JPH03109322A - ウイルス阻害医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はウィルスの阻害方法に関し、さらに詳しくハ、
バリストイル化酵素のオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁
体基質によってレトロウィルスのようなウィルスを阻害
する方法に関する。これらは、ペプチドおよび蛋白質の
脂肪酸アシル化に有用な基質である。 特定の真核生物蛋白質の脂肪酸アシル化は明瞭に確立さ
れた過程であり、便宜的に２つのカテゴリーに分けられ
ている。ひとつは、パルミテート（０１６）　カ、ｕ訳
後、エステルまたはチオエステル結合を介して、多分ゴ
ルジ装値内で膜蛋白質に連結するものである。 他方は、ミリステート（（’１４）が、蛋白質生合底経
路の早い時期にアミド結合を介して、可溶性および膜蛋
白質に共有結合するものとして知られている。Ｎ−ミリ
ストイル化蛋白質においては、アミン末端グリシン残基
がアシ化部位であることが知られている。 すなわち、多様なウィルスおよび細胞蛋白質が、そのア
ミノ末端におけるグリシンにアミド結合を介して連結す
るミリステートの共有結合付加によって修飾されろこと
が明らかにされている。最もよく研究されているミリス
トイル化蛋白質の例としては、ラウス肉腫ウィルスの形
質転Ｗ４蛋白質（チロシンキナーゼ）、ｐ６０　　　　
かある。 ミリストイル化反応は、次のように表示することができ
る。 １ １：Ｈ，−（ＣＩ（２）１．−０−００Ａ　十Ｈ２Ｎ−
ｇ２７−蛋白質ミリストイル化酵素 上記蛋白質脂肪酸アシル化に関するその他の背景情報と
しては、ワシントン大学医学部に関係する科学者達（よ
る以下の一連の文献を参照することができる。 ＴＯＷ１θｒ　＆　ＧＬａ８ｅｒ　：　ｎｔｏｃｈｅｍ
ｔｓｔｒｙ、　　２５　：８７８〜８８４（１９８６） ＴＯＷｌｌｌｒ　＆　Ｇｕｍ＠ｒ　：　ＰｒｏＣ，Ｎａ
ｔ’ｌ＋Ａｃａａ、　　ＳＣ１゜σ８Ａ、８３：２８１
２〜２８１６（１９８６）ＴＯｒｌｅｒら：　Ｊ、　Ｂ
ｉｏＬ　Ｃｈｅｍ１２６２：１０６０〜１０５６　（１
９８７） ７ＯＷｌｅｒら：　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅ
ＩＬ、５７　：６９〜９９（１９８８） ミリストイル化酵素の基質として有用な、比較的短いア
ミノ酸配列を有する独特の台底ペプチドが、米国特許第
４．７４０．５８８号に記載されている。このようなペ
ゾチドの例には、 Ｇｊ７−Ａ８ｎ−Ａｊａ　−Ａｉａ　−Ａｊａ　−Ａｊ
ａ　−Ａｒｇ−ＡｒｇおよびＧＪ７−ＡＩｉｎ−、Ａｊ
ａ　−ｑａ　−８８ｒ−’ｒ７ｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇがあ
る。 ある種の他の独特の合成ペゾチドは、米国特許第４．７
０９．０１２号に記載されているようにミリストイル化
酵素の阻害剤である。 本発明はとくに、ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩＶ）の
ようなレトロウィルスを阻害する方法に関する。すなわ
ち、これらの脂肪酸ｆｔＩ縁体基質は、後天性免疫不全
症候群（Ａより８）および人より８関連合併症（ＡＲＣ
）の治療に使用できる可能性がある。 わずか数年前までは珍しい疾患であった後天性免疫不全
症候群は、今や深刻な疾患となっている。 その結果、ＡＩＤＳヲ打負かすための薬剤およびワクチ
ンの開発には著しい努力が払われている。 １９８３年に始めてＷｉ認され７：ＡＩＤ日ウィルスは
様々な名前で呼ばれている。それは３番目に明らかＫさ
れたＴ−リンパ球ウィルス（口ＴＬＶ−［１［）であり
、免疫系のａ砲門で複製する能力乞有し、それによりＴ
Ａ”ＴＡ胸（１にはＣＤ４“細胞）の重大な破ＩＩを招
＜　（Ｇａ１ｌｏら：　５ｃｔｅｎｃｅ、　２２４　：
５００〜５０３．１９８４およびｐｎｐＯＶｉｏら：同
誌、４９７〜５００．１９８４参照）。このレトロウィ
ルスは、りン７アデノパシー関連ウィルス（Ｔ、ＡＶ）
’Ｅｒ、−は、ｌＤ８関連ウイつ、　ｘ　（ＡＲＭ、）
　トも呼ばれていたか、最も新しい名称をエヒト免疫不
全症ウィルス（ＦＩＩＶ）でＪｌ　’ｊ　、Ａより８ウ
イルスニハ２漕の異なるウィルス、ＨＩＶ−１およびＨ
ｘｖ−２が報告されている。８工Ｖ−１が１９８６年に
パリのパスツール研究所においてＭｎｎｔａＨｎｉθｒ
と共同研究者によって始めて確認されたウィルスであり
（Ａｎｎ、　Ｖｉｒｏｌ、　Ｉｎａｔ、　Ｐａ５ｔｅｕ
ｒ、　１３５　Ｆｉ　、　１１９〜１３４．１９８４　
）、一方、ＨＩＶ−２ｔ’！、もツト最近、１９８６年
にＭＯｎｔａｇｎ１８ｒと共同研究者にＪ”）て単離さ
れ７．−　（１Ｊａｔｕｒｅ、　５２６　：　６６２　
。 １９８７）。本明細書において用いられるＨＩＶの語は
、−収約な意味でこれらのウィルスを指すことを意味す
る。 Ａより８の分子生物学は解明され、明確にされ始めてい
るが、この疾患についてはさらに多くのことを学び、理
解する必要がある。一方、抗ＡＩＤＳ薬およびワクチン
の可能性を求めて多くのアプローチが検討されている。 ＡＩＤＢワクチンの開発は、Ｉ（Ｉｖに対する保護免疫
の機構が不明なこと、遺伝的ｆ動が大きいこと、および
ＨＬＶ感染に対する有効な！ａ物モモデルないことが足
かせになっている（たとえば、ＫＯｆｆ　＆　Ｈｏｔｈ
　：　８ｃｉｓｎｃｏ、　２４１：４２６〜４３４．１
９８８参照）。 米国食品医薬局（ＦＤＡ　）によってＡ　ＩＤＳの治療
用に最初に承認された薬は、シトデシンであり、これは
アジドチミジン（ＡＺＴ　）の慣用名でも知られている
。化学名は３′−アシド−６フーデオキシチミシンであ
る。これは、ウィルスのｉｎ　ｖｉｔｒｏでの複製を阻
害することから、人より８に対する武器としての可能性
があるものとして始め選択された。 このようなｉｎ　Ｖｉｔｒｏ試験汀１、抗Ａより８薬の
可能性の初期のスクリーニングおよび試験として有用で
あり、実際上唯一の実用的な方法である。しかしながら
、ＡＺＴの重大な欠点はその毒性による副作用である。 したがって、より優れた抗Ａより８薬の研究が続けられ
ている。 本発明によれば、ミリストイル化酵素に対する脂肪酸類
縁体基質で処置することによるウィルスの阻害方法が提
供される。好ましい抗ウィルス化合物は、蛋白質の脂肪
酸アシル化に有用なオキシおよびチオｆ換脂肪酸類縁体
である。これらは、０１３〜Ｃｘ４１１Ｗ肪酸またはそ
のアルギルエステルの脂肪酸鎖中の炭素位置４〜１３の
いずり、−ｎｓにメチレン基に代わってＩ！Ｉｔ＃Ａま
たは硫黄が言まれ４）。この場合、カルボキシル炭素原
子を１と定義した慣用の命名法によっている。脂肪酸類
縁体の好ましいアルキルエステルは、アルキル基に１〜
６個の炭素原子を有する。脂肪酸は、飽和アルカン酸ま
たは不飽和アルケンおよびアルキン酸から誘導される。 これらの脂肪酸類縁体基質化合物汀また、＃索（アシル
トランスフェラーゼ）作用のｖＩＩ節ｊ６エび蛋白質機
能におけるＮ−ミリストイル化の役割の研究にも有用で
