JPH0675505B2 - Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 - Google Patents
Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法Info
- Publication number
- JPH0675505B2 JPH0675505B2 JP10137988A JP10137988A JPH0675505B2 JP H0675505 B2 JPH0675505 B2 JP H0675505B2 JP 10137988 A JP10137988 A JP 10137988A JP 10137988 A JP10137988 A JP 10137988A JP H0675505 B2 JPH0675505 B2 JP H0675505B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- threonine
- threonine aldolase
- producing
- aldolase
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、微生物を用いてＤ−スレオニンアルドラーゼ
を製造する方法に関する。Ｄ−スレオニンアルドラーゼ
はＤ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解
する酵素でDL−スレオニンの光学分割、Ｄ−スレオニン
の定量分析及び逆反応を利用してグリシンとアルデヒド
類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ酸類等に用いること
が出来る。
を製造する方法に関する。Ｄ−スレオニンアルドラーゼ
はＤ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解
する酵素でDL−スレオニンの光学分割、Ｄ−スレオニン
の定量分析及び逆反応を利用してグリシンとアルデヒド
類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ酸類等に用いること
が出来る。
〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕 本発明者らはＤ−スレオニンを分解する酵素を広く検索
した結果、先にアリスロバクター属、シュードモナス属
およびアルカリゲネス属に属する特定の微生物がＤ−ス
レオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する新規
な酵素Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生することを見
出している（特開昭58−116680号公報）。それ以外には
未だ本酵素活性を示す微生物は知られていなかった。
した結果、先にアリスロバクター属、シュードモナス属
およびアルカリゲネス属に属する特定の微生物がＤ−ス
レオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する新規
な酵素Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生することを見
出している（特開昭58−116680号公報）。それ以外には
未だ本酵素活性を示す微生物は知られていなかった。
今回、更にバクテリヤ、カビ及び酵母につき広範囲にわ
たりＤ−スレオニンアルドラーゼ活性を有する微生物を
検索した結果、新たにキサントモナス（Xanthomonas）
属に属する微生物もＤ−スレオニンアルドラーゼを産生
することを見い出し本発明を完成するに到った。
たりＤ−スレオニンアルドラーゼ活性を有する微生物を
検索した結果、新たにキサントモナス（Xanthomonas）
属に属する微生物もＤ−スレオニンアルドラーゼを産生
することを見い出し本発明を完成するに到った。
本発明において使用される微生物としてはキサントモナ
ス属に属しＤ−スレオニンアルドラーゼ産生能を有する
ものであり具体例としてはキサントモナス オリザエ
（Xanthomonas oryzae IAM1657）を挙げることが出来
る。
ス属に属しＤ−スレオニンアルドラーゼ産生能を有する
ものであり具体例としてはキサントモナス オリザエ
（Xanthomonas oryzae IAM1657）を挙げることが出来
る。
このような微生物を培養してＤ−スレオニンアルドラー
ゼを生成せしめるには特に困難はなく、通常の細菌類の
培養に準じて行なえばよい。すなわち、培地について炭
素源としてはグルコース、グリセロール、糖蜜等の糖類
あるいは酢酸、リンゴ酸等の有機酸など、窒素源として
は硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、尿素など、有
機栄養源として酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンスティープリカーなど、そして無機イオンとしてマグ
ネシウム、鉄、マンガン、カリウム、リン酸塩などを含
むものを用いる。培地中にＤ−スレオニンを0.05〜0.5
％程度添加すると酵素の産生量が増加する場合もある。
ゼを生成せしめるには特に困難はなく、通常の細菌類の
培養に準じて行なえばよい。すなわち、培地について炭
素源としてはグルコース、グリセロール、糖蜜等の糖類
あるいは酢酸、リンゴ酸等の有機酸など、窒素源として
は硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、尿素など、有
機栄養源として酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンスティープリカーなど、そして無機イオンとしてマグ
ネシウム、鉄、マンガン、カリウム、リン酸塩などを含
むものを用いる。培地中にＤ−スレオニンを0.05〜0.5
％程度添加すると酵素の産生量が増加する場合もある。
培養方法も常法によればよく、例えば培地のpHを４〜10
として菌を接種後、20〜60℃で１〜３日間好気的に培養
すればよい。
として菌を接種後、20〜60℃で１〜３日間好気的に培養
すればよい。
このようにして得られるＤ−スレオニンアルドラーゼ
は、主に菌体内に生成蓄積される。そこで、Ｄ−スレオ
ニンアルドラーゼを酵素源として使用する場合には、培
養物あるいはそれから分離した菌体をそのままあるいは
乾燥して用いてもよいが、Ｄ−スレオニンアルドラーゼ
をより精製した形で使用する必要がある場合には、まず
菌体を機械的方法、酵素処理する方法、自己溶解法など
公知の方法によって破壊して粗抽出液を得る。それか
ら、この粗抽出液を硫安沈殿、アセトン又はエタノール
などによる溶媒沈殿、DEAE−セファロース、DEAE−セフ
ァデックス、リン酸カルシウムゲル等の種々のイオン交
換体や吸着剤を用いたクロマトグラフィーなどを適宜組
合せて精製することによって高純度の酵素標品を得るこ
とができる。本酵素の活性発現には、補酵素としてピリ
ドキサール−５′−リン酸を必要とするため、反応時に
は通常10-3〜10-5Ｍで存在させる。
は、主に菌体内に生成蓄積される。そこで、Ｄ−スレオ
ニンアルドラーゼを酵素源として使用する場合には、培
養物あるいはそれから分離した菌体をそのままあるいは
乾燥して用いてもよいが、Ｄ−スレオニンアルドラーゼ
をより精製した形で使用する必要がある場合には、まず
菌体を機械的方法、酵素処理する方法、自己溶解法など
公知の方法によって破壊して粗抽出液を得る。それか
ら、この粗抽出液を硫安沈殿、アセトン又はエタノール
などによる溶媒沈殿、DEAE−セファロース、DEAE−セフ
ァデックス、リン酸カルシウムゲル等の種々のイオン交
換体や吸着剤を用いたクロマトグラフィーなどを適宜組
合せて精製することによって高純度の酵素標品を得るこ
とができる。本酵素の活性発現には、補酵素としてピリ
ドキサール−５′−リン酸を必要とするため、反応時に
は通常10-3〜10-5Ｍで存在させる。
本酵素は、例えばDL−スレオニンを原料としてＬ−スレ
オニンを製造する方法に用いれば光学分割工程を簡略化
しうるが、そのほかＤ−スレオニンの定量分析などにも
有効である。
オニンを製造する方法に用いれば光学分割工程を簡略化
しうるが、そのほかＤ−スレオニンの定量分析などにも
有効である。
又、本酵素反応が可逆反応であることを利用し、グリシ
ンと各種アルデヒド類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ
酸類の合成に用いることも出来る。
ンと各種アルデヒド類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ
酸類の合成に用いることも出来る。
以下、実施例を示す。なお、％は全て重量％である。
実施例１ ポリペプトン0.5％、酵母エキス0.5％、KH2PO40.1％、M
gSO40.05％、Ｌ−グルタミン酸0.1％、およびＤ−スレ
オニン0.1％からなるpH8.0の培地を調製し、120℃で15
分間加熱殺菌した。この培地にキサントモナス オリザ
エ（Xanthomonas oryzae）IAM1657を接種し、30℃で20
時間培養した。
gSO40.05％、Ｌ−グルタミン酸0.1％、およびＤ−スレ
オニン0.1％からなるpH8.0の培地を調製し、120℃で15
分間加熱殺菌した。この培地にキサントモナス オリザ
エ（Xanthomonas oryzae）IAM1657を接種し、30℃で20
時間培養した。
培養終了後、培養液5mlから菌体を遠心分離し、生理食
塩水で１回洗浄後この湿菌体を0.1mMピリドキサール−
５′−リン酸及び50mMD−スレオニンを含むpH7.5の0.1M
トリス−塩酸緩衝液5ml中に懸濁し、35℃で分解反応を
行った。24時間後に遠心分離により得られた反応液上清
をHPLC分析した結果、グリシンが32mM生成しておりＤ−
スレオニンアルドラーゼ活性を有することを認めた。
塩水で１回洗浄後この湿菌体を0.1mMピリドキサール−
５′−リン酸及び50mMD−スレオニンを含むpH7.5の0.1M
トリス−塩酸緩衝液5ml中に懸濁し、35℃で分解反応を
行った。24時間後に遠心分離により得られた反応液上清
をHPLC分析した結果、グリシンが32mM生成しておりＤ−
スレオニンアルドラーゼ活性を有することを認めた。
本発明によれば大量かつ安価に簡便な方法でＤ−スレオ
ニンアルドラーゼを製造することができる。
ニンアルドラーゼを製造することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】キサントモナス属に属するＤ−スレオニン
アルドラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、
培養物からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取すること
