JPH0691A - ピルビン酸の製造方法 - Google Patents
ピルビン酸の製造方法Info
- Publication number
- JPH0691A JPH0691A JP4181558A JP18155892A JPH0691A JP H0691 A JPH0691 A JP H0691A JP 4181558 A JP4181558 A JP 4181558A JP 18155892 A JP18155892 A JP 18155892A JP H0691 A JPH0691 A JP H0691A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pyruvic acid
- medium
- producing
- debaryomyces
- hansenii
- Prior art date
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 医薬、農薬、香料などの合成原料として有用
なピルビン酸の効率的な製造方法を提供する。 【構成】 デバリオマイセス（Debaryomyces）属に属す
るピルビン酸生産菌、例えばデバリオマイセス・ハンセ
ニイ（Debaryomyces hansenii) Y-256株（微工研菌寄第
12970号）を、培養温度20〜35℃好ましくは30℃、pH3.
0〜8.0好ましくはpH6.0の条件で培養し、培地中に蓄積
されたピルビン酸を採取する。
なピルビン酸の効率的な製造方法を提供する。 【構成】 デバリオマイセス（Debaryomyces）属に属す
るピルビン酸生産菌、例えばデバリオマイセス・ハンセ
ニイ（Debaryomyces hansenii) Y-256株（微工研菌寄第
12970号）を、培養温度20〜35℃好ましくは30℃、pH3.
0〜8.0好ましくはpH6.0の条件で培養し、培地中に蓄積
されたピルビン酸を採取する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、発酵法によるピルビン
酸の製造方法に関する。ピルビン酸は、生体代謝の重要
な中間体であり、さらには医薬、農薬、香料などの各種
薬品の合成原料として利用されている。よって安価に製
造し得れば、種々の合成原料として有用である。
酸の製造方法に関する。ピルビン酸は、生体代謝の重要
な中間体であり、さらには医薬、農薬、香料などの各種
薬品の合成原料として利用されている。よって安価に製
造し得れば、種々の合成原料として有用である。
【０００２】
【従来の技術】従来発酵法によるピルビン酸の製造法と
しては、サッカロマイセス（Saccharomyces)属及びキャ
ンディダ（Candida)属、トルロプシス（Torulopsis）属
などの微生物による方法が知られている（特公昭51-344
75号、特公平3-5800号、特公平3-58275号等）。
しては、サッカロマイセス（Saccharomyces)属及びキャ
ンディダ（Candida)属、トルロプシス（Torulopsis）属
などの微生物による方法が知られている（特公昭51-344
75号、特公平3-5800号、特公平3-58275号等）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし従来法は、副生
成物、収率等改善すべき点が残っており、より工業的に
有利な製造法の開発が望まれていた。
成物、収率等改善すべき点が残っており、より工業的に
有利な製造法の開発が望まれていた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するため、多くの微生物についてそのピルビン
酸生産能を検索したところ、デバリオマイセス(Debaryo
myces)属に属する微生物が優れたピルビン酸生産能を有
することを見出だし、本発明を完成した。すなわち、本
発明は、デバリオマイセス(Debaryomyces)属に属する微
生物を用いてピルビン酸を効率よく製造する方法を提供
するものである。デバリオマイセス(Debaryomyces)属に
属する微生物が著量のピルビン酸を培地中に蓄積するこ
とはこれまで知られていなかった。
題を解決するため、多くの微生物についてそのピルビン
酸生産能を検索したところ、デバリオマイセス(Debaryo
myces)属に属する微生物が優れたピルビン酸生産能を有
することを見出だし、本発明を完成した。すなわち、本
発明は、デバリオマイセス(Debaryomyces)属に属する微
生物を用いてピルビン酸を効率よく製造する方法を提供
するものである。デバリオマイセス(Debaryomyces)属に
属する微生物が著量のピルビン酸を培地中に蓄積するこ
とはこれまで知られていなかった。
【０００５】本発明に用いられるピルビン酸生産菌は、
ピルビン酸生産能を有するデバリオマイセス(Debaryomy
