JPH07228583A

JPH07228583A - アブラツボラクタム類、その生産微生物及び製造法、並びに抗炎症剤

Info

Publication number: JPH07228583A
Application number: JP6276901A
Authority: JP
Inventors: Daisuke Kamimura; 大輔上村; Kaoru Yamada; 薫山田; Yasuo Masuzawa; 康男増沢; Yasuji Ijuin; 保治伊集院; Mayumi Kano; 真弓鹿野; Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤; Tomoko Tsuji; 智子辻; 明愛 ▲ぺい▼; Akiyoshi Pei
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1993-11-11
Filing date: 1994-11-11
Publication date: 1995-08-29

Abstract

(57)【要約】【目的】海洋微生物の培養液から、新規な構造を有す
る抗腫瘍性物質及び／又は抗炎症性物質を提供する。【構成】微生物培養液を抽出、精製して得られる、下
記一般式【化１】で表されるアブラツボラクタム類（式中、Ｒ¹及びＲ²は
独立に水素原子又は水酸基の保護基を表し、Ｒ³及びＲ⁴
は独立に水素原子又は低級アルキル基を表す）、それら
を生産できるストレプトマイセス属微生物及びアブラツ
ボラクタム類の製造方法、並びに抗炎症剤。【効果】アブラツボラクタム類は、マウスリンパ性白
血病細胞（Ｐ３８８）に対する増殖阻害活性、ヒト好中
球のＯ₂ ^-産生阻害活性、細胞内ホスホリパーゼＡ₂阻害
活性及びヒト好中球のＰＡＦ産生阻害活性を有し、抗腫
瘍剤、抗炎症剤等の医薬品として利用することが期待さ
れる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍活性、ヒト好中
球のＯ₂ ^-産生阻害活性、細胞内ホスホリパーゼＡ₂阻害
活性及び／又はヒト好中球のＰＡＦ産生阻害活性を持つ
アブラツボラクタム類、アブラツボラクタム類を生産す
る微生物、アブラツボラクタム類の製造法、及びそれを
有効成分とする抗炎症剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】微生物を含む天然物質由来の抗腫瘍剤は
アドリアマイシン、マイトマイシン等、数多く知られて
いるが、必ずしも満足の行かない治療成績や重篤な副作
用等の点で問題が残っており、医療の場では常により有
効で、より副作用の少ない薬剤が求められている。

【０００３】また、炎症反応は有害な刺激が生体に侵入
した場合に発効される一種の生体防御作用であるが、結
果として腫れ、痛み、臓器機能障害などの支障を伴い、
致死的であることも少なくない。具体的には外部からの
作用に対する一型アレルギーに伴う急性の炎症から、腎
炎やリウマチ性疾患による慢性の炎症まで、その原因や
発症過程、及び症状は極めて広範囲、かつ複雑である。
この対症療法剤として用いられるのが抗炎症剤と呼ばれ
る物で、ステロイド抗炎症剤と非ステロイド抗炎症剤に
大別され、各種糖質コルチコイドやインドメタシン等が
代表として挙げられる。しかし、ステロイド系抗炎症剤
は、種々の蛋白性メジエーターを含む蛋白合成阻害作用
を持ち、薬理効果が広範囲であり治癒効果も大きいもの
の重篤な副作用を引き起こすことが知られ、また薬理効
果と副作用の分離はほぼ不可能であることも最近明らか
にされた。一方、非ステロイド系抗炎症剤は、シクロオ
キシゲナーゼ阻害（プロスタグランジン産生抑制）作用
が主要薬理作用であるため効果が限定される。そのため
新たな薬理作用に基づく抗炎症剤の開発が求められてお
り、Ｏ₂ ^-産生阻害活性、細胞内ホスホリパーゼＡ₂阻害
活性、ＰＡＦ産生阻害活性を持つ化合物はその目的にか
なう物質と考えられる。即ち、種々の活性酸素分子種は
炎症時の組織障害に関与する最も中心的なメジエーター
であるがその産生は白血球（好中球、マクロファージ）
によるＯ₂ ^-産生に起因する。また細胞内ホスホリパーゼ
Ａ2 はごく最近その存在が明らかにされた酵素であり、
その活性化により主な炎症惹起メジエーターであるプロ
スタグランジン、ロイコトリエン、ＰＡＦの酵素的産生
が共通して開始されることが知られている。またＰＡＦ
はプロスタグランジン、ロイコトリエンと並ぶ強力な炎
症メジエーターであるがその合成阻害剤はまだ知られて
いない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明は、海洋
微生物の培養液から、新規な構造を有する抗腫瘍性物質
及び／又は抗炎症性物質を発見することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者等は海洋放線菌
の培養液に含まれる成分を検索した結果、ストレプトマ
イセス属に属する新規微生物培養液から分離される下記
一般式（１）、（２）及び（３）で表されるアブラツボ
ラクタム類が、Ｐ３８８に対するインビトロの増殖阻害
活性、ヒト好中球のＯ₂ ^-産生阻害活性、細胞内ホスホリ
パーゼＡ₂阻害活性及びヒト好中球のＰＡＦ産生阻害活
性を有することを見出し、本研究を完成した。

【０００６】即ち、本発明は、一般式

【０００７】

【化１０】

【化１１】

【０００８】または

【０００９】

【化１２】

【００１０】（式中、Ｒ¹及びＲ²は独立に水素原子又は
低級アルキル基を表し、Ｒ³及びＲ⁴は独立に水素原子又
は水酸基の保護基を表す）で表されるアブラツボラクタ
ム類を提供する。

【００１１】また、本発明は、共通の部分構造として、

【００１２】

【化１３】

【化１４】

【００１３】および

【００１４】

【化１５】

【００１５】（式中、Ｒ¹及びＲ²は独立に水素原子又は
低級アルキル基を表し、Ｒ³は水素原子又は水酸基の保
護基を表す）を有し、かつ

【００１６】（ａ）下記の物性：分子式： C₃₀H₄₀N₂O₅ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.7(1H,m), 0.80(3H,t), 0.90(3H,
d), 1.0(1H,m), 1.05(1H,m), 1.25(1H,m), 1.35(1H,m),
1.55(1H,m), 1.6(1H,m), 1.63(1H,m), 1.71(1H,m), 1.
88(1H,m), 1.9(1H,m), 1.9(1H,m), 2.23(1H,m), 2.28(1
H,m), 2.4(1H,m),3.13(1H,m), 3.19(1H,m), 3.3(3H,s),
4.05(1H,m), 4.20(1H,bs), 4.79(1H,bd),5.6(1H,dd),
5.95(1H,m), 6.08(1H,dd), 6.12(1H,dd), 6.12(1H,d),
6.32(1H,d), 7.55(1H,dd), 7.68(1H,dd)；

【００１７】（ｂ）下記の物性、分子式： C₃₀H₄₀N₂O₆ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.8(3H,t), 0.8(1H,m), 0.85(3H,
d), 0.95(1H,m), 1.05(1H,m), 1.2(1H,m), 1.25(1H,m),
1.5(1H,m), 1.85(1H,m), 1.9(1H,m), 2.0(1H,m),2.0(1
H,m), 2.2(1H,m), 2.4(1H,m), 2.5(1H,m), 2.5(1H,m),
2.7(1H,m), 2.85(1H,dd), 3.15(1H,m), 3.25(3H,s), 3.
5(1H,m), 3.5(1H,m), 4.0(1H,m), 4.1(1H,d), 4.8(1H,
m), 5.3(1H,m), 5.5(1H,m), 6.6(1H,bd), 6.7(1H,bd),
7.4(1H,bdd),7.7(1H,bdd)；

【００１８】または（ｃ）下記の物性：分子式 : C₃₀H₄₀N₂O₅ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.82(3H,t), 0.84(1H,m), 0.87(3H,
d), 1.0(1H,m), 1.05(1H,m), 1.25(1H,m), 1.28(1H,m),
1.48(1H,m), 1.50(1H,m), 1.64(1H,m), 1.88(1H,m),
1.92(1H,m), 2.02(1H,m), 2.02(1H,m), 2.12(1H,m), 2.
5(1H,m), 2.58(1H,m), 2.6(1H,m), 2.75(1H,bdd), 2.89
(3H,s), 3.13(1H,m), 3.20(1H,m), 3.28(1H,m), 3.58(1
H,m), 3.60(1H,bd), 3.70(1H,m), 5.50(1H,m), 5.60(1
H,m), 6.75(2H,d), 7.48(1H,dd), 7.60(1H,dd)；のいず
れかを有するアブラツボラクタム類を提供する。

【００１９】さらに本発明は、上記アブラツボラクタム
類を生産する微生物、上記アブラツボラクタム類の製造
法、及びそれを有効成分とする抗炎症剤を提供するもの
である。

【００２０】前記一般式（１）、（２）及び（３）中の
水酸基の保護基としては、アセチル基、プロパノイル
基、ベンゾイル基等のアシル基、トリメチルシリル基、
ｔ−ブチルジメチルシリル基等のシリル基、メトキシメ
チル基、テトラヒドロピラニル基等のアセタール型保護
基などが例示できる。また低級アルキル基としては、メ
チル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチ
ル基、イソブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが例
示できる。

【００２１】本発明の微生物はストレプトマイセス属に
属し、上記のアブラツボラクタム類を生産するものであ
って、このような微生物は自然界から新たに分離するこ
とができる。

【００２２】ストレプトマイセス属に属する微生物の例
として、アブラツボラクタム類生産能力を持つ微生物と
して本発明者らが新たに分離し、ストレプトマイセス属
に属する新規微生物と同定したストレプトマイセスｓ
ｐ．ＳＣＲＣ−Ａ２０を挙げることができる。この新
菌株、ストレプトマイセスｓｐ．ＳＣＲＣ−Ａ２０
は、工業技術院生命工学工業技術研究所特許微生物寄託
センターにＦＥＲＭＰ−１３９１５として寄託されて
いる。

【００２３】この新菌株は表１に示す組成の培地を用い
て次のように分離した。

【００２４】

【表１】

【００２５】上記組成のａ．培地の寒天平板に各地の海
洋より採取したサンプルを滅菌した生理食塩水で適度に
希釈した物を接種し、２５℃で７から１４日間培養し
た。この寒天培地上に出現したコロニーを同じ培地組成
の斜面培地に釣菌し、多数の菌株を分離した。

