JPH0682128B2 - ラテツクス試薬 - Google Patents
ラテツクス試薬Info
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- JPH0682128B2 JPH0682128B2 JP61171875A JP17187586A JPH0682128B2 JP H0682128 B2 JPH0682128 B2 JP H0682128B2 JP 61171875 A JP61171875 A JP 61171875A JP 17187586 A JP17187586 A JP 17187586A JP H0682128 B2 JPH0682128 B2 JP H0682128B2
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- reagent
- latex reagent
- average particle
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- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、保存安定性の優れたラテックス試薬に関する
ものである。
ものである。
抗原・抗体反応を利用する免疫学的検査において、凝集
反応は沈降反応，補体結合反応と共に、あるいはこれら
に比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されてい
る。そして、凝集反応は、遊離細胞や細菌膜表面に局在
する抗原を検出する反応と共に、抗原・抗体の精製技術
の進歩により特異性の高い抗血清が得られることによっ
て、特異性の高い抗体を血球粒子，ベントナイト粒子，
カオリン粒子，ラテックス粒子などの粒子担体に固定さ
せておき、対応する抗原を反応させ凝集を起させ、該凝
集を直接又は間接的に測定することにより抗原濃度を検
査するなど、臨床検査における応用範囲が著しく拡大し
ている。
反応は沈降反応，補体結合反応と共に、あるいはこれら
に比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されてい
る。そして、凝集反応は、遊離細胞や細菌膜表面に局在
する抗原を検出する反応と共に、抗原・抗体の精製技術
の進歩により特異性の高い抗血清が得られることによっ
て、特異性の高い抗体を血球粒子，ベントナイト粒子，
カオリン粒子，ラテックス粒子などの粒子担体に固定さ
せておき、対応する抗原を反応させ凝集を起させ、該凝
集を直接又は間接的に測定することにより抗原濃度を検
査するなど、臨床検査における応用範囲が著しく拡大し
ている。
しかも近年、抗原の精製技術の進歩，特異性の高い抗体
の開発、更には定量分析技術の発展に伴ない、鋭敏性が
高く、非特異的凝集反応が起こらない、しかもより保存
安定性に優れている等の性状を有する診断用試薬の開発
が要望されている。
の開発、更には定量分析技術の発展に伴ない、鋭敏性が
高く、非特異的凝集反応が起こらない、しかもより保存
安定性に優れている等の性状を有する診断用試薬の開発
が要望されている。
しかしながら、診断用試薬に、免疫学的凝集反応時の迅
速性及び鋭敏性を保持したまま、保存時の安定性を向上
させる要求は相互に矛盾する性状を両者共に満足させる
要望であり、現実には非常に困難なことである。即ち、
過度のコロイド化学的定性を付与された診断用試薬は保
存安定性には優れるものの、免疫学的凝集反応の迅速性
及び鋭敏性が十分ではないものが多く、また逆に、免疫
学的凝集反応の迅速性及び鋭敏性を上げようとすれば、
非特異的に自然凝集して保存性に劣る傾向を示すため
に、診断用試薬として利用し得なくなる。そのために現
在公知の診断用試薬は上記いずれかの性状が犠牲にされ
ていると言える。
速性及び鋭敏性を保持したまま、保存時の安定性を向上
させる要求は相互に矛盾する性状を両者共に満足させる
要望であり、現実には非常に困難なことである。即ち、
過度のコロイド化学的定性を付与された診断用試薬は保
存安定性には優れるものの、免疫学的凝集反応の迅速性
及び鋭敏性が十分ではないものが多く、また逆に、免疫
学的凝集反応の迅速性及び鋭敏性を上げようとすれば、
非特異的に自然凝集して保存性に劣る傾向を示すため
に、診断用試薬として利用し得なくなる。そのために現
在公知の診断用試薬は上記いずれかの性状が犠牲にされ
ていると言える。
本発明者等は保存安定性に優れ、しかも免疫学的凝集反
応の迅速性及び鋭敏性を有する試薬を開発すべく鋭敏系
統的に研究して来た。その結果以外にもこれらの相反す
る性状が、ラテックス粒子径及び該ラテックス粒子に免
疫活性物質を感作させたラテックス試薬の粒子径を制御
することにより、発揮されうることを見出し、本発明を
完成し、ここに提案するに至った。
応の迅速性及び鋭敏性を有する試薬を開発すべく鋭敏系
統的に研究して来た。その結果以外にもこれらの相反す
る性状が、ラテックス粒子径及び該ラテックス粒子に免
疫活性物質を感作させたラテックス試薬の粒子径を制御
することにより、発揮されうることを見出し、本発明を
完成し、ここに提案するに至った。
即ち、本発明はラテックス粒子に免疫活性物質を感作さ
せてなる平均粒子径（Ｄ）が0.1〜0.5μｍのラテックス
試薬で且つ該ラテックス試薬はラテックス粒子の平均粒