ある。これらは、酵母、小麦胚溶解物および哺乳類細胞
のような起源からのＮ　−ミリストイル化酵素に対して
台底基質としても動く。 これらの化合物は、ミリスチン酸とほぼ同じ鎖長が保持
されているが、疎水性がｉ　１７ステン酸と異なる。し
たがって、ミリストイル蛋白質中に導入された場合、そ
れらはアシル蛋白質のその後の膜または他の蛋白質との
相互作用を変えるはずである（　Ｈｅｕｃｋｅｒｏｔｈ
ら：、Ｔ、Ｂ工ｏ１．Ｏｈθｍ、、２６３：２１２７〜
２１３３．１９８８　）。多くのへテロ原子置換を有す
る脂肪酸類縁体基質化合物では、１個のへテロ原子置換
をもつ相当する類縁体よりも疎水性が大きく低下するも
のと考えられている（　Ｈｅｕｃｋｅｒｏｔｈら：　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、８ｃｉ、　［７ＳＡ。 ８５：８７９５〜８７９９．１９８８参照）。 ヘテｃ２原子置換脂肪酸類縁体はｉｎ　Ｖｉｔｒｏでも
１ｎ　ｖｔｖｏでも、Ｎ−ミリストイルトランスフェラ
ーゼに対する基質として作用する。これらの結果は、Ｈ
ｅｕｃｋｅｒｏｔｈら（Ｐｒｏｃ＋Ｎａｔ１．　ＡＯａ
ｄ、　８（！ｉ。 ［７８Ａ、８６：５２６２〜５２６６、　１９８９）に
よって、たとえばＢＯ３Ｈ１のような哺乳類動物細胞で
示されている。 本発明の方法に有用な抗ウイルスオキシおよびチオ置換
脂肪酸類縁体基質化合物の例としては、Ａ、１１−（エ
チルチオノウンデカン酸０Ｈ３ｃＨ２Ｂ（ＯＨ，）１ｏ
ＣｏｏｌＢ、１１−（エトキシ）ウンデカン酸 ０Ｈ３０Ｈ２０（ＣＨ２）ＩＱｃ！００■０．５−（オ
クチルチオ）ペンタン酸 ｃＨ３（０Ｈ２）、Ｓ　（Ｃ！Ｈ２）　、Ｃ００ｋｌＤ
、１１−（メトキシ）ウンデカン酸 ０Ｈ３０（ＣＨ２）１ｏＣ！０ＯＨ １１２−（メトキシ）ウンデカン酸 ０Ｈ３０（ＯＨ２）１１０００Ｈ ？、５−（オクチルオキシ）ペンタン酸Ｃ■３（ＯＨ２
）マ０（ＯＨ２）、Ｃ００ＨＧ、ＩＱ−（グロビルチオ
）デカン酸 ０Ｈ３（ＯＨ２３２Ｂ（ＯＨ２）９ＣＯＯＨ）！、１０
−（ゾａポキン）デカノン酸０Ｈ３（ＯＦ（、）２０（
０■２）９０００Ｈ工、　　１ｊ−（ｊ−ブトキシ）ウ
ンデカン酸０Ｈ３（ＣＨ２）５０（ＯＨ２）１ｏＯＯＯ
Ｈ１、ｊＤ−Ｃ２−プロｅノキシ〕デカン酸ＨＯ三ｃ　
ｃｕ２ｏ（ｃ［（、）、ｃｏｏｕがある。 上記の抗ウイルスオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁体基
質化合物には、別の命名法を使用することもできる。た
とえば、化合物Ａは１２−チアはリスチン酸、化合物Ｂ
は１２−オキシミリスチン酸好ましくは１２−オキサミ
リスチン酸、化合物Ｊは１１−オキシ−１６−インミリ
スチン酸とも呼ぶことができる。 本発明の好ましい態様においては、抗ウイルスオキシお
よびチオ置換脂肪酸類縁体基質化合物は、化合物Ａ〜Ｕ
として上に例示されたように、飽和０１３〜Ｃ１４脂肪
酸に基づくものである。 ０１６飽和脂肪酸に基づく脂肪酸類縁体である化合物工
を工、ＣＺＳ〜０１４脂肪酸に基づく類縁体よりも効果
が劣る。 上記化合物Ｊに例示したように、さらに他の態様におい
ては、抗ウイルス脂肪酸類縁体はω−不飽和０１４脂肪
酸に基づ（ものである。この化合物で得られるような結
果はΔ９・１０シスおよびΔ９・１０トランス不飽和脂
肪酸に基づ（脂肪酸類縁体、たとえば１２−チアミリス
トレイン酸および１２−オキシミリステライト酸によっ
ても達成できる。 抗ウイルスオキシおよびチオ置換脂肪酸類縁体基質化合
物の製造は、ウィリアムノン合成による混合エーテルの
製造と類似の方法で実施できる。 すなわち、適当なω−ブロモカルボン酸をアルコラード
またはアルキルチオールと反応させてそれぞれ、オキシ
置換脂肪酸エーテルまたはチオ置換脂肪酸エーテルケ製
造できる。 と（に、本発明の方法に有用な化合物は、Ｐａ５ｃａｌ
　＆　Ｚｉｅｒｉｎｇ　：　Ｊ、　Ｌｉｐｉｄ　Ｂｅｓ
、、　２７　：２２１〜２２４（１９８６）に置換され
たステアリン酸のへテロ原子置換類縁体の合成と類似の
操作で製造することかでざる。これらの方法を用い、含
硫類縁体は、適当なアルキルチオールとω−ブロモカル
ボン酸の、アルコール性塩基の存在下における縮合で製
造できる。これを、上記化合物Ａの製造について例示す
れば次の通りである。 ０Ｈ３０Ｈ２−８−（ＯＨ２３１０ＣＯＯＦＩ　＋　Ｋ
Ｅｒ　十Ｆ（２０同様に、酸素含有類縁体は、ω−ブロ
モ酸のアルコール性塩基との反応で製造できる。これを
、上記化合物Ｅの製造について例示すれば次の通りであ
る。 ０Ｈ ＣＨ３０Ｈ２−８−（ＣＨ２）１６ＣＯＯＨ＋ＫＢｒ　
＋Ｈ２０同様に、＃素含有類縁体は、ω−ブロモ酸とア
ルコール性塩基の反応で製造できる。これは、上記化合
物２の製造について、次のように例示できる。 Ｂｒ（ＣＩ（２）ＩｌｏｏＯＨ＋（ｊｌｉ３０Ｈ＋　Ｋ
ＯＨ−一−−−−−→０Ｈ３０（ＣｎＨ２）ｌｌｏｏＯ
Ｈ＋Ｋｌ　＋Ｈ２０本発明の他の抗ウイルスオキシおよ
びチオ置換脂肪酸類縁体基質化合物は、反応原料化合物
として所望の生成物の生成に適当なアルキルおよび脂肪
酸銀を選択し、同様の方法で製造できる。上述のタイプ
の反応はいずれも、有機溶媒中、還流温度で、所望の反
応が実質的に完了する１で行われる。 脂肪酸類縁体の製造は、本明細曹では特定の方法のみに
ついて説明するが、本発明の抗ウィルス化合物は特定の
＃漬方法に限足されるものではないことを理解すべきで
ある。 本発明の典型的な抗ウィルス化合物、すなわち１１−（
エチルチオラウンデカン酸では、脂肪酸銀へのチオエー
テル基の導入により、予期に反してまた篤くべきことに
、その疎水性および関連アシルペプチドおよび脂肪酸ア
シル蛋白質の疎水性が低下し、しかも酵素、ミリストイ
ルｃｏＡ：　Ｂ白ｔＢＮ−ミリストイルトランスフェラ
ーゼ（ＮＭＴ　）の基質として働く能力はその１１残っ
ていることが明らかにされた。この酵素の精製および便
用にライては、たとえば、ＴＯＷｌｅｒら：　Ｆｒｅｅ
、　Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　　８ａｉ、　　σｓＡ、　　８　４　　：
　　２７　０８〜２７１２（１９８７）：　　：ｒ、　
　Ｂｌｏｌ、ｃｈｅｍ、、２６２　　：　　１０３０〜
１０３６　（１９８７）に記載されている。 これらの脂肪酸類縁体によるウィルスの阻害方法は、２
種のレトロウィルス、すなわちヒト免疫不全症ウィルス
−１（ＨＩＶ−１）およびマロニーマウス白血病ウィル
ス（ＭＯＭＬＶ）の阻害によって例示する。これらのウ
ィルスはいずれも、集合なｇａｇポリ蛋白質前駆体のＮ
−ミリストイル化に依存している。 発明の詳細な説明 本明細書と（に特許請求の範囲には、本発明を形成する
主題が特定的に指摘され、それが明瞭に請求されている
が、添付図面を参照しながら以下の詳細な説明によって
、本発明はざら九理解が容易になるものと考えられる。 第１図は、酸素および硫黄置換ミリスチン酸誘辱体の、
Ｈ−９ｍ胞中ＨＩＶ−１の複製に対する作用をグラフで
表示しである。パネルＡ−Ｈ９細胞はＨＩＶ−１で急性
感染させ、１２−（メトキシ）ドラ”カン酸（１６−オ
