JPH0733660A

JPH0733660A - 脂質代謝改善剤

Info

Publication number: JPH0733660A
Application number: JP5182964A
Authority: JP
Inventors: Sumio Matsuno; 純男松野; Masaki Aida; 真貴合田; Hajime Ebisu; 一戎; Norifumi Nakamura; 憲史中村
Original assignee: Green Cross Corp Japan; Green Cross Corp Korea
Current assignee: Tanabe Pharma Corp; GC Biopharma Corp
Priority date: 1993-07-23
Filing date: 1993-07-23
Publication date: 1995-02-03

Abstract

(57)【要約】【構成】一般式（Ｉ）：【化１】で表されるアミノピリジン誘導体の（＋）−対掌体、あ
るいはその酸付加塩を有効成分とする脂質代謝改善剤。【効果】短期間の連続投与で、強力なＴＧ、ならびに
ＴＧ−豊富なリポタンパク質低下作用を発揮し、且つ低
毒性である。従って、脂質代謝異常によって引き起こさ
れる疾患、例えば、高脂血症、虚血性心疾患、脳血管疾
患、粥状動脈硬化等の予防、治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アミノピリジン系化合
物の（＋）−対掌体、あるいはその酸付加塩の新規用
途、詳しくは、後述の特定構造を有するアミノピリジン
系化合物の（＋）−対掌体、あるいはその酸付加塩を有
効成分とする脂質代謝改善剤に関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】脂質は、
アポリポタンパク質と結合して、リポタンパク質となり
転送される。リポタンパク質は、その密度の違いによ
り、カイロミクロン、ＶＬＤＬ（超低比重リポタンパク
質）、ＬＤＬ（低比重リポタンパク質）、ＨＤＬ（高比
重リポタンパク質）などに分類され、それぞれの役目を
持って脂質の転送に働いている。中でもＬＤＬは、コレ
ステロールとリン脂質の組織への供給に、またＨＤＬは
これらを組織から除去するのに役立っているといわれて
いる。脂質代謝異常とは、これらのリポタンパク質の代
謝に異常をきたすことをいい、高脂血症、脳梗塞、動脈
硬化、虚血性の心臓病などが引き起こされる。中でも高
脂血症は近年、西欧型生活様式の普及に伴う食生活の変
化に伴い、大きな問題となっている。高脂血症は、血清
コレステロール、トリグリセリド（ＴＧ）のいずれか、
あるいは両方が増加した病態を指す。コレステロール、
ＴＧはタンパク質との複合体（リポタンパク質）として
血中に存在し、よって、カイロミクロン、ＶＬＤＬ、Ｌ
ＤＬ等のリポタンパク質の血中含量の上昇が、当病態の
一つの指標となっている。

【０００３】脂質代謝改善剤とは、血中脂質の低下作
用、具体的には、ＴＧ、ならびにＴＧ−豊富なリポタン
パク質（カイロミクロン、ＶＬＤＬ等）の低下作用を有
し、同時に、コレステロールプールと逆相関を示すＨＤ
Ｌ−Ｃ（高比重リポタンパク質コレステロール）を上昇
させて、脂質の代謝を円滑な状態にさせるものをいう。
脂質代謝異常の一病態である高脂血症には、イオン交換
樹脂、コレステロール合成阻害剤（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元
阻害剤）、プロブコール、クロフィブラート系製剤、ニ
コチン酸系製剤等が有効であることが知られており、こ
れらはいずれもＴＧ、カイロミクロン、ＶＬＤＬ、ＬＤ
Ｌの低下作用によるものである。

【０００４】今日、抗高血圧薬と脂質代謝との関係が注
目されている。抗高血圧薬とは、血管の緊張を緩和して
高血圧症の血圧を下降させる薬物を指すが、その機序に
より、降圧利尿薬、β遮断薬、α₁遮断薬、カルシウム
拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬に分類され
る。抗高血圧薬の中で、降圧利尿薬、β遮断薬は、脂質
代謝に悪影響を与えることが明らかにされている一方
[Glimm, R. H., 他：Am. J. Med., 87 (suppl 2A):56-6
3, 1986]、α₁遮断薬は、脂質代謝改善作用を有するこ
とが明らかにされている[Glimm, R. H.,他：Am. J. Me
d., 80 (suppl 2A): 62S-65S, 1989]。

【０００５】したがって、本発明の課題は、近年、高脂
血症、脳梗塞、動脈硬化、肥満、糖尿といった脂質代謝
異常により引き起こされる疾患が問題視される状況下、
抗高血圧薬と脂質代謝との関係に着目し、抗高血圧薬の
降圧作用以外の有用性として、優れた脂質代謝作用を有
するものを見出し、副作用のない脂質代謝改善剤として
提供することにある。