【００２６】次にＳＺ培地を試験管に５ｍＬづつ分注
し、同様に滅菌し、各々の菌株をこの液体培地で２５℃
で７日間振とう培養した。

【００２７】このようにして本発明のアブラツボラクタ
ム類を生産するストレプトマイセスｓｐ．ＳＣＲＣ−
Ａ２０を神奈川県三浦市油壺で採取したタツナミガイよ
り得た。

【００２８】この新規な菌株は次のような菌学的性質を
有する。

【００２９】１．酵母−麦芽寒天培地上でのコロニーの形態色：淡黄色光沢：なし形：円形で規則正しい、台状に盛り上がり周縁
あり、ひだ状を呈する大きさ：直径１〜１．５ｍｍ胞子形成：なし（スターチ無機塩培地で１２日間培養
すると螺旋状の胞子鎖を形成することがある）

【００３０】２．生化学的性質生育温度：２５〜４５℃ カタラーゼ：陽性オキシダーゼ：陽性グラム染色：陽性ＯＦテスト：陰性

【００３１】３．各種寒天培地での生育状況（３７℃、
１５日間培養）食塩ポリミキシン＋− ＢＴＢテイボル − マッコンキー − スタヒロＮｏ．１１０＋＋ポテトデキストロース − サブロー＋ガラクトース寒天＋− マリン寒天＋マルト寒天 − トリプトソイ寒天＋ＳＺ寒天^* ＋＋＋（青色色素生産）（* ＳＺ液体培地に寒天を２％加えたもの）

【００３２】４．化学分類学的性質細胞壁ジアミノ酸：ＬＬジアミノピメリン酸主要な脂肪酸の種類：１２−メチルテトラデカン酸１４−メチルペンタデカン酸１４−メチルヘキサデカン酸

【００３３】以上の結果より、ＳＣＲＣ−Ａ２０は、菌
の形態的性質、胞子形成が無いこと、菌糸が容易に解裂
し易い点ではノカルヂア属に似ているが、化学的性質が
ノカルヂア属に当てはまらず、ストレプトマイセス属に
近い性質を示している。従って本菌株はストレプトマイ
セス属に属する新規微生物と同定された。

【００３４】なお、本菌に変異を生じさせて一層生産性
の高い菌株を得ることもできる。また、本菌株の細胞中
に存在するアブラツボラクタム類の生産に関与する遺伝
子を切り出し、これを適切なベクター例えばプラスミド
に挿入し、このベクターを用いて適当な宿主、例えばエ
ッシェリッヒア・コリ（Escherichia coli）や酵母のご
とき異種宿主、またはストレプトマイセス属菌のごとき
同種宿主を形質転換することにより、本発明のアブラツ
ボラクタム類生産菌を人為的に創製することもできる。

【００３５】本発明の菌株は、常法に従って保存するこ
とができ、例えば寒天スラント上で、または凍結乾燥法
により保存することができる。寒天スラント培地として
はストレプトマイセス属菌の保存に常用されている培
地、例えば菌の分離に関して前記した培地を使用するこ
とができる。また凍結乾燥も常法に従って行うことがで
きる。

【００３６】前記微生物を培養して本発明のアブラツボ
ラクタム類を製造しようとする場合、基礎栄養培地とし
て、この発明の微生物が増殖し得るものであればいずれ
を使用してもよい。この培地は、窒素源として例えば酵
母エキス、ペプトン、肉エキス等の１種類または複数種
類を含有する。またこの培地には必要に応じて炭素源と
して各種の糖類を加えることができる。この培地には塩
化ナトリウム、もしくは天然海水や人工海水を加えるこ
とが必要である。

【００３７】培養は固体培地または液体培地のいずれを
用いても良いが、目的とする物質を多量に得るためには
液体培地を用い、静置培養もしくは振とう培養、通気・
攪はん培養等により好気的条件下で行うのが好ましい。
培養温度は菌が生育し、本発明のアブラツボラクタム類
が生産される温度範囲であればいずれの温度でも良く、
好ましくは２５〜４５℃であり、より好ましくは３０〜
３７℃である。ｐＨは６〜９、好ましくは７〜８の範囲
である。培養時間は採取し得る量のアブラツボラクタム
が生産される時間を選べば良く、好ましくは１２時間〜
１０日間である。

【００３８】本発明の上記アブラツボラクタム類は、例
えばストレプトマイセス属の微生物培養菌体または培養
上清を有機溶媒で抽出し、更にクロマトグラフィにより
分離することにより、通常の方法で得られる。

【００３９】抽出に用いられる溶媒としてはメタノー
ル、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム等が挙げら
れ、クロマトグラフィはカラム及び薄層クロマトグラフ
ィが用いられ、カラムクロマトグラフィとしてはシリカ
ゲルの他、セファデックスＬＨ２０、逆相系のＲＰ−１
８が用いられ、薄層クロマトグラフィとしては、シリカ
ゲルの他、ＲＰ−１８が用いられる。

【００４０】本発明のアブラツボラクタム類に含まれる
化合物としては具体的には、

【００４１】

【化１６】

【００４２】で表されるアブラツボラクタムＡ、

【００４３】

【化１７】

【００４４】で表されるアブラツボラクタムＢ、及び

【００４５】

【化１８】

【００４６】で表されるアブラツボラクタムＣが挙げら
れる。

【００４７】本発明の抗炎症剤は、治療のために経口的
あるいは非経口的に投与することができる。経口投与剤
としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製
剤あるいはシロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤と
することができる。また、非経口投与剤として注射剤と
することができる。

