JPH07501092A - 染料移り抑制組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 染料移り抑制組成物 発明の分野 本発明は洗浄時における染色布帛から他の布帛への染料の移動を抑制するための 酵素組成物に関する。

発明の背景 現代の布帛洗濯操作時に生じる最も頑固で厄介な問題の１つは、一部の着色布帛 が洗濯溶液中に染料を放出する傾向である。そのとき染料は、それと−緒に洗浄 された布帛に移ってしまう。

この問題を克服する１つの方法は、染料が洗濯で他の物品に付着する前に、染色 布帛から洗い落された遊走染料を漂白することである。

懸濁または溶解された染料は公知の漂白剤を用０ることにより溶液中である程度 酸化することができる。

ＧＢ第２　１０１　１６７号明細書は、希釈時に活性化されて過酸化水素を生じ る過酸化水素前駆体を含有した安定な液体漂白組成物について記載している。

しかしながら、布帛に残る染料を漂白しないこと、即ちカラーダメージを起こさ ないことも同時に重要である。

米国特許第４，０７７．７６８号明細書は鉄ポルフィンのような触媒化合物と一 緒に酸化漂白剤の使用により染料移りを抑制するためのプロセスについて記載し ている。

米国特許出願第４２１，４１４号明細書は着色物質を含めた有機または無機物質 の酸化に利用されるペルオキシダーゼおよびオキシダーゼについて記載している 。過酸化水素を生成しうる酵素系と鉄触媒を含んだ染料移り抑制組成物は、１９ ９１年１０月９日付で出願された同時係属ＥＰ特許出願第９１２０２６５５．６ 号明細書に開示されている。

ＥＰ第４２４　３９８−Ａ号明細書はペルオキシダーゼを含んだ漂白効果を発揮 しうる洗剤添加物について記載している。その添加物は１種以上の酵素、特にリ パーゼ、プロテアーゼ、アミラーゼまたはセルラーゼを更に含んでいる。

ＥＰ−Ａ−第３５０　０９８号明細書は洗剤適用に関連したセルラーゼ選択基準 を規定するＣ　Ｉ４ｃ　Ｍ　Ｃ法について開示している。試験溶液中２５Ｘ１０ ’重量％のセルラーゼタンパク質でＣＭＣ法に従い固定放射性標識カルボキシメ チルセルロースを最低１０％除去すれば、高活性セルラーゼであるとされている 。

本発明による高活性の定義に属するセルラーゼの好ましいグループは、１９９０ 年５月５日付で出願された同時係属テンマーク特許出願第１１５９／９０号明細 書に開示されている。ヒューミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ　１ｎｓ ｏｌｅｎｓ）　Ｄ　Ｍ　１８００に由来する部分的に精製された＝　４３　ｋＤ セルラーゼに対するモノクローナル抗体と免疫反応性である均一なエンドグルカ ナーゼ成分から本質的になるセルラーゼ調製物が開示されている。

染料移りの抑制に関するペルオキシダーゼの効力は、上記の高活性セルラーゼ、 更に具体的には同時係属デンマーク特許出願第１１５９／９０号明細書で開示さ れた特定のセルラーゼ調製物を用いることで、著しく高められることが意外にも わかった。したがって、上記の高活性セルラーゼおよびペルオキシダーゼを用い ることにより洗浄液中で最良の染料移りの抑制を示す染料移り抑制組成物を提供 することが本発明の目的である。

本発明の１つの態様によれば、例えば組換えＤＮＡ技術を用いることにより、原 価効率のよいセルラーゼ調製物を含んだ染料移り抑制組成物が提供される。

本発明のもう１つの態様によれば、着色布帛を伴う洗濯操作に関する方法も提供 される。

発明の概要 本発明は、ペルオキシダーゼ活性を示す酵素、過酸化水素または過酸化水素前駆 体または過酸化水素を生成しつる酵素系、追加の酸化性基質、およびセルラーゼ を含んでなり、該セルラーゼが洗濯試験溶液の２５Ｘ１０’重量％でＣ１４ＣＭ 　Ｃ法に従い固定放射性標識カルボキシメチルセルロースを少くとも１０％除去 するものであることを特徴とする染料移り抑制組成物を提供する。

本発明によれば、好ましいセルラーゼは、ヒューミコラ・インソレンスＤＭ１８ ００に由来する部分的に精製された＝４３ｋＤセルラーゼに対するモノクローナ ル抗体に免疫反応性である、均一なエンドグルカナーゼ成分から本質的になるも のである。