【０００６】ところで、後記アミノピリジン系化合物の
（＋）−対掌体は、カリウムイオンチャンネルオープナ
ーという機序に基づく循環器用剤、特に高血圧治療剤と
して有用であることを既に見出されている（特願平４−
３２７０１３号）。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、アミノピリジン系化合物の（＋）−対掌体に関し、
さらに研究を進めた結果、当該化合物は、血中脂質低下
作用、すなわち血中のトリグリセリド、カイロミクロ
ン、およびＶＬＤＬ低下作用を有しており、臨床上脂質
代謝改善剤として有用であることを見出して本発明を完
成した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明の脂質代
謝改善剤は、その有効成分が一般式（Ｉ）：

【０００９】

【化２】

【００１０】（式中、Ｒ¹およびＲ²は同一または異な
っていてもよく、それぞれ、水素、炭素数１〜６のアル
キル基またはアミノ基の保護基を、Ｒ³は水素または炭
素数１〜６のアルキル基を、ＺはＳまたはＮＣＮを、ｍ
は１または２を、およびｎは０または１を示す）で表さ
れるアミノピリジン誘導体の（＋）−対掌体〔以下、化
合物（Ｉ）ともいう〕、あるいはその酸付加塩を有効成
分とする脂質代謝改善剤に関する。

【００１１】本発明に使用されるアミノピリジン誘導体
の（＋）−対掌体、あるいはその酸付加塩は、強力な作
用発現を有し、しかも低毒性であるので、有効性、安全
性の極めて高いものである点に大きな特徴を有している

【００１２】一般式（Ｉ）において、Ｒ¹およびＲ²に
関して、炭素数１〜６のアルキルは直状または分枝状の
いずれでもよく、例えばメチル基、エチル基、プロピル
基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ｔ−ブチル基
等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、自体既知の
アミノ基の保護基、例えばアシル基（アセチル基、ホル
ミル基、ベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル基
等）、ベンジル基、フタルイミド基等が挙げられる。Ｒ
³に関して、炭素数１〜６のアルキル基は、Ｒ¹あるい
はＲ²のアルキル基同様直状または分枝状のいずれでも
よく、同じものが例示される。この明細書において
（＋）−対掌体とは、ナトリウムＤ線の線状に偏光され
ている光線の振動面を右に回転するエナンチオマーを意
味する。

【００１３】本発明の有効成分である化合物（Ｉ）の代
表的な合成方法を以下に示す。合成法（イ）

【００１４】

【化３】

【００１５】（式中、Ｒは、

【００１６】

【化４】

【００１７】で表される基を示し、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ
³は前記と同じ。）一般式（II）の化合物と一般式（III)の化合物を反応さ
せる。反応は通常、溶媒中で行われる。溶媒としては、
反応に悪影響を及ぼさないものであれば何れのものも使
用することができ、例えば、メタノール、エタノール等
のプロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒド
ロフラン、ジオキサン等のエーテル類、ジクロロメタ
ン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハ
ロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等
の芳香族炭化水素類、ピリジン、ピペリジン等の複素環
式化合物、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチル
スルホキシド等の非プロトン性極性溶媒等が例示され
る。化合物（III)の使用量は、化合物（II）に対して
０．９倍モル〜５倍モル程度、好ましくは等モル〜３倍
モル程度とするのがよい。この反応は、１０〜８０℃程
度、好ましくは室温程度（すなわち、１５〜２５℃程
度）の温度条件下に、１〜２００時間程度の反応時間で
行われる。化合物（III）は、例えば以下に示すように
M. L. Moore et al, Org. Synth.III 599(1955) 記載の
方法で調製することができる。

【００１８】

【化５】

【００１９】（式中、ＲおよびＲ³は前記と同じ。）出発化合物であるアミン誘導体（ＩＩＩａ）は、T. Pol
l et al, Tetrahedron．Lett., 30 5595(1989)に記載
されたカルボン酸誘導体を特開昭６３−２８７７９４号
公報に記載された方法またはこれに準じる方法にてアミ
ン誘導体に変換して得られる。

【００２０】合成法（ロ）

【００２１】

【化６】

【００２２】（式中、Ｒ、Ｒ¹およびＲ²は前記と同じ。）

【００２３】第一工程本反応の第一工程は、一般式（Ｉ−１）のチオウレア化
合物から一般式（ＩＶ）のカルボジイミド化合物を得る
反応である。この反応は、チオウレア化合物からカルボ
ジイミド化合物を合成する慣用の方法で行うことができ
る。例えば、チオウレア化合物と、例えば酸化水銀や酸
化鉛等の金属酸化物とを、必要に応じて硫黄の存在下で
反応させる方法、四塩化炭素およびトリエチルアミンの
存在下、チオウレア化合物とトリフェニルホスフィンと
を反応させる方法などにより行うことができる。反応
は、通常溶媒中で行われる。溶媒としては、反応に悪影
響を及ぼさないものであれば何れのものも使用すること
ができ、例えばジクロロメタン、ジクロロエタン、クロ
ロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類、エー
テル、ジオキサン等のエーテル類、ベンゼン、トルエ
ン、キシレン等の芳香族炭化水素類、エタノール等のア
ルコール類、ピリジン等が例示される。金属酸化物また
はトリフェニルホスフィンの使用量は、チオウレア化合
物（Ｉ−１）に対して当該試薬を０．９倍モル〜２倍モ
ル程度、好ましくは等モル〜１．２倍モル程度とするの
がよい。反応は、室温（１５〜２５℃程度）から溶媒の
沸点、好ましくは３０〜６０℃の温度条件下、１０〜１
００時間程度の反応時間で行われる。

