JPH0710818A

JPH0710818A - アフィディコラン誘導体およびその製造法

Info

Publication number: JPH0710818A
Application number: JP17089693A
Authority: JP
Inventors: Atsushi Mori; 敦史毛利; Tokiyuki Hiramitsu; 時幸平光; Chiaki Yasuhara; 千晶安原; Katsunori Suzuki; 功徳鈴木
Original assignee: Nippon Mektron KK
Current assignee: Nippon Mektron KK
Priority date: 1993-06-18
Filing date: 1993-06-18
Publication date: 1995-01-13

Abstract

(57)【要約】【目的】 16β-位に置換アミノエトキシを有するアフ
ィディコラン誘導体およびその製造法を提供する。【構成】 16β-(2-ハロゲノエトキシ)-3α,17,18-トリ
ヒドロキシアフィディコランに、モノ低級アルキルアミ
ンまたはそのアミノ-、シアノ-、ヒドロキシ-置換体、
ジ低級アルキルアミン、環状アミン、アミノピリジンあ
るいはフタルイミド(塩)を反応させ、16β-位を2-(置換
アミノ)エトキシ基に変換させる。16β-位を2-フタルイ
ミドエトキシ基に変換させた誘導体は、ヒドラジン・1
水和物と反応させて2-アミノエトキシ基に導くことがで
き、これをハロ酢酸低級アルキルエステルと反応させた
後加水分解すると、2-(カルボキシメチルアミノ)エトキ
シ基に変換される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アフィディコラン誘導
体およびその製造法に関する。更に詳しくは、抗腫瘍作
用を有する新規なアフィディコラン誘導体およびその製
造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】代表的なアフィディコラン誘導体である
アフィディコリンは、かびの一種である Verticillium
lecanii より得られる抗ウィルス剤として発見され、テ
トラサイクリックジテルペンテトラオールの構造を有す
る水難溶性物質であり、真核細胞由来DNAポリメラーゼ
αおよびδ型に高い特異的阻害作用を示すことから、こ
の酵素の型の判別に用いられており、特殊なウィルスを
除き、原核細胞由来のDNAポリメラーゼには無効であ
り、主としてDNAの複製、修復機序の解析などに利用さ
れている。また、抗腫瘍作用、抗ウィルス作用、植物種
子生長抑制作用を有することも知られており、こうした
用途への利用も図られている。

【０００３】また、近年では、アフィディコリンの抗腫
瘍活性に注目し、種々の誘導体も合成されている(特開
昭59-88438号公報、同61-83138号公報、同62-155232号
公報、同62-155239号公報、Nucleic Acid Research 第1
7巻第6339〜6348頁、1989年、J．Chem．Soc.，Perkin T
rans．Ｉ第41〜46頁、1992年など)。特に、プロドラッ
グとして合成された水溶性のエステル誘導体であるアフ
ィディコリン-17-グリシネートについては、臨床試験が
進められており、血中でアフィディコリンを生成して、
抗腫瘍活性を示すことが期待され、最近では最適な臨床
試験方法についても提案されている(J．of Pharm．Sc
i．第78巻第5号第399〜401頁、1989年およびJ．of the
National Cancer Institute 第83巻、第16号、1991年8
月21日)。

【０００４】ところで、アフィディコリンのDNAポリメ
ラーゼα阻害作用に関する構造活性を論じた報告があ
り、アフィディコリンに含まれる４個の水酸基の必要性
ならびに立体配置的意義についても種々論ぜられてお
り、16β-位の水酸基はDNAポリメラーゼα阻害作用発現
に対する寄与は小さいと推測されている(Chem．Pharm．
Bull．第35巻第4号第1641〜1644頁、1987年)。

【０００５】しかるに、16β-位水酸基のみを他の官能
基で置換したアフィディコラン誘導体は殆んど報告され
ておらず、水酸基の保護を目的として導入された16β-
メトキシメトキシ誘導体が知られているだけであり、16
β-位置換基の役割については明確ではない。このよう
に、16β-位に水酸基以外の官能基を有するアフィディ
コラン誘導体ならびにその生物活性に関しては、未開発
の分野ということができる。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、16β
-位に置換アミノエトキシを有するアフィディコラン誘
導体およびその製造法を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明により、一般式

【化４】 (ここで、-NR¹R²基はアミノ基、モノ低級アルキルアミ
ノ基、アミノ-、シアノ-またはヒドロキシ-置換モノ低
級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、環状ア
ミノ基、ピリジルアミノ基、低級アルコキシカルボニル
メチルアミノ基、ビス(低級アルコキシカルボニルメチ
ル)アミノ基、カルボキシメチルアミノ基、ビス(カルボ
キシメチル)アミノ基あるいはフタルイミド基である)で
表わされる新規な16β-[2-(置換アミノ)エトキシ]-3α,
17,18-トリヒドロキシアフィディコラン誘導体が提供さ
れる。

【０００８】かかる新規アフィディコラン誘導体の内、
-NR¹R²基がモノ低級アルキルアミノ基、アミノ-、シア
ノ-またはヒドロキシ-置換モノ低級アルキルアミノ基、
ジ低級アルキルアミノ基、環状アミノ基、ピリジルアミ
ノ基あるいはフタルイミド基である化合物は、16β-(2-
ハロゲノエトキシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフィデ
ィコラン

