JPH0716404B2 - キヤンデイダ・ボイデイニイａｐ−１５株 - Google Patents
キヤンデイダ・ボイデイニイａｐ−１５株Info
- Publication number
- JPH0716404B2 JPH0716404B2 JP25146386A JP25146386A JPH0716404B2 JP H0716404 B2 JPH0716404 B2 JP H0716404B2 JP 25146386 A JP25146386 A JP 25146386A JP 25146386 A JP25146386 A JP 25146386A JP H0716404 B2 JPH0716404 B2 JP H0716404B2
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- JP
- Japan
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- nad
- strain
- medium
- culture
- kyandeida
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は，ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以
下NADと略称する。）含有量の高いキヤンデイダ・ボイ
デイニイAP−15株に関するものである。
下NADと略称する。）含有量の高いキヤンデイダ・ボイ
デイニイAP−15株に関するものである。
（従来の技術） NADは，生体内における多種多様な酸化還元酵素の補酵
素として生体内のエネルギー代謝，各種物質の補酵素と
して古くから知られている。また，近年では，臨床用試
薬，生化学試薬として生化学，医学方面に広範な用途が
拡大し，その需要は多いに高まってきているが,NADは高
価な物質である。
素として生体内のエネルギー代謝，各種物質の補酵素と
して古くから知られている。また，近年では，臨床用試
薬，生化学試薬として生化学，医学方面に広範な用途が
拡大し，その需要は多いに高まってきているが,NADは高
価な物質である。
従来,NADは酵母，細菌等を培養し，培養菌体から抽出す
ることで製造されてきた。近年では，生産量の向上をは
かるため，培養方法に種々の工夫が凝らされている。例
えば，培養過程にNAD前駆物質やNAD前駆物質と共に界面
活性剤を添加して菌体内又は培養液中にNADを蓄積させ
る方法（特公昭47−19748号公報，特公昭47−19749号公
報，特公昭45−29436号公報，特開昭48−56891号公報参
照），あるいは培養終了後，培養液から菌体を一旦分離
し，界面活性剤で処理した後,NAD前駆物質を含んだ溶液
中でさらに培養する方法（特開昭54−80493号公報，特
開昭54−80494号公報参照）が提案されている。
ることで製造されてきた。近年では，生産量の向上をは
かるため，培養方法に種々の工夫が凝らされている。例
えば，培養過程にNAD前駆物質やNAD前駆物質と共に界面
活性剤を添加して菌体内又は培養液中にNADを蓄積させ
る方法（特公昭47−19748号公報，特公昭47−19749号公
報，特公昭45−29436号公報，特開昭48−56891号公報参
照），あるいは培養終了後，培養液から菌体を一旦分離
し，界面活性剤で処理した後,NAD前駆物質を含んだ溶液
中でさらに培養する方法（特開昭54−80493号公報，特
開昭54−80494号公報参照）が提案されている。
しかしながら，上記のような従来法において用いられる
微生物は，いずれも炭水化物を炭素源及びエネルギー源
として生育するものに限られ，工業的規模での生産にお
ける原料としては，現在の醗酵工業の共通の原料である
廃糖蜜あるいは澱粉糖化液を使わざるをえず，これらの
原料は工業的見地から供給が不安定であり，均一な製品
が得られないため培養管理が難しく，強い着色のため廃
液処理にコストがかかると共に，目的物質の単離，精製
が困難である等の問題点を有しており，ひいてはNADの
価格上昇の大きな要因になっている。
微生物は，いずれも炭水化物を炭素源及びエネルギー源
として生育するものに限られ，工業的規模での生産にお
ける原料としては，現在の醗酵工業の共通の原料である
廃糖蜜あるいは澱粉糖化液を使わざるをえず，これらの
原料は工業的見地から供給が不安定であり，均一な製品