子径（ｄ）に対するラテックス試薬の平均粒子径（Ｄ）
の比（D/d）が1.3〜3.0の範囲であることを特徴とする
ラテックス試薬である。
せてなる平均粒子径（Ｄ）が0.1〜0.5μｍのラテックス
試薬で且つ該ラテックス試薬はラテックス粒子の平均粒
子径（ｄ）に対するラテックス試薬の平均粒子径（Ｄ）
の比（D/d）が1.3〜3.0の範囲であることを特徴とする
ラテックス試薬である。
本発明で使用されるラテックス粒子の種類は特に限定さ
れず公知のものが使用される。最も一般的に好適に使用
されるラテックス粒子を例示すると例えば次式〔Ｉ〕、 （但し、R1は水素原子又はアルキル基であり、R2はハロ
ゲン原子、置換若しくは非置換のフェニル基、アルコキ
シカルボニル基、アシルオキシ基、アルコキシ基又はシ
アノ基である。） で示される疎水性ビニル系単量体単位を含んでいる高分
子重合体よりなるラテックス粒子である。ここで、フェ
ニル基の置換基としては特に限定されないが、ハロゲン
原子、ハロアルキル基、アルキル基等を挙げることがで
きる。このような疎水性ビニル系単量体単位の中でもR2
が置換若しくは非置換のフェニル基、塩素原子、又はア
ルコキシカルボニル基である疎水性ビニル系単量体単位
が好ましい。このような単量体単位を与える単量体とし
ては、例えば、スチレン、ビニルトルエン、クロロメチ
ルスチレン、クロルスチレン、塩化ビニル、臭化ビニ
ル、メチルメタアクリレート、エチルメタアクリレー
ト、プロピルメタアクリレート、酢酸ビニル、エチルビ
ニルエーテル、プロピルビニルエーテル、ブチルビニル
エーテル、アクリロニトリル、メタアクリロニトリル等
が好適に用いられ、特にスチレン、ビニルトルエン、ク
ロロメチルスチレン、塩化ビニル、メチルメタアクリレ
ート、エチルメタアクリレート等が好ましく採用され
る。また、高分子重合体よりなるラテックス粒子表面に
次式〔II〕 （但し、Ｒは水素原子又はアルキル基である。） で示される単量体単位を有しているものが本発明に於い
て好適に用いられる。〔II〕式で示される単量体単位を
与える単量体としては、グリシジルアクリレート、グリ
シジルメタアクリレート等が例示される。
れず公知のものが使用される。最も一般的に好適に使用
されるラテックス粒子を例示すると例えば次式〔Ｉ〕、 （但し、R1は水素原子又はアルキル基であり、R2はハロ
ゲン原子、置換若しくは非置換のフェニル基、アルコキ
シカルボニル基、アシルオキシ基、アルコキシ基又はシ
アノ基である。） で示される疎水性ビニル系単量体単位を含んでいる高分
子重合体よりなるラテックス粒子である。ここで、フェ
ニル基の置換基としては特に限定されないが、ハロゲン
原子、ハロアルキル基、アルキル基等を挙げることがで
きる。このような疎水性ビニル系単量体単位の中でもR2
が置換若しくは非置換のフェニル基、塩素原子、又はア
ルコキシカルボニル基である疎水性ビニル系単量体単位
が好ましい。このような単量体単位を与える単量体とし
ては、例えば、スチレン、ビニルトルエン、クロロメチ
ルスチレン、クロルスチレン、塩化ビニル、臭化ビニ
ル、メチルメタアクリレート、エチルメタアクリレー
ト、プロピルメタアクリレート、酢酸ビニル、エチルビ
ニルエーテル、プロピルビニルエーテル、ブチルビニル
エーテル、アクリロニトリル、メタアクリロニトリル等
が好適に用いられ、特にスチレン、ビニルトルエン、ク
ロロメチルスチレン、塩化ビニル、メチルメタアクリレ
ート、エチルメタアクリレート等が好ましく採用され
る。また、高分子重合体よりなるラテックス粒子表面に
次式〔II〕 （但し、Ｒは水素原子又はアルキル基である。） で示される単量体単位を有しているものが本発明に於い
て好適に用いられる。〔II〕式で示される単量体単位を
与える単量体としては、グリシジルアクリレート、グリ
シジルメタアクリレート等が例示される。
上記〔Ｉ〕式もしくは〔II〕式で示されるいずれか一方
の単量体単位のみで構成されているラテックス粒子、ま
たは、上記〔Ｉ〕式及び〔II〕式で示される単量体単位
の両方で構成されているラテックス粒子は、本発明に於
いて特に好適に使用される。
の単量体単位のみで構成されているラテックス粒子、ま
たは、上記〔Ｉ〕式及び〔II〕式で示される単量体単位
の両方で構成されているラテックス粒子は、本発明に於
いて特に好適に使用される。
上記ラテックス粒子を吸着型ラテックス試薬の原料とし
て用いる場合には、前記〔II〕式で示される単量体単位
の含有量は、ラテックス粒子中に０〜20モル％、好まし
くは、0.05〜15モル％であることが好適である。また、
上記ラテックス粒子を共有結合型ラテックス試薬の原料
として用いる場合には、上記〔II〕式で示される単量体
単位の含有量はラテックス粒子中に20〜100モル％、好
ましくは、30〜99モル％の範囲から選ぶことが好適であ
る。
て用いる場合には、前記〔II〕式で示される単量体単位
の含有量は、ラテックス粒子中に０〜20モル％、好まし
くは、0.05〜15モル％であることが好適である。また、
上記ラテックス粒子を共有結合型ラテックス試薬の原料
として用いる場合には、上記〔II〕式で示される単量体
単位の含有量はラテックス粒子中に20〜100モル％、好
ましくは、30〜99モル％の範囲から選ぶことが好適であ
る。
尚、ラテックス粒子を診断用ラテックス試薬の原料とし
て用いる場合は、ラテックス試薬の性質に悪影響を及ぼ
