JPH0716403B2 - キヤンデイダ・ボイデイニイｐｃ−３１株 - Google Patents
キヤンデイダ・ボイデイニイｐｃ−３１株Info
- Publication number
- JPH0716403B2 JPH0716403B2 JP25146286A JP25146286A JPH0716403B2 JP H0716403 B2 JPH0716403 B2 JP H0716403B2 JP 25146286 A JP25146286 A JP 25146286A JP 25146286 A JP25146286 A JP 25146286A JP H0716403 B2 JPH0716403 B2 JP H0716403B2
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- Japan
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- nad
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- strain
- culture
- methanol
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は，ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以
下NADと略称する。）含有量の高いキヤンデイダ・ボイ
デイニイPC−31株に関するものである。
下NADと略称する。）含有量の高いキヤンデイダ・ボイ
デイニイPC−31株に関するものである。
（従来の技術） NADは，生体内における多種多様な酸化還元酵素の補酵
素として生体内のエネルギー代謝，各種物質の補酵素と
して古くから知られている。また，近年では，臨床用試
薬，生化学試薬として生化学，医学方面に広範な用途が
拡大し，その需要は多いに高まってきているが,NADは高
価な物質である。
素として生体内のエネルギー代謝，各種物質の補酵素と
して古くから知られている。また，近年では，臨床用試
薬，生化学試薬として生化学，医学方面に広範な用途が
拡大し，その需要は多いに高まってきているが,NADは高
価な物質である。
従来,NADは酵母，細菌等を培養し，培養菌体から抽出す
ることで製造されてきた。近年では，生産量の向上をは
かるため，培養方法に種々の工夫が凝らされている。例
えば，培養過程にNAD前駆物質やNAD前駆物質と共に界面
活性剤を添加して菌体内又は培養液中にNADを蓄積させ
る方法（特公昭47−19748号公報，特公昭47−19749号公
報，特公昭45−29436号公報，特開昭48−56891号公報参
照），あるいは培養終了後，培養液から菌体を一旦分離
し，界面活性剤で処理した後,NAD前駆物質を含んだ溶液
中でさらに培養する方法（特開昭54−80493号公報，特
開昭54−80494号公報参照）が提案されている。
ることで製造されてきた。近年では，生産量の向上をは
かるため，培養方法に種々の工夫が凝らされている。例
えば，培養過程にNAD前駆物質やNAD前駆物質と共に界面
活性剤を添加して菌体内又は培養液中にNADを蓄積させ
る方法（特公昭47−19748号公報，特公昭47−19749号公
報，特公昭45−29436号公報，特開昭48−56891号公報参
照），あるいは培養終了後，培養液から菌体を一旦分離
し，界面活性剤で処理した後,NAD前駆物質を含んだ溶液
中でさらに培養する方法（特開昭54−80493号公報，特
開昭54−80494号公報参照）が提案されている。
しかしながら，上記のような従来例において用いられる
微生物は，いずれも炭水化物を炭素源及びエネルギー源
として生育するものに限られ，工業的規模での生産にお
ける原料としては，現在の醗酵工業の共通の原料である
廃糖蜜あるいは澱粉糖化液を使わざるをえず，これらの
原料は工業的見地から供給が不安定であり，均一な製品
が得られないため培養管理が難しく，強い着色のため廃
液処理にコストがかかると共に，目的物質の単離，精製
が困難である等の問題点を有しており，ひいてはNADの
価格上昇の大きな要因になっている。
微生物は，いずれも炭水化物を炭素源及びエネルギー源
として生育するものに限られ，工業的規模での生産にお
