JPH0686387B2 - 甘草由来細胞賦活作用剤 - Google Patents
甘草由来細胞賦活作用剤Info
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- JPH0686387B2 JPH0686387B2 JP63271819A JP27181988A JPH0686387B2 JP H0686387 B2 JPH0686387 B2 JP H0686387B2 JP 63271819 A JP63271819 A JP 63271819A JP 27181988 A JP27181988 A JP 27181988A JP H0686387 B2 JPH0686387 B2 JP H0686387B2
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- JP
- Japan
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- licorice
- water
- cell activating
- activating agent
- ethanol
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
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- A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
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- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は、新規な細胞賦活作用剤（因子）の開発に関す
る。
る。
さらに詳しくは、マメ科植物（Leguminosae）の甘草（G
lycyrrhizae Redix）から抽出される、ある特定な理化
学的諸性質を示す水溶性の分画を有効成分とする、新規
な細胞賦活作用剤に関するものである。
lycyrrhizae Redix）から抽出される、ある特定な理化
学的諸性質を示す水溶性の分画を有効成分とする、新規
な細胞賦活作用剤に関するものである。
「産業上の利用分野」 本発明による甘草由来の水溶性分画は、細胞に対して優
れた賦活作用を示す。
れた賦活作用を示す。
よって本剤の利用分野としては、例えば、医薬品、医薬
部外品、あるいは化粧品（人及びその他の動物用）をは
じめとする皮膚外用剤などに配合して用いることが有用
である。
部外品、あるいは化粧品（人及びその他の動物用）をは
じめとする皮膚外用剤などに配合して用いることが有用
である。
また、組織培養などにおける培地への添加剤としての利
用も可能である。
用も可能である。
「従来の技術」 甘草には、抗炎症作用、抗アレルギー作用、抗潰瘍作用
があるとされ、古くから医薬品あるいは食品などに用い
られてきた。
があるとされ、古くから医薬品あるいは食品などに用い
られてきた。
特に、甘草からの抽出成分であるグリチルリチン、及び
そのサポゲニンであるグリチルリチン酸には、抗炎症、
抗アレルギー作用があることが知られている。
そのサポゲニンであるグリチルリチン酸には、抗炎症、
抗アレルギー作用があることが知られている。
甘草は、また、消化性潰瘍にも用いられているが、その
有効物質については未だ確定されていないようである。
（高木敬次郎ら：和漢薬物学P73,南山堂刊（1982
年））。
有効物質については未だ確定されていないようである。
（高木敬次郎ら：和漢薬物学P73,南山堂刊（1982
年））。
「発明が解決しようとする課題」 本発明者らの課題は、植物の有効利用をはかることにあ
り、特に、ヒトや動物の美容と健康に役立つような植物
由来の有効成分の開発とその応用を提供することにあ
る。
り、特に、ヒトや動物の美容と健康に役立つような植物
由来の有効成分の開発とその応用を提供することにあ
る。
本発明者らは、この目的のため各種植物成分のスクリー
ニングを継続してきた。
ニングを継続してきた。
そして、その過程において、意外にもグリチルリチンや
グリチルリチン酸を含まない甘草の抽出物に、細胞に対
して強い賦活作用を有する成分が含まれていることを見
い出し、さらにその追求を試みたところ、次に示すごと
く理化学的データ及び生物学的データをもって特定する
ことに成功し、本発明を完成するに至った。
グリチルリチン酸を含まない甘草の抽出物に、細胞に対
