JPH0690767A - トマト酸性インベルターゼ相補的遺伝子、該遺伝子を有する組換えベクター及び該組換えベクターを有する形質転換体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 配列表の配列番号１記載の塩基配列を有する
トマト酸性インベルターゼをコードするｃＤＮＡ、該ｃ
ＤＮＡを有する組換えベクター及び該組換えベクターを
有する形質転換体。 【効果】 本発明により、トマト酸性インベルターゼを
コードする相補的遺伝子と該遺伝子を有する組換えベク
ター及び該組換えベクターを有する形質転換体が提供さ
れる。この酸性インベルターゼ遺伝子のセンス鎖あるい
はアンチセンス鎖を、例えば野性型トマト等に導入する
ことにより、トマトなどの植物体中における当該酵素の
活性を上昇あるいは抑制することができるようになり、
糖含量を制御した新しい植物の育成等に大きく寄与する
ことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、トマト酸性インベルタ
ーゼ相補的遺伝子（ｃＤＮＡ）、該遺伝子を有する組換
えベクター及び該組換えベクターを有する形質転換体に
関する。酸性インベルターゼ（β−フルクトシダーゼと
も称する。）は、酸性側のｐＨの下、二糖類であるショ
糖を単糖類であるブドウ糖と果糖に加水分解する酵素で
ある。栽培種トマト果実中の糖類はブドウ糖と果糖が大
部分であるが、この特異的な糖の蓄積は果実の成熟時に
当該酵素の活性が飛躍的に増大することが主要因である
とみなされている。

【０００２】この酵素遺伝子の発現を制御（例えばアン
チセンスＲＮＡ等）し、ショ糖の蓄積量を増大させるこ
とが可能となれば、多様化する消費者の嗜好に対応した
新しい風味をトマトに加えることができるようになる。

【０００３】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】トマト
果実中の酸性インベルターゼには種々のアイソザイムが
あり、その精製も行われている（Plant Physiology, 9
5:1026-1035,1991)。その中の一つに関しては、既にそ
の遺伝子の構造が明らかにされている（Plant Physiolo
gy, 99:351-353,1992)。しかしながら、他のアイソザイ
ムについては未だ構造が解明されておらず、その酵素活
性，機能なども全く不明である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は、トマト(Lyc
opersicon 属、例えばL.esculentum、品種：ハウスおど
りこ）果実由来の酸性インベルターゼのアイソザイムの
一つをコードする相補的遺伝子（ｃＤＮＡ、翻訳領域及
び非翻訳領域を含む）の単離並びに構造の解明に成功
し、本発明を完成した。

【０００５】すなわち、本発明は配列表の配列番号１記
載の塩基配列を有するトマト酸性インベルターゼをコー
ドするｃＤＮＡ、該ｃＤＮＡを有する組換えベクター並
びに該組換えベクターを有する形質転換体に関する。

【０００６】本発明の遺伝子は、配列表の配列番号１記
載の塩基配列を有し、イニシエーターメチオニンを含む
５５３個のアミノ酸に対応する構造遺伝子領域およびポ
リＡ鎖を含むその３’下流域の非翻訳領域からなる。

【０００７】トマト果実より酸性インベルターゼに対応
するｍＲＮＡを分離する際には、まずインタクトな総Ｒ
ＮＡを抽出することが望ましい。また、材料の果実とし
ては成熟した果実（Red ステージ) が望ましい。

【０００８】トマト果実より総ＲＮＡを抽出する方法と
しては、例えば塩酸グアニジン／フェノール法などがあ
る。調製した総ＲＮＡから酸性インベルターゼｍＲＮＡ
を得るには、オリゴｄＴセルロースカラムなどを用いる
ことができる。この処理で直接酸性インベルターゼｍＲ
ＮＡを単離することは容易でないので、得られたｍＲＮ
Ａ集団を鋳型としてｃＤＮＡを作製し、これらを有する
微生物の集団（ｃＤＮＡライブラリー）を作製すること
が望ましい。具体的には、GublerとHoffman の方法(Gen
e,25:263,1983)等により２本鎖のｃＤＮＡを作製し、ア
ダプターＤＮＡを介してリガーゼにより適当なベクター
に結合させ、宿主となる微生物を形質転換させ、ｃＤＮ
Ａライブラリーを作製する。次いで、このライブラリー
から酸性インベルターゼｍＲＮＡに対応したｃＤＮＡク
ローンを同定する。

