JPH072867A - ビオチンアミド誘導体の製造方法及び、それらを含有する糖尿病及び糖尿病合併症の治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明の目的はインシュリン依存性糖尿病、
インシュリン非依存性糖尿病、あるいは末梢神経障害の
ような、糖尿病合併症に対して有効な予防／治療薬を提
供することである。 【構成】 本発明は、ビオチンアミド誘導体を有効成分
とする糖尿病治療、予防薬である。 【効果】 本発明により提供されるビオチンアミド誘導
体を有効成分とする薬剤は、糖尿病及びその合併症の治
療薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ビオチンアミド誘導体
及びその製造法に関するものであり、更には、それらを
用いた、糖尿病及び糖尿病合併症の治療薬に関するもの
である。

【０００２】

【従来の技術】ビオチンの薬理上の作用は、ビタミンＨ
としてよく知られている。このことは、１９４２年にＳ
ｉｄｅｎｓｔｒｉｃｋｅｒと彼の共同研究者によって発
見された。彼らはいわゆる“卵白障害（ｅｇｇ ｗｈｉ
ｔｅ ｉｎｊｕｒｙ）”かビオチンの投与により消失す
るのを示した。

【０００３】又それ以前には、他の研究者たちにより、
卵白のみの食事を与えた動物に見られるこの現象が、ビ
オチンの投与により防げるということが確かに示されて
いた。

【０００４】Ｓｉｄｅｎｓｔｒｉｃｋｅｒらの実験はヒ
トにおいて、ビタミンＨの欠乏がこれらの現象を引き起
こすことを直接示したものであった。

【０００５】実際、卵白を与えられた患者においては、
ビチオンがタンパク質アビジンに結合し、そして生理活
性を有するビタミンＨが不足しビオチン欠乏状態が観察
された。この実験とこれに続く実験よりビチオンの欠乏
が生理学的な現象と関係していることは明らかであっ
た。これらの生理学的な現象は重大であり、非痒疹性の
皮膚炎から、黄斑−鱗状皮膚という幅広い症状を示し、
又精神障害、筋肉病、知覚過敏、限局性感覚異常、食欲
不振あるいは冠状動静脈血膚のような症状も示す。

【０００６】これらのすべての２次的な現象は、一定期
間のビチオンの長期投与のあとには消失し、患者は正常
に戻る。

【０００７】やはり長い歳月をかけて、ビチオンの生物
学的な役割も解明された。ビタミンＨはカルボキシル化
の酵素反応において、コファクターとして働く。この作
用故、ここ２０年間、人の疾患の治療の為に、酵素反応
コファクター類を用いるという考えが重要視されてき
た。

【０００８】引き続いて、ビオチンは、酵素反応におけ
るコファクターとしての性質を持つ故、ピリドキシンや
ビタミンＤと同様に治療に精力的に用いられてきた。

【０００９】例えば、ビオチンがプロピロニル−ＣｏＡ
カルボキシラーゼ欠損（これは、ケトン性高グリシン血
症の原因である）やピルベート−カルボキシラーゼ欠損
（これは、幼時期における乳酸の代謝異常の原因であ
る）やβ−メチル−クロトニルカルボキシラーゼ欠損
（これは幼時性、脊椎萎縮、筋萎縮症や重症な代謝異常
アミドーシスの原因である）のような、カルボキシラー
ゼ酵素欠乏の単独原因により引き起こされる疾患の治療
には効果がないということが示された。その一方で、ビ
オチンは多種カルボキシラーゼ酵素欠損症によって引き
起こされるの疾患の治療には効果があった。これらの欠
損の症状は、多かれ少なかれ、前記の異常の症状や、単
独のカルボキシラーゼ酵素欠損症によって引き起こされ
る症状と共通であった（Ｋ．Ｓ．Ｒｏｔｈ、“臨床医学
におけるビオチンの総論（Ｂｉｏｔｉｎｉｎ ｃｌｉｎ
ｉｃａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ −ａ ｒｅｖｉｅｗ）”
ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌ
ｉｎｉｃａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ３４号，９月，１
９８１，ｐｐ１９６７−１９７４）。

【００１０】一方、ビタミンＨは特に、新生児の脂漏性
皮膚炎の治療に効果があることが明らかにされた。この
原因はまだ確認されてはいないが、恐らく、母乳中のビ
タミンＨの不足、消化欠損、持続性下痢に帰因すると思
われている（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｉ−Ｄａｃｈｓｈ
ｉｎａｍｕｒｔｉ ａｎｄ Ｊａｓｂｉｒ Ｃｈａｎａ
ｎ−Ｂｉｏｔｉｎ−Ｖｉｔａｍｉｎｓ ａｎｄ ｈｏｒ
ｍｏｎｅｓ ｖｏｌ．４５，１９８９，ｐｐ３３７−３
８５）。

【００１１】グルコース代謝にビチオンが関与している
という最初の証明は１９６８年であった。重要な解糖系
の酵素であるグルコキナーゼの活性の復元にビオチンが
活性を有しているということが示された（Ｄａｃｈｓｈ
ｉｎａｍｕｒｔｉ Ｋ．，Ｃｈｅａｈ−Ｔａｎ Ｃ．，
１９６８，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆ Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ．，１２７：ｐ．１７−２１）。実際この酵素が細
胞によるグルコース利用の初期段階の触媒である。それ
故、グルコースの肝臓への取り込みの制御に関与してい
る酵素である。

【００１２】実際、グルコキナーゼ酵素は肝性のグルコ
ース、糖血（ｇｌｙｃｅｍｉａ）と呼ばれているが、を
制御していることが知られており、グリコーゲンという
形において肝性グルコースの利用と貯蔵を制御してい
る。そして膵臓ランゲルハンス島のグルコキナーゼは、
インシュリンの生合成を制御しているグルコースセンサ
ーとしての役割を果たしていると考えられている。肝臓
グルコキナーゼに対するビオチンの効果はこの酵素の遺
伝的制御とｍＲＮＡのインダクションを介した制御に依
存しているとわかった。それ故、インシュリンのそれら
の制御に対してアナログとして作用する（Ｃｈａｕａｎ
Ｊ．ｅｔａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９１，
ｖｏｌ２６６，ｐｐ１００２５−１００３８）。

【００１３】更に、ビオチンのコファクターとしての役
割を考え合わせると血中のグルコースの制御に対しても
重要な作用をもっており、他の酵素系を制御しているか
もしれない。

【００１４】事実、ビオチンは、コファクターとして、
グルコキナーゼの他にも、カルボキシル化反応を活性化
する。例えば、ピルベートカルボキシラーゼを挙げるこ
とができこれは糖新生に関与している重要な酵素であ
る。この活性は見かけ上はグルコキナーゼの活性化によ
る解糖系の活性の活性化に比較できる。確かにピルベー
トカルボキシラーゼはクレブスサイクル（Ｋｒｅｂｓ
ｃｙｃｌｅ）の活性化における重要な酵素であり、血中
のグルコース及び脂肪酸の利用を決定づける活性化因子
である。それ故、ピルベートカルボキシラーゼの作用と
同様、ビオチンは糖血の減少を引き起こすことができ
る。

【００１５】後になって、臨床上において、真性糖尿病
の状態ではビオチンのレベルが糖血に対して相関してい
るらしいということが示された。

【００１６】この観察により、真性糖尿病の典型である
高血糖症は細胞レベルにおけるビオチンの増加に帰因
し、この増加に対してグルコースの増加が相関している
と推論できる。

【００１７】更に、糖尿病患者の群においては、インシ
ュリン処理を中断したのちのプラセボの使用は、血漿中
のグルコースの急激な増加を引き起こした。それに対
し、ビオチンの使用（１６ｍｇ／日で１週間投与）は、
血中グルコール量の著しい減少を引き起こした（Ｃｏｇ
ｇｅｓｈａｌｌ，Ｊ．Ｃ．，１９８５，ＬｉｆｅＳｃｉ
ｅｎｃｅｓ，ＮＹ Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．ｖｏｌ４４７
ｐｐ３８９−３９２）。

【００１８】又適度な高血糖症を引き起こすがインスリ
ンに対して耐性であり、ビオチン欠損でない糖尿病マウ
スＫＫを用いた糖尿病の実験モデルにおいては、高ビオ
チン投与で効果が認められた。特に２ｍｇ／ｋｇで１４
日間のビオチンの投与においてはこれらの動物におい
て、改善されたグルコース耐性が認められた（Ｒｅｄｄ
ｉ，Ａ．ｅｔ ａｌ，１９８８ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ，ｖｏｌ４２；ｐｐ１３２３−１３３０）。

【００１９】最近になって、非常に興味ある知見が、臨
床上の観点より提示された。それは、ビオチンの使用が
糖代謝の正常化との関係同様神経障害や非常に高頻度の
糖尿病合併症の治療に対しても関連しているというもの
であった（Ｋｏｕｔｓｉｋｏｓ Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，
１９９０，Ｂｉｏｍｅｄ ＆ Ｐｈａｍａｃｏｔｈｅｒ
ｖｏｌ４４；ｐ５１１−５１４）。

【００２０】事実、６週間にわたるビオチンの筋肉投与
は、一日当たり５ｍｇの投与量で約２年間投与する経口
投与の場合と同様の活性を示した。この２年間の経口投
与は、運動神経や行動知覚能力のレベルにおける反応速
度のわずかな改善と同様に精神障害の病状の著しい改善
（筋肉痙攣、感覚異常、歩行や階段の登行の改善、足の
震えの消失）を引き起こした。

【００２１】ビオチンレベルの減少に引き続いて起こる
ピルベートキナーゼ活性の減少は、前記の著者によれ
ば、糖尿病と関連した精神障害を引き起こすであろうと
言っており、この精神障害は、他の代謝異常やアルコー
ル症や尿毒症のような異常と関連もしている。

【００２２】それでも、前記の重要な結果は糖尿病と関
連しているモデルにおいて、そして糖尿病において、ビ
オチンの活性と関連している。そしてこのことは、ビオ
チンの幅広い使用、例えば単独で用いたり、インシュリ
ン非依存性糖尿病の治療のため経口投与される抗糖尿病
薬と併用したりするということを示している。

【００２３】更にはインシュリン依存性糖尿病の場合は
インシュリンと併用するということも示している。

【００２４】しかしながら、この目的のためのこの重要
なビタミンの治療上の使用の成果は、現在までのところ
報告がない。

【００２５】このことは恐らく、その作用が素速く、そ
してその作用が持続しないため、治療学上そして、薬量
学的な機構としての確認が困難であるということに起因
すると考えられる。

【００２６】一方、ダイエットの間でも、生理学的な要
求量を満たすため十分な量のビオチンを摂取することが
できるということは一般に認識されている。事実、ビオ
チンは多くのそして広く普及した食物（ミルク、卵黄
等）に存在し、又腸内生物によって生産されている。

【００２７】しかしながらこのことが、通常の状態にお
いて、本当なら、糖尿病患者においても、ビオチンの血
漿中のレベルの重要な変化が起こり、遊離のビオチンが
血中のグルコースの使用を制御するだろうと考えられ
る。

【００２８】前記の観点に立てば、特に興味深いこと
は、いわゆる治療学的言えばに、ビオチンの誘導体がビ
タミンとして働きそして高い血中レベルを一定期間維持
できるかということである。このようなビオチン誘導体
が水にほとんど溶解しなく、そして一般的な非経口的な
系での使用に限定されるという可能性もあるが、重症な
糖尿病の状態や、末梢性神経障害のような、いくつかの
ひどく病弱な糖尿病合併症においては、そのような使用
形態でも重要である。

【００２９】以上のような状況を考え合わせると、この
ビタミンの素速い生物活性を得ることは、特に治療上、
有益である。なぜなら、このビタミンは、単独でも用い
ることができ、又、インシュリン非依存性糖尿病の場合
は、経口投与の低血糖薬との併用も可能であり、更に
は、インシュリン依存性糖尿病の場合はインシュリンの
併用も可能である。

【００３０】それ故、完全に水溶性のビオチン誘導体を
得ることが最も望ましいが、活性のある状態で経口投与
できない場合でも、非経口投与、例えば、筋肉内投与
や、静脈内投与においてそれらのビオチン誘導体を使用
することで十分に効果を発揮し得る。

【００３１】

【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、糖尿病の治療のために有効なビオチン誘導
体を提供することである。

【００３２】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく、種々検討した結果、以下に記すビオチン
誘導体が有効であることを見い出し、本発明を完成し
た。

【００３３】以下それらを詳しく述べる。

【００３４】本発明者らは意外にも、一般式（Ｉ） Ｗ−ＣＯＮＨ−Ｒ−Ｘ （Ｉ） ここでＷは

【００３５】

【化２２】 であり、Ｒは以下のいずれかの１つにより定義される、
１から２０の炭素数を有する二価の官能基である。 （Ａ）Ｒは直鎖状あるいは分枝したアルキレン基であ
り、アルキレン鎖は場合により −ＣＯＯＨ，ＮＨ₂ ，

【００３６】

【化２３】 ，Ｈ，ＳＨ，−ＣＯ−，ＯＨ（Ｒ′はメチル又はＨであ
る）から成る群から選ばれる少なくとも１つの置換基に
より、置換されることもできる。 （Ｂ）Ｒは３から７の炭素数を有するシクロアルキレン
である。 （Ｃ）Ｒは、アリレン又はアリルアルキレン基であり、
場合により少なくとも１つのＮＯ₂ 基によって、炭素環
が置換されてもよい。 （Ｄ）Ｒはピペラジニルアルキレン基であり、そして、
Ｘは、Ｈ，ＯＨ，ＣＯＯＨ，

【００３７】

【化２４】 である。を有するα又はβビオチンの誘導体が、高血糖
症の阻害剤として働くことを見い出した。このビオチン
誘導体の作用は、活性型肝臓グルコキナーゼと同等であ
り、ビオチンのそれよりは高いレベルである。

【００３８】それ故、本発明は、一般式（Ｉ）のアミド
誘導体の有効量を少なくとも１以上合んでなる治療薬で
あって、場合により、適当な結合剤そして／あるいは賦
活剤との組み合わせも可能である。これらの薬剤は、好
ましくは、糖尿病の治療に、そして、糖尿病合併症の治
療及び予防に供することができる。

【００３９】一般式（Ｉ）のアミド誘導体は、２つの異
なった工程により製造することができる。

【００４０】そのうちの１つは以下の段階より成る工程
である。 （ａ）ビオチンを極性の中性溶媒中にて、第４アミンの
存在下で、０℃より低い温度にて、アルキルクロロギ酸
エステル Ｃｌ−ＣＯＯＲ″ （II） ここでＲ″は１から１０の炭素数を有するアルキルであ
るで処理し、式(III) で表わされる混合アンヒドライド
を得る Ｗ−ＮＨ−ＣＯＯ−ＣＯＯＲ″ (III) （ｂ）式(IV) ₂ ＨＮ−Ｒ−Ｘ (IV) ここでＲとＸは前記の意味であるで表わされるアミンで
（ａ）により得た式(III) で表わされる混合アンヒドラ
イドを含む反応液を直接処理し、式（Ｉ）で表わされ
る、アミド誘導体を得る。

【００４１】第２の製造方法は−１０℃から０℃の温度
で、ジメチルホルムアミド中にてＮ−ヒドロキシ−スク
シンイミドのα又はβビオチンエステルを前記のアミド
（IV）と反応させる工程を含んでいる。

【００４２】以下更に詳しく本発明を説明するが、化合
物（Ｉ）は、β−誘導体として定義されるものは、Ｗと
して

【００４３】

【化２５】 という置換基を有するという特徴を有し、一方“α−ビ
オチニル”として定義されるものはＷとして

【００４４】

【化２６】 を有するという特徴を有する。

【００４５】式（Ｉ）の化合物においてはＲが（Ａ）と
して定義される場合は−ＣＨ₂ −ＣＨ₂ −あるいは

【００４６】

【化２７】 （ここでＲ′は前記の意味、−（ＣＨ₂ ）₄ −，

【００４７】

【化２８】 である。）であることが好ましくＲが（Ｂ）として定義
される場合はシクロヘキシレンであることが好ましく、
Ｒが（Ｃ）として定義される場合は

【００４８】

【化２９】 から選ばれることが好ましくＲが（Ｄ）で定義される場
合は

【００４９】

【化３０】 であることが好ましい。

【００５０】更に、本発明に従って、有益な治療薬とし
て使用できる。好ましい一般式（Ｉ）を有する化合物と
しては以下のものを挙げることができる。

【００５１】Ｒが−（ＣＨ₂ ）₂ −、ＸがＯＨである一
般式（Ｉ）の化合物Ｎ−β−ビオチニル−エタノールア
ミン、Ｒが

【００５２】

【化３１】 Ｘが、ＣＯＯＨである一般式（Ｉ）の化合物、Ｎ−β−
ビオチニル−Ｎ^G −メチル−Ｌ−アルギニン、Ｒが

【００５３】

【化３２】 ＸがＯＨである、一般式（Ｉ）の化合物Ｎ¹ −β−ビオ
チニル−Ｎ⁴ −（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジ
ン、Ｒが

【００５４】

【化３３】 ＸがＨである一般式（Ｉ）の化合物、Ｎ−β−ビオチニ
ル−ベンジルアミン、Ｒが−（ＣＨ₂ ）₂ −、ＸがＯＨ
である一般式（Ｉ）の化合物、Ｎ−β−ビオチニル−４
−アミノ−ブタノール Ｒが−（ＣＨ₂ ）₂ − Ｘが

【００５５】

【化３４】 である一般式（Ｉ）の化合物、Ｎ，Ｎ′ビス−（β−ビ
オチニル）−エチレンジアミン Ｒが

【００５６】

【化３５】 ＸがＯＨである一般式（Ｉ）の化合物Ｎ−β−ビオチニ
ル−Ｌ−セリン、Ｒが−（ＣＨ₂ ）₄ −、ＸがＨである
一般式（Ｉ）の化合物Ｎ−β−ビオチニル−１−アミノ
ブタン Ｒがシクロヘキシレン、ＸがＨである一般式（Ｉ）の化
合物Ｎ−β−ビオチニル−アミノシクロヘキサン Ｒが

【００５７】

【化３６】 ＸがＨである一般式（Ｉ）の化合物Ｎ−β−ビオチニル
−４−ニトロベンジルアミン Ｒが

【００５８】

【化３７】 ＸがＣＯＯＨである一般式（Ｉ）の化合物Ｎ−β−ビオ
チニル−Ｌ−アルギニン Ｒが

【００５９】

【化３８】 である一般式（Ｉ）の化合物Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−
システイン ビオチニルブタノールアミンは、ビオチンをリン酸化オ
リゴヌクレオチドに縮合する中間体として既に知られて
いる。

【００６０】このような“ビオチン化された”オリゴヌ
クレオチドはバイブリダイゼーションのプローブとして
も使え又、酵素反応のための更に長いプローブを精製す
る目的にも使える。（Ｔ．Ｋｅｍｐｅ ｅｔ ａｌ“Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｄｉｏ
ｔｉｎ ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｏｆ ｏｌｉｇｏ ｄｅ
ｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ”Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ ａｎｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ１３（１），ｐ
４５−４７） 本発明で提供する式（Ｉ）のアミド誘導体は、特に糖尿
病に関連した代謝異常の状態において糖代謝の制御が可
能である。すなわち、インシュリン非依存性糖尿病の治
療においては単独でも又経口投与できる抗糖尿病薬との
併用もでき、更にはインシュリン依存性糖尿病の治療に
おいては単独でも又インシュリンとの併用での使用も可
能である。

【００６１】式（Ｉ）で表わされる誘導体は例えば末梢
性神経異常や慢性病弱性疾患などの糖尿病合併症の治療
にも有利に使用できる。

【００６２】式（Ｉ）で表わされる誘導体の使用は単独
でも又、他の抗糖尿病薬（インシュリンや経口低血糖
剤）との併用でもよく、これらの使用は、糖尿病のタイ
プ及び病状の程度により任意に変更可能である。

【００６３】一般式（Ｉ）の化合物の使用は好ましく
は、低度の高血糖症の状態においてである。又、その使
用は年令に応じて変えることもできる。更に式（Ｉ）の
化合物と他の抗糖尿病薬との併用は、明白であり重症な
糖尿病の場合や、遺伝的要因に基づく糖尿病の場合にお
いては有利である。これらの場合は併用により、糖血を
有利に制御でき、そして、今までのインシュリンを含む
抗糖尿病薬の使用量を下げることも可能である。式
（Ｉ）の化合物は１日当たり５から２０ｍｇ投与するの
が好ましい。又慢性の症例においてはくり返し投与する
ことが好ましい。

【００６４】しかしながら場合によっては病状や、患者
の体重、年令、投与形態に応じて投与量は変えることが
必要であり、更には重症な場合や他の症状を併発してい
る場合も投与量を変えることが必要である。

【００６５】本発明の治療薬は一般的には経口又は非経
口により投与できるが好ましくは皮下投与又は筋肉内投
与である。

【００６６】更にこれらの薬剤は、有効成分の他に薬理
学的に使用可能な結合剤や賦形剤を含むこともできる。

【００６７】非経口投与に適した本発明の治療薬の形状
としては好ましくは水溶性の等張液、例えば生理食塩水
等の形である。又、経口投与に適した形としては粉末
状、錠剤、糖衣錠、カプセル等を挙げることができる。

【００６８】前記のどちらの製造方法においても、極性
の中性溶媒としてはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又
はラトラヒドロフラン（ＴＨＦ）が好ましく、第４アミ
ンとしてはトリエチルアミンとトリブチルアミンが好ま
しい。

【００６９】第一の製造方法においてはクロロギ酸エス
テルとしてはイソブチルクロロギ酸エステルが好適に用
いられ、段階（ａ）の温度は−１０℃から０℃が好まし
く、（ｂ）の段階では０℃が好ましい。

【００７０】本発明の製造方法により得られた物質はそ
の反応液より、凍結乾燥や濾過などの通常の方法により
分離することができ、陰イオン交換樹脂や逆相クロマト
グラフィを用いた精製法や結晶化法により、精製するこ
とができる。

【００７１】一般式（Ｉ）の化合物の大部分は水及び有
機溶媒に可溶である。

【００７２】以下本発明の式（Ｉ）で表わされる化合
物、その製造法及びその効果を実施例により詳しく述べ
るが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではな
い。

【００７３】

【実施例】

（実施例１） Ｎ−β−ビオチニル−エタノールアミン
の製造 ２．１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のトリエチルアミンを
５．０ｇのＤ−ビオチン（２０．５ｍｍｏｌｅ）ととも
に８０ｍｌの無水テトラヒドロフラン中にて撹拌する。

【００７４】その溶液を撹拌しながら−１０℃にて放置
する。２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチルクロ
ロギ酸エステルを３０分かけてゆっくりとその溶液中に
滴下し、撹拌を続ける。その混合液を−１０℃に２時間
放置したのち、更に０℃で１５時間放置する。その後
２．５ｇのエタノールアミンを３０分かけてゆっくりと
その混合液に滴加する。

【００７５】得られた混合液を室温に戻し、６時間、撹
拌しながら放置する。その懸濁液をグーチ（ｇｏｏｃ
ｈ）Ｇ３フィルターにより濾過し、濾液を捨てる。沈殿
物を１００ｍｌのエタノール／水（１：１）溶液に溶解
し、５０ｍｌの陰イオン樹脂（アンバーライト（Ａｍｂ
ｅｒｌｉｔｅ）ＩＲＡ４００）をつめたカラムに重層す
る。溶出液を真空下で濃縮し、残渣を７０ｍｌの８０％
エタノール中にて結晶化する。できた結晶は濾過により
回収し、２０ｍｌの冷エタノールにて３回洗ったのち高
真空下で乾燥させた。実施例１で得られた誘導体の物理
化学的性質は以下のとおりである。

【００７６】物性 白い結晶粉末 分子式 Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｎ₃ Ｏ₃ Ｓ 分子量 ２８７．３２ 組成分析 Ｃ＝５０．１６％、Ｈ＝７．３７％、
Ｎ＝１４．６３％ Ｏ＝１６．７１％、Ｓ＝１１．１４％ 有機溶媒での溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳＯ
中） 水での溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ 融点 １７２℃

【００７７】（実施例２Ａ） Ｎ−β−ビオチニル−Ｎ
^G −メチル−Ｌ−アルギニンの製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを７．
８ｇ（４２ｍｍｏｌｅ）のトリブチルアミンを加えてあ
る８０ｍｌの無水ＤＭＦ中にて懸濁する。その懸濁液を
−１０℃にて撹拌しながら放置する。次に２．８７ｇ
（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチルクロロギ酸エステルを
３０分かけてゆっくりと滴下し滴加後も、その反応液を
撹拌し続ける。

【００７８】その反応液をその後、−１０℃に２時間、
０℃に１５時間放置する。３．９５ｇのＮ^G −メチル−
Ｌ−アルギニンをゆっくりと加え、０℃で２４時間、撹
拌する。その後、室温にて６時間放置する。反応液を真
空下に置き溶媒を蒸発させる。残渣を水で希釈したの
ち、逆相クロマトグラフィー（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ
ＲＰ１８樹脂カラム）により精製した。

【００７９】溶出点は、水／メタノール＝８０：２０で
あった。

【００８０】純品である合成物を含んでいる溶出分画を
取り、蒸発させ、乾燥させた。

【００８１】残渣を５０ｍｌの水に溶解し、凍結乾燥し
た。収量は５．８ｇであった。

【００８２】合成したＮ−β−ビオチニル−Ｎ^G −メチ
ル−Ｌ−アルギニンの物理化学的性質は以下のとおりで
あった。

【００８３】物性 白い非結晶性粉末 分子式 Ｃ₁₇Ｈ₃₀Ｎ₆ Ｏ₄ Ｓ 分子量 ４１４．５３ 組成分析 Ｃ＝４９．２６％、Ｈ＝７．２９％、
Ｎ＝２０．２７％ Ｏ＝１５．４４％、Ｓ＝７．７４％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．２２（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝６５：３５：
５：３）

【００８４】（実施例２Ｂ） Ｎ−β−ビオチニル−Ｎ
^G −メチル−Ｌ−アルギニンの製造 ７．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチナート（Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ
−Ｄ−ｂｉｏｔｉｎａｔｅ）を２．１３ｇのトリエチル
アミンを加えてある無水ＤＭＦ８０ｍｌに加え懸濁し、
０℃にて撹拌を続ける。その後、３．９５ｇのＮ^G −メ
チル−Ｌ−アルギニンを加え、混合液を０℃で２時間撹
拌し、更に４５℃で４時間、撹拌する。目的物は実施例
２Ａと同様の方法により回収、精製を行った。収量は
５．９ｇであった。

【００８５】（実施例３） Ｎ¹ −β−ビオチニル−Ｎ
⁴ −（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン塩酸塩の製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビチオンを２．
１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のトリエチルアミンを加えて
ある無水ＴＨＦ８０ｍｌに加え、懸濁し、−１０℃にて
撹拌する。２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチル
クロロギ酸エステルを３０分かけて、ゆっくりと滴下
し、滴下後もその反応液を撹拌し続ける。その反応液を
−１０℃に２時間、そして０℃に１５時間放置する。次
に３．０ｇの１−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン
を３０分かけて、ゆっくり滴下する。

【００８６】その反応液を室温に戻し、更に６時間撹拌
する。このようにして得た懸濁液を濾過し、濾液を捨て
る。固形の沈殿物を１００ｍｌの水に溶解し、ＨＣｌで
ｐＨを４．０にする。溶液はｒｏｔａｖａｐｏｒを用い
て真空下で濃縮した。残渣をＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ Ｒ
Ｐ１８樹脂カラムを用いた逆相クロマトグラフィーによ
り精製した。

【００８７】溶出点は水／エタノール＝９０：１０であ
った。純品である目的物を含んでいる溶出分画を集め、
蒸発させ、乾燥させた。残渣は高真空下において乾燥さ
せた。

【００８８】収量は６．２ｇであった。

【００８９】得られたＮ¹ −β−ビオチニル−Ｎ⁴ −
（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン塩酸塩の物理化
学的性質は以下のとおりである。

【００９０】物性 白い粉末 分子式 Ｃ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₄ Ｏ₃ Ｓ・ＨＣｌ 分子量 ３９２．９５ 組成分析 Ｃ＝４８．９１％、Ｈ＝７．４４％、
Ｎ＝１４．２６％ Ｏ＝１２．２２％、Ｓ＝８．１６％、Ｃｌ＝９．０２％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．５０（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【００９１】（実施例４） Ｎ−β−ビオチニル−ベン
ジルアミンの製造 ５．０ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを２．１３
ｇのトリエチルアミンを加えてある無水ＴＨＦ８０ｍｌ
に懸濁し、−１０℃にて撹拌する。２．８７ｇ（２１ｍ
ｍｏｌｅ）のイソブチルクロロギ酸エステルを３０分か
けてゆっくりと滴下し、滴下後も撹拌し続ける。反応液
を−１０℃に２時間、０℃に１５時間放置する。その後
３．５ｇのベンジルアミンを３０分かけてゆっくりと滴
下する。その後、反応液を室温に戻し、更に６時間撹拌
する。溶媒は真空下で乾燥のために蒸発させる。得られ
た残渣を１２０ｍｌの水中にて結晶化させた。目的物
は、濾過により回収し２０ｍｌの冷水で３回洗い、高真
空下で乾燥させた。収量は５．２ｇであった。

【００９２】得られたＮ−β−ビオチニル−ベンジルア
ミンの物理化学的性質は以下の通りである。

【００９３】物性 白い結晶粉末 分子式 Ｃ₁₇Ｈ₂₃Ｎ₃ Ｏ₂ Ｓ 分子量 ３３３．４６ 組成分析 Ｃ＝６１．２３％、Ｈ＝６．９５％、
Ｎ＝１２．６０％ Ｏ＝９．６０％、Ｓ＝９．６２％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） ＞１０ｍｇ／ｍｌ（エタノール中） 水に対する溶解性 難溶性 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．６９（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【００９４】（実施例５） Ｎ−β−ビオチニル−４−
アミノ−ブタノールの製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを２．
１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のトリエチルアミンを加えた
無水ＴＨＦ８０ｍｌに懸濁し、−１０℃で撹拌する。
２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチルクロロギ酸
エステルをゆっくり滴下し、反応液を撹拌し続ける。反
応液を−１０℃に２時間、０℃に１５時間放置する。そ
の後３．０ｇの４−アミノ−ブタノールをゆっくりと滴
下する。その後、反応液を室温に戻し、更に６時間放置
する。このようにして得られた懸濁液を、濾過し、濾液
を捨てる。残渣はＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ１８樹脂
カラムを用いた逆相クロマトグラフィーにより精製し
た。溶出点は水／エタノール＝９０：１０であった。純
品である目的物を含んでいる溶出画分を集め、乾燥のた
め蒸発させた。残渣は高真空下において乾燥させた。収
量は４．７ｇであった。

【００９５】得られたＮ−β−ビオチニル−４−アミノ
−ブタノールの物理化学的性質は以下のとおりである。

【００９６】物性 白い粉末 分子式 Ｃ₁₄Ｈ₂₅Ｎ₃ Ｏ₃ Ｓ 分子量 ３１５．４４ 組成分析 Ｃ＝５３．３１％、Ｈ＝７．９９％、
Ｎ＝１３．３２％ Ｏ＝１５．２２％、Ｓ＝１０．１７％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 ＞５ｍｇ／ｍｌ 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．４５（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【００９７】（実施例６） Ｎ，Ｎ′ビス−（β−ビオ
チニル）−エチレンジアミンの製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを４．
２６ｇ（４１ｍｍｏｌｅ）のトリエチルアミンを加えて
ある無水ＤＭＦ８０ｍｌ中に懸濁し、−１０℃で撹拌す
る。２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチルクロロ
ギ酸エステルを３０分かけてゆっくりと滴下し、滴下後
も撹拌し続ける。

