JPH0662426B2 - 腫瘍の血管新生を抑制するための治療薬 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明の分野は、腫瘍を治療するための治療薬である。

発明の背景 β溶血性ストレプトコッカス(β−hemolytic Streptoco
ccus)(ＧＢＳ)群は、広く存在する微生物である。ＧＢ
Ｓは、新生児を除く人間に、有害な感染をもたらすもの
としては知られていない。“早期発症病(early-onset d
isease)”とも呼ばれるＧＢＳ肺炎は、新生児の高い罹
患率および死亡率に関係している。ＧＢＳ感染は、誕生
の日におこり、とくに未熟児に頻繁に見られる。感染が
年令数週間に起こり、且つ通常の肺の発達が見られたと
きには、もはやＧＢＳ肺炎にはかからない。

カール・ジー・ヘラビスト(Carl G. Hellerqvist)と彼
の関係するバンダービルト・ユニバーシティー・スクー
ル・オブ・メディスン(Vanderbilt University School
of medicine)、ナッシュビル(Nashville)、テネシー(Te
nnessee)で行われている連続的な研究において、ポリサ
ッカライドのＧＢＳ毒素が同定された。この毒素は、Ｂ
β溶血性ストレプトコッカス群によって生産され、Ｇ
ＢＳ肺炎の合併症の主要因子であると考えられる。ＧＢ
Ｓ毒素は、ＧＢＳ培地から分離され、生成され、部分的
に特徴付けられた(ヘラビストら、ピジアトリック・リ
サーチ(Pediatr. Res.)、１５巻、892〜898頁(1981
年)；ロジャス(Rojas)ら、ピジアトリック・リサーチ(P
ediatr. Res.)、１５巻、899〜904頁(1981年)；ロジャ
スら、ピジアトリック・リサーチ(Pediatr. Res.)、１
７巻、1002〜1008頁(1983年)およびヘラビストら、プロ
シーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシイズ(Proc. Natl. Acad. Sci. USA)、
８４巻、51〜55頁参照）。これらの研究において、肺に
対するＧＢＳポリサッカライド毒素の効果を試験するた
めの実験モデルとして羊を用いた。ヒトと異なって、若
い羊に加えて成熟した羊もＧＢＳ毒素にかけた。この毒
素を羊に感染させたとき、肺高血圧症が見られ、肺血管
の浸透性が増加した。これらの変化は、Ｂ ストレプト
コッカス敗血症の新生児に起こるものと同様である。

ＧＢＳ毒素は、推定分子量約２０万のポリサッカライド
複合体である。このポリサッカライドは、上記のヘラビ
ストら(1981年)に報告されているように、抗原基となる
免疫学的な構造特性を有している。また、毒素の機能と
直接的であれ間接的であれ重要な関係があると考えられ
るホスホジエステル構造を含む（上記のヘラビストら、
(1987年)）。

発明の要旨 本発明は、ＧＢＳ毒素が、血管新生を阻止することによ
って、腫瘍を除去する治療薬として使用できるという新
規な概念に基づいている。約１cm³のサイズをこえて成
長するためには、固化した腫瘍(solid tumor)は、これ
が拡大するように、腫瘍に血液を供給する新しい血管の
形成を含む血管新生を行わなければならない。本発明の
基礎をなすことは、新しく形成される血管系は、誕生の
ときの未熟児および新生児の胎芽の肺血管系に匹敵する
成長状態にあるという認識である。このような腫瘍の血
管系細胞は、ＧＢＳ毒素と相互作用できるような状態に
ある。とくに、発生論的に胎芽である腫瘍の血管系の肺
細胞は、ＧＢＳ毒素の重要構造部位の細胞性のレセプタ
ーをもつと考えられる。このようなレセプターは、毒素
が腫瘍体の血管系と相互作用し、その結果、新しく形成
された毛細管の宿主で仲介された（host mediated)破壊
もたらし、腫瘍の血管系を抑制させる。この相互作用
は、腫瘍の血管系の部位に特異的である。成熟した通常
の血管系、例えば肺血管系は、もはやＧＢＳ毒素と相互
作用するレセプターをもたない。さらに、この毒素を静
脈内への注入によって患者に投与しても、系統的に安全
である。通常の大人は、ＧＢＳおよびこれが生産する毒
素に耐性があることが知られているが、大人へのＧＢＳ
の感染は、他の合併症、例えば真性糖尿病、肝不全およ
び悪性疾患のある種類に関連がある(アーチブス・イン
ターナル・メディスン(Archives Internal Medicine)、
１４５巻、641〜645頁(1988年))。

