JPH0698795A - ３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法 - Google Patents
３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法Info
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- JPH0698795A JPH0698795A JP14257393A JP14257393A JPH0698795A JP H0698795 A JPH0698795 A JP H0698795A JP 14257393 A JP14257393 A JP 14257393A JP 14257393 A JP14257393 A JP 14257393A JP H0698795 A JPH0698795 A JP H0698795A
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- carbon atoms
- substituted
- acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 セファロスポラン酸ラクトン誘導体を微生物
の作用により３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸
誘導体に変換する方法を提供する。 【構成】 セファロスポラン酸ラクトン誘導体にシュウ
ドモナス属またはメチロバクテリウム属に属する微生物
またはその調製物を作用させて、３−ヒドロキシメチル
セファロスポラン酸誘導体を製造する方法。
の作用により３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸
誘導体に変換する方法を提供する。 【構成】 セファロスポラン酸ラクトン誘導体にシュウ
ドモナス属またはメチロバクテリウム属に属する微生物
またはその調製物を作用させて、３−ヒドロキシメチル
セファロスポラン酸誘導体を製造する方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、セファロスポリン系抗
生物質製造における有用中間体である３−ヒドロキシメ
チルセファロスポラン酸誘導体の新規製造法に関するも
のである。
生物質製造における有用中間体である３−ヒドロキシメ
チルセファロスポラン酸誘導体の新規製造法に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】これまで、前記化２式で示される３−ヒ
ドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法とし
ては、下記化３式で示される７−アミノセファロスポラ
ン酸（７−ＡＣＡ）誘導体に、加水分解酵素を作用させ
るか、あるいは化学反応的に脱アセチル化することによ
り製造している。
ドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法とし
ては、下記化３式で示される７−アミノセファロスポラ
ン酸（７−ＡＣＡ）誘導体に、加水分解酵素を作用させ
るか、あるいは化学反応的に脱アセチル化することによ
り製造している。
【０００３】
【化３】 （式中、Ｒは上記化１と同一である。）
【０００４】一方、本発明に関する前記化１式で示され
るセファロスポラン酸誘導体は、セフ系抗生物質または
その合成中間体を製造する際に副生物として生成するも
のである。該誘導体を開環し、化２式で示される物質へ
変換する方法としては、特公昭４９−３１９９７号のみ
が知られているが、反応率が低く、工業的な方法とは云
えないものである。
るセファロスポラン酸誘導体は、セフ系抗生物質または
その合成中間体を製造する際に副生物として生成するも
のである。該誘導体を開環し、化２式で示される物質へ
変換する方法としては、特公昭４９−３１９９７号のみ
が知られているが、反応率が低く、工業的な方法とは云
えないものである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、セフ系抗生
物質またはその合成中間体の製造上において重要な課題
である、セファロスポラン酸ラクトン誘導体を３−ヒド
ロキシメチルセファロスポラン酸誘導体に効率的に変換
する方法を提供することを目的とするものである。
物質またはその合成中間体の製造上において重要な課題
である、セファロスポラン酸ラクトン誘導体を３−ヒド
ロキシメチルセファロスポラン酸誘導体に効率的に変換
する方法を提供することを目的とするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するため、特異的にセファロスポラン酸ラクト
ン誘導体を酵素反応にて開環することのできる微生物の