ける原料としては，現在の醗酵工業の共通の原料である
廃糖蜜あるいは澱粉糖化液を使わざるをえず，これらの
原料は工業的見地から供給が不安定であり，均一な製品
が得られないため培養管理が難しく，強い着色のため廃
液処理にコストがかかると共に，目的物質の単離，精製
が困難である等の問題点を有しており，ひいてはNADの
価格上昇の大きな要因になっている。
これを解決するため，本発明者らは先にキヤンデイダ25
−Ａをメタノールを主たる炭素源とする培地で培養し，
培養物からNADを採取するNADの製造法を提案した（日本
農芸化学会，昭和61年度大会講演要旨集P505参照）。
−Ａをメタノールを主たる炭素源とする培地で培養し，
培養物からNADを採取するNADの製造法を提案した（日本
農芸化学会，昭和61年度大会講演要旨集P505参照）。
（発明が解決しようとする問題点） しかしながら，上記で用いられているキヤンデイダ25−
Ａは,NADの含有量がそれほど高くないので,NADの生産量
はまだ満足いくべきものではなかった。このことによ
り,NADを未だ高価な物質としているのである。
Ａは,NADの含有量がそれほど高くないので,NADの生産量
はまだ満足いくべきものではなかった。このことによ
り,NADを未だ高価な物質としているのである。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らは，上記のごとき問題点を解決してNAD含有
量の高い菌株を提供することを目的として鋭意検討を重
ねた結果，上記のキヤンデイダ25−Ａを用いて突然変異
処理を行うことにより，ピコリン酸に耐性を有する変異
株を発見し，その菌株がNAD含有量の高い菌株であるこ
とを見い出し，本発明を完成するに至った。
量の高い菌株を提供することを目的として鋭意検討を重
ねた結果，上記のキヤンデイダ25−Ａを用いて突然変異
処理を行うことにより，ピコリン酸に耐性を有する変異
株を発見し，その菌株がNAD含有量の高い菌株であるこ
とを見い出し，本発明を完成するに至った。
すなわち，本発明は，ピコリン酸に耐性を有し，かつ,N
AD含有量の高いキヤンデイダ・ボイデイニイPC−31株を
要旨とするものである。
AD含有量の高いキヤンデイダ・ボイデイニイPC−31株を
要旨とするものである。
次に，本発明の菌学的性質を以下に示す。この菌学的性
質の検討のうち，ピコリン酸耐性とNAD含有量の検討に
は，メタノールを炭素源とする以下の培地を用いた。
質の検討のうち，ピコリン酸耐性とNAD含有量の検討に
は，メタノールを炭素源とする以下の培地を用いた。
なお，％は特に明記しない限りは重量％を示す（以下同
様）。
様）。
メタノール２容量％，塩化アンモニウム0.5％，リン酸
２水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫
酸マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カル
シウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/
ml,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビオチン0.02μg/mlからな
るメタノール培地（pH6.0）。
２水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫
酸マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カル
シウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/
ml,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビオチン0.02μg/mlからな
るメタノール培地（pH6.0）。
これ以外の検討には，酵母の分類同定法〔飯塚広，後藤
昭二著，（1969）〕，改訂版微生物の分類と同定（上）
〔長谷川武治編著，（1984）〕，ザ イースツ ア タ
クソノミツク スタデイー（THE YEASTS A taxonomic s
tudy）〔ロツダー（Lodder）編著，（1970）〕及びザ
イースツ ア タクソノミツク スタデイー（The Yeas
ts a taxonomic study）〔リジ（Rij）編著，（198
4）〕に記載されている方法に従った。
昭二著，（1969）〕，改訂版微生物の分類と同定（上）
〔長谷川武治編著，（1984）〕，ザ イースツ ア タ
クソノミツク スタデイー（THE YEASTS A taxonomic s
tudy）〔ロツダー（Lodder）編著，（1970）〕及びザ
イースツ ア タクソノミツク スタデイー（The Yeas
ts a taxonomic study）〔リジ（Rij）編著，（198
4）〕に記載されている方法に従った。
（ａ） 各培地における生育状態 MY液体培地,28℃,3〜５日間培養 細胞の大きさ:1.5〜3.5μ×2.0〜12.0μ 細胞の形態：卵円形又は円筒形，単独又は二連で，まれ
に仮性菌糸を形成しているものあり 増殖の形式：多極出芽 生育による培地の混濁：やや濁る 沈殿物の生成：粉状沈殿物あり 皮膜の形成：表面にシワ状皮膜あり MY寒天培地,28℃,3〜５日間培養 生育の程度：良好 周縁の形状：全縁 隆起状態：半レンズ状 表面の形状：粗面 表面の光沢：鈍光 表面の性状：バター質 表面の色調：乳白色 バレイシヨ・グルコース寒天培地によるスライド培養 仮性菌糸：形成し，芽出胞子も形成する 分裂子，厚膜胞子：形成せず （ｂ） 子嚢胞子の形成：なし （ｃ） 射出胞子の形成：なし （ｄ） 各生理的性質 最適生育条件:pH4.0〜7.0,27〜30℃ 生育の範囲:pH2.5〜9.5,18〜33℃ 硝酸塩の同化：あり 脂肪の分解：なし 尿素の分解：なし ゼラチンの液化：なし 耐浸透圧性： 塩化ナトリウム10％以上では生育しない カロチノイドの生成：なし 顕著な有機酸の生成：なし 殿粉様物質の生成：なし ビタミンの要求性： ビタミンを含有しない培地でも弱く生育するが，ビオチ
ンの添加により生育は増大する 菌株の特徴となる生理的性質 ピコリン酸耐性：あり 0.3％キノリン酸添加メタノール培地におけるNAD含有
量:26mg/g乾燥菌体（79mg/培地） （ｅ） 醗酵性と同化性 醗酵性を有する炭素源:D−グルコース 醗酵性のない炭素源： Ｄ−ガラクトース，麦芽糖，シヨ糖，乳糖，ラフイノー
ス 同化性を有する炭素源： Ｄ−リボース,D−キシロース,D−グルコース,D−マンノ
ース,D−フラクトース，エタノール，アドニツト，エリ
トリツト,D−マンニツト,D−ソルビツト，グリセリン 弱い同化性を有する炭素源： Ｄ−ガラクトース，麦芽糖,D−グルコン酸塩,DL−乳酸
塩，コハク酸塩 同化性のない炭素源： Ｄ−アラビノース,L−アラビノース,L−ラムノース,L−
ソルボース，シヨ糖，乳糖，メリビオース，セロビオー
ス，トレハロース，ラフイノース,D−メレジトース，α
−メチル−Ｄ−グルコシド，アルブチン，デキストリ
ン，可溶性澱粉，イヌリン，イノシツト，ズルシツト,2
−ケト−Ｄ−グルコン酸塩，クエン酸塩 上記の菌学的性質から，ロツダー（Lodder）の「ザ イ
ースツ ア タクソノミツク スタデイー（THE YEASTS
A taxonomic study）」（1970）の検索表及びリジ（Ri
j）の「ザ イースツ ア タクソノミツク スタデイ
ー（The Yeasts a taxonomic study）」（1984）の検索
表に基づき検索した結果，本菌株はキヤンデイダ（Cand
ida）属に属するものと判断され，さら炭素源の同化性
に関してあまり重要でない2,3の糖類についての結果が
異なるものの，その他の性質において一致をみたので，
本菌株はキヤンデイダ・ボイデイニイ（Candida boidin
ii）と同定するのが妥当であると判断した。
に仮性菌糸を形成しているものあり 増殖の形式：多極出芽 生育による培地の混濁：やや濁る 沈殿物の生成：粉状沈殿物あり 皮膜の形成：表面にシワ状皮膜あり MY寒天培地,28℃,3〜５日間培養 生育の程度：良好 周縁の形状：全縁 隆起状態：半レンズ状 表面の形状：粗面 表面の光沢：鈍光 表面の性状：バター質 表面の色調：乳白色 バレイシヨ・グルコース寒天培地によるスライド培養 仮性菌糸：形成し，芽出胞子も形成する 分裂子，厚膜胞子：形成せず （ｂ） 子嚢胞子の形成：なし （ｃ） 射出胞子の形成：なし （ｄ） 各生理的性質 最適生育条件:pH4.0〜7.0,27〜30℃ 生育の範囲:pH2.5〜9.5,18〜33℃ 硝酸塩の同化：あり 脂肪の分解：なし 尿素の分解：なし ゼラチンの液化：なし 耐浸透圧性： 塩化ナトリウム10％以上では生育しない カロチノイドの生成：なし 顕著な有機酸の生成：なし 殿粉様物質の生成：なし ビタミンの要求性： ビタミンを含有しない培地でも弱く生育するが，ビオチ
ンの添加により生育は増大する 菌株の特徴となる生理的性質 ピコリン酸耐性：あり 0.3％キノリン酸添加メタノール培地におけるNAD含有
量:26mg/g乾燥菌体（79mg/培地） （ｅ） 醗酵性と同化性 醗酵性を有する炭素源:D−グルコース 醗酵性のない炭素源： Ｄ−ガラクトース，麦芽糖，シヨ糖，乳糖，ラフイノー
ス 同化性を有する炭素源： Ｄ−リボース,D−キシロース,D−グルコース,D−マンノ
ース,D−フラクトース，エタノール，アドニツト，エリ
トリツト,D−マンニツト,D−ソルビツト，グリセリン 弱い同化性を有する炭素源： Ｄ−ガラクトース，麦芽糖,D−グルコン酸塩,DL−乳酸
塩，コハク酸塩 同化性のない炭素源： Ｄ−アラビノース,L−アラビノース,L−ラムノース,L−
ソルボース，シヨ糖，乳糖，メリビオース，セロビオー
ス，トレハロース，ラフイノース,D−メレジトース，α
−メチル−Ｄ−グルコシド，アルブチン，デキストリ
ン，可溶性澱粉，イヌリン，イノシツト，ズルシツト,2
−ケト−Ｄ−グルコン酸塩，クエン酸塩 上記の菌学的性質から，ロツダー（Lodder）の「ザ イ
ースツ ア タクソノミツク スタデイー（THE YEASTS
A taxonomic study）」（1970）の検索表及びリジ（Ri
j）の「ザ イースツ ア タクソノミツク スタデイ
ー（The Yeasts a taxonomic study）」（1984）の検索
表に基づき検索した結果，本菌株はキヤンデイダ（Cand
ida）属に属するものと判断され，さら炭素源の同化性
に関してあまり重要でない2,3の糖類についての結果が
異なるものの，その他の性質において一致をみたので，
本菌株はキヤンデイダ・ボイデイニイ（Candida boidin
ii）と同定するのが妥当であると判断した。
そして，親株であるキヤンデイダ25−Ａがピコリン酸に
耐性を有しないのに対して，本菌株はピコリン酸に耐性
を有するようになったことで，両者に著しい差がみられ
た。しかも,NADの含有量は，親株であるキヤンデイダ25
−Ａに比べて約2.4倍に増加していた。
耐性を有しないのに対して，本菌株はピコリン酸に耐性
を有するようになったことで，両者に著しい差がみられ
た。しかも,NADの含有量は，親株であるキヤンデイダ25
−Ａに比べて約2.4倍に増加していた。
このように，本菌株は菌学的性質が明らかに既存菌とは
異なっているので，新菌株と判断し，キヤンデイダ・ボ
イデイニイ（Candida boidinii）PC−31と命名し，昭和
61年９月25日に通産省工業技術院微生物工業技術研究所
へ寄託した〔微工研菌寄第8975号（FERM Ｐ−897
5）〕。
異なっているので，新菌株と判断し，キヤンデイダ・ボ
イデイニイ（Candida boidinii）PC−31と命名し，昭和
61年９月25日に通産省工業技術院微生物工業技術研究所
へ寄託した〔微工研菌寄第8975号（FERM Ｐ−897
5）〕。
本発明の菌株を得るためには，例えば，親株としてすで
に微工研に寄託されているメタノール資化性酵母キヤン
デイダ（Candida）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM
Ｐ−8725）を用い，変異誘発源として紫外線を用いて変
異させればよい。このとき，変異誘発源としては，紫外
線以外に物理的因子や薬剤を用いてもよい。そのような
ものとしては，例えば，放射線，高熱処理,5−ブロモウ
ラシル，エチルメタンサルホネート，マスタードガス，
ニトロソグアニジンがあげられる。
に微工研に寄託されているメタノール資化性酵母キヤン
デイダ（Candida）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM
Ｐ−8725）を用い，変異誘発源として紫外線を用いて変
異させればよい。このとき，変異誘発源としては，紫外
線以外に物理的因子や薬剤を用いてもよい。そのような
ものとしては，例えば，放射線，高熱処理,5−ブロモウ
ラシル，エチルメタンサルホネート，マスタードガス，