【００９８】反応液を−１０℃に２時間、０℃に１５時
間放置する。その後０．６ｇのエチレンジアミンをゆっ
くりと滴下する。その後、反応液を室温に戻し、更に２
０時間撹拌する。このようにして得られた懸濁液を濾過
し、濾液を捨てる。沈殿物を１０ｍｌの水で３回洗い、
水／エタノール（１：１）中にて、結晶化する。得られ
た結晶は濾過にて回収し、２０ｍｌの冷エタノールで３
回洗い、高真空下で乾燥させる。収量は３．７ｇであっ
た。

【００９９】得られたＮ，Ｎ′−ビス−（β−ビオチニ
ル）−エチレンジアミンの物理化学的性質は以下のとお
りである。

【０１００】物性 白い結晶粉末 分子式 Ｃ₂₂Ｈ₃₆Ｎ₆ Ｏ₄ Ｓ₂ 分子量 ５１２．７０ 組成分析 Ｃ＝５１．５４％、Ｈ＝７．０８％、
Ｎ＝１６．３９％ Ｏ＝１２．４８％、Ｓ＝１２．５１％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞２ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳＯ
中） 水に対する溶解性 難溶性 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．３６（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【０１０１】（実施例７Ａ） Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ
−セリンの製造 ７．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチナートを２．１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）
のトリエチルアミンを加えてある無水ＤＭＦ８０ｍｌに
加え懸濁し、０℃で撹拌する。その後、２．１ｇのＬ−
セリンを加え、反応液を０℃で２時間、４５℃で４時
間、撹拌する。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を冷水で
希釈し、２２ｍｌの１ＮＨＣｌを加える。生成した沈殿
物を濾過により分離し、濾液は捨てる。沈殿物はＬｉｃ
ｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ１８樹脂カラムを用いた逆相クロ
マトグラフィーによって精製した。溶出点は水／エタノ
ール＝７０：３０であった。純品である目的物を含んで
いる溶出画分を集め、乾燥のため蒸発させた。残渣は高
真空下で乾燥させた。収量は５．１ｇであった。

【０１０２】得られたＮ−β−ビオチニル−Ｌ−セリン
の物理化学的性質は以下の通りである。 物性 白い粉末 分子式 Ｃ₁₃Ｈ₂₁Ｎ₃ Ｏ₅ Ｓ 分子量 ３３１．４０ 組成分析 Ｃ＝４７．１１％、Ｈ＝６．３９％、
Ｎ＝１２．６８％ Ｏ＝２４．１４％、Ｓ＝９．６８％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（０．１
Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．４中） 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．２８（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝６５：３５：
５：３）

【０１０３】（実施例７Ｂ） Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ
−セリンの製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを７．
８ｇ（４２ｍｍｏｌｅ）のトリブチルアミンを加えてあ
る無水ＤＭＦ８０ｍｌに加え、懸濁し、−１０℃にて撹
拌する。２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチルク
ロロギ酸エステルを３０分かけてゆっくりと滴下し、滴
下後も撹拌し続ける。反応液は−１０℃で２時間、０℃
で１５時間放置する。その後２．１ｇのＬ−セリンをゆ
っくりと滴下し、滴下後０℃で２４時間、室温で６時
間、撹拌する。

【０１０４】得られた生成物は実施例７Ａと同様の方法
により回収、精製を行った。

【０１０５】収量は５．２ｇであった。

【０１０６】（実施例８） Ｎ−β−ビオチニル−１−
アミノブタンの製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを２．
１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のトリエチルアミンを加えて
ある無水ＴＨＦ８０ｍｌ中にて懸濁し、−１０℃にて撹
拌する。

【０１０７】２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチ
ルクロロギ酸エステルを３０分かけてゆっくりと滴下
し、滴下後も撹拌し続ける。反応液は−１０℃で２時
間、０℃で１５時間放置する。その後２．０ｇの１−ア
ミノブタンを３０分かけてゆっくりと滴下する。その反
応液を室温に戻し、更に６時間撹拌する。

【０１０８】その溶媒を真空下にて蒸発させ、得られた
残渣は、２５０ｍｌの水の中にて結晶化させた。目的物
は、濾過により回収し、２０ｍｌの蒸留水で２回洗った
のち、高真空下で乾燥させた。収量は４．２５ｇであっ
た。

【０１０９】得られたＮ−β−ビオチニル−１−アミノ
ブタンの物理化学的性質は以下のとおりである。

【０１１０】物性 白い結晶性粉末 分子式 Ｃ₁₄Ｈ₂₅Ｎ₃ Ｏ₂ Ｓ 分子量 ２９９．４４ 組成分析 Ｃ＝５６．１６％、Ｈ＝８．４２％、
Ｎ＝１４．０３％ Ｏ＝１０．６９％、Ｓ＝１０．７１％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 難溶性 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．６６（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【０１１１】（実施例９） Ｎ−β−ビオチニル−アミ
ノシクロヘキサンの製造 ７．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチナートを２．１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）
のトリエチルアミンを加えてある無水ＤＭＦ８０ｍｌに
加え懸濁し、０℃で撹拌する。その後２．０ｇのシクロ
ヘキシルアミンを加え０℃で２時間更に室温で１４時間
撹拌する。その後反応液を０℃に冷却し、濾過し、濾液
を捨てた。

【０１１２】沈殿物は２０ｍｌの冷水で３回洗い高真空
下で乾燥させた。収量は４．５７ｇであった。

【０１１３】得られたＮ−β−ビオチニル−アミノシク
ロヘキサンの物理化学的性質は以下のとおりである。

【０１１４】物性 白い粉末 分子式 Ｃ₁₆Ｈ₂₇Ｎ₃ Ｏ₂ Ｓ 分子量 ３２５．４８ 組成分析 Ｃ＝５９．０５％、Ｈ＝８．３６％、
Ｎ＝１２．９１％ Ｏ＝９．８３％、Ｓ＝９．８５％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 難溶性 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．６８（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【０１１５】（実施例１０） Ｎ−β−ビオチニル−４
−ニトロベンジルアミンの製造 ５．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＤ−ビオチンを２．
１３ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のトリエチルアミンを加えて
ある無水ＴＨＦ８０ｍｌに懸濁し、−１０℃で撹拌す
る。２．８７ｇ（２１ｍｍｏｌｅ）のイソブチルクロロ
ギ酸エステルを３０分かけてゆっくりと滴下し、滴下後
も撹拌し続ける。反応液は−１０℃で２時間、０℃で１
５時間撹拌する。他方、３．７７ｇの４−ニトロベンジ
ルアミン塩酸塩と２ｇのＫ₂ ＣＯ₃ を冷水５０ｍｌに溶
解し、その溶液を５０ｍｌのエチルアセテートで３回抽
出し、抽出液を５０ｍｌの冷水で２回洗った。その後そ
れを取り出し、蒸発させ、乾燥させた。得られた残渣を
１０ｍｌのＤＭＦで希釈し、その溶液を３０分かけてゆ
っくりと前記の０℃で撹拌している反応液に滴下した。
その後反応液を室温に戻し、更に６時間撹拌した。その
後溶媒を真空下で蒸発させ乾燥させた。

【０１１６】残渣は２４０ｍｌの水の中にて結晶化さ
せ、濾過により分離し、２０ｍｌの冷水で３回洗い、高
真空下で乾燥させた。収量は５．４７ｇであった。

【０１１７】得られたＮ−β−ビオチニル−４−ニトロ
ベンジルアミンの物理化学的性質は以下のとおりであ
る。

【０１１８】物性 黄色味かかった結晶性粉
末 分子式 Ｃ₁₇Ｈ₂₂Ｎ₄ Ｏ₄ Ｓ 分子量 ３７８．４６ 組成分析 Ｃ＝５３．９５％、Ｈ＝５．８６％、
Ｎ＝１４．８１％ Ｏ＝１６．９１％、Ｓ＝８．４７％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 難溶性 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．６３（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝８０：２５：
２：１）