酵素の活性、特にセルラーゼ酵素の活性は異なる分析方法により様々な用途に関 して規定されている。これらの方法ではすべて、予想される使用時性能の現実的 評価、または少くとも使用時性能と相関する測定を行おうと試みている。欧州特 許出願ＥＰ−Ａ−第３５００９８号明細書で詳述されたように、その方法の多く 、特にセルラーゼ製造業者によりしばしば用いられる方法は、洗濯洗剤組成物に おいてセルラーゼの使用時性能と十分には相関していない。これは、これらの活 性測定法が開発された様々な他の使用条件に起因している。

ＥＰ−Ａ＝第３５００９８号明細書に記載された方法は、洗濯洗剤組成物中での セルラーゼ活性の格付に関する予想相互関係を示すために開発された。

したがって、本発明では、本発明で有用なセルラーゼと、本発明の目的物を提供 しないものとを区別するために、セルラーゼをスクリーニングするＥＰ−Ａ−第 ３５００９８号明細書に開示された方法を用いる。ＥＰ−Ａ−第３５００９８号 明細書で開示された方法から採用された、以下でＣ１４ＣＭ　Ｃ法と称されるス クリーニング方法を、以下に説明する。

原理ニ スクリーニングに関するＣ　Ｉ４ｃ　Ｍ　Ｃ法の原理は、有基体からの固定カル ボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の除去率を洗浄溶液中において規定セルラー ゼ濃度で測定することである。ＣＭＣの除去率はＣ１４放射性炭素を用いてＣＭ Ｃの一部を放射性標識することにより測定される。セルラーゼ処理前後における 有基体上の放射性ＣＩ４の量の簡単な計測から、セルラーゼ活性を評価すること ＣＭＣ調製：放射性ＣＭＣストック溶液は表Ｉに従い調製される。放射性ＣＭＣ はＥＰ−Ａ−第３５００９８号明細書で言及された方法により得られる。

布帛基体：布帛基体は５　ｘ　５　ｃｏのサイズを有するモスリンコツトン布切 れである。それらは、それらの中心に放射性標識ＣＭＣストック溶液０．３５ｍ １が接種される。

次いでモスリンコツトン布切れを風乾する。

ＣＭＣの固定：モスリンコットン布切れに放射性標識ＣＭＣを固定するために、 ドイツのオリジナル・ハウナラ製の洗濯機装置“リニテスト・オリジナル・ハウ ナラ”′（Ｌｉｎｉｊｅｓｔ　Ｏｒｉｇｉｎａｌ　Ｈｘｕｎａｕ）が用いられる 。洗濯機の金属ジャーに硬水（Ｃａ　イオン４　ｍｍｏｌ／リットル）４００ｍ ｌを充填する。最大１３枚の布切れがジャー当たりで使用できる。次いでジャー を洗濯機装置で４０分間にわたる２０℃から６０℃への昇温サイクルでインキュ ベートする。インキュベート後、布切れを水道水で１分間すすぐ。それらはしぼ って、少くとも３０分間風乾させる。ＥＰ−Ａ−３５００９８によれば、放射性 ＣＭＣが固定された布切れのサンプルは、洗浄せずに“ブランクサンプル”とし て測定することもできる。

サンプル処理： 洗濯試験溶液：洗濯試験溶液は表１１の組成に従い調製される。それをｐＨ７， ５に平衡化する。洗濯試験溶液はセルラーゼ試験サンプルが加えられるベースで ある。

加えられたセルラーゼの量を決める前に、残部１００％まで水を加えて洗濯試験 溶液を希釈することがないように　注意する。このスクリーニング試験で用いら れるセルラーゼの量は、洗濯試験溶液で２５Ｘ１０’重量％のセルラーゼタンパ ク質（１４，５℃で０．２５ｍｇ／リットルに相当する）となるように加えられ なければならない。

洗浄操作：次いで放射性標識ＣＭＣで接種された布切れは洗濯シミュレートプロ セスで試験される。洗濯プロセスはドイツのオリジナル・ハウナラによる洗濯機 タイプ装置“リニテスト・オリジナル・ハウナウ”でシミュレートする。個々の 布切れは２０ｒｉガラスバイアル中にいれる。バイアルは洗濯試験溶液１０ｍ１ で充填された後、液密に閉じられる。５本以内のバイアルが各洗濯機ジャー中に いれられる。ジャーに洗濯シミュレート用に熱伝達媒体として水が充填される。