探索を進めた。その結果、前記化１式で示されるセファ
ロスポラン酸ラクトン誘導体を、前記化２式で示される
３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体に変換
する能力を持つ微生物を見出し、本発明を完成するに至
った。
題を解決するため、特異的にセファロスポラン酸ラクト
ン誘導体を酵素反応にて開環することのできる微生物の
探索を進めた。その結果、前記化１式で示されるセファ
ロスポラン酸ラクトン誘導体を、前記化２式で示される
３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体に変換
する能力を持つ微生物を見出し、本発明を完成するに至
った。
【０００７】すなわち、本発明は、化１式で示されるセ
ファロスポラン酸ラクトン誘導体に、シュウドモナス属
またはメチロバクテリウム属に属する微生物またはその
調製物を作用させ、化２式で示される３−ヒドロキシメ
チルセファロスポラン酸誘導体を製造する方法である。
ファロスポラン酸ラクトン誘導体に、シュウドモナス属
またはメチロバクテリウム属に属する微生物またはその
調製物を作用させ、化２式で示される３−ヒドロキシメ
チルセファロスポラン酸誘導体を製造する方法である。
【０００８】この化１式および化２式におけるＲは水素
原子、Ｒ1 −ＣＯ基またはＲ2 −ＳＯ2 基を表し、Ｒ1
は水素原子、アミノ基、カルボニル基、カルボキシル基
により１個または複数個置換された炭素数１〜６の直鎖
状あるいは分枝状のアルキル基、ハロゲン原子、シアノ
原子、炭素数１〜３のアルコキシ基、置換または無置換
のアリールオキシ基、イミノ基、炭素数１〜４のアルキ
リデン基あるいは複素環基により置換された炭素数１〜
３のアルキル基、炭素数１〜４の直鎖状あるいは分枝状
のアルコキシ基、置換あるいは無置換のアラルオキシ基
を表し、Ｒ2 は炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜
３のハロゲン置換アルキル基、置換あるいは無置換のア
リール基を表す。
原子、Ｒ1 −ＣＯ基またはＲ2 −ＳＯ2 基を表し、Ｒ1
は水素原子、アミノ基、カルボニル基、カルボキシル基
により１個または複数個置換された炭素数１〜６の直鎖
状あるいは分枝状のアルキル基、ハロゲン原子、シアノ
原子、炭素数１〜３のアルコキシ基、置換または無置換
のアリールオキシ基、イミノ基、炭素数１〜４のアルキ
リデン基あるいは複素環基により置換された炭素数１〜
３のアルキル基、炭素数１〜４の直鎖状あるいは分枝状
のアルコキシ基、置換あるいは無置換のアラルオキシ基
を表し、Ｒ2 は炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜
３のハロゲン置換アルキル基、置換あるいは無置換のア
リール基を表す。
【０００９】さらに詳しく説明すると、Ｒ1 のアルキル
基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチ
ル基、ヘキシル基等がある。置換アルキル基としては、
例えば、クロロメチル基、２，２，２−トリクロロエチ
ル基、シアノメチル基、シアノエチル基、メトキシエチ
ル基、エトキシエチル基、メトキシプロピル基、フェノ
キシメチル基、トリルオキシメチル基、ｐ−クロロフェ
ノキシ基、ｐ−ニトロフェノキシ基、（２−チエニル）
メチル基、（１−（１Ｈ）−テトラゾール）メチル基、
（２−アミノ−４−チアゾリル）メチル基、（２−フリ
ル）メチル基、（２−アミノ−４−チアゾリル）メトキ
シイミノメチル基、（２−アミノ−４−チアゾリル）プ
ロピリデンメチル基等がある。アルコキシ基としては、
メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキ
シ基、ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基等がある。アラルオ
キシ基としては、例えば、ベンジルオキシ基、ｐ−ニト
ロベンジルオキシ基等がある。Ｒ2 のアルキル基として
は、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基等があ
る。ハロゲン置換アルキル基としては、例えば、トリフ
ルオロメチル基等がある。
基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチ
ル基、ヘキシル基等がある。置換アルキル基としては、
例えば、クロロメチル基、２，２，２−トリクロロエチ
ル基、シアノメチル基、シアノエチル基、メトキシエチ
ル基、エトキシエチル基、メトキシプロピル基、フェノ
キシメチル基、トリルオキシメチル基、ｐ−クロロフェ
ノキシ基、ｐ−ニトロフェノキシ基、（２−チエニル）
メチル基、（１−（１Ｈ）−テトラゾール）メチル基、