【００４８】これらの製剤は活性成分に薬理学的、製剤
学的に認容される製造助剤を加えることにより常法に従
って製造される。更に公知の技術により持続性製剤とす
ることも可能である。当該製造助剤を用いる場合は、本
発明の抗炎症剤中のアブラツボラクタムＣ類の配合量は
通常は０．１〜１０重量％、好ましくは０．２〜５重量
％である。

【００４９】上記添加物は、内服用製剤（経口剤）、注
射用製剤（注射剤）、粘膜投与剤（バッカル、トロ−
チ、坐剤等）、外用剤（軟膏、貼付剤等）などの投与経
路に応じた適当な製剤用成分が使用される。例えば、経
口剤および粘膜投与剤にあっては、賦形剤（例：澱粉、
乳糖、結晶セルロース、乳糖カルシウム、メタケイ酸ア
ルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸）、崩壊剤（例：カ
ルボキシメチルセルロ−ス、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム）、滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシ
ム、タルク）、コ−テング剤（例：ヒドロキシエチルセ
ルロ−ス）、矯味剤などの製剤用成分が、また注射剤に
あっては、水性注射剤を構成し得る溶解剤ないし溶解補
助剤（例：注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリ
コ−ル）、懸濁化剤（例：ポリソルベ−ト８０などの界
面活性剤）、ｐＨ調整剤（例：有機酸またはその金属
塩）、安定剤などの製剤用成分が、さらに外用剤にあっ
ては、水性ないし油性の溶解剤ないし溶解補助剤（例：
アルコ−ル、脂肪酸エステル類）、粘着剤（例：カルボ
キシビニルポリマ−、多糖類）、乳化剤（例：界面活性
剤）などの製剤用成分が使用される。

【００５０】上記構成を有する本発明の抗炎症剤は、公
知の製造法、例えば日本薬局法第１０版製剤総則記載の
方法ないし適当な改良を加えた方法によって製造するこ
とができる。

【００５１】以下、実施例及び試験例により本発明をさ
らに詳細に説明する。

【００５２】

【実施例】

実施例１．ＳＣＲＣ−Ａ２０の培養によるアブラツボ
ラクタム類の生産ストレプトマイセスｓｐ．ＳＣＲＣ−Ａ２０をグルコ
ース１．０％、バクトペプトン０．５％、酵母エキス
０．１％、リン酸鉄（III）０．０１％を含む３／４濃
度人工海水培地（ｐＨ７．４）で３５℃、７日間好気的
に培養した。培養液（１０リットル（Ｌ））を濾紙とセ
ライトで吸引濾過して菌体と上清に分け、菌体を７００
ｍＬのメタノールで３回抽出した。抽出液を合わせ、エ
バポレータで約１００ｍＬに濃縮し酢酸エチル、クロロ
フォルムで順次３回づつ抽出して合わせた。不溶物が出
現した場合は濾別しメタノール溶液として前記抽出液と
合わせた。上清は半容の酢酸エチルで３回抽出した後、
クロロフォルムで抽出し、前記抽出液と併せて濃縮し、
粗抽出物１．９ｇを得た。これを繰り返し、培養液１０
０Ｌより粗抽出物１９ｇを得た。

【００５３】実施例２．培養液中のアブラツボラクタ
ム類の分離内径３．５ｃｍ×４０ｃｍのガラスカラムに４％メタノ
ール−クロロフォルムで懸濁させたシリカゲル（１００
ｇ）を充填し、少量の４％メタノール−クロロフォルム
に溶かした粗抽出物（３．７ｇ）を吸着させた。このカ
ラムに順次、４％メタノール−クロロホルム溶液５００
ｍＬ、８％メタノール−クロロホルム溶液６００ｍＬ、
２０％メタノール−クロロホルム溶液７００ｍＬを流
し、８％メタノール−クロロホルムで溶出される画分及
び２０％メタノール−クロロホルムで溶出される画分を
それぞれ集め、濃縮した。残りの粗抽出物も同様に処理
し、それぞれの画分から濃縮物を合計８３０ｍｇ及び
６．４ｇ得た。

【００５４】実施例３．アブラツボラクタムＡ及びＢ
の単離精製２０％クロロフォルム−メタノールで膨潤させたセファ
デックスＬＨ−２０を内径１．８ｃｍのガラスカラムに
高さ５５ｃｍに充填し、上記２０％メタノール−クロロ
ホルムで溶出された画分の濃縮物のうち１．５ｇを少量
の２０％クロロフォルム−メタノールに溶かして吸着さ
せた。このカラムに２０％クロロフォルム−メタノール
を１５０ｍＬ流し、１０ｍＬ目から約２０ｍＬを集め、
濃縮した。残りも同様に処理して合計４．１ｇの濃縮物
を得た。