本明細書においては、最初に肺腫瘍について示してあ
る。しかし、腫瘍に血液を供給するための新しい毛細管
を成長させる固化した腫瘍に一般的に適用できると考え
られる。とくに、本発明の治療薬は、ガンおよび腺ガン
に有効であると思われる。本発明の目的は、固化した腫
瘍、ガン、腺ガン、または肺腫瘍の血管系の成長を少な
くとも部分的に抑制することである。成長する腫瘍に血
液を供給するための新しい毛細管の成長を抑制すること
は、腫瘍の成長を阻止することになり、固化した腫瘍を
抑制するまたは撲滅するのに役立つ。

詳細な説明 本発明は、ヒト患者の成長する固化した腫瘍の治療のた
めの治療薬として、Ｂ β溶血性ストレプトコッカス細
菌により生産されたポリサッカライドの毒素を利用す
る。この毒素(以下、ＧＢＳ毒素という)は、精製された
形状で使用され、これは、ヘラビストら、プロシーディ
ングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシイズ(Proc. Natl. Acad. Sci. USA)、８４巻、
51〜55頁に記載されているように、ポリサッカライドの
ポリマーとマンノシルホスホジエステル基との複合体か
らなる。成長する腫瘍の血管新生を抑制する目的のため
に、ＧＢＳ毒素を、抑制に有効な量を非経口的に投与す
ることができる。例えば、この毒素は、患者体重１kgあ
たり１〜１０マイクログラム(mcg)の投与量において、
水溶液として静脈内に注入することができる。さらに具
体的には、投与のビヒクルは、滅菌した通常の食塩水を
含有することができ、さらに溶液の３０mlにつき０．５
〜２mgの量の毒素を含有することができる。この治療の
プロトコルは、最大の効果が得られるように変化させる
ことができる。例えば毒素の投与は、必要に応じて繰り
返す、すなわち週を基本として繰り返すことができる。

投与量およびＧＢＳ毒素の進行は、循環する顆粒球の数
を調べることにより測定することができる。毒素が成長
する腫瘍の血管系のレセプターと相互作用するとき、循
環する顆粒球は影響される。治療のプロトコルは、治療
された固化した腫瘍の種類によって変化する。この見地
をもとにして、本発明の治療薬は、人間すべての部分の
固化した腫瘍、とくにガンまたは腺ガンとして分類され
る腫瘍に適用できる。効果の程度は、成育する腫瘍の血
管系が、ＧＢＳ毒素のレセプターをどの程度提供するか
に依存する。肺腫瘍の血管系は、このようなレセプター
をもつことが見いだされた。さらに、人間の大細胞(lar
ge cell)および小細胞(small cell)のガンの分析によっ
て、これらの腫瘍集団の血管系の部位と結合するＧＢＳ
毒素が示された。さらに、本発明に導くマウスの研究に
おいて使用されたヒト大細胞の腺ガンは、ヒト胸部の腺
ガンに単一特異的な抗体により免疫学的に同定された。
確かに示されたわけではないが、一般に、成長する固化
した腫瘍の血管系は、少なくともいくつかのＧＢＳ毒素
と結合する部位を提供し、従って本発明の治療薬は、血
管系の成長の少なくとも部分的な阻止を得るために使用
され得る。

腫瘍における成長する毛細管と毒素のレセプターとの相
互作用は、顆粒球の減少を導き、続いて顆粒球から酵素
のエラスターゼが放出されると考えられる。エラスター
ゼが減少することは、ラジオイムノアッセイによってモ
ニターすることができ、これは、治療のモニターの他の
手段として役立つ。さらに、顆粒球により誘発された酸
化損傷は、血漿中の共役ジエン類を測定することにより
モニターすることができる。

