JPH069462A

JPH069462A - アフィディコラン誘導体およびその製造法

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Publication number: JPH069462A
Application number: JP22777492A
Authority: JP
Inventors: Tokiyuki Hiramitsu; 時幸平光; Atsushi Mori; 敦史毛利; Katsunori Suzuki; 功徳鈴木
Original assignee: Nippon Mektron KK
Current assignee: Nippon Mektron KK
Priority date: 1992-04-28
Filing date: 1992-08-05
Publication date: 1994-01-18

Abstract

(57)【要約】（修正有）【目的】 16β-低級アルコキシ-3α,17,18-トリヒドロ
キシアフィディコランおよびその合成中間体、ならびに
それらの製造法を提供する。【構成】 3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エポキシアフ
ィディコランに、酸性物質を触媒として低級アルコール
を反応させて、式（Ｉ）の16β-低級アルコキシ-3α,1
7,18-トリヒドロキシアフィディコランを得る。また、3
α,16β,18-トリヒドロキシ-17-p-トルエンスルホニル
オキシアフィディコランに、3α,18-イソプロピリデン
ジオキシ基を導入した後加水分解し、次いで17-位にト
リチルオキシ基を導入した後、ヨウ化メチルと反応さ
せ、16β-位をメトキシ基としてから、3α,18-イソプロ
ピリデンジオキシ基および17-トリチルオキシ基を加水
分解して、3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-メトキシア
フィディコランを得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アフィディコラン誘導
体およびその製造法に関する。更に詳しくは、抗腫瘍作
用を有する新規なアフィディコラン誘導体およびその製
造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】代表的なアフィディコラン誘導体である
アフィディコリンは、かびの一種である Verticillium
lecanii より得られる抗ウィルス剤として発見され、テ
トラサイクリックジテルペンテトラオールの構造を有す
る水難溶性物質であり、真核細胞由来DNAポリメラーゼ
αおよびδ型に高い特異的阻害作用を示すことから、こ
の酵素の型の判別に用いられており、特殊なウィルスを
除き、原核細胞由来のDNAポリメラーゼには無効であ
り、主としてDNAの複製、修復機序の解析などに利用さ
れている。また、抗腫瘍作用、抗ウィルス作用、植物種
子生長抑制作用を有することも知られており、こうした
用途への利用も図られている。

【０００３】また、近年では、アフィディコリンの抗腫
瘍活性に注目し、種々の誘導体も合成されている(特開
昭59-88438号公報、同61-83138号公報、同62-155232号
公報、同62-155239号公報、Nucleic Acid Research 第1
7巻第6339〜6348頁、1989年、J．Chem．Soc.，Perkin T
rans．Ｉ第41〜46頁、1992年など)。特に、プロドラッ
グとして合成された水溶性のエステル誘導体であるアフ
ィディコリン-17-グリシネートについては、臨床試験が
進められており、血中でアフィディコリンを生成して、
抗腫瘍活性を示すとされている(J．of Pharm．Sci．第7
8巻第5号第399〜401頁、1989年)。しかしながら、生成
したアフィディコリンの血中濃度は、急速に低下すると
の報告もなされている(AACR第31巻第180頁、1990年)。

【０００４】ところでアフィディコリンに含まれる４個
の水酸基を種々の置換基に置換した誘導体を合成し、そ
れらのDNAポリメラーゼα阻害活性を測定した報告があ
り(Chem．Pharm．Bull．第35巻第1641〜1644頁、1987
年)、その中に16β-位のアルコール性水素基のみを保護
基としてのメトキシメチル基に置換した化合物が記載さ
れているが、DNAポリメラーゼαに対する阻害作用は示
さないことが述べられている。

【０００５】一方、16β-位のアルコール性水素基のみ
を安定なアルキル基で置換した化合物は未だ報告されて
おらず、従ってその生物活性も不明である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、16β
-低級アルコキシ-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディ
コランおよびその合成中間体ならびにそれらの製造法を
提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明によって、次の４
種類のアフィディコラン誘導体が提供される。

【化１】 16β-低級アルコキシ-3α,17,18-トリヒドロキシアフィ
ディコラン[Ｉ] R＝低級アルキル基

【化２】 16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロピリデンジオキシ-17
-p-トルエンスルホニルオキシアフィディコラン[II] R´＝H，X＝p-トルエンスルホニル基 16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロピリデンジオキシ-17
-トリチルオキシアフィディコラン[III] R´＝H，X＝トリチル基 (トリフェニルメチル基) 3α,18-イソプロピリデンジオキシ-16β-メトキシ-17-
トリチルオキシアフィディコラン[IV] R´＝CH₃，X＝トリチル基