【００５５】内径３．５ｃｍのガラスカラムにメタノー
ルに懸濁させたＲＰ−１８を高さ３０ｃｍに充填し、溶
媒を７０％メタノール−水に置換した。上記濃縮物３．
１ｇを少量のＲＰ−１８に吸着させてカラム上に載せ
た。このカラムに順次７０％メタノール−水３００ｍ
Ｌ、８５％メタノール−水３００ｍＬ、メタノール３０
０ｍＬ、クロロフォルム３００ｍＬを流し、メタノール
溶出部の後半とクロロフォルム溶出部の前半を合わせて
濃縮し、濃縮物４４０ｍｇを得た。

【００５６】内径１．８ｃｍのガラスカラムにメタノー
ルに懸濁させたＲＰ−１８を高さ２５ｃｍに充填し、溶
媒を８０％メタノール−水に置換した。前のＲＰ−１８
カラム処理で得た濃縮物の２６０ｍｇを少量のＲＰ−１
８に吸着させてカラム上に載せた。このカラムに順次８
０％メタノール−水１００ｍＬ、９０％メタノール−水
１００ｍＬ、メタノール１００ｍＬ、クロロフォルム１
００ｍＬを流し、メタノールで溶出される画分を静置
し、析出してきた黄色針状結晶を濾別してアブラツボラ
クタムＡ、１ｍｇを得た。

【００５７】分子式： C₃₀H₄₀N₂O₅ 融点： 255〜258℃¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.7(1H,m,H-9), 0.80(3H,t,H-29),
0.90(3H,d,H-27), 1.0(1H,m,H-28), 1.05(1H,m,H-11),
1.25(1H,m,H-10), 1.35(1H,m,H-7), 1.55(1H,m,H-7),
1.6(1H,m,H-28), 1.63(1H,m,H-12), 1.71(1H,m,H-24),
1.88(1H,m,H-14),1.9(1H,m,H-9), 1.9(1H,m,H-13), 2.2
3(1H,m,H-24), 2.28(1H,m,H-14), 2.4(1H,m,H-8), 3.13
(1H,m,H-6), 3.19(1H,m,H-25), 3.3(3H,s,H-Nb-Me), 4.
05(1H,m,H-25), 4.20(1H,bs,H-22), 4.79(1H,bd,H-23),
5.6(1H,dd,H-5), 5.95(1H,m,H-15), 6.08(1H,dd,H-4),
6.12(1H,dd,H-16), 6.12(1H,d,H-18), 6.32(1H,d,H-
2), 7.55(1H,dd,H-17), 7.68(1H,dd,H-3), 9.2,9.6(各
々1H,-OH/-NH).

【００５８】¹³C-NMR(C₅H₅N)：δ 13.0, 19.6, 26.5, 2
9.0, 32.4, 36.0, 38.0, 40.8, 41.8,45.7, 47.9, 49.
8, 50.5, 54.5, 56.7, 71.6, 74.0, 101.9, 121.5, 12
6.2, 127.0, 132.4, 134.8, 139.4, 143.7, 144.2, 16
6.5, 173.4, 174.3, 192.7. EI-MS (m/z)： 508(M⁺) ［α］_D ²⁰： +868°(c 0.05, C₅H₅N) さらに、Ｘ線結晶解析により本物質が上記の構造を有す
ることが決定された。

【００５９】前記２回目のＲＰ−１８カラム処理で得ら
れた９０％メタノール溶出部に析出した白色固体を濾別
して、アブラツボラクタムＢを８ｍｇ得た。

【００６０】なお、前記１回目のＲＰ−１８カラムで得
た濃縮物の５０ｍｇを分取用シリカゲル薄層板（厚さ
０．５ｍｍ、２０ｘ２０ｃｍ）に吸着させ、クロロフォ
ルム：ジエチルアミン：イソプロピルアルコール（７：
１：３）で２時間展開し、Ｒｆ値が０．４から０．５の
部分をかきとり、クロロフォルム：メタノール：水
（２：１：１）を加えて激しく振とう後静置し、下層を
分液濃縮してもアブラツボラクタムＢを８ｍｇ得た。

【００６１】分子式： C₃₀H₄₀N₂O₆ 融点： 239〜242℃（褐色）¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.8(3H,t,H-29), 0.8(1H,m,H-9),
0.85(3H,d,H-27), 0.95(1H,m,H-28), 1.05(1H,m,H-11),
1.2(1H,m,H-13), 1.25(1H,m,H-10), 1.5(1H,m,H-28),
1.85(1H,m,H-24), 1.9(1H,m,H-12), 2.0(1H,m,H-9), 2.
0(1H,m,H-13), 2.2(1H,m,H-24), 2.4(1H,m,H-17), 2.5
(1H,m,H-17), 2.5(1H,m,H-14), 2.7(1H,m,H-7), 2.85(1
H,dd,H-18), 3.15(1H,m,H-8), 3.25(3H,s,H-Nb-Me), 3.
5(1H,m,H-18), 3.5(1H,m,H-25), 4.0(1H,m,H-25), 4.1
(1H,d,H-22), 4.8(1H,m,H-23), 5.3(1H,m,H-16), 5.5(1
H,m,H-15), 6.6(1H,bd,H-5), 6.7(1H,bd,H-2), 7.4(1H,
bdd,H-3), 7.7(1H,bdd,H-4), 9.6(1H, -OH/-NH).