本発明の治療薬に用いるＧＢＳ毒素は、新生児に最近感
染したまたは感染することのできるＢ β溶血性ストレ
プトコッカス細菌群の菌株を培養することにより得られ
る。従って、このような菌株の分離物は、ＧＢＳ肺炎に
感染し、その症状をもつ新生児の血液から得られる。連
続的に試験官内で培養することにより維持されたＧＢＳ
菌株は、ＧＢＳ毒素の源として適切ではない。培地にお
いて生産された炭水化物は、胎芽の肺細胞のレセプター
と相互作用するホスホジエステル残基であると考えられ
るその特異的な構造特性におい不完全である。適当なポ
リサッカライド成分は、羊において試験することにより
決定される。このことは、ヘラビストら、ピジアトリッ
ク・リサーチ、１５巻、892〜898頁(1981年)；ロジャス
ら、ピジアトリック・リサーチ、１５巻、899〜904頁(1
981年)に記載されている。羊の肺での毒素の作用は、肺
動脈の圧力を増加させることにより、また、肺血管の浸
透性を増加させることにより、肺高血圧症を増加させる
ことである。

ＧＢＳ毒素がレセプターと相互作用する能力は、ＧＢＳ
菌株の生体内の通過により高めることができる。例え
ば、マウスまたはうさぎは、腹腔内の注入により接種さ
れ得る。マウスまたはうさぎが明らかに病気となった
後、これらを屠殺し、脾臓を切除し、次のマウスまたは
うさぎへの注入のために、切除した脾臓からＧＢＳ培養
物を回収する。多段階の生体内の通過が好ましく、例え
ばマウスを５回通過させるのがよい。この手順は、上記
で引用したヘラビストら(1987年)に詳細に記載されてい
る。

非常によく相互作用するＧＢＳ毒素の形状を生産するＧ
ＢＳ菌株を使用するために、この菌株は、培地において
ＧＢＳ毒素を生産するように、試験官内で大きいスケー
ルで培養することができる。このような培養を行うため
の手順の詳細は、上記で引用したヘラビストら(1987年)
に記載されている。例えば、上記で引用したヘラビスト
ら(1981年)に記載されているように、菌株を、トッドヘ
ウィットブロス(Todd Hewitt Broth)を用いて３５℃で
１８時間培養することができる。最初の培養は、大きい
バッチによって接種物を生産するために用いることがで
きる。これは、トッドヘウィットブロスで行うことがで
き、回転シェーカーの接種フラスコを用いて２５〜３７
℃で２４〜４８時間インキュベートする。

ＧＢＳの培養の後、細胞をＧＢＳ毒素を含む上清から分
離する。好適な回収の手順は、上記で引用したヘラビス
トら(1981、1987年)に記載されている。その概要は、培
養の後、上清をオートクレーブにかけ、エタノールを７
０％の濃度になるように加える。得られた沈殿物は、ガ
ラノス(Galanos)ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ
・バイオケミストリー(Eur. J. Biochem.)９巻、245〜2
49頁(1969年)に記載されている手順に従って、水性フェ
ノール抽出にかけることができる。例えば、上記で引用
したヘラビストら(1981年)に記載されているように、抽
出は、７０℃までの温度で３０分間ゆっくりと加熱する
ような上昇する温度で、エタノール沈殿に適用される同
じ部の水とフェノールからなる抽出溶媒で行うことがで
きる。抽出の水相は、上記で引用したヘラビストら(198
7年)に記載されているように、水で透析し、且つゲル
過で精製することができる。代わりに、高分子量の形状
のＧＢＳ毒素(上記で引用したヘラビストら(1981年))
は、フェノール、水抽出手順を省略して、カラムクロマ
トグラフィー手順(上記で引用したヘラビストら(1981
年))によって、付随した沈殿物から回収される。さら
に、ＧＢＳ毒素は、細菌メンブランフラクションのプロ
テアーゼ消化の後、得ることもできる(ヘラビストら、
未公表)。