【０００９】ｃＤＮＡクローンを同定するには、酸性イ
ンベルターゼの部分アミノ酸配列の決定に基づいて合成
したオリゴヌクレオチドをプローブとするプラークハイ
ブリダイゼーション法により選別すればよい。ここで用
いるベクターとしては、大腸菌を宿主とする場合、ｐＵ
Ｃ系やλファージ系のものが利用し易い。しかし、最も
効率的に当該遺伝子を調製するには、トマト果実ｍＲＮ
Ａより作製されたｃＤＮＡをEcoRI 部位を有するアダプ
ターＤＮＡを介してλgt10ファージベクターのEcoRI 部
位にリガーゼにより結合せしめた後、ファージ粒子を形
成させ、ｃＤＮＡライブラリーを作製することにより行
う。

【００１０】このライブラリーからの酸性インベルター
ゼ遺伝子の検索は、上記オリゴヌクレオチドを³²Ｐで標
識してプローブとすることにより行うことができる。こ
のようにして得られた形質転換体をプレートライセート
法等により大量培養して得られたファージ粒子より常
法、例えばSambrookらの方法(Molecular Cloning:A Lab
oratory Manual/Second Edition,Cold Spring Harbor L
aboratory,1989) によりファージＤＮＡを抽出し、さら
にEcoRI 消化、アガロースゲル電気泳動を行うことによ
り、酸性インベルターゼに対応するｃＤＮＡ断片を得る
ことができる。

【００１１】この酸性インベルターゼｃＤＮＡの利用法
としては、まず第一にこれを微生物，植物および動物の
ベクター等に組み込んで微生物，植物および動物で酸性
インベルターゼ活性を増大させることを可能ならしめる
ことである。さらに、別の利用法として、酸性インベル
ターゼｃＤＮＡを逆向きに挿入し、トマト等の植物細胞
中で発現させ、本来植物が有する酸性インベルターゼ活
性を抑制できることである。

【００１２】ここで、微生物としてはエシェリヒア・コ
リ等のエシェリヒア属等の細菌やサッカロミセス・セレ
ビシェ等のサッカロミセス属等の酵母がある。また、植
物としては主としてアグロバクテリウム属細菌−Ｒｉ／
Ｔｉプラスミド系による形質転換が可能な双子葉植物、
例えばトマト，タバコ，ジャガイモ等に代表されるナス
科植物、メロン，キュウリ等のウリ科植物、洋種ナタネ
等のアブラナ科植物、キウイ，柑橘類などの果樹類が挙
げられる。その他、ＰＥＧ−リン酸カルシウム法，エレ
クトロポレーション法，パーテイクルガン法（爆撃法）
などによる形質転換が可能な植物としては、イネ，トウ
モロコシに代表されるイネ科植物等の単子葉植物があ
る。動物では、ヒト，マウス等の各種培養細胞（BALB/c
-3T3等）が挙げられる。これら宿主に使用されるベクタ
ーを以下に例示する。

【００１３】大腸菌のベクターとしては、文献（Molecu
lar Cloning:A Laboratory Manual/Second Edition, Co
ld Spring Harbor Laboratory,1989、ベクターＤＮＡ，
講談社，1986等）に記載の各種プラスミドベクター（pB
R322,pUC系プラスミド等）およびファージベクター（λ
gt10, λgt11, λZAP 等）などがあり、酵母や動物細胞
のベクターとしては、文献（Molecular Cloning:A Labo
ratory Manual/SecondEdition, Cold Spring Harbor La
boratory,1989、ベクターＤＮＡ，講談社，1986、遺伝
子工学ハンドブック−実験医学別冊−，羊土社，1991
等）に記載の各種ベクター類があげられる。植物ベクタ
ーとしては、通常クローニングに用いられるプラスミド
由来の各種ベクターやコインテグレートベクター，バイ
ナリーベクター（pGA482, pGA580, pBI101, pBI121等）
などのＴｉプラスミド由来のベクター類が挙げられる。
ただし、Ｔｉプラスミド由来の植物ベクターの場合は、
得られた組換えＤＮＡを一旦アグロバクテリウム・ツメ
ファシエンスLBA4404 等に導入し、本組換え微生物を植
物細胞にco-cultureすることなどにより感染させること
によって、宿主植物に該ｃＤＮＡを導入することができ
る。なお、植物においてこれらの組換えＤＮＡを有する
個体を育成するには、既知の組織培養法により器官ある
いは個体を再生させればよい。