（２−アミノ−４−チアゾリル）メチル基、（２−フリ
ル）メチル基、（２−アミノ−４−チアゾリル）メトキ
シイミノメチル基、（２−アミノ−４−チアゾリル）プ
ロピリデンメチル基等がある。アルコキシ基としては、
メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキ
シ基、ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基等がある。アラルオ
キシ基としては、例えば、ベンジルオキシ基、ｐ−ニト
ロベンジルオキシ基等がある。Ｒ2 のアルキル基として
は、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基等があ
る。ハロゲン置換アルキル基としては、例えば、トリフ
ルオロメチル基等がある。
【００１０】本発明に用いられる微生物としては、シュ
ウドモナス属、メチロバクテリウム属に属する微生物の
中から選ばれた微生物である。具体的には、以下の微生
物を使用することができる。シュウドモナス プチダ
（ Pseudomonas putida ）２９−Ｂ（微工研菌寄第１３
０３８号）、メチロバクテリウム エスピー（ Methylo
bacterium sp. ）８２−２Ｂ（微工研菌寄第１３０４０
号）。２９−Ｂ、８２−２Ｂ株は、京都府の土壌中より
分離したもので、いずれも上記の番号で微生物工業技術
研究所に寄託されている。これらの菌学的性質は、以下
に示すとおりである。
ウドモナス属、メチロバクテリウム属に属する微生物の
中から選ばれた微生物である。具体的には、以下の微生
物を使用することができる。シュウドモナス プチダ
（ Pseudomonas putida ）２９−Ｂ（微工研菌寄第１３
０３８号）、メチロバクテリウム エスピー（ Methylo
bacterium sp. ）８２−２Ｂ（微工研菌寄第１３０４０
号）。２９−Ｂ、８２−２Ｂ株は、京都府の土壌中より
分離したもので、いずれも上記の番号で微生物工業技術
研究所に寄託されている。これらの菌学的性質は、以下
に示すとおりである。
【００１１】２９−Ｂ菌株； 形 状 桿菌 グラム染色性 − 胞 子 − 運動性 ＋ コロニーの形態；肉汁寒天上にて、淡い黄緑色、半透
明。円形、規則状、光沢があり、表面はなめらか、低凸
状。直径約０．５mm（２４時間培養）。拡散性の緑黄色
の色素を生産。 各温度での生育 ３７℃ ＋ ４１℃ − ４５℃ −
明。円形、規則状、光沢があり、表面はなめらか、低凸
状。直径約０．５mm（２４時間培養）。拡散性の緑黄色
の色素を生産。 各温度での生育 ３７℃ ＋ ４１℃ − ４５℃ −
【００１２】カタラーゼ ＋ オキシダーゼ ＋ ＯＦテスト − ＮＯ3 還元 − インドール産生 − グルコースからの酸生産 − アルギニンジヒドロラーゼ ＋ ウレアーゼ − エスカリン加水分解 − ゼラチン加水分解 − Ｂガラクトシダーゼ − チトクロームオキシダーゼ ＋ King Ｂ培地での色素生産 ＋ リトマスミルクでの反応性 変化なし ５％ ＮａＣｌ中での生育 ＋
【００１３】各炭素源での生育 グルコース ＋ アラビノース ＋ マンノース − マンニトール − Ｎ−アセチルグルコサミン − マルトース − トレハロース − イノシトール − ベンジルアミン ＋ グルコン酸 ＋ カプロン酸 ＋ アジピン酸 − リンゴ酸 ＋ クエン酸 ＋ フェニル酢酸 ＋
【００１４】８２−２Ｂ菌株； 形 状 桿菌 グラム染色性 − 胞 子 − 運動性 − コロニーの形態；酵母寒天培地にて、半透明。円形、規
則状、光沢があり、小さな斑点状。 生育温度 １５〜３２℃
則状、光沢があり、小さな斑点状。 生育温度 １５〜３２℃
【００１５】カタラーゼ ＋ オキシダーゼ ＋ ＯＦテスト − 硝酸還元 − 窒素源を抜いた培地での生育 − インドール産生 − グルコースからの酸生産 − アルギニンジヒドロラーゼ − ウレアーゼ ＋ エスカリン加水分解 − ゼラチン加水分解 ＋ Ｂガラクトシダーゼ − チトクロームオキシダーゼ ＋ Tween ８０加水分解 − ３％ ＮａＣｌ中での生育 ＋ 血液寒天培地での生育 ＋ McConkey 寒天培地での生育 ＋ サイトファーガ寒天培地での黄色素 − フェニルアラニンデアミナーゼ − アセトイン − メタノールの利用 ＋ Simmansクエン酸のアルカリ化 − Penicillin Ｇへの感受性 ＋ Polymyxin への感受性 ＋
【００１６】各炭素源での生育 グルコース − アラビノース − マンノース − マンニトール − Ｎ−アセチルグルコサミン − マルトース − グルコン酸 − カプロン酸 − アジピン酸 − リンゴ酸 − クエン酸 − フェニル酢酸 −
【００１７】以上の菌学的性質を Bergey's Manual of
Systematic Bacteriology (VolumeＩ）１９８４年、お