洗濯シミュレートは４０分間にわたる２０℃から６０℃への昇温サイクルとして 行う。

サンプルの処理後にバイアルは冷水に浸漬され、その後各布切れはそのバイアル から取り出され、水道軟水によりビーカー内ですすぎ、しぼられ、少くとも３０ 分間風乾させる。

放射性標識ＣＭＣ除去率を測定するために、シンチレーションカウンター、例え ばＬＫＢ　Ｌ　２１０ウルトラベータ（ＵＮｒａｂｅ＋ａ）　シンチレーション カウンターが用いられる。最も正確な結果を得るためには、具体的シンチレーシ ョンカウンターの最適操作に関する取扱いマニュアルに従うべきである。例えば 、ＬＫＢ１２１０ウルトラベータシンチレーションカウンターの場合には、下記 操作に従うべきである。測定される布切れはシンチレーション液体〔例えば、パ ラカード（Ｐ！ｃｋａ＋ｄｌ　からのシンチレータ−２９９）１２ｍｌで充填さ れたプラスチ・ソクノくイアル中にいれられる。次いで布切れは少くとも３０分 間安定化させる。次いでバイアルはＬＫＢ１２１０ウルトラベータシンチレーシ ョンカウンター中にいれられ、布切れの各放射能カウントが得られる。

セルラーゼのみによるＣＭＣ除去量を測定するためには、同時に接種されたもの の無セルラーゼ洗濯試験溶液で処理された布切れの測定が必要である。次いでセ ルラーゼの活性は放射性標識ＣＭＣ除去率として表示される。

このパーセンテージは下記式により計算される：放射性ＣＭＣ除去率（％）＝ｘ ０−ｘ０×１００Ｏ 上記においてＸＯは無セルラーゼ洗濯試験溶液で処理された布切れの放射能シン チレーションカウントでり、ＸＣは評価されるセルラーゼを含有した洗濯試験溶 液で処理された布切れの放射能シンチレーションカウントである。

統計的考察、操作確認： 統計上十分な結果を得るためには、標準統計分析が用いられるべきである。与え られた例では、ＬＫＢ１２１０ウルトラベータシンチレーションカウンターを用 いて、各放射性シンチレーションカウント用にサンプルサイズの布切れ３枚が使 用できることがわかった。

内部クロスチェックにより操作を確認するためには、ＥＰ−Ａ−第３５００９８ 号に従い“ブランクサンプル”の測定および計算が勧められる。これによりエラ ーを検出して排除する。

結果の解釈： 記載されたスクリーニング試験は、本発明の一部ではないセルラーゼと、本発明 の活性基準を満足するセルラーゼとを識別するための、迅速無比で、信頼性のあ る方法を提供する。

上記ＣＩ４ｃ　Ｍ　Ｃ法により固定放射性標識ＣＭＣを１０％以上除去していれ ば、各セルラーゼは本発明の要求を満たすことが見出された。

１０％以上の除去率が各セルラーゼに関して高い活性を示すことは当業者にとり 明らかである。したがって、ＣＩ４ＣＭ　Ｃ法により洗濯試験溶液中のタンパク 質濃度で放射性標識ＣＭＣを２５％以上または好ましくは５０％以上除去するセ ルラーゼは、洗濯洗剤で使用上セルラーゼの一層優れた性能を示すと考えられる 。

ＣＩ４ｃ　Ｍ　Ｃ法では高濃度のセルラーゼの使用はど高い除去率を示すことも わかった。しかしながら、セルラーゼ濃度とそれにより得られる除去率との間に は直線的な相互関係は存在しない。

ＣＩ４ＣＭ　Ｃ法では高濃度のセルラーゼの使用はど高い除去率を示すこともわ かった。

表■：放射性Ｃ１４標識ＣＭＣストック溶液９全ＣＭ　Ｃは用いられたシンチレ ーションカウンターで十分明瞭に読み取れる放射能を示す放射性ＣＭＣと非放射 性ＣＭＣとを含有している。例えば、放射性ＣＭＣは０　、　７　ｍｃｉ／Ｈの 放射能を有し、１・６．７の比率で非放射性ＣＭＣとミックスされる。

表１１＝洗濯試験溶液（すべて全溶液の重量％）本発明によれば、好ましいセル ラーゼはデンマーク特許出願第１１５９／９０号明細書で記載されたようなもの である。例えば、本発明の組成物で有用なセルラーゼ調製物は均一なエンドグル カナーゼ成分から本質的になり、これはヒューミコラ・インソレンスＤＳＭ１８ ００に由来する高度精製４３ｋＤセルラーゼまたはその４３ｋＤエンドグルカナ ーゼに相同的であるセルラーゼに対する抗体と免疫反応性である。

本発明によるすべてのセルラーゼ酵素は上記スクリーニング試験の基準に合わね ばならないことを強調しなければならない。しかしながら、デンマーク特許出願 第１１５９／９０号では、本スクリーニング試験と組合せて好ましいセルラーゼ 酵素を確認しうる追加の基準が確立される。

本発明の組成物で特に有用なセルラーゼ調製物は、スクリーニング試験に加えて 、エンドグルカナーゼ成分が少くとも約５０、好ましくは少くとも約６０、特に 少くとも約９０、ＣＭＣエンドアーゼ単位／ｌｌ１ｇ全タンパク質のＣＭＣエン ドアーゼ活性を示すものである。特に、好ましいエンドグルカナーゼ成分は少く とも１００　ＣＭＣエンドアーゼ単位／＋ｎｇ全タンパク質のＣＭＣエンドアー ゼ活性を示す。

本関係において、“ＣＭＣエンドアーゼ活性”　（ｃｅｙｕｌという用語は、以 下で詳細に記載される本発明のセルラーゼ調製物とのインキュベート後における カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の溶液の粘度減少から調べられるように 、セルロースをグルコース、セロビオース、およびトリオースに分解するその能 力についてのエンドグルカナーゼ成分のエンドグルカナーゼ活性に関する。

ＣＭＣエンドアーゼ（エンドグルカナーゼ）活性は、下記のように、ＣＭＣの粘 度減少から決定することができる：ｐＨ９，０の０．ＩＭｈリス緩衝液中に３５ ｇ／ｌＣＭＣ〔バーキュリーズ（ＨｅＩｃｕｌｅｓ）　７　Ｌ　Ｆ　Ｄ　）を含 有した基質溶液が調製される。分析される酵素サンプルを同緩衝液に溶解する。

基質溶液１０１および酵素溶液０．５ｍｌを混合し、４０℃で恒温化された粘度 計〔例えば、ハーク（Ｈａａｋｅ）　ＶＴ　１８１、ＮＶセンサー、１８１＋ｐ ｍ　）に移す。粘度計の読取りは混合後できるだけすぐに、および再び３０分間 後に行う。これらの条件下で粘度を半分に減少させる酵素の量は１単位のＣＭＣ エンドアーゼ活性として定義される。

当業者に公知の方法で、マーカータンパク質とのＳＤＳポリアクリルアミドゲル 電気泳動（ＳＤＳ　−ＰＡＧＥ）および等電点電気泳動が、本関係で有用なセル ラーゼ調製物中におけるエンドグルカナーゼ成分の分子量および等電点（ｐＩ） を各々調べるために用いられた。こうして、特異的エンドグルカナーゼ成分の分 子量は４３ｋＤであることがわかった。このエンドグルカナーゼの等電点は約５ ．１であることがわかった。

セロビオヒドロラーゼ活性はセロビオースｐ−ニトロフェニルに対する活性とし て定義してもよい。その活性は３７℃およびｐＨ７，０で１分間当たりに放出さ れるμｍｏｌニトロフェニルとして定義される。本エンドグルカナーゼ成分はセ ロビオヒドロラーゼ活性を実質的に有しないことが見出された。

本発明のセルラーゼ調製物中におけるエンドグルカナーゼ成分は、一般的には米 国特許第４．４３５．３０７号による粗製Ｈ，インソレンシスルラーゼ混合物の 逆相ＨＰＬＣ精製を含む徹底した精製操作により初めて単離された。この操作に より、意外に高いエンドグルカナーゼ活性のために予想外に好ましい性質を有す る、単一成分としての４３ｋＤエンドグルカナーゼが意外にも単離された。

しかも、スクリーニング試験に加えて、本組成物で有用なセルラーゼ酵素は、エ ンドグルカナーゼ活性を示す酵素（以下では“エンドグルカナーゼ酵素”と呼ぶ ）（その酵素は添付の配列表の配列番号２で示されたアミノ酸配列を有する）ま たはエンドグルカナーゼ活性を示すそのホモログとして更に定義することができ る。

ここで、“ホモログという用語は、（５×ＳＳＣに前浸漬、２０％ホルムアミド 、５×デンハート（Ｄｅｎｈａｒｄ＋’＋）溶液、ｐＨ６，８の５０ｍＭリン酸 ナトリウムおよび変性超音波処理子牛胸腺ＤＮＡ５０μｇの溶液中４０℃で１時 間の前ハイブリッド形成、その後１００μＭＡ　Ｔ　Ｐで補充された同溶液中４ ０℃で１８時間のハイブリッド形成のような）ある特定条件下で、このアミノ酸 配列のエンドグルカナーゼ酵素をコードするＤＮＡと同様のプローブとハイブリ ッドするＤＮＡによりコードされたポリペプチドを表す意味に用いる。この用語 は、天然配列のＣおよびＮ末端の一方または双方への１以上のアミノ酸残基の付 加、天然配列の１以上の部位における１以上のアミノ酸残基の置き換え、天然ア ミノ酸配列の一方または双方の末端または天然配列内部の１以上の部位における １以上のアミノ酸残基の削除あるいは天然配列の１以上の部位における１以上の アミノ酸残基の挿入により得られる前記配列の誘導体を含めた意味である。

エンドグルカナーゼ酵素とはここでは、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に 関するブダペスト条約（ブダペスト条約）の規定に従い、トイチェ・サムルンク ・フォノ・ミクロオルガニスメン、マシエローダーーベクＩＢ、Ｄ−３３００ブ ラウンシュバイク、Ｆ　ＲＧ　（Ｄｅｌｓｃｈｅ　Ｓａｍｍｌｏｎｇ　ｖｏｎ　 ＭｉｋｕｏｒＨｎｉｓｍｅｎ、Ｍａｓｃｂｅｒｏｄｅ＋　ｌｅｇ　ＩＢ。

Ｄ−３３００Ｂ＋ａｕｎｓｃｈｖｅｉｇ、ＦＲＧ）に１９８１年１０月１日付で 寄託された、ヒューミコラ・インソレンスのようなヒューミコラ種、例えば株Ｄ ＳＭ１８００により産生されうるものであってもよい。

更に別の面において、ここで有用なセルラーゼ酵素とは、スクリーニング試験に 加えて、添付された配列表の配列番号４で示されたアミノ酸配列を有するエンド グルカナーゼ酵素、またはエンドグルカナーゼ活性を示す（前記のような）その ホモログとして定義することができる。上記エンドグルカナーゼ酵素は、ブダペ スト条約の規定に従い、トイチェ書サムルンクφフオン・ミクロオルガニスメン 、マシェローダー・ベクＩＢ、Ｄ−３３００ブラウンシュバイク、ＦＲＧに１９ ８３年６月６日付で寄託された、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａ＋ｉｕ ｍ　ｏＢ＋ｐｏ＋ｕｍｌのようなフザリウム種、例えば菌株ＤＳＭ２６７２によ り産生されうるちのであってもよい。　更に、相同的エンドグルカナーゼはセル ロース分解酵素を産生ずる他の微生物、例えばトリコデルマ（Ｔ＋１ｃｈｏｄｅ ＋ｍａ）　、ミセリオフトラ（Ｊｃｅｌｉｏｐｈｌｈａ＋ａ）、ファネロカエテ （Ｐｈａｎｅ＋ｏｃｈａｅｔｅ）　、シゾフィルム（Ｓｃｈｉｒｏｐｂ７１１ｕ ｍ）　、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）　、アスペルギルス（Ａｓｐ ｅｒｇｉｌｌｕｓ）およびゲオトリクム（ＧｅｏＨｉｃｕｍ）の種に由来しても よいと考えられる。

しかしながら、ここでのセルラーゼ調製物の工業的生産のためには、望ましい酵 素活性の大量産生を保証する上で行われる組換えＤＮＡ技術、あるいは発酵の調 整、または微生物の変異を含めた他の技術を用いることが好ましい。このような 方法および技術は当業界で公知であり、当業者であれば容易に行える。

このためエンドグルカナーゼ成分とは、上記エンドグルカナーゼ成分、または上 記エンドグルカナーゼ成分の前駆体をコードするＤＮＡ配列と、エンドグルカナ ーゼ成分またはその前駆体をコードするＤＮＡ配列を発現させる機能をコードす るＤＮＡ配列とを保有した組換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細胞を、 エンドグルカナーゼ成分またはその前駆体を発現させる条件下で培地中において 培養し、エンドグルカナーゼ成分を培養物から回収することからなる方法により 産生されうるものであってもよい。