【００１４】酸性インベルターゼｃＤＮＡのベクターへ
の組み込みは、通常試験管内で次のようにして行うこと
ができる。酸性インベルターゼｃＤＮＡのＤＮＡ両端を
必要に応じてエキソヌクレアーゼで処理し、それぞれに
必要なＤＮＡを接続し、あるいはアニーリング可能な組
み合わせの塩基を複数個重合させる。しかる後、これを
目的とするベクターに組み込む。ベクターに組み込む方
法としては、ベクターを適当な制限酵素で切断し、必要
により適当なリンカーまたはアニーリング可能な組み合
わせの塩基を複数個重合させる。次いで、このように加
工した二本鎖ＤＮＡとベクターＤＮＡを混合し、リガー
ゼを用いて接続させる。得られた組換えＤＮＡは、ベク
ターの宿主である微生物，植物細胞及び動物細胞に導入
する。

【００１５】

【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。 実施例 Red ステージのトマト果実(Lycopersicon esculentum、
品種：ハウスおどりこ) を液体窒素とブレンダーを用い
て磨砕した後、塩酸グアニジン／フェノール法により総
ＲＮＡを抽出した。このＲＮＡ３８４μｇをオリゴｄＴ
セルロースカラムにアプライし、溶出されたｍＲＮＡを
常法に従ってエタノール沈澱させ、滅菌水に溶解した。
次いで、得られたｍＲＮＡ２μｇを鋳型としてGublerと
Hoffman の方法 (Gene,25,263,1983) によりｃＤＮＡを
合成した（Amersham cDNA synthesis system plus)。

【００１６】合成された二本鎖ｃＤＮＡ２００ｎｇを常
法に従ってフェノール処理、エタノール沈澱させた後、
EcoRI アダプターを介してEcoRI 消化λgt10アーム１μ
ｇとライゲーション反応を行った。反応はＴ４ＤＮＡリ
ガーゼ（2.５Ｕ）を用いて、１５℃で１４時間行った。
次いで、ライゲーション混液を常法に従ってインビトロ
パッケイジング（in vitro packaging) し、ファージ粒
子を形成させ、常法に従って大腸菌ＮＭ５１４株に形質
転換した。得られた形質転換株を培養して約４5,０００
のプラークを得た（Amersham cDNA cloning systemλgt
10) 。

【００１７】一方、酸性インベルターゼをトマト果実よ
り精製し、そのＮ−末端のアミノ酸配列を決定した。こ
の配列中でコドンの縮重の少ない領域について配列表の
配列番号２記載のオリゴヌクレオチドを合成した。ま
た、Ｎ−末端近傍に存在すると考えられているインベル
ターゼ共通アミノ酸配列(The Plant Cell,2,1107-1119,
1990) に基づくオリゴヌクレオチド（配列表の配列番号
３記載のもの）を合成した。

【００１８】上記２種のオリゴヌクレオチドをプライマ
ーとして、トマト果実ｍＲＮＡより合成した二本鎖ｃＤ
ＮＡを鋳型としてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行
った。その結果、約６０ｂｐのｃＤＮＡが増幅され、こ
れをＴ４ＤＮＡポリメラーゼにより平滑末端にした後、
プラスミドベクターｐＵＣ１８のHincII部位に連結し、
大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。この形質転換株か
らアルカリ−ＳＤＳ法によりプラスミドを抽出し、Sang
er法による塩基配列解析を行ったところ、先に求めたト
マト酸性インベルターゼＮ−末端のアミノ酸配列との比
較で、１０残基中８残基が一致したため、この断片は酸
性インベルターゼｃＤＮＡの一部分であると考えられ
た。この断片の塩基配列データをもとに、配列表の配列
番号４記載のオリゴヌクレオチド並びに配列表の配列番
号５記載のオリゴヌクレオチドを合成した。

【００１９】上記２種をプローブとしてλgt10ｃＤＮＡ
ライブラリーのプラークハイブリダイゼーションによる
スクリーニングを行ったところ、５０個の陽性プラーク
を得た。このうち最も長いｃＤＮＡを含むクローンλAi
v-１を選抜し、制限酵素EcoRI によりｃＤＮＡ断片を抜
き出した後、構造解析用プラスミドpBluescript KS+のE
coRI 部位に挿入し、サブクローニングを行った。次い
で、Steven Henikoffの方法(Gene,28,351,1984)およびY
anisch-Perronらの方法(Gene,23,103,1985)に基づいて
λAiv-１由来のクローンAiv-１の挿入部位を種々の程度
に欠損するプラスミドを作製し、大腸菌でクローニング
を行った。これらの一連の欠損プラスミドを用いて、Sa
nger法により酸性インベルターゼｃＤＮＡの完全構造を
明らかにした（配列表の配列番号１）。

