している：PDGF存在下ではTGF−βは線維芽
細胞の増殖を刺激し、EGF存在下では線維芽細胞を阻害
する(Robertsら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA82：119)。TGF
−βは生物体外では上皮細胞の増殖を阻害するが、生物
体内では傷部分に注入された場合DNA、総タンパク質お
よびコラーゲン合成を促進する(Spornら1986,Science21
9：1329)。切開傷の破断強度はTGF−βの投与後、投与
量に依存した様子で増加する(Mustoeら、Science237：1
333)。
ヒトの血小板に隠れている多機能制御ポリペプチドであ
る。TGF−βの生物体外での生物効果は他の成長因子の
存在に依存している：PDGF存在下ではTGF−βは線維芽
細胞の増殖を刺激し、EGF存在下では線維芽細胞を阻害
する(Robertsら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA82：119)。TGF
−βは生物体外では上皮細胞の増殖を阻害するが、生物
体内では傷部分に注入された場合DNA、総タンパク質お
よびコラーゲン合成を促進する(Spornら1986,Science21
9：1329)。切開傷の破断強度はTGF−βの投与後、投与
量に依存した様子で増加する(Mustoeら、Science237：1
333)。
IGF−Ｉは始めから肝臓中で合成され、血漿中へ分泌さ
れる。生物体外では、IGF−Ｉは間葉および上皮細胞の
両方においてのDNA合成を促進できる(Van Wyk 1984、ホ
ルモン様タンパク質およびペプチド Li編集）。生物体
内へIGF−Ｉを加えるとそれ自身だけでは傷の治癒を促
進しないが、PDGFと共に加えた場合、その組合せは結合
組織および上皮の増殖を促進する(Lynchら、1987,Proc.
Natl.Acad,Sci.,USA84：7696)。
れる。生物体外では、IGF−Ｉは間葉および上皮細胞の
両方においてのDNA合成を促進できる(Van Wyk 1984、ホ
ルモン様タンパク質およびペプチド Li編集）。生物体
内へIGF−Ｉを加えるとそれ自身だけでは傷の治癒を促
進しないが、PDGFと共に加えた場合、その組合せは結合
組織および上皮の増殖を促進する(Lynchら、1987,Proc.
Natl.Acad,Sci.,USA84：7696)。
発明の開示 一般的には、本発明は精製TGF−βおよび精製IGF−Ｉの
組合せを含む組成物の有効量を傷に投与することによ
り、哺乳類における（例えばヒト患者）外傷の治癒を特
色とする。好適にはTGF−βはヒトTGF−βであるが、別
の哺乳類種例えばブタのものでもよい。TGF−βは天然
の源（例えば血小板）から単離できるが、より好適には
組換え体細胞により産生される。IGF−Ｉは組換え体DNA
技術または固相ペプチド合成を用いて産生できる。
組合せを含む組成物の有効量を傷に投与することによ
り、哺乳類における（例えばヒト患者）外傷の治癒を特
色とする。好適にはTGF−βはヒトTGF−βであるが、別
の哺乳類種例えばブタのものでもよい。TGF−βは天然
の源（例えば血小板）から単離できるが、より好適には
組換え体細胞により産生される。IGF−Ｉは組換え体DNA
技術または固相ペプチド合成を用いて産生できる。
本発明の組成物は少くとも部分的に上皮および結合組織
の増殖および総タンパク質およびコラーゲンの合成を促
進することにより傷の治療を助ける。本発明の組成物を
用いる傷治癒は、無処置（即ち外因性の薬を投与しない
で）または精製IGF−Ｉ単独または精製TGF−β単独での
処置により達成されるよりもっと効果的である。
の増殖および総タンパク質およびコラーゲンの合成を促
進することにより傷の治療を助ける。本発明の組成物を
用いる傷治癒は、無処置（即ち外因性の薬を投与しない
で）または精製IGF−Ｉ単独または精製TGF−β単独での