して強い賦活作用を有する成分が含まれていることを見
い出し、さらにその追求を試みたところ、次に示すごと
く理化学的データ及び生物学的データをもって特定する
ことに成功し、本発明を完成するに至った。
本発明は、マメ科植物の甘草から抽出された、次の
（ａ）〜（ｄ）の性質を有する分画を有効成分とする細
胞賦活作用剤をもってなる。
（ａ）〜（ｄ）の性質を有する分画を有効成分とする細
胞賦活作用剤をもってなる。
（ａ）分子量1,300付近 （ｂ）ペーパークロマトグラム［展開溶媒：水・エタノ
ール混液（1:1）］のRf値が、0.80〜0.85にある。
ール混液（1:1）］のRf値が、0.80〜0.85にある。
（ｃ）水及び80％エタノールに可溶 無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロ
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶 （ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性 「課題を解決するための手段」 〔Ａ〕製造法（抽出手段） 本発明による細胞賦活成分は、マメ科植物の甘草を出発
原料となし、抽出、精製することによって製造出来る。
その際の出発原料は、組織培養法によって得られた甘草
を用いてもよい。その製造法は次のごとくである。
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶 （ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性 「課題を解決するための手段」 〔Ａ〕製造法（抽出手段） 本発明による細胞賦活成分は、マメ科植物の甘草を出発
原料となし、抽出、精製することによって製造出来る。
その際の出発原料は、組織培養法によって得られた甘草
を用いてもよい。その製造法は次のごとくである。
「実施例１」 甘草（乾燥物）1Kgに対して、５〜10部の水を加え、４
℃にて時々撹拌しながら３日間浸漬する。その後、ろ過
してろ液をとり、減圧下において10〜20分の１量になる
まで濃縮し、この濃縮液に対してエタノールを50％濃度
になるように添加した後、遠心分離して上清液を分取す
る。
℃にて時々撹拌しながら３日間浸漬する。その後、ろ過
してろ液をとり、減圧下において10〜20分の１量になる
まで濃縮し、この濃縮液に対してエタノールを50％濃度
になるように添加した後、遠心分離して上清液を分取す
る。
次に、この上清液をセファデックスＧ−25メディウムを
充填したカラム（25×60cm）を用いてゲル濾過を行い、
Kav値で、0.4〜0.65に流出するフラクションを得る（第
１図）。
充填したカラム（25×60cm）を用いてゲル濾過を行い、
Kav値で、0.4〜0.65に流出するフラクションを得る（第
１図）。
さらにこれを凍結乾燥して、本発明による細胞賦活成分
を得る。尚、上記方法によって得られたそれの収量は、
約10gである。
を得る。尚、上記方法によって得られたそれの収量は、
約10gである。
〔Ｂ〕理化学的特性に関するデータ （ａ）分子量測定 本発明による細胞賦活成分の分子量は、以下の試験法を
もって推定するとき、1,300前後であることが確認され
た。（第２図）。
もって推定するとき、1,300前後であることが確認され
た。（第２図）。
（測定法の概要） 平均分子量1,000および3,000のポリエチレングリコール
（ポリエチレングリコール1,000,ポリエチレングリコー
ル4,000）を標準として、セファデックスＧ−25ファイ
ン（ファルマシア社製）で分画して分子量を推定する。
（ポリエチレングリコール1,000,ポリエチレングリコー
ル4,000）を標準として、セファデックスＧ−25ファイ
ン（ファルマシア社製）で分画して分子量を推定する。
（ｂ）ペーパークロマトグラム 東洋ろ紙No.50を使用し、展開溶媒として、エタノール
・水混液（1:1）を使用した場合のクロマトグラム上のR
f値は、0.80〜0.85であることが確認された。
・水混液（1:1）を使用した場合のクロマトグラム上のR
f値は、0.80〜0.85であることが確認された。
尚、アニリン−フタレート法によって、淡赤色に呈色す
ることが確認された。
ることが確認された。
（ｃ）溶媒に対する溶解性 水及び80％エタノール水溶液には易溶であるが、無水エ
タノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロホル
ム、石油エーテル、エーテルには不溶である。
タノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロホル
ム、石油エーテル、エーテルには不溶である。
（ｄ）その他の反応 モーリッシュ反応：水に溶解した液に、15％α−ナフ
トールを滴下し硫酸を加える時、赤紫色を呈する。
トールを滴下し硫酸を加える時、赤紫色を呈する。
ニンヒドリン反応：水に溶解した液に、ニンヒドリン
試液を加え、水浴中で３分間加熱する時青紫色を呈す
る。
試液を加え、水浴中で３分間加熱する時青紫色を呈す
る。
〔Ｃ〕発明の効果 （１）細胞生着率の促進作用 モルモットの初代線維芽細胞、さらにマウスの初代腹腔
マクロファージは、無血清のMEM中では、培養器に生着
せず死滅する。
マクロファージは、無血清のMEM中では、培養器に生着
せず死滅する。
これに対して、実施例１で得た凍結乾燥物は、無血清の
培地において、細胞の生着性（率）を促進し、死滅する
ことを防止した。
培地において、細胞の生着性（率）を促進し、死滅する
ことを防止した。
すなわち、本成分を添加することにより細胞が生着し、
１週間以上生存することがわかった。
１週間以上生存することがわかった。
尚、その際の添加量は、培養液1mL当り50μｇである
（細胞数５×104個/mL）。
（細胞数５×104個/mL）。
（２）コロニー形成からみた促進作用 モルモットの初代培養線維芽細胞を用いて、コロニー形
成能（率）を求めてみると形成が良好である。この促進
作用は線維芽細胞に限らず、上皮細胞等においても同様
に確認された。
成能（率）を求めてみると形成が良好である。この促進
作用は線維芽細胞に限らず、上皮細胞等においても同様
に確認された。
第１表（次表）は、10〜1,000個のモルモットの初代培
養線維芽細胞を、直径6.0cmのペトリ皿（培養液:MEM＋
５％FBS＜牛胎児血清＞）に播種し、本成分を培養液1mL
当り50μｇ添加し２週間後のコロニー数を測定した成績
結果である。
養線維芽細胞を、直径6.0cmのペトリ皿（培養液:MEM＋
５％FBS＜牛胎児血清＞）に播種し、本成分を培養液1mL
当り50μｇ添加し２週間後のコロニー数を測定した成績
結果である。
（３）安全性 ＜皮膚一次刺激性試験＞ 実施例１で得た甘草の水溶液分画について、１％水溶液
を調整し、背部を除毛した兎（１群３匹，体重3.9Kg前
後）の皮膚に貼付した。判定は、貼布後24,48,72時間に
一次刺激性の評点法により紅斑および浮腫を指標として
行った。
を調整し、背部を除毛した兎（１群３匹，体重3.9Kg前
後）の皮膚に貼付した。判定は、貼布後24,48,72時間に
一次刺激性の評点法により紅斑および浮腫を指標として
行った。
その結果、何等、紅斑および浮腫を認めず陰性と判定さ
れた。
れた。
＜急性毒性試験＞ 試験前４時間絶食させたddY系マウス（１群５匹,30g前
後）を使用し、実施例１で得た甘草の水溶性分画を2,00
0mg/Kg量経口投与し、毒性症状の発現、程度等を経時的
に観察した。
後）を使用し、実施例１で得た甘草の水溶性分画を2,00
0mg/Kg量経口投与し、毒性症状の発現、程度等を経時的
に観察した。
その結果、すべてのマウスにおいて14日間何等異常を認
めず、また解剖の結果も異常がなかった。LD502,000mg/
Kg以上と判定された。
めず、また解剖の結果も異常がなかった。LD502,000mg/
Kg以上と判定された。
（４）用途 以上、本発明による甘草から得られた水溶性分画は、細
胞賦活作用に優れ、しかも安全な素材であることがわか
る。
胞賦活作用に優れ、しかも安全な素材であることがわか
る。
よって例えば、潰瘍部あるいは外傷部などの再生治癒の
促進剤、あるいは細胞賦活剤として、医薬品あるいは化
粧品など、美容や健康に役立つ製剤などに応用すること
が有用である。
促進剤、あるいは細胞賦活剤として、医薬品あるいは化
粧品など、美容や健康に役立つ製剤などに応用すること
が有用である。
特に、皮膚や頭髪用の化粧品（スキンケア，ヘアーケア
製品）などには、常用される基剤とともに、配合すれば
よく、その際、添加量については、先の有効性、安全性
の結果からみて甘草由来の有効成分が処方中の１％以下
の範囲となる量が望ましい。
製品）などには、常用される基剤とともに、配合すれば
よく、その際、添加量については、先の有効性、安全性
の結果からみて甘草由来の有効成分が処方中の１％以下
の範囲となる量が望ましい。
これまで甘草の有効利用に当たっては、そのほとんどが
甘草中の成分であるグリチルリチンやグリチルリチン酸
