JPH0714875B2 - ウイルス阻害医薬組成物 - Google Patents
ウイルス阻害医薬組成物Info
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- JPH0714875B2 JPH0714875B2 JP2232269A JP23226990A JPH0714875B2 JP H0714875 B2 JPH0714875 B2 JP H0714875B2 JP 2232269 A JP2232269 A JP 2232269A JP 23226990 A JP23226990 A JP 23226990A JP H0714875 B2 JPH0714875 B2 JP H0714875B2
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Description
【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明はウイルスの阻害方法に関し、さらに詳しくは、
ミリストイル化酵素のオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁
体基質によつてレトロウイルスのようなウイルスを阻害
する方法に関する。これらは、ペプチドおよび蛋白質の
脂肪酸アシル化に有用な基質である。
ミリストイル化酵素のオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁
体基質によつてレトロウイルスのようなウイルスを阻害
する方法に関する。これらは、ペプチドおよび蛋白質の
脂肪酸アシル化に有用な基質である。
特定の真核生物蛋白質の脂肪酸アシル化は明瞭に確立さ
れた過程であり、便宜的に２つのカテゴリーに分けられ
ている。ひとつは、パルミテート（C16）が、翻訳後、
エステルまたはチオエステル結合を介して、多分ゴルジ
装置内で膜蛋白質に連結するものである。
れた過程であり、便宜的に２つのカテゴリーに分けられ
ている。ひとつは、パルミテート（C16）が、翻訳後、
エステルまたはチオエステル結合を介して、多分ゴルジ
装置内で膜蛋白質に連結するものである。
他方は、ミイステート（C14）が、蛋白質生合成経路の
早い時期にアミド結合を介して、可溶性および膜蛋白質
に共有結合するものとして知られている。Ｎ−ミリスト
イル化蛋白質においては、アミノ末端グリシン残基がア
シ化部位であることが知られている。
早い時期にアミド結合を介して、可溶性および膜蛋白質
に共有結合するものとして知られている。Ｎ−ミリスト
イル化蛋白質においては、アミノ末端グリシン残基がア
シ化部位であることが知られている。
すなわち、多様なウイルスおよび細胞蛋白質が、そのア
ミノ末端におけるグリシンにアミド結合を介して連結す
るミリステートの共有結合付加によつて修飾されること
が明らかにされている。最もよく研究されているミリス
トイル化蛋白質の例としては、ラウス肉腫のウイルスの
形質転換蛋白質（チロシンキナーゼ）,p60v-srcがあ
る。
ミノ末端におけるグリシンにアミド結合を介して連結す
るミリステートの共有結合付加によつて修飾されること
が明らかにされている。最もよく研究されているミリス
トイル化蛋白質の例としては、ラウス肉腫のウイルスの
形質転換蛋白質（チロシンキナーゼ）,p60v-srcがあ
る。
ミリストイル化反応は、次のように表示することができ
る。
る。
上記蛋白質脂肪酸アシル化に関するその他の背景情報と
しては、ワシントン大学医学部に関係する科学者達によ
る以下の一連の文献を参照することができる。
しては、ワシントン大学医学部に関係する科学者達によ
る以下の一連の文献を参照することができる。
Towler ＆ Glaser:Biochemistry,25:878〜884（1986） Towler ＆ Glaser:Proc.Natl.Acad.Sci.USA,83:2812〜2
816（1986） Towlerら:J.Biol.Chem.,262:1030〜1036（1987） Towlerら:Ann.Rev.Biochem.,57:69〜99（1988） ミリストイル化酵素の基質として有用な、比較的短いア
ミノ酸配列を有する独特の合成ペプチドが、米国特許第
4,740,588号に記載されている。このようなペプチドの
例には、 Gly−Asn−Ala−Ala−Ala−Ala−Arg−Argおよび Gly−Asn−Ala−Ala−Ser−Tyr−Arg−Arg がある。
816（1986） Towlerら:J.Biol.Chem.,262:1030〜1036（1987） Towlerら:Ann.Rev.Biochem.,57:69〜99（1988） ミリストイル化酵素の基質として有用な、比較的短いア
ミノ酸配列を有する独特の合成ペプチドが、米国特許第
4,740,588号に記載されている。このようなペプチドの
例には、 Gly−Asn−Ala−Ala−Ala−Ala−Arg−Argおよび Gly−Asn−Ala−Ala−Ser−Tyr−Arg−Arg がある。
ある種の他の独特の合成ペプチドは、米国特許第4,709,
012号に記載されているようにミリストイル化酵素の阻
害剤である。
012号に記載されているようにミリストイル化酵素の阻
害剤である。
本発明はとくに、ヒト免疫不全症ウイルス（HIV）のよ
うなレトロウイルスを阻害する方法に関する。すなわ
ち、これらの脂肪酸類縁体基質は、後天性免疫不全症候
群（AIDS）およびAIDS関連合併症（ARC）の治療に使用
できる可能性がある。
うなレトロウイルスを阻害する方法に関する。すなわ
ち、これらの脂肪酸類縁体基質は、後天性免疫不全症候
群（AIDS）およびAIDS関連合併症（ARC）の治療に使用
できる可能性がある。
わずか数年前までは珍しい疾患であつた後天性免疫不全
症候群は、今や深刻な疾患となつている。その結果、AI
DSを打負かすための薬剤およびワクチンの開発には著し
い努力が払われている。
症候群は、今や深刻な疾患となつている。その結果、AI
DSを打負かすための薬剤およびワクチンの開発には著し
い努力が払われている。
1983年に始めて確認されたAIDSウイルスは様々な名前で
呼ばれている。それは３番目に明らかにされたＴ−リン
パ球ウイルス（HTLV−III）であり、免疫系の細胞内で
複製する能力を有し、それによりT4+T細胞（またはCD4+
細胞）の重大な破壊を招く（Galloら:Science,224:500
〜503,1984およびPopovicら：同誌,497〜500,1984参
照）。このレトロウイルスは、リンフアデノパシー関連
ウイルス（LAV）またはAIDS関連ウイルス（ARV）とも呼
ばれていたが、最も新しい名称はヒト免疫不全症ウイル
ス（HIV）である。AIDSウイルスには２種の異なるウイ
ルス、HIV−１およびHIV−２が報告されている。HIV−
１が1983年にパリのパスツール研究所においてMontagni
erと共同研究者によつて始めて確認されたウイルスであ
り（Ann.Virol.Inst.Pasteur,135E,119〜134,1984）、
一方、HIV−２はもつと最近、1986年にMontagnierと共
同研究者によつて単離された（Nanure,326:662,198
7）。本明細書において用いられるHIVの語は、一般的な
意味でこれらのウイルスを指すことを意味する。
呼ばれている。それは３番目に明らかにされたＴ−リン
パ球ウイルス（HTLV−III）であり、免疫系の細胞内で
複製する能力を有し、それによりT4+T細胞（またはCD4+
細胞）の重大な破壊を招く（Galloら:Science,224:500
〜503,1984およびPopovicら：同誌,497〜500,1984参
照）。このレトロウイルスは、リンフアデノパシー関連
ウイルス（LAV）またはAIDS関連ウイルス（ARV）とも呼
ばれていたが、最も新しい名称はヒト免疫不全症ウイル
ス（HIV）である。AIDSウイルスには２種の異なるウイ
ルス、HIV−１およびHIV−２が報告されている。HIV−
１が1983年にパリのパスツール研究所においてMontagni
erと共同研究者によつて始めて確認されたウイルスであ
り（Ann.Virol.Inst.Pasteur,135E,119〜134,1984）、
一方、HIV−２はもつと最近、1986年にMontagnierと共
同研究者によつて単離された（Nanure,326:662,198
7）。本明細書において用いられるHIVの語は、一般的な
意味でこれらのウイルスを指すことを意味する。
AIDSの分子生物額は解明され、明確にされ始めている
が、この疾患についてはさらに多くのことを学び、理解
する必要がある。一方、抗AIDS薬およびワクチンの可能
性を求めて多くのアプローチが検討されている。AIDSワ
クチンの開発は、HIVに対する保護免疫の機構が不明な
こと、遺伝的変動が大きいこと、およびHIV感染に対す
る有効な動物モデルがないことが足かせになつている
（たとえば、Koff ＆ Hoth:Science,241:426〜434,1988
参照）。
が、この疾患についてはさらに多くのことを学び、理解
する必要がある。一方、抗AIDS薬およびワクチンの可能
性を求めて多くのアプローチが検討されている。AIDSワ
クチンの開発は、HIVに対する保護免疫の機構が不明な
こと、遺伝的変動が大きいこと、およびHIV感染に対す
る有効な動物モデルがないことが足かせになつている
（たとえば、Koff ＆ Hoth:Science,241:426〜434,1988
参照）。
米国食品医薬局（FDA）によつてAIDSの治療用に最初に
承認された薬は、ジドブジンであり、これはアジドチミ
ジン（AZT）の慣用名でも知られている。化学名は３′
−アシド−３′−デオキシチミジンである。これは、ウ
イルスのin vitroでの複製を阻害することから、AIDSに
対する武器としての可能性があるものとして始め選択さ
れた。このようなin vitro試験は、抗AIDS薬の可能性の
初期のスクリーニングおよび試験として有用であり、実
際上唯一の実用的な方法である。しかしながら、AZTの
重大な欠点はその毒性による副作用である。したがつ
て、より優れた抗AIDS薬の研究が続けられている。
承認された薬は、ジドブジンであり、これはアジドチミ
ジン（AZT）の慣用名でも知られている。化学名は３′
−アシド−３′−デオキシチミジンである。これは、ウ
イルスのin vitroでの複製を阻害することから、AIDSに
対する武器としての可能性があるものとして始め選択さ
れた。このようなin vitro試験は、抗AIDS薬の可能性の
初期のスクリーニングおよび試験として有用であり、実
際上唯一の実用的な方法である。しかしながら、AZTの
重大な欠点はその毒性による副作用である。したがつ
て、より優れた抗AIDS薬の研究が続けられている。
発明の簡単な説明 本発明によれば、ミリストイル化酵素に対する脂肪酸類
縁体基質で処置することによるウイルスの阻害方法が提
供される。好ましい抗ウイルス化合物は、蛋白質の脂肪
酸アシル化に有用なオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁体
である。これらは、C13〜C14脂肪酸またはそのアルキル
エステルの脂肪酸鎖中の炭素位置４〜13のいずれかにメ
チレン基に代わつて酸素または硫黄が含まれる。この場
合、カルボキシル炭素原子を１と定義した慣用の命名法
によつている。脂肪酸類縁体の好ましいアルキルエステ
ルは、アルキル基に１〜６個の炭素原子を有する。脂肪
酸は、飽和アルカン酸または不飽和アルケンおよびアル
キン酸から誘導される。
縁体基質で処置することによるウイルスの阻害方法が提
供される。好ましい抗ウイルス化合物は、蛋白質の脂肪
酸アシル化に有用なオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁体
である。これらは、C13〜C14脂肪酸またはそのアルキル
エステルの脂肪酸鎖中の炭素位置４〜13のいずれかにメ
チレン基に代わつて酸素または硫黄が含まれる。この場
合、カルボキシル炭素原子を１と定義した慣用の命名法
によつている。脂肪酸類縁体の好ましいアルキルエステ
ルは、アルキル基に１〜６個の炭素原子を有する。脂肪
酸は、飽和アルカン酸または不飽和アルケンおよびアル
キン酸から誘導される。
これらの脂肪酸類縁体基質化合物はまた、酵素（アシル
トランスフエラーゼ）作用の調整および蛋白質機能にお
けるＮ−ミリストイル化の役割の研究にも有用である。
これらは、酵母、小麦胚溶解物および哺乳類細胞のよう
な起源からのＮ−ミリストイル化酵素に対して合成基質
としても働く。これらの化合物は、ミリスチン酸とほぼ
同じ鎖長が保持されているが、疎水性がミリスチン酸と
異なる。したがつて、ミリストイル蛋白質中に導入され
た場合、それらはアシル蛋白質のその後の膜または他の
蛋白質との相互作用を変えるはずである（Heuckeroth
ら:J.Biol.Chem.,263:2127〜2133,1988）。多くのヘテ
ロ原子置換を有する脂肪酸類縁体基質化合物では、１個
のヘテロ原子置換をもつ相当する類縁体よりも疎水性が
大きく低下するものと考えられている（Heuckerothら:P
roc.Natl.Acad.Sci.USA,85:8795〜8799,1988参照）。ヘ
テロ原子置換脂肪酸類縁体はin vitroでもin vivoで
も、Ｎ−ミリストイルトランスフエラーゼに対する基質
として作用する。これらの結果は、Heuckerothら（Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA,86:5262〜5266,1989）によつて、
たとえばBC3H1のような哺乳類動物細胞で示されてい