さない範囲で、例えば、20モル％以下の範囲で親水性ビ
ニル系単量体単位がラテックス粒子中に含まれていても
良い。親水性ビニル系単量体単位を与える単量体として
は、例えば、メタアクリル酸、アクリル酸、スチレンス
ルホン酸、スチレンスルホン酸ナトリウム、２−ヒドロ
キシエチル（メタ）アクリレート、ビニルピロリドン、
ポリエチレングリコール（メタ）アクリル酸エステル等
が挙げられる。更にまた、必要に応じてジビニルベンゼ
ン、エチレングリコールジメタクリレート、ジエチレン
グリコールメタクリレート、ビスフェノールＡジグリシ
ジルエーテル等の架橋性単量体も好適に使用できる。
て用いる場合は、ラテックス試薬の性質に悪影響を及ぼ
さない範囲で、例えば、20モル％以下の範囲で親水性ビ
ニル系単量体単位がラテックス粒子中に含まれていても
良い。親水性ビニル系単量体単位を与える単量体として
は、例えば、メタアクリル酸、アクリル酸、スチレンス
ルホン酸、スチレンスルホン酸ナトリウム、２−ヒドロ
キシエチル（メタ）アクリレート、ビニルピロリドン、
ポリエチレングリコール（メタ）アクリル酸エステル等
が挙げられる。更にまた、必要に応じてジビニルベンゼ
ン、エチレングリコールジメタクリレート、ジエチレン
グリコールメタクリレート、ビスフェノールＡジグリシ
ジルエーテル等の架橋性単量体も好適に使用できる。
本発明で用いる高分子重合体よりなるラテックス粒子を
得るための重合方法は特に限定されず、公知の方法が好
適に採用される。例えば、アニオン性界面活性剤、非イ
オン性界面活性剤の存在下に水媒体中で水溶性ラジカル
開始剤を用いて乳化重合する方法、界面活性剤を使わず
に水媒体中で水溶性ラジカル開始剤を用いて不均一重合
する方法、部分けん化ポリビニルアルコール、ホリビニ
ルピロリドン等の保護コロイドの存在下に懸濁重合する
方法、ビニル系単量体は溶解するが重合体は溶解しない
有機溶媒中で沈澱重合する方法等が採用される。
得るための重合方法は特に限定されず、公知の方法が好
適に採用される。例えば、アニオン性界面活性剤、非イ
オン性界面活性剤の存在下に水媒体中で水溶性ラジカル
開始剤を用いて乳化重合する方法、界面活性剤を使わず
に水媒体中で水溶性ラジカル開始剤を用いて不均一重合
する方法、部分けん化ポリビニルアルコール、ホリビニ
ルピロリドン等の保護コロイドの存在下に懸濁重合する
方法、ビニル系単量体は溶解するが重合体は溶解しない
有機溶媒中で沈澱重合する方法等が採用される。
本発明で使用するラテックス粒子の平均粒子径は特に限
定されないが、一般に0.05〜0.38μ好ましくは0.07〜0.
3μの範囲にあるものが好適に用いられる。さらにま
た、該ラテックス粒子は、粒子径の分散値の小さい方
が、再現性が良いために望ましい。例えば、粒子径の分
散値は10％以下、さらには５％以下であることが好まし
い。尚、上記分散値とは、標準偏差を平均粒子径で除し
て100をかけた値であり、単位を％で表示したものであ
る。
定されないが、一般に0.05〜0.38μ好ましくは0.07〜0.
3μの範囲にあるものが好適に用いられる。さらにま
た、該ラテックス粒子は、粒子径の分散値の小さい方
が、再現性が良いために望ましい。例えば、粒子径の分
散値は10％以下、さらには５％以下であることが好まし
い。尚、上記分散値とは、標準偏差を平均粒子径で除し
て100をかけた値であり、単位を％で表示したものであ
る。
このようにして得られたラテックス粒子は、特に免疫活
性物質を感作することによりラテックス試薬を得て、免
疫学的反応用診断用試薬として好適に使用される。該免
疫活性物質としては、特に限定されず、たとえば凝集反
応，凝集阻止反応などに利用しうる各種抗原，抗体など
のいずれであってもよい。代表的なものを例示すれば、
例えば、変性ガンマグロブリン、リウマチ因子、抗核因
子、ヒトアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグ
ロブリンＧ（IgG）、イムノグロブリンＡ（IgA）、イム
ノグロブリンＭ（IgM）、ストレプトリジンＯ、抗スト
レプトリジンＯ抗体、Ｃ−反応性蛋白、抗Ｃ−反応性蛋
白抗体、アルファーフェトプロティン（AFP）、抗AFP抗
体、癌胎児性抗原（CEA）、抗CEA抗体、ヒト胎盤ラクト
ゲン（HPL）、抗HPL抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン
（HCG）、抗HCG抗体、抗エストロゲン抗体、抗インシュ
リン抗体、Ｂ型肝炎表面抗原（HBS）、抗HBS抗体、梅毒
トリポネーマ面抗原、風疹抗原、補体成分C1q，抗補体
成分C1q抗体、等の公知の免疫活性物質をあげることが
できる。
性物質を感作することによりラテックス試薬を得て、免
疫学的反応用診断用試薬として好適に使用される。該免
疫活性物質としては、特に限定されず、たとえば凝集反
応，凝集阻止反応などに利用しうる各種抗原，抗体など
のいずれであってもよい。代表的なものを例示すれば、
例えば、変性ガンマグロブリン、リウマチ因子、抗核因
子、ヒトアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグ
ロブリンＧ（IgG）、イムノグロブリンＡ（IgA）、イム
ノグロブリンＭ（IgM）、ストレプトリジンＯ、抗スト
レプトリジンＯ抗体、Ｃ−反応性蛋白、抗Ｃ−反応性蛋