【００２４】第二工程第二工程は、上記で得られたカルボジイミド化合物（Ｉ
Ｖ）にシアナミドを反応させて、一般式（Ｉ−２）の化
合物を得るものである。反応は、通常溶媒中で行われ
る。溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさないものであ
れば何れのものも使用することができ、例えばジクロロ
メタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等
のハロゲン化炭化水素類、エーテル、ジオキサン等のエ
ーテル類、エタノール等のアルコール類、ピリジン等が
例示される。シアナミドの使用量は、カルボジイミド化
合物（ＩＶ）に対して０．９倍モル〜２倍モル程度、好
ましくは等モル〜１．２倍モル程度とするのがよい。反
応は好ましくはジイソプロピルエチルアミン等の塩基性
物質の存在下に行われ、反応条件としては、１０〜３０
℃で１〜５０時間程度が例示される。

【００２５】合成法（ハ）

【００２６】

【化７】

【００２７】（式中、Ｚ、Ｒ、Ｒ¹およびＲ²は前記と同じ）

【００２８】第一工程本反応の第一工程は、一般式（II）の化合物と一般式
（Ｖ）の化合物を反応させて、一般式（VI）の化合物を
得るものである。反応は、通常溶媒中で行われる。溶媒
としては、反応に悪影響を及ぼさないものであれば何れ
のものも使用することができ、例えば合成法（イ）にお
いて記載される溶媒が例示され、特にピリジン、ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）、エタノール等の極性溶媒等
が好適に使用される。化合物（Ｖ）の使用量は、化合物
（II）に対して０．９倍モル〜５倍モル程度、好ましく
は等モル〜２倍モル程度とするのがよい。反応は、１０
〜８０℃程度、好ましくは室温程度（すなわち、１５〜
２５℃程度）の温度条件下に、１〜２００時間程度の反
応時間で行われる。

【００２９】第二工程第二工程は、上記で得られた一般式（VI) の化合物に一
般式（VII)の化合物を反応させて、一般式（Ｉ−１）ま
たは（Ｉ−２）の化合物を得るものである。反応は、溶
媒中または無溶媒中で行われる。溶媒を使用する場合、
使用される溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさないも
のであれば何れのものも使用することができ、例えばピ
リジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、エタノール
等の極性溶媒等が好適に使用される。化合物（VII)の使
用量は、化合物（VI）に対して０．９倍モル〜１０倍モ
ル程度、好ましくは等モル〜３倍モル程度とするのがよ
い。反応は、１０〜９０℃の温度条件下に、１〜１００
時間程度の反応時間で行われる。

【００３０】合成法（ニ）

【００３１】

【化８】

【００３２】（式中、Ｚ，Ｒ，Ｒ¹及びＲ²は前記と同じ）一般式（Ｉ−３）の化合物は、一般式（Ｉ−１）または
（Ｉ−２）の化合物を酸化反応に付することによって得
られる。酸化反応は、酸化剤の存在下に行われる。酸化
反応は、通常溶媒中で行われる。溶媒としては、反応に
悪影響を及ぼさないものであれば何れのものも使用する
ことができ、例えばジクロロメタン、ジクロロエタン、
クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類、
メタノール、エタノール等のアルコール類、ベンゼン、
トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、酢酸、プロ
ピオン酸等の脂肪酸類等が例示される。反応に使用され
る酸化剤としては、例えば、過酢酸、過安息香酸、ｍ−
クロロ過安息香酸等の過酸類、過酸化水素等が挙げられ
る。酸化剤の使用量は、化合物（Ｉ−１）または化合物
（Ｉ−２）に対して０．９倍モル〜２倍モル程度、好ま
しくは等モル〜１．２倍モル程度とするのがよい。反応
は、氷冷下〜加温下、好ましくは氷冷下〜室温程度（１
５〜２５℃程度）の温度条件下に、１〜１０時間程度の
反応時間で行われる。

【００３３】本発明における一般式（Ｉ）に関して、Ｒ
¹および／またはＲ²がアミノ基の保護基である化合物
は、自体既知の方法による脱保護反応に付することによ
って、Ｒ¹および／またはＲ²が水素である化合物とす
ることができる。当該保護基の脱離手段は、保護基の種
類によって異なり、具体的には酸（例えば、塩酸）によ
り処理する方法、ヒドラジンを使用するインゲマンス法
等から適宜選択すればよい。本発明の有効成分であるア
ミノピリジン系化合物の（＋）−対掌体は、上記合成法
（イ）〜（ニ）の他に、光学分割によっても製造でき
る。

【００３４】かくして製造される本発明の有効成分であ
る化合物（Ｉ）は、公知の分離精製手段、例えば濃縮、
抽出、クロマトグラフィー、再沈殿、再結晶等を適宜用
いることにより任意の純度のものとして採取できる。