腫瘍の成長抑制剤としての分離されたＧＢＳ毒素の有効
性は、抗ＧＢＳ毒素ＩｇＧを用いる腫瘍組織標本のパー
オキシダーゼ−抗パーオキシダーゼ(ＰＡＰ)検定によ
り、および２μｇ、１０^-11モル／kgで羊モデルに注入
することにより(上記で引用したヘラビストら(1981年)
(1987年))、確認することができる。本発明の目的のた
めに、ＧＢＳ毒素という術語は、天然のすべてのＧＢＳ
毒素画分、あるいは溶解したＧＢＳ細菌の培地またはプ
ロテアーゼ消化から生産されたものを意味し、この毒性
は、前記の特別な測定手段のいずれかによって、確認す
ることができる。ＧＢＳ毒素は、レンチルレクチン(len
til lectin)で分画できる。最も有効なＧＢＳ毒素画分
は、設置されたレンチルレクチンカラムを連続的に２つ
通過する。羊モデルにおいて低い特異的な毒性活性のＧ
ＢＳ毒素画分は、ａ−メチル−マンノサイドをもつレン
チルレクチンカラムから浸出され得る(ヘラビストら(19
71年)反応量図３参照)。このことは、マンノシルホスフ
ェート基での置換の増加したレベルは、毒性の有効性を
増加させるが、レンチルレクチン親和性を減少させるこ
とを示している。最も有効性のある毒素の形状は、推定
分子量約２０万を有し、明らかにラムノース、マンノー
ス、ガラクトース、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコ
サミンおよびＮ−アセチルガラクトサミンから構成さ
れ、そのモル比が、それぞれおよそ２：２：３：１：
２：１であるものである。

本発明を、以下の実験実施例によってさらに説明する。

実施例Ｉ 精製したＧＢＳ毒素は、以下の手順によって調製され
た。

ＧＢＳ毒素の分離 細菌の成育 トッドヘウィットブロス(ＴＨＢ)１０mlに、罹患した新
生児からの分離物から得られた凍結保存した培養物を接
種し、９〜１２時間インキュベートした。このようにし
て得られた培養物は、上昇したプラスミド含量およびＧ
ＢＳ毒素生産能力のある培養物を得ることを目的とする
以下に記載の手順の接種物として使用された。

手順１ 培養物の１mlを、マウスの腹腔の孔に無菌的に注入し
た。ヘラビストら(1987年)。敗血症の動物を屠殺し、脾
臓を取り出した。羊血液寒天(ＳＢＡ)プレートは、脾臓
によって“汚染(contaminated)”され、プレートを白金
耳で画線して単一のコロニーを得た。脾臓をトッドヘウ
ィットブロスの１０ml中におき、この培養物は、第２の
マウスを通過させるために使用され、β−溶血性ストレ
プトコッカス以外のコロニーが見られないＳＢＡプレー
トが得られた。５回の通過および任意のその後の通過に
よって、１５１のトッドヘウィットブロスのバッチに、
脾臓培養物由来の１０^９の細菌を接種し、回転シェーカ
ーで３７℃、４２時間インキュベートした。

手順２ ヒトまたは他の標本から、血清を追加したＴＨＢが接種
され、得られた培養物は、連続的なマウスの通過の代わ
りとなるような、連続的な通過を行って用いられた。５
回またはそれ以上の２次培養により、細菌は、ＴＨＢま
たは血清およびグルコースを追加したＴＨＢの大きなバ
ッチにおいて成長された。

品質管理 インキュベートが完了した後、各フラスコから一定量抜
出し、以下の接種プレートに用いた： ａ）サバロード・デキストロース・アガー(Sabaraud De
xtrose Agar)(ＳＤＡ)を２ヶ、 ｂ）エオシン・メチレンブルー(Eosin Methylene Blue)
(ＥＭＢ)、 ｃ）トリプチカーゼ・ソイ・アガー(Trypticase Soy Ag
ar)(ＴＳＡ)、 ｄ）ＳＢＡ。