白抗体、アルファーフェトプロティン（AFP）、抗AFP抗
体、癌胎児性抗原（CEA）、抗CEA抗体、ヒト胎盤ラクト
ゲン（HPL）、抗HPL抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン
（HCG）、抗HCG抗体、抗エストロゲン抗体、抗インシュ
リン抗体、Ｂ型肝炎表面抗原（HBS）、抗HBS抗体、梅毒
トリポネーマ面抗原、風疹抗原、補体成分C1q，抗補体
成分C1q抗体、等の公知の免疫活性物質をあげることが
できる。
本発明のラテックス試薬は前記ラテックス粒子に免疫活
性物質を感作することによって得られる。該ラテックス
粒子は一般に分散性がよく非凝集性のものであるが、免
疫活性物質を感作させると凝集性が生じ、該ラテックス
試薬は凝集粒子として存在する。本発明で提供するラテ
ックス試薬はその粒子径（Ｄ）が0.1〜0.5μｍの範囲で
ある必要がある。該ラテックス試薬の粒子径が上記範囲
より小さいものは著しく安定で、免疫学的凝集反応に於
いて要求される迅速性及び鋭敏性の面で十分ではない。
また逆にラテックス試薬の粒子径が上記範囲より大きい
場合は凝集性が強く安定な試薬とならない場合があるの
で好ましくない。
性物質を感作することによって得られる。該ラテックス
粒子は一般に分散性がよく非凝集性のものであるが、免
疫活性物質を感作させると凝集性が生じ、該ラテックス
試薬は凝集粒子として存在する。本発明で提供するラテ
ックス試薬はその粒子径（Ｄ）が0.1〜0.5μｍの範囲で
ある必要がある。該ラテックス試薬の粒子径が上記範囲
より小さいものは著しく安定で、免疫学的凝集反応に於
いて要求される迅速性及び鋭敏性の面で十分ではない。
また逆にラテックス試薬の粒子径が上記範囲より大きい
場合は凝集性が強く安定な試薬とならない場合があるの
で好ましくない。
本発明のラテックス試薬として他の重要な用件はラテッ
クス粒子の粒子径（ｄ）に対する該ラテックス試薬の粒
子径（Ｄ）の比（D/d）が1.3〜3.0の範囲にある必要が
あることである。前記（D/d）が1.3未満の時は高い保存
安定性を有するが、低濃度の抗原又は抗体を検出するこ
とが困難となる。すなわち、対応する抗原又は抗体を感
作したラテックス粒子間の静電的反発が強すぎるため、
低濃度の抗原又は抗体存在下で凝集することができな
い。また、前記（D/d）が3.0を越える時は、感作時に大
きな凝集塊ができていることを示したおり、保存時に非
特異的に凝集を引き起こす。さらに、抗原又は抗体存在
下での最終的な凝集塊の大きさが決まっているため、高
濃度の抗原又は抗体を検出することが困難となる。
クス粒子の粒子径（ｄ）に対する該ラテックス試薬の粒
子径（Ｄ）の比（D/d）が1.3〜3.0の範囲にある必要が
あることである。前記（D/d）が1.3未満の時は高い保存
安定性を有するが、低濃度の抗原又は抗体を検出するこ
とが困難となる。すなわち、対応する抗原又は抗体を感
作したラテックス粒子間の静電的反発が強すぎるため、
低濃度の抗原又は抗体存在下で凝集することができな
い。また、前記（D/d）が3.0を越える時は、感作時に大
きな凝集塊ができていることを示したおり、保存時に非
特異的に凝集を引き起こす。さらに、抗原又は抗体存在
下での最終的な凝集塊の大きさが決まっているため、高
濃度の抗原又は抗体を検出することが困難となる。
本発明のラテックス試薬の製法は特に限定的ではない
が、一般に前記性状は原料として使用するラテックス粒
子径と免疫活性物質を感作する条件によって選ぶことが
出来る。例えばラテックス粒子径は前記のように使用目
的に応じて0.05〜0.38μｍの範囲から選べばよい。また
ラテックス試薬の平均粒子径（Ｄ）がラテックス粒子の
平均粒子径（ｄ）に対して（D/d）＝1.3〜3.0、好まし
くは1.5〜2.5の範囲になるような感作方法は例えば次の
方法が好適である。例えばラテックス粒子の水性懸濁液
にモーター付の攪拌棒を入れ懸濁液を攪拌しながら、免
疫活性物質含有液をすばやく添加し、そのまま攪拌をつ
づける。攪拌速度は、ラテックス粒子の大きさ、懸濁液
の濃度、免疫活性物質含有液の濃度によって異なるが、
100〜500回転／分、好ましくは300〜400回転／分が好適
に用いられる。また上記振盪する場合も同様に25〜250
回／分、好ましくは50〜150回／分が好適に用いられ
る。感作処理は一般にpH約6.0〜8.6、約４〜37℃の温度
で行なうのが好ましい。また一般に免疫活性物質はラテ
ックス粒子の飽和吸着量よりやや過剰量を使用し、感作
後過剰分を遠心分離などで除去するとよい。また一般に
免疫活性物質は、抗原又は抗体（mg）／ラテックス粒子
の表面積（m2）の比が0.05〜10kg/m2の範囲となるよう
に選べば好適である。
が、一般に前記性状は原料として使用するラテックス粒
子径と免疫活性物質を感作する条件によって選ぶことが
出来る。例えばラテックス粒子径は前記のように使用目
的に応じて0.05〜0.38μｍの範囲から選べばよい。また
ラテックス試薬の平均粒子径（Ｄ）がラテックス粒子の
平均粒子径（ｄ）に対して（D/d）＝1.3〜3.0、好まし
くは1.5〜2.5の範囲になるような感作方法は例えば次の
方法が好適である。例えばラテックス粒子の水性懸濁液
にモーター付の攪拌棒を入れ懸濁液を攪拌しながら、免
疫活性物質含有液をすばやく添加し、そのまま攪拌をつ