【０００８】以下、反応工程順に、化合物[Ｉ]の内、3
α,17,18-トリヒドロキシ-16β-メトキシアフィディコ
ランの製造法を説明する。(1)3α,16β,18-トリヒドロ
キシ-17-p-トルエンスルホニルオキシアフィディコラン
に、酸性物質触媒の存在下で、2,2-ジメトキシプロパン
を反応させ、前記化合物[II]を得る。ここで用いられる
原料化合物は、特開昭59-88438号公報に記載される如
く、アフィディコリンをピリジン溶媒中p-トルエンスル
ホン酸ハライドと反応させることにより得られる。

【０００９】酸性物質触媒としては、p-トルエンスルホ
ン酸などの有機酸、塩酸などの無機酸が用いられる。反
応は、通常原料化合物をアセトンなどの反応を妨害しな
い溶媒中にけん濁または溶解させ、そこに約2〜100倍モ
ル量の2,2-ジメトキシプロパンおよび触媒量の酸性物質
を添加し、約-5〜40℃、好ましくは約0〜20℃で反応さ
せることにより行われる。

【００１０】(2)このようにして得られた化合物[II]
を、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホ
キシドなどの反応に不活性な水混和性溶媒中に溶解し、
大過剰量の水酸化アルカリ水溶液と約50〜150℃、好ま
しくは約80〜120℃で反応させ、16β,17-ジヒドロキシ-
3α,18-イソプロピリデンジオキシアフィディコラン
[Ｖ;前記一般式でR´＝H，X＝Hの化合物]を得る。

【００１１】(3)化合物[Ｖ]を、ピリジン溶媒中、1.0〜
1.5倍モル量のトリチルハライドと約20〜100℃、好まし
くは約50〜80℃で反応させて、前記化合物[III]を得
る。

【００１２】(4)得られた化合物[III]を、テトラヒドロ
フラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド
などの非プロトン性極性溶媒中、n-ブチルリチウム、水
素化ナトリウムなどの強塩基の存在下で、約2〜20倍モ
ル量のヨードメチル、ジメチル硫酸などのメチル化剤と
約0〜60℃、好ましくは約20〜50℃で反応させることに
より、前記化合物[IV]を得る。

【００１３】(5)化合物[IV]を、水の存在下で酸性物質
と処理して、イソプロピリデン基およびトリチル基の両
者を加水分解させる。加水分解反応は、水または反応に
不活性な溶媒と水との混合溶媒中に化合物[IV]を溶解ま
たはけん濁し、前記と同様の酸性物質触媒の存在下で約
0〜100℃で行われ、最終目的物たる前記化合物[Ｉ]を得
る。

【００１４】3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-メトキシ
アフィディコランは、3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エ
ポキシアフィディコラン

【化３】に、メタノールを反応させることによっても得ることが
でき、同様にエタノール、n-プロパノール、イソプロパ
ノール、n-ブタノール、n-ペンタノールなどの他の低級
アルコールを反応させることによって、16β-低級アル
コキシ-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコランを
得ることができる。

【００１５】この反応の原料化合物である3α,18-ジヒ
ドロキシ-16β,17-エポキシアフィディコランは、公知
の化合物であり、特開昭59-88438号公報に記載されてい
る3α,16β,18-トリヒドロキシ-17-p-トルエンスルホニ
ルオキシアフィディコランを、塩基性物質と反応させる
ことによっても得ることができる(特願平3-237489号参
照)。

【００１６】この原料化合物と低級アルコールとの反応
は、溶媒を兼ねて低級アルコールを大過剰に用い、触媒
量の酸性物質の存在下で、約-5〜100℃、好ましくは約0
〜30℃の反応温度で行われる。この際、テトラヒドロフ
ラン、ジオキサンなどのこの反応条件下では原料化合物
と反応しない溶媒で希釈して反応させることもできる。
触媒として用いられる酸性物質としては、例えばp-トル
エンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸、塩
酸、硫酸などの無機酸、テトラシアノエチレンなどのπ
酸などが挙げられる。