ces)属に属する微生物であればいかなるものであっても
よいが、好ましくは、その生育にチアミン及びビオチン
を要求するものがよい。さらに、他の各種ビタミン類を
要求するものであってもよい。本発明に好適に用いられ
るピルビン酸生産菌として、例えば、デバリオマイセス
・ハンセニイ（Debaryomyces hansenii) Y-256株等を挙
げることができる。本菌株は、平成 4年 5月25日付けで
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第 12970
号として寄託されている。
ピルビン酸生産能を有するデバリオマイセス(Debaryomy
ces)属に属する微生物であればいかなるものであっても
よいが、好ましくは、その生育にチアミン及びビオチン
を要求するものがよい。さらに、他の各種ビタミン類を
要求するものであってもよい。本発明に好適に用いられ
るピルビン酸生産菌として、例えば、デバリオマイセス
・ハンセニイ（Debaryomyces hansenii) Y-256株等を挙
げることができる。本菌株は、平成 4年 5月25日付けで
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第 12970
号として寄託されている。
【０００６】デバリオマイセス・ハンセニイ（Debaryom
yces hansenii) Y-256株の菌学的性質は以下の通りであ
る。 １．形態的性質 麦芽エキス液体培地での増殖形式は多極性出芽増殖であ
り、細胞は球形または短卵形でその大きさは 2〜 7×
2.4〜 8.5μｍである。沈殿物や皮膜を形成する。麦芽
エキス寒天培地で黄色がかった灰白色のコロニーを形成
する。有性生殖は異形接合で母細胞と娘細胞との間に起
こる。子のう胞子は球形で表面にイボ状突起があり、子
のう内に 1ヶないしは非常に希に 2ヶ形成する。子のう
形成後のコロニーの色調は茶色になる。
yces hansenii) Y-256株の菌学的性質は以下の通りであ
る。 １．形態的性質 麦芽エキス液体培地での増殖形式は多極性出芽増殖であ
り、細胞は球形または短卵形でその大きさは 2〜 7×
2.4〜 8.5μｍである。沈殿物や皮膜を形成する。麦芽
エキス寒天培地で黄色がかった灰白色のコロニーを形成
する。有性生殖は異形接合で母細胞と娘細胞との間に起
こる。子のう胞子は球形で表面にイボ状突起があり、子
のう内に 1ヶないしは非常に希に 2ヶ形成する。子のう
形成後のコロニーの色調は茶色になる。
【０００７】２．生理的性質 (1) 発酵性：グルコース −または非常に弱い ガラクトース −または非常に弱い ラクトース − マルトース −または非常に弱い シュクロース −または非常に弱い (2) 資化性：ガラクトース ＋ アラビノー
ス ＋ シュクロース ＋ エリスリトール ＋ マルトース ＋ リビトール ＋ セロビオース ＋ マンニトール ＋ トレハロース ＋ コハク酸 ＋ ラフィノース ＋ イノシトール − 可溶性でんぷん ＋ 硝酸塩 − キシロース ＋ (3) ビタミン要求性：ビオチン要求性、チアミン要求性 以上の性質をもとにThe yeasts/a taxonomic study(thi
rd revised and enlarged edition;edited by N.J.W.Kr
egar-Van Rij) で検索したところ、 Y-256株は、デバリ
オマイセス・ハンセニイ（Debaryomyces hansenii)と同
定された。
ス ＋ シュクロース ＋ エリスリトール ＋ マルトース ＋ リビトール ＋ セロビオース ＋ マンニトール ＋ トレハロース ＋ コハク酸 ＋ ラフィノース ＋ イノシトール − 可溶性でんぷん ＋ 硝酸塩 − キシロース ＋ (3) ビタミン要求性：ビオチン要求性、チアミン要求性 以上の性質をもとにThe yeasts/a taxonomic study(thi
rd revised and enlarged edition;edited by N.J.W.Kr
egar-Van Rij) で検索したところ、 Y-256株は、デバリ
オマイセス・ハンセニイ（Debaryomyces hansenii)と同
定された。
【０００８】ピルビン酸を発酵生産するためには、上記
菌株等を好気的に培養すればよく、振とう培養法、通気
攪拌培養法等を採用すればよい。本発明で用いられる培
地は、発酵に通常使用されるものを用いればよい。すな
わち、炭素源として例えば、グルコース、シュクロー
ス、ガラクトース、でんぷん等の糖類、コハク酸、クエ
ン酸等の有機酸、エタノール、マンニトール等のアルコ
ール類を単独または混合して使用すればよく、また窒素
源としては、例えば硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機窒素源、尿素、ペプト