【００６２】¹³C-NMR(C₅D₅N)：δ 12.8(C-29), 17.8(C-
27), 26.4(C-28), 27.8(C-17), 28.3(C-Nb-Me), 32.2(C
-24), 37.7(C-18), 37.7(C-25), 38.6(C-9), 41.1(C-1
3), 43.9(C-8), 48.9(C-11), 52.2(C-12), 54.4(C-10),
55.3(C-14), 65.6(C-7), 70.8(C-23), 72.5(C-22), 10
2.2(C-20), 131.4(C-16), 133.6(C-15), 134.4(C-2), 1
36.7(C-5), 137.8(C-4), 138.9(C-3), 166.7(C-1), 17
5.8(C-26), 189.8(C-19),192.5(C-21), 201.0(C-6).

【００６３】SI-MS(m/z)： 525(M+H⁺), 547(M+Na⁺). ［α］_D ²⁰： +197°(c 0.43, C₅H₅N)

【００６４】実施例４．アブラツボラクタムＣの精製上記８％メタノール−クロロホルムで溶出された画分の
濃縮物のうち８０ｍｇを分取用シリカゲル薄層板（厚さ
０．５ｍｍ、２０ｘ２０ｃｍ）２枚に吸着させ、クロロ
フォルム：ジエチルアミン（７：３）で４時間展開し、
Ｒｆ値が０．２５から０．４５の部分をかきとり、クロ
ロフォルム：メタノール：水（２：１：１）を加えて激
しく振とう後静置し、下層を分液濃縮した。残りも同様
に処理して目的物質を主成分とする画分を合計２６０ｍ
ｇ得た。このうちの５０ｍｇを分取用シリカゲル薄層板
（厚さ０．５ｍｍ、２０ｘ２０ｃｍ）に吸着させ、クロ
ロフォルム：ジエチルアミン（７：３）で３時間展開
し、Ｒｆ値が０．３から０．４の部分をかきとり、クロ
ロフォルム：メタノール：水（２：１：１）を加えて激
しく振とう後静置し、下層を分液濃縮した。残りも同様
に処理して、アブラツボラクタムＣを合計１４０ｍｇ、
無色ガラス状物質として得た。

【００６５】分子式 : C₃₀H₄₀N₂O₅ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.82(3H,t,H-29), 0.84(1H,m,H-9),
0.87(3H,d,H-27), 1.0(1H,m,H-28), 1.05(1H,m,H-11),
1.25(1H,m,H-10), 1.28(1H,m,H-13), 1.48(1H,m,H-2
4), 1.50(1H,m,H-28), 1.64(1H,m,H-24), 1.88(1H,m,H-
23), 1.92(1H,m,H-12), 2.02(1H,m,H-9), 2.02(1H,m,H-
13), 2.12(1H,m,H-23), 2.5(1H,m,H-17), 2.58(1H,m,H-
14), 2.6(1H,m,H-17), 2.75(1H,bdd,H-7), 2.89(3H,s,N
b-Me), 3.13(1H,m,H-18/25), 3.20(1H,m,H-8), 3.28(1
H,m,H-25/18), 3.58(1H,m,H-18/25), 3.60(1H,bd,H-2
2), 3.70(1H,m,H-25/18), 5.50(1H,m,H-16), 5.60(1H,
m,H-15), 6.75(2H,d,H-2,5), 7.48(1H,dd,H-3/4), 7.60
(1H,dd,H-4/3), 9.1(1H,b,NH/OH).

【００６６】¹³C-NMR(C₅D₅N)：δ 12.8(C-29), 17.8(C-
27), 23.2(C-24), 26.53(C-23), 26.58(C-28), 26.7(Nb
-Me), 28.3(C-17), 38.9(C-9), 39.8(C-25/18), 41.3(C
-18/25), 41.5(C-13), 44.1(C-8), 48.7(C-11), 52.
0(C-12), 53.3(C-10), 54.3(C-14), 64.3(C-22), 6
5.2(C-7), 102.1(C-20), 132.4(C-16), 133.2(C-15), 1
35.4(C-2/5), 135.4(C-5/2), 136.4(C-3/4), 139.4(C-4
/3), 166.5(C-1), 175.3(C-26), 193.4(C-19), 195.3(C
-21), 201.1(C-6).

【００６７】HR-FAB-MS(m/z)： 509.2995(M+H⁺). C₃₀H
₄₀N₂O₅(calcd. 509.3015). ［α］_D ²⁰： 136゜(c 0.27, pyridine).

【００６８】試験例１．マウスリンパ性白血病細胞
（Ｐ３８８）細胞増殖阻害活性測定マウスリンパ性白血病細胞（Ｐ３８８）を２−ヒドロキ
シエチルジスルフィド５μＭ、硫酸カナマイシン１００
μｇ／ｍＬを添加した１０％牛胎児血清含有のＲＰＭＩ
−１６４０培地に加え、培養細胞を１ｘ１０⁴ 個／ｍＬ
に調製し、前記アブラツボラクタムＡ、ＢもしくはＣを
所定の濃度になるように添加し、ＣＯ₂培養器（ＣＯ₂
５％、湿度１００％、３７℃）で４日間培養した。ＭＴ
Ｔ比色法により生存細胞数を計測して、対照群に対する
増殖阻害率から５０％細胞増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求
めた。結果を表２に示す。