処置により達成されるよりもっと効果的である。
本発明の好適な実施態様において、本組成物は薬学的に
許容できる担体物質、例えば市販の入手可能な不活性ゲ
ルまたは液体（例えばアルブミンまたはメチルセルロー
スを補給した塩溶液）中へ精製されたIGF−ＩおよびTGF
−β（両方とも市販品として入手可能）を混合すること
により調製される。最も好適には精製されたIGF−Ｉお
よびTGF−βは重量−重量比で１：４から４：１の間
で、好適には１：２および２：１の間で、より好適には
１：１または２：１で混合される。精製TGF−βはヒト
血小板からまたは、組換えDNA技術により得られるであ
ろう。それ故、術語“TGF−β”は血小板由来および哺
乳類、好適には霊長類起源（最も好適には霊長類はヒト
であるが、チンパンジーまたは他の霊長類でもよい）の
組換え体物質の両方を意味するつもりである。組換え体
TGF−βは組換え体モノマーまたはホモダイマーであり
得、培養原核または真核細胞のサブユニットをコードし
ているDNA配列内へ挿入し、放置して細胞により翻訳さ
れたサブユニットを発現させホモダイマーを形成させる
ことにより作製された。
許容できる担体物質、例えば市販の入手可能な不活性ゲ
ルまたは液体（例えばアルブミンまたはメチルセルロー
スを補給した塩溶液）中へ精製されたIGF−ＩおよびTGF
−β（両方とも市販品として入手可能）を混合すること
により調製される。最も好適には精製されたIGF−Ｉお
よびTGF−βは重量−重量比で１：４から４：１の間
で、好適には１：２および２：１の間で、より好適には
１：１または２：１で混合される。精製TGF−βはヒト
血小板からまたは、組換えDNA技術により得られるであ
ろう。それ故、術語“TGF−β”は血小板由来および哺
乳類、好適には霊長類起源（最も好適には霊長類はヒト
であるが、チンパンジーまたは他の霊長類でもよい）の
組換え体物質の両方を意味するつもりである。組換え体
TGF−βは組換え体モノマーまたはホモダイマーであり
得、培養原核または真核細胞のサブユニットをコードし
ているDNA配列内へ挿入し、放置して細胞により翻訳さ
れたサブユニットを発現させホモダイマーを形成させる
ことにより作製された。
ここで使用する術語“精製された”とは互に混合する前
にIGF−ＩまたはTGF−βが重量で95％より上であり、即
ち、IGF−ＩまたはTGF−βは天然に付随している他のタ
ンパク質、脳質および炭水化物を実質的に含んでいな
い。
にIGF−ＩまたはTGF−βが重量で95％より上であり、即
ち、IGF−ＩまたはTGF−βは天然に付随している他のタ
ンパク質、脳質および炭水化物を実質的に含んでいな
い。
精製されたタンパク質調製試料は一般に、IGF−Ｉまた
はTGF−βの各々の成分に対しポリアクリルアミド上、
単一の主たるバンドを与えるであろう。最も好適には、
本発明の組成物中に使用される精製IGF−ＩおよびTGF−
βはアミノ末端アミノ酸配列分析で判断された場合純粋
であった。
はTGF−βの各々の成分に対しポリアクリルアミド上、
単一の主たるバンドを与えるであろう。最も好適には、
本発明の組成物中に使用される精製IGF−ＩおよびTGF−
βはアミノ末端アミノ酸配列分析で判断された場合純粋
であった。
本発明の組成物は哺乳類の外傷（例えばじょく槍、裂傷
および熱傷）の治癒の為のすばやく、有効な方法を提供
する。組成物は自然治癒（即ち何の外因性の薬剤も与え
ない）または純粋なIGF−ＩまたはTGF−β単独に比較し
て結合組織の形成を促進する。純粋なTGF−β単独と異
なり、本組成物は新しい上皮組織および結合組織の両方
の有意の増加を促進する。得られた上皮層は自然治癒ま
たはTGF−β単独により作られるものより厚く、新しい
結合組織へそれを結合させているより多くの上皮突出物
をまた含んでいる：それ故より堅固に結合し保護的であ
る。
および熱傷）の治癒の為のすばやく、有効な方法を提供
する。組成物は自然治癒（即ち何の外因性の薬剤も与え
