JPH0728759B2 - 腫瘍形成性の検出方法 - Google Patents

腫瘍形成性の検出方法

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JPH0728759B2
JPH0728759B2 JP58207345A JP20734583A JPH0728759B2 JP H0728759 B2 JPH0728759 B2 JP H0728759B2 JP 58207345 A JP58207345 A JP 58207345A JP 20734583 A JP20734583 A JP 20734583A JP H0728759 B2 JPH0728759 B2 JP H0728759B2
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Description

【発明の詳細な説明】 哺乳動物細胞の悪性に対する機構は従来から又現在にお
いてもなお真剣に検討されている主題である。この機構
の解明に有望と考えられている分野の一つは腫瘍を起こ
す遺伝子（以下、単に腫瘍遺伝子（oncogenes）と称
す）の分野である。腫瘍遺伝子の発生は、最初にレトロ
ウイルスについて検出されたが、現在ではウイルス腫瘍
遺伝子が細胞の相手を有することが合理的根拠のある確
固たるものとなつているように思われる。細胞の相手の
役割は明確でない。腫瘍遺伝子、それらの特性及び特に
src遺伝子についての優れた総説がJ.マイケル・ビシヨ
ツプによる記事に見られる（J.Michael Bishop、Scient
ific American、1982年３月、81〜93頁）。この記事は
又各種ウイルス腫瘍遺伝子のリストを提供し、それらの
多くがリン酸化反応を含んでいることを示している。
このsrc遺伝子は、ニワトリの悪性細胞中において活性
であるのみならず、正常細胞においても活性であること
が判明している。その相違はsrc遺伝子により表現され
る酵素が正常細胞に比べて悪性細胞においてはるかに高
い濃度で存在するように思われる点において、種類とい
うよりもむしろ程度の差であるように思われる。
腫瘍細胞の存在を決定することが可能となるためには、
正常細胞と腫瘍細胞の区別を行うことが可能である必要
がある。従つて、腫瘍細胞と診断すべく観察される性質
は、正常細胞からの区別、或いは細胞よりもむしろ流体
が測定される正常宿主の生理学的流体からの区別が可能
でなければならない。更に、その性質は個人に特異的な
ものであるべきでなく、細胞の悪性の性質に共通のもの
でなければならない。
診断及び治療の両者において、悪性細胞を特異的に検出
するための好機は極めて重要である。悪性の疑いがもた
れる高い割合の状況において、如何なる技術も悪性細胞
を正常細胞から区別する能力を有するべきである。更
に、診断技術は多くの人口に対して有用であるべきであ
り、１人或いは数人の人口に対して特異的であるべきで
はない。
癌細胞は正常細胞に由来するものであるので、悪性細胞
の性質及び成分の殆んどは正常細胞と同一である。更
に、悪性は自然の過程の結果であり、一定の状況におい
て悪性となるという見解が次第に増大している。悪性
が、問題の時点において常軌を逸した結果を有する正常
な過程に基づくものであるとの事実に鑑みれば、広汎な
範囲の異質遺伝子的な宿主にわたつて正常細胞と癌細胞
間の観察可能な差異を示すことに実質的な困難があつた
としても驚くに足りない。
次の論文は腫瘍遺伝子、及び腫瘍形成におけるレトロウ
イルスの役割についての一般的記述を提供するものであ
る:Bishop、Scientific American、前記;Bishop New En
gland J.of Med.（1980）303:675〜681頁;Lancet、1982
年７月24日、195〜196頁;Cooper、Science（1982）218:
801〜806頁;Varmus,Science（1982）216:812〜820頁。
特別の腫瘍遺伝子に関する論文としては、BeckerらのPN
AS USA（1982）79:3315〜3319;TsuchidaらのScience（1
982）217:937〜938及びDharらの同上の（1982）217:934
〜936などが挙げられる。
ヒト宿主における新らたな腫瘍の悪性細胞を同定し、治
療するための方法及び組成物が提供されている。低級脊
椎動物の細胞を悪性に形質転換することのできるDNA配
列についての知識から、該DNAのヒト細胞における転写
の程度を決定するためのポリヌクレオチドプローブを作
成することができ、該DNA配列のペプチド生成物の決定
因子部位を特異的に認識することのできる受容体を生成
することができる。これらのプローブ及び受容体は、診
断及び治療のための各種のラベルで標識を付することが
できる。
本発明によれば、ヒト及びその他の霊長類における癌の
診断及び治療のための新規方法及び組成物が提供され
る。低級脊椎動物の細胞を悪性に形質転換することので
きるDNAがヒトの細胞中に存在し、それが悪性細胞にお
いて正常細胞におけるよりもはるかに高程度の転写及び
表現を有することが此の度判明した。即ち、このより高
い割合のメツセンジヤーRNA或いはその様なメツセンジ
ヤーRNAの表現生成物を検出することができることによ
り宿主中の悪性細胞の存在を診断することが可能であ
る。更に、悪性細胞中の高割合のペプチドの生成は悪性
の治療に対する基礎となり得る。血液のような生理学的
流体中にポリペプチド表現生成物を見出すことが可能で
あり、その表現生成物の割合が悪性の存在或いは不存在
において実質的に異る場合には、その生理学的流体を特
別の腫瘍の存在に対する徴候として検査することができ
る。
本発明は、一定の群の細胞、特に生体内のヒト細胞或い
はヒト宿主から新らたに取出されたヒト細胞における悪
性細胞の可能性或いは存在を評価するための方法及び組
成物を提供する。この方法は悪性細胞の可能性のある存
在の徴候としてmRNA或いはその表現生成物のような細胞
生成物に着目するものである。検出のために選択される
mRNAは、哺乳動物細胞を悪性に形質転換することのでき
るレトロウイルスのゲノム中にRNAが存在する結果とし
て通常選択される。更に、選択されたレトロウイルス中
のRNAは、レトロウイルスの本質的機能を暗号化するも
のではなく、事実、サイレントであつてもよい配列であ
る。
本発明の方法は、第１工程として、哺乳動物細胞におい
て悪性を引起こすことのできるDNA配列の決定を含むも
のである。一度DNA配列が決定されると、高割合のメツ
センジヤーRNAを検出するためのプローブとしての役割
を果すポリヌクレオチド配列を提供することができ、細
胞が悪性であるかどうかを決定することができる。又、
この配列を使用してペプチド配列に対して高い特異性を
有する相補的受容体を決定することのできるポリペプチ
ド配列を決定することもできる。これらの受容体は次い
で、細胞或いは生理学的流体中のペプチドの存在或いは
濃度の決定、および受容体を悪性細胞に向けることがで