づける。攪拌速度は、ラテックス粒子の大きさ、懸濁液
の濃度、免疫活性物質含有液の濃度によって異なるが、
100〜500回転／分、好ましくは300〜400回転／分が好適
に用いられる。また上記振盪する場合も同様に25〜250
回／分、好ましくは50〜150回／分が好適に用いられ
る。感作処理は一般にpH約6.0〜8.6、約４〜37℃の温度
で行なうのが好ましい。また一般に免疫活性物質はラテ
ックス粒子の飽和吸着量よりやや過剰量を使用し、感作
後過剰分を遠心分離などで除去するとよい。また一般に
免疫活性物質は、抗原又は抗体（mg）／ラテックス粒子
の表面積（m2）の比が0.05〜10kg/m2の範囲となるよう
に選べば好適である。
上記のようにして得られたラテックス試薬は必要により
水性溶媒で洗浄した後、一般には水性溶媒に浮遊せしめ
た状態で免疫学的凝集反応に供される。一般に水性溶媒
に浮遊させるときのラテックス試薬濃度は0.01〜0.1重
量％の範囲から選べば好適である。
水性溶媒で洗浄した後、一般には水性溶媒に浮遊せしめ
た状態で免疫学的凝集反応に供される。一般に水性溶媒
に浮遊させるときのラテックス試薬濃度は0.01〜0.1重
量％の範囲から選べば好適である。
本発明のラテックス試薬は前記性状の他に上記水性溶媒
に浮遊せしめた状態でのラテックス試薬のゼータ電位が
−20mV〜10mV、好ましくは−10mV〜0mVの範囲で、また
吸光度が光路長10mmセルで0.5〜1.5の範囲となるように
例えば前記方法で調製するのが最も好適である。これら
の性状は特に鋭敏性の良好なラテックス試薬を得るため
に好適である。
に浮遊せしめた状態でのラテックス試薬のゼータ電位が
−20mV〜10mV、好ましくは−10mV〜0mVの範囲で、また
吸光度が光路長10mmセルで0.5〜1.5の範囲となるように
例えば前記方法で調製するのが最も好適である。これら
の性状は特に鋭敏性の良好なラテックス試薬を得るため
に好適である。
上記のような特徴を有する本発明のラテックス試薬は一
般にラテックス粒子が平均２〜３個凝集したものできわ
めて高い保存安定性を有する反面、適度に凝集している
ため高い鋭敏性、迅速性を有している。
般にラテックス粒子が平均２〜３個凝集したものできわ
めて高い保存安定性を有する反面、適度に凝集している
ため高い鋭敏性、迅速性を有している。
本発明のラテックス試薬は、水性媒体中で極めて安定で
あり、保存安定性に優れているだけでなく、同時に広い
測定領域を有しているラテックス試薬を提供するものと
して、その価値は極めて大きい。
あり、保存安定性に優れているだけでなく、同時に広い
測定領域を有しているラテックス試薬を提供するものと
して、その価値は極めて大きい。
以下に実施例によって、本発明のラテックス試薬が保存
安定性にすぐれていることを示すが、本発明は、これら
の実施例に限定されるものではない。
安定性にすぐれていることを示すが、本発明は、これら
の実施例に限定されるものではない。
尚、実施例におけるラテックス試薬の平均粒子径は、レ
ーザー回転グレーディング方式オートマティック表面電
荷スペクトルアナライザーLASERZEETMSystem3000（PEN
KEM社製）（以下パーティクルアナライザーと略す）を
使用して決定した。
ーザー回転グレーディング方式オートマティック表面電
荷スペクトルアナライザーLASERZEETMSystem3000（PEN
KEM社製）（以下パーティクルアナライザーと略す）を
使用して決定した。
実施例１ （１）リウマチ因子測定試薬の調製 平均粒子径0.178μｍのポリスチレンラテックス粒子をN
aCl0.05Mを含むpH8.2の0.1Mのホウ酸緩衝液（以下BBSと
略す）で希釈しラテックス濃度が１重量％の懸濁液を調
製する。次いで60℃で10分間加熱処理したヒトIgGをBBS
により希釈し1mg/mlに調製する。上記ラテックス懸濁液
１容を350回転／分で攪拌しながら熱変性ヒトIgG1容を
加え、次いで同速度で攪拌しながら２時間室温で放置し
た。次いで遠心分離し、上清を除去した後、沈澱をウシ
血清アルブミンを0.05重量％の濃度で添加したBBSで再
分散しラテックス濃度を0.03重量％に調製し、リウマチ
因子測定試薬を得た。パーティクルアナライザーで分析
した結果、ラテックス試薬の平均粒子径は0.240μｍで
あった。またLASER ZEE Mode l501（PEN KEM社製）でゼ
ータ電位を測定した結果−2.5±0.2mV（BBS中）であっ
た。ラテックス試薬の吸光度は1.25（光路長10mm580n
m）であった。
aCl0.05Mを含むpH8.2の0.1Mのホウ酸緩衝液（以下BBSと
略す）で希釈しラテックス濃度が１重量％の懸濁液を調
製する。次いで60℃で10分間加熱処理したヒトIgGをBBS
により希釈し1mg/mlに調製する。上記ラテックス懸濁液
１容を350回転／分で攪拌しながら熱変性ヒトIgG1容を
加え、次いで同速度で攪拌しながら２時間室温で放置し
た。次いで遠心分離し、上清を除去した後、沈澱をウシ
血清アルブミンを0.05重量％の濃度で添加したBBSで再
分散しラテックス濃度を0.03重量％に調製し、リウマチ
因子測定試薬を得た。パーティクルアナライザーで分析
した結果、ラテックス試薬の平均粒子径は0.240μｍで
あった。またLASER ZEE Mode l501（PEN KEM社製）でゼ