【００１７】

【発明の効果】本発明により、16β-位に低級アルコキ
シ基を有する新規なアフィディコラン誘導体が提供され
る。また、その合成中間体として有用な３種のアフィデ
ィコラン誘導体が提供される。

【００１８】本発明によって提供される16β-低級アル
コキシ誘導体は、16β-位水酸基を安定なアルキルエー
テル型にした始めての化合物である。そして、培養細胞
レベルでは、高い抗腫瘍活性を示すことに加え、16β-
位に低級アルコキシ基を有していることから、アフィデ
ィコリンとは異なった体内代謝を受けることが考えられ
る。

【００１９】

【実施例】次に、実施例について本発明を説明する。

【００２０】実施例１ 3α,16β,18-トリヒドロキシ-17-p-トルエンスルホニル
オキシアフィディコラン8.04gを、アセトン80ml中にけ
ん濁し、氷冷した。このけん濁液に、2,2-ジメトキシプ
ロパン4.0mlおよび触媒量のp-トルエンスルホン酸を加
え、氷冷温度に維持しながら、１時間撹拌した。反応混
合物を、氷冷した2%炭酸水素ナトリウム水溶液300ml中
に注入後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固した。残渣を、n-
ヘキサンで処理し、16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロ
ピリデンジオキシ-17-p-トルエンスルホニルオキシアフ
ィディコラン(融点142〜145℃)6.86gを無色の粉末とし
て得た。¹ H NMR(CDCl₃，TMS)(270MHz)δ:0.71(3H,s)，0.96(3H,
s)，1.397(3H,s)，1.40(3H,s)，2.45(3H,s)，3.22(1H,d
J=12.2Hz)，3.62(1H,d J=12.2Hz)，3.62(1H,b)，3.86
(2H,ABq J=9.9Hz)，7.35(2H,d J=8.0Hz)，7.79(2H,d J=
8.0Hz)¹³ C NMR(CDCl₃，TMS)(68MHz)δ:144.9，132.7，129.9，
128.0，98.0，75.4，73.4，73.4，68.8，49.0，41.2，4
0.0，39.6，35.2，33.3，32.3，31.3，29.5，27.9，26.
9，26.6，24.3，24.1，22.5，21.7，19.1，17.3，15.4

【００２１】実施例２実施例１で得られた16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロ
ピリデンジオキシ-17-p-トルエンスルホニルオキシアフ
ィディコラン3.27gを、ジオキサン250mlおよび1N水酸化
カリウム水溶液250mlの混合溶液中に加え、18時間加熱
還流した。反応混合物を濃縮後、残渣に氷水を加え、析
出物をロ取、水洗、乾燥して、16β,17-ジヒドロキシ-3
α,18-イソプロピリデンジオキシアフィディコラン(融
点75〜85℃)2.21gを無色の粉末として得た。¹ H NMR(CDCl₃，TMS)(270MHz)δ:0.73(3H,s)，0.99(3H,
s)，1.41(6H,s)，3.23(1H,d J=12.2Hz)，3.40(2H,ABq J
=11.2Hz)，3.63(1H,b)，3.64(1H,d J=12.2Hz)

【００２２】実施例３実施例２で得られた16β,17-ジヒドロキシ-3α,18-イソ
プロピリデンジオキシアフィディコラン2.05gおよびト
リチルクロライド3.03gを、20mlのピリジン中、80℃で3
時間撹拌した。冷却後、反応混合物を氷水中に注入し、
析出物をロ取、水洗、乾燥した。乾燥物をカラムクロマ
トグラフィー(ワコーゲルC-300 75g、溶離液メタノール
/クロロホルム＝1/199)で精製し、16β-ヒドロキシ-3
α,18-イソプロピリデンジオキシ-17-トリチルオキシア
フィディコラン(融点241〜244℃)2.58gを無色の粉末と
して得た。¹ H NMR(CDCl₃，TMS)(270MHz)δ:0.71(3H,s)，0.97(3H,
s)，1.40(6H,s)，2.98(2H,ABq J=8.9Hz)，3.21(1H,d J=
12.2Hz)，3.62(1H,d J=12.2Hz)，3.62(1H,b)，7.20〜7.
44(15H，m)¹³ C NMR(CDCl₃，TMS)(68MHz)δ:143.9，128.7，127.8，
127.0，98.0，86.3，74.2，73.5，68.8，68.2，49.1，4
2.2，40.1，39.6，35.2，33.3，32.7，31.3，29.5，28.
9，27.0，26.6，24.5，24.3，22.6，19.1，17.4，15.4