きる場合には治療のために使用することができる。又、
ペプチドの性質及びその機能を知ることにより特別のペ
プチドの上昇した産生を制御するためのその他の手段も
利用可能である。
本発明の方法における第１工程は、DNA配列を決定する
ことである。レトロウイルス腫瘍遺伝子のDNA配列を決
定するために各種方法を使用することができる。例え
ば、低級脊椎動物の細胞を悪性に形質転換することので
きるレトロウイルスが見出されている。これまでに特性
化されているレトロウイルス類は、宿主中に存在する野
性型遺伝子、即ち、現在では腫瘍遺伝子と呼ばれている
遺伝子、に匹敵するDNA配列を有することが示されてい
る。更に、ラウス肉腫ウイルスの場合には、その遺伝子
の表現生成物が単離され、特性付けられキナーゼである
ことが示されている。このキナーゼは、細胞により正常
状態でも産生されているが、しかし、ラウス肉腫ウイル
スからのsrc遺伝子が導入された場合よりもはるかに低
割合であることも示されている。各種脊椎動物において
既に多数のウイルス腫瘍遺伝子が検出されており、次表
は一連の腫瘍遺伝子及びそれ等の起源種を示すものであ
る。 表 １ 腫瘍遺伝子 起 源 種 ｖ−src ニワトリ ｖ−fps 〃 ｖ−yes 〃 ｖ−fos 〃 ｖ−myc 〃 ｖ−erb 〃 ｖ−myb 〃 ｖ−rel シチメンチヨウ ｖ−mos マウス ｖ−bas 〃 ｖ−abl 〃 ｖ−ras ラツト ｖ−fes ネ コ ｖ−fms 〃 ｖ−sis サ ル 脊椎動物細胞中に悪性形質転換をもたらす能力を有する
その他のDNA配列源としては、悪性細胞或いは細胞系か
ら単離されたDNA、ゲノムの図書館からクローン化され
たDNA、或いは悪性細胞の全メツセンジヤーがDNAに逆転
写されクローン化される場合のメツセンジヤーRNA図書
館からのクローン化DNAなどが挙げられる。これらの図
書館のいずれについても、その悪性を誘発する能力につ
いてスクリーニングすることができる。スクリーニング
技術における改良は正常細胞から全メツセンジヤーを取
出し、このメツセンジヤーからcDNAを調整することによ
り達成される。次いでこの一本鎖DNAを、悪性細胞から
の全メツセンジヤーRNAより正常細胞に関連したメツセ
ンジヤーRNAを除去するプローブとして使用することが
できる。残りのメツセンジヤーRNAは悪性に関連した遺
伝子により表現されるメツセンジヤーを含むことにな
る。次いでこのメツセンジヤーをゲノムの図書館をスク
リーニングするために使用し、悪性に形質転換する能力
を決定するための培養アツセイにおいてメツセンジヤー
とハイブリツド化するクローン化DNAを使用することが
できる。正常細胞を形質転換することができるDNA配列
を検出及び決定するためのその他の方法もやがて利用可
能となるであろう。
悪性細胞からのメツセンジヤーRNAを用いて胎児からのc
DNAをスクリーニングすることによつて更に別の分析を
用いることが可能である。特に、腫瘍遺伝子が、胚にお
いては極めて活性であるが、成熟した脊椎動物において
サイレント或いは比較的静かである遺伝子の場合にはこ
のスクリーニングは被スクリーニング配列分野を更に狭
めるのに役立つことが可能である。
一度、悪性を誘発することのできるDNA配列が同定され
ると、クローン化されたウイルスの腫瘍遺伝子、即ち、
短いポリヌクレオチド配列を悪性の疑いのもたれる細胞
におけるメツセンジヤーRNAの生成割合を検出するため
のプローブとして使用することができる。RNA及びDNAヌ
クレオチド配列の調製、これらの配列の標識化、及び配
列の好ましい大きさは文献上十分な説明及び例示が行わ
れている。通例、配列は少なくとも約14個のヌクレオチ
ド、通常少なくとも約18個のヌクレオチド、を有すべき
であり、及びポリヌクレオチドプローブは１キロ塩基
（kilobase）以上である得る。各種ラベルが使用可能で
あるが、最も普通には放射性核種、特に〔32P〕が使用
される。しかしながら、例えばビオチン（biotin）変性
ヌクレオチドをポリヌクレオチド導入のために使用する
ようなその他の技術も又使用することができる。このビ
オチンは次いで各種のラベル、例えば放射性核種、螢光
体、酵素などにより標識化することのできるアビジン
（avidin）或いは抗体と結合する部位として機能する。
或いは又、DNA−蛋白質二重らせんを含む特別の二重ら
せんを認識することのできる抗体を使用することもでき
る。この抗体は次いで標識化され、この二重らせんが表
面に結合した場合に測定を行うことが可能となり、二重
らせんが表面上に形成された際に二重らせんに結合した
抗体の存在を検出することができる。
全腫瘍遺伝子のヌクレオチド配列を単離することによ
り、塩基の配列を公知の手段により決定することができ
る。例えば、マクサム及びギルバート（Maxam and Gilb
ert）、PNAS USA（1977）74:560参照。この配列を使用
して腫瘍遺伝子により表現される蛋白質のアミノ酸配列
の決定を行うことができる。表現を妨げる停止コドンを
有さない配列が続くメチオニンのコドンを同定すること
によりメチオニンコドンを有するフレーム中に腫瘍遺伝
子を決定するための単一配列を通常見出すことが可能で
ある。
あるいは又、表現を得るためにハイブリツドDNA技術を
使用することもできる。このDNA配列について制限マツ
ピングを行い、適当な切断部位を決定する。この様にし
て配列を切除し適当な制御信号を有するベクター中に導
入する。DNA配列の表現を得た後に、ポリペプチドに対
する抗体を作成することができる。次いで、翻訳されて
腫瘍遺伝子により表現されるペプチドを生成するメツセ
ンジヤーRNAの表現のために卵母細胞を用いることによ
り、このメツセンジヤーにより決定される蛋白質を生成
することができる。ハイブリツドDNAの表現により生成
されるペプチドである卵母細胞からのペプチドの同一性
が次いで決定される。
蛋白質が一度同定され、立証されると、この蛋白質或い
はサブユニツトペプチドを診断及び治療のための抗体産
生用抗原として使用することができる。抗体は、モノク
ローナル或いはポリクローナル抗体のいずれかが所望さ
れるかに応じて各種方法で調製することができる。ポリ
クローナル抗体のためには、脊椎動物、通常は家畜が抗
原により超免疫化され、繰返し免疫化後間もなく血液を
集め、ガンマグロブリンを単離する。モノクローナル抗
体については、小さな動物を超免疫化させ、脾臓を取出
し、リンパ球を適当な融合相手と融合させる。得られた
ハイブリドーマを次いで限定稀釈下に生育し、所望の抗
体を与えるクローンを選択する。
全ペプチドを製造するよりもむしろ、決定因子部位であ
ると思われる各種領域を決定し、少なくとも約８個のア
ミノ酸、通常は少なくとも約10〜20以下のアミノ酸、通
常は約18個のアミノ酸、を有するこれらのオリゴペプチ
ドを用いて抗体形成を誘発するのに用いることのできる
ハプテン（hapten）を決定することができる。このオリ
ゴペプチドな適当な免疫原に結合され、脊椎動物に導入
され、前記のようなポリクローナル或いはモノクローナ