キサミリスチン酸、ｏｌ３）。 １０−（プロボキタ）デカン酸（１１−オキサミリスチ
ン（Ｈ，ｏｌ　１　）、５−（オクチルオキシ）ペンタ
ン酸（６−オキサミリスチン酸０６）もしくは１１−（
エチルチオ）ウンデカン酸（１２−チアミリスチン酸、
８１２）筐たはドデカン酸を指示製置で血清中に含有す
る培地で８〜１０間処置した。培地は隔日に交換した。 これらの化合物のウィルス産生に対する作用は、細胞培
養上清のサンダル中の逆転写酵素（ＲＴ）活性を測定す
ることによって決定した。５μＭのアジドチミジン（Ａ
ＺＴ）を陽性対照として使用し１こ。陰性対照は、非添
加または０．１％エタノールとした。２回の検定結果を
平均した。パネルＢ−ＲＴ活性（非処置対照に対するパ
ーセント〕およびｐ２４抗原の存在（ＦＸＬＩ８Ａで測
定、ｎｇ／ｄ）で測定した１６−オキサミリスチン酸の
ＨＩＶ−１複製に対する濃度依存性の影響。誤差のバー
は６回の１１定位の８、　Ｆｉ、　Ｍ、を示す。パネル
Ｃ−１６−オキサミリスチン酸のシンシチウム形改に対
する影響を、以下の例１６のｆｆ科および方法の項に記
載した任意尺度を用いて示している。パネルＤ−１３−
オキサミＩＪスチン酸の毒性を生存細胞数（トリバンプ
ルー排泄）ならびに〔３Ｈ〕チミジンおよび〔３Ｈ〕ロ
イシン標識（以下の例１６の材料および方法の項参照）
によって測定した。これらの放射標識化合物のつり込み
は、１０日間の類縁体処置後のウェル中に含１れる総細
胞集団中で測定した。２回の測定を行い、結果を平均し
た。 第２図は、ミリスチン酸の酸素置換類縁体の、ＭＯＭＬ
Ｖ複製に対する作用を示すグラフである。パネルＡ　−
ＭＯＭＬＶ検定システムの工程図である。 ダイアダラムの左側にある円は（１）安定に統合され７
：　ＭＯＭＬＶ　Ｏ）パッケージング変異体ｐＭＯＶ−
Ｆテ、ｅｎｖの５′スプライスアクセプタ一部位に３５
０ｂｐの欠失とＰｒ　（５５ｇａｇ　）開始Ｍａｔ　：
ｒ　）”　ｙ　（ＡＵＧ）　、ｆＬらびに（ＩＩ）これ
らのパック−ソング配列を欠く第２の統合、組換えＤＮ
Ａ配列と８ｖ４０プロモーターの下流に大腸菌Ａａｃ　
Ｚ遺伝子を含有するＩ、Ｚ１ウィルス産生細胞を示す。 この細胞は、感染性の、複製欠損ウィルス（ＬＺＩと命
名）を産生し、このウィルスはＬａｃ　ｚ遺伝子をもっ
ている。ＬＺ１ウィルス産生細胞からの上清にＮ　Ｉ　
Ｈ３Ｔ５細胞を暴露すると、それらはまず感染され、そ
の子孫はβ−がラクトシダーゼに対する組織化学的染色
で検出できる。すなわち、様々な薬剤で処置したのちＬ
ＺＩ　Ｋよって産生されるウィルスの力価は、青色のＮ
工Ｈ３Ｔ３細胞数を計数することによって容易に測定で
きる。ｊａｃ　Ｚ遺伝子生成物は存在しないので、この
検定システムを用いても複製適格性のあるＭＯＭＬＶは
検出されない。パネルＢ−６−オキサミリスチ／酸およ
び１３−オキサミリスチン酸のＬＺｊウィルス産生に対
する作用。結果は、３回の独立した試験について各２回
のｉｌｌ！Ｉ定値の平均（＋１標準偏差）として示す。 パネルＣ−類縁体処置２日目の終わりに、トリバンプル
ー排泄で測定した生存ＬＺ１産生細胞数。２回り測定結
果を平均した。パネルクー類縁体処置の〔３Ｈ〕ロイシ
ン取り込みに対する作用。各２個のウエル中で細胞を、
類縁体″ｔたはエタノール（０，１％）と３日間インキ
ュベーションしたのち、４時間パルス標識した。測足を
２回実施した。結果を平均し、非処置細胞について得ら
れた結果に対するパーセントで表した。 本発明を以下の実施例１〜１１により、合成および本発
明の代表的化合物の抗ウィルス剤としての試験によって
、さらに詳細に例示する。 例１ １１−（エチルチオフランデカン故の合成エタンチオー
ル（０，２７９ｍ、　６．７７　ｍｍｏＪ。 Ａ’１ｄｒｉｃｈ　）および水酸化カリウム（、０，４
８６、Ｖ　。 ８．６６　ｍｍｏＬ）　ｔ７）無水：ｒ−１／−ｋ＜４
０ｗ１）中浴液に１１−ブロモウンデカン酸（１＆、３
．７７ｍｍｏｆ　、　Ａｌｄｒｉｃｈ　）　Ｙ　７／口
え、窒素気相下に５時間還流した。冷却し、ＨＣＪ、で
酸性にしにのち、溶媒を減圧下に除去すると白色の固体
が得られた。固体を酢酸エチルに溶解し、水で抽出した
。有機相′ｌｔ硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、溶
媒を減圧下に除去した。生成物をシリカｒルカラムクａ
マドグラフィーにより、溶出にはヘキサン中酢酸エチル
を増加させていく濃度勾配を用いて精製した。生氏物は
、２５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出した。溶媒を減圧
下に除去すると、１１−（エチルチオ）ウンデカン酸（
７６η、　８　’ｌ　）　カ？＋１−＋れた。融点５８
〜６１℃ ｌＨＮＭＲ（３Ｑ　Ｑ　ＭＨ２、０ＤＣＪ３　）δ１．
２４（ｔ。 ３■、　、Ｔ＝７．４．　Ｃ！）１３　）、　１．２０
〜１．４０　（ｂｍ。 １２Ｈ，メチレンエンベローゾ）、１．４８〜１．６７
（ｂｍ　、　４　Ｈ，Ｓ−０Ｈ２−弛Ｃｏｏ−ＣＨ，ヨ
２）、２．３３（ｔ、　２Ｈ，Ｊ＝７．５．　シーＣ０
ＯＨ）、２．４９（ｔ、　　　２ｇ、　　　Ｊ＝７．４
．　　８−ＣＨ二？−ＣＨ２）　、２．５１（ｑ、　２
）１．　Ｊ＝７．４．　ｓ−ｃ＋ａ、ＣＨ３）、　　１
　［１，５（ｂｒ、　Ｉ　Ｈ，Ｃ！ＯＯＨ）　、工３（
３ＮＭＲ（７５−４ＭＨ２。 ＣＤＣｊ３　）δ１４．８８．２４．７０．２５．９８
゜２８．９７．２９．０８．２９．２４ゝ、２９．３８
゜２９．４８．２９．６９．３１．７３．３４．１１゜
ｊ　８０．Ｑ　５　；　Ｍ８　、　ｒｎ／Ｚ　２４６　
（Ｍ”　、　５０　）　。 ２１７　（ｃｏｏ）Ｉ　（Ｃ！Ｈ２）１０３”　　７　
）、　１９９　（１００）。 １８１（７）　　　１６７（７）　　　１４９（６）１
１７’　　（７）、ｉｏｌ　　（９）、９７　　（９）
、８７（１４）、８５　　（１８）、７５　　（５４）
　　　６９（２９ン　、　　６２　　（１８）　　、　
　５５　　（３７）例２ １１−（エトキシ）ウンデカン酸の合成水酸化カリウム
（２，１３，１１’　、　３８．６ｍｍｏＪ　）ノ無水
エタノール（２０ｔｎり中溶液に１１−ブロモウンデカ
ン酸（２−２５！！、　８．４７　ｍｍｎＬ）　”ｒ：
ｎｏ　、ｔ、７時間還流した。滑動して

【（ｃｌで酸性
にしたのち、溶媒馨減圧下に除去すると白色の固体が得
られた。 このサンプルを酢酸エチルに溶解し、水で抽出した。有
機相を硫酸す）　ＩＪウム上で乾燥し、溶媒を減圧下に
除去した。生成物を、１％ジエチルエーテル１０．３％
ギ酸／メチレンクロリド中シリカゾルカラムクロマトグ
ラフィーによって精製した。 溶媒を減圧下に除去すると、１１−（エトキシ）ウンデ
カン酸（６８ＯＮ９．３５％）が得られた。 融点４４〜４５．５°Ｃ ”Ｋ　ＮＭＲ（３Ｑ　Ｑ　ＭＨ２，ＣＤＣＬ５）６１．
２０（ｔ。 ３　Ｈ，Ｊ＝７．０　、　ＯＨ３）　、　Ｃ２４〜Ｌ４
０　（ｂｉｎ。 １２Ｈ，メチレンエンベローゾ）、１．５２〜１．６８
（ｂｍ　＊　　４　Ｈ，０−０Ｈ２−ＣＨ２；　　ＣＨ
２−Ｃ１（２−０００Ｈ）。 ２．３４　（ｔ、　　２　）ｆ、　　Ｊ＝ニア、５　、
　　ＣＨ，−ＣＯＯＨ）　。 ３．４１　　（ｔ、　　２　Ｆ（、Ｊ＝７５．８．　０
−ＣＨ２−ＣＨ２）　。 ３．４８　（ｑ　、　２　Ｈ，：ｒ＝７．０．０−ＣＨ
２−ＣＨ３）　。 １０．２５　（ｂｒ、　　Ｉ　Ｈ’、　　Ｃ０ＯＨ）　
；　１３ｃＮＭＲ（７５，４ＭＨ２＋　　０ＤＣＬ３　
　）　δ　１　５．２７．７４．７５．２６．２３゜２
９．１１．２９．２６．２９．．１１０．２９．５５“
。 ２９．８０．３４．１　２．６６．０６．７［１，７６
゜１７９．７１　　；ｍ／ｚ　　２５１　（Ｍ＋Ｈ”　
）例−ト Ａ、　　６−チオチトラデカ／酸メチルエステルの、合
成 オクタンチオール（１；　２．９．Ｖ、　１９．８闘ｏ
１　）の乾燥ＴＨＢ′ｔ１９８ｗＬｌ）溶液にｏ　’ｃ
でｎ−ブーＦ−Ａ。 リチウム（８−３ｎｄ、　２２．１　ｍｍｏノンを滴下
Ｌ７ｊ。 ０℃で４０分間攪拌したのち、５−ブロモペンタン酸メ
チルエステル（２；　４．２　、！Ｖ　、　２１．６ｍ
ｍｏｊ）の乾燥ＴＨｐ（４３＋ｄ）溶液を適下し、生成
した不均一な混合物を室酷で一夜攪拌した。この混合物
を濃縮し、残留物乞エーテルと飽和ＮＨ４Ｃ’ｊに分配
した。水ｔｔｔｉ　ｙｘエーテルでもう一度抽出し、有
機抽出液を合わせて、食塩水で洗浄し、乾壊しくＭｇ８
０ｔ）　、　ａ　ｋｍ　Ｌ　ｒ：。減圧蒸留（１４０〜
ｂ（８６％ンが得られた。 ｌＨＮＭＲデータ、δ３．６３　（Ｂ、　５Ｈ，ＯＯＨ
＊　）：２．４８　（Ｑ　、　４　Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈ２
，０Ｈ２−８−ＯＨ２）　；２．３０　（ｔ　、　Ｊ　
−７，Ｕ　Ｋ２　、　ｃｌ（２ｃｏ２ａＨ３）　；　１
．７８〜ｋｌ！１８　（ｂｍ、　６１Ｊ、チオおよびエ
ステル基に対するβ−メチレン）；１．４３〜１．１３
（ｂ”。 １０　Ｈ、ＣＨ２）　；０−８５　（ｔ、Ｊ　＝６−６
　Ｈ２＋ＣＨ３）　ｔ　”Ｏ−ＮＭＲデータ：δ１７３
．７．５１．４゜３３．５．３２．１．３１．７．３Ｌ
６．２９．６゜２９．１　　（２）　　、　２９．０．
２８．８．２４．１　、２２．５゜１４．０ ６−チオナト２デカン酸メチルエステル（４，２５Ｍ　
、　１６．３　ｍｍｏｊ　）ノ乾燥メタノール（５５ｓ
ｄ）中溶液にＮａＯＨ（１−２４ｇ　＊　３１．０　”
”　）　Ｙ：　ＩＸＪえ、生成した混合物ケ還流させた
。５時間後、反応混合物を室温に冷却し、１００−の水
で希釈し、Ｉ　Ｍ　Ｈ”ｊでｐＨ３の酸性にした。この
酸性化溶液をエーテル（２ｘ）で抽出し、有機抽出液な
合わせて、水（２Ｋ）、食塩水（２ｘ）で洗浄し、乾燥
しくＭｇ５０４）　、濃縮した。カラムクロマドグラフ
イー（酢酸エチル−ペンタン、１：９）で残留物を精製
すると、生成物１．４，９．３５乎が得られた。 ”Ｈ−ＮＭＲデータ、δ２．４６　（ｑ　、　４　Ｈ、
、Ｔ＝７．６ＨｚＩ　ＣＨ２８ＣＨ２）　；　２．５３
　（ｔ、　２　Ｈ，：ｒ＝７．２ｇｚ、　０Ｈ２ＣＯ２
Ｈ）　；　１．７５〜１．４５　（１）ｍ、　６　Ｈ＋
チオおよび酸基に対するβ−Ｃ！Ｈ，，）　；　１．３
３〜１．１３　（ｂｅ、　１０Ｈ，ａＨ２）　ｓ　Ｌｌ
、８３　（ｔ。 ３　Ｈ、Ｊ”６．６　ＥＩＺ　、　　ＯＨ３）　；　”
’Ｏ−ＮＭＲデータ。 １７９．４．３３．５．３２．１　、３１．８．３１．
６゜２９．１　、２９．１　　（２）　、　２８．９　
　（２）　、　２３．８゜２２．６．１４．０；ｍ／Ｚ
　　（Ｋ１）：２４６．１４５（１００％）、１１３，
１０１，８８．６９水酸化カリウＡ　（２４，３１、４
３３ｍｍｏｊ　）のメタノール（２８０ｍ）中溶液に１
１−ブロモウンデカン酸（１０，Ｏｆｌ　、　３７−７
　ｍｏｎｏＪ）を加え、５時間還流した。冷却してＨ’
：’ｊで酸性にしたのち、溶媒を減圧下に除去した。サ
ンプルを酢酸エチルに浴解し、水で抽出した。有機相を
硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を減圧下に除去した。 生成物をシリカカラムクロマトグラフィーにより、溶出
にはヘキサン中酢酸エチルを増加させていく濃度勾配を
用いて、ＦＷ製した。生成物はヘキサ／中２５％酢酸エ
チルで溶出した。溶媒を減圧下に除去すると、１１−（
メトキシ］ウンデカン酸（２００１１１ｉ、２．５％）
が侮られた。融点３１〜３２℃ ｌＨ−ＮＭＲ（３Ｑ　Ｑ　Ｍｌ（Ｚ　、　ＣＤＣ１３）
δ１．１〜１．３（ｂｒｎ＊　１２　Ｈ＋メチレンエノ
ペローゾ）　、　１．４５〜１．６３（ｂｍ、４■、　
　０−ＣＨ２−９ム、咀−０Ｈ２−０００１）。 ２．３４　（ｔ、　２　Ｈ，Ｊ＝７．３　、０Ｈ２−０
００Ｈ）　。 ３．４５（８，３１（、ＣＨ３）　＋　３−５０　（ｔ
＊　２　Ｈ＊ｙ＝ｓ、８．ｏ−μ（２）　、　　１０．
７０　（ｂｒ　、　　Ｃｏ憇）　；”ｃ　ＮＭＲ（７５
，４ＭＨｚ　、　　ａＤＣｉ３）　δ２４．６　Ａ　。 ２６．００．　２９．００．　２９．１　６．　２９．
２９゜２９．４０，３４．００．　５８．２３．　７２
．８１　　。 １　７９．１　７　　；　　ｍ／ｚ　　２１　６　　（
Ｍ”）例５ １２−（メトキシ）ドデカン酸の合成 水酸化カリウム（１，６１，９、２８，６５ｍｍｎ−り
のメタノール（３０ｍ）中溶液に、１２−ブロモドデカ
ン酸（２，ＯＭ　、　７．１６　ｍｏｂ　）ｌ：ｗえ、
２０時間還流した。冷却してＩ（’Ｊで酸性にしたのち
、溶媒を減圧下に除去した。サンプルを酢酸エチルに溶
解し、水で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し
、溶媒を減圧下に除去した。生成物を１％ジエチルエー
テル１０．３％ｅｔｌＲ／メチレンクロリド中シリカカ
ラムシリカカラムクロマトグラフィー、１２−（メトキ
シ）ドデカン酸ｔｓ４゜岬、３９％）が得られた。融点
４５〜４７°Ｃ”ＨＮＭＲ（３Ｑ　（Ｊ　ＭＨｚ　、　
ＣＤ（δ３）６１．２０〜１．４５　（ｂｍ、　１３　
Ｈ，メチレンエンペａ−プ）。 １．５１〜１．６９　（ｂｍ、　４　Ｈ，ｏ−ｃｕ２−
ｃｐ、　。 忠バー０Ｈ２−Ｃｏｏｌ（）　、　　２．５４　（ｔ　
、　　２　Ｈ，Ｊ＝７．４゜０Ｈ２−０００Ｈ）　、　
３−３　４　　（’　　ｌ　３　　Ｈ−０−０Ｈｓ　　
）　。 ３．３８　　（ｔ、　　２Ｈ，：ｒ＝６．７　、　　Ｏ
−（！＋（２３，１０，９９（ｂｒ、　　ｊ　　Ｈ，０
ＯＯＨ）　　；　　１３ＣＮＭＲ（７５，４ＭＨ２゜Ｃ
Ｄ侃３　）δ　２４．７５．　２６．１　６．２９．１
　０゜２９．２７．２９．３８．２９．４４．２９．５
３゜３４．１　２．５８．５０．７２．９７，１　７９
．７０；ｍ／ｚ２３１（Ｍ＋　Ｈ”） 水酸化カリウム（２，４８１１、４４，２ｍｍｏｔ　）
の１−オクタツール（２０ｓｓ（）中溶液に５−ブロモ
ペンタンＨ（２ｊ／　、　　１１．Ｏｍｍｏｊ　）　ｙ
、；１１ｇえ、９７℃で２７時間攪拌した。冷却後、生
成物を…＝１において、酢酸エチルと水で抽出した。有
機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒ケ除去した。１−
オクタツールを短路（ＫｕｇｅｌｒＯｈｒ）蒸留（５０
〜７０’Ｇ　＊　０−５　ｍｍＨｇ）で除去した。オク
チルエステルの完全な切断を確実にする定め、残留物ン
メタノール／水／ＫＯＨ（５０％１３０％／　２．５　
＆　。 ４０−）と２５℃で３時間撹拌した。１−オクタツール
は一＝１２で酢酸エチル中に抽出された。 ５−（オクチルオキシ）ペンタンｆＩＲは、Ｈツで−を
１．５に調整すると水から酢酸エチル中に抽出された。 硫酸す）　ＩＪウム上で乾燥したのち、溶媒を減圧下に
除去した。１０％酢酸エチル／ヘキサン１０．３％イ酸
中シリカカラムクロマトグラフィーに付すと、５−（オ
クチルオキシ）ペンタン酸（２！＋５Ｍ９．９％）が得
られた。融点く６０℃ＩＨＮＭＲ（３（Ｊ　Ｑ　ＭＨｚ
　、　ＣＤＣｌ３）６０．８８　（ｔ　。 ３　Ｈ，Ｊ＝６．６　）　、　１．１８〜１．５９　（
ｂｍ、　ＩＯＨ。 メチレンエンベａ−プ）、Ｌ４８〜１．７７　（ｂｍ。 ６　ＥＩ　、　ｃｇ、ｃＨ２ｏｃａ２ジ、憇、（！Ｈ，
Ｃ０ＯＨ）　、　２．３９（ｔｏ　２Ｈ，、Ｔ＝７．１
　、ジＣ！ＯＯＨ）　、　３．３４〜３．４９　（ｂｍ
、　４Ｈ，ａＨ２ｏｃＨ２）、　１０．６６　（ｂｒ。 Ｉ　Ｈ、（３００Ｈ）　；　１３ＣＮＭＢ　（７５，４
ＭＨ２，ＣＤＣ，１３）１４．１８．２１．５９，２２
．７３．２６．２２゜２９．０５．２９．３２．２９．
５１．２９．７２゜３１．８９，３３．８５．７０．２
２．７１．０７゜１７９．５５　；ｍ／ｚ　２３１　（
Ｍ十Ｈ）例７ 水酸化カリウム（０，８９３Ｎ　、　１３．９　ｍｍｏ
Ｊ　）の１−ゾロパンチオール（３０ｍ）およびメタノ
ール（３０ｍ）中溶液に１０−ブロモデカン酸（１，０
ｇ　、　３．９８　ｍｍｏ）〕を加え、６９℃で１８時
間攪拌した。反応混合物に水２０−を加えたのち室温１
で放冷した。−二１の酸性にして酢酸エチルに抽出し、
有機相′％：硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に
除去すると、白色の結晶性粉末が得られた。生成物を８
％酢酸エチル／ヘキサン１０．６％イ酸中シリカカラム
クロマトグラフィーに付し、ついでヘキサンから再結晶
して精製すると、１０−（プロピルチオ）デカンｅＩＲ
（２１０ｍｌ。 ２１％）が得られた。融点４２〜４６．５℃ｌＨＮＭＲ
（３Ｑ　Ｑ　ＭＨｚ　、　ＣＤＣｌ３　）６０．９６（
ｔ。 ３　Ｈ，Ｊ＝７．３．　ｃｕ３　）、　　１．１３〜１
．４０　（ｂｍ。 １０Ｈ，メチレンエンペローフ’）、１．４９〜１．６
４（ｂｍ　、　（５Ｈ、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２８０Ｈ２Ｃ
Ｉ（２、０Ｈ２（！Ｈ２Ｏ００［（）。 ７−３２　（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７．６．　　ｃｔｉ２ｃｏ
ｏｔｉ　）１２−４０〜２．５５　　（ｂｍ、　　４　
　Ｈ、０Ｈ３０Ｈ２（！１（２ＳＣＨ２）。 １　０．９３　　（Ｂｒ、　　１　［（、ｃｏｏ旦）　
；　　”ＣＮＭＲ（７５，４ＭＨｚ　、０ＤＣＪ３　　
）　　δ　１　３−６４．’；’５−０９．２４．７１
゜２８．９６．２９．０７．　　？９．１　５．　２９
．７４゜２９．３６．２９．７７、　３２．１　６．　
３４．１　０゜５４−２８−１７９−９８　ｐ　ｍ／Ｚ
　２４７　（Ｍ　十Ｉ（）例８ １０−（ゾａボキシ）デカン酸の台底 水酸化カリウム（０，８９３，（／、１３．９ｍｍα）
のｎ−ゾロパノール（３０ｍ）中溶液に、１〇−ブロモ
デカン酸（１、Ｖ　、　３．９８　ｍｍｏ’　）　′？
：卯え、１０２℃で１８時間攪拌した。水２０−をＩＪ
Ｏえたのち、反応混合物を室温１で放冷した。−二１の
酸性にしたのち、酢酸エチルに抽出し、有機相を硫酸マ
グネシウム上で乾燥し、溶媒を減圧下に除去すると、黄
色の油状物が得られた。生成物乞、２優ゾエチルエーテ
ル／メチレンクロリド１０．２％ギ酸中、ついで７％酢
酸エチル／ヘキサン１０．３％ギ酸中、シリカカラムク
ロマドグラフイーによって精製した。ヘキサンから−２
０”Ｃで再結晶すると、１０−（ゾロボキシ）デカン酸
（７４岬、１２％）が得られた。融点く６０℃１１（Ｎ
ＭＲ（３Ｑ　Ｑ　ＭＨｇ、　ＣＤＣｌ−３）δ０．９１
　（ｔ。 ３　Ｈ，Ｊ＝７．５　、０Ｍ５　）ｔ　Ｌｌ　８〜１．
４０　（ｂｒ。 １０Ｈ，メチレンエンペａ−ゾ）　、１．４８〜１．６
７（ｂｍ　、　　（５Ｈ、ＣＦ］３０Ｈ２Ｃ！Ｈ２Ｏ０
Ｈ２０Ｈ２、０Ｈ２ＣＨ２（！００１：１　）。 ２．３３　　＜　　ｔ、２　ｇ、　　Ｊ＝７．４．（Ｈ
２ＣｏＯＥ４　）。 ５．５１〜３．４５　　（ｂｍ、　　４　Ｈ，ＣＨ２０
ＣＩＩ２　　）　。 １　０．３７　　（ｂｒ、　　Ｉ　　Ｈ，ｃｏａ旦）　
　；　　”ＯＮＭＲ（７５，４ＩＪＨ２，ＣＤ’ｒｉ３
　　）１　０．６７、　２２．９ｄ、　　２４．７２゜
２６、δ９．２９．０９，２９．２２．２９．４１゜２
９．７４　、５４．１１　、７０．８８　、７２．５３
　。 １７９−６９　；　ｍ／Ｚ　２３１　（Ｍ　十Ｈ）例？ １ｌ−（１−ブトヤシ）ウンデカン酸の合成水酸化カリ
ウム（Ｌ７　＆　、　３０．２　ｍｍｏ、ｔ　）の１−
ブタノール（２０ｍｌ　）中溶液に１１−ブロモウンデ
カン！！２　（２ｊｌ　、　　１７．５　ｍｍｏｊ　）
　’ｔｌＪＩＪえ、コ（７）溶液’！’４０℃で５時間
攪拌した。冷却後、反応混合物乞ｐＨ＝２において酢酸
エチルおよび水で抽出した。ついで有機相を飽和食塩水
で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下に除
去した。 生成物を２〜１０％酢酸エチル／ヘキサン１０．２％ギ
酸中シリカカラムクロマトグラフィーによって精製する
と、１ｌ−（１−ブトキシ）ウンデカン酸（３３６ｍ９
．１７％ンが得られた。融点２９〜６０．５℃ ＩＨＮＭＲ（３０（Ｉ　ＭＨ２、ＣＤＣｌ３）δｏ、８
４〜０．９６　（ｔ、　５　Ｈ，Ｊ＝７．３　、　ｃｌ
（３３，１，１８〜１．４６　（ｂｍ、　１４　Ｆｌ、
メチレンエンベロープ）。 １．４７〜１−６８　（ｂｍ　、　６　Ｈ、シＣＨ２０
（Ａｉ２ＣＡ１ｘ　。 ０Ｆ（２ＣＨ２０００Ｈ）＊　７−３１　（１−、７＋
（、（！Ｈ２ＣＯＯＨ）　。 ５．５２−３．４６　（ｂｍ、　４ＥＩ、　（Ｈ２００
Ｈ２）、１１．０２（’ｂｒ、　Ｉ　Ｈ，（１！０ＯＨ
）　；　１３ｃ＋ＮＭＲ（７５，４ＭＨ２゜ＣＤ’ｌ’
！３）δ１４．０２　、１９．４３　、２４．７４　。 ２６．２１．２９．１１．２９，２８，２９．３５゜２
９．５６．２９．６４．２９．７６．３１．８５゜３４
．１４，７ＣＬ６５．７（Ｊ、９４，１７９．８２；ｍ
７Ｍ　２５９　ＣＭ十Ｈ） 例１０ １０−（２−グロビンオキシ）デカン酸の合成プロパル
イルアルコール（６８ｍ、　１．１７　ｒｎｏｌ）に４
℃で水素化ナトリウム（４２（）ｖ、８．７５ｍｍｏ２
　）を加え、２５℃で！ＩＯ分間攪拌した。この混合物
に１０−プａモデカン酸（２，９，７，９６”Ｄｏ”　
）　’＆　７ＪＤえ、反応混合物乞９８℃で４８時間攪
拌した。反応混合物な−＝１において水および酢酸エチ
ルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥したの
ち、溶媒を減圧下に除去しに０生成物′？ニア〜ｉｏ＊
酢酸エチル／ヘキサン１０．３％イ酸酸中シリカゲルク
ツマドグラフィーついで１〜２．５％酢酸エチル／ベン
ゼン７０．３％ギ［中シリカデルカラムで精製すると、
１Ｏ−（２−プロピンオキシノデカン＃Ｒ（２４５■、
１４％］が得られた。融点く３０°Ｃ １［（ＮＭＲ（３Ｑ　Ｑ　ＭＨｚ　、　ＣＤＣＬ３　）
δ１．２５〜１−４２　（ｔａｒ、　Ｉ　ＱＨ，メチレ
ンエンペａ−シン。 １．５４〜１．７０　（ｂｍ、　４ｇ、　ａｃＨ２ｃＨ
２゜呈ａｎ２ｃｏｏｕ　）　、　２．３５　（ｔ　、　
２■、Ｊ＝７．４゜臘０００Ｈ）、２．４３（ｔ、ＩＨ
，！＝２．５゜ＨＣ”　Ｃ）　、３．５２　　（ｔ、２
　Ｈ、Ｊ　〜６−８　＊　０ＣＨｚ）。 ４．１　４（ｄ、　　２Ｈ，Ｊ＝２．５．　　ｃ＝＝ｃ
ｃＨｚｏ）。 １　０．４２　（ｂｒ、　　１　１（、（！０ＯＥＩ　
）　；　　”ｃ　ＮＭＲ（７５，４ＭＨ２、ＣＤＣｌ３
　　）　　δ　２４．６８．　２６．０６．　２９．０
４゜７９．１７．２９．３５”、２９．４６．３４．０
９゜５７．９５．７０．２２．７４．０９．７９．９０
゜１８０．０２；Ｉｌｌ／！　２２７（Ｍ＋）ｌ）以下
の実施例は、これらの脂肪酸類縁体基質の、２種のレト
ロウィルス、すなわちＨＩＶ−１およびＭ　ＯＭＬＶに
対する抗ウィルス活性を例示する。 剋１１− １２−（メトキシノドデカン＃１（１３−オキサミリス
チン＃Ｒ）、１０−（ゾロボキシ）デカン酸（１１−オ
キサミリスチンＩ！！り、５−（オクチルオキシ）ペン
タン酸（６−オキサミリスチン酸）。 および１１−（エチルチオ）ウンデカンｆＩＲ（１２−
チアミリスチン酸）ヲ上述の方法で製造しに０精製類縁
体、ＴＬＣ、融点（可能な揚台）　、’ＨＮＭＲ。 １３ｃ　ＮＭＲ＃　Ｊ：　ヒマススベクトルで同足した
。 ＥｌｒＶ−１複製に対するアッセイ： ヒトＴ−リンパ球細胞系■９はＲ，Ｄ、　Ｇａｌｌｏ氏
（Ｎ工Ｈ）から恵与され、１０係ウシ胎仔血清、１００
工σ／−ペニシリン、１００μｇ／−ストレプトマイシ
ンおよび２　ｍＭ　Ｌ−グルタずンを補光Ｌ７．：ＲＰ
ＭＩ　−１４５４０培地中に維持１．ＹＳ６ＥＩＸ’ｌ
−１株ＨＸＢ７ｇｐｔＸ　（Ｆｉｓｈｅｒら：　Ｂｃｌ
ｅｎｃｅ、　２３３　：６５５〜６５９．１９８６）は
、慢性的に感染させたＨ９細胞培養体から取得しくｐｏ
ｐｏｖｉｃも：５ｃｉｅｎｃｅ、　２２４　：　４９７
〜５００．１９８４　）、Ｑ、７　ｐｍ　Ｍｉｌｌｉｐ
Ｏｒ８　フィルターを通して濾過し、−９０°ＱＫ保存
した。保存ウィルスの力価は、Ｈ９細胞での感染性の指
標として、シンシチウム形放および逆転写酵素活性（下
記参照）を用（・、希釈系列によって画定し７Ｑ　６ 予め２　ｐｇ　／　ｗ　ｖ　ＰＯ１７ｂｒ８ｎｅ■（ヘ
キサゾメスレンデクミド、　Ｓｉｇｍａ　）で処理した
Ｈ９細胞１０７個に、無細胞系１（ＩＶ−１を、感染の
多重度（ｍ、　ｏ、　ｉｅ　）　３．０１〜０．００１
でｆｉｓ　７１０した。５７’Ｃで３０分間インキュベ
ートしてウィルスを吸収させたのち、４Ｘ１０５のウィ
ルス処理細胞を１−の新鮮培地（１０％ウシ胎仔血清、
ペニシリンおよびストレプトマイシン添７７０　）　’
％：２４ウ工ル組織培養プレー）　（Ｆａｌｃｏｎ）の
各ウェルに２１１１え、類縁体ｆｔ含有する無血清ＲＰ
Ｍニー１６４０培地の等・容と混合した。５％血清、抗
生物質土類縁体含有培地で融日に置換した。各ヘテロ原
子置換類縁体は１００％エタノール中Ｉ　Ｑ　ＯｍＭの
保存液としてｙＪ！４１１！！ｔ、、−９０℃＃Ｃ保存
し、部用時に無血清ＲＰＭニー１６４０培地で希釈した
。各種類縁体の希釈後の培地中の最大最終エタノール濃
度は０，１僑であった。したがって、０．１％エタノー
ル祭η口または非添加、非感染または感染Ｈ９細胞馨谷
試験の対照として使用した。エタノール単独でを工特記
丁べぎ作用は認められなかった。 各種（記号化）類縁体の予備スクリーニングは２回実施
したが、これを除く他の丁べてのアッセイは少なくとも
６回実施した。サングルは二組に試験し、各回ともアッ
セイを反復した。 ウィルスアッセイ： 処置８日目（ｍ、ｏ、ｉ　＝　０．０１　）　または処
置１００日目　ｍ、ｏ、ｉ、　＝　０．Ｑ　１　）に収
穫された細胞の上清溶液を用いてウィルスを定量化した
。培養上清をポリエチレングリコール（１３Ｑ　ｍＭ　
ＮａＣＪ。 Ｑ、１　ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド中６
０％）溶液で沈殿させて、ウィルス粒子’ｋｌＯ倍に濃
縮した。沈殿を可溶化し、ウィルス関連逆転写酵素（Ｉ
ＩＴ）活性を、ポリ（ｒＡ）−オリ−！′（ａ’ｒ）鋳
型を用いる〔″”Ｐ）ＴＴＰ取り込みによって測定し７
１：　（Ｐｎｉｅｓｚら：　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　
Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、σ８Ａ。 ７７：７４ｆ５　〜７．！１９．　　ｆ９８０）、ａ　
Ｉ＠上１’ｆｆは、ＤｕＰｏｎｔ　（Ｗｉｌｍｉｎｇｔ
ｏｎ、　Ｄｇ）のｐ２４ＥＬＩ８Ａを用い、ウィルス特
異的抗原についても試験した。 このアッセイでは抗原０．０３　ｎｇ　／−まで検出可
能である（抗原＝ｐ２Ａ、Ｈ工Ｖ−１の主構造ヌクレオ
カプシド蛋白質、ならびにその前駆体、　Ｐｒ５５”ｇ
）。 各ウェル中のシンシチウム数（工、４〜６日目（感染、
非処置対照培養）、８および９日目（類縁体またはデカ
ン酸処置培養）に顕微鏡検査によって測定した。１０低
倍率野（ＬＰＩＦ＝倍″４４Ｄ倍）あアこりの多核巨細
胞の平均数を計数し、補助シンシチウム尺＃：　：　０
＝（１／ＬＰＦ、　１＋＝１〜４／ＬＰ？、２＋＝５〜
７／ＬＰＦ、３＋＝８〜１０／ＬＰ？、４＋＝＞１０／
ＬＰＦに帰にさせｙ、、　、この基準では、非感染対照
細胞はシンクチウム０．感染、非装置Ｈ９細胞は常に４
＋と評価された。 感染ウィルス産生の迅速な！１１織化学的定月の定めに
ＬＺＩ力価アッセイを開発した。簡単に説明すると、Ｂ
ａｎｅｓら（ｇｕｎｏ　、ｒ、、　５　：　５１３５〜
３１４２．１９８６）によりｖ２細胞系からＬＺＩウィ
ルス産生細胞系が誘噂されｒ’：、　ａ　’　−２細胞
は、安定に統合されたＭｎＭＬＶのバラケージング変異
体（ｐＭＯＶ　−Ｆ　−）を含有するＮ工Ｈ３Ｔ３細胞
である。 この変異体を工、免ｎηの５′ドナ一スプライス部位と
ｐｒ　６５ｇａｇの開始メチオニンコドンの間の６５０
ヌクレオチドが欠失している（　Ｍａｎｎら：　Ｃｅ１
ｌ。 ３３　：　１３３〜１３９．１９８３　）。ＬＺＩ　ｍ
胞系は、ｐＭ−ＭｕＬＶ−Ｅ’１Ｖ−ＬａｃＺ　（Ｂａ
ｎｅａら：前出）およびｐｓＶＴＫ　ｎθｏＢでコトラ
ン７エクとされ、ついで０４１８　（Ｇｏｎｅｔｉｃｉ
ｎ＠　）抗生物質抵抗性ト、大腸菌β−ガラクトシダー
ゼ遺伝子を含む欠陥ＭＯ−ＭＬＶの産生（８ａｎ８８ら
：前出）によって選択されたｖ／−２細胞のサデクａ−
ンである。ＬＺ１細胞によって産生されろ組換えウィル
スはＮＩＨ５Ｔ５への一次感染が０Ｔ能であるが、複製
欠損株である（　５ａｎｅｓら：前出〕。Ｌａｃ　Ｚ遺
伝子を含む感染ＮＩＨ３Ｔ３はβ−ガラクトシダーゼ活
性に対する岨１城化学的染色によって確認でざる。 ＭＱＭＬＶ複製に対する類縁体処置の効果を評価するた
めには、ウシ血清（最終濃度＝Ｉ　Ｑ％　）、ペニシリ
ン（１００工Ｕ　／　ｔａｌ　）　、ストレプトマイシ
ン（１００μｇ／−）を言有し、類縁体（１０〜１００
μＭ）馨ｔｌｓ　ＩＪ（’−ｆたは非添加し１こダルベ
ツコの改良イーグル培地（ＤＭＥ）１７を含む２４−ウ
ェル［織ｔａ　養７’レートの谷ウェルにＩ　Ｘｌ　０
”　ＬＺ１陀生純生細胞えた０２４時間後に１培地ケ除
去し、新鮮な血清含有培地土類縁体を加えた。翌日（ブ
レーティング優４８時間）、ウィルス含有上清を採取し
、０．２μｍフィルターを通した。様々なサイズのサン
プル（ａ＃液１−の２５〜１００　ｐＪ−）を、１−の
ＤＭＥ／１０％ウシ血清／ペニシリン／ストレプトマイ
シン中Ｉ　Ｘ　１０’　Ｎ工Ｈ３Ｔ３細胞に加えた。こ
れらの指示細胞は、２４ウ工ル組織培養グレート中で２
４時間前から平板培養したものである。ｐ０１７ｂｒｅ
ｎａ　（Ｓｉｇｍａ　）を濾液と同時に、最終濃肚が１
０μｇ／−になるように添ｙ＋ａした。 感染２日後、ＮＩＨ３Ｔ３細胞をリン酸塩緩衝食塩溶液
（ＰＢＳ）で洗浄し、ＰＢＳ、ホルムアルデヒド（２％
〕およびグルグルアルデヒド（２％）を含有する各液中
２５　”Ｃで５分間固定した。細胞を次にＰＢＳ中で洗
浄しく２５°Ｃで２回）、４−クロｃＩ−５−プロモー
６−インドリル−β−がラクトシダーゼ（ｚ−ＧａＪ　
　、　　１　岬／ｍｌ　、　Ｂａｎｅｓら：前出参照）
、７エリシアン化カリ（５ｍＭ　）　、フェロシアン化
カリ（５ｍＭ　）およびＭｇＣｌ２とともにＰＢＳ中で
インキュベートしてβ−がラクトシダーゼ活性について
染色した。組織化学的反応混合物は細胞ととも罠、３７
°Ｃで６〜１４時間インキュベートシタ。次にβ−がラ
クトシダーゼ陽性青色細胞の谷ウェルあ１こりの数を解
剖顕微鏡を用いて測定した。試験は６回反復し、各回ご
とに２回アッセイを行っに０類縁体処置後の結果を、培
地に類縁体ｙ！′添加しなかった場合またはエタノール
（最終濃度０，１％）（Ｉｓ卯の場合の細胞で得られた
結果と比較した。 毒性試験： これらの分析は２つのアッセイ系で実施した。 細胞生存率はトリバンプルー排泄試験によって測定した
。処置培養液１−中の非染色細胞数を非処置培養中の非
染色細胞数で除し、対照パーセントとして表示した。蛋
白質合成は、処置期間の終わりに、Ｌ−（４，５−３［
（（Ｎ））−ロイシン（２μ０１／＋＋ｔ／培地、比活
性＝１４Ｄ　Ｃ！ｉ／ｍｍｏｊ　）Ｉｃ、Ｃつて４時間
代謝標識を行って測定した。２４ウエルプレートの与え
られたウェル中に會まれる全細胞を掻き取って回収し、
蛋白′ＸをでＧＡ（最終濃度１０％ンで沈殿させ、溶液
を５分間１００℃でインキュベートしたのち、ガラス繊
維フィルター（Ｗｈａｔｍａｎ）に通した。Ｉ（−９ア
ツセイの場合には、処置または非処Ｒ細胞を１０日間の
インキュベーションの終了時にパルス標識した。ＭｏＭ
ＬＶアッセイの場合には、Ｌｚ１ウィルス産生細胞につ
いて、２日の処置期間終了時に標識試験を実施した。さ
らに対照試験として、ウィルスには暴露されていないが
、培地（土類縁体）と２日間インキュベートシたＮ工ｌ
（３Ｔ３細胞について災施しアこ。 ＤＮＡ合取はＨ９アッセイの１０日間に測定した。 細胞を［５’−”ｉｎチミジｙ　（０，５ｐｃ１／ｗ、
比活性＝　２　ａ１／　ｍｍｏＪ　）で１２時間標識シ
タ、ウェル中の細Ｉｔｌ！１をすべて掻き落として回収
し、核酸をＴＣＡ（最終濃［１０％）で沈殿させ、ガラ
ス繊維フィルター上に収集したのちカウントした。 結果 一連の酸素および硫黄置換ミリスチン酸類縁体について
、ｃＤＪ＋　Ｈ−９ヒトＴ−リンパ球細胞系による■工
ｖ−１産生への影響を、上述のようにして、二重盲検方
式でスクリーニングした（ＰＯｐＯＶｉＧ＋−）：　５
ｃｉｅｎｃｅ、　２７４　：　４９７〜５００．１９８
４）。 細胞を上述のようにウィルスに暴露し、０．５〜１時間
後に類縁体（１〜１００μＭ）を添加しに０ウシ胎仔血
清土類縁体を含む培地を１０日間にわたり隔日に置換し
た。処置期間の終了時に、ウィルスの複製を逆転写酵素
の測定によって評価した。 二重盲検薬剤スクリーニングの結果を第１Ａ図に示す。 培地単独、培地プラスエタノール（０，１係）または？
カ／醒含有培地による処置に比較して、４１１の類縁体
はそれぞれ効果は異なるがＨＩＶ−１の産生を低下さ？
ることが明らかにされた。６−オキサミリスチン酸は最
も効果が低かった。逆転写酵素活性の低下（０，１％エ
タノール添加まＫは非添η口処置対照培養と比較して）
は、この類縁体１〜１０μＭのに囲の横組で１０日間イ
ンキュペートシＴこのちも全く認められなかった。 しかしながら、６−オキサミリスチン酸１００μＭでは
逆転写酵素（ＲＴ）の活性は対照の２０優に低下した。 さらに顕著な効果が、１〜１０μＭの１１＝オキサミリ
スチン酸および１３−オキサミリスチン酸ならびに１２
−チアミリスチン酸で認められた０１３−オキサミリス
チン酸は、最大の逆転写酵素活性低下作用を示し、１０
μＭで対照の２０優に、１００μＭで対照のく１０％に
酵素活性を低下させた。この阻害桿Ｉ＆は、Ｈ９「急性
」アッセイでウィルスの複製を９０％以上阻害する５μ
Ｍアジドチミジン（ＡＺＴ）で得られる値と類似してい
た。これに対し、１００μＭのドデカン酸はＲＴ活注を
対照の８０％に低下させたにすぎなかった。 １６−オキサミリスチン酸のＨ工Ｖ−１ｉ製に及ぼす作
用をさらに検討した。０．１μＭから１０し１μＭの間
で、逆転写酵素活性の用量依存性の低下が認められた（
第１Ｂ図）。さらに、ウィルスカシシト抗原（ｐ２４　
）の量をＩＩ、工ＥＩＡ検定を用いて同時に測定したと
ころ、逆転写酵素アッセイの結果とよく相関する類似の
用量反応が観察された（第１Ｂ図挿入図参照）。いずれ
の場合も、１３−オキサミリスチン酸は、２０〜４０μ
Ｍの範囲で、ウィルスの複製を９０％以下低下させるこ
とが明うかにされた。シンシチウムの低下も、逆転写酵
素およびｐ　２４　ＫＬ工日Ａアッセイの結果と平行し
ｚ（第１０図）。１６−オキサミリスチン酸のシンシチ
ウム形成に対する効果も、この培養系におけるＨＩＶ−
１の拡散と細胞変性効果の低下を同様に反映している。 ４０〜８０μＭ１３−オキサミリスチン酸によるシンシ
チウムの低下は５μＭＡＺＴＫよる結果と匹敵するもの
であったが、デカン酸または０．１暢エタノール単独で
を工、感染、非処ｆＭＨ９対照に比べ、シンシチウム数
への影響は認められなかった【第１Ｃ図、他のデータは
示していない】。 １６−オキサｉ　＋Ｊスチン酸の細胞毒性は６種の独立
の細胞生存能の検定を用いて分析した。第一に、生存細
胞数を、１０日の処置期間の終わりにトリバンプルー排
泄を用いて測定した。非処置、ＨＩＶ−１感染培養体中
の生存細胞百分率は、非処置、非感染細胞の場合に比較
して５０％低下した（第１図）。これを工、このＨ工Ｖ
−１株による細胞変性効果を反映するものである（　Ｒ
ａｔｎｅｒら：Ｎａｔｕｒｅ、　３１３　：　２７７〜
７８４　、　’１９８５　）。 １６−オキサミリスチン酸を感染Ｈ９培養液に添加した
ところ、生存細胞数の増加が観察され１こ。 ２０〜４０μＭの類縁体で、非処置対照の場合と同等の
細胞数が得られた。生存細胞数のこの「正常化」も、感
染ウィルスの産生の低下を反映するものである。ウィル
スの複製が阻害されたので、細胞変性作用も低下する。 この観察は、類縁体が細胞に対してｉ？ｉ接毒性？示す
ものではなかったことも示唆している。この仮説乞さら
に検討するために、類縁体の濃度馨上昇させた場合のＤ
ＮＡおよび蛋白質台底を測定した。［３Ｈ〕Ｃ’イシン
および〔３Ｈ〕チミジン標識の結果は細胞の生存ｒ−タ
と相関した（第１Ｄ図）。非感染Ｈ９細胞を月１いた別
個の代謝標識試験において、０．１〜１００μＭの１３
−オキサミリスチン酸は、生育速度、１には蛋白質もし
くはＤＮＡ合成速度に有意な影響を与えなかった。これ
らの結果を考え合わせろと、１３−オキサミリスチン酸
のＨ工Ｖ−１複製に対して観察された作用を工、細胞代
謝の非特異的な有害な変化によるものではないと思われ
る。 なる この検定には２撞の類縁体を使用した。Ｕ工ｖ−１複裂
アツセイで試験された４種の化合物中、最も効果の低か
った６−オキサミリスチン酸と、最も問い効果を示した
１６−オキサミリスチン酸である。これらの化合物のＭ
ＯＭＬＶ複製に対する作用を評価するために、新しいア
ッセイ系を開発した。 この糸の詳細についてを工上述し、第２Ａ図に例示した
とおりである。ＬＺ１ウィルスはＭＯＭＬＶから誘導さ
れた複製欠損株である。感染が起こっても、ウィルスの
Ｐ？ｉ殖はブロックされ、グロウイルスが最初に感染し
た細胞の子孫に局限される。このウィルスはまた、大腸
菌ＬａＣＺ遺伝子を有し、これが感染ウィルス産生の定
量マーカーとなる。ここに導入したＭ（’ＩＭＩＪＶア
ッセイ系では、ＬＺ１ウィルス産生細胞を異なる類縁体
で２日間処置した。ついで、Ｎ工Ｈ３’ｌ’３細胞を、
ＬＺ１ウィルス産生細胞から収穫した濾過培地のサンプ
ルに暴露し、得られたフォーカスンβ−がラクトシダー
ゼに対する組織化学的染色によって同定した。ウィルス
複製に対する薬剤の効果は、処置培養液から調製された
濾液によって生じるフォーカス（青色細胞）の数を、非
処置対照によって生じるフォーカスと比較することによ
って決定できる。第２Ｂ図に示すように、１３−オキサ
ミリスチン酸は１００μＭまでの濃度ではウィルスの複
製に何ら影響を与えなかった。一方、Ｈ工Ｖ−１複製に
作用しなかつた６−オキサミリスチン酸を工、ＭＯＭＬ
Ｖの複製乞、濃度依存性の方式で阻害する。すなわち、
１０μＭで４０％の低下が認められ、１００μＭでは６
０％以上のウィルス力価の乎均低下を生じた。エタノー
ル（０，１％）およびデカンｅ（１０〜１００μＭ）で
は、非処置対照に比べて有意な低下を生じなかった。 ＨＩＶ−１７ツセイ系について記載したのと類似の毒性
試験を実施した。生存ＬＺ１ウィルス産生細胞数および
Ｎ工Ｈ３Ｔ３ｒレポーター」は、各種処置群と非処置対
照の間で〈２０優の差を示すのみであった（第２Ｃ図、
他のデータは示していない）。〔３）（〕ロロインによ
るパルス標識試験では、非処置対照に比較して処ｆ＃１
ＬＺ１細胞で蛋白質の合成ＶＣ１０〜４０％の低下が認
められた。しかしながら、類縁体、０．１％エタノール
または１０〜１００μＭデカン酸処置細胞の間に有意差
は認められなかったことから、上述の低下は多分非特異
的なものと考えられる。２日間類縁体で処置したＮ工Ｈ
３Ｔ３細胞の〔３Ｈ〕ロイシン標識試験では、対照細胞
に比較して有意な差は認められなかった（〈１０％）。 本発明の抗ウィルス剤は、レトロウィルス等に感染した
哺乳類宿主に、ｔｘ用用法法より、好１しくは医薬的に
許容される希釈剤および担体との組成物として投与する
ために使用できる。投与される活性薬剤の葉は、有効量
、すなわち医療的に有効な量であるが、その利用の利益
以上の毒性作用を示さない量でなければならない。成人
ヒトにおける用量は、通常、活性化合物的１１１Ｐ’ｊ
ｌ：はそれ以上と考えられる。適当な投与経路は経口投
与で、カプセル、錠剤、シロッノ、エリキシール等とし
て投与されるが、非経口投与経路も利用できる。 活性化合物を医薬的に許容される希釈剤および担体中に
投与剤形とした適当な組成物、この領域における一投的
参考書、たとえばＲθｍ１Ｊｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｃｉｅｎｃｅｓ、　Ａｒｔｈｕｒ　
０ｓｏ１編、１６版、　１９８０　、　Ｍａｃｋ　ｐｕ
ｂｌｉｓｈｉｎｇ　ｃｏｌＥａｓｔｏｎ。 ＰＡ　Ｆｉｌ’参考に製造することができる。 ペプチド配列の確認のためには本明細曹で（工、以下の
標準アミノ酸略号を使用する。 Ｌ−アラニン　　　　　　Ａｚａまたは　ＡＬ−アルギ
ニン　　　　　　Ａｒｇまたは　ＲＬ−アスパラギン　
　　　　Ａａｎまたは　ＮＬ−アスパラギン酸　　　　
ＡＢｐｊたは　ＤＬ−グルタミン　　　　　Ｇｕｎ　ｊ
たは　ＱＬ−グリシン　　　　　　　ａｔｙｔたは　Ｇ
Ｌ−ロイシン　　　　　　　Ｌθｕ４には　ＬＬ−リジ
ン　　　　　　　Ｌ７ｇまたは　ＫＬ−グロリン　　　
　　　　ｐｒｏまたは　ＰＬ−セリン　　　　　　　ｓ
ｅｒまたは　ＳＬ−チロシン　　　　　　　Ｔｙｒまた
）工　ＹＬ　−ハＩＪ　７　　　　　　　Ｖａ２　ｊａ
ｙは７例はすべて、本発明の特許請求の範囲に包宮され
ろものである。

【図面の簡単な説明】

第１Ａ図、第１Ｂ図、第１Ｃ図及び第１Ｄ図は、本発明
の酸素および硫ＲＩＰｔ＠ミ＋）スチン酸類鰍体の、Ｈ
９細胞中ｅこおけるｕｒｖ−ｉの複製に対する作用の試
験結果を示すグラフであり、第２Ａ図、第２Ｂ図、第２
Ｃ図及び第２Ｄ図は、本発明の酸素および硫黄置換ミＩ
Ｊステン酸類縁体の、ＭＯ）ｌＬＶの複製に対する作用
の試験の方法の概略およびその結果を示す図である。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）ウィルスに感染した哺乳動物宿主中のウィルスを
   阻害する方法において、通常炭素位置４〜１３のメチレ
   ン基が酸素または硫黄に置換されているＣ＿１＿３また
   はＣ＿１＿４脂肪酸またはそのアルキルエステルから選
   ばれるミリストイル化酵素のオキシまたはチオ置換脂肪
   酸類縁体基質のウィルス阻害有効量を上記宿主に投与す
   る方法
2. （２）脂肪酸類縁体のメチレン基は酸素で置換されてい
   る請求項（１）記載の方法
3. （３）脂肪酸類縁体のメチレン基は硫黄で置換されてい
   る請求項（１）記載の方法
4. （４）脂肪酸類縁体中の脂肪酸は飽和Ｃ＿１＿３または
   Ｃ＿１＿４脂肪酸である請求項（１）記載の方法
5. （５）ウィルスはレトロウィルスである請求項（１）記
   載の方法
6. （６）レトロウイルスはＨＩＶ−１である請求項（５）
   記載の方法
7. （７）レトロウイルスはＭＯＭＬＶである請求項（５）
   記載の方法
8. （８）脂肪酸類縁体は１２−（メトキシ）ドデカン酸で
   ある請求項（６）記載の方法
9. （９）脂肪酸類縁体は５−（オクチルオキシ）ペンタン
   酸である請求項（７）記載の方法