【００２０】その結果、トマトの酸性インベルターゼ
は、５５３個のアミノ酸からなる前駆体として合成さ
れ、Ｎ−末端の９２個のアミノ酸が翻訳後取り除かれて
４６１個のアミノ酸よりなる成熟蛋白として果実中で存
在していることが、Ｎ−末端アミノ酸配列分析の結果か
らも明らかとなった。また、成熟蛋白に対応する部分に
は、インベルターゼ共通アミノ酸配列およびシステイン
残基を基本とする活性中心の配列が見出され、本遺伝子
は活性のあるインベルターゼ蛋白をコードするものと考
えられる。

【００２１】また、本遺伝子は先にデータベースに登録
されたｃＤＮＡと高い相同性を有しているが、Ｃ末端の
アミノ酸配列が８３残基程短くなっており、かつ末端の
１２残基は既報のものと全く異なるものであった。以上
に述べたように、本発明のｃＤＮＡはトマト果実の酸性
インベルターゼをコードするものであるが、先に報告さ
れているｃＤＮＡとはそのＣ末端アミノ酸配列が異なる
ため、局在性等を異にするアイソザイムの一つであると
考えられる。

【００２２】

【発明の効果】本発明により、トマト酸性インベルター
ゼをコードする相補的遺伝子と該遺伝子を有する組換え
ベクター及び該組換えベクターを有する形質転換体が提
供される。この酸性インベルターゼ遺伝子のセンス鎖あ
るいはアンチセンス鎖を、例えば野性型トマト等に導入
することにより、トマトなどの植物体中における当該酵
素の活性を上昇あるいは抑制することができるようにな
り、糖含量を制御した新しい植物の育成等に大きく寄与
することができる。