ない）または純粋なIGF−ＩまたはTGF−β単独に比較し
て結合組織の形成を促進する。純粋なTGF−β単独と異
なり、本組成物は新しい上皮組織および結合組織の両方
の有意の増加を促進する。得られた上皮層は自然治癒ま
たはTGF−β単独により作られるものより厚く、新しい
結合組織へそれを結合させているより多くの上皮突出物
をまた含んでいる：それ故より堅固に結合し保護的であ
る。
本発明の他の特色および利点はその好適な実施態様の以
下の説明から、および請求の範囲から明らかにされるで
あろう。
下の説明から、および請求の範囲から明らかにされるで
あろう。
発明を実施する為の最良の形態 本発明の好適な実施態様をここで説明する。
例えばじょく槍および熱傷のごとき外傷が本発明に従っ
てIGF−Ｉ／TGF−βにより処置される。組換え体ヒトIG
F−Ｉはアムジェン・バイオロジカル（サウザント オ
ークス，CA)から市販品として入手可能である。精製ヒ
トおよびブタTGF−βはＲ＆ＤシステムInc.（ミネソ
タ，MN)から市販品として入手可能である。
てIGF−Ｉ／TGF−βにより処置される。組換え体ヒトIG
F−Ｉはアムジェン・バイオロジカル（サウザント オ
ークス，CA)から市販品として入手可能である。精製ヒ
トおよびブタTGF−βはＲ＆ＤシステムInc.（ミネソ
タ，MN)から市販品として入手可能である。
TGF−βはヒトまたはブタ血小板からAssoianの方法(198
3,J.Biol.Chem.258：7155)により精製された。簡単に記
すと、血漿タンパク質を除去するため血小板に富む血漿
（20-30単位、２−５日経たもの）を遠心分離（3200xg、
30分、４℃にて）した。血小板は次に500mlのトリス−H
Cl／クエン酸緩衝液にて２度洗浄し、再遠心分離を行っ
た。洗浄した血小板を酸性エタノールの溶液に加え直ち
にホモゲナイザー中で抽出した。４℃に一夜インキュベ
ーションした後、沈殿したタンパク質は遠心分離により
除去し、上澄液はNH4OHを用いてpH3に調整した。エタノ
ール（２倍容量、０℃にて）およびエチルエーテル（４
倍容量０℃にて）を加えるとTGF−βが沈殿した。沈殿
物を遠心分離にて集め、1N酢酸(10ml)に懸濁させた。遠
心分離により沈殿から上澄液を分離し、1M酢酸で平衡化
され、流速20ml／時間のバイオーゲルP60ゲル濾過カラ
ム(4.4×115cm)上に負荷した。５ミリリットルの分画を
集めBALB/MK細胞の増殖阻害および非腫瘍性NRK線維芽細
胞の足場非依存性増殖を用いて生物活性を検定した。ピ
ーク活性を含む分画を集め、凍結乾燥し、8M超純粋尿素
（シュワルツ／マン）を含む0.5mlの1M酢酸に再溶解
し、バイオーゲルP60カラム(1.6×85cm)上３ml／時間の
流速でゲル濾過した。カラム分画の一部を前記のごとく
してTGF−β活性を試験した。ピークTGF−β活性を含む
分画を集め、1M酢酸に対して透析して尿素を除き、0.1
％トルフルオロ酢酸となし、Ｃ−18（シンクロパック）
HPLCカラムに加え、20-50％アセトニトリル傾斜溶離に
より溶出した。生物的に活性な分画を集め、最終純度は
SDS-PAGEおよびTGF−βの既知の性質に対するアミノ酸
分析により試験した。
3,J.Biol.Chem.258：7155)により精製された。簡単に記
すと、血漿タンパク質を除去するため血小板に富む血漿
（20-30単位、２−５日経たもの）を遠心分離（3200xg、
30分、４℃にて）した。血小板は次に500mlのトリス−H
Cl／クエン酸緩衝液にて２度洗浄し、再遠心分離を行っ
た。洗浄した血小板を酸性エタノールの溶液に加え直ち
にホモゲナイザー中で抽出した。４℃に一夜インキュベ
ーションした後、沈殿したタンパク質は遠心分離により
除去し、上澄液はNH4OHを用いてpH3に調整した。エタノ
ール（２倍容量、０℃にて）およびエチルエーテル（４
倍容量０℃にて）を加えるとTGF−βが沈殿した。沈殿
物を遠心分離にて集め、1N酢酸(10ml)に懸濁させた。遠