が得られないため培養管理が難しく，強い着色のため廃
液処理にコストがかかると共に，目的物質の単離，精製
が困難である等の問題点を有しており，ひいてはNADの
価格上昇の大きな要因になっている。
これを解決するため，本発明者らは先にキヤンデイダ25
−Ａをメタノールを主たる炭素源とする培地で培養し，
培養物からNADを採取するNADの製造法を提案した（日本
農芸化学会，昭和61年度大会講演要旨集P505参照）。
−Ａをメタノールを主たる炭素源とする培地で培養し，
培養物からNADを採取するNADの製造法を提案した（日本
農芸化学会，昭和61年度大会講演要旨集P505参照）。
（発明が解決しようとする問題点） しかしながら，上記で用いられているキヤンデイダ25−
Ａは,NADの含有量がそれほど高くないので,NADの生産量
はまだ満足いくべきものではなかった。このことによ
り,NADを未だ高価な物質としているのである。
Ａは,NADの含有量がそれほど高くないので,NADの生産量
はまだ満足いくべきものではなかった。このことによ
り,NADを未だ高価な物質としているのである。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らは，上記のごとき問題点を解決してNAD含有
量の高い菌株を提供することを目的として鋭意検討を重
ねた結果，上記のキヤンデイダ25−Ａを用いて突然変異
処理を行うことにより,3−アセチルピリジンに耐性を有
する変異株を発見し，その菌株がNAD含有量の高い菌株
であることを見い出し，本発明を完成するに至った。
量の高い菌株を提供することを目的として鋭意検討を重
ねた結果，上記のキヤンデイダ25−Ａを用いて突然変異
処理を行うことにより,3−アセチルピリジンに耐性を有
する変異株を発見し，その菌株がNAD含有量の高い菌株
であることを見い出し，本発明を完成するに至った。
すなわち，本発明は,3−アセチルピリジンに耐性を有
し，かつ,NAD含有量の高いキヤンデイダ・ボイデイニイ
AP−15株を要旨とするものである。
し，かつ,NAD含有量の高いキヤンデイダ・ボイデイニイ
AP−15株を要旨とするものである。
次に，本発明の菌学的性質を以下に示す。この菌学的性
質の検討のうち,3−アセチルピリジン耐性とNAD含有量
の検討には，メタノールを炭素源とする以下の培地を用
いた。
質の検討のうち,3−アセチルピリジン耐性とNAD含有量
の検討には，メタノールを炭素源とする以下の培地を用
いた。
なお，％は特に明記しない限りは重量％を示す（以下同
様）。
様）。
メタノール２容量％，塩化アンモニウム0.5％，リン酸
２水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫
酸マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カル
シウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/
ml,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビチオン0.02μg/mlからな
るメタノール培地（pH6.0）。
２水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫
酸マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カル
シウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/
ml,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビチオン0.02μg/mlからな
るメタノール培地（pH6.0）。
これ以外の検討には，酵母の分類同定法〔飯塚広，後藤
昭二著，（1969）〕，改訂版微生物の分類と同定（上）
〔長谷川武治編著，（1984）〕，ザ イースツ ア タ
クソノミツク スタデイー（THE YEASTS A taxonomic s
tudy）〔ロツダー（Lodder）編著，（1970）及びザ イ
ースツ ア タクソノミツク スタデイー（The Yeasts
a taxonomic study）〔リジ（Rij）編著，（1984）〕
に記載されている方法に従った。
