JPH0718865B2 - 水性液体のイオン強度又は比重の測定法及びその試薬 - Google Patents

水性液体のイオン強度又は比重の測定法及びその試薬

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JPH0718865B2
JPH0718865B2 JP1174300A JP17430089A JPH0718865B2 JP H0718865 B2 JPH0718865 B2 JP H0718865B2 JP 1174300 A JP1174300 A JP 1174300A JP 17430089 A JP17430089 A JP 17430089A JP H0718865 B2 JPH0718865 B2 JP H0718865B2
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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明の対象は、水溶液のイオン強度又は比重の新規測
定法及びその方法を実施するための試薬である。
〔従来の技術〕
尿の比重測定のために、多くの物理的方法、例えば液体
比重計、尿比重計、ピクノメータ及び屈折計による測定
が知られている。これらの方法は、十分に正確ではある
が、高価な器具による出費が要求され、かつ器具の必要
な掃除と目盛調整によつて時間と費用の問題を含む。
視覚によつても評価できる所謂試験片を使用する比重の
測定は比較的簡単である。試験片は、適当な試薬を含む
試験領域を有する。この測定は試験片を被検尿中に浸漬
し、試験領域の変色を観察することによつて簡単に行わ
れる。試験片は、更に他の尿検査、例えば、相応した多
くの相互に分離された試験領域をもつユニバーサル試験
片中でグルコース、リンパ球、血液等の検査と組合せる
ことのできる利点を提供する。従つて尿の比重測定は、
時間をかけることなく1工程でこれらのパラメーターの
測定と共に行われる。評価は、器具を使つても実施でき
る。
尿の比重の試験片による測定法は、米国(US−A)特許
第4,015,462号明細書に記載されている。担体マトリツ
クスは、液体を含有し、滲透圧により破壊されうるマイ
クロカプセルを具えており、この様なマトリツクスは低
いオスモル濃度の試験溶液に接すると半透性の壁膜材料
から成るマイクロカプセルの静水力学的圧力が上昇す
る。このことはマイクロカプセルを破壊させる。このマ
イクロカプセルの破裂及びそれに由来する液体中に溶け
た色素の放出がマトリツクスを変色させる。色の強度
は、試料液のオスモル濃度もしくは比重に比例する。こ
の方法の欠点は、マイクロカプセルを備えた担体のマト
リツクスの使用にある。それというのも、これの製造
は、正確性が必要であるために非常に困難であるからで
ある。
試験片による比重又はイオン強度を測定するもう1の方
法は、米国特許(US−A)第4,318,709号及びこれに対
応する西ドイツ国特許(DE−A)第29 44 980号明細
書に記載されている。これらにおいては試料は弱酸性又
は弱塩基性の少くとも50%中和された高分子電解質ポリ
マー及び指示薬を含有する試薬と混合する。これの基礎
となる原理は、水溶液の比重とイオン高度の比例性にあ
る。
そこでは、イオン性基を有するポリマーが、高分子電解
質ポリマーと称されている。その例として、ポリアクリ
ル酸もしくはポリビニールアミンが挙げられている。
欧州特許(EP−A)第0 114 315号明細書には、強有
機酸によつて中和された弱塩基性の高分子電解質ポリマ
ー及び指示薬を含む試薬が記載されている。