よび The Prokaryotes (Volume II ，第２版，A.Balows
ら）にしたがって分類すると、２９−Ｂ菌株はシュウド
モナスプチダと同定され、８２−２Ｂ菌株はメチロバク
テリウム属に属する細菌と同定された。
Systematic Bacteriology (VolumeＩ）１９８４年、お
よび The Prokaryotes (Volume II ，第２版，A.Balows
ら）にしたがって分類すると、２９−Ｂ菌株はシュウド
モナスプチダと同定され、８２−２Ｂ菌株はメチロバク
テリウム属に属する細菌と同定された。
【００１８】本発明における反応方法は、微生物または
その調製物と化１式で示されるセファロスポラン酸ラク
トン誘導体とを接触させることにより、加水分解開環反
応を行い、３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘
導体を得るものである。微生物またはその調製物とは、
具体的には前記微生物を培養した培養物、そこから集め
た菌体処理物（例えば、菌体の破砕物または菌体より分
離抽出した酵素）、さらに、菌体または菌体処理物を適
当な方法により固定化したものを示す。
その調製物と化１式で示されるセファロスポラン酸ラク
トン誘導体とを接触させることにより、加水分解開環反
応を行い、３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘
導体を得るものである。微生物またはその調製物とは、
具体的には前記微生物を培養した培養物、そこから集め
た菌体処理物（例えば、菌体の破砕物または菌体より分
離抽出した酵素）、さらに、菌体または菌体処理物を適
当な方法により固定化したものを示す。
【００１９】本発明で使用される微生物の培養は、公知
の方法に準じて行うことができる。使用する培地は、一
般微生物の栄養源として公知のものが利用でき、グルコ
ース、グリセロール、メタノール、シュークロース、デ
キストリン、酢酸、オレイン酸エチル等の炭素源、尿
素、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、アンモニア
等の窒素源、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトン、肉エ
キス等の有機栄養源、Ｌ−チロシン、Ｌ−リジン等のア
ミノ酸、リン酸、マグネシウム、カリウム、鉄、コバル
ト、マンガン等の無機栄養源を適宜組合せて使用でき
る。培地のｐＨは４から１０の範囲で選べばよく、培養
温度は１５℃から４０℃、好ましくは２５℃から３２℃
である。培養日数は１日から１０日の範囲で活性が最大
となるまで培養すればよい。
の方法に準じて行うことができる。使用する培地は、一
般微生物の栄養源として公知のものが利用でき、グルコ
ース、グリセロール、メタノール、シュークロース、デ
キストリン、酢酸、オレイン酸エチル等の炭素源、尿
素、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、アンモニア
等の窒素源、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトン、肉エ
キス等の有機栄養源、Ｌ−チロシン、Ｌ−リジン等のア
ミノ酸、リン酸、マグネシウム、カリウム、鉄、コバル
ト、マンガン等の無機栄養源を適宜組合せて使用でき
る。培地のｐＨは４から１０の範囲で選べばよく、培養
温度は１５℃から４０℃、好ましくは２５℃から３２℃
である。培養日数は１日から１０日の範囲で活性が最大
となるまで培養すればよい。
【００２０】本発明における反応条件を次に説明する。
反応は、一般に水性溶媒の存在下で都合よく進行する。
水性溶媒とは、水、各種塩類からなる緩衝液、およびこ
れらとメタノール等のアルコール溶媒、アセトン等のケ
トン溶媒、１，４−ジオキサン等のエーテル溶媒、ジメ
チルスルホキシド等の極性非プロトン性溶媒等の水溶性
有機溶媒との混合溶媒、さらには、水性溶媒と非水溶性
有機溶媒との混合溶媒とからなる二相系溶媒等を意味す
る。さらに、反応を促進する物質として、MnCl2、MnSO4、
NaCl、KI、3-(3',4'-Dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea
(DCMU)、Nutrientbroth、NZ amine等を添加してもよい。
反応は、一般に水性溶媒の存在下で都合よく進行する。
水性溶媒とは、水、各種塩類からなる緩衝液、およびこ
れらとメタノール等のアルコール溶媒、アセトン等のケ
トン溶媒、１，４−ジオキサン等のエーテル溶媒、ジメ
チルスルホキシド等の極性非プロトン性溶媒等の水溶性
有機溶媒との混合溶媒、さらには、水性溶媒と非水溶性
有機溶媒との混合溶媒とからなる二相系溶媒等を意味す
