JPH07121870B2 - 糖たんぱく質結合体 - Google Patents

糖たんぱく質結合体

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JPH07121870B2
JPH07121870B2 JP61156342A JP15634286A JPH07121870B2 JP H07121870 B2 JPH07121870 B2 JP H07121870B2 JP 61156342 A JP61156342 A JP 61156342A JP 15634286 A JP15634286 A JP 15634286A JP H07121870 B2 JPH07121870 B2 JP H07121870B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合
体、その製法及びワクチンとしての使用に関する。
特に、本発明は、CRM 197、破傷風トキソイド及び百日
咳毒素から選ばれるたんぱく質に、共有結合により、グ
ラム陽性細菌の莢膜多糖から誘導された少なくとも１の
オリゴ糖ハプテン及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から誘
導された少なくとも１のオリゴ糖ハプテンを、これらオ
リゴ糖ハプテンを末端エステル基導入により予備的に活
性化させた後、結合せしめることにより得られる、三価
免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体に関する。
髄膜炎菌及び肺炎球菌の如き莢膜を有する細菌に対す
る、これら細菌から誘導された莢膜多糖抗原を使用する
ワクチンの開発では、中でも幼児におけるこれら多糖抗
原の免疫性付与機能が不充分であることを示している。
これは、かかる莢膜を有する細菌によって生ずる感染の
頻度レベルが幼児において最大となるため、特に重大か
つ興味ある問題の１つである。
糖たんぱく質結合体の合成及び使用は、多糖抗原に対す
る免疫応答を改善することにおける特に興味深い解決法
である。
Avery（「J.Exp.Med.」（1959）50,533）及びGobel
（「J.Exp.Med.」（1939）69,53）は、約50年前、糖た
んぱく質結合体の調製及びその使用を開示すると共に、
かかる化合物（その糖部分はストレプトコッカス・ニュ
ーモニエ（S.Pneumoiae）タイプ３の多糖である）がこ
の細菌に対する免疫を発揮すること（多糖自体よりも効
果的である）を実証している。
最近では、糖たんぱく質結合体の合成の分野で多数の研
究が行なわれており、ヘモフィルス・インフルエンゼ
（Haemophilus influenzae）ｂ型及び髄膜炎菌グループ
Ａ及びＣを使用する場合に有望な効果が得られている。
米国特許第4,356,170号は、グラム陽性又はグラム陰性
細菌の莢膜多糖及びたんぱく質によって構成される糖た
んぱく質結合体、及び莢膜を有する細菌を、たんぱく質
に結合する前に変性して、近接する水酸基の酸化により
末端アルデヒド基を生成させることを特徴とするかかる
糖たんぱく質結合体の調製法を開示している。
従来の方法によれば、このようにして得られた糖たんぱ
く質は、グラム陽性又はグラム陰性細菌に対するワクチ
ンとして、又は混合ワクチン（すなわち、薬学上許容さ
れる液状キャリヤー中で２以上の糖たんぱく質結合体を
混合することにより、異種の細菌に免疫反応を示すワク
チン）の調製に使用される。
発明者らは、特殊な条件下では、同一のたんぱく質に、
グラム陽性及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導され
るオリゴ糖ハプテンを結合させることができ、三価免疫
原活性を有する糖たんぱく質結合体が得られることを見
出し、本発明に至った。
従って、本発明は、CRM 197、破傷風トキソイド及び百
日咳毒素から選ばれるたんぱく質に、共有結合により、
グラム陽性細菌の莢膜多糖から誘導された少なくとも１
のオリゴ糖ハプテン及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から
誘導された少なくとも１のオリゴ糖ハプテンを、これら
オリゴ糖ハプテンを末端エステル基導入により予備的に
活性化させた後、結合せしめることにより得られる、三
価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体に関する。
このようにして得られた糖たんぱく質結合体は、動物モ
デルに、同時に、グラム陽性細菌の莢膜多糖抗原、グラ
ム陰性細菌の莢膜多糖抗原及び使用したたんぱく質に対
する既住性免疫応答を誘発しうる。本発明の結合体は、
三価免疫原活性を有する唯１つの糖たんぱく質結合体を
使用して、疫学的に重大な莢膜を有するグラム陰性及び
グラム陽性細菌に対する新規なワクチンの調製に有用で
ある。
本発明によれば、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質
結合体の調製に使用されるたんぱく質は、生理学上許容
される遊離のアミノ基を有するたんぱく質の中から選ば
れる。
これらの中でも、特にCRM 197、破傷風トキソイド及び
百日咳毒素が好適である。
このようなたんぱく質は、各々の生産微生物を培養し、
濾過により培養基から分離し、沈殿させ、最後にクロマ
トグラフィーにより精製することによって調製される。
本発明によれば、オリゴ糖ハプテンは、疫学上重大なグ
ラム陽性及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導される
ものの中から選択される。
特に、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococ
cus Pneumoniae）、ストレプトコッカス・ベータ−エモ
リティカス（Streptococcus β−emoliticus）に属する
グラム陽性細菌に由来するもの、及びナイセリア・メニ
ンギチジス（Neisseria meningitidis）、シュードモナ
ス・アエルギノーザ（Pseudomonas aeruginosa）、エシ
エリキア・コリ（Escherichia coli）及びヘモフィルス
・インフルエンゼ（Haemophilus influenzae）に属する
グラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導されるものが好適で
ある。
オリゴ糖ハプテンは相当する莢膜多糖の酸性加水分解に
より調製される。代表的には、加水分解反応は、莢膜多
糖をpH3ないし5.5の酢酸水溶液中に懸濁させることによ
って行なわれる。
加水分解は、密閉したアンプル内で溶液を温度100℃に
４ないし40時間維持することにより実施される。
加水分解終了後、オリゴ糖ハプテンをゲル−クロマトグ
ラフィーによって反応混合物から分離する。流出液の分
析により、メチルペントース、リン及び還元基の存在を
確認する。
このオリゴ糖ハプテンの分子量は、ゲル−クロマトグラ
フィー分析において分布係数（Kd）を測定することによ
り確認され、一方、物理的手段による特性の確認はNMR
分析によって行なわれる。
オリゴ糖ハプテンの免疫化学特性は、Porroらの方法
（「モレキュラー・イミュノロジー（Molec.Immuno
l.）」1985）に従って確認される。かかる方法は、電気
泳動親和法と「ロケット（rocket）」免疫電気泳動法と
を組合せたもので、抗原と相同抗体との間の免疫沈殿反
応におけるハプテンの阻害能力を基礎とする方法であ
る。
この目的に好適なオリゴ糖ハプテンは、分子量103ない
し２×103、好ましくは分子量1500を有しかつ末端還元
基の存在によって特徴ずけられるものの中から選ばれ
る。
本発明によれば、上記オリゴ糖ハプテンは、共有結合に
よりたんぱく質に結合される前に、末端へのエステル基
の導入によって活性化される。
活性化は、オリゴ糖ハプテンの末端還元基への第１アミ
ノ基の導入及びつづく該アミノ基の相当するエステルへ
の変換によって行なわれる。
一般に、オリゴ糖ハプテンを、塩化アンモニウム及びNa
BH3CNの存在下、水中に懸濁化させることにより実施さ
れる。
得られた溶液のpHを7.5ないし9.5に調整し、密閉アンプ
ル内において、温度30ないし55℃に、１ないし２週間の
対応する期間維持する。
反応終了後、オリゴ糖ハプテンをゲル−クロマトグラフ
ィーによって分離し、流出液を分析して、メチルペント
ース、リン及びアミノ基の存在を確認する。
このようにして得られたオリゴ糖ハプテンを、つづいて
ジメチルスルホキシド内に移し、有機酸エステル（たと
えばアジピン酸の誘導体）の存在下でエステル化する。
好ましくは、アジピン酸ヒドラジドのジスクシンイミジ
ルエステルが、オリゴ糖ハプテンに導入されたアミノ基
に対して過剰のモル濃度、一般に2:1ないし10:1のモル
濃度で使用される。
活性化されたオリゴ糖ハプテンは、1,4−ジオキサンの
添加（1,4−ジオキサン／ジメチルスルホキシドの容量
比＝10/1）により、反応混合物から沈殿、分離される。
ついで、活性化オリゴ糖ハプテンは反応混合物から遠心
分離され、アミノ基の消失及びアミノ基の活性エステル
への変化を確認するため分析に付される。