欧州特許(EP−A)第0 114 316号明細書中には、少
くとも1個のカルボキル基がアンモニウム塩の形で存在
する弱酸性高分子電解質ポリマー及び指示薬を含有する
試薬が開示されている。
欧州特許(EP−A)第0 023 631号明細書中にもイオ
ン強度又は比重測定試薬が記載されている。これは、弱
酸性又は強塩基性の高分子電解質ポリマーと並んで、少
くとも6.5のpH価を保証する緩衝剤並びにpH指示薬を含
有している。
高分子電解質ポリマーを含む試薬を用いて実施される方
法は、しかしながらpHの急激な変化によつて一度生じた
呈色が時間とともに変色する欠点を有する。すなわち1
分後に読みとる比重の値が2分又は5分後に読みとる値
と著しく異なる結果をもたらす。
この試験に対して特別に訓練されていない人々、例えば
任意の患者達によって該試験が実施され、かつ試験片の
メーカーによつて設定された時間通りに評価が行われな
い場合には、健康状態が重大な誤つた解釈に導かれる可
能性がある。
従つて、比較的長期にわたる試験の間に安定した実験結
果を提供するイオン強度又は比重を測定する方法の必要
性が生じた。
〔発明が解決しようとする課題〕
本発明の課題は、これらの需要を満たし、被験体に対し
ても迅速かつ信頼性のある方法を提供することであつ
た。
〔課題を解決する手段〕
この課題は、液体を適当な試薬と混合し、生じる液体中
のpH変化を測定し、かつ評価することによる水性液体の
イオン強度及び比重を測定する本発明による方法で解決
され、これは、該試薬がpH−指示薬を含有し、並びに少
くとも1種のpH−緩衝剤を含むが、高分子電解質ポリマ
ーを含まないか又は少くとも1種のpH−緩衝剤及び/又
は少くとも1種の錯体形成剤を含むことを特徴とする。
本発明のもう1つの目的は、測定に好適な試薬である。
オスモル濃度とも称される水溶液のイオン強度又はその
比重が本発明の方法で測定される水性液体は、本質的に
は水からなつている。この液体の他の成分は溶解した及
び/又は溶解していない成分である。溶解した成分は、
イオン性及び非イオン性物質である。溶解していない成
分は難溶性化学物質であつてよいが、他の成分例えば生
体物質の例えば細胞であつてもよい。この液体は、任意
のpH価を有していてよい。3〜13有利に4〜9のpH価を
もつ液体を検査するのが有利である。他のpH価をもつ液
体でもそれらのpH価が酸又は塩基の添加によつて定量の
前又はその間にこれらの範囲にもたらされる場合には、
該液体を検査することも可能である。
この方法を比重を測定するために使用する場合には、0.
95〜2有利に0.99〜1.2の値の範囲の比重に対して使用
することができる。
有利な水性液体は塩溶液又は体液である。本発明の方法
は、体液例えば汗や尿に対して特に好適である。殊に尿
の検査に好適であることが立証されている。即ち、この
場合、1.00〜1.04の価の尿の比重も4.5〜8.0の尿のpH価
も、通例本発明の方法にとつて有利な範囲に存在するの
で、つまり何等の予備的な操作を加えることなく尿試料
に試薬を加えることができる。
液体と混合する試薬は、少くとも一種のpH緩衝剤及び/
又は少くとも1種の錯体形成を含む。pH緩衝剤は当業者
に公知の物質である。pH緩衝剤は、弱酸とこの酸の実質
的に完全に解離された塩との混合物もしくは弱塩基との
この塩基の実質的に完全に解離された塩との混合物であ
る。このことは、例えばレンプのヘミー・レキシコン
(Rmpps Chemie Lexikon)、第8版、5巻に緩衝剤
(Puffer)の標題のもとに明らかにされている。そこに
は加えられた酸及び塩基に対するこれら緩衝剤の溶液の