ニトロソグアニジンがあげられる。
本発明の菌株を培養するに際して用いられる培地として
は，メタノールを炭素源とし，前駆物質としてキノリン
酸を添加すること以外は，キヤンデイダ属に属する酵母
で通常用いられる培地でよい。このときの培地組成とし
て，メタノール濃度を0.5〜３容量％程度，キノリン酸
濃度を0.1〜0.5％程度とし，それ以外の培地組成とし
て，例えば，ペプトン，尿素，硫安，塩安，硝安，硝酸
ソーダ等の窒素源が用いられ，また，リン酸２水素ナト
リウム，リン酸２水素カリウム，リン酸１水素カリウム
等のリン酸源が用いられる。さらに増殖促進因子とし
て，ビオチン，チアミン，酵母エキス，あるいは鉄，カ
ルシウム，マンガン，亜鉛等の金属塩を微量添加するこ
とができる。
は，メタノールを炭素源とし，前駆物質としてキノリン
酸を添加すること以外は，キヤンデイダ属に属する酵母
で通常用いられる培地でよい。このときの培地組成とし
て，メタノール濃度を0.5〜３容量％程度，キノリン酸
濃度を0.1〜0.5％程度とし，それ以外の培地組成とし
て，例えば，ペプトン，尿素，硫安，塩安，硝安，硝酸
ソーダ等の窒素源が用いられ，また，リン酸２水素ナト
リウム，リン酸２水素カリウム，リン酸１水素カリウム
等のリン酸源が用いられる。さらに増殖促進因子とし
て，ビオチン，チアミン，酵母エキス，あるいは鉄，カ
ルシウム，マンガン，亜鉛等の金属塩を微量添加するこ
とができる。
これらの培地を用いて，本発明の菌株をpH4〜7,温度25
〜33℃で通気撹拌培養すればよい。このとき，培養終了
時点は，菌の増殖後であればいつでもよいが，好ましく
は培養液のメタノールがまったく消費された後にするの
が,NADがより蓄積されていて良い。
〜33℃で通気撹拌培養すればよい。このとき，培養終了
時点は，菌の増殖後であればいつでもよいが，好ましく
は培養液のメタノールがまったく消費された後にするの
が,NADがより蓄積されていて良い。
本発明において,NADを単離，精製するには，例えば，ま
ず培養物から遠心分離や濾過等で菌体を集菌し，次い
で，集菌した菌体を常法，すなわち菌体を破砕後，遠心
分離して得られた上澄に有機溶媒又は各種の塩類を加え
て分画精製したり，担体に吸着させて精製する等の方法
で行うことができる。
ず培養物から遠心分離や濾過等で菌体を集菌し，次い
で，集菌した菌体を常法，すなわち菌体を破砕後，遠心
分離して得られた上澄に有機溶媒又は各種の塩類を加え
て分画精製したり，担体に吸着させて精製する等の方法
で行うことができる。
（実施例） 以下，実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
なお，実施例中の％は，特に明記しない限りは重量％を
示す。
示す。
実施例1,比較例１ まず，親株として用いたキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌
寄第8725号）の紫外線に対する感受性を調べるため，メ
タノール１容量％，塩化アンモニウム0.5％，リン酸２
水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫酸
マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カルシ
ウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/m
l,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビオチン0.02μg/ml,寒天1.
5％,pH6.0からなる培地（以下メタノール培地と略称す
る。）を用いてプレートを作成し，それに各種濃度の菌
懸濁液をまき，その上から紫外線を400μw/cm2の照度で
照射し，生存率0.1％を与える照射時間を求めたところ,
34秒間であった。
寄第8725号）の紫外線に対する感受性を調べるため，メ
タノール１容量％，塩化アンモニウム0.5％，リン酸２
水素カリウム0.1％，リン酸１水素カリウム0.1％，硫酸
マグネシウム0.05％，塩化第２鉄30μg/ml,塩化カルシ
ウム10μg/ml,硫酸マンガン10μg/ml,硫酸亜鉛10μg/m
l,チアミン塩酸塩２μg/ml,ビオチン0.02μg/ml,寒天1.