【００２３】実施例４実施例３で得られた16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロ
ピリデンジオキシ-17-トリチルオキシアフィディコラン
1.78gを、窒素気流下で30mlのテトラヒドロフランに溶
解させる。この溶液に、n-ブチルリチウムの1.68モル濃
度のn-ヘキサン溶液7.64mlを加え、室温下で１時間撹拌
した後、ヨウ化メチル１mlを加え、50℃で3時間撹拌し
た。得られた反応液に、更に上記n-ブチルリチウム溶液
7.64mlを加え、30分間撹拌後、ヨウ化メチル2mlを加え
て、50℃で3時間撹拌した。

【００２４】反応混合物を室温に冷却後、100mlの氷水
中に注入し、酢酸エチルで抽出した。この抽出液を水洗
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固した。残渣
を、カラムクロマトグラフィー(ワコーゲルC-300 100
g、メタノール/クロロホルム＝1/199)で精製し、3α,18
-イソプロピリデン-16β-メトキシ-17-トリチルオキシ
アフィディコラン(融点196〜199℃)1.52gを無色の粉末
として得た。¹ H NMR(CDCl₃，TMS)(270MHz)δ:0.71(3H,s)，0.96(3H,
s)，1.40(6H,s)，3.00(2H,ABq J=10.6Hz)，3.10(3H,
s)，3.21(1H,d J=12.2Hz)，3.61(1H,b)，3.62(1H,d J=1
2.2Hz)，7.18〜7.49(15H，m)¹³ C NMR(CDCl₃，TMS)(68MHz)δ:144.1，128.8，127.7，
126.8，98.0，86.1，78.7，73.5，68.8，63.8，49.4，4
8.8，40.3，39.8，39.6，35.2，33.3，32.5，31.5，29.
6，26.9，26.6，25.1，24.5，24.3，22.6，19.1，17.
4，15.4

【００２５】実施例５実施例４で得られた3α,18-イソプロピリデン-16β-メ
トキシ-17-トリチルオキシアフィディコラン1.52gを、1
5mlの80%酢酸水溶液中で、80℃で2時間撹拌した。反応
混合物を濃縮乾固後、残渣を20mlの酢酸エチルで処理
し、析出した粉末をロ取後、カラムクロマトグラフィー
(ワコーゲルC-300 15g、溶離液メタノール/クロロホル
ム＝3/100)で精製して、3α,17,18-トリヒドロキシ-16
β-メトキシアフィディコラン(融点182〜186℃)250mgを
無色の粉末として得た。¹H NMR(pyridine-d₅，TMS)(270
MHz)δ:0.80(3H,s)，1.02(3H,s)，3.32(3H,s)，3.58〜
3.85(4H，m)，3.93(1H,b)，5.69(1H,b)，5.77(1H,dd)，
6.28(1H,d J=2.3Hz)¹³ C NMR(pyridine-d₅，TMS)(68MHz)δ:79.3，76.3，71.
9，62.9，49.3，48.9，41.0，40.6，40.1，39.4，34.
0，33.0，31.7，27.4，27.2，25.4，25.4，23.5，18.
1，15.4

【００２６】実施例６ 3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エポキシアフィディコラ
ン1.025gを、メタノール10mlに溶解させた溶液中に、p-
トルエンスルホン酸１水和物１mgを加え、室温下で30分
間撹拌した。反応混合物を氷水200ml中に注入した後、
析出物をロ取し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
(ワコーゲルC-300 150g、溶離液：メタノール/クロロホ
ルム＝3/100)で精製した後、酢酸エチルで再結晶して、
3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-メトキシアフィディコ
ラン402mgを無色のプリズム晶として得た。このものの
融点、¹H NMRおよび¹³C NMRは、上記実施例５で得られ
たものと完全に一致していた。