作用も記載されており;緩衝液のpH価は、酸又は塩基の
添加に際しても殆ど変化しない。
本発明によれば、特に尿のイオン強度もしくは比重の測
定に際して使用するための試薬として水溶液中のpH価が
4及び12の間、有利には5.5と10の間にあるpH−緩衝剤
が好適である。これらの中で、できるだけ小さい活量係
数(Aktivittkoeffizienten)を有する緩衝剤が有利
である。この活量係数は、高い有効荷電を有するイオン
から構成されている緩衝剤において特に小さい。水溶液
中におけるイオン及び緩衝剤の活量係数は、公知である
か又公知の方法で簡単に測定できる〔F.Seel,Grundlage
nder analylischen Chemie,verlag Chemie,Weinheim;Br
oschre“Buffer"der Firma Calbiochem.1985、12〜15
頁〕。緩衝剤でそれの0.1Mの濃度における活量係数が1
より小さく、かつ有利には0.9より小さい緩衝剤が特に
有利であることが証明されている。
このような緩衝剤は4〜11のpH領域で、例えば次のイオ
ンを含有する緩衝液である:燐酸塩、硼酸塩、炭酸塩、
クエン酸塩、ジエチルマロン酸塩、ニトリロ−トリス−
メチレン燐酸塩。同様に両性イオン性の緩衝剤例えばグ
リシン緩衝剤又は2−(N−モノホリノ)エタンスルホ
ン酸(MES)も好適である。
本発明の意味での錯体形成剤は、イオンと錯体を形成し
ながら反応する化学物質である。イオンとの錯体形成の
際に少くとも1個のプロトンを遊離する錯体形成剤が特
に有利である。
このような錯体形成剤は、例えば、クラウンエーテル、
クリプタンデン、ポダンデン及び弱酸又は弱塩基性の基
例えばカルボキシル又はアミノ基を有する多座配位子
(Mehrzhninge Liganden)である。1分子当り最高1
個のイオンと錯結合できる錯体形成剤が有利である。イ
オン強度もしくは比重を特に正確に把握するためには、
この錯体形成剤は、液体中に存在するなるべくすべての
イオン例えば尿中に屡々存在する陽イオン例えばアルカ
リ及びアルカリ土類金属イオンと特に錯体を形成するこ
とのできる状態になければならない。本発明の方法でpH
価の測定のためにpH指示薬を使用する場合には、無色の
錯体形成剤の使用が有利である。従つて錯体形成剤とし
ては、例えば次の化合物が好適である。
−クラウンエーテル、クリプタンデン、ポダンデン; 18−クラウン−6−テトラカルボン酸、N−フエニルア
ザ−15−クラウン−5、ヘキササイクレン−三硫酸塩、
クリプトフイツクス222 (Kryptofix 222 )、クリプ
トフイツクス221 、クリプトフイツクス211 、 −多座配位子: エチレンジアミン四醋酸、ニトリロ三醋酸、ジエチレン
トリアミン五醋酸、ジ−2−アミノエトキシ−エタン四
醋酸、ヘキサメチレンジニトリロ四醋酸、ニトリロ二醋
酸、N−メチルアミノ二醋酸。
主として塩を溶解含有し、実質的に緩衝能を示さない液
のイオン強度又は、比重の測定のために、主として1種
以上の錯体形成剤からなる試薬を用いてこの方法を実施
するのが特に有利である。この場合に、該試薬は、かな
らずしもpH緩衝剤を含む必要はない。
顕著な緩衝能をもつ物質例えば弱酸又は弱塩基もしくは
これらの塩類に含有する液体の比重を測定すべき場合に
は、少くとも1種のpH緩衝剤を含む試薬が有利である。
この場合は、その液体に含まれうる非イオン性化合物の
比重に体する貢献も考慮される。これに加えて、該試薬
は1種以上の錯体形成剤を含有していてもよい。尿の検
査のためには、試料に対して等量の水で溶かして有利5.