このフラスコをオートクレーブにかけ、すべてのプレー
トが以下のことを示さなくなるのに十分な時間、３８時
間、４℃で貯蔵した： １）３７℃でインキュベートされたＳＤＡプレートに１
ヶおよび室温のもの１ヶに、酵母およびカビ、 ２）ＥＭＢプレート上にグラム陰性菌の汚染。

確認可能なプレートの組および滅菌した標準品を使用
し、これらがカラムクロマトグラフィーのベッドまたは
精製手順の間、透析袋にいかなる微生物も成長が起こら
ないことを確認した。

ＴＨＢ培地の調製 ＴＨＢ培地を、血清およびグルコース２ｇ／追加して
使用した。製造会社が培地の各ロットに、記録しないま
ま酵母エキスを加えているかどうかという問題を解決す
るために、培地のバッチを、分子量１万以上を遮断する
フィルターカセット(ミリポア(Millipore)社)で過す
ることができる。もし、過していない培地を使用する
ならば、できる限り酵母マナナス(yeast mananas)を最
も容易なレクチンクロマトグラフィーによって取り除か
なければならない。

ＧＢＳ毒素の分離 続く手順は、我々のオリジナルである(ヘラビストら、
ピジアトリック・リサーチ、１５巻、892〜898頁(1981
年))。いかなる微生物の汚染のないことが決定された、
オートクレーブにかけた培養物の上清またはメンブラン
プロテアーゼ消化物を、７０％のエタノール濃度にする
ことにより沈殿させ、且つ２回フェノール水抽出を行っ
た(ガラノース(Gallanose)ら(1969年))。水相を水に対
して透析することにより集め、続いてＤＥ５２クロマト
グラフィーを行った。水中のＧＢＳ毒素は、ＤＥ５２に
結合し且つヘラビストら(1987年)による０〜０．４Ｍの
ＮaＣlの傾斜溶出を適用すると、約０．２５ＭのＮaＣl
で溶出する。光学的旋光およびフェノール硫酸比色検出
法により画分をモニターした。続いて、セファシル(Sep
hacel)Ｓ−３００を用いるゲル過によってＧＢＳ毒素
を回収し、これはカラムにわずかに含まれるものを溶出
する。透析および凍結乾燥の後、ＧＢＳ毒素をりん酸で
緩衝された食塩水(ＰＢＳ)で展開するレンチルレクチン
アフィニティーカラムで２次分画する。セファシルカラ
ムから出たＧＢＳ毒素(２〜５mg)をＰＢＳ(０．５ml)に
溶解し、レンチルレクチンカラム(１×５cm)に適用し
た。２倍のカラム容量において溶出するカラムに保持さ
れない物質(ＧＢＳ毒素ＬＬ)を透析し、凍結乾燥し、再
生したレンチルレクチンカラムに再度適用した。ピーク
によって流れをＧＢＳ毒素ＬＬ１として集め、１．５倍
のカラム容量の範囲で溶出する部分的に保持された画分
をＧＢＳ毒素ＬＬ２として集めた。酵母マナナスはこの
調製を汚染してしまうので、もし過していないＴＨＢ
培地を使用するならばこの手順は必要である。

予め過してあるＴＨＢを使用することを薦める。この
ことを薦める理由としては、ＧＢＳ毒素自身が、ａ−メ
チルマンノサイドで溶出するためのレンチルレクチンと
の十分な親和性をもつ構造特性を有することである。し
かし、これらのＧＢＳ毒素の画分は、羊モデルに注入し
たとき、ＧＢＳ毒素ＬＬ１またはＬＬ２のいずれか１つ
よりも少ない特異的活性を示す。

ＧＢＳ毒素ＬＬ１およびＬＬ２の特徴 ＧＢＳ毒素ＬＬ１およびＬＬ２は、単離された最も有効
性のある病体生理学的反応モディファイヤーであり、羊
モデルにおいて、一般的な投与量の１／６０または１０
¹¹／kgの投与量で活性を示し、ポリサッカライドを含み
さらにホスホジエステルも含む特徴的なシグナルをもつ
ことを実質上確認できる^1HＮＭＲスペクトルを有する
(ヘラビストら(1987年))。糖類の分析を行ったところ、
最も有効性のあるＧＢＳ毒素を構成するポリサッカライ
ドは、表１に示す組成を有する。