昭二著，（1969）〕，改訂版微生物の分類と同定（上）
〔長谷川武治編著，（1984）〕，ザ イースツ ア タ
クソノミツク スタデイー（THE YEASTS A taxonomic s
tudy）〔ロツダー（Lodder）編著，（1970）及びザ イ
ースツ ア タクソノミツク スタデイー（The Yeasts
a taxonomic study）〔リジ（Rij）編著，（1984）〕
に記載されている方法に従った。
（ａ） 各培地における生育状態 MY液体培地,28℃,3〜５日間培養 細胞の大きさ:1.5〜3.5μ×2.0〜12.0μ 細胞の形態：卵円形又は円筒形，単独にはならず,5〜30
細胞で集塊を形成 増殖の形式：多極出芽 生育による培地の混濁：かすかに濁る 沈殿物の生成：粉状沈殿物あり 皮膜の形成：表面にシワ状皮膜あり MY寒天培地,28℃,3〜５日間培養 生育の程度：良好 周縁の形状：波状 隆起状態：半レンズ状 表面の形状：粗面 表面の光沢：鈍光 表面の性状：バター質 表面の色調：乳白色 バレイシヨ・グルコース寒天培地によるスライド培養 仮性菌糸：形成する 分裂子，厚膜胞子：形成せず （ｂ） 子嚢胞子の形成：なし （ｃ） 射出胞子の形成：なし （ｄ） 各生理的性質 最適生育条件:pH4.0〜7.0,27〜30℃ 生育の範囲:pH2.5〜9.5,18〜33℃ 硝酸塩の同化：あり 脂肪の分解：なし 尿素の分解：なし ゼラチンの液化：なし 耐浸透圧性： 塩化ナトリウム10％以上では生育しない カロチノイドの生成：なし 顕著な有機酸の生成：なし 澱粉様物質の生成：なし ビタミンの要求性： ビタミンを含有しない培地でも弱く生育するが，ビチオ
ンの添加により生育は増大する 菌株の特徴となる生理的性質 ３−アセチルピリジン耐性：あり 0.3％キノリン酸添加メタノール培地におけるNAD含有
量:22mg/g乾燥菌体（44mg/培地） （ｅ） 醗酵性と同化性 醗酵性を有する炭素源:D−グルコース 醗酵性のない炭素源： Ｄ−ガラクトース，麦芽糖，シヨ糖，乳糖，ラフイノー
ス 同化性を有する炭素源： Ｄ−リボース,D−キシロース,D−グルコース,D−マンノ
ース,D−フラクトース，エタノール，アドニツト，エリ
トリツト,D−マンニツト,D−ソルビツト，グリセリン 弱い同化性を有する炭素源： Ｌ−アラビノース,D−ガラクトース，麦芽糖,D−グルコ
ン酸塩,DL−乳酸塩，コハク酸塩 同化性のない炭素源： Ｄ−アラビノース,L−ラムノース,L−ソルボース，シヨ
糖，乳糖，メリビオース，セロビオース，トレハロー
ス，ラフイノース,D−メレジトース，α−メチル−Ｄ−
グルコシド，アルブチン，デキストリン，可溶性澱粉，
イヌリン，イノシツト，ズルシツト,2−ケト−Ｄ−グル
コン酸塩，クエン酸塩 上記の菌学的性質から，ロツダー（Lodder）の「ザ イ
ースツ ア タクソノミツク スタデイー（THE YEASTS
A taxonomic study）」（1970）の検索表及びリジ（Ri
j）の「ザ イースツ ア タクソノミツク スタデイ
ー（The Yeasts a taxonomic study）」（1984）の検索
表に基づき検索した結果，本菌株はキヤンデイダ（Cand
ida）属に属するものと判断され，さらに炭素源の同化
性に関してあまり重要でない2,3の糖類についての結果
が異なるものの，その他の性質において一致をみたの
で，本菌株はキヤンデイダ・ボイデイニイ（Candida bo
idinii）と同定するのが妥当であると判断した。
細胞で集塊を形成 増殖の形式：多極出芽 生育による培地の混濁：かすかに濁る 沈殿物の生成：粉状沈殿物あり 皮膜の形成：表面にシワ状皮膜あり MY寒天培地,28℃,3〜５日間培養 生育の程度：良好 周縁の形状：波状 隆起状態：半レンズ状 表面の形状：粗面 表面の光沢：鈍光 表面の性状：バター質 表面の色調：乳白色 バレイシヨ・グルコース寒天培地によるスライド培養 仮性菌糸：形成する 分裂子，厚膜胞子：形成せず （ｂ） 子嚢胞子の形成：なし （ｃ） 射出胞子の形成：なし （ｄ） 各生理的性質 最適生育条件:pH4.0〜7.0,27〜30℃ 生育の範囲:pH2.5〜9.5,18〜33℃ 硝酸塩の同化：あり 脂肪の分解：なし 尿素の分解：なし ゼラチンの液化：なし 耐浸透圧性： 塩化ナトリウム10％以上では生育しない カロチノイドの生成：なし 顕著な有機酸の生成：なし 澱粉様物質の生成：なし ビタミンの要求性： ビタミンを含有しない培地でも弱く生育するが，ビチオ
ンの添加により生育は増大する 菌株の特徴となる生理的性質 ３−アセチルピリジン耐性：あり 0.3％キノリン酸添加メタノール培地におけるNAD含有
量:22mg/g乾燥菌体（44mg/培地） （ｅ） 醗酵性と同化性 醗酵性を有する炭素源:D−グルコース 醗酵性のない炭素源： Ｄ−ガラクトース，麦芽糖，シヨ糖，乳糖，ラフイノー
ス 同化性を有する炭素源： Ｄ−リボース,D−キシロース,D−グルコース,D−マンノ
ース,D−フラクトース，エタノール，アドニツト，エリ
トリツト,D−マンニツト,D−ソルビツト，グリセリン 弱い同化性を有する炭素源： Ｌ−アラビノース,D−ガラクトース，麦芽糖,D−グルコ
ン酸塩,DL−乳酸塩，コハク酸塩 同化性のない炭素源： Ｄ−アラビノース,L−ラムノース,L−ソルボース，シヨ
糖，乳糖，メリビオース，セロビオース，トレハロー
ス，ラフイノース,D−メレジトース，α−メチル−Ｄ−
グルコシド，アルブチン，デキストリン，可溶性澱粉，
イヌリン，イノシツト，ズルシツト,2−ケト−Ｄ−グル
コン酸塩，クエン酸塩 上記の菌学的性質から，ロツダー（Lodder）の「ザ イ
ースツ ア タクソノミツク スタデイー（THE YEASTS
A taxonomic study）」（1970）の検索表及びリジ（Ri
j）の「ザ イースツ ア タクソノミツク スタデイ
ー（The Yeasts a taxonomic study）」（1984）の検索
表に基づき検索した結果，本菌株はキヤンデイダ（Cand
ida）属に属するものと判断され，さらに炭素源の同化
性に関してあまり重要でない2,3の糖類についての結果
が異なるものの，その他の性質において一致をみたの
で，本菌株はキヤンデイダ・ボイデイニイ（Candida bo
idinii）と同定するのが妥当であると判断した。
そして，親株であるキヤンデイダ25−Ａが３−アセチル
ピリジンに耐性を有しないのに対して，本菌株は３−ア
セチルピリジンに耐性を有するようになったことで，両
者に著しい差がみられた。しかも,NADの含有量は，親株
であるキヤンデイダ25−Ａに比べて約2.0培に増加して
いた。
ピリジンに耐性を有しないのに対して，本菌株は３−ア
セチルピリジンに耐性を有するようになったことで，両
者に著しい差がみられた。しかも,NADの含有量は，親株
であるキヤンデイダ25−Ａに比べて約2.0培に増加して
いた。
このように，本菌株は菌学的性質が明らかに既存菌とは
異なっているので，新菌株と判断し，キヤンデイダ・，
ボイデイニイ（Candida boidinii）AP−15と命名し，昭
和61年９月25日に通産省工業技術院微生物工業技術研究
所へ寄託した〔微工研菌寄第8974号（FERM Ｐ−897
4）〕。
異なっているので，新菌株と判断し，キヤンデイダ・，
ボイデイニイ（Candida boidinii）AP−15と命名し，昭
和61年９月25日に通産省工業技術院微生物工業技術研究
所へ寄託した〔微工研菌寄第8974号（FERM Ｐ−897
4）〕。
本発明の菌株を得るためには，例えば，親株としてすで
に微工研に寄託されているメタノール資化性酵母キヤン
デイダ（Candida）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM
Ｐ−8725）を用い，変異誘発源として紫外線を用いて変
異させればよい。このとき，変異誘発源としては，紫外
線以外に物理的因子や薬剤を用いてもよい。そのような
ものとしては，例えば，放射線，高熱処理,5−ブロモウ
ラシル，エチルメタンサルホネート，マスタードガス，
ニトロソグアニジンがあげられる。
に微工研に寄託されているメタノール資化性酵母キヤン
デイダ（Candida）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM
Ｐ−8725）を用い，変異誘発源として紫外線を用いて変
異させればよい。このとき，変異誘発源としては，紫外
線以外に物理的因子や薬剤を用いてもよい。そのような
ものとしては，例えば，放射線，高熱処理,5−ブロモウ
ラシル，エチルメタンサルホネート，マスタードガス，
ニトロソグアニジンがあげられる。
本発明の菌株を培養するに際して用いられる培地として
は，メタノールを炭素源とし，前駆物質としてキノリン