5％,pH6.0からなる培地（以下メタノール培地と略称す
る。）を用いてプレートを作成し，それに各種濃度の菌
懸濁液をまき，その上から紫外線を400μw/cm2の照度で
照射し，生存率0.1％を与える照射時間を求めたところ,
34秒間であった。
次に，メタノール培地にピコリン酸を各種濃度で添加し
た培地にキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌寄第8725号）を
まき，ピコリン酸に対する感受性を調べたところ，ピコ
リン酸10mM含有の培地ではまったく生育できないことが
わかった。そこで，メタノール培地にピコリン酸10mMを
添加したプレートを作り，それにキヤンデイダ25−Ａ
（微工研菌寄第8725号）をまき，その上から紫外線を40
0μw/cm2の照度で34秒間照射した後,28℃で１週間培養
し，生育してきた多数のコロニーを拾い上げた。これら
の菌株をメタノール培地にキノリン酸0.3％を添加した
液体培地を用いて振盪培養し,4日後に菌体中のNAD含有
量を測定したところ，これらの菌株中からNAD含有量が
親株より約2.4倍高くなったキヤンデイダ・ボイデイニ
イ（Candida boidinii）PC−31〔微工研菌寄第8975号
（FERM Ｐ−8975）〕が得られた。
た培地にキヤンデイダ25−Ａ（微工研菌寄第8725号）を
まき，ピコリン酸に対する感受性を調べたところ，ピコ
リン酸10mM含有の培地ではまったく生育できないことが
わかった。そこで，メタノール培地にピコリン酸10mMを
添加したプレートを作り，それにキヤンデイダ25−Ａ
（微工研菌寄第8725号）をまき，その上から紫外線を40
0μw/cm2の照度で34秒間照射した後,28℃で１週間培養
し，生育してきた多数のコロニーを拾い上げた。これら
の菌株をメタノール培地にキノリン酸0.3％を添加した
液体培地を用いて振盪培養し,4日後に菌体中のNAD含有
量を測定したところ，これらの菌株中からNAD含有量が
親株より約2.4倍高くなったキヤンデイダ・ボイデイニ
イ（Candida boidinii）PC−31〔微工研菌寄第8975号
（FERM Ｐ−8975）〕が得られた。
なお,NADの定量は，菌体を集菌後85℃の熱水で抽出し，
アルコールデヒドロゲナーゼを用いる酵素法にて行った
〔メソツズ オブ エンザイマテイツク アナリシス
（Methods of Enzymatic Analysis）第３版（1984）７
巻P253参照〕。
アルコールデヒドロゲナーゼを用いる酵素法にて行った
〔メソツズ オブ エンザイマテイツク アナリシス
（Methods of Enzymatic Analysis）第３版（1984）７
巻P253参照〕。
次に，グルコース１％，塩化アンモニウム0.4％，リン
酸２水素カリウム0.1％，硫酸マグネシウム0.05％，酵
母エキス0.2％からなる組成の培地に上記菌株を植菌し,
pH6.0にて28℃で24時間振盪培養して種菌液を調製し
た。次いで，メタノール濃度を２容量％とし，寒天を加
えないメタノール培地100mlを500ml容振盪フラスコに入
れ，これに上記の種菌液を１％になるように加えて28℃
で振盪培養した。培養を開始して100時間後に，酵母菌
体中には26mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
酸２水素カリウム0.1％，硫酸マグネシウム0.05％，酵
母エキス0.2％からなる組成の培地に上記菌株を植菌し,
pH6.0にて28℃で24時間振盪培養して種菌液を調製し
た。次いで，メタノール濃度を２容量％とし，寒天を加
えないメタノール培地100mlを500ml容振盪フラスコに入
れ，これに上記の種菌液を１％になるように加えて28℃
で振盪培養した。培養を開始して100時間後に，酵母菌
体中には26mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
なお，比較のため，親株であるキヤンデイダ（Candid
a）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM Ｐ−8725）を用
いて上記と同様にして培養を行ったところ，酵母菌体中
には11mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
a）25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERM Ｐ−8725）を用
いて上記と同様にして培養を行ったところ，酵母菌体中
には11mg/g乾燥菌体のNADが蓄積されていた。
実施例２ ２容ミニジヤーフアーメンターに，メタノール濃度を
２容量％とし，寒天を加えないメタノール培地1.2を
入れ，実施例１と同様に植菌した後，温度28℃，通気条
件1VVM,400rpmで培養を行った。培養開始100時間後に
は，酵母菌体中には約26mg/g乾燥菌体のNADが，また，
培養液1.2中には95mgのNADが蓄積していた。
２容量％とし，寒天を加えないメタノール培地1.2を
入れ，実施例１と同様に植菌した後，温度28℃，通気条