心分離により沈殿から上澄液を分離し、1M酢酸で平衡化
され、流速20ml／時間のバイオーゲルP60ゲル濾過カラ
ム(4.4×115cm)上に負荷した。５ミリリットルの分画を
集めBALB/MK細胞の増殖阻害および非腫瘍性NRK線維芽細
胞の足場非依存性増殖を用いて生物活性を検定した。ピ
ーク活性を含む分画を集め、凍結乾燥し、8M超純粋尿素
（シュワルツ／マン）を含む0.5mlの1M酢酸に再溶解
し、バイオーゲルP60カラム(1.6×85cm)上３ml／時間の
流速でゲル濾過した。カラム分画の一部を前記のごとく
してTGF−β活性を試験した。ピークTGF−β活性を含む
分画を集め、1M酢酸に対して透析して尿素を除き、0.1
％トルフルオロ酢酸となし、Ｃ−18（シンクロパック）
HPLCカラムに加え、20-50％アセトニトリル傾斜溶離に
より溶出した。生物的に活性な分画を集め、最終純度は
SDS-PAGEおよびTGF−βの既知の性質に対するアミノ酸
分析により試験した。
組換え体TGF−βは標準的技術により調製できる。例え
ば、TGF−βのタンパク質配列に基づいて設計されたオ
リゴヌクレオチドプローブがBirynchにより記載されて
いる技術(1985,Nature,316：701)を用いるヒトゲノムDN
AまたはcDNAライブラリー中のTGF−βエクソンの単離に
使用できる。TGF−βの遺伝子は単離されており、標準
発現ベクター内へクローン化され、哺乳類細胞へトラン
スフェクトされ、それからTGF−βが常法を用いて精製
された。
ば、TGF−βのタンパク質配列に基づいて設計されたオ
リゴヌクレオチドプローブがBirynchにより記載されて
いる技術(1985,Nature,316：701)を用いるヒトゲノムDN
AまたはcDNAライブラリー中のTGF−βエクソンの単離に
使用できる。TGF−βの遺伝子は単離されており、標準
発現ベクター内へクローン化され、哺乳類細胞へトラン
スフェクトされ、それからTGF−βが常法を用いて精製
された。
傷治癒 IGF−Ｉ／TGF−β混合物の傷治癒促進の有効性を決定す
る為以下の実験が実施された。
る為以下の実験が実施された。
体重10から15kgの若い白色ヨークシャーブタ（パーソン
農場、ハドレー、MA)を手術に先立って少なくとも、６
時間絶食させ、麻酔した。無菌条件下、背中および胸部
領域を刈込み、そった後緩和な石けんおよび水で洗浄し
た。傷を付けられる領域は次に70％アルコールで消毒さ
れた。
農場、ハドレー、MA)を手術に先立って少なくとも、６
時間絶食させ、麻酔した。無菌条件下、背中および胸部
領域を刈込み、そった後緩和な石けんおよび水で洗浄し
た。傷を付けられる領域は次に70％アルコールで消毒さ
れた。
改良カストロビエジョダ電動式槍状刃（ストーツ、セン
トルイス、MO、ブラウンネルズ Incにより改良）を用
いて0.5mmの深さの１cm×２cmの傷をつくった。傷は上
皮が完全に除去されただけでなく真皮の一部も除去され
た（熱傷障害の第２度に相当する）。個々の傷は少なく
とも15mmの傷を受けていない皮膚により分離されてい
た。同一の処置を受ける傷は一群として系統立てられ、
他の群と少なくとも３cm離された。成長因子処置を受け
ない傷はそのような処置を受ける傷から少なくとも10cm
離されている。
トルイス、MO、ブラウンネルズ Incにより改良）を用
いて0.5mmの深さの１cm×２cmの傷をつくった。傷は上
皮が完全に除去されただけでなく真皮の一部も除去され
た（熱傷障害の第２度に相当する）。個々の傷は少なく
とも15mmの傷を受けていない皮膚により分離されてい
た。同一の処置を受ける傷は一群として系統立てられ、
他の群と少なくとも３cm離された。成長因子処置を受け
ない傷はそのような処置を受ける傷から少なくとも10cm
離されている。
傷は生物適合性ゲルに懸濁された以下の成長因子の一回
投与で直接処置された：１）500ng純粋ヒトまたはブタT
GF−β； 2)500ngの純粋な組換え体IGF−Ｉ単独；3)500ngヒトま