【０１１９】（実施例１１） Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ
−アルギニンの製造 ７．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチナートを、２．１３ｇ（２１ｍｍｏｌ
ｅ）のトリエチルアミンを加えてある無水ＤＭＦ８０ｍ
ｌ中に懸濁し、０℃にて撹拌する。その後３．８３ｇの
Ｌ−アルギニンを加え、反応液を０℃で２時間、４５℃
で４時間撹拌する。溶媒を真空下で蒸発させる。

【０１２０】残渣は水で希釈し、Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ
ＲＰ１８樹脂カラムを用いた逆相クロマトグラフィー
で精製した。

【０１２１】溶出点は水／エタノール＝１：１であっ
た。純品である目的物を含んでいる溶出画分を集め、蒸
発させ乾燥させた。残渣は５０ｍｌの水に溶解し、凍結
乾燥した。収量は５．６ｇであった。

【０１２２】得られたＮ−β−ビオチニル−Ｌ−アルギ
ニンの物理化学的性質は以下のとおりである。

【０１２３】物性 白い非結晶性粉末 分子式 Ｃ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₆ Ｏ₄ Ｓ 分子量 ４００．５１ 組成分析 Ｃ＝４７．９８％、Ｈ＝７．０５％、
Ｎ＝２０．９８％ Ｏ＝１５．９８％、Ｓ＝８．０１％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．１２（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝６５：３５：
５：３）

【０１２４】（実施例１２） Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ
−システインの製造 ７．０ｇ（２０．５ｍｍｏｌｅ）のＮ−スクシンイミジ
ル−Ｄ−ビオチナートを、２．１３ｇ（２１ｍｍｏｌ
ｅ）のトリエチルアミンを加えてある無水ＤＭＦ８０ｍ
ｌ中に懸濁し、０℃にて撹拌する。その後２．４２ｇの
Ｌ−システインを加え、反応液を０℃で２時間、４５℃
で４時間撹拌する。溶媒は真空下で蒸発させ、得られた
残渣は２２ｍｌの１ＮＨＣｌを加えた。冷水で希釈しそ
の後生じた沈殿物を濾過により分離し、濾液を捨てた。

【０１２５】得られた沈殿物を４５℃にて、水溶液の懸
濁液にしてくり返し洗い精製した。収量は４．４ｇであ
った。

【０１２６】得られたＮ−β−ビオチニル−Ｌ−システ
インの物理化学的性質は以下のとおりである。

【０１２７】物性 白い粉末 分子式 Ｃ₁₃Ｈ₂₁Ｎ₃ Ｏ₄ Ｓ₂ 分子量 ３４７．４６ 組成分析 Ｃ＝４４．９４％、Ｈ＝６．０９％、
Ｎ＝１２．０９％ Ｏ＝１８．４２％、Ｓ＝１８．４６％ 有機溶媒に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（ＤＭＳ
Ｏ中） 水に対する溶解性 ＞１０ｍｇ／ｍｌ（０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中） 薄層クロマトグラフィー Ｒｆ＝０．３５（クロロホ
ルム／メタノール／水／２８％ＮＨ₃ ＝６５：３５：
５：３） このようにして得られた誘導体について、更に欠食によ
って誘発される高血糖症とストレプトゾトシンによって
誘発される高血糖症の２つの実験系を用いて、その生物
学的活性を検討した。

【０１２８】肝臓のグルコキナーゼ活性は欠食の実験系
において検討を行い、糖血、血中インシュリン、アセト
アセテートのレベルについては、ストレプトゾトシンに
よって誘発される糖尿症の実験系において検討を行っ
た。

【０１２９】（実施例１３） ストレプトゾトシンによ
って誘発された実験的糖尿病 １０匹の雄のウイスターラット（体重２００ｇ）を４つ
の群に分け、第１群は対照群とし、他の群は、ストレプ
トゾトシンを８０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与した。第３の群
は更にビオチンを３ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与し、第４の群
はビオチニルエタノールアミドを３ｍｇ／ｋｇ腹腔内投
与した。投与は３日間くり返した。その後、最初の投与
より５日目の血液を採取し、分析を行った。

【０１３０】

【表１】 上記の結果より ビオチンを処理したものは糖血は正常値に近く、ビオチ
ニルエタノールアミンを処理したものは、正常値であっ
た。

【０１３１】このことは血中インシュリンに対して、ビ
オチニルエタノールアミンもビオチンもアナログと同様
の作用をしていると考えられる。

【０１３２】（実施例１４） インビボでの肝臓のグル
コキナーゼ活性の検討 （実験Ａ） この検討は、Ｃｈａｎｈａｎ ｅｔ ａ
ｌ．の実験系（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，ｐ
１００３５，１９９１）に従って行った。この系では、
欠食によって減少したラットの肝グルコキナーゼ活性
が、ビオチンの作用によって再活性化された。平均体重
２５０ｇの１５匹のウイスターラットを３つの群に分
け、最初の群は対照群とし、第２の群は、ビオチンを３
ｍｇ／ｋｇとなるよう腹腔内投与し、第３の群は、ビオ
チニルエタノールアミンを３ｍｇ／ｋｇとなるよう腹腔
内投与した。ラットを２４時間欠食させ、その６時間後
に斬首した。肝臓を５倍量のトリス緩衝液（５０ｍＭ
Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５，０．１５ＭＫＣｌ，５ｍＭ Ｅ
ＧＴＡ，４ｍＭ ＭｇＣｌ₂ ，２ｍＭ ｄｉｔｈｉｏｔ
ｈｒｅｉｔｏｌ）中にてホモゲナイズし、１００，００
０×ｇで６０分間遠心した。その上清を−８０℃に凍結
し、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，
ｖｏｌ７２，ｐ２４８，１９７６）に従ったタンパク定
量を行ったのち、活性測定に供した。

【０１３３】グルコキナーゼはＤａｋｓｈｉｎａｍｕｒ
ｔｉ ｅｔ ａｌ．（Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，ｖ
ｏｌ４６，ｐ．７５，１９６８）の方法に従って、分光
光度計を用いて測定した。

【０１３４】結果を以下に示す。

【０１３５】 グルコキナーゼ活性（Ｕ．／ｍｉｎ／ｍｇタンパク） 対照 ２．２０±０．９０※ ビオチン投与 ３．９６±０．７０ ビオチニルエタノールアミン投与 ４．２７±０．４５ ※ ±は標準偏差を示す。

【０１３６】得られた効果は顕著であり（ｔ標準テス
ト、ｐ＝０．０１）、このことは、６時間後において
は、ビオチニルエタノールアミンはビオチンよりも活性
が高いということを示している。投与と斬首の時間を短
くした他の実験においてはビオチンとビオチニルエタノ
ールアミンの効果の差は小さかった。このことは、ビス
エタノールアミン誘導体の方が、持続効果が高いという
ことを示している。

【０１３７】（実験Ｂ） この実験も実験Ａ同様Ｃｈａ
ｎｈａｎ ｅｔ ａｌ．の実験系（Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．，ｖｏｌ２６６，ｐ．１００３５，１９９１）に
従って行った。

【０１３８】２４時間欠食させた平均体重２６０ｇのス
プラグーダウレイ（ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ）ラッ
トを１４の群に分けた。

【０１３９】１２の群については、それぞれの群毎に表
１で示す本発明の化合物あるいはビオチンを２ｍｇ／ｋ
ｇの投与量で腹腔内投与した。

【０１４０】ビオチンを含むすべての化合物は、生理食
塩水に溶解したのち投与した。

【０１４１】それぞれの群におけるグルコキナーゼ活性
を２つの対照群、すなわち、市販の食事を与えた正常群
と２４時間欠食させた薬剤未処理群それぞれの群のグル
コキナーゼ活性に対して比較した。