5より大きいpH価を有する試薬組成物を選択すべきであ
る。
簡素化の理由から、成分の数はできるだけ小さく維持す
るのが好都合である。従つて緩衝剤として、pHの緩衝作
用をこえてイオン錯体形成作用をも有する物質を選択す
ることも非常に有利である。このような物質には、例え
ばニトリロトリス(メチレンホスホン酸)及びペンタナ
トリウム三燐酸(Na5P3O10)である。
試薬の組成は、特にこれのpH価に関連して、試薬を試料
と同量の水中に溶かした後のpH価が被検液体のpH値とほ
ぼ同一か又はそれよりも大きくなる陽に選択するのが有
利である。最適のpH価は、専門家により直ちに、僅かな
実験によつて調べることができる。
担体上に施与した試薬の場合には、このことは非常に簡
単に成就することができる。次いで、含浸液のpH価を、
含浸の前に適当に調節する。例えば尿の比重測定用の試
薬においては、6〜11のpH価、有利には7〜9に調節す
る。
試薬中のpH緩衝剤及び/又は錯体形成剤の量(この双方
の量をこれらと試験液に混合した量に対する)は、試料
液中の試薬のこれら物質の最終濃度が合計0.005〜1.0mo
l/有利には0.005〜0.2mol/になる様に選択する。試
薬の存在する形は、測定にとつて本質的に重要ではな
い。例えばこの試薬は粉末、錠剤又は溶液の形で使用す
ることができる。
試験片上でのこの方法の有利な実施形式では、試薬を吸
収性担体上に被覆物として施与するのが有利である。有
利な担体は、多孔性坦体材料又はフリースである。フリ
ースとは、線維から成る紙状の坦体と解する。試薬で含
浸された吸収性担体を使用するのが有利であり、この
際、吸収性坦体を試薬溶液で含浸し、乾燥させる。こう
して、全表面、有利には内面上にも試薬被膜が生じる。
該試薬は、被膜形成性及び膨張性の添加物と共に坦体上
に例えば試験片上に直接施与されていてもよい。更にこ
の試薬は通常の添加剤例えば安定剤、架橋剤又は膨張剤
を含有していてもよい。
液体と試薬の混合は、これらが試薬に対して選択された
形を得るのに有利な方法で行なう。試薬が吸収可能な坦
体上に被覆物として施与される場合には、単に、坦体を
液体と接触するだけでよい。この場合、液体は坦体中に
分散し、試薬を放出する。この溶解の経過は、本発明方
法の試薬によつて特に迅速かつ完全に進行する。それと
いうのも、この試薬は、易溶性の低分子物質であるから
である。
検査すべき液体上への試薬の作用に基づき、被験液体の
イオン強度又は比重に依存するpH価が生じる。
本発明の方法では、このpH価を測定する。これは公知の
方法、例えばpH電極を用いて行うこともできる。pH−指
示薬を用いる測定が特に有利である。それというのもこ
の測定は、眼によつても付加的な器具を用いることもな
く実施できるからである。
液体中できまるpHを包含するpH領域での色調の変化を示
すpH−指示薬を使用することが前提である。このような
pH−指示薬及びその色調変化域は公知である。尿のイオ
ン強度及び比重の測定のためには、4〜12のpK価を有す
るpH−指示薬が好適である。その中でも、ブロムチモル
ブルー又はチモルブルーが特別に好適であることが証明
されている。
このpH−指示薬は、試薬又は被検液体に、混合前にあら
かじめ加えておいてもよいし又は試薬と液体との混合後
又はその間に加えることもできる。加えた指示薬の量
は、色変化が明瞭に測定される様な量にする。試薬と試
料液体との混合物中の指示薬の有利な濃度は、0.1〜100
mmol/有利には1〜50mmol/である。
本発明方法では試薬と水性液体との反応が2相系中で、
例えば2つの互に不溶の又は僅かに可溶の液相中で実施
することができ、その際、試薬の少くとも一部が非水相
中に存在するが、次の様な場合、即ち試薬と液体もしく
はその成分との反応の間にすべての試薬特にpH緩衝剤も
しくは錯体形成剤及び場合によつてはpH−指示薬が1相
中、有利には水相中に溶解している場合が有利である。
この場合には反応は特に迅速に進行する。