【００３５】また、本発明の有効成分である化合物
（Ｉ）は塩基性基を有するので、公知の手段により酸付
加塩とすることもできる。かかる塩としては、薬理学的
に許容され得る無毒性のものであれば特に制限されず、
例えば、無機酸との塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸
塩、硫酸塩等）、有機酸との塩（酢酸塩、コハク酸塩、
マレイン酸塩、フマール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩
等）などが挙げられる。

【００３６】本発明の有効成分である化合物（Ｉ）およ
びその酸付加塩は、例えばマウス、ラット、ウサギ、イ
ヌ、ネコ、ヒト等の哺乳動物において、ＨＤＬ−Ｃ（高
比重リポタンパク質コレステロール）の増加を伴った、
顕著なＴＧ及びＴＧ−豊富なリポタンパク質であるカイ
ロミクロン、ＶＬＤＬの低下が認められる。また、その
作用機序のひとつとして血中ＬＰＬ（リポタンパク質リ
パーゼ）、Ｈ−ＴＧＬ（肝性トリグリセリドリパーゼ）
の活性亢進を示す。

【００３７】本発明の化合物（Ｉ）およびその酸付加塩
を有効成分とする脂質代謝改善剤は、薬理的に許容され
うる添加剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）等製薬
上必要な成分を適宜混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセ
ル剤、注射剤等の態様で医薬組成物とし、経口的または
非経口的に投与することができる。上記製剤中には本発
明の化合物（Ｉ）およびその酸付加塩はその有効量が配
合される。

【００３８】投与量は投与ルート、症状、患者の体重あ
るいは年齢等によっても異なるが、例えば、成人患者に
経口投与する場合は、０．０５〜５０mg／kg体重／日、
特に１〜２０mg／kg体重／日を１日１〜数回に分けて投
与するのが望ましい。また、静脈投与する場合は、０．
０５〜５mg／kg体重／日、特に０．１〜２mg／kg体重／
日を１日１〜数回に分けて投与するのが望ましい。

【００３９】

【実施例】以下、実験例、実施例、参考例を以て本発明
をさらに詳しく説明するが、これらの実施例、実験例は
本発明を限定するものではない。

【００４０】実験例１血中脂質改善作用１．実験動物１０から１１週令の雌性Obese Zucker rats を購入し
（チャールズ・リバー）、１週間以上予備飼育の後、実
験に供した。Obese Zucker ratは、常染色体劣性遺伝肥
満動物で高インシュリン血症や高ＴＧ血症を示す。

【００４１】２．供試薬剤後記参考例で得られる化合物（Ｉ）を用いた。また、降
圧薬のなかで臨床上比較的血中脂質改善作用を有すると
されているα₁遮断薬であるｐｒａｚｏｓｉｎを比較薬
剤として用いた。この時のｐｒａｚｏｓｉｎの投与量
は、ＳＨＲラットにおいて化合物（Ｉ）の５ｍｇ／ｋｇ
を経口投与した時と同程度の降圧作用を示す投与量（１
ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を設定した。尚、化合物（Ｉ）は
生理食塩水に溶解し、またｐｒａｚｏｓｉｎはジメチル
スルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解後、生理食塩水にて１
００倍希釈して使用した。

【００４２】３．測定項目血中脂質は、全コレステロール（ＴＣ）、血清リポタン
パク質分画〔カイロミクロン（Ｃｈｙ）、ＶＬＤＬ、Ｌ
ＤＬ〕、高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ
−Ｃ）について測定を行った。また、肝重量についても
測定を行い、各薬剤投与群と溶媒投与群とを比較した。

【００４３】４．実験方法溶媒に溶解させた薬物をラットあたり１０ｍｌ／ｋｇで
１日１回２週間連続経口投与した。最終投与後１６時間
絶食して摂食直後の急激なＴＧ豊富なリポタンパク質の
上昇を防ぎ、その後ラットを断頭致死せしめ、その放血
した血液を採取した。４℃、２時間以上の放置によって
血液を凝固させた後、１５００ｇ、１５分間、４℃にて
遠心分離を行い、血清を分離した。各血清中のＴＣは酵
素法 [吉峯徳，葛谷文男，加藤庄志、藤田勝成；動脈硬
化 8, 737-743 (1981)] 、ＴＧはＦｏｓｓａｔｉらの方
法 [Fossati P, Prencipe L; Clin. Chem. 28, 2077-20
80(1982)]、血清リポタンパク質分画はヘパリン−Ｃａ
比濁度法 [Burstein M, Scholnick HR ; Avanses in Li
pid Research, Vol.11 ed, New York: Academic Press,
p.81-83 (1973)]、ＨＤＬ−Ｃは沈降法 [Burstein M e
t al. ; J. Lipid Res. 11, 583 (1970)] にて測定し
た。また、肝臓を摘出し、その重量測定も行った。