表１：ＧＢＳ毒素ＬＬ１およびＬＬ２の糖類の組成糖類 モル％ ラムノース １１．３ マンノース １３．６ ガラクトース １７．７ グルコース １３．１ Ｎ−アセチル−グルコサミン ２９．５ Ｎ−アセチル−ガラクトサミン ９．７ 実施例II 実施例Ｉに記載したように調製したＧＢＳ毒素の効果
を、ヌードマウスにおいて繁殖したヒト大細胞の腺ガン
の成長割合について研究した。ＧＢＳ毒素ＬＬ１の精製
した画分を使用し、これは、実施例Ｉに記載したように
調製した。

実験 組織源 １．４の比較ＤＮＡインデックス(relative DNA index)
をもつヒト肺大細胞腺ガン(BRX Lu 4)は、１０％子牛胎
児血清を追加したＲＰＭＩ１６４０において成長した組
織培養において得られた。培養物の細胞は、軟らかい寒
天中においてコロノジェニック(colonogenic)であり、
比較ＤＮＡインデックスを１．４とした。化学的免疫細
胞学的な特徴は、細胞ケラチンへの有効性を示し、且つ
胸部を源とした腺ガンの大細胞に対して向かう２つのモ
ノクローナル抗体の２つと交差反応した。

組織の接種 腫瘍の接種物は、組織培養皿上で９０％の集合率に成長
した細胞から調製された。りん酸緩衝食塩水中(ＰＢＳ)
で懸濁された１０^７個の細胞を、２２匹のヌードマウス
のそれぞれに、腹部の経路から皮下に個々のシリンジで
注入した。１０日後、腫瘍のサイズの平均は、１００＋
１２mm³に達し、動物は、無作為抽出したサイズの腫瘍
をもつ７、７および８個体の３つのグループに分割され
た。７個体の腫瘍のない動物の４番目のグループを対照
グループとした。

ＧＢＳ毒素の接種物 ポリサッカライド毒素(Ｌ１画分)を、それぞれ１注入中
０．２５および２．５ピコモルに対応する２μｇ／kgお
よび２０μｇ／kgの接種となるような濃度においてＰＢ
Ｓ中に溶解することにより、接種物を調製した。１注入
中２０μｇ／kgまたは７ピコモルで、デキストラン(Dex
tran)７０(ファルマシア(Pharmacia)、アップサラ(Upps
ala)、スウェーデン)を対照として用いた。

注入方法 グループ１〜３は、腫瘍を有するもの、および４は、腫
瘍のないものの４つのグループにおけるマウスに、ＰＢ
Ｓの１００μｌを静脈末端から静脈内に注入した。これ
は、グループ１およびグループ４には２．５ピコモルの
ＧＢＳ毒素、グループ２には０．２５ピコモルのＧＢＳ
毒素、グループ３にはデキストランの７ピコモルを含む
ＰＢＳを注入した。注入は、月曜日、水曜日および金曜
日に行い、各注入日に、腫瘍の容量を、高さ、幅および
長さの測定値から計算した。

結果 グループ４は、２０μｇ／kgでのＧＢＳ毒素が、体重の
増加に影響を及ぼさず、動物は、毒性の徴候を示さなか
った。４mg／kgの投与量は、以前にヘラビストら(1981
年)が、鉛に敏感な動物に使用したが、明白な影響は及
ぼさなかった。予備的な組織学的な試験は、肺、肝臓、
腎臓、脾臓または脳のいずれかに明白な組織の損傷がな
いことを明らかにした。異なるグループの腫瘍の成長
は、異なる割合で起こった。動物の屠殺時の腫瘍の予備
的試験は、ＧＢＳ毒素を２０μｇ／kgを受け入れたグル
ープ１の７個体の動物の内、６個体において、腫瘍部分
の半分よりも多くに出血および壊死から見られたことを
示した。このような損傷は、等しいモル濃度でデキスト
ランを受け入れたグループにおいては明らかに見られな
かった。２μｇ／kgを受け入れたグループは、中間の組
織学的な容体を示した。