【００２７】実施例７ 3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エポキシアフィディコラ
ン658mgをエタノール8mlに溶解させた溶液中に、p-トル
エンスルホン酸１水和物１mgを加え、室温下で１時間撹
拌した。反応混合物を氷水100ml中に注入した後、酢酸
エチル75mlで抽出した。酢酸エチル層を100mlの水で２
回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧濃縮して、
756mgの残渣を得た。この残渣を、フラッシュクロマト
グラフィー(粒径15〜40μmのメルク社製シリカゲルを20
g使用、溶離液：メタノール/クロロホルム＝1/49)で精
製し、更にHPLC(イナートシルPREP-ODS、溶離液：メタ
ノール/水＝4/1)で精製した後、酢酸エチルで再結晶し
て、16β-エトキシ-3α,17,18-トリヒドロキシアフィデ
ィコラン(融点203〜212℃)240mgを無色のプリズム晶と
して得た。¹ H NMR(pyridine-d₅，TMS)(270MHz)δ:0.80(3H,s)，1.0
3(3H,s)，1.20(3H,t J=6.9Hz)，2.45(1H,dd J=3.6,13.2
Hz)，2.55(1H,t J=6.9Hz)，2.85(1H,dd J=3.0,12.2H
z)，3.59(2H,q J=6.9Hz)，3.64〜3.86(4H，m)，3.91〜
3.96(1H，b)¹³ C NMR(pyridine-d₅，TMS)(68MHz)δ:79.2，76.3，71.
9，63.7，56.2，49.3，41.0，40.6，40.1，39.7，34.
0，33.1，31.7，27.4，27.2，25.7，25.4，23.5，18.
1，16.4，15.4

【００２８】[腫瘍細胞増殖抑制試験]マウス腫瘍細胞YA
C-1 10⁶cells/mlを含むRPMI 1640培地(10%のFCS、100U/
mlのペニシリンおよび100μg/mlのストレプトマイシン
添加)100μlを、96穴マイクロプレート各ウェルに分注
し、更に各種濃度の3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-メ
トキシアフィディコラン(5%ジメチルスルホキシド溶液
を前述のRPMI 1640培地で希釈し、各種濃度に調製した
もの)100μlを各ウェルに加えて、37℃、5%CO₂のインキ
ュベータ内で、72時間培養した。培地の色の変化をコン
トロールと比較して、腫瘍細胞の増殖の有無を判定した
結果、3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-メトキシアフィ
ディコランは、0.39μg/mlの濃度で腫瘍細胞の増殖を完
全に抑制した。また、対応する16β-エトキシ置換体
は、0.78μg/mlの濃度で腫瘍細胞の増殖を完全に抑制し
た。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｄ 317/70

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】 16β-低級アルコキシ-3α,17,18-トリヒ
ドロキシアフィディコラン。
【請求項２】 16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロピリ
デンジオキシ-17-p-トルエンスルホニルオキシアフィデ
ィコラン。
【請求項３】 16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロピリ
デンジオキシ-17-トリチルオキシアフィディコラン。
【請求項４】 3α,18-イソプロピリデンジオキシ-16β
-メトキシ-17-トリチルオキシアフィディコラン。
【請求項５】 3α,16β,18-トリヒドロキシ-17-p-トル
エンスルホニルオキシアフィディコランおよび2,2-ジメ
トキシプロパンを反応させることを特徴とする16β-ヒ
ドロキシ-3α,18-イソプロピリデンジオキシ-17-p-トル
エンスルホニルオキシアフィディコランの製造法。
【請求項６】 16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロピリ
デンジオキシ-17-p-トルエンスルホニルオキシアフィデ
ィコランを加水分解反応させることを特徴とする16β,1
7-ジヒドロキシ-3α,18-イソプロピリデンジオキシアフ
ィディコランの製造法。
【請求項７】 16β,17-ジヒドロキシ-3α,18-イソプロ
ピリデンジオキシアフィディコランをトリチルハライド
と反応させることを特徴とする16β-ヒドロキシ-3α,18
-イソプロピリデンジオキシ-17-トリチルオキシアフィ
ディコランの製造法。
【請求項８】 16β-ヒドロキシ-3α,18-イソプロピリ
デンジオキシ-17-トリチルオキシアフィディコランをメ
チル化剤と反応させることを特徴とする3α,18-イソプ
ロピリデンジオキシ-16β-メトキシ-17-トリチルオキシ
アフィディコランの製造法。
【請求項９】 3α,18-イソプロピリデンジオキシ-16β
-メトキシ-17-トリチルオキシアフィディコランを加水
分解反応させることを特徴とする3α,17,18-トリヒドロ
キシ-16β-メトキシアフィディコランの製造法。
【請求項10】 3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エポキシ
アフィディコランに低級アルコールを反応させることを
特徴とする3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-低級アルコ
キシアフィディコランの製造法。