上記のようなエンドグルカナーゼ酵素またはその酵素の前駆体をコードするＤＮ Ａ配列を含んだＤＮＡ構築物には、添付の配列表の配列番号１または３で示され たようなりＮＡ配列、あるいはその修正配列を有するＤＮＡ構築物がある。ＤＮ Ａ配列の適切な修正例は、エンドグルカナーゼの他のアミノ酸配列を生じないが 、ＤＮＡ構築物が導入された宿主生物のコドン用法（ａｇｘｇｅ）に相当するヌ クレオチド置換、あるいは異なるアミノ酸配列、したがっておそらく天然酵素と は異なる性質を有するエンドグルカナーゼ変異体を生じるかもしれない異なるタ ンパク質構造を生じるヌクレオチド置換である。可能な修正の他の例は、配列の 一端における１以上のヌクレオチドの挿入あるいは一端または配列内部における １以上のヌクレオチドの削除である。

ここで有用なエンドグルカナーゼ酵素をコードするＤＮＡ構築物は、確立された 標準方法、例えばＳ、　Ｌ、　Ｂｅａｕｃａｇｅ　ａｎｄ　Ｍ、１１．Ｃａｒｕ ｌｈｅ＋ｓ、Ｔｅｔ＋ａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｌｔｅ＋ｓ、２２，１９８１．ｐｐ 、　１８５９−１８６９で記載されたホスホアミダイト方法またはＭａｓｈｅｓ 　ｅ（ａｌ、、ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ、３，１９８４．ｐｐ、８０１−８０５ で記載された方法により合成してよい。ホスホアミダイト方法によれば、オリゴ ヌクレオチドは例えば自動ＤＮＡシンセサイザーで合成され、精製され、アニー リングされ、結合され、適切なベクターでクローニングされる。

エンドグルカナーゼ酵素またはその前駆体をコードするＤＮＡ構築物は、例えば 、ヒューミコラ・インソレンスＤＳＭ１８００のようなセルラーゼ産生微生物の ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーを確立し、標準技術（例えば１．Ｓａｍｂ＋ ｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ、、Ｍｏ１ｅｃｕｌａ「Ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｌａｂｏ＋ ａｔｏＢ　Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ、Ｅｄ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏ ｒ、１９８９）に従いエンドグルカナーゼの全または一部アミノ酸配列に基づき 合成されたオリゴヌクレオチドプローブを用いるハイブリッド形成によるような 慣用的操作で陽性クローンについてスクリーニングするか、あるいは適切な酵素 活性（即ち、前記のようなＣＭＣエンドアーゼ活性）を発現するクローンについ て選択するか、あるいは天然セルラーゼ（エンドグルカナーゼ）に対する抗体と 反応性であるタンパク質を産生ずるクローンについて選択することにより単離し てよい。

最後に、ＤＮＡ構築物とは、標準技術に従い完全ＤＮＡ構築物の様々な部分に相 当する断片、（適宜に）合成、ゲノムまたはｃＤＮＡ源の断片を結合させること で作製された混合合成およびゲノム、混合合成およびｃ　ＤＮＡまたは混合ゲノ ムおよびｃＤＮＡ源である。ＤＮＡ構築物は、例えば米国特許第４，６８３，２ ０２号明細書またはＲ，Ｋ、　５ａｉｋｉ　ｅｔ　ａｌ、　、　５ｃｉｅｎｃｅ 、　２３９．１９８８．　ＩＩＬ　４８７−４９１で記載されたような特異的プ ライマーを用いるポリメラーゼ鎖反応により作製してもよい。

上記ＤＮＡ構築物が挿入される組換え発現ベクターは組換えＤＮＡ操作にうまく 適合するものであればいがなるベクターであってもよく、ベクターの選択はそれ が導入される宿主細胞に依存することが多い。このため、ベクターは自律複製ベ クター、即ち複製が染色体複製から独立している染色体外物として存在するベク ター、例えばプラスミドであってもよい。一方、ベクターは、宿主細胞中に導入 されたときに、宿主細胞ゲノム中に組み込まれて、それが組み込まれた染色体と 一緒に複製されるものであってもよい。