本発明方法による評価は、特に簡単な方式で行なうこと
ができる。例えば、測定されたpH価に該当イオン強度又
は比重を、検量曲線を用いて割当てることができる。夫
々異なるが既知のイオン強度もしくは異なるが既知の比
重を有する比較可能な溶液に対するpHを測定することに
よつて、検量曲線を得る。pH−指示薬を用いる眼でpH測
定を行う際には、発色を、例えば、1連の既知のイオン
強度又は比重の液体に対して得られた色、例えばカラー
スケール(Farbskala)で得られ又把握された色と比較
することもできる。
この評価は試薬と試薬水溶液の混合後、一分も経過しな
いうちに行うことができる。本発明の方法は、測定され
たpH価が混合後5分間にわたり常に一定である利点を有
する。このことは、評価に比較的長い時間が要求される
か、又は最初の評価の直後に確認のために評価をもう1
度繰り返さなければならない際に重要である。
本発明の方法で特に有利な実施形は、尿の比重を試験片
上で測定する方法である。この試験片は、試薬の溶液に
よつて含浸され乾燥されたフリースから成る試験領域を
有する。試薬としては、pH緩衝剤、例えば水に溶かす場
合に8のpH価を有する燐酸緩衝剤、錯体形成剤、例えば
ニトリロ三醋酸及びpH−指示薬例えばブロムチモルブル
ーからなる混合物を使用する。試験領域を被検尿と接触
させる、例えば試験片を尿中に浸漬し、試験領域が濡れ
たら直ちに取り出す。試験領域に認められる色を、試験
片に添付の見本の色と比較する。その際、比重に関する
価は、見本の個々の色に関連している。測定すべき比重
は一致した色をもつ見本に関連している価を有する。
〔実施例〕
本発明を以下の例によつて更に説明する。
例1 a) 塩溶液又は尿のイオン強度又は比重の測定のため
の試験片の製造 セルロースフリース(タイプ23SL、Schleicher−Schl
l社)を、次の組成の水溶液で含浸した: ニトリロ−トリス(メチレンホスホン酸):120mM ブロムチモルブルー:0.15重量% この溶液を、3.5Nのテトラメチルアルモニウムヒドロオ
キシド水溶液でpH価を8に調整した。このフリースを乾
燥させ、5×5mmの大きさに切断した。この様にして製
造した試験領域をプラスチツク片(100×5mm)上にはり
つけた。
b) セルロースフリース(タイプ23L、Schleicher−S
chll社)を次の組成の水溶液で含浸した。
ペンタナトリウム三燐酸(Na5P3O10) 60mM ブロムチモルブルー 0.15重量% この溶液を2N塩酸でpH価8に調整した。このフリースを
乾燥させ、5×5mmの大きさに切断した。この様にして
製造した試験領域をプラスチツク片(100×5mm)上には
りつけた。
c) セルロースフリース(タイプ2316、Binger社)を
次の組成の水溶液で含浸した。
エチレンジアミン四醋酸 0.2重量% ナトリウム四硼酸 60mM チモルブルー 0.1重量% この溶液を10N苛性ソーダでpH価10に調整した。
このフリースを乾燥させ、5×5mmの大きさに切断し
た。この様にして製造した試験領域をプラスチツク片
(100×5mm)上にはりつけた。
d) セルロースフリース(タイプ23L、Schleicher−S
chll社)を次の組成の水溶液で含浸した: 燐酸2水素ナトリウム 60mM 2−(N−モルホリノエタンスルホン酸(MES) 40mM
ビスアミノエチルグリコールエーテルN,N,N′,N′4醋
酸 0.75重量% ブロムチモルブルー 0.15重量% この溶液を10N苛性ソーダでpH価8に調整した。
このフリースを乾燥させ、5×5mmの大きさに切断し
た。その様にして製造した試験領域をプラスチツク片
(100×5mm)上にはりつけた。
e) セルロースフリース(タイプ2316、Binzer社)を
次の組成の溶液で含浸した: 燐酸2水素ナトリウム 30mM ニトリロ3醋酸 0.2重量% ブロムチモルブルー 0.1重量% 溶液を10N苛性ソーダでpH価8に調整した。
フリースを乾燥させ、5×5mmの大きさに切断した。こ