【００２３】

【配列表】

配列番号：1 配列の長さ：2339 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源 生物名：トマト(Lycopersicon esculentum Mill.) 株名：品種‘ハウスおどりこ’ 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1662 特徴を決定した方法：P 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：277..1659 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：insertion seq 存在位置：1623..1708 特徴を決定した方法：S 配列 ATG GCC ACT CAG TGT TAT GAC CCC GAA AAC TCC GCC TCT CGT TAC ACA 48 Met Ala Thr Gln Cys Tyr Asp Pro Glu Asn Ser Ala Ser Arg Tyr Thr -90 -85 -80 TTA CTC CCG GAT CAA CCC GAT TCC GGC CAC CGG AAG TCC CTT AAA ATC 96 Leu Leu Pro Asp Gln Pro Asp Ser Gly His Arg Lys Ser Leu Lys Ile -75 -70 -65 ATC TCC GGC ATT TTC CTC TCC GTT TTC CTT TTG CTT TCT GTA GCC TTC 144 Ile Ser Gly Ile Phe Leu Ser Val Phe Leu Leu Leu Ser Val Ala Phe -60 -55 -50 TTT CCG ATC CTC AAC AAC CAG TCA CCG GAC TTG CAA ATC GAC TCC CGT 192 Phe Pro Ile Leu Asn Asn Gln Ser Pro Asp Leu Gln Ile Asp Ser Arg -45 -40 -35 -30 TCG CCG GCG CCG CCG TCA AGA GGT GTT TCT CAG GGA GTC TCC GAT AAA 240 Ser Pro Ala Pro Pro Ser Arg Gly Val Ser Gln Gly Val Ser Asp Lys -25 -20 -15 ACT TTT CGA GAT GTA GCC GGT GCT AGT CAC GTT TCT TAT GCG TGG TCC 288 Thr Phe Arg Asp Val Ala Gly Ala Ser His Val Ser Tyr Ala Trp Ser -10 -5 1 AAT GCT ATG CTT AGC TGG CAA AGA ACG GCT TAC CAT TTT CAA CCT CAA 336 Asn Ala Met Leu Ser Trp Gln Arg Thr Ala Tyr His Phe Gln Pro Gln 5 10 15 20 AAA AAT TGG ATG AAC GAT CCT AAT GGA CCA TTG TAT CAC AAG GGA TGG 384 Lys Asn Trp Met Asn Asp Pro Asn Gly Pro Leu Tyr His Lys Gly Trp 25 30 35 TAC CAC CTT TTT TAT CAA TAC AAT CCA GAT TCA GCT ATT TGG GGA AAT 432 Tyr His Leu Phe Tyr Gln Tyr Asn Pro Asp Ser Ala Ile Trp Gly Asn 40 45 50 ATC ACA TGG GGC CAT GCT GTA TCC AAG GAC TTG ATC CAC TGG CTC TAC 480 Ile Thr Trp Gly His Ala Val Ser Lys Asp Leu Ile His Trp Leu Tyr 55 60 65 TTG CCT TTT GCC ATG GTT CCT GAT CAA TGG TAT GAT ATT AAC GGT GTC 528 Leu Pro Phe Ala Met Val Pro Asp Gln Trp Tyr Asp Ile Asn Gly Val 70 75 80 TGG ACA GGG TCC GCT ACC ATC CTA CCC GAT GGT CAG ATC ATG ATG CTT 576 Trp Thr Gly Ser Ala Thr Ile Leu Pro Asp Gly Gln Ile Met Met Leu 85 90 95 100 TAT ACC GGT GAC ACT GAT GAT TAT GTG CAA GTG CAA AAT CTT GCG TAC 624 Tyr Thr Gly Asp Thr Asp Asp Tyr Val Gln Val Gln Asn Leu Ala Tyr 105 110 115 CCC GCC AAC TTA TCT GAT CCT CTC CTT CTA GAC TGG GTC AAG TTC AAA 672 Pro Ala Asn Leu Ser Asp Pro Leu Leu Leu Asp Trp Val Lys Phe Lys 120 125 130 GGC AAC CCG GTT CTG GTT CCT CCA CCC GGC ATT GGT GTC AAG GAC TTT 720 Gly Asn Pro Val Leu Val Pro Pro Pro Gly Ile Gly Val Lys Asp Phe 135 140 145 AGA GAC CCG ACT ACT GCT TGG ACC GGA CCA CAA AAT GGG CAA TGG CTG 768 Arg Asp Pro Thr Thr Ala Trp Thr Gly Pro Gln Asn Gly Gln Trp Leu 150 155 160 TTA ACA ATC GGG TCT AAG ATT GGT AAA ACG GGT GTT GCA CTT GTT TAT 816 Leu Thr Ile Gly Ser Lys Ile Gly Lys Thr Gly Val Ala Leu Val Tyr 165 170 175 180 GAA ACT TCC AAC TTC ACA AGC TTT AAG CTA TTG GAT GGA GTG CTG CAT 864 Glu Thr Ser Asn Phe Thr Ser Phe Lys Leu Leu Asp Gly Val Leu His 185 190 195 GCG GTT CCG GGT ACG GGT ATG TGG GAG TGT GTG GAC TTT TAC CCG GTA 912 Ala Val Pro Gly Thr Gly Met Trp Glu Cys Val Asp Phe Tyr Pro Val 200 205 210 TCT ACT AAA AAA ACA AAC GGG TTG GAC ACA TCA TAT AAC GGG CCG GGT 960 Ser Thr Lys Lys Thr Asn Gly Leu Asp Thr Ser Tyr Asn Gly Pro Gly 215 220 225 GTA AAG CAT GTG TTA AAA GCA AGT TTA GAT GAC AAT AAG CAA GAT CAT 1008 Val Lys His Val Leu Lys Ala