る。さらに、反応を促進する物質として、MnCl2、MnSO4、
NaCl、KI、3-(3',4'-Dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea
(DCMU)、Nutrientbroth、NZ amine等を添加してもよい。
【００２１】反応温度は、原料の種類、反応溶媒の種
類、その他の条件により必ずしも一定ではないが、通常
は約０〜８０℃の間であり、好ましくは４〜５０℃の間
を選択する。反応濃度は、約０．００１〜７０重量％の
間であり、好ましくは０．１〜４０重量％の間を選択す
る。反応ｐＨは３〜１１であり、好ましくは５〜９の間
を選択する。反応に菌体を使用する場合の菌体の濃度
は、通常０．０５重量％から２０重量％の間を選択す
る。反応時間は、０．５〜３００時間の間を選択する。
反応により消費される化１式で示されるセファロスポラ
ン酸ラクトン誘導体は、連続的あるいは間歇的に補充
し、反応液中の濃度が上記の範囲に維持されるように添
加してもよい。
類、その他の条件により必ずしも一定ではないが、通常
は約０〜８０℃の間であり、好ましくは４〜５０℃の間
を選択する。反応濃度は、約０．００１〜７０重量％の
間であり、好ましくは０．１〜４０重量％の間を選択す
る。反応ｐＨは３〜１１であり、好ましくは５〜９の間
を選択する。反応に菌体を使用する場合の菌体の濃度
は、通常０．０５重量％から２０重量％の間を選択す
る。反応時間は、０．５〜３００時間の間を選択する。
反応により消費される化１式で示されるセファロスポラ
ン酸ラクトン誘導体は、連続的あるいは間歇的に補充
し、反応液中の濃度が上記の範囲に維持されるように添
加してもよい。
【００２２】このようにして得られる反応混合物から、
目的化合物を回収するには、先ずｐＨを７〜８に調整
後、遠心分離あるいは濾過等により微生物等の不溶物を
除去し、希硫酸もしくは希塩酸にて酸性となし、０〜１
０℃条件下にて６〜４８時間静置し、生成した結晶を濾
取する。目的化合物は、必要により再結晶、メタノール
等のアルコール類による洗浄、または吸着樹脂やイオン
交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーにより精製
し、高純度のものとすることができる。
目的化合物を回収するには、先ずｐＨを７〜８に調整
後、遠心分離あるいは濾過等により微生物等の不溶物を
除去し、希硫酸もしくは希塩酸にて酸性となし、０〜１
０℃条件下にて６〜４８時間静置し、生成した結晶を濾
取する。目的化合物は、必要により再結晶、メタノール
等のアルコール類による洗浄、または吸着樹脂やイオン
交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーにより精製
し、高純度のものとすることができる。
【００２３】
【実施例】次に、実施例によって本発明をさらに詳細に
説明する。ただし、これらの実施例は本発明の範囲を限
定するものではない。 実施例１ グリセロール２％、尿素０．１％、リジン０．１％、チ
ロシン０．１％、リン酸２カリウム０．４％、リン酸１
カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０２％、酵母
エキス０．２％、金属混合液０．２％（金属混合液と
は、塩化マグネシウム５ｇ、塩化マンガン４１０mg、塩
化第１鉄３５０mg、塩化亜鉛２００mg、塩化カルシウム
１００mg、塩化コバルト２０mg、塩化銅２０mg、モリブ
デン酸ナトリウム１０mg、ホウ酸ナトリウム１０mgを１
００mlの蒸留水に溶かしたものである）を含み、ｐＨを
７．０にした殺菌培地５００mlに、予め同培地で培養し
たシュウドモナス プチダ ２９−Ｂ株を２％移殖し、
２８℃で３６時間培養した。培養後、遠心分離にて菌体
を集めた（約７５０mg−dcw ）。この菌体と、０．１Ｍ
クエン酸−リン酸２ナトリウム（ McIlvaine )バッファ
ー（ｐＨ６．０）１００mlに、デアセチル−７−アミノ
セファロスポラン酸ラクトン（化１式におけるＲが水素
原子）３４０mgを添加し、４℃で２００時間反応させ
た。反応終了後、反応液を遠心分離により菌体を除去し
た後、５％重曹水にて弱アルカリ性とした後、約５０ml
の酢酸エチルで未反応物質等を抽出除去した。水相を低
温下にて減圧濃縮し、希硫酸でｐＨ４〜５とし、２℃で
２４時間静置し、生成した結晶を濾取した。これを水お
よびメタノールで洗浄後、乾燥し、デアセチル−７−ア
ミノセファロスポラン酸７３．７mgを得た（収率２０
％）。化合物の同定は、標品のクロマトデータおよびＮ
ＭＲ、ＩＲ、ＵＶ等のスペクトルデータと比較して行っ
た。
説明する。ただし、これらの実施例は本発明の範囲を限
定するものではない。 実施例１ グリセロール２％、尿素０．１％、リジン０．１％、チ
ロシン０．１％、リン酸２カリウム０．４％、リン酸１
カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．０２％、酵母
エキス０．２％、金属混合液０．２％（金属混合液と
は、塩化マグネシウム５ｇ、塩化マンガン４１０mg、塩
化第１鉄３５０mg、塩化亜鉛２００mg、塩化カルシウム
１００mg、塩化コバルト２０mg、塩化銅２０mg、モリブ
デン酸ナトリウム１０mg、ホウ酸ナトリウム１０mgを１
００mlの蒸留水に溶かしたものである）を含み、ｐＨを
７．０にした殺菌培地５００mlに、予め同培地で培養し
たシュウドモナス プチダ ２９−Ｂ株を２％移殖し、
２８℃で３６時間培養した。培養後、遠心分離にて菌体
を集めた（約７５０mg−dcw ）。この菌体と、０．１Ｍ
クエン酸−リン酸２ナトリウム（ McIlvaine )バッファ
ー（ｐＨ６．０）１００mlに、デアセチル−７−アミノ
セファロスポラン酸ラクトン（化１式におけるＲが水素
原子）３４０mgを添加し、４℃で２００時間反応させ
た。反応終了後、反応液を遠心分離により菌体を除去し
た後、５％重曹水にて弱アルカリ性とした後、約５０ml
の酢酸エチルで未反応物質等を抽出除去した。水相を低
温下にて減圧濃縮し、希硫酸でｐＨ４〜５とし、２℃で
２４時間静置し、生成した結晶を濾取した。これを水お
よびメタノールで洗浄後、乾燥し、デアセチル−７−ア
ミノセファロスポラン酸７３．７mgを得た（収率２０
％）。化合物の同定は、標品のクロマトデータおよびＮ
ＭＲ、ＩＲ、ＵＶ等のスペクトルデータと比較して行っ
た。
【００２４】実施例２ 各種炭素源２％、ポリペプトン０．５％、リン酸２カリ
ウム０．４％、リン酸１カリウム０．２％、硫酸マグネ
シウム０．０２％、酵母エキス０．２％を含み、ｐＨを
７．０にした殺菌培地５mlに、シュウドモナスプチダ
２９−Ｂ株を２８℃、２日間培養した。これを、４ｍＭ
デアセチル−７−アミノセファロスポラン酸ラクトン
（化１式におけるＲが水素原子）を０．１Ｍリン酸カリ
ウムバッファー（ｐＨ７．０）１mlに溶解したものと混
合し、４℃で１７時間反応させた。反応終了後、遠心分
離により菌体を除去した上清液をＨＰＬＣにより、生成
されたデアセチル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｄ
−７ＡＣＡ）を定量した。結果は表１のようになり、炭
素源としてフラクトース、グリセロール、ポリエチレン
グリコールが有効であった。
ウム０．４％、リン酸１カリウム０．２％、硫酸マグネ
シウム０．０２％、酵母エキス０．２％を含み、ｐＨを
７．０にした殺菌培地５mlに、シュウドモナスプチダ
２９−Ｂ株を２８℃、２日間培養した。これを、４ｍＭ
デアセチル−７−アミノセファロスポラン酸ラクトン
（化１式におけるＲが水素原子）を０．１Ｍリン酸カリ
ウムバッファー（ｐＨ７．０）１mlに溶解したものと混
合し、４℃で１７時間反応させた。反応終了後、遠心分
離により菌体を除去した上清液をＨＰＬＣにより、生成
されたデアセチル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｄ
−７ＡＣＡ）を定量した。結果は表１のようになり、炭
素源としてフラクトース、グリセロール、ポリエチレン
グリコールが有効であった。
【００２５】
【表１】
【００２６】実施例３ グリセロール２％、尿素０．５％、リン酸２カリウム
０．４％、リン酸１カリウム０．２％、硫酸マグネシウ
ム０．０２％、酵母エキス０．２％、各種アミノ酸０．
１％を含み、ｐＨを７．０にした殺菌培地５mlに、シュ
ウドモナス プチダ ２９−Ｂ株を２８℃、２日間培養
した。これを４ｍＭデアセチル−７−アミノセファロス
ポラン酸ラクトン（化１式におけるＲが水素原子）を
０．１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）１ml
に溶解したものとを混合し、４℃で１７時間反応させ
た。反応終了後、遠心分離により菌体を除去した上清液
をＨＰＬＣにより、生成されたデアセチル−７−アミノ
セファロスポラン酸（Ｄ−７ＡＣＡ）を定量した。結果
は表２のようになり、アミノ酸としてチロシンとリジン
に添加効果があった。
０．４％、リン酸１カリウム０．２％、硫酸マグネシウ
ム０．０２％、酵母エキス０．２％、各種アミノ酸０．
１％を含み、ｐＨを７．０にした殺菌培地５mlに、シュ
ウドモナス プチダ ２９−Ｂ株を２８℃、２日間培養
した。これを４ｍＭデアセチル−７−アミノセファロス
ポラン酸ラクトン（化１式におけるＲが水素原子）を
０．１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）１ml
に溶解したものとを混合し、４℃で１７時間反応させ
た。反応終了後、遠心分離により菌体を除去した上清液
をＨＰＬＣにより、生成されたデアセチル−７−アミノ
セファロスポラン酸（Ｄ−７ＡＣＡ）を定量した。結果