ベクターにおいて、エンドグルカナーゼをコードするＤＮＡ配列は適切なプロモ ーターおよびターミネータ−配列と作動的に連結されているべきである。プロモ ーターは選択された宿主細胞中で転写活性を示すのであればいかなるＤＮＡ配列 であってもよく、しかも宿主細胞と相同的であるかまたは異種であるタンパク質 をコードする遺伝子に由来してもよい。エンドグルカナーゼ、プロモーターおよ びターミネータ−について各々コードするＤＮＡ配列を結合するために並びにそ れらを適切なベクター中に挿入するために用いられる操作は当業者に周知である （例えば、Ｓａｍ６ｔｏｏｋ　Ｎ　ａｌ、　前　掲）。

上記ＤＮＡ構築物または上記発現ベクターで形質転換される宿主細胞は、例えば アスペルギルスの種に属し、最も好ましくはアスペルギルス・オリザ（Ａｓｐｅ ｒｇｉｌｌｕ＋　。

Ｂ＋ａｅ）またはアスペルギルス中ニガー（Ａｓｐｅ＋ｇｔｌｌｕｓ　ｎ１ｇ８ τ）である。真菌細胞は、それ自体公知の方法で、プロトプラスト形成およびプ ロトプラストの形質転換、しかる後細胞壁の再生を含めたプロセスにより形質転 換してもよい。宿主微生物としてアスペルギルスの使用は〔ノボ・インダストリ 社（Ｎｏｙｏ　Ｉｎｄｕｓｊｒｉ　Ａ／３１　の）ＥＰ第２３８　０２３号明細 書に記載されており、その内容は参考のため本明細書の開示の一部とされる。宿 主細胞は酵母細胞、例えばサツカロミセス・セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍマ ｃｅｓ　ｃｅｒｅマロ目ｅ）の株でもよい。

一方、宿主生物は細菌、特にストレプトミセス（Ｓ　ｔ　ｒ　ｅ　ｐｊｏｍｙｃ ｅｔｌおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の株と大腸菌でもよい。細菌細胞の 形質転換は、例えばＳａｍｂ＋ｏｏｋ　ｅｔ　ａｔ、、ＭＯＩｅｃｕｌａ＋　Ｃ ｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｌｏｒ７１Ａｘｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒ ｉｎｇ　Ｈａｂｂｏ＋、　１９８９で記載されたように、常法に従い行える。

適切なりＮＡ配列のスクリーニングおよびベクターの組立ても標準操作により実 施してよい（ｃｆ、ｓａｍｂ＋ｏｏｋ　ｅｌａｌ、、前掲）。

形質転換された宿主細胞を培養するために用いられる培地は、問題の宿主細胞を 増殖させる上で適したいかなる慣用的な培地であってもよい。発現されたエンド グルカナーゼは好都合には培地中に分泌され、遠心または濾過による培地からの 細胞の分離、硫酸アンモニウムのような塩による培地のタンパク質性成分の沈降 後、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等のよう なりロマトグラフィー操作を含めた周知の操作によりそれから回収される。

前記のような組換えＤＮＡ技術、タンパク質精製の技術、発酵および変異の技術 または当業界で周知の技術を用いることで、高純度のエンドグルカナーゼを提供 することができる。

上記セルラーゼの本組成物中におけるレベルは、洗浄溶液中に放出される酵素タ ンパク質の量が０．００５〜４０　ｍｇ／Ｉ洗浄溶液、好ましくは０．０１〜１ ０ｍｇ／ｌ洗浄溶液となるようなレベルであるべきである。