【００４４】５．結果 (i) ＴＣ化合物（Ｉ）とｐｒａｚｏｓｉｎ共に殆ど影響を及ぼさ
なかった（図１）。

【００４５】(ii) ＴＧ化合物（Ｉ）においては、用量依存的にＴＧを低下さ
せ、５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群については溶媒投与群
の約２分の１にまで有意にこれを低下させた。一方、α
₁遮断薬のｐｒａｚｏｓｉｎにおいては、殆ど変化が
見られなかった（図２）。

【００４６】(iii)血清リポタンパク質分画（Ｃｈｙ，
ＶＬＤＬ，ＬＤＬ）化合物（Ｉ）においては、５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群
において、ＴＧ豊富なＣｈｙ及びＶＬＤＬの有意な低下
が観察された（図３）が、ｐｒａｚｏｓｉｎにおいては
影響は見られなかった（図４）。

【００４７】 (iv) ヘパリン凝集リポタンパク質（ＨＰＬ）一般に、“悪玉”コレステロールの指標となると思われ
るＣｈｙ＋ＶＬＤＬ＋ＬＤＬの総和をＨＰＬとして示し
た。その結果、化合物（Ｉ）は、これを約４分の１まで
有意に抑制した。しかし、ｐｒａｚｏｓｉｎにはこのよ
うな作用は認められなかった（図５）。

【００４８】(v) ＨＤＬ−ＣＴＧの低下と逆相関的に、化合物（Ｉ）の５ｍｇ／ｋｇ
／ｄａｙ投与群において、ＨＤＬ−Ｃの有意な増加が認
められた（図６）。

【００４９】(vi) 肝重量２薬物投与群において、肝重量には殆ど影響がみられな
かった（図７）。

【００５０】尚、化合物（Ｉ）及びｐｒａｚｏｓｉｎの
血中脂質に対する影響を表１にまとめた。

【００５１】

【表１】

【００５２】また、本化合物（Ｉ）の有する強力なＴＧ
低下作用は、５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与で１週間という
更に短い投与期間で発現することも明らかになった（図
８）。

【００５３】実験例２リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）および肝性トリグリ
セリドリパーゼ（Ｈ−ＴＧＬ）活性亢進作用１．実験動物上記血中脂質改善作用と同様、１０から１１週令の雌性
Obese Zucker rats を購入し（チャールズ・リバー）、
１週間以上予備飼育の後、実験に供した。

【００５４】２．供試薬剤化合物（Ｉ）は、血中脂質代謝改善作用の見られたｄｏ
ｓｅ（５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ，ｐ．ｏ．）を投与した。
尚、化合物（Ｉ）は生理食塩水に溶解し、これを使用し
た。

【００５５】３．測定項目酵素活性は、血中に存在するＬＰＬとＨ−ＴＧＬ及び腸
管膜脂肪組織中に存在うるＬＰＬ活性について測定し、
溶媒投与群と薬剤投与群とで比較した。

【００５６】４．実験方法ラットに溶媒および化合物（Ｉ）を１週間にわたり経口
投与した。７日目投与後に１６時間の絶食を行い、続い
て溶媒および化合物（Ｉ）を投与、その２時間後に尾静
脈より１０００単位／ｋｇのヘパリンを投与した。ヘパ
リン投与１０〜３０分後にラットをＣＯ₂麻酔し、心臓
より全採血を行った（抗凝固剤としてＥＤＴＡ１ｍｇ／
ｍｌを用いた）。血液は速やかに１，５００ｇ、１０
分、４℃にて遠心分離を行い、得られた血漿（ポストヘ
パリン血漿）を実験に供した。尚、酵素活性の測定方法
は、Ｙａｍａｄａらの方法 [La Cossa, J. C., Levy,
R.J.,Windmueller, H.G., Fredickson, D.S.; J. Lipi
d. Res. 13, 356 (1972)]にて従い、¹⁴Ｃラベルした基
質を用いて行った。

【００５７】脂肪組織抽出物の調製採血後のラットから腸管膜の脂肪組織を採取し、ただち
に液体窒素にて凍結、細片した。脂肪１ｇに対し、２ｍ
ｌのクレブス−リンゲル（Krebs-Ringer) 溶液（５００
ＩＵ／ｍｌヘパリン含有、ｐＨ７．４）を加え、３７
℃、１時間振盪しながら組織中ＬＰＬ抽出を行った。抽
出液０．１５ｍｌを採取し、実験に供した。

【００５８】基質の調製トリオレイン８９ｍｇ〔ストック溶液（１ｇ／５ｍｌヘ
プタン）０．４４４ｍｌ〕に対し、[ ¹⁴C ] トリオレイ
ン３７ｋＢｑ〔ストック溶液（１．８５ＭＢｑ／５ｍｌ
ヘキサン）０．１ｍｌ〕を加え、窒素下溶媒を留去し
た。ここに、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を０．６ｍ
ｌ、４％ＢＳＡ／Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（０．２Ｍ，ｐＨ
８．６）０．６ｍｌ、０．２ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐ
Ｈ８．６）６．８ｍｌを加え、氷冷下３分間超音波処理
し、基質エマルジョンを作成した（用時調製）。