る。
トランスフエラーゼ）作用の調整および蛋白質機能にお
けるＮ−ミリストイル化の役割の研究にも有用である。
これらは、酵母、小麦胚溶解物および哺乳類細胞のよう
な起源からのＮ−ミリストイル化酵素に対して合成基質
としても働く。これらの化合物は、ミリスチン酸とほぼ
同じ鎖長が保持されているが、疎水性がミリスチン酸と
異なる。したがつて、ミリストイル蛋白質中に導入され
た場合、それらはアシル蛋白質のその後の膜または他の
蛋白質との相互作用を変えるはずである（Heuckeroth
ら:J.Biol.Chem.,263:2127〜2133,1988）。多くのヘテ
ロ原子置換を有する脂肪酸類縁体基質化合物では、１個
のヘテロ原子置換をもつ相当する類縁体よりも疎水性が
大きく低下するものと考えられている（Heuckerothら:P
roc.Natl.Acad.Sci.USA,85:8795〜8799,1988参照）。ヘ
テロ原子置換脂肪酸類縁体はin vitroでもin vivoで
も、Ｎ−ミリストイルトランスフエラーゼに対する基質
として作用する。これらの結果は、Heuckerothら（Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA,86:5262〜5266,1989）によつて、
たとえばBC3H1のような哺乳類動物細胞で示されてい
る。
本発明の方法に有用な抗ウイルスオキシおよびチオ置換
脂肪酸類縁体基質化合物の例としては、 A. 11−（エチルチオ）ウンデカン酸 CH3CH2S（CH2）10COOH B. 11−（エトキシ）ウンデカン酸 CH3CH2O（CH2）10COOH C. ５−（オクチルチオ）ペンタン酸 CH3（CH2）7S（CH2）4COOH D. 11−（メトキシ）ウンデカン酸 CH3O（CH2）10COOH E. 12−（メトキシ）ウンデカン酸 CH3O（CH2）11COOH F. ５−（オクチルオキシ）ペンタン酸 CH3（CH2）7O（CH2）4COOH G. 10−（プロピルチオ）デカン酸 CH3（CH2）2S（CH2）9COOH H. 10−（プロポキシ）デカノン酸 CH3（CH2）2O（CH2）9COOH I. 11−（１−ブトキシ）ウンデカン酸 CH3（CH2）3O（CH2）10COOH J. 10−（２−プロピノキシ）デカン酸 HC≡C CH2O（CH2）9COOH がある。
脂肪酸類縁体基質化合物の例としては、 A. 11−（エチルチオ）ウンデカン酸 CH3CH2S（CH2）10COOH B. 11−（エトキシ）ウンデカン酸 CH3CH2O（CH2）10COOH C. ５−（オクチルチオ）ペンタン酸 CH3（CH2）7S（CH2）4COOH D. 11−（メトキシ）ウンデカン酸 CH3O（CH2）10COOH E. 12−（メトキシ）ウンデカン酸 CH3O（CH2）11COOH F. ５−（オクチルオキシ）ペンタン酸 CH3（CH2）7O（CH2）4COOH G. 10−（プロピルチオ）デカン酸 CH3（CH2）2S（CH2）9COOH H. 10−（プロポキシ）デカノン酸 CH3（CH2）2O（CH2）9COOH I. 11−（１−ブトキシ）ウンデカン酸 CH3（CH2）3O（CH2）10COOH J. 10−（２−プロピノキシ）デカン酸 HC≡C CH2O（CH2）9COOH がある。
上記の抗ウイルスオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁体基
質化合物には、別の命名法を使用することもできる。た
とえば、化合物Ａは12−チアミリスチン酸、化合物Ｂは
12−オキシミリスチン酸好ましくは12−オキサミリスチ
ン酸、化合物Ｊは11−オキシ−13−インミリスチン酸と
も呼ぶことができる。
質化合物には、別の命名法を使用することもできる。た
とえば、化合物Ａは12−チアミリスチン酸、化合物Ｂは
12−オキシミリスチン酸好ましくは12−オキサミリスチ
ン酸、化合物Ｊは11−オキシ−13−インミリスチン酸と
も呼ぶことができる。
本発明の好ましい態様においては、抗ウイルスオキシお
よびチオ置換脂肪酸類縁体基質化合物は、化合物Ａ〜Ｈ
として上に例示されたように、飽和C13〜C14脂肪酸に基
づくものである。
よびチオ置換脂肪酸類縁体基質化合物は、化合物Ａ〜Ｈ
として上に例示されたように、飽和C13〜C14脂肪酸に基
づくものである。
C16飽和脂肪酸に基づく脂肪酸類縁体である化合物Ｉ
は、C13〜C14脂肪酸に基づく類縁体よりも効果が劣る。
は、C13〜C14脂肪酸に基づく類縁体よりも効果が劣る。
上記化合物Ｊに例示したように、さらに他の態様におい
ては、抗ウイルス脂肪酸類縁体はω−不飽和C14脂肪酸
に基づくものである。この化合物で得られるような結果
は△9,10シスおよび△9,10トランス不飽和脂肪酸に基づ
く脂肪酸類縁体、たとえば12−チアミリストレイン酸お
よび12−オキシミリステライド酸によつても達成でき
る。
ては、抗ウイルス脂肪酸類縁体はω−不飽和C14脂肪酸
に基づくものである。この化合物で得られるような結果
は△9,10シスおよび△9,10トランス不飽和脂肪酸に基づ
く脂肪酸類縁体、たとえば12−チアミリストレイン酸お
よび12−オキシミリステライド酸によつても達成でき
る。
抗ウイルスオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁体基質化合
物の製造は、ウイリアムソン合成による混合エーテルの
製造と類似の方法で実施できる。すなわち、適当なω−
ブロモカルボン酸をアルコラートまたはアルキルチオー
ルと反応させてそれぞれ、オキシ置換脂肪酸エーテルま
たはチオ置換脂肪酸エーテルを製造できる。
物の製造は、ウイリアムソン合成による混合エーテルの
製造と類似の方法で実施できる。すなわち、適当なω−
ブロモカルボン酸をアルコラートまたはアルキルチオー
ルと反応させてそれぞれ、オキシ置換脂肪酸エーテルま
たはチオ置換脂肪酸エーテルを製造できる。
とくに、本発明の方法に有用な化合物は、Pascal ＆ Zi
ering:J.Lipid Res.,27:221〜224（1986）に置換された
ステアリン酸のヘテロ原子置換類縁体の合成と類似の操
作で製造することができる。これらの方法を用い、含硫
類縁体は、適当なアルキルチオールとω−ブロモカルボ
ン酸の、アルコール性塩基の存在下における縮合で製造
できる。これを、上記化合物Ａの製造について例示すれ
ば次の通りである。
ering:J.Lipid Res.,27:221〜224（1986）に置換された
ステアリン酸のヘテロ原子置換類縁体の合成と類似の操
作で製造することができる。これらの方法を用い、含硫
類縁体は、適当なアルキルチオールとω−ブロモカルボ
ン酸の、アルコール性塩基の存在下における縮合で製造
できる。これを、上記化合物Ａの製造について例示すれ
ば次の通りである。
同様に、酸素含有類縁体は、ω−ブロモ酸のアルコール
性塩基との反応で製造できる。これを、上記化合物Ｅの
製造について例示すれば次の通りである。
性塩基との反応で製造できる。これを、上記化合物Ｅの
製造について例示すれば次の通りである。
同様に、酸素含有類縁体は、ω−ブロモ酸とアルコール
性塩基の反応で製造できる。これは、上記化合物Ｅの製
造について、次のように例示できる。
性塩基の反応で製造できる。これは、上記化合物Ｅの製
造について、次のように例示できる。
Br（CH2）11COOH＋CH3OH＋KOH→ CH3O（CH2）11COOH＋KBr＋H2O 本発明の他の抗ウイルスオキシおよびチオ置換脂肪酸類
縁体基質化合物は、反応原料化合物として所望の生成物
の生成に適当なアルキルおよび脂肪酸鎖を選択し、同様
の方法で製造できる。上述のタイプの反応はいずれも、
有機溶媒中、還流温度で、所望の反応が実質的に完了す
るまで行われる。
縁体基質化合物は、反応原料化合物として所望の生成物
の生成に適当なアルキルおよび脂肪酸鎖を選択し、同様
の方法で製造できる。上述のタイプの反応はいずれも、
有機溶媒中、還流温度で、所望の反応が実質的に完了す
るまで行われる。
脂肪酸類縁体の製造は、本明細書では特定の方法のみに
ついて説明するが、本発明の抗ウイルス化合物は特定の
製造方法に限定されるものではないことを理解すべきで
ある。
ついて説明するが、本発明の抗ウイルス化合物は特定の
製造方法に限定されるものではないことを理解すべきで
ある。
本発明の典型的な抗ウイルス化合物、すなわち11−（エ
チルチオ）ウンデカン酸では、脂肪酸鎖へのチオエーテ
ル基の導入により、予期に反してまた驚くべきことに、
その疎水性および関連アシルペプチドおよび脂肪酸アシ
ル蛋白質の疎水性が低下し、しかも酵素、ミリストイル
CoA:蛋白質Ｎ−ミリストイルトランスフエラーゼ（NM
T）の基質として働く能力はそのまま残つていることが
明らかにされた。この酵素の精製および使用について
は、たとえば、Towlerら:Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84:2
708〜2712（1987）:J.Biol.Chem.,262:1030〜1036（198
7）に記載されている。
チルチオ）ウンデカン酸では、脂肪酸鎖へのチオエーテ
ル基の導入により、予期に反してまた驚くべきことに、
その疎水性および関連アシルペプチドおよび脂肪酸アシ
ル蛋白質の疎水性が低下し、しかも酵素、ミリストイル
CoA:蛋白質Ｎ−ミリストイルトランスフエラーゼ（NM
T）の基質として働く能力はそのまま残つていることが
明らかにされた。この酵素の精製および使用について
は、たとえば、Towlerら:Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84:2
708〜2712（1987）:J.Biol.Chem.,262:1030〜1036（198
7）に記載されている。
これらの脂肪酸類縁体によるウイルスの阻害方法は、２
種のレトロウイルス、すなわちヒト免疫不全症ウイルス
−１（HIV−１）およびマロニーマウス白血病ウイルス
（MOMLV）の阻害によつて例示する。これらのウイルス
はいずれも、集合をgagポリ蛋白質前駆体のＮ−ミイス
トイル化に依存している。
種のレトロウイルス、すなわちヒト免疫不全症ウイルス
−１（HIV−１）およびマロニーマウス白血病ウイルス
（MOMLV）の阻害によつて例示する。これらのウイルス
はいずれも、集合をgagポリ蛋白質前駆体のＮ−ミイス
トイル化に依存している。
発明の詳細な説明 本明細書とくに特許請求の範囲には、本発明を形成する
主題が特定的に指摘され、それが明瞭に請求されている
が、添付図面を参照しながら以下の詳細な説明によつ
て、本発明はさらに理解が容易になるものと考えられ
る。
主題が特定的に指摘され、それが明瞭に請求されている
が、添付図面を参照しながら以下の詳細な説明によつ
て、本発明はさらに理解が容易になるものと考えられ
る。
第１図は、酸素および硫黄置換ミリスチン酸誘導体の、
Ｈ−９細胞中HIV−１の複製に対する作用をグラフで表
示してある。パネルＡ−H9細胞はHIV−１で急性感染さ
せ、12−（メトキシ）ドデカン酸（13−オキサミリスチ
ン酸,O13）,10−（プロポキシ）デカン酸（11−オキサ
ミリスチン酸,O11）,5−（オクチルオキシ）ペンタン酸
（６−オキサミリスチン酸o6）もしくは11−（エチルチ
オ）ウンデカン酸（12−チアミリスチン酸,S12）または
ドデカン酸を指示濃度で血清中に含有する培地で８〜10
間処置した。培地は隔日に交換した。これらの化合物の
ウイルス産生に対する作用は、細胞培養上清のサンプル
中の逆転写酵素（RT）活性を測定することによつて決定
した。５μＭのアジドチミジン（AZT）を陽性対照とし
て使用した。陰性対照は、非添加または0.1％エタノー
ルとした。２回の検定結果を平均した。パネルＢ−RT活
性（非処置対照に対するパーセント）およびp24抗原の
存在（ELISAで測定,ng/ml）で測定した13−オキサミリ
スチン酸とHIV−１複製に対する濃度依存性の影響。誤
差のバーは３回の測定値のS.E.M.を示す。パネルＣ−13
−オキサミリスチン酸のシンシチウム形成に対する影響
を、以下の例16の材料および方法の項に記載した任意尺
度を用いて示している。パネルＤ−13−オキサミリスチ
ン酸の毒性を生存細胞数（トリパンブルー排泄）ならび
に〔3H〕チミジンおよび〔3H〕ロイシン標識（以下の例
16の材料および方法の項参照）によつて測定した。これ
らの放射標識化合物の取り込みは、10日間の類縁体処置
後のウエル中に含まれる総細胞集団中で測定した。２回
の測定を行い、結果を平均した。
Ｈ−９細胞中HIV−１の複製に対する作用をグラフで表
示してある。パネルＡ−H9細胞はHIV−１で急性感染さ
せ、12−（メトキシ）ドデカン酸（13−オキサミリスチ
ン酸,O13）,10−（プロポキシ）デカン酸（11−オキサ
ミリスチン酸,O11）,5−（オクチルオキシ）ペンタン酸
（６−オキサミリスチン酸o6）もしくは11−（エチルチ
オ）ウンデカン酸（12−チアミリスチン酸,S12）または
ドデカン酸を指示濃度で血清中に含有する培地で８〜10
間処置した。培地は隔日に交換した。これらの化合物の
ウイルス産生に対する作用は、細胞培養上清のサンプル
中の逆転写酵素（RT）活性を測定することによつて決定
した。５μＭのアジドチミジン（AZT）を陽性対照とし
て使用した。陰性対照は、非添加または0.1％エタノー
ルとした。２回の検定結果を平均した。パネルＢ−RT活
性（非処置対照に対するパーセント）およびp24抗原の
存在（ELISAで測定,ng/ml）で測定した13−オキサミリ
スチン酸とHIV−１複製に対する濃度依存性の影響。誤
差のバーは３回の測定値のS.E.M.を示す。パネルＣ−13
−オキサミリスチン酸のシンシチウム形成に対する影響
を、以下の例16の材料および方法の項に記載した任意尺
度を用いて示している。パネルＤ−13−オキサミリスチ
ン酸の毒性を生存細胞数（トリパンブルー排泄）ならび
に〔3H〕チミジンおよび〔3H〕ロイシン標識（以下の例
16の材料および方法の項参照）によつて測定した。これ
らの放射標識化合物の取り込みは、10日間の類縁体処置
後のウエル中に含まれる総細胞集団中で測定した。２回
の測定を行い、結果を平均した。
第２図は、ミリスチン酸の酸素置換類縁体の、MOMLV複
製に対する作用を示すグラフである。パネルＡ−MOMLV
検定システムの工程図である。ダイアグラムの左側にあ
る円は（ｉ）安定に統合されたMOMLVのパツケージング
変異体pMOV−Ψで、envの５′スプライスアクセプター
部位に350bpの欠失とPr65gagの開始Metコドン（AUG）、
ならびに（ii）これらのパツケージング配列を欠く第２
の統合、組換えDNA配列とSV40プロモーターの下流に大
腸菌lac Z遺伝子を含有するLZ1ウイルス産生細胞を示
す。この細胞は、感染性の、複製欠損ウイルス（LZ1と
命名）を産生し、このウイルスはLac Z遺伝子をもつて
いる。LZ1ウイルス産生細胞からの上清にNIH3T3細胞を
暴露すると、それらはまず感染され、その子孫はβ−ガ
ラクトシダーゼに対する組織化学的染色で検出できる。
すなわち、様々な薬剤で処置したのちLZ1によつて産生
されるウイルスの力価は、青色のNIH3T3細胞数を計数す
ることによつて容易に測定できる。lac Z遺伝子生成物
は存在しないので、この検定システムを用いても複製適
格性のあるMOMLVは検出されない。パネルＢ−６−オキ
サミリスチン酸および13−オキサミリスチン酸のLZ1ウ
イルス産生に対する作用。結果は、３回の独立した試験
について各２回の測定値の平均（＋１標準偏差）として
示す。パネルＣ−類縁体処置２日目の終わりに、トリパ
ンブルー排泄で測定した生存LZ1産生細胞数。２回の測
定結果を平均した。パネルＤ−類縁体処置の〔3H〕ロイ
シン取り込みに対する作用。各２個のウエル中で細胞
を、類縁体またはエタノール（0.1％）と３日間インキ
ユベーシヨンとしたのち、４時間パルス標識した。測定
を２回実施した。結果を平均し、非処置細胞について得
られた結果に対するパーセントで表した。
製に対する作用を示すグラフである。パネルＡ−MOMLV
検定システムの工程図である。ダイアグラムの左側にあ
る円は（ｉ）安定に統合されたMOMLVのパツケージング
変異体pMOV−Ψで、envの５′スプライスアクセプター
部位に350bpの欠失とPr65gagの開始Metコドン（AUG）、
ならびに（ii）これらのパツケージング配列を欠く第２
の統合、組換えDNA配列とSV40プロモーターの下流に大
腸菌lac Z遺伝子を含有するLZ1ウイルス産生細胞を示
す。この細胞は、感染性の、複製欠損ウイルス（LZ1と
命名）を産生し、このウイルスはLac Z遺伝子をもつて
いる。LZ1ウイルス産生細胞からの上清にNIH3T3細胞を
暴露すると、それらはまず感染され、その子孫はβ−ガ
ラクトシダーゼに対する組織化学的染色で検出できる。
すなわち、様々な薬剤で処置したのちLZ1によつて産生
されるウイルスの力価は、青色のNIH3T3細胞数を計数す
ることによつて容易に測定できる。lac Z遺伝子生成物
は存在しないので、この検定システムを用いても複製適
格性のあるMOMLVは検出されない。パネルＢ−６−オキ
サミリスチン酸および13−オキサミリスチン酸のLZ1ウ
イルス産生に対する作用。結果は、３回の独立した試験
について各２回の測定値の平均（＋１標準偏差）として
示す。パネルＣ−類縁体処置２日目の終わりに、トリパ
ンブルー排泄で測定した生存LZ1産生細胞数。２回の測
定結果を平均した。パネルＤ−類縁体処置の〔3H〕ロイ
シン取り込みに対する作用。各２個のウエル中で細胞
を、類縁体またはエタノール（0.1％）と３日間インキ
ユベーシヨンとしたのち、４時間パルス標識した。測定
を２回実施した。結果を平均し、非処置細胞について得
られた結果に対するパーセントで表した。
本発明を以下の実施例１〜11により、合成および本発明
の代表的化合物の抗ウイルス剤としての試験によつて、
さらに詳細に例示する。
の代表的化合物の抗ウイルス剤としての試験によつて、
さらに詳細に例示する。
例１ 11−（エチルチオ）ウンデカン酸の合成 エタンチオール（0.279ml,3.77mmol,Aldrich）および水
酸化カリウム（0.486g,8.66mmol）の無水エタノール（4
0ml）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（1g,3.77mmol,A
ldrich）を加え、窒素気相下に５時間還流した。冷却
し、HClで酸性にしたのち、溶媒を減圧下に除去すると
白色の固体が得られた。固体を酢酸エチルに溶解し、水
で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過
し、溶媒を減圧下に除去した。生成物をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーにより、溶出にはヘキサン中酢酸
エチルを増加させていく濃度勾配を用いて精製した。生
成物は、25％酢酸エチル／ヘキサンで溶出した。溶媒を
減圧下に除去すると、11−（エチルチオ）ウンデカン酸
（76mg,8％）が得られた。融点58〜61℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.24（t,3H,J＝7.4,CH3）,1.
20〜1.40（bm,12H,メチレンエンベロープ）,1.48〜1.67
（bm,4H,S−CH2−CH2 COO−CH2 CH2 ）,2.33（t,2H,J＝
7.5,CH2 −COOH）,2.49（t,2H,J＝7.4,S−CH2 −CH2）,2.
51（q,2H,J＝7.4,S−CH2 CH3）,10.5（br,1H,COOH）,13C
NMR（75.4MHz,CDCl3）δ14.88,24.70,25.98,28.97,29.
08,29.24＊,29.38,29.48,29.69,31.73,34.11,180.05;M
S,m/z246（M+,50）,217（COOH（CH2）10S+,7）,199（10
0）,181（７）,167（７）,149（６）,117（７）,101
（９）,97（９）,87（14）,83（18）,75（54）,69（2
9）,62（18）,55（37） 例２ 11−（エトキシ）ウンデカン酸の合成 水酸化カリウム（2.15g,38.3mmol）の無水エタノール
（20ml）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（2.25g,8.47
mmol）を加え、７時間還流した。冷却してHClで酸性に
したのち、溶媒を減圧下に除去すると白色の固体が得ら
れた。このサンプルを酢酸エチルに溶解し、水で抽出し
た。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を減圧下
に除去した。生成物を、１％ジエチルエーテル/0.3％ギ
酸／メチレンクロリド中リシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイーによつて精製した。溶媒を減圧下に除去する
と、11−（エトキシ）ウンデカン酸（680mg,35％）が得
られた。
酸化カリウム（0.486g,8.66mmol）の無水エタノール（4
0ml）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（1g,3.77mmol,A
ldrich）を加え、窒素気相下に５時間還流した。冷却
し、HClで酸性にしたのち、溶媒を減圧下に除去すると
白色の固体が得られた。固体を酢酸エチルに溶解し、水
で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過
し、溶媒を減圧下に除去した。生成物をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーにより、溶出にはヘキサン中酢酸
エチルを増加させていく濃度勾配を用いて精製した。生
成物は、25％酢酸エチル／ヘキサンで溶出した。溶媒を
減圧下に除去すると、11−（エチルチオ）ウンデカン酸
（76mg,8％）が得られた。融点58〜61℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.24（t,3H,J＝7.4,CH3）,1.
20〜1.40（bm,12H,メチレンエンベロープ）,1.48〜1.67
（bm,4H,S−CH2−CH2 COO−CH2 CH2 ）,2.33（t,2H,J＝
7.5,CH2 −COOH）,2.49（t,2H,J＝7.4,S−CH2 −CH2）,2.
51（q,2H,J＝7.4,S−CH2 CH3）,10.5（br,1H,COOH）,13C
NMR（75.4MHz,CDCl3）δ14.88,24.70,25.98,28.97,29.
08,29.24＊,29.38,29.48,29.69,31.73,34.11,180.05;M
S,m/z246（M+,50）,217（COOH（CH2）10S+,7）,199（10
0）,181（７）,167（７）,149（６）,117（７）,101
（９）,97（９）,87（14）,83（18）,75（54）,69（2
9）,62（18）,55（37） 例２ 11−（エトキシ）ウンデカン酸の合成 水酸化カリウム（2.15g,38.3mmol）の無水エタノール
（20ml）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（2.25g,8.47
mmol）を加え、７時間還流した。冷却してHClで酸性に
したのち、溶媒を減圧下に除去すると白色の固体が得ら
れた。このサンプルを酢酸エチルに溶解し、水で抽出し
た。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を減圧下
に除去した。生成物を、１％ジエチルエーテル/0.3％ギ
酸／メチレンクロリド中リシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイーによつて精製した。溶媒を減圧下に除去する
と、11−（エトキシ）ウンデカン酸（680mg,35％）が得
られた。
融点44〜45.5℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.20（t,3H,J＝7.0,CH3）,1.
24〜1.40（bm,12H,メチレンエンベロープ）,1.52〜1.68
（bm,4H,O−CH2−CH2 ；CH2 −CH2−COOH）,2.34（t,2H,J
＝7.5,CH2 −COOH）,3.41（t,2H,J＝6.8,O−CH2 −CH2）,
3.48（q,2H,J＝7.0,O−CH2 −CH3）,10.25（br,1H,COO
H）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ15.27,24.75,26.23,2
9.11,29.26,29.40,29.55＊,29.80,34.12,66.06,70.76,1
79.71;m/z231（Ｍ＋H+） 例３ A. ６−チオテトラデカン酸メチルエステルの合成 オクタンチオール（1;2.9g,19.8mmol）の乾燥THF（198m
l）溶液に０℃でｎ−ブチルリチウム（8.3ml,22.1mmo
l）を滴下した。０℃で40分間撹拌したのち、５−ブロ
モペンタン酸メチルエステル（2;4.2g,21.6mmol）の乾
燥THF（43ml）溶液を滴下し、生成した不均一な混合物
を室温で一夜撹拌した。この混合物を濃縮し、残留物を
エーテルと飽和NH4Clに分配した。水層をエーテルでも
う一度抽出し、有機抽出液を合わせて、食塩水で洗浄
し、乾燥し（MgSO4），濃縮した。減圧蒸溜（140〜145
℃/2mmol）で精製すると標記生成物4.4g（86％）が得ら
れた。1 H NMRデータ，δ3.63（s,3H,OCH3）;2.48（q,4H,J＝6.
8Hz,CH2−Ｓ−CH2）;2.30（t,J−7.0Hz,CH2CO2CH3）;1.
78〜1.48（bm,6H,チオおよびエステル基に対するβ−メ
チレン）;1.43〜1.15（bs,10H,CH2）;0.85（t,J＝6.6H
z,CH3）;13C−NMRデータ：δ173.7,51.4,33.5,32.1,31.
7,31.6,29.6,29.1（２）,29.0,28.8,24.1,22.5,14.0 B. ５−（オクチルチオ）ペンタン酸の合成 ６−チオテトラデカン酸メチルエステル（4.25g,16.3mm
ol）の乾燥メタノール（55ml）中溶液にNaOH（1.24g,3
1.0mmol）を加え、生成した混合物を還流させた。５時
間後、反応混合物を室温に冷却し、100mlの水で希釈
し、1M HClでpH3の酸性にした。この酸性化溶液をエー
テル（2X）で抽出し、有機抽出液を合わせて、水（2
X）、食塩水（2X）で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、濃縮し
た。カラムクロマトグラフイー（酢酸エチル−ペンタ
ン,1:9）で残留物を精製すると、生成物1.4g,35％が得
られた。1 H−NMRデータ，δ2.46（q,4H,J＝7.6Hz,CH2SCH2）;2.3
3（t,2H,J＝7.2Hz,CH2CO2H）;1.75〜1.45（bm,6H,チオ
および酸基に対するβ−CH2）;1.38〜1.15（bs,10H,C
H2）;0.83（t,3H,J＝6.6Hz,CH3）;13C−NMRデータ,179.
4,33.5,32.1,31.8,31.6,29.7,29.1（２）,28.9（２）,2
3.8,22.6,14.0;m/z（E1）:246,145（100％）,115,101,8
8,69 例４ 11−（メトキシ）ウンデカン酸の合成 水酸化カリウム（24.3g,433mmol）のメタノール（280m
l）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（10.0g,37.7mmo
l）を加え、５時間還流した。冷却してHClで酸性にした
のち、溶媒を減圧下に除去した。サンプルを酢酸エチル
に溶解し、水で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で
乾燥し、溶媒を減圧下に除去した。生成物をシリカカラ
ムクロマトグラフイーにより、溶出にはヘキサン中酢酸
エチルを増加させていく濃度勾配を用いて、精製した。
生成物はヘキサン中25％酢酸エチルで溶出した。溶媒を
減圧下に除去すると、11−（メトキシ）ウンデカン酸
（200mg,2.5％）が得られた。融点31〜32℃1 H−NMR（300MHz,CDCl3）δ1.1〜1.3（bm,12H,メチレン
エンベロープ）,1.45〜1.63（bm,4H,O−CH2−CH2 ，CH2
−CH2−COOH）,2.34（t,2H,J＝7.3,CH2 −CCH）,3.45
（s,3H,CH3 ）,3.50（t,2H,J＝6.8,O−CH2 ）,10,70（br,
COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ24.64,26.00,29.0
0,29.16,29.29,29.40,34.00,58.23,72.81,179.17;m/z21
6（M+） 例５ 12−（メトキシ）ドデカン酸の合成 水酸化カリウム（1.61g,28.65mmol）のメタノール（30m
l）中溶液に、12−ブロモドデカン酸（2.0g,7.16mol）
を加え、20時間還流した。冷却してHClで酸性にしたの
ち、溶媒を減圧下に除去した。サンプルを酢酸エチルに
溶解し、水で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥
し、溶媒を減圧下に除去した。生成物を１％ジエチルエ
ーテル/0.3％ギ酸／メチレンクロリド中シリカカラムク
ロマトグラフイーで精製すると、12−（メトキシ）ドデ
カン酸（640mg,39％）が得らてた。融点45〜47℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.20〜1.45（bm,15H,メチレ
ンエンベロープ）,1.51〜1.69（bm,4H,O−CH2−CH2 ，CH
2 −CH2−COOH）,2.34（t,2H,J＝7.4,CH2 −COOH）,3.34
（s,3H,O−CH3）,3.38（t,2H,J＝6.7,O−CH2 ）,10.99
（br,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ24.75,26.
16,29.10,29.27,29.38,29.44,29.53,34.12,58.50,72.9
7,179.70;m/z231（Ｍ＋H+） 例６ ５−（オクチルオキシ）ペンタン酸の合成 水酸化カリウム（2.48g,44.2mmol）の１−オクタノール
（20ml）中溶液に５−ブロモペンタン酸（2g,11.0mmo
l）を加え、97℃で27時間撹拌した。冷却後、生成物をp
H＝１において、酢酸エチルと水で抽出した。有機相を
硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去した。１−オクタ
ノールを短絡（Kugelrohr）蒸留（50〜70℃,0.5mmHg）
で除去した。オクチルエステルの完全な切断を確実にす
るため、残留物をメタノール／水/KOH（50％/50％/2.5
g,40ml）と25℃で３時間撹拌した。１−オクタノールは
pH＝12で酢酸エチル中に抽出された。５−（オクチルオ
キシ）ペンタン酸は、HClでpHを1.5に調整すると水から
酢酸エチル中に抽出された。硫酸ナトリウム上で乾燥し
たのち、溶媒を減圧下に除去した。10％酢酸エチル／ヘ
キサン/0.3％ギ酸中シリカカラムクロマトグラフイーに
付すと、５−（オクチルオキシ）ペンタン酸（235mg,9
％）が得られた。融点＜30℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ0.88（t,3H,J＝6.6）,1.18〜
1.39（bm,10H,メチレンエンベロープ）,1.48〜1.77（b
m,6H,CH2 CH2OCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.39（t,2H,J＝7.
1,CH2 COOH）,3.34〜3.49（bm,4H,CH2 OCH2 ）,10.66（br,
1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）14.18,21.59,22.7
3,26.22,29.03,29.32,29.51,29.72,31.89,33.85,70,22,
71.07,179.55;m/z231（Ｍ＋Ｈ） 例７ 10−（プロピルチオ）デカン酸の合成 水酸化カリウム（0.893g,15.9mmol）の１−プロパンチ
オール（30ml）およびメタノール（30ml）中溶液に10−
ブロモデカン酸（1.0g,3.98mmol）を加え、69℃で18時
間撹拌した。反応混合物に水を20mlを加えたのち室温ま
で放冷した。pH＝１の酸性にして酢酸エチルに抽出し、
有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に除去
すると、白色の結晶性粉末が得られた。生成物を８％酢
酸エチル／ヘキサン/0.3％ギ酸中シリカカラムクロマト
グラフイーに付し、ついでヘキサンから再結晶して精製
すると、10−（プロピルチオ）デカン酸（210mg,21％）
が得られた。融点42〜43.5℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ0.96（t,3H,J＝7.3,CH3 ,1.15
〜1.40（bm,10H,メチレンエンベロープ）,1.49〜1.64
（bm,6H,CH3 CH2 CH2SCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.32（t,2H,
J＝7.6,CH2 COOH）,2.40〜2.55（bm,4H,CH3CH2 CH2 SC
H2 ）,10.93（Br,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）
δ13.64,23.09,24.71,28.96,29.07,29.13,29.24,29.36,
29.77,32.16,34.10,、34.28,179.98;m/z247（Ｍ＋Ｈ） 例８ 10−（プロポキシ）デカン酸の合成 水酸化カリウム（0.893g,15.9mmol）のｎ−プロパノー
ル（30ml）中溶液に、10−ブロモデカン酸（1g,3.98mmo
l）を加え、102℃で18時間撹拌した。水20mlを加えたの
ち、反応混合物を室温まで放冷した。pH＝１の酸性にし
たのち、酢酸エチルに抽出し、有機相を硫酸マグネシウ
ム上で乾燥し、溶媒を減圧下に除去すると、黄色の油状
物が得られた。生成物を、２％ジエチルエーテル／メチ
レンクロリド/0.2％ギ酸中、ついで７％酢酸エチル／ヘ
キサン/0.3％ギ酸中、シリカカラムクロマトグラフイー
によつて精製した。ヘキサンから−20℃で再結晶する
と、10−（プロポキシ）デカン酸（74mg,12％）が得ら
れた。融点＜30℃1 H NMR（300MNz,CDCl3）δ0.91（t,3H,J＝7.5,CH3 ）,1.
18〜1.40（br,10H,メチレンエンベロープ）,1.48〜1.67
（bm,6H,CH3 CH2 CH2OCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.33（t,2H,
J＝7.4,CH2 COOH）,3.31〜3.45（bm,4H,CH2 OCH2 ）,10.37
（br,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）10.67,22.9
4,24.72,26.19,29.09,29.22,29.41,29.74,34.11,70.88,
72.53,179.69;m/z231（Ｍ＋Ｈ） 例９ 11−（１−ブトキシ）ウンデカン酸の合成 水酸化カリウム（1.7g,30.2mmol）の１ブタノール（20m
l）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（2g,17.5mmol）を
加え、この溶液を40℃で５時間撹拌した。冷却後、反応
混合物をpH＝２において酢酸エチルおよび水で抽出し
た。ついで有機相を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、溶媒を減圧下に除去した。生成物を２〜10
％酢酸エチル／ヘキサン/0.2％ギ酸中シリカカラムクロ
マトグラフイーによつて精製すると、11−（１−ブトキ
シ）ウンデカン酸（336mg,17％）が得られた。融点29〜
30.5℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ0.84〜0.96（t,3H,J＝7.3,CH
3 ）,1.18〜1.46（bm,14H,メチレンエンベロープ）,1.47
〜1.68（bm,6H,CH2 CH2OCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.31（t,
2H,CH2 COOH）,3.32〜3.46（bm,4H,CH2 OCH2 ）,11.02（b
r,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ14.02,19.43,
24.74,26.21,29.11,29.28,29.35,29.56,29.64,29.76,3
1.85,34.14,70,63,70.94,179.82;m/z259（Ｍ＋Ｈ） 例10 10−（２−プロピンオキシ）デカン酸の合成 プロパルギルアルコール（68ml,1.17mol）に４℃で水素
化ナトリウム（420mg,8.75mmol）を加え、25℃で30分間
撹拌した。この混合物に10−ブロモデカン酸（2g,7.96m
mol）を加え、反応混合物を98℃で48時間撹拌した。反
応混合物をpH＝１において水および酢酸エチルで抽出し
た。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥したのち、溶媒を
減圧下に除去した。生成物を７〜10％酢酸エチル／ヘキ
サン/0.3％ギ酸中シリカゲルクロマトグラフイー、つい
で１〜2.5％酢酸エチル／ベンゼン/0.3％ギ酸中シリカ
ゲルカラムで精製すると、10−（２−プロピンオキシ）
デカン酸（245mg,14％）が得られた。融点＜30℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.25〜1.42（br,10H,メチレ
ンエンベロープ）,1.54〜1.70（bm,4H,OCH2 CH2 ，CH2 CH2
COOH）,2.35（t,2H,J＝7.4,CH2 COOH）,2.43（t,1H,J＝
2.3,HC＝Ｃ）,3.52（t,2H,J＝6.8,OCH2 ）,4.14（d,2H,J
＝2.5,C＝CCH2 O）,10.42（br,1H,COOH）;13C NMR（75.4
MNz,CDCl3）δ24.68,26.06,29.04,29.17,29.35＊,29.4
6,34.09,57.95,70.22,74.09,79.90,180.02;m/z227（Ｍ
＋Ｈ） 以下の実施例は、これらの脂肪酸縁体基質の、２種のレ
トロウイルス、すなわちHIV−１およびMOMLVに対する抗
ウイルス活性を例示する。
24〜1.40（bm,12H,メチレンエンベロープ）,1.52〜1.68
（bm,4H,O−CH2−CH2 ；CH2 −CH2−COOH）,2.34（t,2H,J
＝7.5,CH2 −COOH）,3.41（t,2H,J＝6.8,O−CH2 −CH2）,
3.48（q,2H,J＝7.0,O−CH2 −CH3）,10.25（br,1H,COO
H）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ15.27,24.75,26.23,2
9.11,29.26,29.40,29.55＊,29.80,34.12,66.06,70.76,1
79.71;m/z231（Ｍ＋H+） 例３ A. ６−チオテトラデカン酸メチルエステルの合成 オクタンチオール（1;2.9g,19.8mmol）の乾燥THF（198m
l）溶液に０℃でｎ−ブチルリチウム（8.3ml,22.1mmo
l）を滴下した。０℃で40分間撹拌したのち、５−ブロ
モペンタン酸メチルエステル（2;4.2g,21.6mmol）の乾
燥THF（43ml）溶液を滴下し、生成した不均一な混合物
を室温で一夜撹拌した。この混合物を濃縮し、残留物を
エーテルと飽和NH4Clに分配した。水層をエーテルでも
う一度抽出し、有機抽出液を合わせて、食塩水で洗浄
し、乾燥し（MgSO4），濃縮した。減圧蒸溜（140〜145
℃/2mmol）で精製すると標記生成物4.4g（86％）が得ら
れた。1 H NMRデータ，δ3.63（s,3H,OCH3）;2.48（q,4H,J＝6.
8Hz,CH2−Ｓ−CH2）;2.30（t,J−7.0Hz,CH2CO2CH3）;1.
78〜1.48（bm,6H,チオおよびエステル基に対するβ−メ
チレン）;1.43〜1.15（bs,10H,CH2）;0.85（t,J＝6.6H
z,CH3）;13C−NMRデータ：δ173.7,51.4,33.5,32.1,31.
7,31.6,29.6,29.1（２）,29.0,28.8,24.1,22.5,14.0 B. ５−（オクチルチオ）ペンタン酸の合成 ６−チオテトラデカン酸メチルエステル（4.25g,16.3mm
ol）の乾燥メタノール（55ml）中溶液にNaOH（1.24g,3
1.0mmol）を加え、生成した混合物を還流させた。５時
間後、反応混合物を室温に冷却し、100mlの水で希釈
し、1M HClでpH3の酸性にした。この酸性化溶液をエー
テル（2X）で抽出し、有機抽出液を合わせて、水（2
X）、食塩水（2X）で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、濃縮し
た。カラムクロマトグラフイー（酢酸エチル−ペンタ
ン,1:9）で残留物を精製すると、生成物1.4g,35％が得
られた。1 H−NMRデータ，δ2.46（q,4H,J＝7.6Hz,CH2SCH2）;2.3
3（t,2H,J＝7.2Hz,CH2CO2H）;1.75〜1.45（bm,6H,チオ
および酸基に対するβ−CH2）;1.38〜1.15（bs,10H,C
H2）;0.83（t,3H,J＝6.6Hz,CH3）;13C−NMRデータ,179.
4,33.5,32.1,31.8,31.6,29.7,29.1（２）,28.9（２）,2
3.8,22.6,14.0;m/z（E1）:246,145（100％）,115,101,8
8,69 例４ 11−（メトキシ）ウンデカン酸の合成 水酸化カリウム（24.3g,433mmol）のメタノール（280m
l）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（10.0g,37.7mmo
l）を加え、５時間還流した。冷却してHClで酸性にした
のち、溶媒を減圧下に除去した。サンプルを酢酸エチル
に溶解し、水で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で
乾燥し、溶媒を減圧下に除去した。生成物をシリカカラ
ムクロマトグラフイーにより、溶出にはヘキサン中酢酸
エチルを増加させていく濃度勾配を用いて、精製した。
生成物はヘキサン中25％酢酸エチルで溶出した。溶媒を
減圧下に除去すると、11−（メトキシ）ウンデカン酸
（200mg,2.5％）が得られた。融点31〜32℃1 H−NMR（300MHz,CDCl3）δ1.1〜1.3（bm,12H,メチレン
エンベロープ）,1.45〜1.63（bm,4H,O−CH2−CH2 ，CH2
−CH2−COOH）,2.34（t,2H,J＝7.3,CH2 −CCH）,3.45
（s,3H,CH3 ）,3.50（t,2H,J＝6.8,O−CH2 ）,10,70（br,
COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ24.64,26.00,29.0
0,29.16,29.29,29.40,34.00,58.23,72.81,179.17;m/z21
6（M+） 例５ 12−（メトキシ）ドデカン酸の合成 水酸化カリウム（1.61g,28.65mmol）のメタノール（30m
l）中溶液に、12−ブロモドデカン酸（2.0g,7.16mol）
を加え、20時間還流した。冷却してHClで酸性にしたの
ち、溶媒を減圧下に除去した。サンプルを酢酸エチルに
溶解し、水で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥
し、溶媒を減圧下に除去した。生成物を１％ジエチルエ
ーテル/0.3％ギ酸／メチレンクロリド中シリカカラムク
ロマトグラフイーで精製すると、12−（メトキシ）ドデ
カン酸（640mg,39％）が得らてた。融点45〜47℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.20〜1.45（bm,15H,メチレ
ンエンベロープ）,1.51〜1.69（bm,4H,O−CH2−CH2 ，CH
2 −CH2−COOH）,2.34（t,2H,J＝7.4,CH2 −COOH）,3.34
（s,3H,O−CH3）,3.38（t,2H,J＝6.7,O−CH2 ）,10.99
（br,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ24.75,26.
16,29.10,29.27,29.38,29.44,29.53,34.12,58.50,72.9
7,179.70;m/z231（Ｍ＋H+） 例６ ５−（オクチルオキシ）ペンタン酸の合成 水酸化カリウム（2.48g,44.2mmol）の１−オクタノール
（20ml）中溶液に５−ブロモペンタン酸（2g,11.0mmo
l）を加え、97℃で27時間撹拌した。冷却後、生成物をp
H＝１において、酢酸エチルと水で抽出した。有機相を
硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去した。１−オクタ
ノールを短絡（Kugelrohr）蒸留（50〜70℃,0.5mmHg）
で除去した。オクチルエステルの完全な切断を確実にす
るため、残留物をメタノール／水/KOH（50％/50％/2.5
g,40ml）と25℃で３時間撹拌した。１−オクタノールは
pH＝12で酢酸エチル中に抽出された。５−（オクチルオ
キシ）ペンタン酸は、HClでpHを1.5に調整すると水から
酢酸エチル中に抽出された。硫酸ナトリウム上で乾燥し
たのち、溶媒を減圧下に除去した。10％酢酸エチル／ヘ
キサン/0.3％ギ酸中シリカカラムクロマトグラフイーに
付すと、５−（オクチルオキシ）ペンタン酸（235mg,9
％）が得られた。融点＜30℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ0.88（t,3H,J＝6.6）,1.18〜
1.39（bm,10H,メチレンエンベロープ）,1.48〜1.77（b
m,6H,CH2 CH2OCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.39（t,2H,J＝7.
1,CH2 COOH）,3.34〜3.49（bm,4H,CH2 OCH2 ）,10.66（br,
1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）14.18,21.59,22.7
3,26.22,29.03,29.32,29.51,29.72,31.89,33.85,70,22,
71.07,179.55;m/z231（Ｍ＋Ｈ） 例７ 10−（プロピルチオ）デカン酸の合成 水酸化カリウム（0.893g,15.9mmol）の１−プロパンチ
オール（30ml）およびメタノール（30ml）中溶液に10−
ブロモデカン酸（1.0g,3.98mmol）を加え、69℃で18時
間撹拌した。反応混合物に水を20mlを加えたのち室温ま
で放冷した。pH＝１の酸性にして酢酸エチルに抽出し、
有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に除去
すると、白色の結晶性粉末が得られた。生成物を８％酢
酸エチル／ヘキサン/0.3％ギ酸中シリカカラムクロマト
グラフイーに付し、ついでヘキサンから再結晶して精製
すると、10−（プロピルチオ）デカン酸（210mg,21％）
が得られた。融点42〜43.5℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ0.96（t,3H,J＝7.3,CH3 ,1.15
〜1.40（bm,10H,メチレンエンベロープ）,1.49〜1.64
（bm,6H,CH3 CH2 CH2SCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.32（t,2H,
J＝7.6,CH2 COOH）,2.40〜2.55（bm,4H,CH3CH2 CH2 SC
H2 ）,10.93（Br,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）
δ13.64,23.09,24.71,28.96,29.07,29.13,29.24,29.36,
29.77,32.16,34.10,、34.28,179.98;m/z247（Ｍ＋Ｈ） 例８ 10−（プロポキシ）デカン酸の合成 水酸化カリウム（0.893g,15.9mmol）のｎ−プロパノー
ル（30ml）中溶液に、10−ブロモデカン酸（1g,3.98mmo
l）を加え、102℃で18時間撹拌した。水20mlを加えたの
ち、反応混合物を室温まで放冷した。pH＝１の酸性にし
たのち、酢酸エチルに抽出し、有機相を硫酸マグネシウ
ム上で乾燥し、溶媒を減圧下に除去すると、黄色の油状
物が得られた。生成物を、２％ジエチルエーテル／メチ
レンクロリド/0.2％ギ酸中、ついで７％酢酸エチル／ヘ
キサン/0.3％ギ酸中、シリカカラムクロマトグラフイー
によつて精製した。ヘキサンから−20℃で再結晶する
と、10−（プロポキシ）デカン酸（74mg,12％）が得ら
れた。融点＜30℃1 H NMR（300MNz,CDCl3）δ0.91（t,3H,J＝7.5,CH3 ）,1.
18〜1.40（br,10H,メチレンエンベロープ）,1.48〜1.67
（bm,6H,CH3 CH2 CH2OCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.33（t,2H,
J＝7.4,CH2 COOH）,3.31〜3.45（bm,4H,CH2 OCH2 ）,10.37
（br,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）10.67,22.9
4,24.72,26.19,29.09,29.22,29.41,29.74,34.11,70.88,
72.53,179.69;m/z231（Ｍ＋Ｈ） 例９ 11−（１−ブトキシ）ウンデカン酸の合成 水酸化カリウム（1.7g,30.2mmol）の１ブタノール（20m
l）中溶液に11−ブロモウンデカン酸（2g,17.5mmol）を
加え、この溶液を40℃で５時間撹拌した。冷却後、反応
混合物をpH＝２において酢酸エチルおよび水で抽出し
た。ついで有機相を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、溶媒を減圧下に除去した。生成物を２〜10
％酢酸エチル／ヘキサン/0.2％ギ酸中シリカカラムクロ
マトグラフイーによつて精製すると、11−（１−ブトキ
シ）ウンデカン酸（336mg,17％）が得られた。融点29〜
30.5℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ0.84〜0.96（t,3H,J＝7.3,CH
3 ）,1.18〜1.46（bm,14H,メチレンエンベロープ）,1.47
〜1.68（bm,6H,CH2 CH2OCH2 CH2 ，CH2 CH2COOH）,2.31（t,
2H,CH2 COOH）,3.32〜3.46（bm,4H,CH2 OCH2 ）,11.02（b
r,1H,COOH）;13C NMR（75.4MHz,CDCl3）δ14.02,19.43,
24.74,26.21,29.11,29.28,29.35,29.56,29.64,29.76,3
1.85,34.14,70,63,70.94,179.82;m/z259（Ｍ＋Ｈ） 例10 10−（２−プロピンオキシ）デカン酸の合成 プロパルギルアルコール（68ml,1.17mol）に４℃で水素
化ナトリウム（420mg,8.75mmol）を加え、25℃で30分間
撹拌した。この混合物に10−ブロモデカン酸（2g,7.96m
mol）を加え、反応混合物を98℃で48時間撹拌した。反
応混合物をpH＝１において水および酢酸エチルで抽出し
た。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥したのち、溶媒を
減圧下に除去した。生成物を７〜10％酢酸エチル／ヘキ
サン/0.3％ギ酸中シリカゲルクロマトグラフイー、つい
で１〜2.5％酢酸エチル／ベンゼン/0.3％ギ酸中シリカ
ゲルカラムで精製すると、10−（２−プロピンオキシ）
デカン酸（245mg,14％）が得られた。融点＜30℃1 H NMR（300MHz,CDCl3）δ1.25〜1.42（br,10H,メチレ
ンエンベロープ）,1.54〜1.70（bm,4H,OCH2 CH2 ，CH2 CH2
COOH）,2.35（t,2H,J＝7.4,CH2 COOH）,2.43（t,1H,J＝
2.3,HC＝Ｃ）,3.52（t,2H,J＝6.8,OCH2 ）,4.14（d,2H,J
＝2.5,C＝CCH2 O）,10.42（br,1H,COOH）;13C NMR（75.4
MNz,CDCl3）δ24.68,26.06,29.04,29.17,29.35＊,29.4
6,34.09,57.95,70.22,74.09,79.90,180.02;m/z227（Ｍ
＋Ｈ） 以下の実施例は、これらの脂肪酸縁体基質の、２種のレ
トロウイルス、すなわちHIV−１およびMOMLVに対する抗
ウイルス活性を例示する。
例11 材料および方法 脂肪酸類縁体： 12−（メトキシ）ドデカン酸（13−オキサミリスチン
酸）,10−（プロポキシ）デカン酸（11−オキサミリス
チン酸）,5−（オクチルオキシ）ペンタン酸（６−オキ
サミリスチン酸），および11−（エチルチオ）ウンデカ
ン酸（12−チアミリスチン酸）を上述の方法で製造し
た。精製類縁体、TLC、融点（可能な場合）、1H NMR,13
C NMRおよびマススペクトルで同定した。
酸）,10−（プロポキシ）デカン酸（11−オキサミリス
チン酸）,5−（オクチルオキシ）ペンタン酸（６−オキ
サミリスチン酸），および11−（エチルチオ）ウンデカ
ン酸（12−チアミリスチン酸）を上述の方法で製造し
た。精製類縁体、TLC、融点（可能な場合）、1H NMR,13
C NMRおよびマススペクトルで同定した。
HIV−１複製に対するアツセイ： ヒトＴ−リンパ球細胞系H9はR.D.Gallo氏（NIH）から恵
与され、10％ウシ胎仔血清、100IU/mlペニシリン、100
μg/mlストレプトマイシンおよび2mM L−グルタミンを
補充したRPMI−1640培地中に維持した。HIV−１株HXB2g
ptX（Fisherら:Science,233:655〜659,1986）は、慢性
的に感染させたH9細胞培養体から取得し（Popovicら:Sc
ience,224:497〜500,1984）、0.2μm Milliporeフイル
ターを通して濾過し、−90℃に保存した。保存ウイルス
の力価は、H9細胞での感染性の指標として、シンシチウ
ム形成〔最新医学大辞典、医歯薬出版株式会社、第220
頁、1987年;Gruters et al.,Nature330,74−77（198
7）;Walker et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84,8120−8
124（1987）〕および逆転写酵素活性（下記参照）を用
い、希釈系列によつて測定した。
与され、10％ウシ胎仔血清、100IU/mlペニシリン、100
μg/mlストレプトマイシンおよび2mM L−グルタミンを
補充したRPMI−1640培地中に維持した。HIV−１株HXB2g
ptX（Fisherら:Science,233:655〜659,1986）は、慢性
的に感染させたH9細胞培養体から取得し（Popovicら:Sc
ience,224:497〜500,1984）、0.2μm Milliporeフイル
ターを通して濾過し、−90℃に保存した。保存ウイルス
の力価は、H9細胞での感染性の指標として、シンシチウ
ム形成〔最新医学大辞典、医歯薬出版株式会社、第220
頁、1987年;Gruters et al.,Nature330,74−77（198
7）;Walker et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84,8120−8
124（1987）〕および逆転写酵素活性（下記参照）を用
い、希釈系列によつて測定した。
予め２μg/mlのPolybrene （ヘキサジメスレンブロミ
ド,Sigma）で処理したH9細胞107個に、無細胞系HIV−１
を、感染の多重度（m.o.i.）0.01〜0.001で添加した。3
7℃で30分間インキユベートしてウイルスを吸収させた
のち、４×105のウイルス処理細胞を1mlの新鮮培地（10
％ウシ胎仔血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン
添加）を24ウエル組織培養プレート（Falcon）の各ウエ
ルに加え、類縁体を含有する無血清RPMI−1640培地の等
容と混合した。５％血清、抗生物質土類縁体含有培地で
融日に置換した。各ヘテロ原子置換類縁体は100％エタ
ノール中100mMの保存液として調製し、−90℃に保存
し、使用時に無血清RPMI−1640培地で希釈した。各種類
縁体の希釈後の培地中の最大最終エタノール濃度は0.1
％であつた。したがつて、0.1％エタノール添加または
非添加、非感染または感染H9細胞を各試験の対照として
使用した。エタノール単独では特記すべき作用は認めら
れなかつた。
ド,Sigma）で処理したH9細胞107個に、無細胞系HIV−１
を、感染の多重度（m.o.i.）0.01〜0.001で添加した。3
7℃で30分間インキユベートしてウイルスを吸収させた
のち、４×105のウイルス処理細胞を1mlの新鮮培地（10
％ウシ胎仔血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン
添加）を24ウエル組織培養プレート（Falcon）の各ウエ
ルに加え、類縁体を含有する無血清RPMI−1640培地の等
容と混合した。５％血清、抗生物質土類縁体含有培地で
融日に置換した。各ヘテロ原子置換類縁体は100％エタ
ノール中100mMの保存液として調製し、−90℃に保存
し、使用時に無血清RPMI−1640培地で希釈した。各種類
縁体の希釈後の培地中の最大最終エタノール濃度は0.1
％であつた。したがつて、0.1％エタノール添加または
非添加、非感染または感染H9細胞を各試験の対照として
使用した。エタノール単独では特記すべき作用は認めら
れなかつた。
各種（記号化）類縁体の予備スクリーニングは２回実施
したが、これを除く他のすべてのアツセイは少なくとも
３回実施した。サンプルは二重に試験し、各回ともアツ
セイを反復した。
したが、これを除く他のすべてのアツセイは少なくとも
３回実施した。サンプルは二重に試験し、各回ともアツ
セイを反復した。
ウイルスアツセイ： 処置８日目（m.o.i＝0.01）または処置10日目（m.o.i.
＝0.01）に収穫された細胞の上清溶液を用いてウイルス
を定量化した。培養上清をポリエチレングリコール（15
0mM NaCl,0.1mMフエニルメチルスルホニルフルオリド中
30％）溶液で沈殿させて、ウイルス粒子を10倍に濃縮し
た。沈殿を可溶化し、ウイルス関連逆転写酵素（PT）活
性を、ポリ（rA）−オリゴ（dT）鋳型を用いる〔32P〕T
TP取り込みによつて測定した（Poieszら:Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA,77:7415〜7419,1980）。細胞上清は、Dupont
（Wilmington,DE）のp24ELISAを用い、ウイルス特異的
抗原についても試験した。このアツセイでは抗原0.03ng
/mlまで検出可能である（抗原＝p24,HIV−１の主構造ヌ
クレオカプシド蛋白質、ならびにその前駆体,Pr55ga
g）。
＝0.01）に収穫された細胞の上清溶液を用いてウイルス
を定量化した。培養上清をポリエチレングリコール（15
0mM NaCl,0.1mMフエニルメチルスルホニルフルオリド中
30％）溶液で沈殿させて、ウイルス粒子を10倍に濃縮し
た。沈殿を可溶化し、ウイルス関連逆転写酵素（PT）活
性を、ポリ（rA）−オリゴ（dT）鋳型を用いる〔32P〕T
TP取り込みによつて測定した（Poieszら:Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA,77:7415〜7419,1980）。細胞上清は、Dupont
（Wilmington,DE）のp24ELISAを用い、ウイルス特異的
抗原についても試験した。このアツセイでは抗原0.03ng
/mlまで検出可能である（抗原＝p24,HIV−１の主構造ヌ
クレオカプシド蛋白質、ならびにその前駆体,Pr55ga
g）。
シンシチウム検定： 各ウエル中のシンシチウム数は、４〜６日目（感染、非
処置対照培養）,8および９日目（類縁体またはデカン酸
処置培養）に顕微鏡検査によつて測定した。10低倍率野
（LPF＝倍率40倍）あたりの多核巨細胞の平均数を計数
し、補助シンシチウム尺度:0＝＜1/LPF,1＋＝１〜4/LP
F,2＋＝５〜7/LPF,3＋＝８〜10/LPF,4＋＝＞10/LPFに帰
属させた。この基準では、非感染対照細胞はシンチウム
0,感染、非処置H9細胞は常に４＋と評価された。
処置対照培養）,8および９日目（類縁体またはデカン酸
処置培養）に顕微鏡検査によつて測定した。10低倍率野
（LPF＝倍率40倍）あたりの多核巨細胞の平均数を計数
し、補助シンシチウム尺度:0＝＜1/LPF,1＋＝１〜4/LP
F,2＋＝５〜7/LPF,3＋＝８〜10/LPF,4＋＝＞10/LPFに帰
属させた。この基準では、非感染対照細胞はシンチウム
0,感染、非処置H9細胞は常に４＋と評価された。
マロニーマウス白血病ウイルスの複製に対する類縁体の
効果の検定： 感染ウイルス産生の迅速な組織化学的定量のためにLZ1
力価アツセイを開発した。簡単に説明すると、Sanesら
（EMBO J.,５:3133〜3142,1986）によりΨ２細胞系から
LZ1ウイルス産生細胞系が誘導された。Ψ−２細胞は、
安定に統合されたMOMLVのパツケージング変異体（pMOV
−Ψ−）を含有するNIH3T3細胞である。この変異体は、
envの５′ドナースプライス部位とPr65gagの開始メチオ
ニンコドンの間の350ヌクレオチドが欠失している（Man
nら:Cell,33:153〜159,1983）。LZ1細胞系は、pM−MuLV
−SV−LacZ（Sanesら：前出）およびpSVTK neo Bでコト
ランフエクとされ、ついでG417（Geneticin ）抗生物
質抵抗性と、大腸菌β−ガラクトシダーゼ遺伝子を含む
欠陥MO−MLVの産生（Sanesら：前出）によつて選択され
たΨ−２細胞のサブクローンである。LZ1細胞によつて
産生される組換えウイルスはNIH3T3への一次感染が可能
であるが、複製欠損株である（Sanesら：前出）。lacZ
遺伝子を含む感染NIH3T3はβ−ガラクトシダーゼ活性に
対する組織化学的染色によつて確認できる。
効果の検定： 感染ウイルス産生の迅速な組織化学的定量のためにLZ1
力価アツセイを開発した。簡単に説明すると、Sanesら
（EMBO J.,５:3133〜3142,1986）によりΨ２細胞系から
LZ1ウイルス産生細胞系が誘導された。Ψ−２細胞は、
安定に統合されたMOMLVのパツケージング変異体（pMOV
−Ψ−）を含有するNIH3T3細胞である。この変異体は、
envの５′ドナースプライス部位とPr65gagの開始メチオ
ニンコドンの間の350ヌクレオチドが欠失している（Man
nら:Cell,33:153〜159,1983）。LZ1細胞系は、pM−MuLV
−SV−LacZ（Sanesら：前出）およびpSVTK neo Bでコト
ランフエクとされ、ついでG417（Geneticin ）抗生物
質抵抗性と、大腸菌β−ガラクトシダーゼ遺伝子を含む
欠陥MO−MLVの産生（Sanesら：前出）によつて選択され
たΨ−２細胞のサブクローンである。LZ1細胞によつて
産生される組換えウイルスはNIH3T3への一次感染が可能
であるが、複製欠損株である（Sanesら：前出）。lacZ
遺伝子を含む感染NIH3T3はβ−ガラクトシダーゼ活性に
対する組織化学的染色によつて確認できる。
MOMLV複製に対する類縁体処置の効果を評価するために
は、ウシ血清（最終濃度＝10％）、ペニシリン（100IU/
ml）、ストレプトマイシン（100μg/ml）を含有し、類
縁体（10〜100μＭ）を添加または非添加したダルベツ
コの改良イーグル培地（DME）1mlを含む24−ウエル組織
培養プレートの各ウエルに１×105LZ1産生細胞を加え
た。24時間後に、培地を除去し、新鮮な血清含有培地土
類縁体を加えた。翌日（プレーテイング後48時間）、ウ
イルス含有上清を採取し、0.2μｍフイルターを通し
た。様々なサイズのサンプル（濾液1mlの25〜100μ）
を、1mlのDME/10％ウシ血清／ペニシリン／ストレプト
マイシン中１×104NIH3T3細胞に加えた。これらの指示
細胞は、24ウエル組織培養プレート中で24時間前から平
板培養したものである。Polybrene（Sigma）を濾液と同
時に、最終濃度が10μg/mlになるように添加した。感染
２日後、NIH3T3細胞をリン酸塩緩衝食塩溶液（PBS）で
洗浄し、PBS,ホルムアルデヒド（２％）およびグルウタ
ルアルデヒド（２％）を含有する溶液中25℃で５分間固
定した。細胞を次にPBS中で洗浄し（25℃で２回）、４
−クロロ−５−ブロモ−３−インドリル−β−ガラクト
シダーゼ（Ｘ−Gal,1mg/ml,Sanesら：前出参照）、フエ
リシアン化カリ（5mM）、フエロシアン化カリ（5mM）お
よびMgCl2とともにPBS中でインキユベートしてβ−ガラ
クトシダーゼ活性について染色した。組織化学的反応混
合物は細胞とともに、37℃で６〜14時間インキユベート
とした。次にβ−ガラクトシダーゼ陽性青色細胞の各ウ
エルあたりの数を解剖顕微鏡を用いて測定した。試験は
３回反復し、各回ごとに２回アツセイを行つた。類縁体
処置後の結果を、培地に類縁体を添加しなかつた場合ま
たはエタノール（最終濃度0.1％）添加の場合の細胞で
得られた結果と比較した。
は、ウシ血清（最終濃度＝10％）、ペニシリン（100IU/
ml）、ストレプトマイシン（100μg/ml）を含有し、類
縁体（10〜100μＭ）を添加または非添加したダルベツ
コの改良イーグル培地（DME）1mlを含む24−ウエル組織
培養プレートの各ウエルに１×105LZ1産生細胞を加え
た。24時間後に、培地を除去し、新鮮な血清含有培地土
類縁体を加えた。翌日（プレーテイング後48時間）、ウ
イルス含有上清を採取し、0.2μｍフイルターを通し
た。様々なサイズのサンプル（濾液1mlの25〜100μ）
を、1mlのDME/10％ウシ血清／ペニシリン／ストレプト
マイシン中１×104NIH3T3細胞に加えた。これらの指示
細胞は、24ウエル組織培養プレート中で24時間前から平
板培養したものである。Polybrene（Sigma）を濾液と同
時に、最終濃度が10μg/mlになるように添加した。感染
２日後、NIH3T3細胞をリン酸塩緩衝食塩溶液（PBS）で
洗浄し、PBS,ホルムアルデヒド（２％）およびグルウタ
ルアルデヒド（２％）を含有する溶液中25℃で５分間固
定した。細胞を次にPBS中で洗浄し（25℃で２回）、４
−クロロ−５−ブロモ−３−インドリル−β−ガラクト
シダーゼ（Ｘ−Gal,1mg/ml,Sanesら：前出参照）、フエ
リシアン化カリ（5mM）、フエロシアン化カリ（5mM）お
よびMgCl2とともにPBS中でインキユベートしてβ−ガラ
クトシダーゼ活性について染色した。組織化学的反応混
合物は細胞とともに、37℃で６〜14時間インキユベート
とした。次にβ−ガラクトシダーゼ陽性青色細胞の各ウ
エルあたりの数を解剖顕微鏡を用いて測定した。試験は
３回反復し、各回ごとに２回アツセイを行つた。類縁体
処置後の結果を、培地に類縁体を添加しなかつた場合ま
たはエタノール（最終濃度0.1％）添加の場合の細胞で
得られた結果と比較した。
毒性試験： これらの分析は２つのアツセイ系で実施した。細胞生存
率はトリパンブルー排泄試験〔John Paul,Cell and Tis
sue Culture,4th Edition,The Williams and Wilkins C
ompany,356−357（1970）〕によつて測定した。処置培
養液1ml中の非染色細胞数を非処置培養中の非染色細胞
数で除し、対照パーセントとして表示した。蛋白質合成
は、処置期間の終わりに、Ｌ−〔4,5−3H（Ｎ）〕−ロ
イシン（２μCi/ml培地、比活性＝140Ci/mmol）によつ
て４時間代謝標識を行つて測定した〔John Paul,Cell a
nd Tissue Culture,4th Edition,The Williams and Wil
kins Company,356−357（1970）〕。24ウエルプレート
の与えられたウエル中に含まれる全細胞を掻き取つて回
収し、蛋白質をTCA（最終濃度10％）で沈殿させ、溶液
を５分間100℃でインキユベートしたのち、ガラス繊維
フイルター（Whatman）に通した。Ｈ−９アツセイの場
合には、処置または非処置細胞を10日間のインキユベー
シヨンの終了時にパルス標識した。MOMLVアツセイの場
合には、LZ1ウイルス産生細胞について、２日の処置期
間終了時に標識試験を実施した。さらに対照試験とし
て、ウイルスには暴露されていないが、培地（土類縁
体）と２日間インキユベートしたNIH3T3細胞について実
施した。DNA合成はH9アツセイの10日間に測定した。細
胞を〔５′−3H〕チミジン（0.5μCi/ml、比活性＝2Ci/
mmol）で12時間標識した〔Jon Paul,Cell and Tissue C
ulture,4th Edition,The Williams and Wilkins Compan
y,356−357（1970）〕。ウエル中の細胞をすべて掻き落
として回収し、核酸をTCA（最終濃度10％）で沈澱さ
せ、ガラス繊維フイルター上に収集したのちカウントし
た。
率はトリパンブルー排泄試験〔John Paul,Cell and Tis
sue Culture,4th Edition,The Williams and Wilkins C
ompany,356−357（1970）〕によつて測定した。処置培
養液1ml中の非染色細胞数を非処置培養中の非染色細胞
数で除し、対照パーセントとして表示した。蛋白質合成
は、処置期間の終わりに、Ｌ−〔4,5−3H（Ｎ）〕−ロ
イシン（２μCi/ml培地、比活性＝140Ci/mmol）によつ
て４時間代謝標識を行つて測定した〔John Paul,Cell a
nd Tissue Culture,4th Edition,The Williams and Wil
kins Company,356−357（1970）〕。24ウエルプレート
の与えられたウエル中に含まれる全細胞を掻き取つて回
収し、蛋白質をTCA（最終濃度10％）で沈殿させ、溶液
を５分間100℃でインキユベートしたのち、ガラス繊維
フイルター（Whatman）に通した。Ｈ−９アツセイの場
合には、処置または非処置細胞を10日間のインキユベー
シヨンの終了時にパルス標識した。MOMLVアツセイの場
合には、LZ1ウイルス産生細胞について、２日の処置期
間終了時に標識試験を実施した。さらに対照試験とし
て、ウイルスには暴露されていないが、培地（土類縁
体）と２日間インキユベートしたNIH3T3細胞について実
施した。DNA合成はH9アツセイの10日間に測定した。細
胞を〔５′−3H〕チミジン（0.5μCi/ml、比活性＝2Ci/
mmol）で12時間標識した〔Jon Paul,Cell and Tissue C
ulture,4th Edition,The Williams and Wilkins Compan
y,356−357（1970）〕。ウエル中の細胞をすべて掻き落
として回収し、核酸をTCA（最終濃度10％）で沈澱さ
せ、ガラス繊維フイルター上に収集したのちカウントし
た。
結果 H9中HIV−１複製はヘテロ原子含有ミリスチン酸類縁体
処置によつて阻害される 一連の酸素および硫黄置換ミリスチン酸類縁体につい
て、CD4＋ H−９ヒトＴ−リンパ球細胞系によるHIV−１
産生への影響を、上述のようにして、二重盲検方式でス
クリーニングした（Popovicら:Science,224:497〜500,1
984）。細胞を上述のようにウイルスに暴露し、0.5〜１
時間後に類縁体（１〜100μＭ）を添加した。ウシ胎仔
血清土類縁体を含む培地を10日間にわたり隔日に置換し
た。処置期間の終了時に、ウイルスの複製を逆転写酵素
の測定によつて評価した。
処置によつて阻害される 一連の酸素および硫黄置換ミリスチン酸類縁体につい
て、CD4＋ H−９ヒトＴ−リンパ球細胞系によるHIV−１
産生への影響を、上述のようにして、二重盲検方式でス
クリーニングした（Popovicら:Science,224:497〜500,1
984）。細胞を上述のようにウイルスに暴露し、0.5〜１
時間後に類縁体（１〜100μＭ）を添加した。ウシ胎仔
血清土類縁体を含む培地を10日間にわたり隔日に置換し
た。処置期間の終了時に、ウイルスの複製を逆転写酵素
の測定によつて評価した。
二重盲検薬剤スクリーニングの結果を第1A図に示す。培
地単独、培地プラスエタノール（0.1％）またはデカン
酸含有培地による処置に比較して、４種の類縁体はそれ
ぞれ効果は異なるがHIV−１の産生を低下させることが
明らかにされた。６−オキサミリチスチン酸は最も効果
が低かつた。逆転写酵素活性の低下（0.1％エタノール
添加または非添加処置対照培養と比較して）は、この類
縁体１〜10μＭの範囲の濃度で10日間インキユベートし
たのちも全く認められなかつた。しかしながら、６−オ
キサミリスチン酸100μＭでは逆転写酵素（RT）の活性
は対照の20％に低下した。さらに顕著な効果が、１〜10
μＭの11−オキサミリスチン酸および13−オキサミリス
チン酸ならびに12−チアミリスチン酸で認められた。13
−オキサミリスチン酸は、最大の逆転写酵素活性低下作
用を示し、10μＭで対照の20％に、100μＭで対照の＜1
0％に酵素活性を低下させた。この阻害程度は、H9「急
性」アツセイでウイルスの複製を90％以上阻害する５μ
Ｍアジドチミジン（AZT）で得られる値と類似してい
た。これに対し、100μＭのドデカン酸はRT活性を対照
の80％に低下させたにすぎなかつた。
地単独、培地プラスエタノール（0.1％）またはデカン
酸含有培地による処置に比較して、４種の類縁体はそれ
ぞれ効果は異なるがHIV−１の産生を低下させることが
明らかにされた。６−オキサミリチスチン酸は最も効果
が低かつた。逆転写酵素活性の低下（0.1％エタノール
添加または非添加処置対照培養と比較して）は、この類
縁体１〜10μＭの範囲の濃度で10日間インキユベートし
たのちも全く認められなかつた。しかしながら、６−オ
キサミリスチン酸100μＭでは逆転写酵素（RT）の活性
は対照の20％に低下した。さらに顕著な効果が、１〜10
μＭの11−オキサミリスチン酸および13−オキサミリス
チン酸ならびに12−チアミリスチン酸で認められた。13
−オキサミリスチン酸は、最大の逆転写酵素活性低下作
用を示し、10μＭで対照の20％に、100μＭで対照の＜1
0％に酵素活性を低下させた。この阻害程度は、H9「急
性」アツセイでウイルスの複製を90％以上阻害する５μ
Ｍアジドチミジン（AZT）で得られる値と類似してい
た。これに対し、100μＭのドデカン酸はRT活性を対照
の80％に低下させたにすぎなかつた。
13−オキサミリスチン酸のHIV−１複製に及ぼす作用を
さらに検討した。0.1μＭから100μＭの間で、逆転写酵
素活性の用量依存性の低下が認められた（第1B図）。さ
らに、ウイルスカプシド抗原（p24）の量をELISA検定を
用いて同時に測定したところ、逆転写酵素アツセイの結
果とよく相関する類似の用量反応が観察された（第1B図
挿入図参照）。いずれの場合も、13−オキサミリスチン
酸は、20〜40μＭの範囲で、ウイルスの複製を90％以下
低下させることが明らかにされた。シンシチウムの低下
も、逆転写酵素およびp24ELISAアツセイの結果と平行し
た（第1C図）。13−オキサミリスチン酸のシンシチウム
形成に対する効果も、この培養系におけるHIV−１の拡
散と細胞変性効果の低下を同様に反映している。40〜80
μM13−オキサミリスチン酸によるシンシチウムの低下
は５μM AZTによる結果と匹敵するものであつたが、デ
カン酸または0.1％エタノール単独では、感染、非処置H
9対照に比べ、シンシチウム数への影響は認められなか
つた（第1C図、他のデータは示していない）。
さらに検討した。0.1μＭから100μＭの間で、逆転写酵
素活性の用量依存性の低下が認められた（第1B図）。さ
らに、ウイルスカプシド抗原（p24）の量をELISA検定を
用いて同時に測定したところ、逆転写酵素アツセイの結
果とよく相関する類似の用量反応が観察された（第1B図
挿入図参照）。いずれの場合も、13−オキサミリスチン
酸は、20〜40μＭの範囲で、ウイルスの複製を90％以下
低下させることが明らかにされた。シンシチウムの低下
も、逆転写酵素およびp24ELISAアツセイの結果と平行し
た（第1C図）。13−オキサミリスチン酸のシンシチウム
形成に対する効果も、この培養系におけるHIV−１の拡
散と細胞変性効果の低下を同様に反映している。40〜80
μM13−オキサミリスチン酸によるシンシチウムの低下
は５μM AZTによる結果と匹敵するものであつたが、デ
カン酸または0.1％エタノール単独では、感染、非処置H
9対照に比べ、シンシチウム数への影響は認められなか
つた（第1C図、他のデータは示していない）。
13−オキサミリスチン酸の細胞毒性は３種の独立の細胞
生存能を検定を用いて分析した。第一に、生存細胞数
を、10日の処置期間の終わりにトリパンブルー排泄を用
いて測定した〔Jon Paul,Cell and Tissue Culture,4th
Edition,The Williams and Wilkins Company,356−357
（1970）〕。非処置、HIV−１感染培養体中の生存細胞
百分率は、非処置、非感染細胞の場合に比較して50％低
下した（第１図）。これは、このHIV−１株による細胞
変性効果を反映すものである（Ratnerら:Nature,313:27
7〜284,1985）。
生存能を検定を用いて分析した。第一に、生存細胞数
を、10日の処置期間の終わりにトリパンブルー排泄を用
いて測定した〔Jon Paul,Cell and Tissue Culture,4th
Edition,The Williams and Wilkins Company,356−357
（1970）〕。非処置、HIV−１感染培養体中の生存細胞
百分率は、非処置、非感染細胞の場合に比較して50％低
下した（第１図）。これは、このHIV−１株による細胞
変性効果を反映すものである（Ratnerら:Nature,313:27
7〜284,1985）。
13−オキサミリスチン酸を感染H9培養液に添加したとこ
ろ、生存細胞数の増加が観察された。20〜40μＭの類縁
体で、非処置対照の場合と同等の細胞数が得られた。生
存細胞数のこの「正常化」も、感染ウイルスの産生の低
下を反映するものである。ウイルスの複製が阻害された
ので、細胞変性作用も低下する。この観察は、類縁体が
細胞に対して直接毒性を示すものではなかつたことも示
唆している。この仮説をさらに検討するために、類縁体
の濃度を上昇させた場合のDNAおよび蛋白質合成を測定
した。〔3H〕ロイシンおよび〔3H〕チミジン標識の結果
は細胞の生存データと相関した（第1D図）〔Jon Paul,C
ell and Tissue Culture,4th Edition,The Williams an
d Wilkins Company,356−357（1970）〕。非感染H9細胞
を用いた別個の代謝標識試験において、0.1〜100μＭの
13−オキサミリスチン酸は、生育速度、または蛋白質も
しくはDNA合成速度に有意な影響を与えなかつた。これ
らの結果を考え合わせると、13−オキサミリスチン酸の
HIV−１複製に対して観察された作用は、細胞代謝の非
特異的な有害な変化によるものではないと思われる。
ろ、生存細胞数の増加が観察された。20〜40μＭの類縁
体で、非処置対照の場合と同等の細胞数が得られた。生
存細胞数のこの「正常化」も、感染ウイルスの産生の低
下を反映するものである。ウイルスの複製が阻害された
ので、細胞変性作用も低下する。この観察は、類縁体が
細胞に対して直接毒性を示すものではなかつたことも示
唆している。この仮説をさらに検討するために、類縁体
の濃度を上昇させた場合のDNAおよび蛋白質合成を測定
した。〔3H〕ロイシンおよび〔3H〕チミジン標識の結果
は細胞の生存データと相関した（第1D図）〔Jon Paul,C
ell and Tissue Culture,4th Edition,The Williams an
d Wilkins Company,356−357（1970）〕。非感染H9細胞
を用いた別個の代謝標識試験において、0.1〜100μＭの
13−オキサミリスチン酸は、生育速度、または蛋白質も
しくはDNA合成速度に有意な影響を与えなかつた。これ
らの結果を考え合わせると、13−オキサミリスチン酸の
HIV−１複製に対して観察された作用は、細胞代謝の非
特異的な有害な変化によるものではないと思われる。
MOMLV複製へのヘテロ原子含有ミリスチン酸類縁体の作
用は、HIV−１複製を変える作用とは異なる この検定には２種の類縁体を使用した。HIV−１複製ア
ツセイで試験された４種の化合物中、最も効果の低かつ
た６−オキサミリスチン酸と、最も高い効果を示した13
−オキサミリスチン酸である。これらの化合物のMOMLV
複製に対する作用を評価するために、新しいアツセイ系
を開発した。この系の詳細については上述し、第2A図に
例示したとおりである。LZ1ウイルスはMOMLVから誘導さ
れた複製欠損株である。感染が起こつても、ウイルスの
増殖はブロックされ、プロウイルスが最初に感染した細
胞の子孫に局限される。このウイルスはまた、大腸菌La
cZ遺伝子を有し、これが感染ウイルス産生の定量マーカ
ーとなる。ここに導入したMOMLVアツセイ系では、LZ1ウ
イルス産生細胞を異なる類縁体で２日間処置した。つい
で、NIH3T3細胞を、LZ1ウイルス産生細胞から収穫した
濾過培地のサンプルに暴露し、得られたフオーカスをβ
−ガラクトシダーゼに対する組織化学的染色によつて同
定した。ウイルス複製に対する薬剤の効果は、処置培養
液から調製された濾液によつて生じるフオーカス（青色
細胞）の数を、非処置対照によつて生じるフオーカスと
比較することによつて決定できる。第2B図に示すよう
に、13−オキサミリスチン酸は100μＭまでの濃度では
ウイルスの複製に何ら影響を与えなかつた。一方、HIV
−１複製に作用しなかつた６−オキサミリスチン酸は、
MOMLVの複製を、濃度依存性の方式で阻害する。すなわ
ち、10μＭで40％の低下が認められ、100μＭでは60％
以上のウイルス力価の平均低下を生じた。エタノール
（0.1％）およびデカン酸（10〜100μＭ）では、非処置
対照に比べて有意な低下を生じなかつた。
用は、HIV−１複製を変える作用とは異なる この検定には２種の類縁体を使用した。HIV−１複製ア
ツセイで試験された４種の化合物中、最も効果の低かつ
た６−オキサミリスチン酸と、最も高い効果を示した13
−オキサミリスチン酸である。これらの化合物のMOMLV
複製に対する作用を評価するために、新しいアツセイ系
を開発した。この系の詳細については上述し、第2A図に
例示したとおりである。LZ1ウイルスはMOMLVから誘導さ
れた複製欠損株である。感染が起こつても、ウイルスの
増殖はブロックされ、プロウイルスが最初に感染した細
胞の子孫に局限される。このウイルスはまた、大腸菌La
cZ遺伝子を有し、これが感染ウイルス産生の定量マーカ
ーとなる。ここに導入したMOMLVアツセイ系では、LZ1ウ
イルス産生細胞を異なる類縁体で２日間処置した。つい
で、NIH3T3細胞を、LZ1ウイルス産生細胞から収穫した
濾過培地のサンプルに暴露し、得られたフオーカスをβ
−ガラクトシダーゼに対する組織化学的染色によつて同
定した。ウイルス複製に対する薬剤の効果は、処置培養
液から調製された濾液によつて生じるフオーカス（青色
細胞）の数を、非処置対照によつて生じるフオーカスと
比較することによつて決定できる。第2B図に示すよう
に、13−オキサミリスチン酸は100μＭまでの濃度では
ウイルスの複製に何ら影響を与えなかつた。一方、HIV
−１複製に作用しなかつた６−オキサミリスチン酸は、
MOMLVの複製を、濃度依存性の方式で阻害する。すなわ
ち、10μＭで40％の低下が認められ、100μＭでは60％
以上のウイルス力価の平均低下を生じた。エタノール
（0.1％）およびデカン酸（10〜100μＭ）では、非処置
対照に比べて有意な低下を生じなかつた。
HIV−１アツセイ系について記載したのと類似の毒性試
験を実施した。生存LZ1ウイルス産生細胞数およびNIH3T
3「レポーター」は、各種処置群と非処置対照の間で＜2
0％の差を示すのみであつた（第2C図、他のデータは示
していない）。〔3H〕ロイシンによるパルス標識試験で
は、非処置対照に比較して処置LZ1細胞で蛋白質の合成
に10〜40％の低下が認められた。しかしながら、類縁
体、0.1％エタノールまたは10〜100μＭデカン酸処置細
胞の間に有意差は認められなかつたことから、上述の低
下は多分非特異的なものと考えられる。２日間類縁体で
処置したNIH3T3細胞の〔3H〕ロイシン標識試験では、対
照細胞に比較して有意な差は認められなかつた（＜10
％）〔Jon Paul,Cell and Tissue Culture,4th Editio
n,The Williams and Wilkins Company,356−357（197
0）〕。
験を実施した。生存LZ1ウイルス産生細胞数およびNIH3T
3「レポーター」は、各種処置群と非処置対照の間で＜2
0％の差を示すのみであつた（第2C図、他のデータは示
していない）。〔3H〕ロイシンによるパルス標識試験で
は、非処置対照に比較して処置LZ1細胞で蛋白質の合成
に10〜40％の低下が認められた。しかしながら、類縁
体、0.1％エタノールまたは10〜100μＭデカン酸処置細
胞の間に有意差は認められなかつたことから、上述の低
下は多分非特異的なものと考えられる。２日間類縁体で
処置したNIH3T3細胞の〔3H〕ロイシン標識試験では、対
照細胞に比較して有意な差は認められなかつた（＜10
％）〔Jon Paul,Cell and Tissue Culture,4th Editio
n,The Williams and Wilkins Company,356−357（197
0）〕。
本発明の抗ウイルス剤は、レトロウイルス等に感染した
哺乳類宿主に、慣用方法により、好ましくは医薬的に許
容される希釈剤および担体との組成物として投与するた
めに使用できる。投与される活性薬剤の量は、有効量、
すなわち医療的に有効な量であるが、その利用の利益以
上の毒性作用を示さない量でなければならない。成人ヒ
トにおける用量は、通常、活性化合物約1mgまたはそれ
以上と考えられる。適当な投与経路は経口投与で、カプ
セル、錠剤、シロツプ、エリキシール等として投与され
るが、非経口投与経路も利用できる。活性化合物を医薬
的に許容される希釈剤および担体中に投与剤形として適
当な組成物、この領域における一般的参考書、たとえば
Remington′s Pharmaceutical Sciences,Arthur Osol
編、16版,1980,Mack Publishing CO.,Easton,PAを参考
に製造することができる。
哺乳類宿主に、慣用方法により、好ましくは医薬的に許
容される希釈剤および担体との組成物として投与するた
めに使用できる。投与される活性薬剤の量は、有効量、
すなわち医療的に有効な量であるが、その利用の利益以
上の毒性作用を示さない量でなければならない。成人ヒ
トにおける用量は、通常、活性化合物約1mgまたはそれ
以上と考えられる。適当な投与経路は経口投与で、カプ
セル、錠剤、シロツプ、エリキシール等として投与され
るが、非経口投与経路も利用できる。活性化合物を医薬
的に許容される希釈剤および担体中に投与剤形として適
当な組成物、この領域における一般的参考書、たとえば
Remington′s Pharmaceutical Sciences,Arthur Osol
編、16版,1980,Mack Publishing CO.,Easton,PAを参考
に製造することができる。
ペプチド配列の確認のためには本明細書では、以下の標
準アミノ酸略号を使用する。
準アミノ酸略号を使用する。
以上の開示から、本技術分野の熟練者によれば、本発明
の精神および範囲から逸脱することなく、様々な他の例
が明らかであろう。すなわち、様々な他のヘテロ原子脂
肪酸類縁体が、レトロウイルスおよび上述の記載と矛盾
しない他のウイルスに有用であることは明白であろう。
このような他の例はすべて、本発明の特許請求の範囲に
包含されるものである。
の精神および範囲から逸脱することなく、様々な他の例
が明らかであろう。すなわち、様々な他のヘテロ原子脂
肪酸類縁体が、レトロウイルスおよび上述の記載と矛盾
しない他のウイルスに有用であることは明白であろう。
このような他の例はすべて、本発明の特許請求の範囲に
包含されるものである。
第1A図、第1B図、第1C図及び第1D図は、本発明の酸素お
よび硫黄置換ミリスチン酸類縁体の、H9細胞中における
HIV−１の複製に対する作用の試験結果を示すグラフで
あり、第2A図、第2B図、第2C図及び第2D図は、本発明の
酸素および硫黄置換ミリスチン酸類縁体の、MOMLVの複
製に対する作用の試験の方法の概略およびその結果を示
す図である。
よび硫黄置換ミリスチン酸類縁体の、H9細胞中における
HIV−１の複製に対する作用の試験結果を示すグラフで
あり、第2A図、第2B図、第2C図及び第2D図は、本発明の
酸素および硫黄置換ミリスチン酸類縁体の、MOMLVの複
製に対する作用の試験の方法の概略およびその結果を示
す図である。
Claims (6)
- 【請求項１】炭素位置４〜13のメチレン基が酸素または
硫黄に置換されているC13またはC14脂肪酸またはそのア
ルキルエステルから選ばれるミリストイル化酵素のオキ
シまたはチオ置換脂肪酸類縁体基質であって、11−（エ
チルチオ）ウンデカン酸、11−（エトキシ）ウンデカン
酸、５−（オクチルチオ）ペンタン酸、11−（メトキ
シ）ウンデカン酸、12−（メトキシ）ウンデカン酸、５
−（オクチルオキシ）ペンタン酸、10−（プロピルチ
オ）デカン酸、10−（プロポキシ）デカノン酸、11−
（１−ブトキシ）ウンデカン酸、10−（２−プロピノキ
シ）デカン酸、12−チアミリストレイン酸、12−オキシ
ミリステライド酸、およびこれらのアルキルエステルか
らなる群より選ばれる脂肪酸類縁体基質を有効成分とす
るウイルスに感染した哺乳動物宿主中のウイルスを阻害
するための医薬組成物。 - 【請求項２】ウイルスはレトロウイルスである請求項
（１）記載の医薬組成物。 - 【請求項３】レトロウイルスはHIV−１である請求項
（２）記載の医薬組成物。 - 【請求項４】レトロウイルスはMOMLVであり、脂肪酸類
縁体基質は、11−（エチルチオ）ウンデカン酸、11−
（エトキシ）ウンデカン酸、５−（オクチルチオ）ペン
タン酸、11−（メトキシ）ウンデカン酸、５−（オクチ
ルオキシ）ペンタン酸、10−（プロピルチオ）デカン
酸、10−（プロポキシ）デカン酸、11−（１−ブトキ
シ）ウンデカン酸、10−（２−ピロピノキシ）デカン
酸、12−チアミリストレイン酸、12−オキシミリステラ
イド酸、およびこれらのアルキルエステルからなる群よ
り選ばれる脂肪酸類縁体基質である請求項（２）記載の
医薬組成物。 - 【請求項５】脂肪酸類縁体は12−（メトキシ）ドデカン
酸である請求項（３）記載の医薬組成物。 - 【請求項６】脂肪酸類縁体は５−（オクチルオキシ）ペ
ンタン酸である請求項（４）記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US402094 | 1989-09-01 | ||
| US07/402,094 US5073571A (en) | 1988-06-16 | 1989-09-01 | Method of inhibiting virus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03109322A JPH03109322A (ja) | 1991-05-09 |
| JPH0714875B2 true JPH0714875B2 (ja) | 1995-02-22 |
Family
ID=23590495
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2232269A Expired - Lifetime JPH0714875B2 (ja) | 1989-09-01 | 1990-08-31 | ウイルス阻害医薬組成物 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5073571A (ja) |
| EP (1) | EP0415902B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0714875B2 (ja) |
| AT (1) | ATE86854T1 (ja) |
| CA (1) | CA2024489A1 (ja) |
| DE (1) | DE69001107T2 (ja) |
| DK (1) | DK0415902T3 (ja) |
| ES (1) | ES2055407T3 (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2036965A1 (en) * | 1990-02-26 | 1991-08-27 | Robert J. Duronio | Method for protein n-myristoylation |
| US5236955A (en) * | 1992-04-10 | 1993-08-17 | Washington University | Anti-fungal agent |
| US6602861B1 (en) | 1992-04-16 | 2003-08-05 | Research Corporation Technologies, Inc. | Acylated phospholipid drugs |
| GB9212276D0 (en) * | 1992-06-10 | 1992-07-22 | Harper David R | Anti-viral agents |
| US5463152A (en) * | 1994-12-08 | 1995-10-31 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Halofluorocarbon hydrogenolysis |
| GB2267642B (en) * | 1992-06-10 | 1996-04-24 | British Tech Group | Anti-viral agents |
| US5599947A (en) * | 1993-01-14 | 1997-02-04 | G. D. Searle & Co. | Fatty acid analogs and prodrugs |
| US5859052A (en) * | 1993-01-14 | 1999-01-12 | G. D. Searle & Co. | Fatty acid analogs and prodrugs |
| DE10063111A1 (de) * | 2000-12-18 | 2002-06-20 | Bayer Ag | Replikationsassay zur Auffindung antiviraler Substanzen |
| EP2598128B1 (en) | 2010-07-28 | 2018-03-28 | Life Technologies Corporation | Anti- viral azide-containing compounds |
| US20120028335A1 (en) | 2010-07-28 | 2012-02-02 | Life Technologies Corporation | Anti-viral azide-containing compounds |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2262514A1 (en) * | 1974-03-01 | 1975-09-26 | Alary Josette | Reticulo-endothelial stimulating compsn. - contg. sodium oleate, sodium stearate and neutralised olive oil |
| US4513005A (en) * | 1981-06-18 | 1985-04-23 | Lilly Industries Limited | SRS-A antagonists |
| US4740588A (en) * | 1986-08-07 | 1988-04-26 | Washington University | Novel substrate peptides |
| US4709012A (en) * | 1986-08-07 | 1987-11-24 | Washington University | Novel inhibitor peptides |
-
1989
- 1989-09-01 US US07/402,094 patent/US5073571A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-08-31 DK DK90870135.2T patent/DK0415902T3/da active
- 1990-08-31 JP JP2232269A patent/JPH0714875B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-31 EP EP90870135A patent/EP0415902B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-31 AT AT90870135T patent/ATE86854T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-08-31 CA CA002024489A patent/CA2024489A1/en not_active Abandoned
- 1990-08-31 ES ES90870135T patent/ES2055407T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-31 DE DE90870135T patent/DE69001107T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5073571A (en) | 1991-12-17 |
| DE69001107T2 (de) | 1993-10-07 |
| ATE86854T1 (de) | 1993-04-15 |
| ES2055407T3 (es) | 1994-08-16 |
| EP0415902A1 (en) | 1991-03-06 |
| DK0415902T3 (da) | 1993-04-19 |
| CA2024489A1 (en) | 1991-03-02 |
| EP0415902B1 (en) | 1993-03-17 |
| DE69001107D1 (de) | 1993-04-22 |
| JPH03109322A (ja) | 1991-05-09 |
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