酸を添加すること以外は，キヤンデイダ属に属する酵母
で通常用いられる培地でよい。このときの培地組成とし
て，メタノール濃度を0.5〜３容量％程度，キノリン酸
濃度を0.1〜0.5％程度とし，それ以外の培地組成とし
て，例えば，ペプトン，尿素，硫安，塩安，硝安，硝酸
ソーダ等の窒素源が用いられ，また，リン酸２水素ナト
リウム，リン酸２水素カリウム，リン酸１水素カリウム
等のリン酸源が用いられる。さらに増殖促進因子とし
て，ビチオン，チアミン，酵母エキス，あるいは鉄，カ
ルシウム，マンガン，亜鉛等の金属塩を微量添加するこ
とができる。
は，メタノールを炭素源とし，前駆物質としてキノリン
酸を添加すること以外は，キヤンデイダ属に属する酵母
で通常用いられる培地でよい。このときの培地組成とし
て，メタノール濃度を0.5〜３容量％程度，キノリン酸
濃度を0.1〜0.5％程度とし，それ以外の培地組成とし
て，例えば，ペプトン，尿素，硫安，塩安，硝安，硝酸
ソーダ等の窒素源が用いられ，また，リン酸２水素ナト
リウム，リン酸２水素カリウム，リン酸１水素カリウム
等のリン酸源が用いられる。さらに増殖促進因子とし
て，ビチオン，チアミン，酵母エキス，あるいは鉄，カ
ルシウム，マンガン，亜鉛等の金属塩を微量添加するこ
とができる。
これらの培地を用いて，本発明の菌株をpH4〜7,温度25
〜33℃で通気撹拌培養すればよい。このとき，培養終了
時点は，菌の増殖後であればいつでもよいが，好ましく
は培養液のメタノールがまったく消費された後にするの
が,NADがより蓄積されていて良い。
〜33℃で通気撹拌培養すればよい。このとき，培養終了
時点は，菌の増殖後であればいつでもよいが，好ましく
は培養液のメタノールがまったく消費された後にするの
が,NADがより蓄積されていて良い。
本発明において,NADを単離，精製するには，例えば，ま
ず培養物から遠心分離や濾過等で菌体を集菌し，次い
で，集菌した菌体を常法，すなわち菌体を破砕後，遠心
分離して得られた上澄に有機溶媒又は各種の塩類を加え
て分画精製したり，担体に吸着させて精製する等の方法
で行うことができる。
ず培養物から遠心分離や濾過等で菌体を集菌し，次い
で，集菌した菌体を常法，すなわち菌体を破砕後，遠心
分離して得られた上澄に有機溶媒又は各種の塩類を加え
て分画精製したり，担体に吸着させて精製する等の方法
で行うことができる。
（実施例） 以下，実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
なお，実施例中の％は，特に明記しない限りは重量％を
示す。
示す。
実施例1,比較例１ まず，親株として用いたキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌
寄第8725号）の紫外線に対する感受性を調べるため，メ
タノール１容量％，塩化アンモニウム0.5％，リン酸２
水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫酸
マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カルシ
ウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/m
l,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビオチン0.02μg/ml,寒天1.
5％,pH6.0からなる培地（以下メタノール培地と略称す
る。）を用いてプレートを作成し，それに各種濃度の菌
懸濁液をまき，その上から紫外線を40μw/cm2の照度で
照射し，生存率0.1％を与える照射時間を求めたところ,
34秒間であった。
寄第8725号）の紫外線に対する感受性を調べるため，メ
タノール１容量％，塩化アンモニウム0.5％，リン酸２
水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫酸
マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カルシ
ウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/m
l,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビオチン0.02μg/ml,寒天1.