ータ電位を測定した結果−2.5±0.2mV（BBS中）であっ
た。ラテックス試薬の吸光度は1.25（光路長10mm580n
m）であった。
（２）測定方法 日立製作所Ｕ−3200型自記分光光度計の測光部に温度調
節器及びマグネット式攪拌装置を取り付けた装置により
吸光度を測定した。光路長10mmのガラス製光学セルに円
筒状の攪拌子を入れ、次いで（１）で得たリウマチ因子
測定用試薬1980μｌを分注し、測光部に挿入し、37℃に
保温した。
節器及びマグネット式攪拌装置を取り付けた装置により
吸光度を測定した。光路長10mmのガラス製光学セルに円
筒状の攪拌子を入れ、次いで（１）で得たリウマチ因子
測定用試薬1980μｌを分注し、測光部に挿入し、37℃に
保温した。
次いで、該攪拌装置によりリウマチ因子測定用試薬を攪
拌しつつ、被検液20μｌを添加した。添加と同時に吸光
度の測定を開始した。吸光度の測定は、580nmの波長の
光線を用いて行なった。なお、攪拌は被検液添加後３秒
で停止した。
拌しつつ、被検液20μｌを添加した。添加と同時に吸光
度の測定を開始した。吸光度の測定は、580nmの波長の
光線を用いて行なった。なお、攪拌は被検液添加後３秒
で停止した。
（３）既知濃度血清の測定 リウマチ因子濃度1600IU/mlであるリウマチ患者血清の
プール血清を生理食塩水で希釈しリウマチ因子濃度5,1
0,20,40,80,100,200,500,1000IU/mlの被検液を得た。
プール血清を生理食塩水で希釈しリウマチ因子濃度5,1
0,20,40,80,100,200,500,1000IU/mlの被検液を得た。
（２）の測定条件下で上記９種の被検液及びBBSにつき
吸光度を各５回測定した。
吸光度を各５回測定した。
得られた吸光度のうち、被検液添加後１分後と５分後の
吸光度から一定間隔時間に対する吸光度の差を得た。
吸光度から一定間隔時間に対する吸光度の差を得た。
また、（１）で得た試薬を４℃で12か月保存後同様にし
て吸光度の差を求めた。この結果を第１表に示す。
て吸光度の差を求めた。この結果を第１表に示す。
第１表の結果から、試薬作成後７日目と４℃,12か月保
存後の吸光度の差は全ての測定濃度で変動係数の範囲内
に入っている。
存後の吸光度の差は全ての測定濃度で変動係数の範囲内
に入っている。
なお４℃,12か月保存後の試薬の平均粒子径は0.240μ
ｍ、ゼータ電位は−2.3±0.2mVで吸光度は1.26であっ
た。
ｍ、ゼータ電位は−2.3±0.2mVで吸光度は1.26であっ
た。
比較例１ 実施例１で用いたのと同様のラテックス懸濁液１容に加
熱変性ヒトIgG溶液１容をラテックス懸濁液を静置状態
で添加し、次いで２時間静置した。以下実施例１と同様
に処理した。パーティクルアナライザーで分析した結
果、ラテックス試薬の平均粒子径は0.720μｍであり、
吸光度2.35であった。ラテックス試薬の平均粒子径
（Ｄ）に対するラテックス粒子の平均粒子径（ｄ）の比
（D/d）＝4.0であった。実施例１と同様にして既知濃度
のリウマチ患者血清のプール血清を測定した結果を第２
表に示す。
熱変性ヒトIgG溶液１容をラテックス懸濁液を静置状態
で添加し、次いで２時間静置した。以下実施例１と同様
に処理した。パーティクルアナライザーで分析した結
果、ラテックス試薬の平均粒子径は0.720μｍであり、
吸光度2.35であった。ラテックス試薬の平均粒子径
（Ｄ）に対するラテックス粒子の平均粒子径（ｄ）の比
（D/d）＝4.0であった。実施例１と同様にして既知濃度
のリウマチ患者血清のプール血清を測定した結果を第２
表に示す。
第２表から明らかなように試薬作成後７日目と４℃,12
か月保存後の吸光度の差は異なっている。試薬作成後４
℃,12か月後の平均粒子径は0.931μｍで吸光度は2.65
で、保存中に非特異凝集を生じている。
か月保存後の吸光度の差は異なっている。試薬作成後４
℃,12か月後の平均粒子径は0.931μｍで吸光度は2.65
で、保存中に非特異凝集を生じている。
比較例２ 実施例１で用いたのと同様のラテックス懸濁液１容にノ
ニオン系の界面活性剤（HLB＝15）1/20容を添加し、室
温１時間静置した。次いでヒトIgG溶液１容を400回転／
分で攪拌しながらすばやく添加し、２時間400回転／分
で攪拌をつづけた。以下実施例１と同様に処理した。パ
ーティクルアナライザーで分析した結果、ラテックス試
薬の平均粒子径は0.196μｍであり、ゼータ電位は−35m
Vで吸光度0.47であった。ラテックス試薬の平均粒子径
（Ｄ）に対するラテックス粒子の平均粒子径（ｄ）に対
する比は（D/d）＝1.10であった。実施例１と同様にし
て既知濃度のリウマチ患者血清のプール血清を測定した
結果を第３表に示す。
ニオン系の界面活性剤（HLB＝15）1/20容を添加し、室
温１時間静置した。次いでヒトIgG溶液１容を400回転／
分で攪拌しながらすばやく添加し、２時間400回転／分
で攪拌をつづけた。以下実施例１と同様に処理した。パ
ーティクルアナライザーで分析した結果、ラテックス試
薬の平均粒子径は0.196μｍであり、ゼータ電位は−35m
Vで吸光度0.47であった。ラテックス試薬の平均粒子径
（Ｄ）に対するラテックス粒子の平均粒子径（ｄ）に対
する比は（D/d）＝1.10であった。実施例１と同様にし
て既知濃度のリウマチ患者血清のプール血清を測定した