【００６９】

【表２】

【００７０】試験例２．ヒト好中球のＯ₂ ^-産生阻害活
性測定ヒト急性骨髄性白血病細胞ＨＬ−６０を、牛胎児血清を
１０％及びジメチルスルホキシド１．４％を含むＲＰＭ
Ｉ−１６４０倍地に３×１０⁵ 個／ｍＬになるように懸
濁させ、ＣＯ₂ 培養器（３７℃、ＣＯ₂ ５．０％、湿度
１００％）で４日間培養して好中球様に分化させた。分
化したヒト好中球をフェノールレッド無添加のＭＥＭ培
地に加え、細胞濃度を２×１０⁶ 個／ｍＬに調製してそ
の２５μＬを９６穴プレートに分注した。アブラツボラ
クタムＡ、ＢもしくはＣを所定の２００倍濃度のメタノ
ール溶液とし、同培地２００μＬに２μＬ添加した物を
上記細胞液に２５μＬ加えＣＯ₂ 培養器で１５分間培養
した。この時、試料無添加群及び１００％阻害対照群に
は同培地２５μＬを加えた。１５分間培養後、１００％
阻害対照群にはチトクロームＣの４ｍｇ／ｍＬ生理食塩
水溶液に、ＴＰＡ２００μｇ／ｍＬエタノール溶液を１
μＬ／ｍＬとＳＯＤ１５０００Ｕ／ｍＬ（＝４．２ｍｇ
／ｍＬ）生理食塩水溶液４０μＬ／ｍＬとを添加した物
を５０μＬ、他にはチトクロームＣ溶液にＴＰＡのみを
同濃度添加した物を５０μＬ加え、ＣＯ₂ 培養器で１時
間培養して発色させた。プレートリーダーで５５０ｎｍ
（対照、５７０ｎｍ）の吸光度を測定してＯ₂ ^-によって
生成した還元型チトクロームＣを定量し、対照群に対す
るＯ₂ ^-産生阻害率から５０％産生阻害阻害濃度（Ｉ
Ｃ₅₀）を求めた。結果を表３に示す。

【００７１】

【表３】

【００７２】試験例３．ホスホリパーゼＡ₂阻害活性
測定ホスホリパーゼＡ₂（ＰＬＡ2 ）としてはウサギ血小板
より既報（FEBS Lett.,282, 326-330, 1991）に基づき
精製した８５ｋＤａ細胞質ＰＬＡ2（ｃＰＬＡ2）を用
い、本酵素に対する阻害活性を以下のように測定した。
アブラツボラクタムＣはメタノールに溶解し試験液とし
て使用した。１Ｍトリス−塩酸（ｐＨ９．０）を２５μ
Ｌ、５０ｍＭ塩化カルシウム溶液２０μＬの混合緩衝液
に試験液とｃＰＬＡ2 溶液を加えて２００μＬとし、３
７℃で２０分間反応させた。その後、基質である１−パ
ルミトイル−２−［¹⁴Ｃ］アラキドノイル−グリセロホ
スホエタノールアミン（０．５ｎｍｏｌ／５００００ｄ
ｐｍ／５０μＬ）を加え、更に３７℃で２０分間反応さ
せた。ドール試薬（イソプロパノール：ヘプタン：１Ｎ
硫酸＝１０：４０：１）を１．２５ｍＬ加え、反応を停
止し、ドールの方法により［¹⁴Ｃ］アラキドン酸画分を
回収してその放射活性を液体シンチレーションカウンタ
ーで測定することにより酵素活性を測定した。結果を表
４に示す。

【００７３】

【表４】

【００７４】試験例４ＰＡＦ産生阻害活性測定ヒト急性骨髄性白血病細胞ＨＬ−６０を試験例１と同様
の手法により好中球様に分化させ、７．７×１０⁶ 個／
ｍＬになるようにイーグルＭＥＭ培地に懸濁させた。こ
の細胞懸濁液２６０μＬとＭＥＭ培地で希釈した試験溶
液１００μＬをガラススピッツに分注して３７℃で保温
し、さらに２０μＭのＡ２３１８７溶液を４０μＬ加え
て１５分間保温した。クロロフォルム：メタノール
（１：２）を１．５ｍＬ加えて反応を停止し、更にクロ
ロフォルムと水を各０．５ｍＬ加えて二層に分け、その
下層を採取することにより総脂質を抽出した。総脂質よ
りＴＬＣ（展開溶媒、クロロフォルム：メタノール：酢
酸：水＝５０：２０：８：４）によりＰＡＦを分離抽出
し、メタノール２０μＬタイロード液８０μＬに溶解し
て試料とし、以下のようなウサギ血小板凝集作用に基づ
いたバイオアッセイによりＰＡＦを定量した。

【００７５】家兎の耳静脈よりＡＣＤ採血した末梢血よ
り遠心分離して得たウサギ血小板を５０ｍＭＨＥＰＥＳ
緩衝液（ｐＨ７．２）、０．２５％ゼラチンと２．４％
クエン酸を含むタイロード液に２．５×１０⁸個／ｍＬ
となるように懸濁した。この２４０μＬをキュベットに
入れ、上記の試料の１／２０から１／２００希釈液１０
μＬを加えアグリコメータにより透過度を測定して血小
板凝集能を調べ、ＰＡＦ標準溶液と比較することにより
試料中のＰＡＦを定量した。結果を表５に示す。