の様にして製造した試験領域をプラスチツク片(100×5
mm)上にはりつけた。
f) セルロースフリース(タイプ23SL、Schleicher−
Schll社)を次の組成の水溶液で含浸した: エチレンジアミン4醋酸 0.2重量% 燐酸2水素ナトリウム 30mM ブロムチモルブルー 0.1重量% この溶液を10N苛性ソーダでpH価8に調整した。
このフリースを乾燥させ、5×5mmの大きさに切断し
た。この様にして製造した試験領域をプラスチツク片
(100×5mm)上にはりつけた。
g) セルロースフリース(タイプ23SL、Schleicher−
Schll社)を次の組成の水溶液で含浸した: ジエチルマロン酸 50mM ニトリロ三醋酸 0.5重量% ブロムチモルブルー 0.15重量% この溶液を3.5Nのテトラメチルアムモニウムヒドロオキ
シド溶液でpH価を8に調整した。
このフリースを乾燥させ、5×5mmの大きさに切断し
た。この様にして製造した試験領域をプラスチツク片
(100×5mm)上にはりつけた。
例2 尿試料の比重の測定 例1により製造した試験片を短時間尿中に浸漬した。30
秒、1分、2分もしくは5分後に色を尿に関して既知の
比重で得たカラースケールの色と比較した。比重に関す
る上記の測定時間に得られた価は同じであつた。該比重
はピクノメータによつて測定された尿の比重と一致し
た。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平2−73134(JP,A) 特開 昭56−21064(JP,A) 特開 昭55−101047(JP,A)

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】液体を適当な試薬と混合し、該液体のpH価
    を測定及び評価することにより水性液体のイオン強度及
    び比重を測定する方法において、該試薬は、 (i)少なくとも1種のpH−指示薬及び少なくとも1種
    のpH−緩衝物質(但し高分子電解質ポリマーを含まな
    い)、 (ii)少なくとも1種のpH−指示薬及び少なくとも1種
    の錯体形成剤、又は (iii)少なくとも1種のpH−指示薬、少なくとも1種
    の錯体形成剤及び少なくとも1種のpH−緩衝物質(但し
    高分子電解物質を含まない)、 を含有することを特徴とする、水性液体のイオン強度又
    は比重を測定する方法。
  2. 【請求項2】該試薬を吸収可能の担体に含浸することを
    特徴とする、請求項1記載の方法。
  3. 【請求項3】pH−緩衝物質は0.1Mの濃度で、1より小さ
    い活量係数を有することを特徴とする、請求項1又は2
    に記載の方法。
  4. 【請求項4】水溶液のイオン強度又は比重を測定する試
    薬において、これは (i)少なくとも1種のpH−指示薬及び少なくとも1種
    のpH−緩衝物質(但し高分子電解質ポリマーを含まな
    い)、 (ii)少なくとも1種のpH−指示薬及び少なくとも1種
    の錯体形成剤、又は (iii)少なくとも1種のpH−指示薬、少なくとも1種
    の錯体形成剤及び少なくとも1種のpH−緩衝物質(但し
    高分子電解物質を含まない)、 を含有することを特徴とする、水性液体のイオン強度又
    は比重を測定する試薬。
  5. 【請求項5】吸収可能の担体に含浸されていることを特
    徴とする、請求項4記載の試薬。
  6. 【請求項6】pH−緩衝物質は、0.1Mの濃度で、1より小
    さい活量係数を有することを特徴とする、請求項4又は
    5に記載の試薬。
  7. 【請求項7】プラスチック片とその上に固定され、試薬
    で含浸された吸収性担体からなる水性液体のイオン強度
    又は比重を測定する試験片において、試薬として請求項
    4記載の試薬を使用していることを特徴とする試験片。
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