結果を第３表に示す。
第３表の結果から保存安定性は優れているが、臨床的に
測定が必要な5IU/mlにおいて凝集が生じない決定があ
る。なお、試薬作成後４℃,12か月後の平均粒子径は0.1
98μｍであり、表面電荷密度は−37mVで吸光度は0.48で
あった。
測定が必要な5IU/mlにおいて凝集が生じない決定があ
る。なお、試薬作成後４℃,12か月後の平均粒子径は0.1
98μｍであり、表面電荷密度は−37mVで吸光度は0.48で
あった。
実施例２ 平均粒子径0.134μｍのポリスチレンラテックス粒子をN
aCl0.05Mを含むpH8.2の0.1Mのグリシン緩衝液（以下GBS
と略す）で希釈しラテックス濃度が１重量％の懸濁液を
調製する。ラテックス懸濁液１容に加熱変性ヒトIgG溶
液１容を実施例１と同様にして添加し、次いで攪拌下２
時間放置した。以下実施例１と同様に処理した。パーテ
ィクルアナライザーで分析した結果、ラテックス試薬の
平均粒子径は0.201μｍであり、ゼータ電位は−3.4±0.
2mV（GBS中）で、吸光度は1.03であった。実施例１と同
様に既知濃度のリウマチ患者血清のプール血清を測定し
た。結果を第４表に示す。
aCl0.05Mを含むpH8.2の0.1Mのグリシン緩衝液（以下GBS
と略す）で希釈しラテックス濃度が１重量％の懸濁液を
調製する。ラテックス懸濁液１容に加熱変性ヒトIgG溶
液１容を実施例１と同様にして添加し、次いで攪拌下２
時間放置した。以下実施例１と同様に処理した。パーテ
ィクルアナライザーで分析した結果、ラテックス試薬の
平均粒子径は0.201μｍであり、ゼータ電位は−3.4±0.
2mV（GBS中）で、吸光度は1.03であった。実施例１と同
様に既知濃度のリウマチ患者血清のプール血清を測定し
た。結果を第４表に示す。
第４表の結果から、試薬作成後７日目と４℃,12か月保
存後の吸光度の差は全ての測定濃度で変動係数の範囲内
に入っている。
存後の吸光度の差は全ての測定濃度で変動係数の範囲内
に入っている。
なお、４℃,12か月保存後の試薬の平均粒子径は0.205μ
ｍでゼータ電位は−3.3±0.1mVで、吸光度は1.06であっ
た。
ｍでゼータ電位は−3.3±0.1mVで、吸光度は1.06であっ
た。
実施例３ （１）Ｃ−反応性蛋白質測定試薬の調製 平均直径0.123μｍのポリスチレンラテックス粒子を塩
化アルモニウム−アンモニア緩衝液（pH＝0.8）で希釈
しラテックス濃度が１重量％の懸濁液を調製する。次い
でＣ−反応性蛋白質（以下CRPと略す）をヤギに免疫し
て得た抗CRP血清より塩析処理により分画した抗CRPヤギ
IgG分画を塩化アンモニウム−アンモニア緩衝液（pH＝
0.8）で希釈し、蛋白濃度2mg/mlの溶液を調製する。上
記ラテックス懸濁液１容に抗CRPヤギIgG分画の溶液１容
を実施例１と同様にして加え37℃で２時間反応させた。
次いで遠心分離し、上清を除去した後沈澱をウシ血清ア
ルブミンを0.05重量％の濃度で添加した塩化アンモニウ
ム−アンモニア緩衝液（pH＝0.8）で再分散しラテック
ス濃度を0.05重量％に調製し、CRP測定試薬を得た。
化アルモニウム−アンモニア緩衝液（pH＝0.8）で希釈
しラテックス濃度が１重量％の懸濁液を調製する。次い
でＣ−反応性蛋白質（以下CRPと略す）をヤギに免疫し
て得た抗CRP血清より塩析処理により分画した抗CRPヤギ
IgG分画を塩化アンモニウム−アンモニア緩衝液（pH＝
0.8）で希釈し、蛋白濃度2mg/mlの溶液を調製する。上
記ラテックス懸濁液１容に抗CRPヤギIgG分画の溶液１容
を実施例１と同様にして加え37℃で２時間反応させた。
次いで遠心分離し、上清を除去した後沈澱をウシ血清ア
ルブミンを0.05重量％の濃度で添加した塩化アンモニウ
ム−アンモニア緩衝液（pH＝0.8）で再分散しラテック
ス濃度を0.05重量％に調製し、CRP測定試薬を得た。
パーティクルアナライザーで分析した結果、ラテックス
試薬の平均粒子径は0.213μｍであった。またゼータ電
位は−0.2±0.2mV（塩化アンモニウム−アンモニア緩衝
液中）で吸光度は1.30であった。
試薬の平均粒子径は0.213μｍであった。またゼータ電
位は−0.2±0.2mV（塩化アンモニウム−アンモニア緩衝
液中）で吸光度は1.30であった。
（２）測定方法 試薬1990μｌと被検液10μｌを用いる以外は実施例１と
同様にして測定した。
同様にして測定した。
（３）既知濃度血清の測定 CRP濃度240mg/dlの精製CRP溶液をCRPを吸収処理して実
質的にCRPを含まない状態としたCRP不含血清により希釈
し、CRP濃度が0.10,0.25,0.50,1.0,2.5,5.0,10,15,20,3
0,40,60mg/dlの被検液を得た。
質的にCRPを含まない状態としたCRP不含血清により希釈
し、CRP濃度が0.10,0.25,0.50,1.0,2.5,5.0,10,15,20,3
0,40,60mg/dlの被検液を得た。
（２）の測定条件下で上記12種の被検液及び塩化アンモ
ニウム−アンモニア緩衝液につき吸光度を各５回測定し
た。
ニウム−アンモニア緩衝液につき吸光度を各５回測定し
た。
得られた吸光度のうち、被検液添加後１分後と５分後の
吸光度より一定間隔時間に対する吸光度の差を得た。ま
た、（１）で得た試薬４℃で12か月保存後同様にして吸
光度の差を求めた。この結果を第５表に示した。