5％,pH6.0からなる培地（以下メタノール培地と略称す
る。）を用いてプレートを作成し，それに各種濃度の菌
懸濁液をまき，その上から紫外線を40μw/cm2の照度で
照射し，生存率0.1％を与える照射時間を求めたところ,
34秒間であった。
次に，メタノール培地に３−アセチルピリジンを各種濃
度で添加した培地にキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌寄第
8725号）をまき,3−アセチルピリジンに対する感受性を
調べたところ,3−アセチルピリジン20mM含有の培地では
まったく生育できないことがわかった。そこで，メタノ
ール培地に３−アセチルピリジン20mMを添加したプレー
トを作り，それにキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌寄第87
25号）をまき，その上から紫外線を400μw/cm2の照度で
34秒間照射した後,28℃で１週間培養し，生育してきた
多数のコロニーを拾い上げた。これらの菌株をメタノー
ル培地にキノリン酸0.3％を添加した液体培地を用いて
振盪培養し,4日後に菌体中のNAD含有量を測定したとこ
ろ，これらの菌株中からNAD含有量が親株より約2.0倍高
くなったキヤンデイダ・ボイデイニイ（Candida boidin
ii）AP−15〔微工研菌寄第8974号（FERM Ｐ−8974）〕
が得られた。
度で添加した培地にキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌寄第
8725号）をまき,3−アセチルピリジンに対する感受性を
調べたところ,3−アセチルピリジン20mM含有の培地では
まったく生育できないことがわかった。そこで，メタノ
ール培地に３−アセチルピリジン20mMを添加したプレー
トを作り，それにキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌寄第87
25号）をまき，その上から紫外線を400μw/cm2の照度で
34秒間照射した後,28℃で１週間培養し，生育してきた
多数のコロニーを拾い上げた。これらの菌株をメタノー
ル培地にキノリン酸0.3％を添加した液体培地を用いて
振盪培養し,4日後に菌体中のNAD含有量を測定したとこ
ろ，これらの菌株中からNAD含有量が親株より約2.0倍高
くなったキヤンデイダ・ボイデイニイ（Candida boidin
ii）AP−15〔微工研菌寄第8974号（FERM Ｐ−8974）〕
が得られた。
なお,NADの定量は，菌体を集菌後85℃の熱水で抽出し，
アルコールデヒドロゲナーゼを用いる酵素法にて行った
〔メソツズ オブ エンザイマテイツク アナリシス
（Methods of Enzymatic Analysis）第３版（1984）７
巻P253参照〕。
アルコールデヒドロゲナーゼを用いる酵素法にて行った
〔メソツズ オブ エンザイマテイツク アナリシス
（Methods of Enzymatic Analysis）第３版（1984）７
巻P253参照〕。
次に，グルコース１％，塩化アンモニウム0.4％，リン
酸２水素カリウム0.1％，硫酸マグネシウム0.05％，酵
母エキス0.2％からなる組成の培地に上記菌株を植菌し,
pH6.0にて28℃で24時間振盪培養して種菌液を調整し
た。次いで，メタノール濃度を２容量％とし，寒天を加
えないメタノール培地100mlを500ml容振盪フラスコに入
れ，これに上記の種菌液を１％になるように加えて28℃
で振盪培養した。培養を開始して100時間後に，酵母菌
体中には22mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
酸２水素カリウム0.1％，硫酸マグネシウム0.05％，酵
母エキス0.2％からなる組成の培地に上記菌株を植菌し,
pH6.0にて28℃で24時間振盪培養して種菌液を調整し
た。次いで，メタノール濃度を２容量％とし，寒天を加
えないメタノール培地100mlを500ml容振盪フラスコに入
れ，これに上記の種菌液を１％になるように加えて28℃
で振盪培養した。培養を開始して100時間後に，酵母菌
体中には22mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
なお，比較のため，親株であるキヤンデイダ（Candid
a）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM Ｐ−8725）を用
いて上記と同様にして培養を行ったところ，酵母菌体中
には11mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
a）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM Ｐ−8725）を用
いて上記と同様にして培養を行ったところ，酵母菌体中
には11mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
実施例２ ２容ミニジヤーフアーメンターに，メタノール濃度を
２容量％とし，寒天を加えないメタノール培地1.2を
入れ，実施例１と同様に植菌した後，温度28℃，通気条
件1VVM,400rpmで培養を行った。培養開始100時間後に
は，酵母菌体中には約22mg/g乾燥菌体のNADが，また，
培養液1.2中には53mgのNADが蓄積していた。
２容量％とし，寒天を加えないメタノール培地1.2を
入れ，実施例１と同様に植菌した後，温度28℃，通気条
件1VVM,400rpmで培養を行った。培養開始100時間後に
は，酵母菌体中には約22mg/g乾燥菌体のNADが，また，
培養液1.2中には53mgのNADが蓄積していた。
次に，この培養液から遠心分離により菌体を得て,2,3回
0.9％塩化ナトリウムで洗浄した。この菌体に85℃の熱
水を約10ml加え,85℃の湯浴中で約５分間撹拌すること
によりNADを抽出し，冷却後，遠心分離により抽出液を
得た。
0.9％塩化ナトリウムで洗浄した。この菌体に85℃の熱
水を約10ml加え,85℃の湯浴中で約５分間撹拌すること
によりNADを抽出し，冷却後，遠心分離により抽出液を
得た。
これをDowex1−X2（200〜400メツシュ，ギ酸型）カラム
（0.8×40cm）にかけ，ギ酸０〜0.15Nのグラジエント溶
出（400ml）を行い,10mlごとに分画した。各分画につ
き,260nmにおける吹光度とNADを定量したところ，ギ酸
濃度0.08N付近に溶出している紫外線吸収ピークがNADの
ピークであった。この画分を回収し,pHをおよそ２に合
わせた後，活性炭に吸着させた。この活性炭をよく撹拌
後，吸引濾過し，適当量の冷0.001N HClで洗浄後，ただ
ちに50％エタノール：濃アンモニア（200:1）溶液に加
え，撹拌後，吸引濾過してNADを含む濾液を回収した。
（0.8×40cm）にかけ，ギ酸０〜0.15Nのグラジエント溶
出（400ml）を行い,10mlごとに分画した。各分画につ
き,260nmにおける吹光度とNADを定量したところ，ギ酸
濃度0.08N付近に溶出している紫外線吸収ピークがNADの
ピークであった。この画分を回収し,pHをおよそ２に合
わせた後，活性炭に吸着させた。この活性炭をよく撹拌
後，吸引濾過し，適当量の冷0.001N HClで洗浄後，ただ
ちに50％エタノール：濃アンモニア（200:1）溶液に加
え，撹拌後，吸引濾過してNADを含む濾液を回収した。
この濾液を数ml程度まで減圧濃縮後，これに10倍量のエ
タノールを加え，生じた沈殿を遠心分離により回収し
た。この沈殿を洗浄して乾燥したところ,42mgの白色粉
末が得られた。この白色粉末は89％の純度を有するNAD
であった。
タノールを加え，生じた沈殿を遠心分離により回収し
た。この沈殿を洗浄して乾燥したところ,42mgの白色粉
末が得られた。この白色粉末は89％の純度を有するNAD
であった。
（発明の効果） 本発明の菌株は,NAD含有量が高いので，これを培養すれ
ば,NADを安価に製造することができる。
ば,NADを安価に製造することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】３−アセチルピリジンに耐性を有し，か
つ，ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド含有量の高
いキヤンデイダ・ボイデイニイAP−15株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25146386A JPH0716404B2 (ja) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | キヤンデイダ・ボイデイニイａｐ−１５株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25146386A JPH0716404B2 (ja) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | キヤンデイダ・ボイデイニイａｐ−１５株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63105671A JPS63105671A (ja) | 1988-05-10 |
| JPH0716404B2 true JPH0716404B2 (ja) | 1995-03-01 |
Family
ID=17223196
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25146386A Expired - Lifetime JPH0716404B2 (ja) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | キヤンデイダ・ボイデイニイａｐ−１５株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0716404B2 (ja) |
-
1986
- 1986-10-21 JP JP25146386A patent/JPH0716404B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63105671A (ja) | 1988-05-10 |
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