JPH07110301A

JPH07110301A - 細胞のａｔｐ量測定方法及び装置

Info

Publication number: JPH07110301A
Application number: JP27897493A
Authority: JP
Inventors: Yasushi Haketa; 靖羽毛田; Tatsuo Nishino; 達夫西野; Hiroshi Tsunoda; 浩角田
Original assignee: Toa Electronics Ltd
Current assignee: DKK TOA Corp
Priority date: 1993-10-12
Filing date: 1993-10-12
Publication date: 1995-04-25

Abstract

(57)【要約】【目的】細胞捕獲後の濾過膜を折り畳むという操作を
必要とせず、操作性が向上するのみならず、濾過膜の外
部からの汚染の危険性をも解決し、高精度にて細胞のＡ
ＴＰ量を測定することが可能な、細胞のＡＴＰ量測定方
法及び装置を提供する。【構成】検体中の細胞を捕獲した濾過膜１００を、折
り畳むことなく、一方が開口した皿状の容器２００内に
載置する。容器２００内に抽出試薬１０４及び発光試薬
１０７を注入し、生物化学発光反応を起こす。そして、
この容器２００の開口部と対面するようにして光電子増
倍管１０８を設置して、発光量を検出し、細胞のＡＴＰ
量を測定する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、食品衛生、医学、バイ
オ、医薬品、臨床検査、超純水、環境、化粧品、酒造等
の種々の分野にて、使用する原料、原料水、或は製品等
に混在する微生物及び動物等の細胞を測定するのに利用
する測定方法及び装置に関するものであり、更に詳しく
言えば、細胞のＡＴＰ量を生物化学発光を利用して測定
し細胞個数を計測する測定方法及び装置に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】上記のような種々の分野において、大腸
菌、酵母菌、乳酸菌及びその他の生細胞の測定は、極め
て重要である。例えば、食品衛生の分野では、製品出荷
のために製品の微生物汚染の検査は必要不可欠である。
現在、細胞数の測定は、成長培地中のコロニーの計測、
血球計算盤による顕微鏡下での計測、濁度測定法等によ
って行われている。

【０００３】成長培地中のコロニー計測法は、高感度
である、生細胞のみを測定できる、選択培地を用い
れば微生物細胞が固定できる等の点で優れているが、培
養を必要とするので測定に要する時間は通常１日以上で
あり、迅速に結果を得たい場合には適さない。

【０００４】血球計算盤による方法は、顕微鏡を用いる
ため、操作が煩雑である、自動化が困難等の欠点を
有している。

【０００５】濁度測定法は、迅速で自動化が容易である
点で優れているが、感度が低い、生細胞と死細胞の
区別ができない、発酵乳等のようなベースの濁度が高
いサンプルには適用できない等の問題点を有している。

【０００６】更に具体的に説明すれば、例えば、上記食
品衛生分野での製品の微生物汚染の検査は、前記コロニ
ー計測法で行われているが、検査に１日以上要するため
に、結果が出るまで製品を倉庫に保管しておかなければ
ならず、流通効率の点で問題があるだけでなく、牛乳等
の製品では保管時間が長いほど微生物汚染の可能性が高
くなる。

【０００７】又、食品で汚染を問題にする微生物濃度は
総じて低濃度であるので、高感度な検査が要求される。

【０００８】このように、迅速で且つ高感度といった上
記要求を満たす微生物濃度測定法として、生きた微生物
中には必ず存在するアデノシン３リン酸（本明細書では
「ＡＴＰ」という。）を生物化学発光測定法を用いて測
定する方法が知られている。この方法は、細胞に含まれ
るＡＴＰ量が細胞数に比例することを利用しており、測
定時間が短く、高感度であるため非常に有効な方法であ
る。

【０００９】生物化学発光測定法には、蛍の酵素である
ルシフェラーゼ及びルシフェリンが用いられる。つま
り、この方法を用いて細胞のＡＴＰ量を測定するために
は、細胞中に含まれるＡＴＰを抽出する試薬（本明細書
では「抽出試薬」という。）を用いて抽出した後、ルシ
フェラーゼ及びルシフェリンを用いた生物化学発光反応
試薬（本明細書では「発光試薬」という。）を作用させ
て生物化学発光に基づき生成した微小な光を高感度な発
光検出器、例えば光電子増倍管を用いて測定し、光の生
成量がＡＴＰ量に比例することを利用して、ＡＴＰを定
量する。そのＡＴＰ量から細胞量を測定することができ
る。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】このように、ＡＴＰ量
を測定する方法は、細胞を測定する方法として迅速且つ
簡便な方法として有用であるが、細菌等の微生物細胞に
含まれる１細胞当たりのＡＴＰ量は、約０．００１ｐｇ
〜０．１ｐｇ（約０．００２ｆｍｏｌ〜０．２ｆｍｏ
ｌ）程度と非常に微量である。

【００１１】ところが、現存の技術ではルシフェラーゼ
及びルシフェリンを用いた発光試薬の試薬ブランク及び
感度、更には、発光検出器の光検出感度などの面から、
検出できるＡＴＰ量の下限は０．１ｐｇ程度が限界であ
り、これは一般細菌数に換算すると１０³ 〜１０⁴ 個／
ｍｌに当たる。

【００１２】しかしながら、食品衛生検査、化粧品等の
化成品細菌検査、原料水検査等の分野では、１０³ 個／
ｍｌ以下の細菌数を測定する必要があるため、単純に検
体のＡＴＰ量を測定する方法では測定感度の面で不十分
であった。

【００１３】このような問題点を解決するため、検体を
濾過膜で濾過して細胞を捕獲する方法が採用されるよう
になった。この方法は、細胞を濾過膜表面に捕獲して細
胞を濃縮し、測定する方法である。

【００１４】この方法による細胞の濃縮効率は、濾過す
る検体の液量と、後に添加する抽出試薬若しくは洗浄液
の量により決まり、１０² 個／ｍｌの細菌を含んだ検体
１００ｍｌを濾過すれば、１０⁴ 個の細胞を捕獲するこ
とが可能になる。図７に、従来のこの種のＡＴＰ量測定
装置の一例を示す。

【００１５】つまり、従来の測定方法によれば、４７ｍ
ｍ或は２５ｍｍ直径の濾過膜１００が使用されており、
この濾過膜１００は、濾過器にて細胞を捕獲した後、小
さく折り畳まれて小型の試験管１０１に入れられる。次
いで、この試験管１０１は、遮光箱１０２の蓋１１０を
開けて、箱内に設けられた試験管ホルダ１０３にセット
され、抽出試薬１０４が試験管１０１内に注入される。

【００１６】試験管１０１は、モータ１０５及び回転伝
達器１０６にて振盪し、抽出試薬１０４で細胞からＡＴ
Ｐを抽出する。次いで、試験管１０１内に発光試薬１０
７を注入し、その発光量を発光検出器（光電子増倍管）
１０８で測定する。このとき、発光検出器１０８は、試
験管１０１の下方にセットするか、或は試験管１０１の
横にセットされた。

【００１７】このような構成の従来の方法によれば、試
験管１０１内に濾過膜１００を入れるために、細胞捕獲
後の濾過膜１００を折り畳むという操作が必須であり、
その操作が煩わしいばかりでなく、濾過膜１００を折り
畳む過程にてこの濾過膜が外部から汚染されるという危
険性が生じる。

【００１８】更に、折り畳んだ濾過膜１００からＡＴＰ
を十分に抽出するには、抽出試薬１０４を必要以上に使
用しなければならず、そのために、濃縮効率の低下を招
いていた。

【００１９】更に重要なことに、従来方法では、光電子
増倍管、即ち、発光検出器１０８は、試験管１０１の下
方或は横にセットされており、従って、試験管１０１の
ガラス管壁を通して試験管１０１内の発光量を計測する
ことが余儀なくされていた。そのために、光がガラス管
壁を通ることによる光の減衰、或は試験管１０１の汚れ
による光量の減少などが起こり、測定精度が低下する原
因となっていた。

【００２０】従って、本発明の目的は、細胞捕獲後の濾
過膜を折り畳むという操作を必要とせず、操作性が向上
するのみならず、濾過膜の外部からの汚染の危険性をも
解決し、高精度にて細胞のＡＴＰ量を測定することが可
能な、細胞のＡＴＰ量測定方法及び装置を提供すること
である。

【００２１】更に、本発明の他の目的は、細胞捕獲後の
濾過膜からＡＴＰを抽出するための抽出試薬の量を最小
限度とし、それによって、濃縮効率の低下を回避するこ
とができ、更には、ガラス管壁などを介することなく直
接、試料の発光量を測定することが可能となり、従っ
て、高精度にて細胞のＡＴＰ量を測定し得る、細胞のＡ
ＴＰ量測定方法及び装置を提供することである。

【００２２】

【課題を解決するための手段】上記目的は本発明に係る
ＡＴＰ量測定方法及び装置にて達成される。要約すれ
ば、本発明は、（ａ）検体中の細胞を濾過膜に捕獲する
こと、（ｂ）前記濾過膜を、上方が開口した皿状の容器
内に載置すること、（ｃ）前記容器内に抽出試薬を注入
し、前記濾過膜に捕獲された細胞のアデノシン３リン酸
を抽出すること、（ｄ）前記容器内に発光試薬を注入
し、生物化学発光反応を起こすこと、（ｅ）前記工程
（ｄ）により発生した光を、前記容器の開口部に対面し
て配置した光電子増倍管で検出すること、を特徴とした
細胞のＡＴＰ量測定方法である。好ましくは、前記検体
中の細胞を捕獲した濾過膜は、折り畳むことなく前記容
器内に載置される。

【００２３】斯かる細胞のＡＴＰ量測定方法は、正面に
開口部が形成されたハウジングと、検体中の細胞を捕獲
した濾過膜を収容することのできる上方が開口した皿状
の容器を担持し、そして前記ハウジングの正面開口部を
介して前記ハウジングに対して出入り自在とされる容器
ホルダと、前記容器ホルダに支持され、そして前記容器
を振盪するための駆動手段と、前記容器の開口部に対面
して前記ハウジングに取り付けられた光電子増倍管とを
有することを特徴とする細胞のＡＴＰ量測定装置にて好
適に実施される。好ましくは、前記容器ホルダが前記ハ
ウジングから引出された時、前記光電子増倍管の前記容
器に対面した開口部を遮蔽するためのシャッタ部材を有
する。又、好ましくは、前記容器に、抽出試薬及び発光
試薬を注入するための薬液導入手段を有する。

【００２４】

【実施例】以下、本発明に係る細胞のＡＴＰ量測定方法
及び装置を図面に則して更に詳しく説明する。図１に本
発明に係る細胞のＡＴＰ量測定装置の一実施例の全体構
成を示し、図２〜図６にその詳細を示す。

【００２５】本実施例によると、細胞のＡＴＰ量測定装
置１は、遮光箱とされる断面が矩形のハウジング２を有
する。ハウジング２は、正面に開口部４を有し、中央部
には仕切り板６が設けられる。この仕切り板６は、後で
説明する容器ホルダ１０の案内支持部材として機能す
る。

【００２６】ハウジング２に対して、その内部へと出入
り自在に容器ホルダ１０が設けられる。容器ホルダ１０
は、検体中の細胞を捕獲した濾過膜１００を収容するこ
とのできる皿状の容器２００を担持する支持板１２と、
この支持板１２に対して直交する態様で、即ち、Ｔ字形
状にて一体に取り付けられた閉鎖部材１４とを有する。
この閉鎖部材１４は、容器ホルダ１０がハウジング２に
挿入された時、ハウジング２の開口部４を閉鎖する扉の
役目を成す。又、この閉鎖部材１４には把手１６が固着
され、容器ホルダ１０のハウジング２への出し入れ時に
使用する。

【００２７】更に説明すると、支持板１２は、仕切り板
６の上面に載置され、そしてこの仕切り板６の上面に互
いに平行に配置されたガイド１８Ａ、１８Ｂの間に適合
され、この仕切り板６上を摺動自在とされる。又、この
支持板１２の大略中央部の下面には、電動モータのよう
な駆動手段２０が取り付けられる。従って、仕切り板６
には、容器ホルダ１０をハウジング２内に装着した時
に、この電動モータ２０の進入を可能とするべく、Ｕ字
型の切欠き２２が形成されている。

【００２８】前記電動モータ２０の駆動軸２０Ａは、支
持板１２に穿設された貫通孔１２Ａを通って上方へと延
在し、その先端に、容器保持台２６が固定される。容器
保持台２６は、上面に凹所を有し、この凹所内に、検体
中の細胞を捕獲した濾過膜１００を収容することのでき
る容器２００が設置とされる。この容器２００は、一方
が開口した皿状の容器、即ち、シャーレなどとされる。

【００２９】容器保持台２６は、その中心をモータ２０
の駆動軸２０Ａに固定することもできるが、僅かに偏心
して取り付けることもでき、それによって、モータ２０
を駆動することにより、容器保持台２６が偏心運動を行
ない、容器保持台２６に載置された容器２００の振盪作
用をより効果的とすることができる。

【００３０】このハウジング２の上壁に光電子増倍管１
０８が設置される。光電子増倍管１０８の光検出先端部
１０８Ａは、上壁に形成された貫通孔部３からハウジン
グ２内方へと突入して配置され、前記容器ホルダ１０を
ハウジング２内に装着した時に、光電子増倍管１０８の
光検出先端部１０８Ａが、容器２００の開口部に対面す
るように構成されている。この光電子増倍管１０８は、
その支持外筒１２８を介してハウジング２上壁に固定さ
れる。

【００３１】本実施例によると、容器ホルダ１０を、図
３に一点鎖線にて示すように、ハウジング２内から引出
した時に、容器ホルダ１０の遮蔽部材１４によるハウジ
ング２の開口部４の遮光が無くなることにより、光電子
増倍管１０８の光検出先端部１０８Ａに侵入する光を抑
制するために、光電子増倍管１０８の光検出先端部１０
８Ａの下方に位置してシャッタ部材１３０が設けられ
る。このシャッタ部材１３０は、手動で操作するように
構成することも可能であるが、本実施例では、容器ホル
ダ１０のハウジング２内への装着に連動して作動するよ
うに構成される。

【００３２】つまり、シャッタ部材１３０は、ハウジン
グ２の上壁に回転自在に設けられた回転支軸１３２に取
り付けられる。この回転支軸１３２には、先端にローラ
１３６を備えた作動レバー１３４が固定されており、
又、回転支軸１３２は、このローラ１３６が容器ホルダ
１０の支持板１２の先端部１２Ｂに当接するように、即
ち、図３にて反時計方向に、ばね部材（図示せず）にて
付勢されている。従って、今、容器ホルダ１０がハウジ
ング２内から外方へと引出されると、ローラ１３６及び
作動レバー１３４は、この作動レバー１３４がガイド部
材１８Ａに当接するまで反時計方向に回転する。そのた
めに、シャッタ部材１３０も反時計方向に回転し、図３
に一点鎖線にて示すように、光電子増倍管１０８の光検
出先端部１０８Ａの下方に位置する位置にて停止する。
これにより、ハウジング２内から引出した時に、シャッ
タ部材１３０は、光電子増倍管１０８の光検出先端部１
０８Ａに侵入する光を抑制することができる。

【００３３】逆に、容器ホルダ１０がハウジング２内へ
と装着される場合には、容器ホルダ１０の支持板１２の
先端がローラ１３６に当接し、ローラ１３６及び作動レ
バー１３４を、時計方向に回転する。そのために、シャ
ッタ部材１３０も時計方向に回転し、図３に実線にて示
すように、光電子増倍管１０８の光検出先端部１０８Ａ
を完全に開放し、光電子増倍管１０８の光検出先端部１
０８Ａが容器２００の開口部に対面することとなる。

【００３４】光電子増倍管１０８には高圧電源１１２に
より高電圧が印加されており、光電子増倍管１０８の出
力電流は、アンプ１１１で電圧に変換され増幅されて、
Ａ／Ｄ変換器を介してコンピュータ１１３に送られる。
コンピュータ１１３には、測定結果を表示するための表
示器１１４と、それを印字するためのプリンタ１１５が
接続されている。

【００３５】容器の上部には発光試薬１０７をポンプ１
１８により容器に注入するための導入管１２０と、抽出
試薬１０４をポンプ１２１により容器に注入するための
導入管１２２が設けられる。勿論、これら試薬の注入
は、装置外部においてディスペンサにより手操作で注入
しても良い。

【００３６】上記構成とされる細胞のＡＴＰ量測定装置
を用いた細胞の測定方法を、次に、詳しく説明する。

【００３７】従来と同様に、濾過膜１００を濾過器に設
置して検体を濾過する。濾過器は市販の濾過器を使用す
ることができる。濾過膜１００は、直径１３ｍｍ、２５
ｍｍ、４７ｍｍ程度のものが一般に市販されているが、
抽出試薬１０４の必要量と測定誤差の面から１３ｍｍ若
しくは２５ｍｍ程度の濾過膜１００を使用するのが好ま
しい。濾過膜１００の孔径は、濾過を行う細胞の種類に
より選択できるが、菌体の細胞を濾過する場合には０．
２μｍ或は０．４５μｍ程度の孔径の濾過膜１００を使
用するのが好ましい。

【００３８】濾過を行う検体の量は、検体に含まれる細
胞及び細胞以外の夾雑物の量によって決まるが、検体量
が多い程細胞の濃縮効率が増加するので、細胞が少ない
場合には濾過膜１００が目詰まりしない範囲で、できる
だけ多量の検体を濾過することが好ましい。

【００３９】もし、検体の夾雑物の量が多くて十分な量
の濾過が不可能な場合には、孔径の大きな濾過膜１００
を上に載せてプレフィルタとして使用することも可能で
ある。

【００４０】濾過終了後は、検体の種類により細胞以外
のＡＴＰが検体中に含まれていたり、生物化学発光反応
を妨害する物質を含む場合もあるので、滅菌水、滅菌生
理食塩水、滅菌ｐＨ緩衝液等で濾過膜１００を洗うこと
が必要である。

【００４１】このようにして濾過を終了した濾過膜１０
０を滅菌したピンセット等で濾過器から取り外し、容器
２００の底面上に載せる。容器２００は濾過膜１００の
大きさに応じて濾過膜１００の入る大きさのものを使用
する。濾過膜１００を載せた容器２００は、容器ホルダ
１０を引き出して、容器保持台２６上に載せた後、容器
ホルダ１０の閉鎖部材、即ち、扉１４を押して、容器ホ
ルダ１０と共にハウジング２内に押し込む。

【００４２】これにより、シャッタ部材１３０も時計方
向に回転し、光電子増倍管１０８の光検出先端部１０８
Ａは完全に開放されて、容器２００の開口部に対面する
こととなる。このとき、光電子増倍管１０８の光検出先
端部１０８Ａと容器２００内の液面との間の距離は、１
０〜１５ｍｍ、好ましくは１１〜１３ｍｍとされる。

【００４３】次いで、ハウジング２の中に設置された容
器上に具備された導入管１２２から抽出試薬１０４をポ
ンプ１２１により定量だけ容器２００内に注入し、必要
に応じて、モータ２０を駆動して容器２００を振盪し、
濾過膜１００表面に捕獲された細胞からＡＴＰを抽出す
る。

【００４４】抽出試薬１０４には、界面活性剤を使用し
た抽出試薬やエタノールを用いた抽出試薬等が使用でき
るが、できるだけ生物化学発光反応を阻害しないものが
好ましく、抽出時間は１０秒から６０秒程度が適当であ
る。抽出試薬１０４の注入量は、使用する濾過膜１００
の直径によるが、１３ｍｍの濾過膜１００の場合１００
μｌ程度、２５ｍｍの濾過膜１００の場合２００μｌ程
度が適当であるが、これにこだわる必要はない。但し、
濃縮効率を考えた場合には、抽出試薬量は必要最低限と
することが好ましい。

【００４５】ＡＴＰを抽出後、容器２００上に配置され
た導入管１２０から発光試薬１０７をポンプ１１８によ
り定量だけ容器内に注入し、モータ２０を駆動して容器
２００を回転（振盪）させながら生物化学発光反応を起
こさせる。これによって生じた発光は、光電子増倍管１
０８でその発光量を検出する。モータ２０による容器２
００の回転は、発光試薬を良く混合するためと発光を均
一に捕らえるための補助的なもので、好ましいものでは
あるが、必須ではない。

【００４６】ポンプ１２１とポンプ１１８はコンピュー
タ１１３でコントロールされる。光電子増倍管１０８の
出力は、アンプ１１１を通してコンピユータ１１３に送
られれ、一定時間積算される。積算時間は１０〜３０秒
程度が一般的である。発光量の積算値は、既知のＡＴＰ
標準試薬で測定した発光量の積算値と比較されて、ＡＴ
Ｐ量としてコンピユータ１１３により計算され、表示器
１１４及びプリンタ１１５に結果が出力される。

【００４７】上述したように、発光試薬１０７と抽出試
薬１０４は、必ずしもポンプ１２１とポンプ１１８を用
いて注入する必要はなく、装置外部においてディスペン
サにより手操作で注入することもできる。

【００４８】以下、本発明を実施例によって更に説明す
る。

【００４９】実施例１本発明に従って、酵母の測定を行った。検体は、S.cere
visiaeを酵母用完全培地を用いて培養し、ｐＨ７．０の
リン酸緩衝液で希釈して、２．７×１０^-2個／ｍｌ〜
２．７×１０⁶ 個／ｍｌになるように作製した。酵母数
の測定は、酵母完全培地による標準寒天平板法により行
った。

【００５０】孔径０．４５μｍ、直径１３ｍｍのニトロ
セルロース濾過膜１００（アドバンテック社製Ａ０４５
Ａ０１３Ａ）を濾過器（日本ミリポア社製ＸＦ３００１
２００）にセットし、検体１０ｍｌを濾過した。濾過膜
１００を滅菌したリン酸緩衝液１０ｍｌで洗浄後、折り
畳むことなく、内径１４ｍｍ、外径１６ｍｍ、高さ８ｍ
ｍの硝子容器とされる容器２００の底面に滅菌したピン
セットで載置した後、この容器２００を本発明の装置の
容器保持台２６に設置した。容器２００を設置した後、
容器ホルダ１０を押して容器２００をハウジング２内に
装着した。コンピユータ１１３からの信号によりポンプ
１２１が作動し、抽出試薬１０４を容器に１００μｌ注
入した。抽出試薬１０４は陽イオン界面活性剤溶液を使
用した。注入後、容器をモータで３０秒間回転振盪し、
酵母からＡＴＰを抽出した。

【００５１】更に、コンピユータ１１３からの信号によ
りポンプ１１８を作動させ、発光試薬１０７（東亜電波
工業社製、商品名「ＡＴＰＡ−１Ｌ１」）を容器に１０
０μｌ注入し、生物化学発光反応を起こさせた。そし
て、光電子増倍管１０８にて発光を検出し、発光量を３
０秒間積算し、予め測定しておいた１（ｎｍｏｌ／リッ
トル）ＡＴＰ標準液の発光量の積算値と比較して酵母の
ＡＴＰ量をコンピユータ１１３にて計算し、表示器１１
４及びプリンタ１１５にて出力した。このとき、光電子
増倍管１０８の光検出先端部１０８Ａと容器２００内の
液面との間の距離は、約１３ｍｍであった。

【００５２】図５に本発明に基づき測定した酵母数とＡ
ＴＰ量の関係を示す。比較のため、検体を濾過しないで
測定した結果を併記した。

【００５３】この結果から、０．１個／ｍｌ〜１０³ 個
／ｍｌの酵母の測定が可能であり、濾過を行わないで直
接検体を測定した場合の１００倍の検出感度を有するこ
とが分かった。この結果は、検体１０ｍｌを濾過し１０
０μｌの抽出試薬で抽出したことによる１００倍の濃縮
の理論的な結果と良く一致している。

【００５４】実施例２本発明に従って、乳酸菌の測定を行った。検体は、市販
発酵乳をｐＨ７．０のリン酸緩衝液で希釈し、４．４個
／ｍｌ〜４．４×１０⁶ 個／ｍｌの乳酸菌懸濁液を作製
した。乳酸菌数は、ＢＰＣ加プレートカウント寒天培地
（栄研化学社製）を用いて測定した。

【００５５】孔径０．４５μｍ、直径１３ｍｍのニトロ
セルロース濾過膜１００（アドバンテック社製Ａ０４５
Ａ０１３Ａ）を濾過器（日本ミリポア社製ＸＦ３００１
２００）にセットし、検体１０ｍｌを濾過した。濾過膜
１００を滅菌したリン酸緩衝液１０ｍｌで洗浄後、折り
畳むことなく、内径１４ｍｍ、外径１６ｍｍ、高さ８ｍ
ｍの硝子容器２００の底面に滅菌したピンセットで載せ
て、実施例１と同様な操作でＡＴＰ量を測定した。

【００５６】図６に本発明に基づき測定した乳酸菌数と
ＡＴＰ量の関係を示す。比較のため、検体を濾過しない
で測定した結果を併記した。

【００５７】この結果から、１０個／ｍｌ〜１０⁵ 個／
ｍｌの乳酸菌の測定が可能であり、濾過を行わないで直
接検体を測定した場合の１００倍の検出感度を有するこ
とが分かった。この結果は、検体１０ｍｌを濾過し１０
０μｌの抽出試薬で抽出したことによる１００倍の濃縮
の理論的な結果と良く一致している。

【００５８】

【発明の効果】以上詳しく説明したように、本発明に係
る細胞のＡＴＰ量測定方法及び装置は、検体中の細胞を
捕獲した濾過膜を一方が開口した皿状の容器内に載置
し、そして、この容器の開口部と対面するようにして光
電子増倍管１０８を設置して細胞のＡＴＰ量を測定する
構成とされるので、細胞捕獲後の濾過膜を折り畳んだ
り、濾過膜上の細胞を洗い流す等の面倒な操作を必要と
せず、操作性が向上するのみならず、濾過膜の外部から
の汚染の危険性をも解決し、高精度にて細胞のＡＴＰ量
を測定することができる。又、細胞捕獲後の濾過膜から
ＡＴＰを抽出するための抽出試薬の量を最小限度とし、
それによって、濃縮効率の低下を回避することができ、
更には、ガラス管壁などを介することなく直接、試料の
発光量を測定することができ、従って、高精度にて細胞
のＡＴＰ量を測定することができる。本発明は、これら
の効果により、細胞の測定下限を大幅に向上でき、従っ
て、食品衛生、バイオ等の微生物検査に大きく貢献する
ことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に係る細胞のＡＴＰ量測定装置の一実施
例の全体構成図である。

【図２】本発明に係る細胞のＡＴＰ量測定装置の断面図
である。

【図３】図２の線III-III にとった断面図である。

【図４】図２の線IV-IV にとった断面図である。本発明
に係る細胞のＡＴＰ量測定装置の一実施例の全体構成図
である。

【図５】酵母数とＡＴＰ量の関係図である。

【図６】乳酸菌数とＡＴＰ量の関係図である。

【図７】従来の細胞のＡＴＰ量測定装置の全体構成図で
ある。

【符号の説明】

１細胞のＡＴＰ量測定装置２ハウジング１０容器ホルダ２０駆動手段（電動モータ）２６容器保持台１００濾過膜１０８光電子増倍管１２０、１２２薬液導入管１３０シャッタ部材２００容器

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）検体中の細胞を濾過膜に捕獲する
こと、（ｂ）前記濾過膜を、上方が開口した皿状の容器
内に載置すること、（ｃ）前記容器内に抽出試薬を注入
し、前記濾過膜に捕獲された細胞のアデノシン３リン酸
を抽出すること、（ｄ）前記容器内に発光試薬を注入
し、生物化学発光反応を起こすこと、（ｅ）前記工程
（ｄ）により発生した光を、前記容器の開口部に対面し
て配置した光電子増倍管で検出すること、を特徴とした
細胞のＡＴＰ量測定方法。
【請求項２】前記検体中の細胞を捕獲した濾過膜は、
折り畳むことなく前記容器内に載置される請求項１の細
胞のＡＴＰ量測定方法。
【請求項３】正面に開口部が形成されたハウジング
と、検体中の細胞を捕獲した濾過膜を収容することので
きる上方が開口した皿状の容器を担持し、そして前記ハ
ウジングの正面開口部を介して前記ハウジングに対して
出入り自在とされる容器ホルダと、前記容器ホルダに支
持され、そして前記容器を振盪するための駆動手段と、
前記容器の開口部に対面して前記ハウジングに取り付け
られた光電子増倍管とを有することを特徴とする細胞の
ＡＴＰ量測定装置。
【請求項４】前記容器ホルダが前記ハウジングから引
出された時、前記光電子増倍管の前記容器に対面した光
検出端部を遮蔽するためのシャッタ部材を有することを
特徴とする請求項３の細胞のＡＴＰ量測定装置。
【請求項５】前記容器に、抽出試薬及び発光試薬を注
入するための薬液導入手段を有することを特徴とする請
求項４の細胞のＡＴＰ量測定装置。