吸光度より一定間隔時間に対する吸光度の差を得た。ま
た、（１）で得た試薬４℃で12か月保存後同様にして吸
光度の差を求めた。この結果を第５表に示した。
第５表の結果から、試薬作成後７日目と４℃,12か月保
存後の吸光度の差は全ての測定濃度で変動係数の範囲内
に入っている。
存後の吸光度の差は全ての測定濃度で変動係数の範囲内
に入っている。
なお、４℃,12か月保存後の試薬の平均粒子径は0.214μ
ｍで、ゼータ電位は−2.1±0.3mV、吸光度は1.31であっ
た。
ｍで、ゼータ電位は−2.1±0.3mV、吸光度は1.31であっ
た。
Claims (3)
- 【請求項１】ラテックス粒子に免疫活性物質を感作させ
てなる平均粒子径（Ｄ）が0.1〜0.5μｍのラテックス試
薬で且つ該ラテックス試薬はラテックス粒子の平均粒子
径（ｄ）に対するラテックス試薬の平均粒子径（Ｄ）の
比（D/d）が1.3〜3.0の範囲であることを特徴とするラ
テックス試薬。 - 【請求項２】ラテックス試薬のゼータ電位が−20mV〜10
mVの範囲である特許請求の範囲第１項記載のラテックス
試薬。 - 【請求項３】ラテックス試薬の吸光度が光路長10mmセル
で0.5〜1.5の範囲である特許請求の範囲第１項記載のラ
テックス試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61171875A JPH0682128B2 (ja) | 1986-07-23 | 1986-07-23 | ラテツクス試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61171875A JPH0682128B2 (ja) | 1986-07-23 | 1986-07-23 | ラテツクス試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6329249A JPS6329249A (ja) | 1988-02-06 |
| JPH0682128B2 true JPH0682128B2 (ja) | 1994-10-19 |
Family
ID=15931410
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61171875A Expired - Fee Related JPH0682128B2 (ja) | 1986-07-23 | 1986-07-23 | ラテツクス試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0682128B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013147306A1 (ja) * | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| WO2014051098A1 (ja) * | 2012-09-27 | 2014-04-03 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006145256A (ja) * | 2004-11-16 | 2006-06-08 | Sekisui Chem Co Ltd | 磁性体内包粒子、免疫測定用粒子及びイムノクロマトグラフィ法 |
-
1986
- 1986-07-23 JP JP61171875A patent/JPH0682128B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PROTIDES OF THE BIOLOGICAL FLUIDS=1973 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013147306A1 (ja) * | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| US9465033B2 (en) | 2012-03-30 | 2016-10-11 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particles for agglutination assay |
| WO2014051098A1 (ja) * | 2012-09-27 | 2014-04-03 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| JP5566557B1 (ja) * | 2012-09-27 | 2014-08-06 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| US9383356B2 (en) | 2012-09-27 | 2016-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particles for particle agglutination assay |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6329249A (ja) | 1988-02-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |