JPH0714913B2

JPH0714913B2 - 興奮性アミノ酸神経伝達物質に対する拮抗薬として有用なポリアミン

Info

Publication number: JPH0714913B2
Application number: JP2418815A
Authority: JP
Inventors: ニコラス・アレックス・サッコマノ; ロバート・アルフレッド・フォルクマン
Original assignee: フアイザー・インコーポレイテツド; ナチュラル・プロダクト・サイエンスィズ・インコーポレーテッド
Priority date: 1990-01-02
Filing date: 1990-12-28
Publication date: 1995-02-22
Anticipated expiration: 2010-02-22
Also published as: NO173733C; ES2083439T3; NO905616L; KR910014123A; US5037846A; FI906466L; NZ236550A; PL165647B1; AU1592692A; IE70757B1; YU247590A; CA2033480A1; PH27608A; FI906466A0; NO905616D0; FI93644B; EP0436332A2; MY104588A; IE904734A1; JPH04210677A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、クモの一種であるアゲ
レノプシス・アペルタ(Agelenopsis aperta)の毒液中に
存在することが見いだされた特定のポリアミンに関す
る。これらのポリアミンおよびそれらの薬学的に許容さ
れる塩は、無脊椎動物および脊椎動物を含めた様々な生
物の神経細胞等の細胞に影響を及ぼす興奮性アミノ酸神
経伝達物質に対する拮抗物質である。本発明のポリアミ
ンおよびそれらの薬学的に許容される塩は興奮性アミノ
酸神経伝達物質が仲介する哺乳動物の病気および症状の
治療において、そして無脊椎動物の毒虫の防除におい
て、生物の神経系の細胞等に影響を及ぼす興奮性アミノ
酸神経伝達物質に対する拮抗物質として使用できる。

【０００２】

【従来の技術】クモの一種であるアゲレノプシス・アペ
ルタ（Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓａｐｅｒｔａ）の毒液
には、カルシウムの流れに影響を及ぼす少なくとも２種
の毒素が含まれていることが報告されている［ジャクソ
ン、Ｈ．等のＳｏｃ．Ｎｅｕ．Ｓｃｉ．Ａｂｓｔｒ．、
12：１０７８（１９８７）］。著者等は、その中でＡＧ
２と呼んでいる毒素について述べている。これは分子量
が１、０００ドルトン未満であり、そして広範囲な組織
におけるカルシウムの流れを抑制すると考えられるもの
である。さらに、ジャクソン、Ｈ．等は分子量が約６、
０００の成分よりなるアゲレノプシス・アペルタ（Agel
enopsis aperta）からの別の毒素について述べてい
る。この毒素は、シナプス前部の伝達を遮断することが
記されており、そしてこの毒素は、神経伝達物質の放出
に関連したカルシウムの経路を遮断すると記載されてい
る。

【０００３】クモの一種であるアゲレノプシス・アペル
タ（Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓａｐｅｒｔａ）の毒液中
に存在することが見いだされた特定のポリアミンについ
ては、１９８９年４月２８日付けの米国特許出願第０７
／３４６、１８１号に記載されている。これらのポリア
ミンおよびこれらの薬学的に許容される塩は、細胞内の
興奮性アミノ酸受容体の遮断体として記載されており、
そしてＢ_１とあるポリアミンの１種も、細胞内のカルシ
ウム経路遮断体として記載されている。これらのポリア
ミンは次のように記されている：ＡＧＥＬ４５２：

【化４】ＡＧＥＬ４６８：

【化５】ＡＧＥＬ４４８：

【化６】ＡＧＥＬ５０５：

【化７】ＡＧＥＬ４８９：

【化８】ＡＧＥＬ５０４：下記の特徴を有する化合物：（ａ）Ｃ−１８ヴァイダック（Ｖｙｄａｃ、商標）２２
ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ３００Å、粒度１０μの
カラムで、流速１５ｍｌ／分および５％→２０％Ｂ、９
５％→８０％Ａ［０→３０分］、次に２０％→７０％
Ｂ、８０％→３０％ＢＡ［３０→５５分］（式中、Ａは
０．１％水性ＴＦＡであり、Ｂはアセトニトリルであ
る）の線勾配プログラムを用いた溶剤系を使用し、約２
２．７５分で溶離した、クモの１種であるアゲレノプシ
ス・アペルタ（Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓａｐｅｒｔ
ａ）の粗毒液からの分画中に存在し、（ｂ）Ｃ−１８ヴァイダック（Ｖｙｄａｃ、商標）２２
ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ３００Å、粒度１０μの
カラムで流速１５ｍｌ／分、および０％→０％Ｂ、１０
０％→１００％Ａ［０→５分］、次に０％→１０％Ｂ、
１００％→９０％Ａ［５→２０分］（ウォーターズ曲線
１）、次に１０％→２０％Ｂ、９０％→８０％Ａ［２０
→３０分］（ウォーターズ曲線６）、次に２０％→５０
％Ｂ、８０％→５０％Ａ［３０→４０分］（ウォーター
ズ曲線１１）（式中、Ａは０．１％水性ＴＦＡであり、
Ｂはアセトニトリルである）の非線勾配プログラムを用
いた溶剤系を使用し、約２１．５分で溶離した、上記
（ａ）に記載の分画中に存在し、（ｃ）ＦＡＢＭＳ：高分解能：Ｃ_２７Ｈ_４８Ｎ_６Ｏ_３
として計算された理論値５０５．３８６１。

【０００４】興奮性アミノ酸神経伝達物質に対する拮抗
物質である化合物は、様々な用途を有する。興奮性アミ
ノ酸神経伝達物質に対する拮抗物質は、とりわけ血栓
症、大脳虚血、アルツハイマー症およびてんかんのよう
なニューロン変性疾患等の症状の治療における臨床的な
用途および精神療法物質として臨床的な用途を見出だす
ことができる（「健康および疾患における興奮性アミノ
酸（ＥｘｃｉｔａｔｏｒｙＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ
ｉｎＨｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅ）」、
Ｄ．ロッジ、ジョン・ウイリー・アンド・サンズ社、ニ
ューヨーク州１９８８、ニューヨークを参照）。さら
に、そのような化合物はニューロン細胞のような細胞の
生理についての研究および無脊椎毒虫の防除に有用であ
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、クモの１種で
あるアゲレノプシス・アペルタ（Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉ
ｓａｐｅｒｔａ）の毒液中に存在することが見出ださ
れた特定のポリアミンに関する。本発明のポリアミンは
次の通りである：ＡＧＥＬ４１６：

【化９】ＡＧＥＬ４６４：

【化１０】ＡＧＥＬ４８９（Ａ）：

【化１１】ＡＧＥＬ５２１：

【化１２】

【０００６】本発明のポリアミンおよびこれらの薬学的
に許容される塩は、細胞に影響を及ぼす興奮性アミノ酸
神経伝達物質に対する拮抗物椎である。すなわち、これ
らのポリアミンはそれ自体で、そのような興奮性アミノ
酸神経伝達物質に対して拮抗するのに有用な化合物であ
る。本発明のポリアミンはまた、無脊椎毒虫の防除にお
よび興奮性アミノ酸神経伝達物質によって仲介される哺
乳動物における疾患および症状の治療に有用である。上
記ポリアミンはまた、哺乳動物の精神療法物質としても
有用である。

【０００７】本発明はまた、前記ポリアミンよりなる薬
剤組成物および前記ポリアミンの投与方法に関する。

【０００８】毒液は、この技術分野で周知の標準的な方
法に従う電気刺激によってしぼり出す方法で、クモの１
種であるアゲレノプシス・アペルタ（Ａｇｅｌｅｎｏｐ
ｓｉｓａｐｅｒｔａ）から得る。用いる方法は、、毒
液全体が、腹部からの吐出液または血液リンパによって
汚染されないようにするものが好ましい。そのような方
法は、この技術分野では周知である。このようにして得
た毒液全体は、下記のような精製に使用するまで、約−
７８℃の冷凍状態で貯蔵する。

【０００９】毒液全体の成分の精製は、Ｃ−４およびＣ
−８ヴァイダックカラム（レイニン・インスツルメント
社、マサチューセッツ州０１８０１、ウォバーン（Ｗｏ
ｂｕｒｎ）、マックロード）、Ｃ−１８ベイカーカラム
（Ｊ．Ｔ．ベーカー社、ニュージャージー州０８８６
５、フィリップスバーグ、レッドスクールレイン２２）
およびダイナマックスフェニルカラム（レイニン・イン
スツルメント社、マサチューセッツ州０１８０１、ウォ
バーン、マックロード）のような様々な調製用および半
調製用カラムでの、逆相高性能液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）によって行なう。ピークの検出は２２０−
２３０ｎｍの単色で行なった。分画はさらに、例えばウ
ォーターズ９９０ダイオードアレー検出器（ミリポール
社、ウォーターズ・クロマトグラフィー・ディビジョ
ン、マサチューセッツ州０１７５７、ミルフォード、メ
イプルストリート３４）で集めた多色ＵＶデータを用い
て分析することができる。カラムからの分画は、例えば
ＩＳＣＯ／“ＦＯＸＹ”分画コレクターおよびＩＳＣＯ
２１５９ピーク検出器（ＩＳＣＯ、ネブラスカ州６８５
０４、リンカン、スペリアー４７００）を使用する公知
の方法によって集める。分画は無菌ポリエチレン実験器
具のような適当な大きさの容器に集める。次に分画を、
溶離剤から凍結乾燥し、続いて水から凍結乾燥すること
によって濃縮する。得られた構成成分の純度は、分画の
最終精製に用いるシステムより均等な（ｉｓｏｃｒａａ
ｔｉｃ）勾配システムを用いる分析カラムでのクロマト
グラフィー分析によって測定することができる。

【００１０】各分画の構造は、質量分析および核磁気共
鳴のような公知の分析法によって測定する。

【００１１】本発明を実施し、上記の一般的な手順を用
いる際、毒液の初期分別に適したカラムは、Ｃ−１８ヴ
ァイダック（２２ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ３００
Å、粒度１０μ）のカラムであることを見出だした。こ
のカラムは１００％→８０％Ａ、０％→２０％Ｂ［０→
３０分］［Ａは０．１％水性トリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）であり、Ｂはアセトニトリルである］の線勾配プロ
グラムを用いて、１５ｍｌ／分の流速で溶離する。分画
を上記のように集める。このようにして得た６種の分画
（ここでは分画１、２、３、４、５および６とする）を
さらに行なう分析および／または精製のために選んだ。
毒液全体を分別する別の方法は、Ｃ−１８ベーカー
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ１００Å、粒度
５μ）カラムで流速１ｍｌ／分そして８％Ｂ、９２％Ａ
（ＡおよびＢは上記の通りである）の均等な条件を用い
て溶離するものである。しかしながら、本発明の目的の
ためには、Ｃ−１８ヴァイダックおよび上記の手順を用
いて、毒液全体の初期分別を行なうのが好ましい。

【００１２】分画１、２および３は、米国特許出願第０
７／３４６、１８１号に記載のポリアミンよりなり、本
発明のものではないことが分かった。分画４、５および
６は様々なカラムおよび条件を用いてさらに精製する。
それぞれの二次分別の詳細および結果は下記の実施例
２、３および４に示す。

【００１３】下記実施例に示すように、分画ＡＧＥＬ４
１６、ＡＧＥＬ４６４、ＡＧＥＬ４８９（Ａ）およびＡ
ＧＥＬ５２１が含むポリアミン化合物は以下の通りであ
る：ＡＧＥＬ４１６：

【化１３】ＡＧＥＬ４６４：

【化１４】ＡＧＥＬ４８９（Ａ）：

【化１５】ＡＧＥＬ５２１：

【化１６】

【００１４】分画ＡＧＥＬ４１６、ＡＧＥＬ４６４、Ａ
ＧＥＬ４８９（Ａ）およびＡＧＥＬ５２１中に存在する
化合物に関する利点を挙げたが、このたび上記の化合物
をアゲレノプシス・アペルタ（Agelenopsis aperta）
の毒液全体から単離／精製することによる方法以外の方
法によって得ることが可能になった。そのような方法の
すべては本発明の範囲に入るものである。例えば、本発
明のポリアミン化合物は、合成法によって直接製造する
ことができる。

【００１５】式：

【化１７】の本発明のポリアミンを製造するための合成式を、下記
の反応式Ａ−Ｃに示す。反応経路Ａ

【化１８】

【化１９】

【化２０】

【００１６】反応式Ａによると、式ＩＶのポリアミン中
間体化合物は、ジアミノブタンで始まる一連の工程によ
って製造される。反応式Ａによって式ＶＩＩＩのポリア
ミン中間体化合物を製造するのに適した反応条件は、実
施例５のＡ−Ｇに示す。反応式Ｂは、式ＩＸの中間体化
合物の製造法を示すものである。反応式Ｂによってこの
中間体を製造するのに適した反応条件は、実施例５のＨ
に示す。式ＸＩＩの本発明のポリアミン化合物の製造に
ついては、反応式Ｃに示す。式ＶＩＩＩおよびＩＸの中
間体化合物のカップリングおよびその後の式ＸＩＩの化
合物の製造に適した反応条件は、実施例５のＩ−Ｋに示
す。

【００１７】

【作用】本発明のポリアミンは、無脊椎動物および脊椎
動物を含めた様々な生物の神経系細胞等のような細胞に
影響を及ぼす興奮性アミノ酸神経伝達物質に対して、可
逆的に拮抗する。ここで使用する「脊椎動物」は、哺乳
動物を含めたものを意味する。ここで使用する「無脊椎
動物」は、例えば昆虫、外部寄生虫および内部寄生虫を
含めたものを意味する。

【００１８】本発明のポリアミンが興奮性アミノ酸神経
伝達物質に対して拮抗する能力は、下記の手順による、
生れてまもないラットの小脳内におけるＮ−メチル−Ｄ
−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）によって誘導されたｃＧ
ＭＰの上昇を妨げる能力により証明される。生後８−１
４日のウイスターラットの小脳をすばやく切り取り、４
℃にしておく。クレブス／炭酸水素塩緩衝液を加えてｐ
Ｈ７．４に保ち、マッキルウエイン（ＭｃＩｌｗａｉ
ｎ）組織チョッパー（ニックル・ラボラトリー・エンジ
ニア社、英国、サリー、ゴムシャール）を用いて０．５
ｍｍ×０．５ｍｍの切片に切る。得られた小脳の試験片
を３７℃の１００ｍｌのクレブス／炭酸水素塩緩衝液に
移し、９０：５のＯ_２／ＣＯ_２で連続的に平衡にする。
小脳試験片をこのような方法で９０分間、緩衝液を３回
変えて培養する。緩衝液をデカントし、組織を遠心分離
し（１分、３２００ｒ．ｐ．ｍ．）、そして２０ｍｌの
クレブス／炭酸水素塩緩衝液に再懸濁させる。次に、２
５０μｌのアリコート（約２ｍｇ）を取り出し、１．５
ｍｌのミクロファージ管に入れる。これらの管にストッ
ク溶液からの１０μｌの試験化合物を、続いて１０μｌ
のＮＭＤＡの２．５ｍＭ溶液を加えて、反応を開始す
る。最終ＮＭＤＡ濃度は１００μＭである。対照にはＮ
ＭＤＡを加えない。管は振盪水浴中で３７℃にて１分間
培養し、次に７５０μｌの５０ｍＭトリス−Ｃ１、５ｍ
ＭＥＤＴＡ溶液を加えて反応を停止させる。管をただ
ちに５分間、沸騰水に入れる。その後、各管の内容物を
出力レベル３にセットしたプローブ音波破砕器を用いて
１５秒間音波破砕を行なう。１０μｌを取り出し、ロウ
リーの方法［Ｌｏｗｒｙ、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．、１００：２０１−２０２（１９７９）」によって
タンパン質を測定する。次に、管を遠心分離し（５分、
１０、０００ｘｇ）、１００μｌの上澄み液を取り出
し、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）の量をニューイングランド
・ニュークリア（マサチューセッツ州、ボストン）ｃＧ
ＭＰＲＩＡ試験を用いて分析する。データは、タンパ
ク質１ｍｇ当たり、生じたｃＧＭＰのｐｍｏｌｅで示し
た。

【００１９】さらに、本発明のポリアミンが興奮性アミ
ノ酸神経伝達物質に対して拮抗する能力は、以下の手順
に従って、ＮＭＤＡ／グリシンによって誘導される、解
離した小脳顆粒細胞内の細胞質ゾルの遊離［Ｃａ^＋２］
_ｉの増加を妨げる能力によって証明される。小脳顆粒細
胞は生後８日のラットの小脳から準備する［ウイルキ
ン、Ｇ．Ｐ．等、ＢｒａｉｎＲｅｓ：１１５：１８１
−１９９（１９７６）］。正方形（１ｃｍ^２）のアクラ
ー（Ａｃｌａｒ）（プロプラスチック社、ニュージャー
ジー州０７７１９、ウォール、インダストリアル・アベ
ニュー５０３３）にポリ−Ｌ−リシンを塗布し、１ｍｌ
のイーグルバーゼル培地の入った１２の穴を有する皿に
入れる。細胞を解離させ、６．２５×１０^６の細胞を含
むアリコートを、正方形のアクラーを含む各穴に加え
る。シトシン−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシド（最終
濃度１０μＭ）を平板培養後２４時間して加える。細胞
は６、７および８日間の培養でフラ２分析する。細胞
（正方形のアクラーに付着した細胞）を、ＨＥＰＥＳ緩
衝液（０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％デキスト
ロース、ｐＨ７．４、マグネシウム非含有）に１ｍｌの
２μＭフラ２／ＡＭ（モレキュラー・プローブ社、オレ
ゴン州９７４０２、ユージーン）を加えたものが入った
１２の穴を有する皿に移す。細胞を３７℃で４０分間培
養し；フラ２／ＡＭを含む緩衝液を除き、フラ２／ＡＭ
を含まない同じ緩衝液１ｍｌに置き換える。石英キュベ
ットに２．０ｍｌの予熱した（３７℃）緩衝液を加え
る。アクラー上の細胞をキュベットに入れ、キュベット
を磁気撹拌機を備えた温度調節した（３７℃）ホルダー
に挿入し、蛍光分光計（バイオメディカル・インスツル
メント・グループ、ペンシルバニア大学）で蛍光を測定
する。蛍光シグナルは約２分間安定化させる。

【００２０】蛍光の増加で表される細胞質ゾルの遊離カ
ルシウムの増加は、５０μＭのＮＭＤＡおよび１μＭの
グリシンを添加することによって得られる。次に、適当
な濃度の、リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中
の試験化合物ストック溶液５−２０μＭを、キュベット
に加える。蛍光シグナルの目盛り定めおよびフラ２／Ａ
Ｍ漏れ補正は、グリンキーウィツ（Ｇｒｙｎｋｉｅｗｉ
ｃｚ）、Ｇ等のＪ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．、260：３４４
０（１９８５）の確立された方法を用いて行なう。各試
験の完了後、最大蛍光値（Ｆ_ｍａｘ）はイオノマイシン
（３５μＭ）を添加することによって測定し、そして最
小蛍光値（Ｆ_ｍａｘ）はその後ＥＧＴＡ（１２μＭ）を
添加してカルシウムをキレート化することによって測定
する。前記の方法を用いると、対象の化合物が興奮性ア
ミノ酸神経伝達物質に対して拮抗する能力が、対象の化
合物の添加時の蛍光の減少によって示される。。

【００２１】本発明のポリアミンは、興奮性アミノ酸神
経伝達物質に対して拮抗するのに有用な化合物である。
それ故、ポリアミンはまた無脊椎毒虫の防除におよび興
奮性アミノ神経伝達物質が仲立ちとなる血栓症、大脳虚
血、アルツハイマー症およびてんかんのようなニュート
ロン変性疾患等の哺乳動物における疾患および症状の治
療に有用である。上記ポリアミンはまた、哺乳動物の精
神療法物質としても有用である。さらに、ポリアミン
は、神経系の細胞（これに限定されないが）を含めた細
胞の生理の研究に有用である。

【００２２】また、本発明のポリアミンの薬学的に許容
される塩も本発明の範囲に入るものである。そのような
塩は、この技術分野に詳しい人々によく知られた方法で
形成される。例えば、ポリアミンの酸付加塩は、一般的
な方法に従って製造することができる。ポリアミンの塩
酸およびトリフルオロ酢酸付加塩のような酸付加塩が好
ましい。ポリアミンの塩酸付加塩が特に好ましい。

【００２３】本発明のポリアミンまたはその薬学的に許
容される塩を哺乳動物に投与する場合、これを単独で、
または薬学的に許容される担体または希釈剤と標準的な
薬学的慣行に従う薬剤組成物の形に組合せて投与するこ
とができる。ポリアミンまたはこれらの薬学的に許容さ
れる塩は経口的にまたは非経口的に投与することができ
る。非経口的投与には、例えば静脈内、筋肉内、腹腔
内、皮下および局所投与がある。

【００２４】本発明のポリアミンまたはその薬学的に許
容される塩を経口的に用いる場合、本化合物を例えば、
錠剤またはカプセルの形で、あるいは水溶液または水性
懸濁液として投与することができる。経口使用のための
錠剤の場合、一般的に用いられる担体には、例えばラク
トースおよびトウモロコシデンプンがあり、ステアリン
酸マグネシウムのような潤滑剤を一般的に加える。カプ
セルの形で経口投与する場合、有用な希釈剤はラクトー
スおよび乾燥トウモロコシデンプンである。経口使用の
ための水性懸濁液が必要な場合、活性成分を乳化剤およ
び懸濁剤と混ぜる。必要に応じて、特定の甘味料および
／または香味料を添加してもよい。

【００２５】筋肉内、腹腔内、皮下および静脈内使用の
場合、活性成分の滅菌溶液を通常製造し、この溶液のｐ
Ｈを適当に調整し、緩衝液を加えて一定に保たなければ
ならない。静脈内使用の場合、溶質の全体濃度を調整し
て調剤を等張にしなければならない。

【００２６】本発明のポリアミンまたはその塩を患者に
使用する場合、１日当たりの投与量は通常医者が決定す
る。しかしながら、本発明のポリアミンの適当な投与量
は、約３−３０ｍｇ／ｋｇ／日である。さらに、投与量
は個々の患者の年令、体重および反応、並びに患者の症
状の重さおよび投与する特定化合物の効能によって変わ
る。従って、上記の範囲外の投与量も可能であり、これ
も本発明の範囲に入るものである。

【００２７】本発明のポリアミンまたはその塩を、無脊
椎害虫の防除に使用する場合、上記化合物は、上記害虫
に直接投与するか、あるいは上記無脊椎害虫の環境に施
す。例えば、本発明の化合物を溶液として上記無脊椎害
虫に噴霧することができる。上記無脊椎害虫の防除に必
要な化合物の量は、無脊椎害虫および環境条件により変
わるので、上記化合物を施す人が決定する。

【００２８】本発明のポリアミンおよびその塩を細胞生
理に関する研究に用いる場合、上記化合物は、この技術
分野に詳しい人に周知の方法に従って細胞に投与する。
例えば、上記化合物は適当な生理的緩衝液中の細胞に投
与することができる。そのような研究に用いる場合の本
発明の化合物の適当な濃度は、１００μＭである。しか
しながら、そのような研究における上記化合物の濃度
は、１００μＭをはるかに越えたり、あるいはこれより
ずと少ないことがありうる。上記化合物の投与量は、周
知の方法に従ってこの技術分野に詳しい人が決定するで
あろう。

【００２９】

【実施例】

実施例１アゲレノプシス・アペルタ（Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓ
ａｐｅｒｔａ）の毒液全体の初期分別ナチュラル・プロダクツ・サイエンス社（ユタ州８４１
０８、ソールトレイクティー）から入手し、約−７８℃
の冷凍状態に貯蔵しておいたアゲレノプシス・アペルタ
（Agelenopsis aperta）の毒液全体を解凍し、その１
０−６０μｌの量を２００μｌに希釈し、Ｃ−１８ヴァ
イダック（２２ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ３００
Å、粒度１０μ）カラムに入れ、流速１５ｍｌ／分およ
び０％→２０％Ｂ、１００％→８０％Ａ［０→３０分］
［Ａは０．１％水性トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）であ
り、Ｂはアセトニトリルである］の線勾配プログラムを
使用する溶剤系を用いて溶離した。ピーク検出は２２０
ｎｍの単色で行ない、分画はＩＳＣＯ／“ＦＯＸＹ”分
画コレクターおよびＩＳＣＯ２１５９ピーク検出器で集
めた。分画は０−３０分集めた。ピーク検出に基づい
て、特に以下の分画を集めた：分画溶離時間１約１３．８分２約１９．２５分３約２１．０分４約２２．３分５約２３．１分６約２６．０分

【００３０】ウォーターズ９９０ダイオードアレー検出
器を用いる以外は、上記と同じカラムおよび条件を用い
て、分画１を二次分別したところ、分画１はポリアミン
ＡＧＥＬ４５２よりなることが分かった。このポリアミ
ンは米国特許出願第０７／３４６、１８１号に記載のも
のであり、本発明のものではない。分画２を分画１の二
次分別と同様に行なったところ、分画２はポリアミンＡ
ＧＥＬ４４８およびＡＧＥＬ４６８よりなることが分か
った。これらは共にまた米国特許出願第０７／３４６、
１８１号に記載のものである。これらのポリアミンはい
づれも本発明のものではない。さらに、分画３を、Ｃ−
４ヴァイダック（２２ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ３
００Å、粒度１０μ）カラムで、５％→１０％Ｂ、９５
％→９０％Ａ［０→３０分］［ＡおよびＢは上記の通り
である］の線勾配およびウォーターズ９９０ダイオード
アレー検出器を用いて二次分別した。分画２はポリアミ
ン５０４および５０５よりなることが分かった。これら
はまた、米国特許出願第０７／３４６、１８１号に記載
のものであり、本発明のものではない。

【００３１】実施例２分画４の二次分別およびその構造決定実施例１に記載のようにして得た分画４を、Ｃ−１８ベ
ーカー（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ３００
Å、粒度５μ）カラムに入れ、流速１ｍｌ／分および８
％Ｂ、９２％Ａ（ＡおよびＢは実施例１で定義した通り
である）の等しい条件を用いて溶離した。ピーク検出
は、ウォーターズ９９０ダイオードアレー検出器（λ＝
２２０ｎｍ）を使用して行ない、分画は実施例１に記載
のようにして集めた。ＡＧＥＬ５２１とした二次分画
は、カラムから約１９．５０分で溶離した。分画ＡＧＥ
Ｌ５２１は、分光分析のために、標準的な方法に従って
溶離剤から凍結乾燥し次いで水から凍結乾燥することに
よって調製した。分画ＡＧＥＬ５２１の凍結乾燥化合物
は、使用するまでアルゴン雰囲気下で−８０℃にて貯蔵
した。

【００３２】次に、分画ＡＧＥＬ５２１に含まれる化合
物の構造を、ＦＡＢＭＳを用いて測定した。得られた
データおよびこれから導かれた構造は以下の通りであ
る：ＡＧＥＬ５２１：ＦＡＢＭＳ：（高分解能）実測値（Ｍ＋Ｈ）Ｍ／Ｚ＝
５２２．３７７４；Ｃ_２６Ｈ_４８Ｎ_７Ｏ_４として計算さ
れた理論値５２２．３７６８構造：１Ｈ−インドール−３−アセトアミド−Ｎ−（２
０−アミノ−４、８−ジヒドロキシ−４、８、１２、１
７−テトラアゼイコス−１−イル）

【００３３】

【化２１】

【００３４】実施例３分画５の二次分別およびその構造決定実施例１に記載のようにして得た分画５を、ダイナマッ
クスフェニル（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、細孔サイズ６
０Å、粒度８μ）カラムに入れ、流速１ｍｌ／分および
１０％Ｂ、９０％Ａ（ＡおよびＢは実施例１で定義した
通りである）の等しい条件を用いて溶離した。ピーク検
出および分画の採取は実施例２に記載のように行なっ
た。ここでＡＧＥＬ４１６およびＡＧＥＬ４６４とする
分画は、以下のようにして得た：分画溶離時間ＡＧＥＬ４１６約２６．４７分ＡＧＥＬ４６４約３７．７６分

【００３５】分画ＡＧＥＬ４１６およびＡＧＥＬ４６４
を分光分析のために調製し、実施例２に記載の方法に従
って貯蔵した。

【００３６】分画ＡＧＥＬ４１６に含まれる化合物の構
造を、ＦＡＢＭＳを用いて測定した。その結果は以下
の通りである：ＦＡＢＭＳ：（高分解能）実測値（Ｍ＋Ｈ）Ｍ／Ｚ＝
４１７．３３３６；Ｃ_２３Ｈ_４１Ｎ_６Ｏ_４として計算さ
れた理論値４１７．３３４２構造：１Ｈ−インドール−３−アセトアミド−Ｎ−（１
６−アミノ−４、８、１３−トリアザヘキサデカ−１−
イル）

【００３７】

【化２２】

【００３８】分画ＡＧＥＬ４６４に含まれる化合物の構
造を、ＦＡＢＭＳを用いて測定した。その結果は以下
の通りである：ＦＡＢＭＳ：（高分解能）実測値（Ｍ＋Ｈ）Ｍ／Ｚ＝
４６５．３１７３；Ｃ_２３Ｈ_４１Ｎ_６Ｏ_４として計算さ
れた理論値４６５．３１８９構造：１Ｈ−インドール−３−アセトアミド−Ｎ−（１
６−アミノ−４、８−ジヒドロキシ−４、８、１３−ト
リアザヘキサデカ−１−イル）−４−ヒドロキシ

【００３９】

【化２３】

【００４０】実施例４分画６の二次分別およびその構造決定実施例１に記載のようにして得た分画６を、ダイナマッ
クスフェニルカラムに入れ、実施例３に記載の方法に従
って溶離した。ピーク検出および分画の採取は実施例２
に記載のようにして行なった。ＡＧＥＬ４８９（Ａ）お
よびＡＧＥＬ４８９とした分画は、以下のようにして得
た：分画溶離時間ＡＧＥＬ４８９約４１．９５分ＡＧＥＬ４８９（Ａ）約５５．２７分

【００４１】分画ＡＧＥＬ４８９（Ａ）およびＡＧＥＬ
４８９を分光分析のために調製し、実施例２に記載の方
法に従って貯蔵した。

【００４２】分画ＡＧＥＬ４８９（Ａ）に含まれる化合
物の構造は、ＦＡＢＭＳを用いて測定した。その結果
は以下の通りである：ＦＡＢＭＳ：（高分解能）実測値（Ｍ＋Ｈ）Ｍ／Ｚ＝
４８９．３８９６；Ｃ_２７Ｈ_４９Ｎ_６Ｏ_２として計算さ
れた理論値４８９．３９１７構造：１Ｈ−インドール−３−アセトアミド−Ｎ−（１
８−アミノ−１３、１３−ジメチル−４−ヒドロキシ−
４、８、１３−トリアザオクタデカ−１−イル）

【００４３】

【化２４】

【００４４】分画ＡＧＥＬ４８９に含まれる化合物の構
造を、ＦＡＢＭＳを用いて測定したところ、米国特許
出願第０７／３４６、１８１号に記載の化合物ＡＧＥＬ
４８９であることが分かった。ＡＧＥＬ４８９は本発明
のものではない。

【００４５】実施例５１Ｈ−インドール−３−アセトアミド−Ｎ−（１６−ア
ミノ−４、８、１３−トリアザヘキサデカ−１−イル）実施例３に記載のような分画ＡＧＥＬ４１６に含まれる
ことが確認された表題化合物の合成は、下記のようにし
て行なった。

【００４６】Ａ．

【化２５】

【００４７】式Ｉの化合物は、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．、103：６１３３−６１３６（１９８１）に記載
のヤマモトヒサナリの方法に従って、ジアミノブタンお
よびアクリロニトリルから製造した。

【００４８】Ｂ．

【化２６】

【００４９】窒素雰囲気下で、前記Ａ項に記載のように
製造した式Ｉの化合物５．７８ｇ（０．０４１モル）
を、７５ｍｌのＣＨ_３ＣＮおよび１１．４８ｇのＫＦセ
ライトに加え、撹拌した。この撹拌混合物へ、製造Ａに
記載のように製造した式ＩＩの化合物９．７５ｇ（０．
０４１モル）をＣＨ_３ＣＮ２５ｍｌに加えた溶液に添加
した。この反応混合物を加熱して６時間還流し、次に室
温に冷却し、一晩放置した。次いで、ＫＦ−セライトを
濾去し、濾過ケークをＣＨ_３ＣＮで十分に洗浄した。濾
液を真空下で濃縮したところ、１４ｇの粗生成物が油と
して得られた。粗生成物を４００ｇのシリカゲル上で，
５００ｍｌのジクロロメタン、次に１リッターの８５：
１５のＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ、そして１リッターの７
５：２５のＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ、１リッターの７
５：２５のＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨプラス２５ｍｌのイ
ソプロピルアミン、次いで１リッターの７５：２５のＣ
Ｈ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨプラス５０ｍｌのイソプロピルア
ミン、そして４００ｍｌの７５：２５のＣＨ_２Ｃｌ_２／
ＭｅＯＨプラス７５ｍｌのイソプロピルアミンを用いて
クロマトグラフィーした。分画は薄層クロマトグラフィ
ーでモニターし、ＮＭＲで確認した目的生成物を含む分
画をプールし、真空下で濃縮したところ、４．７ｇの上
記式ＩＩＩの生成物が得られた。

【００５０】Ｃ．

【化２７】

【００５１】窒素雰囲気下で、前記Ｂ項に記載のように
製造した式ＩＩＩの化合物４．７ｇ（１５．８ｍｍｏ
ｌ）を１５０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。次に、
７．５６ｇ（３４．７ｍｍｏｌ）のジ−ｔ−ブチルジカ
ーボネートを加え、反応混合物を一晩室温で撹拌した。
次いで、混合物を真空下で濃縮し、そして４００ｇのシ
リカゲルで、５０：５０のエチルアセテート／ヘキサン
溶剤を用いてクロマトグラフィーを行なった。分画をＴ
ＬＣ（５０：５０のエチルアセテート／ヘキサン）によ
ってモニターした。式ＩＶの生成物を含む分画を合わ
せ、真空下で濃縮したところ、７．９ｇの生成物が油と
して得られた。

【００５２】Ｃ．

【化２８】

【００５３】窒素雰囲気下、１２５ｍｌの酢酸に、上記
Ｃ項に記載のように製造した式ＩＶの化合物７．８５ｇ
（１５．８ｍｍｏｌ）および６．５ｇのＰｄ（ＯＨ）_２
／炭素を加えた。この混合物を５０ｐ．ｓ．ｉ．で２時
間水素添加した。触媒を濾過により除去し、瀘過ケーク
を酢酸で十分に洗浄した。濾液を濃縮し、２５０ｍｌの
ジクロロメタンに溶解し、１００ｍｌの１Ｎ−ＮａＯＨ
で２回洗浄し、Ｋ_２ＣＯ_３で乾燥した。溶液を瀘過し、
濾液を真空下で濃縮したところ、７．８ｇの式Ｖの化合
物が得られた。

【００５４】Ｅ．

【化２９】

【００５５】窒素雰囲気下で、上記Ｄ項に記載のように
製造した式Ｖの化合物７．１５ｇ（１４．２ｍｍｏｌ）
を、１５０ｍｌのメタノールに溶解した。次に、１．０
３ｍｌ（１５．６ｍｍｏｌ）のアクリリニトリルを加
え、反応混合物を７２時間室温で撹拌した。次いで、反
応混合物を濃縮し、ジクロロメタンから３回再濃縮し、
そして真空下で溶剤をストリップしたところ、７．６５
ｇの式ＶＩの生成物が油として得られた。

【００５６】Ｆ．

【化３０】

【００５７】窒素雰囲気下で、上記Ｅ項に記載のように
製造した式ＶＩの化合物６．４５ｇ（１１．６ｍｍｏ
ｌ）を、１２５ｍｌのジクロロメタンに溶解した。この
溶液に２．６ｇ（１２ｍｍｏｌ）のジ−ｔ−ブチルージ
カーボネートを加え、この反応混合物を一晩室温で撹拌
した。次に反応混合物を濃縮し、４００ｇのシリカゲル
で、溶離剤として５０：５０のエチルアセテート／ヘキ
サンを使用してクロマトグラフィーを行なった。生成物
分画を合わせ、濃縮したところ、６．６ｇの式ＶＩＩＩ
の生成物が油として得られた。Ｇ．

【００５８】

【化３１】

【００５９】窒素雰囲気下で、１５０ｍｌの酢酸に、上
記Ｆ項に記載のように製造した式ＶＩＩの化合物６．６
ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＯＨ）_２／炭素６
ｇを加えた。この溶液を５０ｐ．ｓ．ｉ．で２時間水素
添加した。触媒を瀘過によって除去し、瀘過ケークを酢
酸で十分に洗浄した。濾液を濃縮し、２００ｍｌのジク
ロロメタンに溶解し、１００ｍｌの１Ｎ−ＮａＯＨで２
回洗浄し、Ｋ_２ＣＯ_３で乾燥した。溶液を濾過し、濾液
を真空下で濃縮縮したところ、６．５ｇの式ＶＩＩＩの
生成物が得られた。Ｈ．

【００６０】

【化３２】

【００６１】窒素雰囲気下で、１．７５ｇ（１０ｍｍｏ
ｌ）のインドール酢酸、１．１５ｇ（１０ｍｍｏｌ）の
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび２．０６ｇ（１０
ｍｍｏｌ）のジシクロヘキシカルボジイミドを、７５ｍ
ｌのテトラヒドロフランも加えた。この反応混合物を室
温で撹拌したところ、約５分間後に沈澱物が形成した。
約１．５時間後、沈澱を瀘過することによって除き、濾
過ケークを７５ｍｌのテトラヒドロフランで洗浄し、ケ
ークを空気乾燥したところ、１．８４ｇとなった。合わ
せた濾液を濃縮し、酢酸エチルに溶解し、濾過し、酢酸
エチルで洗浄した。濾液を濃縮したところ、発泡体が得
られた。この発泡体を７５ｍｌのジエチルエーテル中で
粉砕したところ、硬いガムが得られた。次に、約３０ｍ
ｌの酢酸エチルを、その後エチルエーテルを加えた。固
体を濾過によって単離し、ジエチルエーテルで洗浄し、
窒素下で乾燥したとこと、１．７４ｇの式ＩＸの生成物
が得られた。母液を石油エーテルで処理することによっ
て、さらに０．４７ｇの生成物が得られることが分かっ
た。Ｉ．

【００６２】

【化３３】

【００６３】上記Ｇ項に記載のように製造した式ＶＩＩ
Ｉの化合物０．３３ｇ（５ｍｍｏｌ）を、１０ｍｌのジ
クロロメタンに撹拌しながら溶解し、次に０．１３６ｇ
（５ｍｍｏｌ）の上記Ｈ項に記載のように製造した式Ｉ
Ｘの化合物を加えた。この反応混合物を一晩室温で撹拌
した。次に、これを３５ｍｌのジクロロメタンで希釈
し、１０ｍｌの０．５Ｎ−ＮａＯＨで洗浄し、Ｋ_２ＣＯ
_３で乾燥し、濃縮した。濃縮物をシリカゲルで、４：１
の酢酸エチル／ヘキサンを用いてクロマトグラフィーを
行なった。生成物分画を濃縮したところ、酢酸エチルが
いくらが存在する式Ｘの生成物を含む白色の発泡体０．
３７ｇが得られた。Ｊ．

【００６４】

【化３４】

【００６５】上記Ｉ項に記載のように製造した式Ｘの化
合物０．３７ｇ（０．４５ｍｍｏｌ）を、１０ｍｌのジ
クロロメタンに溶解した。次に０．２１８ｇ（１ｍｍｏ
ｌ）のジ−ｔ−ブチルジカーボネートを加え、続いて１
２ｍｌ（０．１ｍｍｏｌ）の４−（Ｎ、Ｎ−ジメチルア
ミノ）−ピリジンを加えた。この反応混合物を室温で１
時間撹拌し、その後一晩放置した。反応混合物をシリカ
ゲルで、４：１の酢酸エチル／ヘキサンを用いてクロマ
トグラフィーを行ない、生成物分画を濃縮したところ、
０．３２ｇの式ＸＩの生成物が白色発泡体として得られ
た。Ｋ．

【００６６】

【化３５】

【００６７】上記Ｊ項に記載のように製造した式ＸＩの
化合物０．３２ｇ（０．３５ｍｍｏｌ）を、１５ｍｌの
トリフルオロ酢酸に加え、１５分間撹拌した。次いで、
反応混合物を真空下で濃縮し、ジエチルエーテル中で粉
砕したところ、０．３０ｇの生成物が白色粉末として得
られた。

【００６８】

【化３６】

【００６９】窒素雰囲気下で、３４．５ｇ（１５７．６
ｍｍｏｌ）の３−ブロモプロピルアミン・ＨＢｒを６０
０ｍｌのＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミドに加えたものを
撹拌した。この溶液に、３４．４ｇ（１５７．６ｍｍｏ
ｌ）のジ−ｔ−ブチルジカーボネート、続いて３２．３
ｍｌ（２３６ｍｍｏｌ）のトリエトルアミンを加えた。
ただちに沈澱物が形成した。反応混合物を一晩撹拌し
た。次に、反応混合物を酢酸エチルで１．５リッターに
希釈し、５００ｍｌの１Ｎ−ＨＣｌで１回、５００ｍｌ
の水で３回、ブラインで１回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾
燥した。濃縮した後、生成物を８００ｇのシリカゲル
で、４：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてクロマトグ
ラフィーを行ない、分画をＴＬＣ（ＫＭＮＯ_４／Ｉ_２）
でモニターした。生成物を含む分画を合わせ、真空下で
濃縮し、５０ｍｌのジクロロメタンで２回洗浄し、高真
空下でパージしたところ２５．８ｇの目的生成物が得ら
れた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ニコラス・アレックス・サッコマノアメリカ合衆国コネチカット州レッドヤード，ペイント・ミル・ドライブ４ (72)発明者ロバート・アルフレッド・フォルクマンアメリカ合衆国コネチカット州ミスティック，ドッグウッド・レーン 135

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の式：【化１】の実質的に純粋な化合物および薬学的に許容されるこれ
らの塩。
【請求項２】下記の式：【化２】の実質的に純粋な化合物および薬学的に許容されるこれ
らの塩。
【請求項３】Ｒが同じであり、そしてＨまたはＯＨであ
る、下記の式：【化３】の実質的に純粋な化合物および薬学的に許容されるこれ
らの塩。
【請求項４】ＲがＨである、請求項３に記載の化合物お
よび薬学的に許容されるこれらの塩。
【請求項５】ＲがＯＨである、請求項３に記載の化合物
および薬学的に許容されるこれらの塩。