JPH01273586A - Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 - Google Patents
Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法Info
- Publication number
- JPH01273586A JPH01273586A JP10137988A JP10137988A JPH01273586A JP H01273586 A JPH01273586 A JP H01273586A JP 10137988 A JP10137988 A JP 10137988A JP 10137988 A JP10137988 A JP 10137988A JP H01273586 A JPH01273586 A JP H01273586A
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- threonine
- threonine aldolase
- aldolase
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、微生物を用いてＤ−スレオニンアルドラーゼ
を製造する方法に関する。Ｄ−スレオニンアルドラーゼ
はＤ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解
する酵素でＤＬ−スレオニンの光学分割、Ｄ−スレオニ
ンの定量分析及び逆反応を利用してグリシンとアルデヒ
ド類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ酸類等に用いるこ
とが出来る。
を製造する方法に関する。Ｄ−スレオニンアルドラーゼ
はＤ−スレオニンをグリシンとアセトアルデヒドに分解
する酵素でＤＬ−スレオニンの光学分割、Ｄ−スレオニ
ンの定量分析及び逆反応を利用してグリシンとアルデヒ
ド類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ酸類等に用いるこ
とが出来る。
〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題］本発明
者らはＤ−スレオニンを分解する酵素を広く検索した結
果、先にアリスロバクター属、シュードモナス属および
アルカリ土類金属に属する特定の微生物がＤ−スレオニ
ンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する新規な酵素
Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生ずることを見出して
いる（特開昭５８−１１６６８０号公報）。それ以外に
は未だ本酵素活性を示す微生物は知られていなかった。
者らはＤ−スレオニンを分解する酵素を広く検索した結
果、先にアリスロバクター属、シュードモナス属および
アルカリ土類金属に属する特定の微生物がＤ−スレオニ
ンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する新規な酵素
Ｄ−スレオニンアルドラーゼを産生ずることを見出して
いる（特開昭５８−１１６６８０号公報）。それ以外に
は未だ本酵素活性を示す微生物は知られていなかった。
今回、更にバクテリヤ、カビ及び酵母につき広範囲にわ
たりＤ−スレオニンアルドラーゼ活性を有する微生物を
検索した結果、新たにキサントモナス（Ｘａｎ ｔｈｏ
ｍｏｎａｓ）属に属する微生物もＤ−スレオニンアルド
ラーゼを産生ずることを見い出し本発明を完成するに到
った。
たりＤ−スレオニンアルドラーゼ活性を有する微生物を
検索した結果、新たにキサントモナス（Ｘａｎ ｔｈｏ
ｍｏｎａｓ）属に属する微生物もＤ−スレオニンアルド
ラーゼを産生ずることを見い出し本発明を完成するに到
った。
本発明において使用される微生物としてはキサントモナ
ス属に属しＤ−スレオニンアルドラーゼ産生能を有する
ものであり具体例としてはキサントモナス オリザエ（
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ＩＡＭ１６５
７）を挙げることが出来る。
ス属に属しＤ−スレオニンアルドラーゼ産生能を有する
ものであり具体例としてはキサントモナス オリザエ（
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ＩＡＭ１６５
７）を挙げることが出来る。
このような微生物を培養してＤ〜スレオニンアルドラー
ゼを生成せしめるには特に困難はな（、通常の細菌類の
培養に準じて行なえばよい。すなわち、培地について炭
素源としてはグルコース、グリセロール、糖蜜等の糖類
あるいは酢酸、リンゴ酸等の有機酸など、窒素源として
は硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、尿素など、有
機栄養源として酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンステイープリカーなど、そして無機イオンとしてマグ
ネシウム、鉄、マンガン、カリウム、リン酸塩などを含
むものを用いる。培地中にＤ−スレオニンを０６０５〜
０．５％程度添加すると酵素の産生量が増加する場合も
ある。
ゼを生成せしめるには特に困難はな（、通常の細菌類の
培養に準じて行なえばよい。すなわち、培地について炭
素源としてはグルコース、グリセロール、糖蜜等の糖類
あるいは酢酸、リンゴ酸等の有機酸など、窒素源として
は硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、尿素など、有
機栄養源として酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンステイープリカーなど、そして無機イオンとしてマグ
ネシウム、鉄、マンガン、カリウム、リン酸塩などを含
むものを用いる。培地中にＤ−スレオニンを０６０５〜
０．５％程度添加すると酵素の産生量が増加する場合も
ある。
培養方法も常法によればよく、例えば培地のｐｈｉを４
〜１０として菌を接種後、２０〜６０℃で１〜３日間好
気的に培養すればよい。
〜１０として菌を接種後、２０〜６０℃で１〜３日間好
気的に培養すればよい。
このようにして得られるＤ−スレオニンアルドラーゼは
、主に菌体内に生成蓄積される。そこで、Ｄ−スレオニ
ンアルドラーゼを酵素源として使用する場合には、培養
物あるいはそれから分離した菌体をそのままあるいは乾
燥して用いてもよいが、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを
より精製した形で使用する必要がある場合には、まず菌
体を機械的方法、酵素処理する方法、自己溶解法など公
知の方法によって破壊して粗抽出液を得る。それから、
この粗抽出液を硫安沈殿、アセトン又はエタノールなど
による溶媒沈殿、ＤＥＡＥ−セファロース、ＤＥＡＥ−
セファデックス、リン酸カルシウムゲル等の種々のイオ
ン交換体や吸着剤を用いたクロマトグラフィーなどを適
宜組合せて精製することによって高純度の酵素標品を得
ることができる。本酵素の活性発現には、補酵素として
ピリドキサール−５′−リン酸を必要とするため、反応
時には通常１０−３〜１０−’Ｍで存在させる。
、主に菌体内に生成蓄積される。そこで、Ｄ−スレオニ
ンアルドラーゼを酵素源として使用する場合には、培養
物あるいはそれから分離した菌体をそのままあるいは乾
燥して用いてもよいが、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを
より精製した形で使用する必要がある場合には、まず菌
体を機械的方法、酵素処理する方法、自己溶解法など公
知の方法によって破壊して粗抽出液を得る。それから、
この粗抽出液を硫安沈殿、アセトン又はエタノールなど
による溶媒沈殿、ＤＥＡＥ−セファロース、ＤＥＡＥ−
セファデックス、リン酸カルシウムゲル等の種々のイオ
ン交換体や吸着剤を用いたクロマトグラフィーなどを適
宜組合せて精製することによって高純度の酵素標品を得
ることができる。本酵素の活性発現には、補酵素として
ピリドキサール−５′−リン酸を必要とするため、反応
時には通常１０−３〜１０−’Ｍで存在させる。
本酵素は、例えばＤＬ−スレオニンを原料としてＬ−ス
レオニンを製造する方法に用いれば光学分割工程を筒略
化しうるが、そのほかＤ−スレオニンの定量分析などに
も有効である。
レオニンを製造する方法に用いれば光学分割工程を筒略
化しうるが、そのほかＤ−スレオニンの定量分析などに
も有効である。
又、本酵素反応が可逆反応であることを利用し、グリシ
ンと各種アルデヒド類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ
酸類の合成に用いることも出来る。
ンと各種アルデヒド類よりＤ−β−ハイドロキシアミノ
酸類の合成に用いることも出来る。
Ｃ実施例〕
以下、実施例を示す。なお、％は全て重量％である。
実施例１
ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．５％、Ｋ１１□
ＰＯ４，０，１％、ＭｇＳＯ４０，０５％、Ｌ−グルタ
ミン酸０．１％、およびＤ−スレオニン０．１％からな
る接種し、３０°Ｃで２０時間培養した。
ＰＯ４，０，１％、ＭｇＳＯ４０，０５％、Ｌ−グルタ
ミン酸０．１％、およびＤ−スレオニン０．１％からな
る接種し、３０°Ｃで２０時間培養した。
培養終了後、培養液５ ｒａｉｌから菌体を遠心分離し
、生理食塩水で１回洗浄後この湿菌体を０．１ ｍＭピ
リドキサール−５′−リン酸及び５０ｍＭＤ−スレオニ
ンを含むｐＨ７，５の０．１ Ｍ ）リス−塩酸緩衝液
５ ｍｌｌ中に懸濁し、３５℃で分解反応を行った。２
４時間後に遠心分離により得られた反応液上清をＨＰＬ
Ｃ分析した結果グリシンが３２ｍＭ生成しておりＤ−ス
レオニンアルドラーゼ活性を有することを認めた。
、生理食塩水で１回洗浄後この湿菌体を０．１ ｍＭピ
リドキサール−５′−リン酸及び５０ｍＭＤ−スレオニ
ンを含むｐＨ７，５の０．１ Ｍ ）リス−塩酸緩衝液
５ ｍｌｌ中に懸濁し、３５℃で分解反応を行った。２
４時間後に遠心分離により得られた反応液上清をＨＰＬ
Ｃ分析した結果グリシンが３２ｍＭ生成しておりＤ−ス
レオニンアルドラーゼ活性を有することを認めた。
本発明によれば大量かつ安価に簡便な方法でＤ−スレオ
ニンアルドラーゼを製造することができる。
ニンアルドラーゼを製造することができる。
特許出願人 電気化学工業株式会社
Claims (1)
- （１）キサントモナス属に属するＤ−スレオニンアルド
ラーゼを産生しうる微生物を栄養培地に培養し、培養物
からＤ−スレオニンアルドラーゼを採取することを特徴
とするＤ−スレオニンアルドラーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10137988A JPH0675505B2 (ja) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10137988A JPH0675505B2 (ja) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01273586A true JPH01273586A (ja) | 1989-11-01 |
| JPH0675505B2 JPH0675505B2 (ja) | 1994-09-28 |
Family
ID=14299157
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10137988A Expired - Fee Related JPH0675505B2 (ja) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ｄ−スレオニンアルドラーゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0675505B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8828740B2 (en) | 2005-01-31 | 2014-09-09 | Koninklijke Philips N.V. | Rapid and sensitive biosensing |
-
1988
- 1988-04-26 JP JP10137988A patent/JPH0675505B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8828740B2 (en) | 2005-01-31 | 2014-09-09 | Koninklijke Philips N.V. | Rapid and sensitive biosensing |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0675505B2 (ja) | 1994-09-28 |
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Legal Events
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