【００５９】酵素測定基質エマルジョン０．２ｍｌ（２．５μｍｏｌ，５００
０ｄｐｍ）に対し、０．１５ｍｌの４％ＢＳＡ／Ｔｒｉ
ｓ−ＨＣｌ（０．２Ｍ，ｐＨ７．４）及びラット血清
（別途作成）０．０５ｍｌを混和し、ここに被験血漿ま
たは脂肪からの抽出液０．１５ｍｌを加え、３７℃、１
時間振盪しながら反応を行った。３Ｎ硫酸−イソプロパ
ノール２ｍｌにて反応を停止させ、水１ｍｌ、ヘキサン
２ｍｌを加え、さらに抽出効率を算出するために内部標
準として１０μｌの³H−オレイン酸（３００ｎｍｏｌ，
３００００ｄｐｍ，用時調製）を加えた。１５分間の振
盪（２００ｒｐｍ）にて抽出、ヘキサン分画を採取し、
さらに０．１ＮＫＯＨ１ｍｌにて生成物の抽出を行
った。１時間以上の放置にて液層を分離させ、水層を採
取し、シンチレーター（ＡＣＳＩＩ）１０ｍｌを添加
後、液体シンチレーションカウンターにて放射活性を測
定し、酵素活性を測定した。なお、ポストヘパリン血漿
中にはＬＰＬの他、肝性トリグリセリドリパーゼ（Ｈ−
ＴＧＬ）も存在する。そこで両者の区別を行うために抗
ＬＰＬモノクローナル抗体（100 μｇ／ｍｌ，Oncogene
Sci.)を反応させてＬＰＬを不活化（１５０μｌ血漿中
２０μｌ抗体溶液、１時間４℃にてインキュベーショ
ン）させたポストヘパリン血漿を同時に測定し、酵素活
性の分離も行った。酵素活性の算出は以下の式に代入し
て行った

【００６０】

【数１】

【００６１】尚、ポストヘパリン血漿においては全リパ
ーゼ活性と抗ＬＰＬ抗体添加血漿のリパーゼ活性を測定
し、抗ＬＰＬ抗体添加血漿のリパーゼ活性をＨ−ＴＧＬ
活性、全リパーゼ活性から抗ＬＰＬ抗体添加血漿のリパ
ーゼ活性を差し引いた残りの活性をＬＰＬ活性として表
示した。

【００６２】５．結果化合物（Ｉ）の１週間連続投与によってObese Zucker r
atの血漿中のＬＰＬ及びＨ−ＴＧＬ活性は有意な上昇を
示した。他方、脂肪組織中ＬＰＬ活性については溶媒投
与群と化合物（Ｉ）投与群とで殆ど変化がみられなった
（図９）。さらに、化合物（Ｉ）を１６時間絶食のObes
e Zucker ratに単回投与し、２時間後の酵素活性を測定
したところ、ＬＰＬ及びＨ−ＴＧＬ活性には変化が認め
られなった（図１０）。この結果より、化合物（Ｉ）の
ＬＰＬ及びＨ−ＴＧＬ活性亢進作用は、単回投与では認
められず、連続投与によって初めて発現することが明ら
かとなった。

【００６３】実験例３ラットを用いた単回投与毒性試験本発明の化合物（塩酸塩）を４５０mg/kg 経口投与して
も死亡例はみられなかった。

【００６４】実施例１錠剤 (1) 化合物（Ｉ）１０mg (2) 直打用微粒No. 209 （富士化学社製）４６．６mg メタケイ酸アルミン酸マグネシウム２０％トウモロコシデンプン３０％乳糖５０％ (3) 結晶セルロース２４．０mg (4) カルボキシルメチルセルロース・カルシウム４．０mg (5) ステアリン酸マグネシウム０．４mg (1) 、(3) および(4) はいずれも予め１００メッシュの
篩に通す。この(1) 、(3) 、(4) と(2) をそれぞれ乾燥
して一定含水率にまで下げた後、上記の重量割合で混合
機を用いて混合する。全質均等にした混合末に(5) を添
加して短時間（３０秒間）混合し、混合末を打錠（杵：
６．３mmφ、６．０mmＲ）して、１錠８５mgの錠剤とし
た。この錠剤は必要に応じて通常用いられる胃溶性フィ
ルムコーティング剤（例えば、ポリビニルアセタールジ
エチルアミノアセテート）や食用性着色剤でコーティン
グしてもよい。

【００６５】実施例２カプセル剤 (1) 化合物（Ｉ）５０ｇ (2) 乳糖９３５ｇ (3) ステアリン酸マグネシウム１５ｇ上記成分をそれぞれ秤量した後均一に混合し、混合粉体
をハードゼラチンカプセルに２００mgずつ充填した。

【００６６】実施例３注射剤 (1) 化合物（Ｉ）塩酸塩５mg (2) ブドウ糖１００mg (3) 生理食塩水１０ml 上記の混合液をメンブランフィルターでろ過後、再び徐
菌ろ過を行い、そのろ過液を無菌的にバイアルに分注
し、窒素ガスを充填して静脈内注射剤とした。