得られたデータは、ＧＢＳ毒素が治療の最初の６日間を
こえて腫瘍の成長割合を等しく有効に減少させ、且つ続
く８日間をこえて、グループ１の成長割合は遅い割合で
残った。グループ２の成長は、デキストランを受け入れ
たグループ３に見られる割合の傾向のように上昇した。
試験の終わりでの腫瘍のサイズの平均は(＋は平均の標
準偏差)、 グループ１ ２．５ピコモルＧＢＳ毒素／１注入 ４２２＋６８ｐ
＜０．００５ グループ２ ０．２５ピコモルＧＢＳ毒素／１注入 ５５０＋７１ｐ
＜０．０５ グループ３ ７．０ピコモルデキストラン／１注入 ７３１＋１３２ 体重増加における有意差の変化は、２．５ピコモルのＧ
ＢＳ毒素／１注入を受け入れた腫瘍発生と非腫瘍発生と
の間、あるいはいかなるグループ間でも見られなかっ
た。

検討 このデータは、投与量に依存した関係で、ＧＢＳ毒素が
単独で、２０μｇまたは２．５ピコモル／kgの投与量で
はデキストランよりもおよそ４５％まで、および２μｇ
または０．２５ピコモル／１注入の投与量では２５％ま
でヒト腫瘍細胞の成長割合を減少させることを示してい
る。羊モデルにおいて、１μｇ／kgでのＧＢＳ毒素は、
激しい呼吸困難を誘発し、これは、マクロファージＢお
よびＴリンパ球および顆粒球を伴う全炎症性および免疫
学的反応によるものであると考えられる。ここで選ばれ
たマウスのモデルにはＴ細胞がなく、従ってまたＴ細胞
に依存したＢ細胞の反応がないので、このようなこと
は、毛細管内皮上の作用によって、おそらく腫瘍の成長
の抑圧遺伝子としての薬剤活性としてＧＢＳ毒素の価値
を示している。腫瘍の発生した通常の個体において、こ
の作用は、血管の破壊、続いて腫瘍の壊死を導くと仮定
される。羊の肺およびヒト腫瘍組織で、ＧＢＳ毒素およ
び抗ＧＢＳ毒素ＩｇＧおよび対照ＩｇＧでおこなった組
織化学的研究は、この仮定を確証させるものである。

ＧＢＳ毒素が異なるヒト腫瘍組織の毛細管と特異的な結
合を示し、且つ免疫欠損動物モデルにおいて、ヒト腫瘍
の成長割合を指数的に減少させるという事実は、ＧＢＳ
毒素に冒された羊の肺およびヒト新生児の肺または早期
発症病においてそれぞれ見られるものと同様な病体生理
学を導入することにより、ＧＢＳ毒素がヒト腫瘍の血管
新生を阻止し、従って、これらの成長を抑制することを
示している。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】Ｂ β溶血性ストレプトコッカス細菌群に
   より生産された、精製され、毒性活性を示す形状である
   ポリサッカライドＧＢＳ毒素を含有してなる、成長する
   固化した腫瘍の血管新生を抑制するための治療薬。
2. 【請求項２】前記腫瘍が、血管新生に関係し且つ依存す
   るガンである、請求の範囲１に記載の治療薬。
3. 【請求項３】前記腫瘍が、血管新生に関係し且つ依存す
   る腺ガンである、請求の範囲１に記載の治療薬。
4. 【請求項４】前記腫瘍が、成長する血管系をもつ肺腫瘍
   である、請求の範囲１に記載の治療薬。
5. 【請求項５】前記ＧＢＳ毒素が、該ＧＢＳ毒素の滅菌さ
   れた水溶液を含む非経口的に投与できる形状である、請
   求の範囲１ないし４のいずれか１項に記載の治療薬。
6. 【請求項６】前記ＧＢＳ毒素が、静脈内に注入可能な水
   溶液の形状である、請求の範囲１ないし５のいずれか１
   項に記載の治療薬。