【化５】 (ここで、Xはハロゲン原子である)に、モノ低級アルキ
ルアミン、アミノ-、シアノ-またはヒドロキシ-置換モ
ノ低級アルキルアミン、ジ低級アルキルアミン、環状ア
ミン、ピリジルアミンあるいはフタルイミドまたはその
アルカリ金属塩を反応させることにより製造される。

【０００９】16β-(2-ハロゲノエトキシ)-3α,17,18-ト
リヒドロキシアフィディコランは、3α,18-ジヒドロキ
シ-16β,17-エポキシアフィディコランに2-ハロゲノエ
タノールを反応させることにより得られる物質である。

【００１０】これら両者間の反応は、溶媒を兼ねて2-ク
ロロエタノール、2-ブロモエタノールなどを大過剰に用
い、触媒量の酸性物質の存在下で約0〜100℃、好ましく
は約10〜30℃の反応温度で行われる。この際、テトラヒ
ドロフラン、ジオキサンなどの反応条件下では前者のエ
ポキシ基と反応しない溶媒で希釈させて反応させること
もできる。触媒として用いられる酸性物質としては、例
えばp-トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有
機酸、塩酸、硫酸などの無機酸、テトラシアノエチレン
などのπ酸などが挙げられる。

【００１１】16β-(2-ハロゲノエトキシ)-3α,17,18-ト
リヒドロキシアフィディコランに反応させるモノ低級ア
ルキルアミンとしては、メチルアミン、エチルアミン、
プロピルアミン、ブチルアミン等が、アミノ基、シアノ
基または水酸基を置換基として有するモノ低級アルキル
アミンとしては、エチレンジアミン、1,3-ジアミノプロ
パン、1,4-ジアミノブタン、3-アミノプロピオニトリ
ル、2-アミノエタノール、3-アミノプロパノール等が、
ジ低級アルキルアミンとしては、ジメチルアミン、ジエ
チルアミン、ジプロピルアミン、ジブチルアミン、メチ
ルエチルアミン、メチルプロピルアミン、エチルプロピ
ルアミン等が用いられる。

【００１２】更に、環状アミンとしては、ピロリジン、
ピペラジン、イミダゾール、モルホリン等が用いられ、
またアミノピリジンとしては3-アミノピリジン等が用い
られる。これらの環状アミンまたはアミノピリジンは、
低級アルキル基などで置換されていてもよい。また、フ
タルイミドは、カリウム塩、ナトリウム塩等のアルカリ
金属塩の形でも用いられる。

【００１３】これらの化合物は、16β-(2-ハロゲノエト
キシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコランに対
して約1〜20倍モル、好ましくは約2〜6倍モル用いら
れ、これら両者間の反応は、テトラヒドロフラン、ジオ
キサン、ジグライム、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメ
チルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチ
ルホスホルアミド、アセトニトリル等の極性溶媒中で、
約5〜160℃、好ましくは約20〜120℃の温度で約0.5〜24
時間撹拌することにより行われる。

【００１４】フタルイミド(塩)を反応させて得られた3
α,17,18-トリヒドロキシ-16β-(2-フタルイミドエトキ
シ)アフィディコランにヒドラジンを反応させると、16
β-(2-アミノエトキシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフ
ィディコラン[R¹,R²＝H]が得られる。これら両者間の反
応は、約1〜10倍モル量のヒドラジン・1水和物を用い、
原料アフィディコラン化合物を溶解し得るメタノール、
エタノール、ジオキサン、テラヒドロフラン、ジメチル
ホルムアミド等の溶媒中で、約0〜150℃、好ましくは約
20〜100℃の温度で約10分間〜5時間程度撹拌することに
より行われる。

【００１５】得られた16β-(2-アミノエトキシ)-3α,1
7,18-トリヒドロキシアフィディコランは、これをハロ
酢酸低級アルキルエステルと反応させることにより、ア
ミノエトキシ基を(低級アルコキシカルボニルメチル)ア
ミノエトキシ基に変換させることができる。この場合、
アミノ基の水素原子が1個置換された化合物と2個置換さ
れた化合物との混合物が生成し、その生成比率は反応条
件によって左右される。 -OCH₂CH₂NHCH₂COOR -OCH₂CH₂N(CH₂COOR)₂

【００１６】この反応は、クロロ酢酸メチル、ブロモ酢
酸メチル、クロロ酢酸エチル、ブロモ酢酸エチル、ブロ
モ酢酸第3ブチル等のハロ酢酸低級アルキルエステル
を、原料アフィディコラン化合物の約0.5〜5倍モル量、
好ましくは約1〜2倍モル量用い、約0.5〜5倍モル量、好
ましくは約1〜2倍モル量の塩基性物質触媒、例えば炭酸
カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トリ
エチルアミン、ジエチルイソプロピルアミン、N,N-ジメ
チルアミノピリジン等の存在下に、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン、ジグライム、ジメチルホルムアミド、
ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサ
メチルホスホルアミド、アセトニトリル等の溶媒中で、
約-10〜60℃、好ましくは約0〜30℃の温度で約5分間〜1
0時間、好ましくは約0.5〜2時間程度撹拌することによ
り行われる。得られた生成物混合物の分離は、カラムク
ロマトグラフィーなどによって行われる。

【００１７】その反応の生成物たるモノ置換体およびジ
置換体は、分離後あるいは混合物のまま、低級アルコキ
シ基を形成しているものとは異なる他の低級アルコール
とエステル交換反応させることができる。エステル交換
反応は、低級アルコールを溶媒を兼ねて大過剰に用い、
約0.01〜1倍モル量、好ましくは約0.05〜0.5倍モル量の
塩基性物質触媒、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、ナトリウムメトキシド等の無機塩基またはトリエ
チルアミン、4-ジメチルアミノピリジン等の有機塩基の
存在下に、上記したような溶媒中で、約0〜100℃、好ま
しくは約10〜30℃の温度で約0.5〜24時間程度撹拌する
ことにより行われる。

【００１８】これらの16β-[2-(低級アルコキシカルボ
ニルメチルアミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキ
シアフィディコランまたは16β-[2-{ビス(低級アルコキ
シカルボニルメチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリ
ヒドロキシアフィディコランは、加水分解反応させるこ
とにより、それぞれ1個または2個の(低級アルコキシカ
ルボニルメチルアミノ)エトキシ基が(カルボキシメチル
アミノ)エトキシ基 -OCH₂CH₂NHCH₂COOH -OCH₂CH₂N(CH₂COOH)₂ に変換された16β-[2-(カルボキシメチルアミノ)エトキ
シ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコランまたは
16β-[2-{ビス(カルボキシメチル)アミノ}エトキシ]-3
α,17,18-トリヒドロキシアフィディコランを与える。

【００１９】加水分解反応は、約1〜10倍モル量、好ま
しくは約1〜4倍モル量の塩基性物質触媒、例えば水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン、4-ジ
メチルアミノピリジン等の存在下に、メタノール、エタ
ノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジグライ
ム、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジ
メチルスルホキシド、ヘキサメチルホスホルアミド等の
水溶性有機溶媒と水との混合溶媒中で、約0〜100℃、好
ましくは約10〜30℃の温度で約0.5〜24時間程度撹拌す
ることにより行われる。

【００２０】以上の各反応により得られた16β-[2-(置
換アミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィ
ディコランは、それらに当量の酸、即ち医薬上許容され
る無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸等あるいは有機
酸、例えば酢酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、乳
酸、酒石酸、クエン酸、p-トルエンスルホン酸等を加
え、酸付加塩を形成させることもできる。

【００２１】

【発明の効果】本発明により、16β-位に2-(置換アミ
ノ)エトキシ基を有する新規なアフィディコラン誘導体
が提供される。これらの誘導体は抗腫瘍作用を有してお
り、その作用の程度は化学構造に依存するが、一般的に
は濃度0.8〜25μg/mlの範囲内で、試験管内でのマウス
の腫瘍細胞YAC-1の増殖を抑制する。従って、これらの
アフィディコラン誘導体は、制がん剤として有望視する
ことができる。

【００２２】

【実施例】次に、実施例について本発明を説明する。

【００２３】参考例１ 3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エポキシアフィディコラ
ン650mgを2-クロロエタノール5mlに溶解させた溶液中
に、p-トルエンスルホン酸１水和物3mgを加え、室温下
で１時間撹拌した。反応混合物を氷水100ml中に注入
し、析出物をロ取、減圧下で乾燥して730mgの粉末を得
た。この粉末を、フラッシュクロマトグラフィー(粒径1
5〜40μmのメルク社製シリカゲル60 40g、溶離液：メタ
ノール/クロロホルム＝1/49)で精製後、ジエチルエーテ
ル-シクロヘキサン混合溶媒で再結晶し、16β-(2-クロ
ロエトキシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラ
ン196mgを無色の針状晶として得た。融点：136〜140℃¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.80(3H,s)，1.
03(3H,s)，2.49(1H,dd J=3.6,13.2Hz)，2.59(1H,t J=6.
9Hz)，2.85(1H,dd J=3.5,12.2Hz)，3.61〜3.85(6H,m)，
3.91(2H,t J=5.6Hz)，3.93(1H,b)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，25.26，25.31，27.15，27.24，27.4，31.7，32.
9，34.1，39.8，40.1，40.6，41.0，45.1，49.3，62.
5，64.1，71.9，76.4，80.0

【００２４】参考例２ 3α,18-ジヒドロキシ-16β,17-エポキシアフィディコラ
ン640mgを2-ブロモエタノール4mlに溶解させた溶液中
に、p-トルエンスルホン酸１水和物3mgを加え、室温下
で１時間撹拌した。反応混合物を氷水100ml中に注入
し、析出物をロ取、減圧下で乾燥して850mgの粉末を得
た。この粉末を、フラッシュクロマトグラフィー(粒径1
5〜40μmのメルク社製シリカゲル60 37g、溶離液：メタ
ノール/クロロホルム＝1/49)で精製後、ジエチルエーテ
ル-シクロヘキサン混合溶媒で再結晶し、16β-(2-ブロ
モエトキシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラ
ン29mgを無色の針状晶として得た。融点：128〜130℃¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.80(3H,s)，1.
04(3H,s)，2.51(1H,dd J=3.6,12.9Hz)，2.60(1H,t J=6.
9Hz)，2.86(1H,dd J=3.3,12.5Hz)，3.60(2H,t J=5.9H
z)，3.67〜3.86(4H,m)，3.95(1H,b)，3.97(2H,t J=5.9H
z)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，25.2，27.15，27.22，27.4，31.7，32.9，33.6，3
4.1，39.8，40.1，40.6，41.0，49.2，62.3，64.1，71.
9，76.3，80.1

【００２５】実施例１参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン200mgを、ジメチル
スルホキシド1.0ml中に溶解し、これにn-プロピルアミ
ン0.3mlを加え、70℃で7時間撹拌した。反応混合物を濃
縮乾固し、得られた残渣に水20mlおよびクロロホルム20
mlを加えて分液した。有機層を水洗、乾燥(無水硫酸ナ
トリウム)した後、溶媒を減圧留去し、残渣をカラムク
ロマトグラフィー(担体：MCIゲルCHP-20P 6g、溶離液：
メタノール/水＝3/7)で精製し、3α,17,18-トリヒドロ
キシ-16β-(2-n-プロピルアミノエトキシ)アフィディコ
ラン64mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.83(3H,s)，1.
00(3H,s)，3.06(2H,b)，3.35(2H,b)，3.60〜4.20(7H,
b)，4.02(1H,m)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：11.3，15.4，1
8.1，19.9，23.4，25.3，25.7，27.15，27.2，27.3，3
1.6，33.1，34.1，39.6，40.0，40.4，41.0，48.4，49.
2，49.8，57.1，62.0，71.7，76.0，80.3

【００２６】実施例２参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン199mgを、ジメチル
スルホキシド1.0ml中に溶解し、これにn-ブチルアミン
0.3mlを加え、70℃で8時間撹拌した。反応混合物を濃縮
乾固し、残渣に水20mlを加えた後、炭酸水素ナトリウム
を加えてpH8に調整し、析出物をロ取した。これを、カ
ラムクロマトグラフィー(担体：メルク社製シリカゲル6
0 5g、溶離液：クロロホルム/メタノール＝9/1)で精製
し、3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-(2-n-ブチルアミ
ノエトキシ)アフィディコラン29mgを無色の粉末として
得た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.83(3H,s)，1.
03(3H,s)，3.50〜4.10(7H,m)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：14.2，15.4，1
8.1，20.7，23.5，25.6，25.7，27.2，27.4，31.7，32.
6，33.3，34.1，40.1，40.6，41.0，49.3，50.0，50.
9，60.6，62.7，71.9，76.3，79.5

【００２７】実施例３参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン100mgを、N,N-ジメ
チルホルムアミド2.0ml中に溶解し、これにジエチルア
ミン244μlを加え、90℃で12時間撹拌した。反応混合物
を氷水50ml中に注入し、析出物をロ取した。これを、HP
LC(カラム：イナートシルPREP-ODS、溶離液：メタノー
ル/水/ジエチルアミン＝85/14/1)で精製し、16β-(2-ジ
エチルアミノエトキシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフ
ィディコラン52mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.97(3H,
s)，1.05(6H,t J=7.26Hz)，2.48〜2.62(6H,m)，3.30〜
3.70(7H,m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：11.2，15.0，17.8，2
3.1，25.0，25.8，26.5，26.8，27.1，31.3，33.0，33.
3，39.65，39.71，40.2，40.6，47.9，48.7，54.9，59.
1，62.4，71.8，77.2，79.1

【００２８】実施例４参考例２で得られた16β-(2-ブロモエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン224mgを、N,N-ジメ
チルホルムアミド3.0ml中に溶解し、これに3-アミノピ
リジン208mgを加え、100〜110℃で１時間撹拌した。反
応混合物を濃縮乾固し、残渣に水5mlを加えた後、析出
物をロ取した。これを、カラムクロマトグラフィー(担
体：メルク社製シリカゲル60 6.5g、粒径63〜200μm、
溶離液：クロロホルム/メタノール＝97/6)およびHPLC
(カラム：イナートシルPREP-ODS、溶離液：メタノール/
水＝8/1)で精製し、3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-[2
-(3-ピリジル)アミノエトキシ]アフィディコラン3.6mg
を無色のアメ状物質として得た。¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.97(3H,
s)，3.30〜3.70(7H,m)，6.90〜7.12(2H,m)，7.90〜8.05
(2H,m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：15.0，17.8，23.0，2
4.8，25.0，26.5，26.7，27.2，31.3，32.8，33.2，39.
3，39.7，40.2，40.5，44.1，48.7，59.1，62.8，71.
9，77.2，79.4，119.0，123.8，136.5，138.8，144.4

【００２９】実施例５参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン200mgを、ジメチル
スルホキシド1.0ml中に溶解し、これにイミダゾール204
mgを加え、70℃で8時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾
固し、残渣に水20mlを加えた後、炭酸水素ナトリウムを
加えてpH8に調整し、クロロホルム20mlで抽出した。有
機層を水洗、乾燥(無水硫酸ナトリウム)した後、濃縮乾
固し、残渣をカラムクロマトグラフィー(担体：メルク
社製シリカゲル60 7g、粒径63〜200μm、溶離液：クロ
ロホルム/メタノール＝19/1)で精製して、16β-[2-(2-
イミダゾリル)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシア
フィディコラン18mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.78(3H,s)，0.
99(3H,s)，3.50〜4.20(7H,m)，7.23〜7.33(2H,m)，7.90
(1H,s)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，25.2，25.5，27.1，27.2，27.4，31.7，32.7，34.
0，39.5，40.0，40.5，41.0，47.9，49.2，61.5，64.
0，72.0，76.4，79.8，120.1，129.4，138.2

【００３０】実施例６参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン200mgを、ジメチル
スルホキシド1.0ml中に溶解し、これにピロリジン0.3ml
を加え、70℃で6時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固
し、残渣に水20mlを加えた後、炭酸水素ナトリウムを加
えてpH8に調整し、酢酸エチル20mlで抽出した。有機層
を水洗、乾燥(無水硫酸ナトリウム)した後、濃縮乾固
し、残渣をHPLC(カラム：イナートシルPREP-ODS、溶離
液：メタノール/水/ジエチルアミン＝85/14/1)およびカ
ラムクロマトグラフィー(担体：メルク社製シリカゲル6
0 5g、粒径63〜200μm、溶離液：クロロホルム/メタノ
ール＝9/1)で精製して、3α,17,18-トリヒドロキシ-16
β-[2-(1-ピロリジル)エトキシ]アフィディコラン18mg
を無色の粉末として得た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.81(3H,s)，1.
00(3H,s)，3.60〜4.10(7H,m)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，23.6，25.5，25.6，27.18，27.24，27.4，31.6，3
3.2，34.1，39.8，40.1，40.5，41.0，49.2，54.9，56.
5，58.3，62.6，71.8，76.2，80.0

【００３１】実施例７参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン150mgを、ジメチル
スルホキシド1.0ml中に溶解し、これに無水ピペラジン3
23mgを加え、80℃で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮
乾固し、残渣に水50mlおよびクロロホルム50mlを加えて
分液した。水層をクロロホルムで洗浄した後、カラムク
ロマトグラフィー(担体：MCIゲルCHP-20P、溶離液：メ
タノール/水＝4/1)で精製し、3α,17,18-トリヒドロキ
シ-16β-[2-(1-ピペラジニル)エトキシ]アフィディコラ
ン90mgを淡黄色のアメ状物質として得た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.80(3H,s)，1.
02(3H,s)，2.47〜2.94(12H,m)，3.53〜3.93(7H,m)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，25.6，25.7，27.18，27.22，27.4，31.6，33.3，3
4.1，40.05，40.12，40.5，41.0，46.1，49.2，55.5，5
8.0，60.5，62.7，71.8，76.2，79.5

【００３２】実施例８参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン200mgを、ジメチル
スルホキシド1.0ml中に溶解し、これにエチレンジアミ
ン333μlを加え、85℃で2時間撹拌した。反応混合物を
濃縮乾固し、残渣に水50mlおよびクロロホルム50mlを加
えて分液した。水層をクロロホルムで洗浄した後、カラ
ムクロマトグラフィー(担体：MCIゲルCHP-20P、溶離
液：メタノール/水＝4/1)で精製し、16β-[2-{(2-アミ
ノエチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシ
アフィディコラン75mgを淡黄色のアメ状物質として得
た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.80(3H,s)，1.
02(3H,s)，2.54〜2.90(8H,m)，3.62〜3.93(7H,m)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，25.55，25.64，27.2，27.4，31.7，33.2，34.1，4
0.1，40.6，41.0，49.2，50.4，60.4，62.6，71.8，76.
2，79.5

【００３３】実施例９参考例２で得られた16β-(2-ブロモエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン536mgを、ジメチル
スルホキシド3.0ml中に溶解し、これに3-アミノプロピ
オニトリル530μlを加え、室温下で16時間撹拌した。反
応混合物を氷水200ml中に注入し、析出物をロ取した。
これを、フラッシュクロマトグラフィー(担体：メルク
社製シリカゲル60 20g、粒径15〜40μm、溶離液：クロ
ロホルム/メタノール＝24/1)で精製し、16β-[2-{(2-シ
アノエチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキ
シアフィディコラン187mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.98(3H,
s)，2.56(2H,t J=6.6Hz)，2.83(2H,t J=4.6Hz)，2.98(2
H,t J=6.6Hz)，3.34〜3.70(7H,m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：15.0，17.8，18.5，2
3.0，25.0，25.2，26.5，26.7，27.2，31.3，32.9，33.
3，39.6，39.7，40.2，40.6，45.2，48.7，49.2，59.
7，62.4，71.9，77.3，79.3，118.4

【００３４】実施例10 参考例１で得られた16β-(2-クロロエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン100mgを、N,N-ジメ
チルホルムアミド3.0ml中に溶解し、これに2-アミノエ
タノール485μlを加え、100℃で3時間撹拌した。反応混
合物を、飽和食塩水100ml中に注入し、析出物をロ取し
た。これを、HPLC(カラム：イナートシルPREP-ODS、溶
離液：メタノール/水/ジエチルアミン＝70/29/1)で精製
し、16β-[2-{(2-ヒドロキシエチル)アミノ}エトキシ]-
3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン100mgを無
色の粉末として得た。¹ H NMR(pyridine-d₅、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.
97(3H,s)，1.05(6H,t J=7.26Hz)，2.48〜2.62(6H,m)，
3.30〜3.70(7H,m)¹³ C NMR(pyridine-d₅、TMS)(68MHz)δ：15.4，18.1，2
3.5，25.6，25.7，27.2，27.4，31.7，33.3，34.1，40.
08，40.13，40.6，41.0，49.3，50.7，52.8，60.5，61.
4，62.7，71.9，76.3，79.5

【００３５】実施例11 参考例２で得られた16β-(2-ブロモエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン297mgを、N,N-ジメ
チルホルムアミド3.0ml中に溶解し、これにフタルイミ
ドカリウム600mgを加え、100℃で1.5時間撹拌した。冷
却後、反応混合物を氷水200ml中に注入し、析出物をロ
取した。これを、フラッシュクロマトグラフィー(担
体：メルク社製シリカゲル60 30g、粒径15〜40μm、溶
離液：クロロホルム/メタノール＝49/1)で精製し、3α,
17,18-トリヒドロキシ-16β-(2-フタルイミドエトキシ)
アフィディコラン100mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.63(3H,s)，0.82(3H,
s)，3.10〜3.95(9H,m)，7.68〜7.90(4H,m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：14.8，17.8，22.9，2
4.6，24.9，25.9，26.6，27.1，31.2，32.3，33.2，38.
7，38.9，39.4，40.1，40.5，48.5，57.9，63.2，71.
8，77.2，79.7，123.4，132.1，133.9，168.4

【００３６】実施例12 実施例11で得られた3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-(2
-フタルイミドエトキシ)アフィディコラン100mgを、エ
タノール2.0ml中に溶解し、これにヒドラジン・1水和物
30μlを加え、室温下で1.5時間撹拌した。析出物をロ去
し、ロ液を5%クエン酸水溶液中に注入した。不溶物をロ
去し、ロ液に水酸化ナトリウム水溶液を加えてpHを9.0
に調整した後、析出物をロ取、乾燥して、16β-(2-アミ
ノエトキシ)-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラ
ン16mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.69(3H,s)，0.98(3H,
s)，2.84〜2.90(2H,b)，3.30〜3.67(7H,m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：15.1，17.8，23.1，2
4.9，25.2，26.5，26.8，27.0，31.4，32.9，33.3，39.
6，39.7，40.2，40.5，41.9，48.7，62.0，62.2，71.
7，77.1，79.1

【００３７】実施例13 実施例12で得られた16β-(2-アミノエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン364mgを、N,N-ジメ
チルホルムアミド3.0ml中に溶解し、これに無水炭酸カ
リウム132mgおよびブロモ酢酸エチル106μlを加え、室
温下で2時間撹拌した。反応混合物を氷水50ml中に注入
し、析出物をロ取した。これを、カラムクロマトグラフ
ィー(担体：メルク社製シリカゲル60 30g、粒径40〜63
μm、溶離液：クロロホルム/メタノール＝24/1)で精製
し、16β-[2-(エトキシカルボニルメチルアミノ)エトキ
シ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン18mgお
よび16β-[2-{ビス(エトキシカルボニルメチル)アミノ}
エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン
34mgをいずれも無色の粉末として得た。 16β-[2-(エトキシカルボニルメチルアミノ)エトキシ]-
3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.98(3H,
s)，1.28(3H,t J=7.3Hz)，2.80(2H,t J=4.6Hz)，3.32〜
3.70(9H,m)，4.19(2H,q J=7.3Hz)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：14.2，15.0，17.8，2
3.1，25.0，25.3，26.5，26.7，27.2，31.3，32.9，33.
4，39.6，39.7，40.2，40.6，48.7，49.7，50.8，59.
9，60.9，62.2，71.8，77.2，79.4，172.3 16β-[2-{ビス(エトキシカルボニルメチル)アミノ}エト
キシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.71(3H,s)，0.98(3H,
s)，1.27(3H,t J=7.3Hz)，2.92(2H,t J=4.5Hz)，3.33〜
3.70(11H,m)，4.17(4H,q J=7.3Hz)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：14.2，15.0，17.9，2
3.1，24.9，25.4，26.5，26.7，27.2，31.3，32.9，33.
4，39.4，39.7，40.2，40.6，48.7，55.4，56.2，59.
8，60.6，62.5，71.9，77.3，79.3，171.4

【００３８】実施例14 実施例12で得られた16β-(2-アミノエトキシ)-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコラン165mgを、ジメチル
ホルムアミド3.0ml中に溶解し、これに無水炭酸カリウ
ム60mgおよびブロモ酢酸第3ブチル64μlを加え、室温下
で3時間撹拌した。反応混合物を氷水100ml中に注入後、
析出物をロ取し、フラッシュクロマトグラフィー(担
体：メルク社製シリカゲル60 30g、粒径15〜40μm、溶
離液：クロロホルム/メタノール＝47/3)で精製して、16
β-[2-(第3ブトキシカルボニルメチルアミノ)エトキシ]
-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン42mgおよ
び16β-[2-{ビス(第3ブトキシカルボニルメチル)アミ
ノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコ
ラン30mgをいずれも無色の粉末として得た。 16β-[2-(第3ブトキシカルボニルメチルアミノ)エトキ
シ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.98(3H,
s)，1.47(9H,s)，2.74〜2.80(2H,m)，3.30〜3.69(9H,m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：15.0，17.8，23.1，2
5.0，25.3，26.5，26.8，27.2，28.1，31.3，32.9，33.
4，39.6，39.7，40.3，40.6，48.7，49.7，51.5，59.
9，62.2，71.9，77.2，79.3，81.5，171.5 16β-[2-{ビス(第3ブトキシカルボニルメチル)アミノ}
エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコラン¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.98(3H,
s)，1.46(18H,s)，2.86〜2.93(2H,m)，3.26〜3.70(11H,
m)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：15.0，17.8，23.1，2
4.9，25.4，26.5，26.7，27.1，28.2，31.3，32.9，33.
4，39.4，39.7，40.3，40.6，48.7，55.3，56.9，59.
8，62.6，71.8，77.1，79.3，81.2，170.6

【００３９】実施例15 実施例13で得られた16β-[2-(エトキシカルボニルメチ
ルアミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィ
ディコラン18mgを、n-プロパノール1.0ml中に溶解し、
これに水素化ナトリウム0.5mgを加え、室温下で12時間
撹拌した。反応混合物を氷水10ml中に注入し、酢酸エチ
ル10mlで抽出した。有機層を水洗、乾燥(無水硫酸ナト
リウム)した後、濃縮乾固し、残渣をフラッシュクロマ
トグラフィー(担体：メルク社製シリカゲル60 10g、粒
径15〜40μm、溶離液：クロロホルム/メタノール＝19/
1)で精製し、16β-[2-(n-プロポキシカルボニルメチル
アミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィデ
ィコラン9mgを無色の粉末として得た。¹ H NMR(CDCl₃、TMS)(270MHz)δ：0.70(3H,s)，0.90〜1.
00(8H,m)，2.81(2H,d J=4.6Hz)，3.33〜3.70(9H,m)，4.
10(2H,d J=6.6Hz)¹³ C NMR(CDCl₃、TMS)(68MHz)δ：10.4，15.0，17.9，2
2.0，23.1，25.0，25.3，26.5，26.8，27.2，31.3，32.
9，33.4，39.6，39.7，40.3，40.6，48.8，49.8，50.
7，59.9，62.3，66.6，71.9，77.2，79.4，172.3

【００４０】実施例16 実施例13で得られた16β-[2-(エトキシカルボニルメチ
ルアミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィ
ディコラン6mgを、メタノール1.0ml中に溶解し、これに
1N水酸化カリウム水溶液50μlを加え、室温下で3時間撹
拌した。反応混合物に5.0mlの水を加え、この溶液を5g
のMCIゲルCHP-20Pに吸着させ、50mlの水で洗浄した後、
50mlのメタノールで溶出した。この溶出液を濃縮乾固し
た後、残渣をカラムクロマトグラフィー(担体：メルク
社製シリカゲル60 10g、粒径15〜40μm、溶離液：クロ
ロホルム/メタノール/水＝15/10/1)で更に精製した後、
酢酸エチルから再結晶し、16β-[2-(カルボキシメチル
アミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフィデ
ィコラン4mgを無色のプリズム晶として得た。融点：138〜146℃¹ H NMR(CD₃OD、TMS)(270MHz)δ：0.73(3H,s)，1.02(3H,
s)，3.17〜3.25(2H,m)，3.44〜3.78(7H,m)¹³ C NMR(CD₃OD、TMS)(68MHz)δ：15.6，18.0，24.2，2
5.9，26.4，27.5，27.7，27.9，32.5，33.9，34.9，40.
5，40.9，41.5，41.6，50.0，50.1，50.9，57.5，63.
3，72.2，77.4，81.2，171.1

【００４１】実施例17 実施例13で得られた16β-[2-{ビス(エトキシカルボニル
メチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシア
フィディコラン34mgを、メタノール2.0ml中に溶解し、
これに1N水酸化カリウム水溶液0.5mlを加え、室温下で2
時間撹拌した。反応混合物に水5mlを加え、この溶液を5
gのMCIゲルCHP-20Pに吸着させ、50mlの水で洗浄した
後、50mlのメタノールで溶出した。この溶出液を濃縮乾
固した後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(担
体：メルク社製シリカゲル60 10g、粒径15〜40μm、溶
離液：クロロホルム/メタノール/水＝6/4/1)で更に精製
した後、酢酸エチルから再結晶し、16β-[2-{ビス(カル
ボキシメチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロ
キシアフィディコラン21mgを無色のプリズム晶として得
た。融点：281〜288℃¹ H NMR(CD₃OD、TMS)(270MHz)δ：0.72(3H,s)，1.02(3H,
s)，3.12〜3.24(4H,b)，3.40〜3.70(7H,m)¹³ C NMR(CD₃OD、TMS)(68MHz)δ：15.8，18.0，24.0，2
6.3，27.5，27.9，32.4，34.3，34.9，40.8，40.9，41.
5，41.6，58.4，63.4，72.1，77.3，180.2

【００４２】[腫瘍細胞増殖抑制試験]マウス腫瘍細胞YA
C-1 10⁸cells/mlを含むRPMI 1640培地(10%のFCS、100U/
mlのペニシリンおよび100μg/mlのストレプトマイシン
添加)100μlを、96穴マイクロプレート各ウェルに分注
し、更に各種濃度の前記各実施例で得られた16β-[2-
(置換アミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフ
ィディコラン(0.5%ジメチルスルホキシド溶液を前述のR
PMI 1640培地で希釈し、各種濃度に調製したもの)100μ
lを各ウェルに加えて、37℃、5% CO₂のインキュベータ
内で、72時間培養した。培地の色の変化をコントロール
と比較して、腫瘍細胞の増殖の有無を判定した結果、腫
瘍細胞の増殖を完全に抑制する濃度として、次のような
結果が得られた。 16β-置換アミノエトキシ誘導体濃度(μg/ml) 実施例１ 6.25 〃２ 6.25 〃３ 6.25 〃４ 1.56 〃５ 1.56 〃６ 6.25 〃７ 25 〃８ 25 〃９ 3.13 〃 10 25 〃 12 25 〃 13(モノ置換体) 0.78 (ビス置換体) 1.56 〃 14(モノ置換体) 1.56 (ビス置換体) 6.25 〃 15 1.56 〃 16 25 〃 17 ＞２５

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式【化１】 (ここで、-NR¹R²基はアミノ基、モノ低級アルキルアミ
ノ基、アミノ-、シアノ-またはヒドロキシ-置換モノ低
級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、環状ア
ミノ基、ピリジルアミノ基、低級アルコキシカルボニル
メチルアミノ基、ビス(低級アルコキシカルボニルメチ
ル)アミノ基、カルボキシメチルアミノ基、ビス(カルボ
キシメチル)アミノ基あるいはフタルイミド基である)で
表わされる16β-[2-(置換アミノ)エトキシ]-3α,17,18-
トリヒドロキシアフィディコラン誘導体およびその酸付
加塩。
【請求項２】 16β-(2-ハロゲノエトキシ)-3α,17,18-
トリヒドロキシアフィディコラン【化２】 (ここで、Xはハロゲン原子である)を、モノ低級アルキ
ルアミン、アミノ-、シアノ-またはヒドロキシ-置換モ
ノ低級アルキルアミン、ジ低級アルキルアミン、環状ア
ミン、アミノピリジンあるいはフタルイミドまたはその
アルカリ金属塩と反応させることを特徴とする、一般式【化３】 (ここで、-NR¹R²基はアミノ基、モノ低級アルキルアミ
ノ基、アミノ-、シアノ-またはヒドロキシ-置換モノ低
級アルキルアミノ基、ジ低級アルキルアミノ基、環状ア
ミノ基、ピリジルアミノ基あるいはフタルイミド基であ
る)で表わされる16β-[2-(置換アミノ)エトキシ]-3α,1
7,18-トリヒドロキシアフィディコラン誘導体の製造
法。
【請求項３】 3α,17,18-トリヒドロキシ-16β-(2-フ
タルイミドエトキシ)アフィディコランをヒドラジンと
反応させることを特徴とする16β-(2-アミノエトキシ)-
3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコランの製造法。
【請求項４】 16β-(2-アミノエトキシ)-3α,17,18-ト
リヒドロキシアフィディコランをハロ酢酸低級アルキル
エステルと反応させることを特徴とする16β-[2-(低級
アルコキシカルボニルメチルアミノ)エトキシ]-3α,17,
18-トリヒドロキシアフィディコランおよび16β-[2-{ビ
ス(低級アルコキシカルボニルメチル)アミノ}エトキシ]
-3α,17,18-トリヒドロキシアフィディコランの製造
法。
【請求項５】 16β-[2-(低級アルコキシカルボニルメ
チルアミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフ
ィディコランまたは16β-[2-{ビス(低級アルコキシカル
ボニルメチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロ
キシアフィディコランを、他の低級アルコールとエステ
ル交換反応させることを特徴とする低級アルコキシ基が
交換されたアフィディコラン誘導体の製造法。
【請求項６】 16β-[2-(低級アルコキシカルボニルメ
チルアミノ)エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロキシアフ
ィディコランまたは16β-[2-{ビス(低級アルコキシカル
ボニルメチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-トリヒドロ
キシアフィディコランを加水分解することを特徴とする
16β-[2-(カルボキシメチルアミノ)エトキシ]-3α,17,1
8-トリヒドロキシアフィディコランまたは16β-[2-{ビ
ス(カルボキシメチル)アミノ}エトキシ]-3α,17,18-ト
リヒドロキシアフィディコランの製造法。