ル抗体のいずれかを産生する。
従つて、本発明は、レトロウイルス腫瘍遺伝子に存在す
るRNAのペプチド表現生成物中の抗原領域に対応する一
連のオリゴペプチド類も提供するものである。本発明に
従つた有用な抗原性オリゴペプチド類の具体例を、以下
に、オリゴペプチドから生成した抗体により認識される
レトロウイルス腫瘍遺伝子（表現生成物）に基づいた群
毎に掲げてある。
A. Myb pro−gln−glu−ser−ser−lys−ala−gly−pro−pro−
ser−gly−thr−thr−gly met−ala−phe−ala−his−asn−pro−pro−ala−gly−
pro−leu−pro−gly−ala pro−pro−val−asp−his−gly−cys−leu−pro−glu−
glu−ser−ala−ser−pro−ala pro−phe−his−lys−asp−gln−thr−phe−thr−glu−
tyr−arg−lys−met−his−gly−gly−ala−val pro−phe−his−lys−asp−gln−thr−phe−thr−glu−
tyr−arg−lys−met asp−asn−thr−arg−thr−ser−gly−asp−asn−ala−
pro−val−ser−cys−leu−gly−glu pro−ser−pro−pro−val−asp−his−gly−cys−leu−
pro−glu−glu−ser−ala−ser−pro−ala−arg leu−gln−glu−ser−ser−lys−ala−ser−gln−pro−
ala−val−ala−thr−ser asn−pro−glu−val−lys−lys−thr−ser−trp−thr−
glu−glu−glu−asp−arg B. Src arg−leu−ileu−glu−asp−asn−glu−tyr−thr−ala
−arg−gln−gly−ala−lys−phe−pro asn−arg−glu−val−leu−asp−gln−val−glu−arg−
gly−tyr−arg−met−pro try−arg−arg−asp−pro−glu−glu−arg−pro−thr C. RasKi arg−leu−lys−lys−ileu−ser−lys−glu−glu−lys
−thr−pro−gly−cys−val−lys−ileu−lys−lys asp−leu−pro−ser−arg−thr−val−asp−thr−lys−
gln−ala−gln−glu−leu−ala−arg met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−gly−ala−
ser−gly−val−gly−lys−ser−ala D. RasHa glu−asp−ileu−his−gln−tyr−arg−glu−gln−ileu
−lys−arg−val−lys−asp−ser−asp−asp val−arg−glu−ileu−arg−gln−his−lys−leu−arg
−lys−leu−asn−pro−pro−asp−glu−ser−gly−pro met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−val−gly−
ala−arg−gly−val−gly−lys−ser−ala met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−val−gly−
ala−val−gly−val−gly−lys−ser−ala met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−val−gly−
ala−gly−gly−val−gly−lys−ser−ala val−asp−glu−tyr−asp−pro−thr−ileu−glu−asp
−ser−tyr−arg−lys−gln−val E. Fes arg−his−ser−thr−ser−ser−ser−glu−gln−glu−
arg−glu−gly−gly−arg ser−arg−glu−ala−ala−asp−gly asn−gln−gln−thr−arg−glu−phe−val−glu−lys−
gly−gly−arg pro−glu−val−gln−lys−pro−leu−his−glu−gln phe−leu−arg−thr−glu−gly−ala−ala−ala−asp−
glu−asp−ala−ala−ala phe−leu−arg−thr−glu−gly−ala−arg−leu−arg−
met−lys−thr−leu−leu ser−ala−pro−arg−ser−ser−pro−ser−thr−ser−
ser−trp−ser−ser ala−ser−pro−tyr−pro−asn−leu−ser−asn−gln−
thr−arg F. Myc asp−gln−gln−arg−leu−gly−arg−ayg−thr−arg−
arg−arg−val−arg−lys glu−arg−aln−glu−ala−glu−arg−his−asn−val−
leu−glu−arg−gln−arg−arg−asn−glu arg−leu−ileu−ala−glu−lys−glu−gln−leu−arg
−arg−arg−glu−gln arg−lys−lys−asn−lys−lys−lys−ser−glu−glu−
ileu−asp pro−pro−thr−thr−ser−ser−asp−ser−glu−glu−
glu−gln−glu arg−thr−leu−asp−ser−glu−glu−asn−asp−lys−
arg−arg glu−arg−gln−arg−arg−asn−glu−leu−lys−leu−
arg glu−gln−leu−arg−arg−arg−arg−glu−gln−leu−
lys asn−asn−glu−lys−ala−pro−lys−val−val arg−arg−glu−gln−leu−lys−his G. Fos lys−glu−lys−glu−lys−leu−glu−phe−ileu−leu pro−glu−glu−glu−glu−lys−arg−arg−ileu−arg
−arg−glu−arg 上記小分類Ａ〜Ｆに挙げたオリゴマーペプチド配列の各
々の一端或いは両端に更にアミノ酸残基を、得られるペ
プチドの抗原特性を変えることなく付加することができ
るので、本発明は又、上記Ａ〜Ｆに掲げたアミノ酸配列
の少なくとも１つを含有する約50までの、好ましくは25
の、アミノ酸の一連の抗原性オリゴペプチドを包含する
ものである。
上記Ａ〜Ｆの小分類において与えた１以上のアミノ酸配
列を含有する本発明による抗原性オリゴペプチド類は、
合成技術及びハイブリツドDNA技術を用いて調製するこ
とができる。約50までのアミノ酸残基を含有する本発明
のポリペプチド及びオリゴペプチドについては、通常の
固相ペプチド合成が使用するのに適している。この一般
的ペプチド合成技術は、例えば、米国特許第4,341,761
号明細書に記載されており、公知の側鎖保護基及び通常
の支持体、例えば、クロロメチル化樹脂、ヒドロキシメ
チル樹脂、或いはベンズヒドリルアミン樹脂などのポリ
スチレン樹脂支持体、を用いてアミノ酸カツプリングを
行つている。組換え或いはハイブリツドDNA技術を利用
する技術においては、本発明の例えば20個までのアミノ
酸を含有するオリゴペプチド類を用いて問題のオリゴペ
プチドを暗号づけするヌクレオチド（DNA）のためのコ
ドン配列を推定することができる。このコドン配列を鋳
型として用い二本鎖DNAを公知の技術を用いて合成し、
ベクターDNA或いは大腸菌（E.Coli）プラスミドなどの
クローニングビヒクル中に挿入することができる。適当
な宿主、例えば、大腸菌などの微生物或いは、例えば、
その他の組換えベクターを有する細胞系の形質転換によ
り所望のオリゴペプチドの表現を得る手段が得られる。
ヒトの遺伝子がｖ−oncと異なる場合、例えば、ヒトｃ
−rasの場合は、上記技術は遺伝子、mRNA或いは偽遺伝
子を単離し、ヒト表現生成物に対する抗体を得るために
使用することができる。ヒトの腫瘍遺伝子は関連するｖ
−oncに実質的な相補性を有するものと思われ、通常塩
基の相違が約５％未満であり、一般的に表現生成物中の
アミノ酸の相違が５％未満である。
これらの抗体は各種方法により使用することができる。
特に、それらは診断のために使用することができる。悪
性が存在する時にのみ高濃度で抗原が生理学的流体中に
見出される場合においては、血清、血漿、全血液或いは
脳脊髄液などの生理学的流体を検定することができる。
検定に使用される抗体は標識化されたものでも、されな
いものでもよい。未標識化抗体は凝集反応において使用
することができる。標識化抗体は各種検定法において、
各種ラベル、例えば、放射性核種、酵素、螢光物質、酵
素基質或いはコフアクター（cofactors）などを用いて
使用することができる。これらの技術は文献に十分に記
載されており、具体的検定法は米国特許第3,817,834
号、同第3,935,074号、同第4.233,402号及び同第4.318,
980号各明細書に例示されている。
ある技術においては、抗体よりもむしろ抗原或いはその
断片にラベルを付し、ラベルを付した抗原と試料中の抗
原との間に抗体に対する競争をさせることが有用な場合
がある。この状況においては、最適の感度及び精度を与
える量での標識化抗原或いは標識化断片と抗体との組合
わせを有するキツトを提供することが通常行われてい
る。
その他の状況において、抗原或いは抗体のいずれかが結
合されている固体支持体を有することが望ましい。多抗
原決定基性抗原は検定媒体内において支持体に結合した
抗体と標識化抗体との間のブリツジとしての役割をはた
し得る。或いは又限られた量の抗体に対する標識化抗原
と試料中の任意の抗原間の競争を有することも可能であ
る。
抗原が生理学的流体内にない場合、或いはあつても悪性
を診断することができない場合には、細胞を単離して細
胞についてメツセンジヤーRNA或いは抗原の存在を検定
しなければならない。メツセンジヤーRNAの検出方法に
ついては既に説明した。抗原を検出するためには組織試
料を通常の方法、例えば、塩基、洗剤、などを用いて溶
解し、細胞の残渣を過或いは遠心分離により分離し、
液或いは上澄液を単離して検定すればよい。
治療目的のために、治療の性質及び外来抗体が免疫応答
を誘発するかどうかに応じて異形発生的（xenogeneic）
或いは異質遺伝子的（allogeneic）抗体のいずれかを使
用することができる。文献にはヒト抗体を作成する多く
の方法が記載されており、それらにおいてはマウスその
他の哺乳動物の抗体は満足できないものであることが判
明されている。これらの抗体は各種方法において使用す
ることができる。適当なIgG（IgG1以外）を使用するこ
とにより、自然相補過程により溶解を誘発することがで
きる。或いは又、毒素の溶解部分を抗体、特に、Fab断
片に連結することができる。これらの抗体をリポソーム
に結合し、リポソームを悪性細胞に指向け、膜を合体す
ることにより細胞に取り入れられるようにすることもで
きる。その他のラベル、例えば、放射線核種、螢光物
質、酵素なども又抗体に結合することができる。抗体を
生体内に導入すれば、抗体はラベルを悪性細胞に指向
け、これによつて悪性の存在を診断或いは治療すること
ができる。
抗体の配合はラベルの性質、抗体の目的、抗体が指向け
られる箇所などに応じて広範に変化する。通常、抗体は
生理学的に許容可能な担体、例えば、塩水或いはリン酸
緩衝塩水中に配合され、宿主中に、可能である場合には
所望の箇所に注射し、これが不可能な場合には血液のよ
うな循環系統中に注射される。
本発明に従つて得られる抗体は又、腫瘍遺伝子を表現す
る細胞を単離するために、及び腫瘍遺伝子を表現する細
胞を含有する不均一細胞群からin vitroでその細胞を取
り出すために使用することも可能である。分離は螢光活
性化細胞分類機（FACS）を用いて達成することができ
る。この同一の技術を用いて腫瘍遺伝子を表現する細胞
を同定及び単離することができる。細胞の混合物から腫
瘍遺伝子を表現する細胞を取り出すために本発明の抗体
を補体と結合し、毒素の溶解断片（Ａ断片）に結合し
（E.P.O.出願第17,507号明細書及び英国特許第2,034,32
4号明細書参照）或いは細胞を凝集し、物理的手段によ
り分離してもよい。
以下の具体例は例示を目的として提示されるものであ
り、本発明を限定するものではない。
腫瘍は切除時に新鮮な外科標本から得られたもので、化
学療法或いは放射線療法による未治療のものであつた。
生育可能な腫瘍のみを得、該組織をメツセンジヤーRNA
（mRNA）の劣化を避けるためになるべく迅速に加工する
努力がなされた。標本はすみやかに冷凍され、RNAに加
工されるまで液体窒素中で貯蔵された。外科標本が広範
囲の正常組織部分を含む場合には、その一部をｃ−onc
遺伝子表現の水準の内部コントロールとして分析用に取
り出した。ｃ−onc遺伝子表現は次いで同一患者からの
正常及び悪性組織において比較することができた。細胞
当り３キロ塩基（kb）のほぼ一つのRNA転写、即ち、フ
イルターに適用されたほぼ２マイクログラムのポリA RN
Aに等価の20pg程度の少量のMaloneyネズミ肉腫ウイルス
をこの方法〔Kafatos等Nucleic Acids Res.（1979）7:1
541〕で検出することができた。未関連のRNAのものを含
む適当な対照を使用することにより、ポリＡ−陰性画分
RNA、プラスミドDNA、及びマウス及びヒトDNA、偽−陰
性並びに偽−陽性結果を合理的に排除することができ
た。ドツト・ブロツト（dot blots）はソフトレーザー
走査濃度計を用いて定量的に評価した。十分な材料が利
用可能な場合には、mRNAは更にノーザン（Northern）分
析により特性化付けし、特異的転写の存在を確認し、そ
の大きさを測定した〔Thomas,PNAS USA（1980）77:520