件1VVM,400rpmで培養を行った。培養開始100時間後に
は，酵母菌体中には約26mg/g乾燥菌体のNADが，また，
培養液1.2中には95mgのNADが蓄積していた。
次に，この培養液から遠心分離により菌体を得て,2,3回
0.9％塩化ナトリウムで洗浄した。この菌体に85℃の熱
水を約10ml加え,85℃の湯浴中で約５分間撹拌すること
によりNADを抽出し，冷却後，遠心分離により抽出液を
得た。これをDowex1−X2（200〜400メツシュ，ギ酸型）
カラム（0.8×40cm）にかけ，ギ酸０〜0.15Nのグラジエ
ント溶出（400ml）を行い,10mlごとに分画した。各画分
につき,260nmにおける吸光度とNADを定量したところ，
ギ酸濃度0.08N付近に溶出している紫外線吸収ピークがN
ADのピークであった。この画分を回収し,pHをおよそ２
に合わせた後，活性炭に吸着させた。この活性炭をよく
撹拌後，吸引濾過し，適当量の冷0.001N HClで洗浄後，
ただちに50％エタノール：濃アンモニア（200:1）溶液
に加え，撹拌後，吸引濾過してNADを含む濾液を回収し
た。
0.9％塩化ナトリウムで洗浄した。この菌体に85℃の熱
水を約10ml加え,85℃の湯浴中で約５分間撹拌すること
によりNADを抽出し，冷却後，遠心分離により抽出液を
得た。これをDowex1−X2（200〜400メツシュ，ギ酸型）
カラム（0.8×40cm）にかけ，ギ酸０〜0.15Nのグラジエ
ント溶出（400ml）を行い,10mlごとに分画した。各画分
につき,260nmにおける吸光度とNADを定量したところ，
ギ酸濃度0.08N付近に溶出している紫外線吸収ピークがN
ADのピークであった。この画分を回収し,pHをおよそ２
に合わせた後，活性炭に吸着させた。この活性炭をよく
撹拌後，吸引濾過し，適当量の冷0.001N HClで洗浄後，
ただちに50％エタノール：濃アンモニア（200:1）溶液
に加え，撹拌後，吸引濾過してNADを含む濾液を回収し
た。
この濾液を数ml程度まで減圧濃縮後，これに10倍量のエ
タノールを加え，生じた沈殿を遠心分離により回収し
た。この沈殿を洗浄して乾燥したところ,75mgの白色粉
末が得られた。この白色粉末は89％の純度を有するNAD
であった。
タノールを加え，生じた沈殿を遠心分離により回収し
た。この沈殿を洗浄して乾燥したところ,75mgの白色粉
末が得られた。この白色粉末は89％の純度を有するNAD
であった。
（発明の効果） 本発明の菌株は,NAD含有量が高いので，これを培養すれ
ば,NADを安価に製造することができる。
ば,NADを安価に製造することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】ピコリン酸に耐性を有し，かつ，ニコチン
アミドアデニンジヌクレオチド含有量の高いキヤンデイ
ダ・ボイデイニイPC−31株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25146286A JPH0716403B2 (ja) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | キヤンデイダ・ボイデイニイｐｃ−３１株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25146286A JPH0716403B2 (ja) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | キヤンデイダ・ボイデイニイｐｃ−３１株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63105670A JPS63105670A (ja) | 1988-05-10 |
| JPH0716403B2 true JPH0716403B2 (ja) | 1995-03-01 |
Family
ID=17223180
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25146286A Expired - Lifetime JPH0716403B2 (ja) | 1986-10-21 | 1986-10-21 | キヤンデイダ・ボイデイニイｐｃ−３１株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0716403B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4957533B2 (ja) * | 2007-12-14 | 2012-06-20 | 株式会社カネカ | ロール受け具 |
-
1986
- 1986-10-21 JP JP25146286A patent/JPH0716403B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63105670A (ja) | 1988-05-10 |
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