は表２のようになり、アミノ酸としてチロシンとリジン
に添加効果があった。
【００２７】
【表２】
【００２８】実施例４ 実施例１と同様に培養した２９−Ｂ株菌体７２mg-dcw
と、デアセチル−７−アミノセファロスポラン酸ラクト
ン（化１式におけるＲが水素原子）を４ｍＭとなるよう
に溶解させた０．１Ｍクエン酸−リン酸２ナトリウム
（ McIlvaine )バッファー（ｐＨ６．０）８mlを混合
し、４，１０，１８，２５，３５℃の各反応温度で９０
時間まで反応経過をみた。結果は図１に示すとおりであ
る。
と、デアセチル−７−アミノセファロスポラン酸ラクト
ン（化１式におけるＲが水素原子）を４ｍＭとなるよう
に溶解させた０．１Ｍクエン酸−リン酸２ナトリウム
（ McIlvaine )バッファー（ｐＨ６．０）８mlを混合
し、４，１０，１８，２５，３５℃の各反応温度で９０
時間まで反応経過をみた。結果は図１に示すとおりであ
る。
【００２９】実施例５ グリセロール３％、ポリペプトン０．５％、リン酸２カ
リウム０．４％、リン酸１カリウム０．２％、硫酸マグ
ネシウム０．０２％、酵母エキス０．２％を含み、ｐＨ
を７．０にした殺菌培地５００mlに、予め同培地で培養
したメチロバクテリウム エスピー ８２−２Ｂを２％
移植し、２８℃で２日間培養した。培養後、遠心分離に
て菌体を集めた後、０．１Ｍリン酸カリウムバッファー
（ｐＨ７．０）１００mlとデアセチル−７−アミノセフ
ァロスポラン酸ラクトン（化１式におけるＲが水素原
子）８４．８mgを添加し、２０℃で１７時間反応させ
た。反応終了液により菌体を遠心分離にて除去した後、
実施例１と同様にして、デアセチル−７−アミノセファ
ロスポラン酸の結晶１９．６mg（収率２１％）を得た。
リウム０．４％、リン酸１カリウム０．２％、硫酸マグ
ネシウム０．０２％、酵母エキス０．２％を含み、ｐＨ
を７．０にした殺菌培地５００mlに、予め同培地で培養
したメチロバクテリウム エスピー ８２−２Ｂを２％
移植し、２８℃で２日間培養した。培養後、遠心分離に
て菌体を集めた後、０．１Ｍリン酸カリウムバッファー
（ｐＨ７．０）１００mlとデアセチル−７−アミノセフ
ァロスポラン酸ラクトン（化１式におけるＲが水素原
子）８４．８mgを添加し、２０℃で１７時間反応させ
た。反応終了液により菌体を遠心分離にて除去した後、
実施例１と同様にして、デアセチル−７−アミノセファ
ロスポラン酸の結晶１９．６mg（収率２１％）を得た。
【００３０】実施例６ 実施例１と同様にして培養した菌体（約７５０mg-dcw）
と、５％ジメチルスルホキシドを含有する McIlvaineバ
ッファー（ｐＨ６．０）１００mlと、７β−〔（Ｚ）−
２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキ
シイミノアセチル〕セファロスポラン酸ラクトン〔化１
式におけるＲが（２−アミノ−４−チアゾリル）メトキ
シイミノアセチル基〕１９８mgを混合し、１０℃で１０
０時間反応させた。反応終了液より菌体を遠心分離にて
除去した後、実施例１と同様に精製して、目的の３−ヒ
ドロキシメチル−７β−〔（Ｚ）−２−（２−アミノチ
アゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチル〕
セファロスポラン酸３１mg（収率１５％）を得た。化合
物の同定は、標品のクロマトデータおよびＮＭＲ、Ｉ
Ｒ、ＵＶ等のスペクトルデータと比較して行った。
と、５％ジメチルスルホキシドを含有する McIlvaineバ
ッファー（ｐＨ６．０）１００mlと、７β−〔（Ｚ）−
２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキ
シイミノアセチル〕セファロスポラン酸ラクトン〔化１
式におけるＲが（２−アミノ−４−チアゾリル）メトキ
シイミノアセチル基〕１９８mgを混合し、１０℃で１０
０時間反応させた。反応終了液より菌体を遠心分離にて
除去した後、実施例１と同様に精製して、目的の３−ヒ
ドロキシメチル−７β−〔（Ｚ）−２−（２−アミノチ
アゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチル〕
セファロスポラン酸３１mg（収率１５％）を得た。化合
物の同定は、標品のクロマトデータおよびＮＭＲ、Ｉ
Ｒ、ＵＶ等のスペクトルデータと比較して行った。
【００３１】実施例７ 実施例１と同様に培養した２９−Ｂ株菌体２０ｍｇ−ｄ
ｃｗと、デアセチル−７−アミノセファロスポラン酸ラ
クトン（化１式におけるＲが水素原子）を４ｍＭとなる
ように溶解させたＭｃｉｌｖａｉｎｅバッファー（ｐＨ
６．０）１ｍｌと、各種有機化合物とを混合し、４℃で
２４時間反応させた。反応終了後、遠心分離により菌体
を除去した上清液をＨＰＬＣにより、生成されたデアセ