ン、肉エキス等の有機窒素源を単独または混合して使用
すればよい。また、無機塩類としては、リン酸カリウ
ム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硫酸鉄、硫酸
マンガン等が用いられ、さらに必要に応じてチアミン、
ビオチンなどのビタミン類またはこれらを含有する酵母
エキス等を添加すればよい。
菌株等を好気的に培養すればよく、振とう培養法、通気
攪拌培養法等を採用すればよい。本発明で用いられる培
地は、発酵に通常使用されるものを用いればよい。すな
わち、炭素源として例えば、グルコース、シュクロー
ス、ガラクトース、でんぷん等の糖類、コハク酸、クエ
ン酸等の有機酸、エタノール、マンニトール等のアルコ
ール類を単独または混合して使用すればよく、また窒素
源としては、例えば硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機窒素源、尿素、ペプト
ン、肉エキス等の有機窒素源を単独または混合して使用
すればよい。また、無機塩類としては、リン酸カリウ
ム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硫酸鉄、硫酸
マンガン等が用いられ、さらに必要に応じてチアミン、
ビオチンなどのビタミン類またはこれらを含有する酵母
エキス等を添加すればよい。
【０００９】培養温度は、20〜35℃、好ましくは30℃付
近（又は27〜32℃）が特に好ましい。pHは、 3.0〜 8.
0、好ましくは 6.0付近（又は 5.0〜 7.0）が特に好ま
しい。培養が進行すると培地中にピルビン酸が蓄積する
ため、pHが下がり、ピルビン酸の生産効率が低下する。
このため炭酸カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム等の塩基性物質を添加し、好ましいpHに調節する
とよい。
近（又は27〜32℃）が特に好ましい。pHは、 3.0〜 8.
0、好ましくは 6.0付近（又は 5.0〜 7.0）が特に好ま
しい。培養が進行すると培地中にピルビン酸が蓄積する
ため、pHが下がり、ピルビン酸の生産効率が低下する。
このため炭酸カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム等の塩基性物質を添加し、好ましいpHに調節する
とよい。
【００１０】培養終了後、培地中に蓄積されたピルビン
酸は常法により、単離採取することができる。例えば、
酸性条件下での溶媒抽出法、フェニルヒドラゾン化して
沈殿単離する方法などを採用することができる。
酸は常法により、単離採取することができる。例えば、
酸性条件下での溶媒抽出法、フェニルヒドラゾン化して
沈殿単離する方法などを採用することができる。
【００１１】以下、実施例により本発明をさらに詳細に
説明する。
説明する。
実施例１ グルコース10％、ペプトン 2％、KH2PO4 0.1％、MgSO4・
7H2O 0.05％、FeSO4・7H2O 10mg/ml、MnSO4・4-6H2O 10mg
/ml、CoCl2・6H2O 10mg/ml、ビオチン 2μg/l、チアミン
10μg/l、CaCO3 40g/l、 pH5.5からなる培地10mlを含む
500ml容量のマイヤーフラスコに Y-256株を接種し、28
℃で 4日間培養した。遠心分離操作で得られた上澄中の
ピルビン酸濃度は 42g/lであった。なお、培地中のピル
ビン酸は、HPLCを用いて測定した。 HPLC測定条件 カラム：Shim-pack SCR-102H(7.9mmφ×300mm) 移動相：HClO4(pH2.1) 流速：1.2ml/min 検出：UV 210nm ピルビン酸の保持時間は6.1minであった。
7H2O 0.05％、FeSO4・7H2O 10mg/ml、MnSO4・4-6H2O 10mg
/ml、CoCl2・6H2O 10mg/ml、ビオチン 2μg/l、チアミン
10μg/l、CaCO3 40g/l、 pH5.5からなる培地10mlを含む
500ml容量のマイヤーフラスコに Y-256株を接種し、28
℃で 4日間培養した。遠心分離操作で得られた上澄中の
ピルビン酸濃度は 42g/lであった。なお、培地中のピル
ビン酸は、HPLCを用いて測定した。 HPLC測定条件 カラム：Shim-pack SCR-102H(7.9mmφ×300mm) 移動相：HClO4(pH2.1) 流速：1.2ml/min 検出：UV 210nm ピルビン酸の保持時間は6.1minであった。
【００１２】実施例２ グルコース10％、ペプトン 2％、KH2PO4 0.1％、MgSO4・
7H2O 0.05％、FeSO4・7H2O 10mg/ml、MnSO4・4-6H2O 10mg
/ml、CoCl2・6H2O 10mg/ml、ビオチン 2μg/l、チアミン
10μg/l、 pH6.0からなる培地 1lを2l容量のジャーフ
ァーメンターに入れ殺菌した。40mlのYM培地（ペプトン
5％、酵母エキス 0.3％、麦芽エキス 0.3％、グルコー
ス 1.0％、pH5.6)で前培養された Y-256株を接種し、28
℃、500rpm、1vvmで培養した。培養中のpHは、50％NaOH
で 6.0に調節した。培養66時間後のピルビン酸濃度は 4
0g/lであった。遠心分離操作で得られた上澄液 900mlに
塩酸を加えて pH2.0とし、エチルエーテルで抽出し、次
いでNaOHでpHを 5.5に中和した後、40℃で減圧濃縮し、
液量を20ml程度とした。この濃縮液にエタノールを滴下
させ、ピルビン酸ナトリウム 29.3g（純度98％）を得
た。
7H2O 0.05％、FeSO4・7H2O 10mg/ml、MnSO4・4-6H2O 10mg
/ml、CoCl2・6H2O 10mg/ml、ビオチン 2μg/l、チアミン
10μg/l、 pH6.0からなる培地 1lを2l容量のジャーフ
ァーメンターに入れ殺菌した。40mlのYM培地（ペプトン
5％、酵母エキス 0.3％、麦芽エキス 0.3％、グルコー
ス 1.0％、pH5.6)で前培養された Y-256株を接種し、28
℃、500rpm、1vvmで培養した。培養中のpHは、50％NaOH
で 6.0に調節した。培養66時間後のピルビン酸濃度は 4
0g/lであった。遠心分離操作で得られた上澄液 900mlに
塩酸を加えて pH2.0とし、エチルエーテルで抽出し、次
いでNaOHでpHを 5.5に中和した後、40℃で減圧濃縮し、
液量を20ml程度とした。この濃縮液にエタノールを滴下
させ、ピルビン酸ナトリウム 29.3g（純度98％）を得
た。
Claims (3)
- 【請求項１】 デバリオマイセス（Debaryomyces）属に
属するピルビン酸生産菌を培養し、培地中に蓄積された
ピルビン酸を採取することを特徴とする、ピルビン酸の
製造方法。 - 【請求項２】 デバリオマイセス（Debaryomyces）属に
属し、生育のためにチアミン及びビオチンを必要とする
ピルビン酸生産菌を培養し、培地中に蓄積されたピルビ
ン酸を採取することを特徴とする、ピルビン酸の製造方
法。 - 【請求項３】 デバリオマイセス・ハンセニイ（Debary
omyces hansenii)に属するピルビン酸生産菌を培養し、
培地中に蓄積されたピルビン酸を採取することを特徴と
する、ピルビン酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4181558A JPH0691A (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | ピルビン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4181558A JPH0691A (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | ピルビン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0691A true JPH0691A (ja) | 1994-01-11 |
Family
ID=16102893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4181558A Pending JPH0691A (ja) | 1992-06-17 | 1992-06-17 | ピルビン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0691A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002253273A (ja) * | 2000-08-08 | 2002-09-10 | Roche Vitamins Ag | 標的発酵産物の生産のための方法 |
| JP2017007965A (ja) * | 2015-06-18 | 2017-01-12 | ノーベルファーマ株式会社 | ピルビン酸ナトリウムの製造方法 |
-
1992
- 1992-06-17 JP JP4181558A patent/JPH0691A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002253273A (ja) * | 2000-08-08 | 2002-09-10 | Roche Vitamins Ag | 標的発酵産物の生産のための方法 |
| JP2017007965A (ja) * | 2015-06-18 | 2017-01-12 | ノーベルファーマ株式会社 | ピルビン酸ナトリウムの製造方法 |
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