たはブタTGF−βに500ngの純粋な組換え体IGF−Ｉを加
える。
投与で直接処置された：１）500ng純粋ヒトまたはブタT
GF−β； 2)500ngの純粋な組換え体IGF−Ｉ単独；3)500ngヒトま
たはブタTGF−βに500ngの純粋な組換え体IGF−Ｉを加
える。
傷生成に続いて３日から10日に渡って生検材料が採取さ
れた。組織学的評価の為の生検材料は約３mmの深さのく
さび状物として採取された10％ホルマリン中に入れられ
た。生化学的分析の為の検体は電動式槍状刃を用いて得
られた。検体の最終的な大きさは1.5mm×10mm×1.5mmで
あった。生化学的分析には傷当り３つの検体が集められ
た。採取に続いて検体は液体窒素中で凍結され−80℃に
て貯蔵された。
れた。組織学的評価の為の生検材料は約３mmの深さのく
さび状物として採取された10％ホルマリン中に入れられ
た。生化学的分析の為の検体は電動式槍状刃を用いて得
られた。検体の最終的な大きさは1.5mm×10mm×1.5mmで
あった。生化学的分析には傷当り３つの検体が集められ
た。採取に続いて検体は液体窒素中で凍結され−80℃に
て貯蔵された。
組織学的評価 組織学的検体はパラフィン含浸および包埋技術を用いて
調製された。４つのミクロンセクションが作られ濾過ハ
リスヘマトキシリンおよびアルコール性エオシンを用い
て染色された：それらは続いて顕微鏡下観察された。コ
ンピューター補助形態的分析が実施された。新しい上皮
および結合組織層の領域は組織学的検体の領域決定のた
めに注文により作られたプログラム（詳細が必要）の助
けをかりて評価された。
調製された。４つのミクロンセクションが作られ濾過ハ
リスヘマトキシリンおよびアルコール性エオシンを用い
て染色された：それらは続いて顕微鏡下観察された。コ
ンピューター補助形態的分析が実施された。新しい上皮
および結合組織層の領域は組織学的検体の領域決定のた
めに注文により作られたプログラム（詳細が必要）の助
けをかりて評価された。
コラーゲン決定 生化学的分析のための検体は融解された、および解剖顕
微鏡下、回りの組織から解離された新しく合成された傷
組織である。試料は封入アンプル中120℃にて18時間6M
HClで加水分解した。ヒドロキシプロリン（コラーゲン
に独特なアミノ酸）のための加水分解物の検定がSwitze
rおよびSummer,1971,Anal.Biochem.,39：487の技法を用
いて実施された。
微鏡下、回りの組織から解離された新しく合成された傷
組織である。試料は封入アンプル中120℃にて18時間6M
HClで加水分解した。ヒドロキシプロリン（コラーゲン
に独特なアミノ酸）のための加水分解物の検定がSwitze
rおよびSummer,1971,Anal.Biochem.,39：487の技法を用
いて実施された。
効果 組織学的評価からの結果はTGF−βで処置された傷は無
処置の傷より薄い上皮層を持っていることを示してい
た。対照的に、精製ヒトまたはブタTGF−βおよび組換
え体ヒトIGF−Ｉの組合せで処置された傷は無処置、ヒ
トまたはブタTGF−β単独または純粋なIGF−Ｉ単独で処
置された傷よりも厚い結合組織および上皮層およびこれ
らの層を結合しているより伸長した上皮突出物を持って
いた。IGF−ＩにTGF−βを加えたもので処置した傷はま
たTGF−β単独、IGF−Ｉ単独またはゲル単独で処置した
傷よりも多くの総コラーゲン含量を持っていた（ヒドロ
キシプロリンの増加を指標として）。
処置の傷より薄い上皮層を持っていることを示してい
た。対照的に、精製ヒトまたはブタTGF−βおよび組換
え体ヒトIGF−Ｉの組合せで処置された傷は無処置、ヒ
トまたはブタTGF−β単独または純粋なIGF−Ｉ単独で処
置された傷よりも厚い結合組織および上皮層およびこれ
らの層を結合しているより伸長した上皮突出物を持って
いた。IGF−ＩにTGF−βを加えたもので処置した傷はま