【０１４２】すべてのラットは水に関しては自由に飲む
ことができた。

【０１４３】投与の３時間後にラットを大脳切除により
殺した。殺したラットの肝臓を４倍量のトリス緩衝液
（５０ｍＡ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．４，０．１５Ｍ ＫＣ
ｌ，５ｍＭ ＥＰＴＡ，２ｍＭ ＤＴＴ）に取り、ｐｏ
ｔｔｅｒを用いて８〜９ストローブ／８００ｒ．ｐ．ｍ
の条件でホモゲナイズした。その破砕液を１００，００
０×ｇにて６０分間遠心した。タンパク濃度は上記のＢ
ｒａｄｆｏｒｄ法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，ｖｏｌ
７２，ｐ．２４８，１９７６）に従って測定した。

【０１４４】グルコキナーゼ活性はＤａｋｓｈｉｎａｍ
ｕｒｔｉ ｅｔ ａｌ．（Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ，ｖｏｌ４６，ｐ．７５，１９６８）の方法に従って
測定した。活性はタンパク量当たりのユニットとして表
した。得られた結果によると、通常の食事を与えたラッ
トに比べると、２４時間欠食させたラットではグルコキ
ナーゼ活性の低下が観察され、その活性は３．０７±
０．１８１Ｕｎｉｔｓ／ｍｇタンパクであった。そし
て、ビオチンの投与はグルコキナーゼ活性を少なくとも
部分的に再生しておりその活性値は３．６６２±０．２
８０Ｕｎｉｔｓ／ｍｇタンパクであった。

【０１４５】本発明の化合物は、表１に示したようにビ
オチンよりも効果的に減少したグルコキナーゼ活性の増
加を引き起こし、又、表１の結果からも明らかなよう
に、投与の３時間後においてもその効果を示している。

【０１４６】 表１ 欠食によって引き起こされたグルコキナーゼ活性の低下に対する本発明 の化合物の効果 ──────────────────────────────────── 投与化合物 グルコキナーゼ活性の増加※ （％） ──────────────────────────────────── ビオチン １９ Ｎ−β−ビオチニル−Ｎ⁴ −（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン ２８ Ｎ−β−ビオチニル−ベンジルアミン ２８ Ｎ−β−ビオチニル−４−アミノブタノール ２５ Ｎ，Ｎ′−ビス−（β−ビオチニル）−エチレンジアミン ３１ Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−セリン ３３ Ｎ−β−ビオチニル−１−アミノブタン ２５ Ｎ−β−ビオチニル−アミノシクロヘキサン ２２ Ｎ−β−ビオチニル−４−ニトロベンジルアミン ３２ Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−アルギニン ３５ Ｎ−β−ビオチニル−Ｎ^G −メチル−Ｌ−アルギニン ２０ Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−システイン ３４ ※ グルコキナーゼ活性の増加は、欠食させた群（対照
群）のグルコキナーゼ活性に対しての増加率として表わ
した。

【０１４７】以下に本発明の製剤例を例示するが、本発
明は以下の例に限定されるものではない。

【０１４８】（製剤例１） 水溶性錠剤 ビオチニルエタノールアミン ６ｍｇ グリシン ６２ｍｇ カルボキシメチルスターチ・ナトリウム塩 ２２ｍｇ ポリエチレングリコール６０００ ４ｍｇ スターチ １ｍｇ ポリビニルピロリドン ５ｍｇ （製剤例２） 顆粒剤 ビオチニルエタノールアミン ６ｍｇ グリシン ９６４ｍｇ ポリビニルピロリドン ５ｍｇ ポリエチレングリコール６０００ ５ｍｇ ピーチ香料エッセンス ２０ｍｇ （製剤例３） ２ｍｌ容バイアル ビオチニルエタノールアミン ６ｍｇ リン酸水素二ナトリウム・１２Ｈ₂ Ｏ ６ｍｇ リン酸水素−ナトリウム ０．５ｍｇ 塩化ナトリウム １２ｍｇ に蒸留水を加え２ｍｌとする。

【０１４９】

【発明の効果】本発明によって提供されるビオチンアミ
ド誘導体は、糖尿病に対して顕著な効果を示すものであ
り、糖尿病の治療薬として有用である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成６年６月３日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】発明の名称

【補正方法】変更

【補正内容】

【発明の名称】 ビオチンアミド誘導体の製造方法及
び、それらを含有する糖尿病及び糖尿病合併症の治療剤

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ガブリエレ マルコロンゴ イタリア国、35020 カッラーラ サン ジョルジョ、ストラデ インテルネ、５ テッラ (72)発明者 ラウロ ガルツィンナ イタリア国、35142 パドヴァ、ヴィーア レンディナーラ ３