を特徴とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10137988A JPH0675505B2 (ja) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10137988A JPH0675505B2 (ja) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01273586A JPH01273586A (ja) | 1989-11-01 |
| JPH0675505B2 true JPH0675505B2 (ja) | 1994-09-28 |
Family
ID=14299157
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10137988A Expired - Fee Related JPH0675505B2 (ja) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0675505B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006079998A1 (en) | 2005-01-31 | 2006-08-03 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Rapid and sensitive biosensing |
-
1988
- 1988-04-26 JP JP10137988A patent/JPH0675505B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01273586A (ja) | 1989-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3922194A (en) | Process for producing 2-keto-L-gulonic acid | |
| JPS5886093A (ja) | アミドの生物学的製造法 | |
| JP2840722B2 (ja) | ４‐ハロ‐３‐ヒドロキシブチロニトリルの製造法 | |
| JP3858505B2 (ja) | Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 | |
| US3943038A (en) | Method for producing amino acids by culturing hydrogen-oxidizing bacteria | |
| JPH0675505B2 (ja) | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 | |
| JPH022589B2 (ja) | ||
| JP3030916B2 (ja) | βーグルコオリゴ糖の製造方法 | |
| JPS5923794B2 (ja) | ジヒドロキシアセトンの製造法 | |
| JP3006907B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| US5288620A (en) | Process for the production of optically active 2-hydroxy-4-phenyl-3-butenoic acid | |
| JP2840723B2 (ja) | ４‐ハロ‐３‐ヒドロキシブチロニトリルの製造法 | |
| US4086138A (en) | Process for producing glucose isomerase | |
| IE50297B1 (en) | Preparation of d-carbamyl-alpha-hydroxy acids and d-hydroxy acids | |
| JPS58116690A (ja) | Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸の製造法 | |
| US3730838A (en) | Enzymatic preparation of l-citrulline | |
| JPS6117475B2 (ja) | ||
| JP2750017B2 (ja) | 新規酵素およびその製造方法、並びに光学活性な（ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸の製造方法 | |
| JPH0515394A (ja) | 光学活性（ｓ）−３−フエニル−１，３−プロパンジオールの製造法 | |
| US5429935A (en) | Process for the production of optically active 2-hydroxy-4-phenyl-3-butenoic acid | |
| JP3090761B2 (ja) | 光学活性乳酸の製造法 | |
| JPWO1989007147A1 (ja) | 光学活性２―ヒドロキシ―４―フェニル酪酸の製造法 | |
| JPH0574353B2 (ja) | ||
| JP2946055B2 (ja) | 光学活性（ｓ）‐（＋）‐３‐ハロ‐１，２―プロパンジオールの製造法 | |
| JPS6140799A (ja) | 環状−（１→２）−β−Ｄ−グルカンの製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |