JPH0696535B2

JPH0696535B2 - シアロシルコレステロ−ルの神経障害疾患治療剤

Info

Publication number: JPH0696535B2
Application number: JP10822886A
Authority: JP
Inventors: 克孝永井; 善保志鳥; 正善伊藤; 慎吾佐藤; 公夫古畑; 治夫小倉
Original assignee: メクト株式会社
Priority date: 1986-05-12
Filing date: 1986-05-12
Publication date: 1994-11-30
Anticipated expiration: 2009-11-30
Also published as: JPS62265229A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、末梢神経系又は中枢神経系の障害に起因する
各種疾患の治療に有用な薬剤としてのシアロシルコレス
テロールに関する。

〔従来の技術〕

神経系障害に起因する疾患は難治のものが多くその治療
用薬剤も種類が少なく現在、メコバラミン（医薬一般
名）が代表的なものであるが、その効果も未だ十分でな
く、さらに良好なる治療薬の開発が望まれている。

動物の神経刺激伝達系に重要な役割をもつものとして、
ガングリオシドなどの酸性糖脂質やホスファチジルイノ
シトール、ホスファチジルセリンなどの酸性リン脂質が
知られている。

またシアン酸は動物或いは細菌の細胞表面にシアロ複合
体（糖蛋白、糖脂質、オリゴ糖、多糖類等）と共に特異
的な活性分子として存在し、近年免疫、癌、炎症、ウィ
ルス感染、細胞分化、ホルモン受容体等に関与する物質
として、医学的且つ薬理学的に注目されつつあるが、シ
アロシルコレステロールの神経障害疾患治療効果につい
ては発明されていない。また本発明では神経突起生長促
進作用の測定として一般的に購入でき、培養も比較的容
易な神経芽腫瘍細胞Neuro 2aを用いた。

〔発明の目的〕

従って、本発明は、シアル酸Na塩にすることにより、水
溶性を増大させ、医薬品としての用途を拡大し、末梢神
経系又は中枢神経系の障害に起因する各種疾患の治療に
有用なシアロシルコレステロールを提供するものであ
る。

〔発明の構成〕

本発明は、シアロシルコレステロールについてマウス由
来の神経芽腫瘍細胞（Neuro 2a）の培養にこれを用い
て、その活性を試験したところ、神経突起の生長を促す
作用を有するとの知見に基づくものである。

すなわち本化合物は式（Ｉ）：及び、式（II）：で表わされる化合物を含有することを特徴とする神経障
害疾患治療剤を提供するものである。

本発明化合物（Ｉ）（II）の製造方法は一般に、次のよ
うな工程で実施することができる。

式（III）で表わされる化合物を、Koenigs-Knorr反応用触媒の存
在下にコレステロールと常圧で約20〜25℃の温度で、約
２〜７日反応させる。その後、コレステロールは、化合
物（III）１モルに対して約２〜５倍モル用いる。得ら
れた反応生成物はカラムクロマトグラフィーのごとき常
法により、単離精製される（特願昭60-69741号参照）。

尚、上記化合物（III）は容易に入手可能な公知化合物
である。

更に、上記生成物を加水分解し、メトキシカルボニル基
をカルボキシルナトリウム基に、アセチル基を水素に変
換し、化合物（Ｉ）（α体）、化合物（II）（β体）を
得る。この工程について、以下に実施例で示す。

製造例１３β−Ｏ−（４′−アセタミド−２′,4′−ジデオキシ
−３′,6′,7′,8′−テトラ−Ｏ−アセチル−１′−メ
トキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−
１′−オクトピラノシル）コレスト−５−エン（化合物
（IV））の50mgを、メタノールの100mlに溶かして攪拌
しながら2N水酸化ナトリウム水溶液の20ml弱を滴下して
約0.2N水酸化ナトリウム／メタノール溶液とし、室温で
一晩攪拌することによりけん化を行った。

引き続き、攪拌しながらダウェックス（Dowex）50W
（H⁺）resinを加えていき、溶液のpHを酸性（約pH4）に
調整した後、その樹脂を除き、減圧下乾燥し３β−Ｏ−
（４′−アセタミド−２′,4′−ジデオキシ−１′−カ
ルボキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−１′−オ
クトピラノシル）コレスト−５−エンとして、白色粉末
として得、次にこれらをそれぞれ0.02N水酸化ナトリウ
ム水溶液に溶かし、ダイヤイオン（Diaion）HP20樹脂カ
ラムに通して吸着させ、水洗後、75％メタノール水にて
溶出し、メタノールを留去後、凍結乾燥して、ナトリウ
ム３β−Ｏ−（４′−アセタミド−２′,4′−ジデオキ
シ−１′−カルボキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラク
ト−１′−オクトピラノシル）コレスト−５−エナート
（化合物（Ｉ））を白色粉末として得た（37mg、91
％）。

製造例２化合物（IV）の50mgを、メタノール100mlに溶かして、2
N−ナトリウム水溶液の20mlを加えて、室温で一晩攪拌
することにより、けん化を行ない、引き続き、ダウェッ
クス（Dowex）50W×８（H⁺）樹脂を加えて攪拌し、溶液
のpHを７〜８とした後、吸引ろ過、メタノールで洗浄す
ることにより、その樹脂を除き、ろ液および洗浄液をま
とめて減圧下、メタノールを留去、析出してきた白色不
溶物はろ過後、ろ液を凍結乾燥することにより、化合物
（Ｉ）を白色粉末として得た（39mg、96％）。

〔化合物（Ｉ）の物理化学的性状〕

FD-MS（m／z）;722(M+Na),700(M+1),386,336,314。

元素分析（％）C₃₈H₆₂O₉NNa・２H₂O 計算値:C,61.96;H,8.42;N,1.90. 実測値:C,61.92;H,8.71;N,2.04. ▲〔α〕²⁴ _D▼：+2.2°（C,1.0メタノール） ¹H‐NMR（400MHz,in CD₃OD）δH: 0.704（3H,s,18-Me）0.992（3H,s,19-Me） 0.936（3H,d,J=6.5Hz,21-Me）（0.870,0.885（3H×2,d,J＝1.7Hz,26,27-Me） 2.010（3H,s,NAc） 2.839（1H,dd,J=4.2,12.0Hz,2′‐Heq） 5.332（1H,d,J=5.5Hz,6-H）¹³ C‐NMR（100MHz,in CD₃OD）δc: 175.91（NAc）175.26（１′‐COONa） 142.87（C-5）122.59（C-6）102.57（C-1′） 70.50（C-3）41.00（C-2）製造例３３β−Ｏ−（４′−アセタミド−２′,4′−ジデオキシ
−３′６′７′８′−テトラ−Ｏ−アセチル−１′−メ
トキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−ガラクト−
１′−オクトピラノシル）コレスト−５−エン（化合物
（Ｖ））を化合物（IV）の代わりに用いる他は製造例１
と同様に操作し、ナトリウム３β−Ｏ−（４′−アセタ
ミド−２′,4′−ジデオキシ−１′−カルボキシ−Ｄ−
グリセロ−β−Ｄ−ガラクト−１′−オクトピラノシ
ル）コレスト−５−エナート（化合物（II））を得た
（36mg、88％）。

製造例４化合物（IV）の代わりに化合物（Ｖ）を用いる他は実施
例２と同様に操作し、化合物（II）を得た（40mg、98
％）。

〔化合物（II）の物理化学的性状〕

FD-MS（m／z）;722(M+Na),700(M+1),386。

元素分析（％）C₃₈H₆₂O₉NNa・H₂O 計算値:C,63.52;H,8.91;N,1.95 実測値:C,63.81;H,9.25;N,2.13 ▲〔α〕²⁴ _D▼：-10.6°（C1.0 メタノール） ¹H‐NMR（400MHz,in CD₃OD）δH; 0.700（3H,s,18-Me）0.991（3H,s,19-Me） 0.928（3H,d,J=6.5Hz,21-Me） 0.861,0.880（3H×2,d,J=1.5Hz,26,27-Me） 1.972（3H,s,NAc） 2.482（1H,dd,J=4.5,13.0Hz,2′‐Heq） 5.282（1H,d,J=5.3Hz,6-H）¹³ C‐NMR（100MHz,in CD₃OD）δc: 176.95（NAc）174.51（１′‐COONa） 143.08（C-5）122.46（C-6）101.37（C-1′） 72.37（C-3）43.82（C-2′）別紙に本化合物の合成の工程を図示する。

本発明化合物の投与方法は経口、非経口とも可能である
が、点眼、吸入、筋肉注射、皮下注射、静脈注射が好ま
しい。投与量は疾患の程度と患者の体重に依存するが、
0.001〜10mgが好ましい。本発明の薬剤につき実施例に
示す。本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１注射剤１アンプル中に本発明化合物2.5mg、リン酸二水素ナト
リウム２水塩0.25mg、リン酸水素二ナトリウム12水塩3m
g及び、注射用蒸留水を含有させ、全量が1mlである注射
剤を調製した。

実施例２用時溶解注射剤１バイアル中に本発明化合物0.5mg及び生理食塩水1mlを
含有させ、凍結乾燥せしめた注射剤、注射用蒸留水1ml
を用い、溶解して使用した。

実施例３点眼剤１バイアル中に本発明化合物1mg、ホウ酸52.5mg、ホウ
砂14.5mg、塩化ベンザルコニウム適量及び、点眼用溶解
液を含有させ、全量が5mlである点眼剤を調製した。

実施例４吸入剤本発明化合物をメノー乳鉢に入れよくすりつぶし、粒径
が１〜20μの微粉末とした。これに乳糖を入れ、粉砕混
合し、さらにこの微粉末に少量ずつ乳糖を加えてよくす
り混ぜ、20〜40倍散とした。この20〜40mgを常法により
カプセル又は分包し、製剤とした。

カプセルは粉末エアゾル用、分包剤は、液体エアゾル用
とした。

次に本発明化合物（Ｉ）及び（II）の神経突起生長促進
作用を確認した試験について述べる。

試験例１神経芽腫瘍細胞Neuro 2a株増殖に対する効果神経芽腫瘍細胞Neuro 2aを牛胎児血清（以下FCSと略
す）を含む培養液〔DulbeccoのModified Eoglis Medium
90％ FCS10％より成りペニシリンＧを100単位/ml及びス
トレプトマイシン硫酸塩100μg/mlを含有する〕に浮遊
させ、37℃で空気中に５％の炭酸ガスを含む炭酸ガス培
養器中で培養した。容器として60mmのポリスチレン皿を
用い、各容器あたり１〜２×10⁴個を播種し、48時間培
養したものを試験に用いた。細胞培養液よりFCS含有培
養液を除去した後、FCSを含有しない培養液（RPM150％
MEM50％抗生物質は前記培養液と同濃度含有）に、被
験物質として化合物（Ｉ）（表１）、（II）（表２）、
Gal（β1-3）GalNac（β1-4）〔NAcNeu-〔α2-3）〕Gal
（β1-4）Glc（β1-1）‐Ceramide（以下ＧM₁と略す）
（表３）、〔NAcNeu（α2-8）NAcNeu（α2-3）〕‐Gal
（β1-3）GalNAc（β1-4）‐〔NAcNeu-（α2-8）NAcNeu
（α2-3）〕‐Gal（β1-4）Glc（β1-1）‐Ceramide
（以下ＧQ_1bと略す）（表４）の所定量を各々加え、同
様にして培養を継続した。薬剤を加えて24時間後と48時
間後に、各培養容器中の生細胞数の増加、神経突起の数
の増加、及び神経突起の長さの伸長を測定した。

実験は各濃度３皿で行った。測定値は平均値±標準誤差
（S.E.）で表わした。

（結果）試験例１の結果において48時間後の測定で、化合物
（Ｉ）の最小有効濃度をＧM₁、ＧQ_1bと比較すると、化
合物（Ｉ）の最小有効濃度は10ng/ml、ＧM₁は10μg/m
l、ＧQ_1bは10μg/mlで、各々の分子量を考え合わせる
と、化合物（Ｉ）はＧM₁の420倍、ＧQ_1bの270倍の活性
を示す。また48時間後の測定で、化合物（II）の最小有
効濃度をＧM₁、ＧQ_1bと比較すると、化合物（II）の最
小有効濃度は100ng/mlで化合物（II）はＧM₁の42倍、Ｇ
Q_1bの27倍の活性を示す。また、ＧM₁、ＧQ_1bは24時間後
で活性が出ていないのに対し、化合物（Ｉ）、（II）
は、24時間後10ng/mlから活性が出ており、強力な神経
突起生長活性をもつことが示される。

（急性毒性試験）急性毒性試験はddy系雄性マウス45週令に静脈内注射を
行ない結果はLD₅₀＝93mg/kg（化合物（Ｉ））、LD₅₀＝2
91mg/kg（化合物（II））であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者小倉治夫千葉県松戸市常盤平陣屋前５−５ (56)参考文献特開昭57−193496（ＪＰ，Ａ) 日本薬学会第105年会講演要旨集（社団法人日本薬学会昭和60年３月10 日発行）Ｐ．633 ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬＥＴＴＥＲＳＮｏ．９（1986）Ｐ．1449−1452

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】化合物（Ｉ）：及び化合物（II）：で表わされるシアロシルコレステロールを含有すること
を特徴とする神経障害疾患治療剤。
【請求項２】神経障害疾患治療剤が点眼剤、吸入剤、静
脈注射剤、筋肉注射剤、皮下注射剤の形態にある、特許
請求の範囲第（１）項記載の神経障害疾患治療剤。