たTGF−β単独、IGF−Ｉ単独またはゲル単独で処置した
傷よりも多くの総コラーゲン含量を持っていた（ヒドロ
キシプロリンの増加を指標として）。
用量 精製されたTGF−βの適切な用量を決定するため、上記
の実験が繰り返されたが、30μｌの生物適合性ゲルに分
散した、ミリメータ平方の傷当り2.5ng、5.0ngおよび10n
gの精製TGF−βで傷が処置された。その結果はIGF−Ｉ
／TGF−β混合物のTGF−β含量が5.0ng/mm2またはそれ
以上であった時最適の効果が得られたことを示してい
る。
の実験が繰り返されたが、30μｌの生物適合性ゲルに分
散した、ミリメータ平方の傷当り2.5ng、5.0ngおよび10n
gの精製TGF−βで傷が処置された。その結果はIGF−Ｉ
／TGF−β混合物のTGF−β含量が5.0ng/mm2またはそれ
以上であった時最適の効果が得られたことを示してい
る。
TGF−βに対するIGF−Ｉの最適な比を決定する為、TGF
−βに対するIGF−Ｉの重量−重量比で１：10から25：
１の範囲の組合せを上記のごとくして評価した。最適の
結果は１：２および２：１の間の比で達成された。
−βに対するIGF−Ｉの重量−重量比で１：10から25：
１の範囲の組合せを上記のごとくして評価した。最適の
結果は１：２および２：１の間の比で達成された。
他の実施態様 他の実施態様も、付随する請求の範囲に含まれている。
例えば、IGF−ＩおよびTGF−βは、ヒトまたは他の哺乳
類においてIGF−ＩまたはTGF−βをコードしている天然
の遺伝子と同一の塩基配列を持つ核酸を用いて標準組換
えDNA技術により得ることができる。さらに、この核酸
は、天然のIGF−ＩまたはTGF−βと同じアミノ酸配列を
コードするような保存的塩基置換により改変されてもよ
く、または、天然のアミノ酸配列と異った配列をコード
するがそのタンパク質生成物が天然のタンパク質と同様
の傷治癒性を実質的に持つような塩基置換されてもよ
い。
例えば、IGF−ＩおよびTGF−βは、ヒトまたは他の哺乳
類においてIGF−ＩまたはTGF−βをコードしている天然
の遺伝子と同一の塩基配列を持つ核酸を用いて標準組換
えDNA技術により得ることができる。さらに、この核酸
は、天然のIGF−ＩまたはTGF−βと同じアミノ酸配列を
コードするような保存的塩基置換により改変されてもよ
く、または、天然のアミノ酸配列と異った配列をコード
するがそのタンパク質生成物が天然のタンパク質と同様
の傷治癒性を実質的に持つような塩基置換されてもよ
い。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 アントニアオエス，ハリー・エヌ アメリカ合衆国マサチューセッツ州02148, ニュートン，マグノリア・ドライブ 21 (72)発明者 リンチ，サミュエル・イー アメリカ合衆国マサチューセッツ州02158, ジャマイカ・プレイン，ジャマイカ・ウェ イ 224 (56)参考文献 特開 平１−279840（ＪＰ，Ａ)
Claims (5)
- 【請求項１】精製インシュリン様成長因子−Ｉおよび精
製トランスホーミング成長因子ベータを含む傷治癒用組
成物。 - 【請求項２】重量対重量比で１：４から２５：１の精製
インシュリン様成長因子−Ｉおよび精製トランスホーミ
ング成長因子ベータからなる傷治癒用組成物。 - 【請求項３】前記の比が１：２および１０：１の間であ
る請求の範囲第２項記載の組成物。 - 【請求項４】前記の比が１：２または２：１である請求
の範囲第４項記載の組成物。 - 【請求項５】重量対重量比が１：４および２５：１の間
で精製インシュリン様成長因子−Ｉおよび精製トランス
ホーミング成長因子ベータを混合することを特徴とする
傷治癒のための組成物の製造方法。
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-
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