【００６７】参考例１Ｎ−（６−アミノ−３−ピリジル）−Ｎ''−シアノ−
Ｎ'-（エンド−２−ノルボルニル）グアニジン（＋）対
掌体（化合物Ｉ）およびその塩酸塩の製造：（１）光学活性−エンド−２−ノルボルニルイソチオシ
アネートの製造

【００６８】

【化９】

【００６９】水酸化ナトリウム２．９０４ｇを水１７ml
に溶解し、これに氷冷下、二硫化炭素５．２４０mlを加
えた。さらに氷冷下、（２Ｒ）−（−）−エンド−２−
ノルボルニルアミン８ｇを徐々に加えると、白色結晶が
析出した。室温で１時間攪拌した後、７０℃で１時間攪
拌した結果、一層のオレンジ色の液体を得た。室温にも
どし、クロロ炭酸エチル７．６３６mlを滴下、さらに室
温で１時間攪拌して、２層に分離した黄色液体を得た。
下層に沈んだ油状物を分液ロートで取り出し、20％水酸
化ナトリウム水溶液２０ml中に懸濁させ、１６時間激し
く攪拌した。水20mlを加えヘキサンで抽出した。硫酸マ
グネシウムで乾燥させた後、溶媒を留去し、カラム精製
（ヘキサン）し、目的物である光学活性−エンド−２−
ノルボルニルイソチオシアネートの白色粉末を得た。収量：５．１０９ｇ（４６．５％）

【００７０】（２）光学活性−Ｎ-(６−アミノ−３−ピ
リジル）−Ｎ'-（エンド−２−ノルボルニル）チオウレ
アの製造

【００７１】

【化１０】

【００７２】２，５−ジアミノピリジン・塩酸塩４ｇを
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）20mlに溶解し、これに
前記（１）で得た光学活性−エンド−２−ノルボルニル
イソチオシアネートを３．６５５ｇ加え、トリエチルア
ミン６．１２５mlを加えた。該混合物を室温で１６時間
攪拌し、５％炭酸カリウム水溶液８０mlおよび水８０ml
を加え、酢酸エチルで抽出した。溶媒を留去し、カラム
精製（クロロフォルム：メタノール＝１０：１）し、さ
らに塩化メチレン−メタノール−ジエチルエーテルで再
結晶し、目的物質である光学活性−Ｎ-(６−アミノ−３
−ピリジル) −Ｎ'-（エンド−２−ノルボルニル）チオ
ウレアの淡桃色粉末を得た。収量：３．４０２ｇ（５９．０％）融点：１７３．０〜１７４．０℃ また、目的物質の¹Ｈ−ＮＭＲを以下に示す。¹ Ｈ−ＮＭＲ（DMSO): 0.7-1.7 (7H, m), 1.8-2.1 (1H,
m), 2.1-2.25 (1H, m),2.4-2.6 (1H, m), 4.2-4.45 (1
H, m), 5.77 (2H, brs),6.40 (1H, d, J=8.0Hz), 7.37
(1H, dd, J=2.0, 8.0Hz), 7.55 (1H, brs),7.77 (1H,
d, J=2.0Hz), 8.84 (1H, brs) ＩＲ（ＫＢｒ）: 3500-3000, 2900, 2850, 1630, 150
0, 1530

【００７３】（３）光学活性−Ｎ−（６−アミノ−３−
ピリジル）−Ｎ’−（エンド−２−ノルボルニル）カル
ボジイミドの製造

【００７４】

【化１１】

【００７５】青色シリカゲルおよびジムロート冷却管を
装着した１リットルのナス型フラスコに前記（２）で得
た光学活性- Ｎ-(６−アミノ−３−ピリジル)-Ｎ'-（エ
ンド−２−ノルボルニル）チオウレア（２９．７ｇ、１
１３．２mmol）のエタノール（１５０ml）−塩化メチレ
ン（１５０ml）溶液を入れ、これに酸化水銀（49.0g、
２２６．４mmol）および硫黄粉末（１．８２ｇ、５６．
６mmol）を加えた。還流下、１５時間攪拌し、さらに酸
化水銀（２０．０ｇ、９２．３mmol）および硫黄粉末
（５００mg、１５．６mmol）を加え、還流下、２．５時
間攪拌した。不溶物をセライトでろ過によって除去し、
ろ液を濃縮し、約１００mlのエタノールを残し、目的化
合物のエタノール溶液を得た。