チル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｄ−７ＡＣＡ）
を定量した。結果は表３のようになった。
ｃｗと、デアセチル−７−アミノセファロスポラン酸ラ
クトン（化１式におけるＲが水素原子）を４ｍＭとなる
ように溶解させたＭｃｉｌｖａｉｎｅバッファー（ｐＨ
６．０）１ｍｌと、各種有機化合物とを混合し、４℃で
２４時間反応させた。反応終了後、遠心分離により菌体
を除去した上清液をＨＰＬＣにより、生成されたデアセ
チル−７−アミノセファロスポラン酸（Ｄ−７ＡＣＡ）
を定量した。結果は表３のようになった。
【００３２】
【表３】
【００３３】
【発明の効果】本発明を利用することにより、セファロ
スポリン系抗生物質の製造中間体である３−ヒドロキシ
メチルセファロスポラン酸誘導体を、対応するラクトン
体より微生物を用いて、常温常圧の反応条件下で製造で
きるため経済上非常に有利である。本発明は、詳細に、
かつ、特にその具体化においては、実施例をもって述べ
てきたが、本発明の精神と範囲から外れることがないな
らば、本発明の中で各種の変化や変更ができることは、
当該技術分野のものには明らかであろう。
スポリン系抗生物質の製造中間体である３−ヒドロキシ
メチルセファロスポラン酸誘導体を、対応するラクトン
体より微生物を用いて、常温常圧の反応条件下で製造で
きるため経済上非常に有利である。本発明は、詳細に、
かつ、特にその具体化においては、実施例をもって述べ
てきたが、本発明の精神と範囲から外れることがないな
らば、本発明の中で各種の変化や変更ができることは、
当該技術分野のものには明らかであろう。
【図１】本発明の実施例４における反応経過の結果を示
すグラフである。
すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 35/00 Ｃ１２Ｒ 1:40） (Ｃ１２Ｐ 35/00 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (1)
- 【請求項１】 下記化１式で示されるセファロスポラン
酸ラクトン誘導体に、シュウドモナス属またはメチロバ
クテリウム属に属する微生物またはその調製物を作用さ
せることを特徴とする下記化２式で示される３−ヒドロ
キシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法。 【化１】 （式中、Ｒは水素原子、Ｒ1 −ＣＯ基またはＲ2 −ＳＯ
2 基を表し、Ｒ1 は水素原子、アミノ基、カルボニル
基、カルボキシル基により１個または複数個置換された
炭素数１〜６の直鎖状あるいは分枝状のアルキル基、ハ
ロゲン原子、シアノ原子、炭素数１〜３のアルコキシ
基、置換または無置換のアリールオキシ基、イミノ基、
炭素数１〜４のアルキリデン基あるいは複素環基により
置換された炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜４の
直鎖状あるいは分枝状のアルコキシ基、置換あるいは無
置換のアラルオキシ基、Ｒ2 は炭素数１〜３のアルキル
基、炭素数１〜３のハロゲン置換アルキル基、置換ある
いは無置換のアリール基を表す。） 【化２】 （式中、Ｒは上記化１と同一である。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14257393A JPH0698795A (ja) | 1992-08-05 | 1993-05-24 | ３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22779492 | 1992-08-05 | ||
| JP4-227794 | 1992-08-05 | ||
| JP14257393A JPH0698795A (ja) | 1992-08-05 | 1993-05-24 | ３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0698795A true JPH0698795A (ja) | 1994-04-12 |
Family
ID=26474530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14257393A Withdrawn JPH0698795A (ja) | 1992-08-05 | 1993-05-24 | ３−ヒドロキシメチルセファロスポラン酸誘導体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0698795A (ja) |
-
1993
- 1993-05-24 JP JP14257393A patent/JPH0698795A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20000801 |