として利用され、また甘草の抽出エキスも、こうした成
分を指標に定量されたものが医薬品、化粧品、健康食
品、その他の食品などに用いられてきた。
甘草中の成分であるグリチルリチンやグリチルリチン酸
として利用され、また甘草の抽出エキスも、こうした成
分を指標に定量されたものが医薬品、化粧品、健康食
品、その他の食品などに用いられてきた。
ところが本発明によれば、従来指標とされてきた主役成
分とは全く異なった分画を有効成分とする利用であり、
これにより甘草の有効的な利用法が大きく拡大されたも
のと考える。
分とは全く異なった分画を有効成分とする利用であり、
これにより甘草の有効的な利用法が大きく拡大されたも
のと考える。
第１図は、本発明による甘草由来細胞賦活成分（実施例
１の工程で得られたフラクションのセフアデックスＧ−
25ファインによる分画）による溶出図である。 第２図は、本発明による甘草由来細胞賦活成分の分子量
測定に当って、標準物質を用いて作成した、分子量とKa
v値による検量線である。 第２図中、Ａはポリエチレングリコール1,000（平均分
子量1,000）、またＢはポリエチレングリコール4,000
（平均分子量3,000）を示す。
１の工程で得られたフラクションのセフアデックスＧ−
25ファインによる分画）による溶出図である。 第２図は、本発明による甘草由来細胞賦活成分の分子量
測定に当って、標準物質を用いて作成した、分子量とKa
v値による検量線である。 第２図中、Ａはポリエチレングリコール1,000（平均分
子量1,000）、またＢはポリエチレングリコール4,000
（平均分子量3,000）を示す。
Claims (1)
- 【請求項１】マメ科植物の甘草から抽出された、次の
（ａ）〜（ｄ）の性質を有する分画を有効成分とする細
胞賦活作用剤。 （ａ）分子量1,300付近 （ｂ）ペーパークロマトグラム［展開溶媒：水・エタノ
ール混液（1:1）］のRf値が、0.80〜0.85にある。 （ｃ）水及び80％エタノールに可溶 無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロ
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶 （ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63271819A JPH0686387B2 (ja) | 1988-10-26 | 1988-10-26 | 甘草由来細胞賦活作用剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63271819A JPH0686387B2 (ja) | 1988-10-26 | 1988-10-26 | 甘草由来細胞賦活作用剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02117687A JPH02117687A (ja) | 1990-05-02 |
| JPH0686387B2 true JPH0686387B2 (ja) | 1994-11-02 |
Family
ID=17505289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63271819A Expired - Lifetime JPH0686387B2 (ja) | 1988-10-26 | 1988-10-26 | 甘草由来細胞賦活作用剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0686387B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4563521B2 (ja) * | 1998-12-24 | 2010-10-13 | 丸善製薬株式会社 | コラーゲン産生促進剤および皮膚外用剤 |
| JP4832793B2 (ja) * | 2004-06-14 | 2011-12-07 | 雅夫 田北 | 美白性皮膚外用剤およびその製造方法 |
-
1988
- 1988-10-26 JP JP63271819A patent/JPH0686387B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02117687A (ja) | 1990-05-02 |
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