Ser Leu Asp Asp Asn Lys Gln Asp His 230 235 240 TAT GCT ATT GGT ACG TAT GAC TTG GGA AAG AAC AAA TGG ACA CCC GAT 1056 Tyr Ala Ile Gly Thr Tyr Asp Leu Gly Lys Asn Lys Trp Thr Pro Asp 245 250 255 260 AAC CCG GAA TTG GAT TGT GGA ATT GGG TTG AGA CTA GAC TAT GGG AAA 1104 Asn Pro Glu Leu Asp Cys Gly Ile Gly Leu Arg Leu Asp Tyr Gly Lys 265 270 275 TAT TAT GCA TCA AAG ACT TTT TAT GAC CCG AAG AAA GAA CGA AGA GTA 1152 Tyr Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Pro Lys Lys Glu Arg Arg Val 280 285 290 CTG TGG GGA TGG ATT GGG GAA ACT GAC AGT GAA TCT GCT GAC CTG CAG 1200 Leu Trp Gly Trp Ile Gly Glu Thr Asp Ser Glu Ser Ala Asp Leu Gln 295 300 305 AAG GGA TGG GCA TCT GTA CAG AGT ATT CCA AGG ACA GTG CTT TAC GAC 1248 Lys Gly Trp Ala Ser Val Gln Ser Ile Pro Arg Thr Val Leu Tyr Asp 310 315 320 AAG AAG ACA GGG ACA CAT CTA CTT CAG TGG CCA GTG GAA GAA ATT GAA 1296 Lys Lys Thr Gly Thr His Leu Leu Gln Trp Pro Val Glu Glu Ile Glu 325 330 335 340 AGC TTA AGA GTG GGT GAT CCT ACT GTT AAG CAA GTC GAT CTT CAA CCA 1344 Ser Leu Arg Val Gly Asp Pro Thr Val Lys Gln Val Asp Leu Gln Pro 345 350 355 GGC TCA ATT GAG CTA CTC CGT GTT GAC TCA GCT GCA GAG TTG GAT ATA 1392 Gly Ser Ile Glu Leu Leu Arg Val Asp Ser Ala Ala Glu Leu Asp Ile 360 365 370 GAA GCC TCA TTT GAA GTG GAC AAA GTC GCG CTT CAG GGA ATA ATT GAA 1440 Glu Ala Ser Phe Glu Val Asp Lys Val Ala Leu Gln Gly Ile Ile Glu 375 380 385 GCA GAT CAT GTA GGT TTC AGT TGC TCT ACT AGT GGA GGT GCT GCT AGC 1488 Ala Asp His Val Gly Phe Ser Cys Ser Thr Ser Gly Gly Ala Ala Ser 390 395 400 AGA GGC ATT TTG GGA CCA TTT GGT GTC ATA GTA ATT GCT GAT CAA ACG 1536 Arg Gly Ile Leu Gly Pro Phe Gly Val Ile Val Ile Ala Asp Gln Thr 405 410 415 420 CTA TCT GAG CTA ACG CCA GTT TAC TTT TAC ATT TCT AAA GGA GCT GAT 1584 Leu Ser Glu Leu Thr Pro Val Tyr Phe Tyr Ile Ser Lys Gly Ala Asp 425 430 435 GGT CGT GCA GAG ACT CAC TTC TGT GCT GAT CAA ACT AGG TTT GCT TTT 1632 Gly Arg Ala Glu Thr His Phe Cys Ala Asp Gln Thr Arg Phe Ala Phe 440 445 450 CTA TCT GGC ACA ATT AAT TTG TCC TTG TAAAATGGAG ATGGATAAAA 1679 Leu Ser Gly Thr Ile Asn Leu Ser Leu 455 460 GTAGCGGGTT GTTGATCTGA TATATGCAGA TCCTCTGAGG CTCCGGGAGT TGGTAAACAA 1739 GTTTATGGTA GTTCAGTACC TGTGTTGGAC GGTGAAAAAC ATTCAATGAG ATTATTGGTG 1799 GATCACTCAA TTGTGGAGAG CTTTGCTCAA GGAGGAAGAA CAGTCATAAC ATCGCGAATT 1859 TACCCAACAA AGGCAGTAAA TGGAGCAGCA CGACTCTTTG TTTTCAACAA TGCCACAGGG 1919 GCTAGCGTTA CTGCCTCCGT CAAGATTTGG TCACTTGAGT CAGCTAATAT TCAATCCTTC 1979 CCTTTGCAAG ACTTGTAATC TTCTTTATTT CGTTTTTTTT TTCTTTTTCA TTTGAAGGTT 2039 ATTTCACCGA CGTCCCATCA AGAAAGGGAA GAGGGAGATC AATATATGTA GTGTTATTCG 2099 CCCTACCTTA GGATTAGATG TCATCTAGCA ATGTCAAATC TAGTAGAGTA TACAATGTAT 2159 GGGTTCCTGG AAACCGAGTA GAGCTTACCT GGATTCTATG TAAACTAAGA AAGCTCAGCA 2219 AATATATGCA CAAATAATTT ACAGAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 2279 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 2339

【００２４】配列番号：2 配列の長さ：17 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ

【００２５】配列番号：3 配列の長さ：14 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ

【００２６】配列番号：4 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 TCAAAAAAATTGGATGAACG 20

【００２７】配列番号：5 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/42 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１記載の塩基配列を有
   するトマト酸性インベルターゼをコードするｃＤＮＡ。
2. 【請求項２】 請求項１記載のｃＤＮＡを有する組換え
   ベクター。
3. 【請求項３】 請求項２記載の組換えベクターを有する
   形質転換体。