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の一般式（Ｉ）を有するα又はβビ
   オチンのアミド誘導体。 Ｗ−ＣＯＮＨ−Ｒ−Ｘ （Ｉ） ここでＷは 【化１】 であり、Ｒは、以下のいずれかの１つにより定義され
   る、１から２０の炭素数を有する二価の官能基である。 （Ａ）Ｒは直鎖状あるいは分枝したアルキレン基であ
   り、アルキレン鎖は場合により−ＣＯＯＨ，ＮＨ₂ ， 【化２】 ，Ｈ，ＳＨ，−ＣＯ−，ＯＨ（Ｒ′はメチル又はＨであ
   る）から成る群から選ばれる少なくとも１つの置換基に
   より、置換されることもできる。 （Ｂ）Ｒは３から７の炭素数を有するシクロアルキレン
   である。 （Ｃ）Ｒは、アリレン基又はアリルアルキレン基であ
   り、場合により少なくとも１つのＮＯ₂ 基によって、炭
   素環が置換されてもよい。 （Ｄ）Ｒはピペラジニルアルキレン基であり、そして、
   Ｘは、Ｈ，ＯＨ，ＣＯＯＨ， 【化３】 から成る群より選ばれる。但し、Ｗが 【化４】 でありかつＲが−（ＣＨ₂ ）₂ −であるときは、ＸはＯ
   Ｈであってはならない。
2. 【請求項２】 Ｒが（Ａ）であり、かつ好ましくは、−
   ＣＨ₂ −ＣＨ₂ −， 【化５】 （Ｒ′は、前記の意味，−（ＣＨ₂ ）₄ −，又は 【化６】 である。）より成る群より選ばれる、請求項１記載のア
   ミド誘導体。
3. 【請求項３】 Ｒが（Ｂ）であり、かつシクロヘキシレ
   ンである、請求項１記載のアミド誘導体。
4. 【請求項４】 Ｒが（Ｃ）でありかつ、好ましくは、 【化７】 より成る群より選ばれる、請求項１記載のアミド誘導
   体。
5. 【請求項５】 Ｒが（Ｄ）であり、かつ、 【化８】 である、請求項１記載のアミド誘導体。
6. 【請求項６】 Ｎ−β−ビオチニル−Ｎ^G −メチル−Ｌ
   −アルギニン、Ｎ−β−ビオチニル−４−アミノ−ブタ
   ノール、Ｎ，Ｎ′ビス−（−β−ビオチニル）−エチレ
   ンジアミン、Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−セリン、Ｎ−β
   −ビオチニル−１−アミノブタン、Ｎ−β−ビオチニル
   −Ｌ−アルギニン、Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−システイ
   ンより成る群より、選ばれる請求項２記載のアミド誘導
   体。
7. 【請求項７】 Ｎ−β−ビオチニル−アミノシクロヘキ
   サンである請求項３記載のアミド誘導体。
8. 【請求項８】 Ｎ−β−ビオチニル−ベンジルアミン、
   Ｎ−β−ビオチニル−４−ニトロベンジルアミンから成
   る群より選ばれる請求項４記載のアミド誘導体。
9. 【請求項９】 Ｎ¹ −β−ビオチニル−Ｎ⁴ −（２−ヒ
   ドロキシエチル）−ピペラジンである、請求項５記載の
   アミド誘導体。
10. 【請求項１０】以下の一般式（Ｉ）を有する Ｗ−ＣＯＮＨ−Ｒ−Ｘ （Ｉ） ここでＷは 【化９】 であり、Ｒは、以下のいずれかの１つにより定義され
    る、１から２０の炭素数を有する二価の官能基である。 （Ａ）Ｒは直鎖状あるいは分枝したアルキレン基であ
    り、アルキレン鎖は場合により−ＣＯＯＨ，ＮＨ₂ ， 【化１０】 ，Ｈ，ＳＨ，−ＣＯ−，ＯＨ（Ｒ′はメチル又はＨであ
    る）から成る群から選ばれる少なくとも１つの置換基に
    より、置換されることもできる。 （Ｂ）Ｒは３から７の炭素数を有するシクロアルキレン
    である。 （Ｃ）Ｒは、アリレン又はアリルアルキレン基であり、
    場合により少なくとも１つのＮＯ₂ 基によって、炭素環
    が置換されてもよい。 （Ｄ）Ｒはピペラジニルアルキレン基であり、そして、
    Ｘは、Ｈ，ＯＨ，ＣＯＯＨ， 【化１１】 より成る群より選ばれるα又はβビオチンアミド誘導体
    の製造方法であって以下の過程より成る製造方法。 （ａ）ビオチンを極性の中性溶媒中にて、第４アミンの
    存在下で、０℃以下の温度において、式（II）で表わさ
    れるアルキルクロロギ酸エステルで処理し、 Ｃｌ−ＣＯＯＲ″ （II） ここでＲ″はＣ₁ からＣ₁₀のアルキル。式(III) で表せ
    る混合アンヒドライドを得る。 Ｗ−ＮＨ−ＣＯＯ−ＣＯＯＲ″ (III) （ｂ）式(IV) ₂ ＨＮ−Ｒ−Ｘ (IV) ここでＲとＸは、前記の意味で表わされるアミンで
    （ａ）により得た式（III ）で表わされる混合アンヒド
    ライドを含む反応液を直接処理し、式（Ｉ）で表わされ
    るアミド誘導体を得る。
11. 【請求項１１】 一般式（Ｉ）を有する Ｗ−ＣＯＮＨ−Ｒ−Ｘ （Ｉ） ここでＷは 【化１２】 であり、Ｒは、以下のいずれかの１つにより定義され
    る、１から２０の炭素数を有する二価の官能基である。 （Ａ）Ｒは直鎖状あるいは分枝したアルキレン基であ
    り、アルキレン鎖は場合により −ＣＯＯＨ，ＮＨ₂ ， 【化１３】 ，Ｈ，ＳＨ，−ＣＯ−，ＯＨ（Ｒ′はメチル又はＨであ
    る）から成る群から選ばれる少なくとも１つの置換基に
    より、置換されることもできる。 （Ｂ）Ｒは３から７の炭素数を有するシクロアルキレン
    である。 （Ｃ）Ｒは、アリレン又はアリルアルキレン基であり、
    場合により少なくとも１つのＮＯ₂ 基によって炭素環が
    置換されてもよい。 （Ｄ）Ｒはピペラジニルアルキレン基であり、そして、
    Ｘは、Ｈ，ＯＨ，ＣＯＯＨ， 【化１４】 から成る群より選ばれる。α又はβビオチンのアミド誘
    導体を製造する方法であって、Ｎ−ヒドロキシスクシン
    イミドのα又はβビオチンエステルをジメチルホルムア
    ミド中にて、−１０℃から０℃の温度において式（IV） ₂ ＨＮ−Ｒ−Ｘ （IV） ここでＲとＸは前記の意味で表わされるアミンと反応さ
    せることから成る製造方法。
12. 【請求項１２】 一般式（Ｉ）を有するα又はβビオチ
    ンアミド誘導体を、有効成分として少なくとも一種含ん
    でいることから成る糖尿病及び糖尿病合症の予防／治療
    薬。 Ｗ−ＣＯＮＨ−Ｒ−Ｘ （Ｉ） ここでＷは 【化１５】 であり、Ｒは、以下のいずれかの１つにより定義され
    る、１から２０の炭素数を有する二価の官能基である。 （Ａ）Ｒは直鎖状あるいは分枝したアルキレン基であ
    り、アルキレン鎖は場合により −ＣＯＯＨ，ＮＨ₂ ， 【化１６】 ，Ｈ，ＳＨ，−ＣＯ−，ＯＨ（Ｒ′はメチル又はＨであ
    る）から成る群から選ばれる少なくとも１つの置換基に
    より、置換されることもできる。 （Ｂ）Ｒは３から７の炭素数を有するシクロアルキレン
    である。 （Ｃ）Ｒは、アリレン又はアリルアルキレン基であり、
    場合により少なくとも１つのＮＯ_I 基によって、炭素環
    が置換されてもよい。 （Ｄ）Ｒはピペラジニルアルキレン基であり、そして、
    Ｘは、Ｈ，ＯＨ，ＣＯＯＨ， 【化１７】 から成る群より選ばれる。
13. 【請求項１３】 インシュリン非依存性糖尿病の治療の
    ための請求項１２記載の治療薬。
14. 【請求項１４】 経口投与可能な低血糖症薬とともに用
    いる請求項１３記載の治療薬。
15. 【請求項１５】 インシュリン依存性糖尿病の治療のた
    めの請求項１２記載の治療薬。
16. 【請求項１６】 インシュリンを有効成分として合有し
    ている注射治療薬とともに用いる請求項１５記載の治療
    薬。
17. 【請求項１７】 末梢性神経障害(peripheral neuropat
    hies) あるいは慢性病弱性疾患(chronic invalidating
    pathologies)である、糖尿病合併症の治療のための請求
    項１２記載の治療薬。
18. 【請求項１８】 経口あるいは非経口投与可能な請求項
    １２記載の治療薬。
19. 【請求項１９】 式（Ｉ）中のＲが（Ａ）で定義されか
    つ好ましくは、−ＣＨ₂ −ＣＨ₂ ， 【化１８】 （ここでＲ′は前記の意味、−（ＣＨ₂ ）₄ −， 【化１９】 である）より成る郡から選ばれることを特徴とする請求
    項１２記載の治療薬。
20. 【請求項２０】 式（Ｉ）中のＲが（Ｂ）で定義され、
    かつシクロヘキシレンであることを特徴とする請求項１
    ２記載の治療薬。
21. 【請求項２１】 式（Ｉ）中のＲが（Ｃ）で定義され、
    かつ 【化２０】 からなる郡から選ばれることを特徴とする請求項１２記
    載の治療薬。
22. 【請求項２２】 式（Ｉ）中のＲが（Ｄ）で定義され、
    かつ 【化２１】 であることを特徴とする請求項１２記載の治療薬。
23. 【請求項２３】 式（Ｉ）の化合物が、Ｎ−β−ビオチ
    ニルエタノールアミン、Ｎ−β−ビオチニル−Ｎ^G −メ
    チル−Ｌ−アルギニン、Ｎ−β−ビオチニル−４−アミ
    ノ−ブタノール、Ｎ，Ｎ′ビス−（β−ビオチニル）−
    エチレンジアミン、Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−セリン、
    Ｎ−β−ビオチニル−１−アミノブタン、Ｎ−β−ビオ
    チニル−Ｌ−アルギニン、Ｎ−β−ビオチニル−Ｌ−シ
    ステインよりなる群より選ばれることを特徴とする請求
    項１９記載の治療薬。
24. 【請求項２４】 式（Ｉ）の化合物がＮ−β−ビオチニ
    ル−アミノシクロヘキサンであることを特徴とする請求
    項２０記載の治療薬。
25. 【請求項２５】 式（Ｉ）の化合物が、Ｎ−β−ビオチ
    ニル−ベンジルアミン、Ｎ−β−ビオチニル−４−ニト
    ロベンジルアミンからなる群より選ばれることを特徴と
    する請求項２１記載の治療薬。
26. 【請求項２６】 式（Ｉ）の化合物が、Ｎ−β−ビオチ
    ニル−Ｎ⁴ −（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジンで
    あることを特徴とする請求項２２記載の治療薬。