【００７６】（４）Ｎ−（６−アミノ−３−ピリジル）
−Ｎ''−シアノ−Ｎ'-（エンド−２−ノルボルニル）グ
アニジンの（＋）対掌体の製法

【００７７】

【化１２】

【００７８】窒素風船を装着した２リットルのセパレー
ト式３口フラスコに、前記（３）で得た光学活性−Ｎ−
（６−アミノ−３−ピリジル）−Ｎ’−（エンド−２−
ノルボルニル）カルボジイミド（２５．８g 、１１３．
２mmol）のエタノール（200ml）−塩化メチレン（２５
０ml）溶液を入れ、シアナミド（５．２３g 、124.5mmo
l）、ジイソプロピルエチルアミン（９．９ml、５６．
６mmol）を加え、室温で１８時間攪拌し、さらにシアナ
ミド（２．５g 、５９．５mmol）を加え、７２時間攪拌
した。析出物質をろ過し、再結晶し、白色針状結晶であ
る目的物を得た。収量：２２．５ｇ（７４％）〔α〕_D＝＋１２．０（ｃ＝０．６エタノール）融点：１８４〜１８５℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（DMSO) : 0.9-1.6 (7H, m), 1.7-2.05 (1
H, m),2.05-2.2 (1H, brs), 2.3-2.45 (1H, m), 3.85-
4.1 (1H, m),5.91 (2H, s), 6.43 (1H, d, J=8.0Hz),
6.58 (1H, d, J=4.0Hz),7.21 (1H, dd, J=2.0, 8.0Hz),
7.73 (1H, d, J=2.0Hz),8.46 (1H, s) ＩＲ（ＫＢｒ）: 3500-3000, 2900, 2850, 2150, 1600,
1500

【００７９】（５）Ｎ−（６−アミノ−３−ピリジル）
−Ｎ''−シアノ−Ｎ'-（エンド−２−ノルボルニル）グ
アニジン（＋）対掌体の塩酸塩の製法

【００８０】

【化１３】

【００８１】１リットルのナス型フラスコにＮ−（６−
アミノ−３−ピリジル）−Ｎ''−シアノ−Ｎ'-（エンド
−２−ノルボルニル）グアニジン（＋）対掌体（２１．
９g、８１．０mmol）の塩化メチレン（２５０ml）−メ
タノール（１００ml）溶液を入れ、氷冷下、４．７４Ｎ
の塩酸のエタノール溶液（１７．１ml、８１．０mmol）
を徐々に滴下した。室温で１時間攪拌し、溶媒を減圧留
去し、析出物質をろ取し、７８℃で真空ポンプで６時間
乾燥し、目的物である白色粉末を得た。収量：２１．２２ｇ（８５％） [α] _D= ＋２６．５（Ｃ＝０．５エタノール）¹ Ｈ−ＮＭＲ（DMSO) : 0.9-1.7 (7H, m), 1.75-2.05 (1
H, m),2.05-2.25 (1H, m), 2.35-2.50 (1H, m), 3.9-4.
2 (1H, m),7.03 (1H, d, J=10.0Hz), 7.44 (1H, d, J=
6.0Hz),7.84 (1H, d, J=10.0Hz), 7.98 (1H, s), 8.0-
8.4 (2H, brs),9.31 (1H, brs) ＩＲ（ＫＢｒ）: 3600-2200, 2150

【発明の効果】本発明の脂質代謝改善剤は、短期間の連
続投与で、強力なＴＧ、ならびにＴＧ−豊富なリポタン
パク質低下作用を発揮し、且つ低毒性である。従って、
脂質代謝異常によって引き起こされる疾患、例えば、高
脂血症、虚血性心疾患、脳血管疾患、粥状動脈硬化等の
予防、治療に有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）とｐｒａｚｏｓｉｎの全コレステロール（ＴＣ）
に対する影響を示す。

【図２】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）とｐｒａｚｏｓｉｎのトリグリセリド（ＴＧ）に
対する影響を示す。

【図３】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）の血清リポタンパク質分画に対する影響を示す。

【図４】絶食のObese Zucker Rats における、ｐｒａｚ
ｏｓｉｎの血清リポタンパク質分画に対する影響を示
す。

【図５】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）とｐｒａｚｏｓｉｎの血漿ヘパリン凝集リポタン
パク質（ＨＰＬ）に対する影響を示す。

【図６】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）とｐｒａｚｏｓｉｎの高比重リポタンパク質−コ
レステロール（ＨＤＬ−Ｃ）に対する影響を示す。

【図７】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）とｐｒａｚｏｓｉｎの肝重量に対する影響を示
す。

【図８】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）のＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ−Ｃに対する短期間での影
響を示す。

【図９】絶食のObese Zucker Rats から採取した脂肪組
織ならびにポストヘパリン血漿における、化合物（Ｉ）
とｐｒａｚｏｓｉｎのＬＰＬならびにＨ−ＴＧＬ活性に
対する影響を示す。

【図１０】絶食のObese Zucker Rats における、化合物
（Ｉ）単回投与のＬＰＬならびにＨ−ＴＧＬ活性に対す
る影響を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者中村憲史大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号株式会社ミドリ十字中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式（Ｉ）：【化１】（式中、Ｒ¹およびＲ²は同一または異なっていてもよ
く、それぞれ、水素、炭素数１〜６のアルキル基または
アミノ基の保護基を、Ｒ³は水素または炭素数１〜６の
アルキル基を、ＺはＳまたはＮＣＮを、ｍは１または２
を、およびｎは０または１を示す）で表されるアミノピ
リジン誘導体の（＋）−対掌体、あるいはその酸付加塩
を有効成分とする脂質代謝改善剤。