1〕。
14の腫瘍における13の細胞腫瘍遺伝子の表現をDNA−RNA
ハイブリツド化技術により調べた。これらのデータを表
２にまとめて示す。
次の３つのパターンが観察された:1）全て或いは殆んど
全ての腫瘍試料における特異的ｃ−onc mRNA配列の表現
（例、ｃ−myc）;2）散発性腫瘍におけるｃ−onc表現の
検出（例、ｃ−fes）；及び３）検出可能な表現のない
もの（例、ｃ−mos）。
ｃ−erb、ｃ−yes、ｃ−abl、ｃ−mos、ｃ−fms或いは
ｃ−sisに相応するmRNA配列の有意な表現を検出するこ
とができなかつた。これらの全てのプローブの相応物を
ヒトゲノムのDNA中において検出することは可能である
ので、これは、ウイルス遺伝子プローブとヒトメツセン
ジヤーRNA間の相同関係の欠乏の結果によるものではな
い。顕微鏡的に正常な組織からのRNAはこの分析による
検出可能な転写物を全く含有していなかった。
４つの細胞腫瘍遺伝子は各種ヒト腫瘍において首尾一貫
した表現パターンを示した。これらはｃ−myc、ｃ−fo
s、ｃ−rasHa、及びｃ−rasKiであつた。ハイブリツド
化の強さについて比較を行つたが、これは全てのプロー
ブがほぼ同一の特異活性に標識化されていたために可能
であつた。ｕ−myc及びｖ−fosはヒトの腫瘍RNAのもの
に対して最も高いハイブリツド化強度を示し、細胞当り
の多数のmRNAのコピーを示唆した。これらの両者の遺伝
子の表現は試験された全ての悪性において観察された。
ｃ−rasHa、及びｃ−rasKi配列も殆んどのヒト腫瘍にお
いて検出されたがそのハイブリツド化の強度はより弱い
ものであつた。
ｃ−fesに関連したメツセンジヤーRNA配列は試験された
14の腫瘍のうち２つのみに検出された。これらのいずれ
も肺癌であつた。
ｃ−myb表現は14の腫瘍のうち１つのみに検出された。
これも又肺癌であつた。
ｃ−srcメツセンジヤーRNA配列はリンパ肉腫を有する患
者の循環腫瘍細胞にのみ観察された。
細胞の腫瘍遺伝子配列の表現が腫瘍新生に関連するか否
かを試験するために同一患者の同一部位から同時に大体
正常に見える組織及び明らかに悪性の組織の両者を得る
努力がなされた。次いで、腫瘍からのRNA試料及び隣接
の非罹患組織からのRNA試料についてハイブリツド化研
究を行つた。14人の患者のうち６人についてこの分析を
行うことが可能であつた。これらの６つのケースの１つ
において正常と推定された組織は引続き組織構造分析に
よつて腫瘍によりじりじり入り込まれていることが示さ
れた。残りの５つのケースのうち４つにおいて腫瘍及び
正常組織間に異つた表現が見られ、正常な組織において
は低い或いは検出不可能な程度の表現が見られるのに対
し、悪性においては、高い程度の表現が見られた。３つ
の腎臓細胞癌及び１つの結腸癌がこの現象を示した。
細胞からのRNAのブロツト分析は、腫瘍試料及び対照試
料の領域において、腫瘍及びｃ−onc遺伝子表現の存在
或いは不存在間の相関関係を示した。１つの腫瘍、即
ち、小腸の腺癌においてｃ−onc関連配列が組織学的に
正常な隣接組織に見出された。
腫瘍及び対照組織からのポリA RNAの分析は、ノーザン
技術により行われた。4.0及び2.0kbの２つのｃ−myc関
連転写物は全ての検査された腫瘍に見出された。これら
の転写物の他に、これらのハイブリツド化分析におい
て、メツセンジヤーRNAのあるものの明らかな劣化があ
つたが、おそらくは組織の外科的取り出し後の期間にお
ける組織の酸素欠乏の際に起こつた劣化の結果によるも
のと思われる。
上記操作を用いて新鮮な外科標本から得られた幾つかの
その他の腫瘍の型についてｃ−onc遺伝子表現を調べ
た。この一連の試験において、９個の腫瘍における10個
の異つた細胞の腫瘍遺伝子の表現を探すためにDNA−RNA
ハイブリツド化を使用した。得られたデータを下記の表
３に示す。
表３の結果は、細胞の腫瘍遺伝子ｃ−myc、ｃ−fos、ｃ
−rasHa、及びｃ−rasKiが調べられた追加の腫瘍型にお
いて首尾一貫した表現のパターンを示す点において前に
表２において報告された結果とかなり十分な相関関係を
示すものである。更に、いくつかの追加の腫瘍型におい
てｃ−myb、ｃ−src及びｃ−fesも又検出されたのに対
し、調べられた追加の腫瘍型のいずれにもｃ−rel、ｃ
−abl、及びｃ−sis表現は観察されなかつた。興味ある
ことに、探索された細胞の腫瘍遺伝子のいずれもが評価
された単一の子宮癌においていかなる有意量においても
表現されていなかつた。
悪性細胞に高い量にて存在することが示されたメツセン
ジヤーRNAが胚形成に関与する遺伝子と関連するか否か
を決定するために一般的に次の様な実験が行われた。全
RNAはランダムに受精させたスイスマウスの胚／胎児か
ら妊娠の６日目（性交プラグの日を出生前発育の０日と
した）から毎日の間隔で単離した。出生前発育の10日目
より開始して胚そのものを胚外膜及び胎盤から分離し
た。10日目前の小径のものは分離を妨げ、従つて６〜９
日目の胚は子宮壁から切断された全受胎産物を表わす。
ポリ（Ａ）−含有RNA〔ポリ（A+）RNA〕のアリコートを
アフイニテイクロマトグラフイーによりオリゴ（dT）−
セルロースカラム上に単離し、ニトロセルロース紙上に
スポツトを付した（ドツトブロツト）（KafatosらのNuc
l.Acids Res.（1979）7:1541〜1552）。これらの試料を
〔32P〕−標識化され、分子的にクローン化された腫瘍
遺伝子−特異性プローブにハイブリツド化させた。
ドツト・ブロツトはソフトレーザー走査濃度計により定
量的に評価した。ｃ−oncの転写活性は更により詳細
に、新生及び10日目のマウスの各種組織において追加研
究された。アガロースゲル電気泳動後にニトロセルロー
ス紙上におけるブロツテイング（Northern blotting）
（Thomas、PNAS USA（1980）77:5201〜5205）を用いて
ドツト・ブロツト分析により得られた結果を確認し、更
に、異つたｃ−onc関連転写物の大きさを決定した。
より具体的には、RNAはグアニジンチオシアネート法を
用いて各種発育段階のスイス−ウエブスター（Swiss−W
ebster）マウスの胚胎児から単離された。（Cox.Method
s Enzymol（1967）12:120−129;AdamsらのPNAS USA（19
80）74:3399−3043）。
上記の如く、６〜９日目のスイス−ウエブスターマウス
の胚は、全ての胚外組織、例えば膜及びより後期の発育
段階において胎盤を発生させる細胞など、を含む全受胎
産物を表わすものである。全てのより遅い段階において
は、胚そのものが胚外組織なしに切断された。RNAの
（ポリ（A+）−RNAの選択はオリゴ（dT）セルロースカ
ラム上の１サイクルのクロマトグラフにより行われた
（Aviv and Ledar、RNAS USA（1972）69:1408−141
2）。（ポリ（A+）RNAを水に溶解し、沸騰し、氷上で迅
速に冷却し、3ug（1.5ul）を予め20×SSC（１×SSCは0.