【００７６】

【表５】

【００７７】

【発明の効果】本発明のアブラツボラクタム類は、マウ
スリンパ性白血病細胞（Ｐ３８８）に対してインビトロ
増殖阻害活性を持つため、抗腫瘍剤として利用すること
が、また、ヒト好中球のＯ₂ ^-産生阻害活性、細胞内ホス
ホリパーゼＡ₂阻害活性及びヒト好中球のＰＡＦ産生阻
害活性を有し、抗炎症剤等の医薬品として利用すること
が期待される。さらに本発明によれば、微生物を用いる
ことによりこれらアブラツボラクタム類を簡便に、かつ
定常的に製造することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｂ 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者矢澤一良神奈川県相模原市鵜野森１−28−10 (72)発明者辻智子神奈川県横浜市金沢区能見台６−12−２ (72)発明者 ▲ぺい▼ 明愛大韓民国大邸市南區大明洞２−34（４／５)

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式、【化１】【化２】または【化３】で表されるアブラツボラクタム類（式中、Ｒ¹及びＲ²は
独立に水素原子又は低級アルキル基を表し、Ｒ³及びＲ⁴
は独立に水素原子又は水酸基の保護基を表す）。
【請求項２】一般式、【化４】【化５】または【化６】で表されるアブラツボラクタム類（式中、Ｒ¹及びＲ²は
独立に水素原子又は低級アルキル基を表し、Ｒ³及びＲ⁴
は独立に水素原子又は水酸基の保護基を表す）。
【請求項３】共通の部分構造として、【化７】【化８】および【化９】（式中、Ｒ¹及びＲ²は独立に水素原子又は低級アルキル
基を表し、Ｒ³は水素原子又は水酸基の保護基を表す）
を有し、かつ（ａ）下記の物性：分子式： C₃₀H₄₀N₂O₅ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.7(1H,m), 0.80(3H,t), 0.90(3H,
d), 1.0(1H,m), 1.05(1H,m), 1.25(1H,m), 1.35(1H,m),
1.55(1H,m), 1.6(1H,m), 1.63(1H,m), 1.71(1H,m), 1.
88(1H,m), 1.9(1H,m), 1.9(1H,m), 2.23(1H,m), 2.28(1
H,m), 2.4(1H,m),3.13(1H,m), 3.19(1H,m), 3.3(3H,s),
4.05(1H,m), 4.20(1H,bs), 4.79(1H,bd),5.6(1H,dd),
5.95(1H,m), 6.08(1H,dd), 6.12(1H,dd), 6.12(1H,d),
6.32(1H,d), 7.55(1H,dd), 7.68(1H,dd)；（ｂ）下記の物性、分子式： C₃₀H₄₀N₂O₆ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.8(3H,t), 0.8(1H,m), 0.85(3H,
d), 0.95(1H,m), 1.05(1H,m), 1.2(1H,m), 1.25(1H,m),
1.5(1H,m), 1.85(1H,m), 1.9(1H,m), 2.0(1H,m),2.0(1
H,m), 2.2(1H,m), 2.4(1H,m), 2.5(1H,m), 2.5(1H,m),
2.7(1H,m), 2.85(1H,dd), 3.15(1H,m), 3.25(3H,s), 3.
5(1H,m), 3.5(1H,m), 4.0(1H,m), 4.1(1H,d), 4.8(1H,
m), 5.3(1H,m), 5.5(1H,m), 6.6(1H,bd), 6.7(1H,bd),
7.4(1H,bdd),7.7(1H,bdd)；または、（ｃ）下記の物性：分子式 : C₃₀H₄₀N₂O₅ ¹ H-NMR(C₅D₅N)：δ 0.82(3H,t), 0.84(1H,m), 0.87(3H,
d), 1.0(1H,m), 1.05(1H,m), 1.25(1H,m), 1.28(1H,m),
1.48(1H,m), 1.50(1H,m), 1.64(1H,m), 1.88(1H,m),
1.92(1H,m), 2.02(1H,m), 2.02(1H,m), 2.12(1H,m), 2.
5(1H,m), 2.58(1H,m), 2.6(1H,m), 2.75(1H,bdd), 2.89
(3H,s), 3.13(1H,m), 3.20(1H,m), 3.28(1H,m), 3.58(1
H,m), 3.60(1H,bd), 3.70(1H,m), 5.50(1H,m), 5.60(1
H,m), 6.75(2H,d), 7.48(1H,dd), 7.60(1H,dd)；のいず
れかを有するアブラツボラクタム類。
【請求項４】請求項１、２または３に記載のいずれか
のアブラツボラクタム類を生産するストレプトマイセス
（Streptomyces）属微生物。
【請求項５】前記微生物がストレプトマイセスｓ
ｐ．ＳＣＲＣ−Ａ２０である請求項４に記載の微生
物。
【請求項６】請求項４に記載の微生物を培養し、その
培養液から請求項１、２または３に記載のアブラツボラ
クタム類を採取することを特徴とするアブラツボラクタ
ム類の製造方法。
【請求項７】請求項１、２または３に記載のアブラツ
ボラクタム類を有効成分とする抗炎症剤。