本発明は、さらに、CRM 197、破傷風トキソイド及び百
日咳毒素から選ばれるたんぱく質抗原に、グラム陽性細
菌の莢膜多糖から誘導された少なくとも１のオリゴ糖ハ
プテン及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導された少
なくとも１のオリゴ糖ハプテンを、これらオリゴ糖ハプ
テンを末端エステル基導入により予備的に活性化させた
後、同時に又は順次、共有結合を介して結合させてな
る、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体の製法
にも係る。
たんぱく質とオリゴ糖ハプテンとの間の結合反応は、ハ
プテンに、予じめ活性化せしめたオリゴ糖ハプテンを、
同時に又は順次、たんぱく質／ハプテンのモル比1/10で
添加することによって実施される。
代表的には、結合反応は、液相中、有機溶媒の存在下、
温度10ないし40℃、時間２ないし24時間で行なわれる。
好ましくは、ジメチルスルホキシドの存在下、温度15
℃、15時間の各条件下で実施される。
結合反応後、反応混合物から、ゲル−クロマトグラフィ
ーにより糖たんぱく質結合体を分離する。流出液のクロ
マトグラフィーでは、たんぱく質及び結合されたオリゴ
糖ハプテンに対する化学活性が併存することが明らかに
なる。流出液は22μｍの濾過膜を使用する濾過によって
滅菌される。
たんぱく質分子におけるオリゴ糖ハプテンによる置換率
は、糖たんぱく質の化学分析及びこれにつづく３成分の
モル％への換算により測定される。
本発明によれば、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質
結合体の置換率とは、たんぱく質１モル当りのグラム陽
性細菌の莢膜多糖から誘導された少なくとも１のオリゴ
糖ハプテンの置換率、及びグラム陰性細菌の莢膜膜多糖
から誘導された少なくとも１のオリゴ糖ハプテンの置換
率である。一般に、たんぱく質１モル当り、グラム陽性
細菌の莢膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンのモル
数は１ないし６であり、グラム陰性細菌の莢膜多糖から
誘導されたオリゴ糖ハプテンのモル数は１ないし２であ
る。
本発明による糖たんぱく質結合体は、疫学上重大な莢膜
を有するグラム陽性細菌及び莢膜を有するグラム陰性細
菌に対するワクチンとして有用である。
特に、幼児を免疫するためのワクチンとして使用され
る。このような分子は、莢膜多糖から誘導されたオリゴ
糖ハプテンを含有し、その免疫応答は胸腺非依存性（th
ymus−independent）である。
このような多糖は、それ自体では幼児における免疫性付
与作用に乏しいが、本発明の糖たんぱく質結合体の調製
に使用される場合には、動物モデルに、胸腺依存（thym
us−dependent）形の免疫応答を生ずる。
特に、ELISA法により行ったテストでは、本発明の糖た
んぱく質結合体を使用する場合、莢膜多糖に特異的な抗
体の抗血清が生産されることが実証された。
本発明によれば、ワクチンは、三価免疫原活性を有する
糖たんぱく質結合体の有効量を、生理溶液又は他の注射
用液状キャリヤーの中から選ばれる液状キャリヤーと混
合することにより調製される。
このような混合物に、ワクチンの調製に現在使用されて
いるものの中から選ばれる添加剤を添加することもでき
る。かかる目的に達する添加剤は、ラクトースまたはソ
ルビトールの如き安定剤、及び水酸化アルミニウム、リ
ン酸塩又はアルギニン酸塩の如きアジュバントである。
好ましくは、AlPO4が使用される。
このようにして調製されたワクチンは筋肉内又は皮下注
射法によって投与される。
小児用ワクチンの調製における糖たんぱく質結合体の濃
度は25ないし200μｇである。体重に応じて、これより
も多い量で投与されてもよい。
ワクチンは一度で、又は数回に分けて投与される。
本発明を説明するため（しかし、本発明を制限するもの
ではない）、糖たんぱく質結合体を合成した。この結合
体では、たんぱく質CRM 197が、共有結合を介して、グ
ラム陽性細菌であるストレプトコッカス・ニューモニエ
タイプ6Aの莢膜多糖から誘導された少なくとも１つの
オリゴ糖ハプテン及びグラム陰性細菌であるナイセリア
・メニンギチジス グループＣの莢膜多糖から誘導され
た少なくとも１つのオリゴ糖ハプテンに結合している。
このような糖たんぱく質結合体の免疫特性を、実験動物
を用いてテストし、たんぱく質CRM 197、ストレプトコ
ッカス・ニューモニエ タイプ6A及びナイセリア・メニ
ンギチジス グループＣの莢膜多糖に対する免疫応答を
評価した。
次に、後述する図面に関して記述する。
第１図は、糖たんぱく質の電気泳動における挙動（５μ
ｇ、ライン２）及び結合前のたんぱく質CRM 197の電気
泳動における挙動（５μｇ、ライン３）を表わす図であ
る。
化学法による糖付加（glycosilanizing）は、たんぱく
質CRM 197を形成するサブユニットＡ及びＢの両方に分
配されて生ずる。
糖たんぱく質結合体の分子量は、ライン１に示す分子量
の基準と比較して、約78,000である。
第２図は、時間（日）を横軸に、免疫グロブリンIgGの
濃度（ELISA単位で表示）を縦軸にプロットしたチャー
トである。
図中、 は、抗ストレプトコッカス・ニューモニア タイプ6A I
gGの値を示し、 は、抗ナイセリア・メニンギチジス グループC IgGの
値を示す。
第３図は、ナイセリア・メニンギチジスの生菌に関する
家兎の抗血清の殺菌活性の測定について得られたチャー
トである。
横軸に時間（日）を、縦軸に希釈の対数の逆数をプロッ
トしている。
は抗−グループＣ殺菌活性を示す。
第４図は、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体
により免疫したモルモットの抗血清中の抗ジフテリア菌
毒素の定量に関するチャートである。
横軸に時間（日）を、縦軸に濃度S.I.（単位/ml）をプ
ロットしている。
は抗ジフテリア菌毒素を示す。
各点は、１グループ10匹の動物を使用して得た滴定量の
平均値を表す。
実施例１ ストレプトコッカス・ニューモニエ タイプ 6Aの莢膜
多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンの調製 S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖2mgを、10mM酢酸
水溶液（pH3.4）1ml中に溶解させた。
油浴中に浸漬した密閉アンプル内において、溶液を温度
100℃に39時間維持することにより、加水分解した。
かかる時間の経過後、200mM NaCl溶液（pH7.0）で処理
したSephadex G 15（Pharmacia,Uppsala）上でのカラム
クロマトグラフィー（４℃で操作）によって、生成した
オリゴ糖を反応混合物から分離した。
ついで、クロマトグラフィー流出液を、メチルペントー
ス、リン及び還元基の存在を確認するため、それぞれKa
batの方法（「エキスペリメンタル・イミュノケミスト
リー（Exp.Immunochemistry）」E.A.Rabat ＆ Mayer
編、538−541頁）、Chenらの方法（「アナリティカル・
ケミストリー（Anal.Chem.）28,1756−1758,1956）及び
Porroらの方法（「アナリティカル・バイオケミストリ
ー（Anal.Biochem.）」118,301−306,1981）に従って分
析した。
得られた結果では、リン／ラムノースのモル比は１であ
り、ラムノース／還元基のモル比は３であった。
Sephadex G 50での分析では、このオリゴ糖は、分布係
数（Kd）0.48（分子量（MW）約1500に相当）を示した。
NMR分析では、このオリゴ糖は約８個の単糖残基（この
うちには免疫優性（immunodominant）の糖であるガラク
トース残基がみられる）で形成されていることを示し
た。
NMR分析は、代表的には、重水（D2O）1mlにオリゴ糖50m
gを溶解し、35℃の5mmプローブ、Varian分光計モデルCF
T 20を使用し、内部基準としてδ＝39.5PPmのメタノー
ルを使用して20メガヘルツ（MHz）で操作することによ
り行なわれる。
実施例２ ナイセリア・メニンギチジス グループＣの莢膜多糖か
ら誘導されたオリゴ糖ハプテンの調製 実施例１と同様にして、N.メニンギチジスグループＣの
莢膜多糖の加水分解について、0.5mM酢酸溶液中、pH5、
８時間でテストを行った。
このようにして得られたオリゴ糖ハプテンは、Sephadex
G50上でKd 0.46（分子量約1500に相当）を示した。
クロマトグラフィー流出液の化学分析では、末端還元基
の存在及びＮ−アセチル−ノイラミン酸（シアリン酸と
しても公知）の存在を示した。
NMR分析では、かかるハプテンが10−12個の単糖残基
（これらの中で、免疫優性残基はＮ−アセチル−ノイラ
ミン酸である）で構成されることを示した。
実施例３ S.ニューモニエ6A及びN.メニンギチジスグループＣの莢
膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンの免疫化学特性
の確認 Porroらの方法（「モレキュラー・イミュノロジー」198