15NaCl、0.015Mクエン酸ナトリウム）で平衡化されたニ
トロセルロース紙に適用し、風乾した。80℃で一昼夜焼
いた後、これらのブロツトを、45℃において少なくとも
４時間、0.75M NaCl、0.05Mリン酸ナトリウム（pH7.
5）、0.005M EDTA、0.2％SDS、10mgのグリシン/ml、５
×デンハルト（Denhardt）の試薬（１×デンハルト試薬
は各々0.02％のフイコル、ウシ血清アルブミン及びポリ
ビニルピロリドンである）、0.25mgの変性ニシンDNA/ml
及び50％ホルムアミドを含有する緩衝液中において前ハ
イブリツド化した。
これらのブロツトを、45℃において約20時間１×106cpm
のニツク−翻訳プローブ/mlハイブリツド化緩衝液（デ
ンハルト試薬を１×で用いた前ハイブリツド化緩衝液）
を用いてハイブリツド化した。調製アガロースゲル電気
泳動によりベクター配列から精製されたクローン化腫瘍
遺伝子断片を〔32P〕−dCTP（3200Ci/mmol）の存在下に
１〜２×109cpm/ugのDNAの特別の放射活性にまでニツク
−翻訳した（RigbyらのJ.Mol.Biol.（1977）113:237−2
51）。ハイブリツド化後、ブロツトを３回１×SSC中で5
0℃において全部で合計約２時間洗浄し、補力スクリー
ンを有する前閃光されたＸ−線フイルムに−70℃におい
て72時間曝露した。
上記操作を用いて、多くの公知の腫瘍遺伝子のスクリー
ニングを行い、それらが胚に表現されるか否かを決定し
た。次の表は個々の腫瘍遺伝子及びそれらの胚細胞にお
ける表現に関する観察事項を示す。
比較的高割合のｃ−fos関連配列が胚そのもの及び胚外
組織を含有する６、７、８及び９日目の受精産物から調
製された（ポリ（A+）−RNA中に検出された。胚外組織
から切断された後の発育段階の胚には10倍よりも低いfo
s表現が観察された。10〜18日目からの胎盤及び胎児の
胚外膜からのデータは、表現は主としてそれらの組織に
あることを示した。出生後の組織においては、検討され
た全ての組織においてｃ−fos表現を観察することがで
き、骨からのfos−特異性プローブに特に強いハイブリ
ツド化が見られた。
ハイブリツド化はｃ−ablについて６、７及び９日目の
受胎産物中に見られる濃度に対比して妊娠10日目におい
て胚外膜および胎盤よりも胚そのものにおいて約３倍よ
り高い割合が見られることを示した。ｃ−ablの胎児に
おける表現は、出生前発育の11日目後に減少するように
思われる。腫瘍遺伝子ｃ−ablは脾臓を用いて調べられ
た全ての出生後のマウス組織において転写活性を有し、
胸腺の（ポリ（A+）−RNAはその他の組織からのものよ
りも僅かにより強いハイブリツド化を示す。
腫瘍遺伝子ｃ−rasHaは胚そのもの並びに胚外組織の両
者において相当な割合で、しかし出生前の発育の全ての
段階において同程度で表現されることが判明した。新生
或いは10日目のマウスの各種組織特に骨、脳、腎臓、皮
膚及び脾臓において高割合のｃ−rasHaの表現が見られ
た。
腫瘍遺伝子ｃ−mycは７日目及び８日目に検出可能であ
つたが、後の胚発育（17日及び18日）において、はるか
に高い割合が観察された。
腫瘍遺伝子ｃ−erbは13日目に最高ハイブリツド化を有
したが、６日目には全くハイブリツド化が観察されなか
つた。
腫瘍遺伝子ｃ−srcはマウスの胚発育の後半において最
高に検出され、増加が14日目に始まり15日目にピークに
達し、その後次第に減少した。腫瘍遺伝子ｃ−sisにつ
いては、ピーク表現は７日目及び16日目に見られ、７日
目のピークはその他の全ての日よりも1.5〜３倍であ
り、16日目のピークは９〜13日及び17日及び18日目より
も1.5〜２倍高かつた。
次の研究においては、鳥類の骨髄芽球症ウイルスmybの
推定された腫瘍遺伝子領域のヌクレオチド配列が使用さ
れた〔前記Visterらのもの（1982）〕。刊行されたヌク
レオチド配列を用い、幾つかの抗原性オリゴペプチド配
列を導き、その様にして導いた７個のポリペプチドを合
成し、潜在的に抗原性であることを評価した。これらの
７つのオリゴペプチドは本発明による抗原性オリゴペプ
チドとして既に前記リストに示したものであるが、次の
式を有するものである。
（１） pro−phe−his−lys−asp−gln−thr−phe−gl
u−tyr−arg−lys−met （２） pro−ser−pro−pro−val−asp−his−gly−cy
s−leu−pro−glu−glu−ser−ala−ser−pro−ala−ar
g （３） asp−asn−thr−arg−thr−ser−gly−asp−as
n−ala−pro−val−ser−cys−leu−gly−glu （４） pro−gln−glu−ser−ser−lys−ala−gly−pr
o−pro−ser−gly−thr−thr−gly （５） met−ala−phe−ala−his−asn−pro−pro−al
a−gly−pro−leu−pro−gly−ala （６） pro−pro−val−asp−his−gly−cys−leu−pr
o−glu−glu−ser−ala−ser−pro−ala （７） pro−phe−his−lys−asp−gln−thr−phe−th
r−glu−tyr−arg−lys−met−his−gly−gly−ala−va
l これらのポリペプチドは常法に従つて〔Dockray、Regul
atory Peptides（1980）1:169〕キーホール笠貝（keyho
le limpet）のヘモシアニンに結合し、得られた免疫原
に使用して、完全フロイントアジユバントとともに最初
の注射においてウサギを免疫化し、引続いて不完全フロ
イントアジユバントを用いた注射により３〜４週間に亘
つてウサギを超免疫化させた。ウサギを６ケ月間に亘り
繰返し採血した。抗体の産生の結果得られた７つのオリ
ゴペプチドのうち２つのペプチド（５及び７）に対する
抗体を更に詳細な分析のために選択した。これらの抗体
は鳥類の骨髄芽球症ウイルスの多数のコピーを含有する
細胞系からの放射線活性標識を付された細胞リゼイト及
び適当な非感染細胞系からのリゼイトと反応させた。抗
体No.5はウイルス感染細胞系には存在するが対照例には
存在しない約58,000ダルトンの特別の蛋白質である。
ポリペプチド５に対する抗体は、又、amvにより誘発さ
れた腫瘍を有するニワトリの血漿と反応させた。上記リ
ゼイトで見られたものと同様な約48,000ダルトンのバン
ドが同定された。
ポリペプチドNo.5に対する抗血清は、又、Ｃ−myb遺伝
子のメツセンジヤーRNA転写物を表現することが知られ
ている（Gallo及びWong−Staal、Blood（1982）60:54
5）骨髄性ヒト白血病細胞系（HL−60）のリゼイトと反
応させた。この抗体は約9000ダルトンの蛋白質と反応し
た。新らたに単離された骨髄性白血病細胞においてこの
抗体は正常の白血球には存在しない14kd〜70kdの一連の
蛋白質を固定する。
myb蛋白質の断片No.5に対するポリクローナル抗体につ
いてその正常細胞及び白血病細胞を殺す能力の試験を行
つた。使用された方法は以下に示すTerasaki及びMcClel
landの文献に記載されている。データを次表に示す。
上記結果はmyb遺伝子の表現生成物は抗体と反応して補
体との溶解をもたらすことができることを示す。この様
にmyb蛋白質は抗体との結合に利用可能な表面膜蛋白質
であるように思われる。特異的抗体が結合し、悪性を表
示する診断価値を有する蛋白質を同定することにより、
悪性細胞を同定し、処理することができる。この実験に
おいて、用いた抗体の特異性或いは交差反応性について
は何等の測定も行われなかつた。抗体の調製には断片の
みを用いたに過ぎないので、より大きな結合特異性及び
結合活性を有する抗体を全蛋白質、特に膜内の全蛋白質
を用いて調製することが可能であると期待できるであろ
う。この対象抗体を使用して同一或いはその他の決定基
部位に結合する抗体を選択することが可能である。
上記データは、正常のＢ−及びＴ−細胞に影響を及ぼさ
ず、補体と組合わされて各種悪性細胞に対して細胞毒性
を示す抗体を調製することが可能であることを示してい
る。従つて、この抗体は癌の治療に免疫系を実質的に不
活性化する危険を有することなく使用することができ
る。
上記結果より、腫瘍遺伝子の転写及び／又は表現生成物
を測定することによりヒト宿主中の悪性の存在を検出す
ることが可能である。脊椎動物を悪性に形質転換するレ
トロウイルス類又はその他の核酸源のスクリーニングを
行うことができる。次いで、これらの核酸を用いてペプ
チド組成を推定し、転写物或いはペプチド類に対する悪
性細胞をスクリーニングすることができ、前者の場合は
ハイブリツド化により後者の場合は適当な受容体を用い
て行うことが可能であるが、各種診断検定法の任意のも
のを使用することができる。これらのペプチド類に対し
て抗体を製造することができ、この抗体はラベルを付さ
れた後悪性の症状を示すペプチドの存在を診断するため
に使用することができる。この腫瘍形成性蛋白質は表面
膜蛋白質としての抗体に結合するために利用可能である
ことが判明した。この抗体は悪性の存在の測定及び悪性
細胞の位置の測定の診断試薬として役立ち得る。この抗
体は又、放射性核種、毒素を宿主補体系或いはオプソニ
ン類、或いはその他の抗体依存性溶解系統などと組合わ
せて用いることによりin vivoでの腫瘍の治療に役立ち
得る。この抗体は前及び後手術系においても用途を有
し、後者においては完全な除去が行われたか或いは転移
が存在するかを測定するのに使用することができる。こ
れらの抗体を手術後に用いて切除されなかつたかもしれ
ない腫瘍の残りを破壊することが可能である。
以上、本発明の理解を明らかにする目的のために具体例
についてより詳細に説明したが、特許請求の範囲内にお
いて変更及び修正を行うことが可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｎａｔｕｒｅ （Ｌｏｎｄｏｎ），297 （5866）， Ｐ．474−478，1982 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，41（９）Ｐｔ. １， Ｐ．3597−3603，1981

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ヒト宿主中の細胞の悪性の確率を評価する
    方法において、（１）細胞生成物に対して特異的なプロ
    ーブ（但し、該細胞生成物はmRNA或いはその表現生成物
    であり、該mRNAは正常細胞を悪性に形質転換することの
    あるレトロウイルスのDNA配列或いは該DNA配列に対応す
    る腫瘍遺伝子に相補的である）、及び（２）細胞生成物
    を含有すると疑われた該ヒト宿主からの試料源を密接に
    合体させ、そして細胞悪性の存在を示すものとしての該
    プローブの該細胞生成物に対する結合程度を測定する
    （但し、該結合程度は、正常細胞源における該プローブ
    の結合とは異なる）ことを特徴とするヒト宿主中の細胞
    の悪性の確率を評価する方法。
  2. 【請求項２】該試料源が該ヒト宿主からの細胞である、
    特許請求の範囲第１項記載の方法。
  3. 【請求項３】該試料源が該ヒト宿主からの生理学的流体
    である、特許請求の範囲第１項記載の方法。
  4. 【請求項４】該DNA配列がレトロウイルスである、特許
    請求の範囲第１項記載の方法。
  5. 【請求項５】該DNA配列が腫瘍遺伝子である、特許請求
    の範囲第１項記載の方法。
  6. 【請求項６】該DNA配列が腫瘍遺伝子src、fbs、yes、fo
    s、myc、erb、myb、rel、mos、bas、abl、ras、fes、fm
    s、及びsisよりなる群から選ばれる、特許請求の範囲第
    １項記載の方法。
  7. 【請求項７】該プローブが抗体である、特許請求の範囲
    第１項乃至第６項のいずれか一項に記載の方法。
  8. 【請求項８】該抗体が検知可能な信号を与えることので
    きるラベルで標識化されている、特許請求の範囲第７項
    記載の方法。
  9. 【請求項９】該プローブが該mRNAに相補的な少なくとも
    14個の塩基のポリヌクレオチドである、特許請求の範囲
    第１項乃至第６項のいずれか一項に記載の方法。
  10. 【請求項１０】腫瘍遺伝子mybに特異的な抗体よりなる
    プローブと白血病を有することが疑われたヒト宿主から
    の血球よりなる細胞生成物とを合体し、そして白血病宿
    主の症状を示すものとしての該抗体の該宿主血球への結
    合程度を測定し、ヒト宿主中の白血病の確率を評価す
    る、特許請求の範囲第１項記載の方法。
  11. 【請求項１１】該抗体がmyb蛋白質の立体配置の一部を
    模倣するオリゴペプチドに対応して産生されたものであ
    る、特許請求の範囲第10項記載の方法。
  12. 【請求項１２】該プローブが、ヒト腫瘍遺伝子ｃ−my
    c、ｃ−fos、ｃ−rasHa、ｃ−rasKi、ｃ−fes、ｃ−my
    b、及びｃ−srcの表現生成物に対して特異的な抗体であ
    る、特許請求の範囲第１項記載の方法。
  13. 【請求項１３】該抗体が検知可能な信号を与えることの
    できるラベルで標識化されている、特許請求の範囲第12
    項記載の方法。
  14. 【請求項１４】該抗体が細胞毒試薬で標識化されてい
    る、特許請求の範囲第12項記載の方法。
  15. 【請求項１５】細胞生成物が、下記の群から選ばれた抗
    原性オリゴペプチドである、特許請求の範囲第１項記載
    の方法： （ａ） pro−gln−glu−ser−ser−lys−ala−gly−pr
    o−pro−ser−gly−thy−thr−gly, （ｂ） met−ala−phe−ala−his−asn−pro−pro−al
    a−gly−pro−leu−pro−gly−ala, （ｃ） pro−pro−val−asp−his−gly−cys−leu−pr
    o−glu−glu−ser−ala−ser−pro−ala, （ｄ） pro−phe−his−lys−asp−gln−thr−phe−th
    r−glu−tyr−arg−lys−met−his−gly−gly−ala−va
    l, （ｅ） pro−phe−his−lys−asp−gln−thr−phe−th
    r−glu−tyr−arg−lys−met, （ｆ） asp−asn−thr−arg−thr−ser−gly−asp−as
    n−ala−pro−val−ser−cys−leu−gly−glu, （ｇ） pro−ser−pro−pro−val−asp−his−gly−cy
    s−leu−pro−glu−glu−ser−ala−ser−pro−ala−ar
    g, （ｈ） arg−leu−ileu−glu−asp−asn−glu−tyr−t
    hr−ala−arg−gln−gly−ala−lys−phe−pro, （ｉ） asn−arg−glu−val−leu−asp−gln−val−gl
    u−arg−gly−tyr−arg−met−pro, （ｊ） arg−leu−lys−lys−ileu−ser−lys−glu−g
    lu−lys−thr−pro−gly−cys−val−lys−ileu−lys−
    lys, （ｋ） asp−leu−pro−ser−arg−thr−val−asp−th
    r−lys−gln−ala−gln−glu−leu−ala−arg, （ｌ） met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−gl
    y−ala−ser−gly−val−gly−lys−ser−ala, （ｍ） glu−asp−ileu−his−gln−tyr−arg−glu−g
    ln−ileu−lys−arg−val−lys−asp−ser−asp−asp, （ｎ） val−arg−glu−ileu−arg−gln−his−lys−l
    eu−arg−lys−leu−asn−pro−pro−asp−glu−ser−g
    ly−pro, （ｏ） met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−va
    l−gly−ala−arg−gly−val−gly−lys−ser−ala, （ｐ） met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−va
    l−gly−ala−val−gly−val−gly−lys−ser−ala, （ｑ） met−thr−glu−tyr−lys−leu−val−val−va
    l−gly−ala−gly−gly−val−gly−lys−ser−ala, （ｒ） val−asp−glu−tyr−asp−pro−thr−ileu−g
    lu−asp−ser−tyr−arg−lys−gln−val, （ｓ） arg−his−ser−thr−ser−ser−ser−glu−gl
    n−glu−arg−glu−gly−gly−arg, （ｔ） ser−arg−glu−ala−ala−asp−gly, （ｕ） asn−gln−gln−thr−arg−glu−phe−val−gl
    u−lys−gly−gly−arg, （ｖ） pro−glu−val−gln−lys−pro−leu−his−gl
    u−gln, （ｗ） phe−leu−arg−thr−glu−gly−ala−ala−al
    a−asp−glu−asp−ala−ala−ala, （ｘ） phe−leu−arg−thr−glu−gly−ala−arg−le
    u−arg−met−lys−thr−leu−leu, （ｙ） ser−ala−pro−arg−ser−ser−pro−ser−th
    r−ser−ser−trp−ser−ser, （ｚ） asp−gln−gln−arg−leu−gly−arg−arg−th
    r−arg−arg−arg−val−arg−lys, （aa） glu−arg−gln−gl−ala−glu−arg−his−asn
    −val−leu−glu−arg−gln−arg−arg−asn−glu, （bb） arg−leu−ileu−ala−glu−lys−glu−gln−l
    eu−arg−arg−arg−arg−glu−gln, （cc） arg−lys−lys−asn−lys−lys−lys−ser−gl
    u−glu−ileu−asp, （dd） pro−pro−thr−thr−ser−ser−asp−ser−gl
    u−glu−glu−gln−glu, （ee） arg−thr−leu−asp−ser−glu−glu−asn−as
    p−lys−arg−arg, （ff） glu−arg−gln−arg−arg−asn−glu−leu−ly
    s−leu−arg, （gg） glu−gln−leu−arg−arg−arg−arg−glu−gl
    n−leu−lys, （hh） asn−asn−glu−lys−ala−pro−lys−val−va
    l, （ii） arg−arg−glu−gln−leu−lys−his, （jj） lys−glu−lys−glu−lys−leu−glu−phe−il
    eu−leu, （kk） pro−glu−glu−glu−glu−lys−arg−arg−il
    eu−arg−arg−glu−arg, （ll） leu−gln−glu−ser−ser−lys−ala−ser−gl
    n−pro−ala−val−ala−thr−ser, （mm） asn−pro−glu−val−lys−lys−thr−ser−tr
    p−thr−glu−glu−glu−asp−arg, （nn） try−arg−arg−asp−pro−glu−glu−arg−pr
    o−thr,および （oo） ala−ser−pro−tyr−pro−asn−leu−ser−as
    n−gln−thr−arg.
  16. 【請求項１６】該プローブが、特許請求の範囲第15項記
    載の抗原性オリゴペプチドに対して産生された抗体であ
    る、特許請求の範囲第１項記載の方法。
  17. 【請求項１７】該抗体が検知可能な信号を与えることの
    できるラベルで標識化されている、特許請求の範囲第16
    項記載の方法。
  18. 【請求項１８】該抗体が細胞毒試薬で標識化されてい
    る、特許請求の範囲第16項記載の方法。
  19. 【請求項１９】細胞生成物が、特許請求の範囲第15項の
    アミノ酸配列を１以上含有する約50個までのアミノ酸残
    基よりなる抗原性オリゴペプチドである、特許請求の範
    囲第１項記載の方法。
  20. 【請求項２０】細胞生成物が約25個までのアミノ酸残基
    を含有する抗原性オリゴペプチドである、特許請求の範
    囲第19項記載の方法。
  21. 【請求項２１】該プローブが、悪性細胞を有する疑いの
    あるヒト宿主治療用の、正常細胞内に悪性を誘発するこ
    とのできるレトロウイルスゲノムの一部である遺伝子、
    或いは該レトロウイルスゲノムの該遺伝子に対して実質
    的に相補的である遺伝子の表現生成物に対する抗体であ
    る、特許請求の範囲第１項記載の方法。
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