5）に従ってテストを行った。
３つの区域（区域A,B及びＣ）に分画した免疫電気泳動
用プラスチックプレート（各区域はアーガロース（Agar
ose M−LKB,Bromma社）0.1％（w/v）2mlを含有する）を
使用した。
区域Ａには、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖用又
はN.メニンギチジス グループＣ（Staten Seruminstit
ut.コペンハーゲン）の莢膜多糖用検出剤として家兎の
抗血清0.05％（v/v）を導入した。
区域Ｂには、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖抗原
用又はN.メニンギチジス グループＣの莢膜多糖抗原用
検出剤として、予じめ37℃で15分間培養しておいた各々
S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖5ng及びN.メニン
ギチジスグループＣの莢膜多糖5ngを含有する家兎の抗
血清0.05％（v/v）を導入した。
区域Ｃには、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖用又
は家兎の抗血清用検知剤として、N.メニンギチジス グ
ループＣの莢膜多糖用検知剤として、予め37℃で15分間
培養した、それぞれオリゴ糖ハプテン5,50,500及び5000
ngを含有する家兎抗血清0.05％（v/v）を導入した。
対照として使用した莢膜多糖タイプ6A及びグループＣ
を、各回1:2の比（計2,4,8,16μｇ）で４回希釈し、区
域Ｂ及びＣのアーガロースに設けた４つのくぼみの各々
に希釈物10μずつを導入した。
このように調製したプレートを、70V/cm、１ないし２時
間で操作して電気泳動させた。終了後、プレートを37℃
で乾燥し、免疫沈殿した「ロケット」を測定し、定量し
た。
この方法の感度は、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多
糖の定量では約20ng/mlであり、N.メニンギチジス グ
ループＣの多糖の定量では約50ng/mlである。
オリゴ糖ハプテンの阻害は、免疫沈殿「ロケット」がア
ーガロース区域Ｃ（オリゴ糖ハプテンと共に予培養され
た対照抗血清を含有する）において、区域Ｂ（多糖抗原
と共に予培養された対照抗血清を含有する）におけるよ
りも高い場合に明らかであった。
ついで、実施例１及び２に示す如くして得られたオリゴ
糖ハプテンの最小阻害濃度、及び対照家兎抗血清により
認識された抗原に対するその免疫化学特異性を、Porro
らの記載（「モレキュラー・イミュノロジー」1985）に
従って証明した。
特に、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖から誘導さ
れたオリゴ糖ハプテンに関しては、構造中に免疫優性糖
であるガラクトースが存在する場合、N.メニンギチジス
の莢膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンに関して
は、構造中に免疫優性酸であるＮ−アセチル−ノイラミ
ン酸が存在する場合に低い特異性値を示すことが観察さ
れた。
オリゴ糖ハプテンの特異性は、それぞれの多糖抗原のも
のと比較する場合、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多
糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンでは1.08×10-3であ
り、N.メニンギチジス グループＣの多糖から誘導され
たオリゴ糖ハプテンでは1.06×10-3であった。
実施例４ たんぱく質CRM 197の調製 菌株コリネバクテリウム・ジフセリエ（Corynebacteriu
m diphtheriae C7（βtox-197）によって生産されたCRM
197を、Millipore XM 50（NMWL5×10-4）膜を使用する
分子濾過によって培養基から分離した。
ついで、濾液に硫酸アンモニウムの飽和溶液（65％以
下）を添加することにより、たんぱく質を沈殿させた。
沈殿したたんぱく質を遠心分離によって分離し、0.01M
リン酸塩緩衝液（pH7.2）に溶解させた。
つづいて、イオン交換クロマトグラフィーにより、たん
ぱく質CRM 197を精製した。
0.01Mリン酸塩緩衝液（pH7.2）で処理したDEAE Sepharo
se 6B/CLカラム（2.5×100cm）を使用し、溶離剤として
0.09M NaCl緩衝液を使用した。
Pappenheimerら方法（「イミュノケミストリー（Immuno
chemistry）」９,891−906,1972）に従って、還元条件
下、ポリアクリルアミドゲル（SDS−PAGE）による硫酸
ナトリウムドデシル−電気泳動により分析したところ、
得られたCRM 197の80％は、天然分子形であった。
このたんぱく質の純度は約400フロキュレーション限界
（Lf）/mgであった。
実施例５ S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖及びN.メニンギチ
ジス グループ6Cの莢膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハ
プテンの活性化 ａ）オリゴ糖ハプテンの末端還元基への第１級アミノ基
の導入 実施例１及び２の如くして得られたオリゴ糖ハプテンを
別々に蒸留水に溶解して最終濃度10mg/mlとした。各溶
液に、塩化アンモニウム50mg/ml及びNaBH3CN20mg/mlを
添加した。
S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜多糖から誘導されたオ
リゴ糖ハプテンを含有する溶液を1NNaOHでpH9に調整
し、密閉アンプル内で、ゆっくりと攪拌しながら、温度
50℃に２週間維持した。一方、N.メニンギチジスの莢膜
多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンを含有する溶液に
ついては、pH8に調整し、密閉アンプル内で、ゆっくり
と攪拌しながら温度37℃に１週間維持した。
反応終了後、10nM NaCl緩衝溶液（pH7.0）で処理したSe
phadex G15を使用して、ゲル−クロマトグラフィーによ
り、オリゴ糖ハプテンを精製した。
Kd≦0.1及び各々、メチルペントース残基、リン及びア
ミノ基についての化学活性又はＮ−アセチル−ノイラミ
ン酸残基及びアミノ基についての化学活性を有するクロ
マトグラフィー流出液を集め、これらを併わせた。
ｂ）アミノ基含有ハプテン誘導体から相当するモノ官能
性エステルへの変化 アミノ基が導入されているオリゴ糖ハプテンを、ジメチ
ルスルホキシド水溶液（80−95％、v/v）に溶解して、
濃度10mg/mlの溶液とした。この溶液を、オリゴ糖ハプ
テンに導入されているアミノ基に対して過剰のモル量で
アジピン酸のジスクシンイミジルエステル（DEA）を含
有する溶液（1:10）に１ないし２時間で滴加した。
溶液を20−25℃に４時間維持することによってエステル
化反応を行った。かかる時間の経過後、エステル化され
たオリゴ糖ハプテンを1,4−ジオキサンを最終濃度90％
（v/v）となるように添加して沈殿させ、つづいて遠心
分離により、反応混合物から分離した。
ついで、Miron−Wilchekにより報告されている方法
（「アナリティカル・バイオケミストリー」126,433−4
35,1982）により、アミノ基が相当する活性エステルに
変化されていることを確認した。
ｃ）エステル化オリゴ糖ハプテンのCRM 197への結合 CRM 197 2mg/mlを含有する水溶液に、S.ニューモニエ
タイプ6Aの莢膜多糖から誘導された活性化オリゴ糖ハ
プテンを含有するジメチルスルホキシド溶液を、該たん
ぱく質に対してモル比10/1で、水中におけるジメチルス
ルホキシドの最終濃度が20％（v/v）となるまで添加し
た。
このようにして得られた混合物を、ゆっくりと攪拌しな
がら、室温（20−25℃）に15時間維持した。この時間の
経過後、N.メニンギチジス グループＣの莢膜から誘導
された活性化オリゴ糖ハプテンを含有する有機溶液をた
んぱく質に10:1のモル比で添加し、得られた混合物を室
温に15時間維持した。
別法によれば、CRM 197含有溶液に、S.ニューモニエ
タイプ6Aの莢膜多糖及びN.メニンギチジス グループＣ
の莢膜多糖から誘導された２つの活性化オリゴ糖ハプテ
ンを同時に添加することによっても結合反応を実施でき
る。
上述の如くして得られた糖たんぱく質結合体を0.2M NaC
l含有する0.01Mリン酸塩緩衝液（pH＝7.0）で処理したS
ephadex G 100カラム（Pharmacia,Uppsala）を使用し
て、ゲル−クロマトグラフィーにより分離した。たんぱ
く質、リン及びシアリン酸に関する化学活性を示す溶出
フラクションを併わせ、気孔率0.22μｍを有するMillip
ore膜を通して濾過した。
このようにして得られた糖たんぱく質結合体の化学分析
では、たんぱく質含量87％（w/w）、タイプ6Aオリゴ糖
ハプテン含量８％（w/w）及びグループＣオリゴ糖ハプ
テン含量５％（w/w）を示した。
これらの値（モルに換算して）は、置換率（たんぱく質
CRM 197 1モル当り）がタイプ6Aのオリゴ糖ハプテンに
関して４モル、グループＣのオリゴ糖ハプテンに関して
２モルであることを表示する。
糖たんぱく質結合体の物質−化学特性については、Laem
uli法（「ネーチャー（Nature）」227,680−685,1970）
に従って、SDS−PAGE及びアクリルアミド傾斜溶離（３
−９％）によって測定した。
たんぱく質CRM 197の異なるエピトープに関するモノク
ロナール抗体の免疫化学特異性を、たんぱく質がCRM 19
7である糖たんぱく質結合体に関して観察されたものと
比較して第１表にしめす。
各々の値（テスト３回から得られた）は、ELISA法を利
用して測定されたものである。
たんぱく質結合体に関するモノクロナール抗体の特異性
割合（％）は、ELISA法においてCRM 197について吸収値
を測定することにより観察された特異性割合を100と仮
定して算出したものである。
第１表から理解されるように、糖たんぱく質結合体のた
んぱく質CRM 197には、たんぱく質の465−535配列に局
在化されたCRM 197の最も重要なエピトープが存在す
る。
このエピトープはジフテリア菌毒素の最も重要な免疫優
性体であり、感受性細胞に対する同一の毒素の細胞性結
合を阻害することによって中和抗体を誘発する。
実施例６ 実施例５で得られた三価免疫原活性を有する糖たんぱく
質結合体によって免疫した動物から得られた血清の免疫
特性 各グループが体重約2kgの家兎10匹でなる２グループ、
体重350gのモルモット10匹でなる１グループに、AlPO4
担体上に吸収させた糖たんぱく質結合体（糖たんぱく質
結合体37.5mg/AlPO41.5mg）を、２回にわけて、皮下注
射により接種した。
各回の容量中には、CRM 197 12.5Lf,S.ニューモニエ
タイプ6Aの莢膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテン4.
8ng及びN.メニンギチジスグループＣの莢膜多糖から誘
導されたオリゴ糖ハプテン3ngが含まれる。
つづいて、第１回目の接種から28日後に、第２回目の接
種を行った。
これら２回の接種の直後及び２回目の接種から11日目に
家兎から血清を採取した。
A.Vollerらの方法（「シャガス病に関する血小板、酵素
結合免疫吸収検定法（Microplate EnzymeLinked Immuno
sorbent Assay for Chagas Disease）」Lancet １,426
（1975））に従い、免疫酵素法（ELISA）によって家兎
の抗血清を分析して、S.ニューモニエ タイプ6Aの莢膜
多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテン及びN.メニンギチ
ジス グループＣの莢膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハ
プテンに特異的な免疫グロブリンIgGの存在を確認した
（第２図）。
Wongの方法（「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ス
タンダード（J.Biol.Stand.）」５,197−215,1977）に
従って、N.メニンギチジスの生菌に関し、家兎抗血清の
殺菌活性を確認した。その結果、糖たんぱく質結合体の
各回の投与直後に殺菌活性が形成されることが確認され
た（第３図）。
モルモットからの抗血清については、米国薬局法に従っ
て、抗ジフテリア菌毒素の含量を測定した。
生物学的分析法において利用するジフテリア菌毒素の滴
定における標準として、ジフテリア菌毒素に関するウマ
抗血清を使用した。第４図に、得られた結果を図示し
た。
いずれの動物においても、免疫前では、特殊な抗体が存
在しないことが確認されている。
オリゴ糖ハプテン又は莢膜多糖のみで対照動物を免疫し
た場合には、上述の精製された化合物による場合のよう
な免疫は見られなかった。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明による糖たんぱく質結合体及び結合前の
たんぱく質CRM 197の電気泳動における挙動を示す図、 第２図ないし第４図は本発明による糖たんぱく質結合体
の各種の免疫学上の特性を証明するグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39:05） (Ａ６１Ｋ 39/116 39:02 39:08） (Ａ６１Ｋ 39/116 39:02 39:10）

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】CRM 197、破傷風トキソイド及び百日咳毒
    素から選ばれるたんぱく質抗原に、共有結合により、グ
    ラム陽性細菌の莢膜多糖から誘導された少なくとも１の
    オリゴ糖ハプテン及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から誘
    導された少なくとも１のオリゴ糖ハプテンを、これらオ
    リゴ糖ハプテンを末端エステル基導入により予備的に活
    性化させた後、結合せしめてなる、三価免疫原活性を有
    する糖たんぱく質結合体。
  2. 【請求項２】特許請求の範囲第１項記載のものにおい
    て、前記グラム陽性細菌の莢膜多糖から誘導されたオリ
    ゴ糖ハプテンが、ストレプトコッカス ニューモニエ
    （Streptococcus pneumoniae）及びストレプトコッカス
    ・ベータ−エモリティカス（Streptococcus β−emolit
    icus）に属する細菌に由来するものの中から選ばれ、前
    記グラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導されるオリゴ糖ハ
    プテンが、ナイセリア・メニンギチジス（Neisseria me
    ningitidis）、ヘモルフィルス・インフルエンゼ（Haem
    ophilus influenzae）、シュードモナス・アエルギノー
    ザ（Pseudomonas aeruginosa）及びエシェリキア・コリ
    （Escherichia coli）に属する細菌に由来するものの中
    から選ばれる三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合
    体。
  3. 【請求項３】特許請求の範囲第１項記載のものにおい
    て、前記たんぱく質抗原がCRM 197であり、前記グラム
    陽性細菌の莢膜多糖から誘導されるオリゴ糖ハプテンが
    ストレプトコッカス・ニューモニエから得られたもので
    あり、前記グラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導されるオ
    リゴ糖ハプテンがナイセリア・メニンギチジスから得ら
    れたものであり、これら３種の成分間のモル比が1/4/2
    である、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体。
  4. 【請求項４】特許請求の範囲第１項ないし第３項のいず
    れか１項に記載のものにおいて、活性化後のオリゴ糖ハ
    プテンが分子量約150を有する、三価免疫原活性を有す
    る糖たんぱく質結合体。
  5. 【請求項５】CRM 197、破傷風トキソイド及び百日咳毒
    素から選ばれるたんぱく質抗原に、共有結合により、グ
    ラム陽性細菌の莢膜多糖から誘導された少なくとも１の
    オリゴ糖ハプテン及びグラム陰性細菌の莢膜多糖から誘
    導された少なくとも１のオリゴ糖ハプテンを、これらオ
    リゴ糖ハプテンを末端エステル基導入により予備的に活
    性化させた後、同時に又は順次結合させることを特徴と
    する、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体の製
    法。
  6. 【請求項６】特許請求の範囲第５項記載の製法におい
    て、前記グラム陽性細菌の莢膜多糖から誘導されたオリ
    ゴ糖ハプテンが、ストレプトコッカス・ニューモニエ及
    びストレプトコッカス・ベータ−エモリティカスに属す
    る細菌に由来するものの中から選ばれ、前記グラム陰性
    細菌の莢膜多糖から誘導されたオリゴ糖ハプテンが、ナ
    イセリア・メニンギチジス、ヘモフィルス・インフルエ
    ンゼ、シュードモナス・アエルギノーザ及びエシェリキ
    ア・コリに属する細菌に由来するものの中から選ばれ
    る、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体の製
    法。
  7. 【請求項７】特許請求の範囲第６項記載の製法におい
    て、前記たんぱく質抗原がCRM 197であり、前記グラム
    陽性細菌の莢膜多糖から誘導されるオリゴ糖ハプテンが
    ストレプトコッカス・ニューモニエから得られたもので
    あり、前記グラム陰性細菌の莢膜多糖から誘導されるオ
    リゴ糖ハプテンがナイセリア・メニンギチジスから得ら
    れたものである、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質
    結合体の製法。
  8. 【請求項８】特許請求の範囲第５項ないし第７項のいず
    れか１項に記載の製法において、前記たんぱく質抗原と
    前記活性化オリゴ糖ハプテンとの間の結合を、液状溶媒
    中、ジメチルスルホキシドの存在下、温度20ないし25
    ℃、反応時間４ないし24時間で、同時に又は順次行な
    う、三価免疫原活性を有する糖たんぱく質結合体の製
    法。
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Families Citing this family (160)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4755381A (en) * 1986-03-27 1988-07-05 Swiss Serum And Vaccine Institute Berne Klebsiella capsular polysaccharide vaccine
US5374426A (en) * 1986-09-03 1994-12-20 University Of Saskatchewan Rotavirus nucleocapsid protein VP6 in vaccine compositions
US5785973A (en) * 1988-02-01 1998-07-28 Praxis Biologics, Inc. Synthetic peptides representing a T-cell epitope as a carrier molecule for conjugate vaccines
US7118757B1 (en) * 1988-12-19 2006-10-10 Wyeth Holdings Corporation Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine
US5153312A (en) * 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CA2059693C (en) * 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
EP0630260B1 (en) * 1991-03-12 2001-01-24 THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Polysaccharide-protein conjugates
US5370872A (en) * 1991-08-12 1994-12-06 Swiss Serum And Vaccine Institute Berne Escherichia coliO-polysaccharide-protein conjugate vaccine
US5371197A (en) * 1991-09-24 1994-12-06 Merck & Co., Inc. Protein-dimeric polysaccharide conjugate vaccine
FR2682388B1 (fr) * 1991-10-10 1995-06-09 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal.
AU685047B2 (en) * 1992-02-11 1998-01-15 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Dual carrier immunogenic construct
IT1262896B (it) * 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
SG47582A1 (en) * 1992-05-07 1998-04-17 American Cyanamid Co Synthetic lipid a glycoconjugate antigens for use in vaccines
US5445817A (en) * 1992-08-21 1995-08-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Pertussis toxin used as a carrier protein with non-charged saccharides in conjugate vaccines
GB9422096D0 (en) * 1994-11-02 1994-12-21 Biocine Spa Combined meningitis vaccine
FR2734484B1 (fr) * 1995-05-24 1997-06-27 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale liquide et procede de fabrication
KR19990007777A (ko) * 1995-06-07 1999-01-25 듀크두플레시스 면역성 및 면역자극성 올리고당 조성물 및 이를 제조하고 이용하는 방법
US5866132A (en) * 1995-06-07 1999-02-02 Alberta Research Council Immunogenic oligosaccharide compositions
US5695768A (en) * 1995-06-07 1997-12-09 Alberta Research Council Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides
US6284884B1 (en) 1995-06-07 2001-09-04 North American Vaccine, Inc. Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof
NZ311000A (en) * 1995-06-07 1999-04-29 Smithkline Beecham Biolog Vaccine comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and a free carrier protein
US20020054884A1 (en) 1995-06-23 2002-05-09 Smithkline Beecham Biologicals, Sa Vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate
PT939647E (pt) * 1996-08-27 2002-04-29 Chiron Corp Glicpconjugados do serogrupo b de neisseria meningitidis e metodos de utilizacao dos mesmos
RU2233172C2 (ru) * 1997-07-17 2004-07-27 Бакстэ Хелскеа С.А. Иммуногенный коньюгат полисахарид h. influenzae - порин менингококка группы b (варианты), способ его получения, фармацевтическая композиция и способ индукции иммунного ответа у животного в отношении h.influenzae
CA2297072A1 (en) * 1997-07-17 1999-01-28 Baxter Healthcare S.A. Immunogenic conjugates comprising a group b meningococcal porin and an h. influenzae polysaccharide
US6709658B1 (en) * 1998-02-12 2004-03-23 Wyeth Holdings Corporation Pneumococcal vaccines formulated with interleukin-12
SE522715C2 (sv) 1998-06-02 2004-03-02 Ericsson Telefon Ab L M Portabel kommunikationsanordning med elektromekaniskt omvandlingsorgan samt ett batteripaket för densamma
WO2000003745A2 (en) 1998-07-15 2000-01-27 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Polysaccharide vaccine for staphylococcal infections
CA2714833A1 (en) * 1998-07-20 2000-02-03 Edward Konadu (Deceased) Vaccines against escherichia coli o157 infection
US6858211B1 (en) * 1998-07-20 2005-02-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vaccines against Escherichia coli O157 infection
RU2130779C1 (ru) * 1998-07-31 1999-05-27 Акционерное общество закрытого типа Научно-производственная компания "Комбиотех Лтд" Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита в, столбняка и дифтерии
RU2130778C1 (ru) * 1998-07-31 1999-05-27 Акционерное общество закрытого типа НПК "Комбиотех Лтд" Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита в, столбняка, дифтерии и коклюша
CN1263510C (zh) * 1998-08-19 2006-07-12 巴克斯特健康护理股份有限公司 多糖－蛋白质缀合物或寡糖－蛋白质缀合物、其制备方法及其应用
US6974581B1 (en) * 1998-12-15 2005-12-13 Aventis Pasteur Limited Multi-component vaccine comprising at least two antigens from haemophilus influenzae to protect against disease
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
US20040096461A1 (en) * 2002-07-30 2004-05-20 Baxter Healthcare Corporation Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines
CA2493124C (en) 2002-08-02 2014-04-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN1809380B (zh) 2002-10-11 2010-05-12 启龙有限公司 广泛防御高毒性脑膜炎球菌谱系的多肽-疫苗
MXPA05004528A (es) 2002-11-01 2005-07-26 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
ES2461350T3 (es) 2003-01-30 2014-05-19 Novartis Ag Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos
GB0313916D0 (en) 2003-06-16 2003-07-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
NZ546430A (en) 2003-10-02 2009-04-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Liquid vaccines for multiple meningococcal serogroups
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
ATE474595T1 (de) 2003-10-02 2010-08-15 Glaxosmithkline Biolog Sa B. pertussis antigene und ihre verwendung bei der vakzinierung
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
US9402915B2 (en) 2004-04-30 2016-08-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Integration of meningococcal conjugate vaccination
GB0502095D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Conjugation of streptococcal capsular saccharides
GB0505996D0 (en) 2005-03-23 2005-04-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Fermentation process
EP2425853A1 (en) 2005-04-08 2012-03-07 Wyeth LLC Multivalent Pneumococcal Polysaccharide-Protein Conjugate Composition
LT2351578T (lt) 2005-06-27 2017-04-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vakcinų gavimo būdas
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
BRPI0620460B8 (pt) 2005-12-22 2021-05-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa uso de composição imunogênica para bebês, e, processo para produzir uma vacina
ES2383209T3 (es) 2006-03-22 2012-06-19 Novartis Ag Regímenes para la inmunización con conjugados meningococicos
GB0612854D0 (en) 2006-06-28 2006-08-09 Novartis Ag Saccharide analysis
EP1872791A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-02 Institut Pasteur Use of bacterial polysaccharides for biofilm inhibition
EA015964B1 (ru) 2006-09-07 2012-01-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина
GB0700136D0 (en) 2007-01-04 2007-02-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Process for manufacturing vaccines
GB0700562D0 (en) 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
DK2129693T3 (en) * 2007-03-23 2017-02-13 Wyeth Llc BRIEF PURIFICATION PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE-Capsule POLYACCHARIDES
EA201490303A1 (ru) 2007-05-02 2014-05-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина
BRPI0813644B8 (pt) 2007-06-26 2021-05-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa composição imunogênica, vacina, processo para fabricar a mesma, e, uso da composição imunogênica ou vacina
GB0713880D0 (en) 2007-07-17 2007-08-29 Novartis Ag Conjugate purification
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
BR122016015627A2 (pt) 2007-10-19 2018-10-30 Novartis Ag kit, composição antigênica liofilizada e método para preparação de uma composição imunogênica
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
EP2886551A3 (en) 2008-02-21 2015-09-23 Novartis AG Meningococcal fhbp polypeptides
CN102264444B (zh) 2008-10-27 2015-08-05 诺华股份有限公司 纯化方法
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
WO2010070453A2 (en) 2008-12-17 2010-06-24 Novartis Ag Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor
US20120064103A1 (en) 2009-03-24 2012-03-15 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates
PL2411048T3 (pl) 2009-03-24 2020-11-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Adjuwantowe meningokokowe białko wiążące czynnik h
NZ612315A (en) 2009-04-14 2014-10-31 Novartis Ag Compositions for immunising against staphylococcus aureus
WO2010141312A2 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Wake Forest University Health Sciences Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same
JP2013502918A (ja) 2009-08-27 2013-01-31 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌ｆＨＢＰ配列を含むハイブリッドポリペプチド
WO2011030218A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Novartis Ag Combination vaccines against respiratory tract diseases
EP2493510B1 (en) 2009-09-30 2020-07-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Conjugation of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides
US20130022639A1 (en) 2009-09-30 2013-01-24 Novartis Ag Expression of meningococcal fhbp polypeptides
GB0917647D0 (en) 2009-10-08 2009-11-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Expression system
BR112012010531A2 (pt) 2009-10-27 2019-09-24 Novartis Ag "polipeptídeos de modificação meningocócica fhbp"
GB0919690D0 (en) 2009-11-10 2009-12-23 Guy S And St Thomas S Nhs Foun compositions for immunising against staphylococcus aureus
US9173954B2 (en) 2009-12-30 2015-11-03 Glaxosmithkline Biologicals Sa Polysaccharide immunogens conjugated to E. coli carrier proteins
GB201003333D0 (en) 2010-02-26 2010-04-14 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
GB201003924D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
EP2544714A1 (en) 2010-03-10 2013-01-16 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine composition
GB201005625D0 (en) 2010-04-01 2010-05-19 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
CA2803239A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding proteins
GB201015132D0 (en) 2010-09-10 2010-10-27 Univ Bristol Vaccine composition
WO2012072769A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Novartis Ag Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations
WO2012085668A2 (en) 2010-12-24 2012-06-28 Novartis Ag Compounds
US20140112950A1 (en) 2011-03-02 2014-04-24 Manmohan Singh Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
GB201106225D0 (en) 2011-04-13 2011-05-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Fermentation process
GB201114923D0 (en) 2011-08-30 2011-10-12 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
WO2013068949A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Novartis Ag Carrier molecule comprising a spr0096 and a spr2021 antigen
GB201121301D0 (en) 2011-12-12 2012-01-25 Novartis Ag Method
AU2011384634A1 (en) 2011-12-29 2014-06-19 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor H binding proteins
CN104519910B (zh) 2012-03-07 2017-05-03 诺华股份有限公司 肺炎链球菌抗原的含佐剂制剂
JP2015509963A (ja) 2012-03-08 2015-04-02 ノバルティス アーゲー Ｔｌｒ４アゴニストを含む混合ワクチン
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
RU2014151567A (ru) 2012-05-22 2016-07-10 Новартис Аг Конъюгат менингококка серогруппы х
EP2892553A1 (en) 2012-09-06 2015-07-15 Novartis AG Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p
CA2885625A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Nonlinear saccharide conjugates
CA2886938A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines
WO2014102265A1 (en) 2012-12-27 2014-07-03 Glycovaxyn Ag Methods and compositions relating to crm197
ITMI20130142A1 (it) * 2013-01-31 2014-08-01 Biosynth Srl Vaccini glicoconiugati comprendenti unita' di base di un costrutto molecolare esprimente epitopi multipli incorporati
TR201807340T4 (tr) 2013-02-01 2018-06-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Çan benzeri reseptör agonistleri içeren immünolojik kompozisyonların intradermal yoldan verilmesi.
CN105007936B (zh) 2013-03-08 2018-10-02 扬森疫苗与预防公司 无细胞百日咳疫苗
RU2662968C2 (ru) 2013-09-08 2018-07-31 Пфайзер Инк. Иммуногенная композиция против neisseria meningitidis (варианты)
CA2940447C (en) 2014-02-28 2023-07-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified meningococcal fhbp polypeptides
ES2672045T3 (es) * 2014-07-25 2018-06-12 Biosynth S.R.L. Vacunas de productos glicoconjugados que comprenden unidades básicas de una construcción molecular que expresa múltiples epítopos incorporados para la formulación de una vacuna de amplio espectro contra infecciones debidas a bacterias enteropatógenas
US9815886B2 (en) 2014-10-28 2017-11-14 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
EP3034516A1 (en) 2014-12-19 2016-06-22 Novartis AG Purification of streptococcal capsular polysaccharide
GB201518684D0 (en) 2015-10-21 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB201610599D0 (en) 2016-06-17 2016-08-03 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic Composition
EP3269385A1 (en) 2016-07-12 2018-01-17 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US11191822B2 (en) 2016-06-22 2021-12-07 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
WO2018042015A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for neisseria gonorrhoeae
EP3530285B1 (en) 2016-10-20 2023-08-09 KM Biologics Co., Ltd. METHOD FOR PRODUCING HIB CONJUGATE VACCINE USING PRP WITH
LOWERED MOLECULAR WEIGHT
BE1025162B9 (fr) 2016-12-06 2019-01-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procede de purification pour les polysaccharides capsulaires
US10183070B2 (en) 2017-01-31 2019-01-22 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
US11400162B2 (en) 2017-02-24 2022-08-02 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
GB201711635D0 (en) 2017-07-19 2017-08-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
AU2018328040B2 (en) 2017-09-07 2025-01-16 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
GB201721582D0 (en) 2017-12-21 2018-02-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa S aureus antigens and immunogenic compositions
GB201721576D0 (en) 2017-12-21 2018-02-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Hla antigens and glycoconjugates thereof
US12018134B2 (en) 2018-07-19 2024-06-25 Glaxosmithkline Biological Sa Processes for preparing dried polysaccharides
EP3607967A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Modified meningococcal fhbp polypeptides
US20220054632A1 (en) 2018-12-12 2022-02-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified carrier proteins for o-linked glycosylation
JP7585203B2 (ja) * 2018-12-12 2024-11-18 ファイザー・インク 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用
EP3923982A1 (en) 2019-02-11 2021-12-22 Pfizer Inc. Neisseria meningitidiscompositions and methods thereof
EP3757217A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Methods for protein purification
EP3777884A1 (en) 2019-08-15 2021-02-17 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic composition
EP4034157A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
EP3799884A1 (en) 2019-10-01 2021-04-07 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic compositions
EP3900739A1 (en) 2020-04-21 2021-10-27 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Synthetic streptococcus pneumoniae saccharide conjugates to conserved membrane protein
EP3919076A1 (en) 2020-06-02 2021-12-08 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Synthetic oligosaccharide vaccines against streptococcus pneumoniae with microparticle adjuvant formulations
CA3185429A1 (en) 2020-06-12 2021-12-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Bacterial immunization using nanoparticle vaccine
BR112022023234A2 (pt) 2020-06-25 2023-01-03 Glaxosmithkline Biologicals Sa Proteínas de exotoxina a modificada
GB202013262D0 (en) 2020-08-25 2020-10-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine Composition
US20230405104A1 (en) 2020-10-20 2023-12-21 Shanghai Reinovax Biologics Co., Ltd Proteoglycan conjugate and application thereof
CN116847879A (zh) 2020-11-13 2023-10-03 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 细菌蛋白载体和缀合方法
WO2023111826A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Bacterial immunization using qbeta hairpin nanoparticle constructs
EP4452308A1 (en) 2021-12-22 2024-10-30 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine
US20250249086A1 (en) 2022-04-11 2025-08-07 Sanofi Pasteur Inc. Protein-Saccharide Conjugation with Sodium Cyanoborohydride
CN116942804A (zh) 2022-04-19 2023-10-27 上海瑞宙生物科技有限公司 多价肺炎球菌多糖结合疫苗的成分及其应用
GB202208089D0 (en) 2022-06-01 2022-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
GB202208093D0 (en) 2022-06-01 2022-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
GB202215414D0 (en) 2022-10-18 2022-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine
GB202302579D0 (en) 2023-02-23 2023-04-12 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
WO2025021710A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
WO2025032534A2 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified proteins
KR20260051063A (ko) 2023-08-09 2026-04-15 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 변형된 단백질
CN118620072A (zh) 2023-12-27 2024-09-10 上海博钒生物科技有限公司 一种肺炎克雷伯菌多糖单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及其应用
WO2025172892A1 (en) 2024-02-16 2025-08-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified proteins and methods

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) * 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4356170A (en) * 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
AU561067B2 (en) * 1982-03-22 1987-04-30 Biocarb Ab Anti-bacterial composition containing an oligosaccharide
US4496538A (en) * 1982-07-06 1985-01-29 Connaught Laboratories, Inc. Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine
US4619828A (en) * 1982-07-06 1986-10-28 Connaught Laboratories, Inc. Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines
US4663160A (en) * 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria

Also Published As

Publication number Publication date
EP0208375B1 (en) 1991-12-11
CA1272952A (en) 1990-08-21
HK192895A (en) 1995-12-29
US4711779A (en) 1987-12-08
DE3682838D1 (de) 1992-01-23
EP0208375A3 (en) 1989-04-05
ATE70187T1 (de) 1991-12-15
JPS6230726A (ja) 1987-02-09
IT8521451A0 (it) 1985-07-05
EP0208375A2 (en) 1987-01-14
CA1272952C (en) 1990-08-21
IT1187753B (it) 1987-12-23

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