ペルオキシダーゼ 本目的に用いられるペルオキシダーゼは植物から単離および産生じても（例えば 、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、あるいは真菌または細菌のような微生物から 単離および産生じてもよい。一部の好ましい真菌としては細分類の不完全菌類、 ヒフォミセテス（Ｈ７９ｈａ＋＋ｙｃｔｔｅｓｊ綱に属する株、例えばフサリウ ム、ヒューミコラ、トリコダーマ、ミロテシウム（Ｍ７＋ｏｌｈｅｃｉｕｍ）　 、バーチシルム（Ｖｅｒｆｉｃｉｌｌｕｍ）　、アルトロミセス（ＡＮｈｒｏｌ Ｉ１７ｃｅｓｌ　、カルダリオミセス（Ｃａｌｄａｒｉｏｍｙｃｅｓ）　、ウロ クラジウム（Ｕｌｏｃｌａｄｉｕｍ）、エンベリシア（Ｅｍｂｅｌｌｉｓｉａ） 、タラトスボリウム（Ｃ１８ｄｏ＋ｐｏ＋ｉｕｍ）またはドレシュレラ（Ｄ＋ｅ ｓｃｈｌｅｒａ）、特にフザリウム・オキシスポルム（ＤＳＭ　２６７２）、ヒ ューミコラ・インソレンス、トリコダーマ・レジイ（Ｔ、＋ｅｓｉｉ）　、ミロ テシウム・ベルカナ（ＩＡ、　ｖｔｕｕｃａｎａ）　（ＩＦＯ６１１３）　、バ ーチシルム拳アルボアトルム（Ｖ、ａｌｂｏａｔｒｕｍ）　、バーチシルム・ダ ーク−ｒ−（Ｖ、　ｄａｈｌｉｅ）、アルトロミセス・ラモサス（Ａ、ｒａｍｏ ｓｕｓ）　（ＦＥＲＭ　Ｐ−７７５４）、カルダリオミセス・フマゴ（仁１ｕｍ ａｇｏｌ、ウロクラジウム・チャータルム（Ｕ、　ｃｈａｒ＋ａ＋ｕｏ）、エン ベリシアーアリア（Ｅ、ａｌｌｉｏｒ）、ドレシュレラ・ハロデス（Ｄ、　ｈｉ ｌｏｄｅ＋）がある。

他の好ましい真菌としては細分類バシジオマイコチナ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏ ＋１ｎａ）　、バシジオマイセテス（Ｂａｓｉｄｉｏｍ７ｃｅｔｅｉ）綱に属す る株、例えばコプリヌス（Ｃａ＋１ｏｕｓ）、ファネロチャエテ（１’ｈａｎｅ ｒｏｃｈａｅｔｅ）　、コリオシス（Ｃａ＋１ｏｌｕｓ）またはトラメテス（Ｔ ＋ａｍｅ＋ｅｓ）、特にコプリヌス・シネレウス（Ｃ，ｃｉｎｅｒｃｕｓ）　ｆ 　、ミクロスポルス（ｍｉｃ＋ｏｓｐ＋ｕｕ＋ｌ　（ＩＦｏ　８３７１１　、コ プリヌス・マクロリズス（Ｃ，ｍａｃ＋ｏｒｈｉ！ｕｓ）、ファネロチャエテ・ クリソスポリウム（Ｐ、　ｃｈＢｓｏｓｐｏ＋ｉｏｍ）（例えば、ＮＡ−１２） またはコリオシス・バージカラー（Ｃ，ｖｅｚｉｃｏｌｏ＋）　（例えば、ＰＨ １２８−Ａ）がある。

別の好ましい真菌としては細分類ジゴミコチナ（２７ｇｏｍｙｃｏｊｉｎａｌ、 ミコラセア（Ｍ７ｃｏ＋ａｃｅａｅ）綱に属する株、例えばリゾプス（Ｒｈｉｚ ｏｐｏｓ）またはムコル（Ｍｕｃｏ「）、特にムコルーヒエマリス（Ｍ、　ｈｉ ｅｍａｌｉｓｌがある。

一部の好ましい細菌としては放線菌目の株、例えばストレプトミセス・スフェロ イデス（Ｓ、　＋ｐｈｅ＋ｏｉｄ！＋）　（ＡＴＴＣ２３９６５）、ストレプト ミセス・サーモビオラセウス（Ｓ、ｔｂｅ＋ｍｏｖｉｏｌａｃｅｕｓ）　（ＩＦ Ｑ　１２３１１２）またはストレプトバーチシルム・バーチシリウムｓｓｐ、バ ーチシリウムがある。

他の好ましい細菌としてはバチルス・プミルス（Ｂ、ｐｕｍｉｌｌｕｓ）　（Ａ ＴＣＣ１２９０５）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂ、　＋＋ｅａ＋ｏ ｔｂｃ＋ｍｏｐｈｉｌｕ＋）、ロードバクター〇スファエロイデス（Ｒｈｏｄｏ ｄｈｘｃｔｅ＋　５ｐｈａｔ＋ｏｉｄｅｓ）、ロードモナス・パルストリ（Ｒｈ ｏｄｏｍｏｎａ＋　ｐａｌｕ＋ｆ＋ｉ）　、ストレプトコッカス會ラクチス（Ｈ ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｃｔｉｓ）、シュードモナス・プロシニア（Ｐｓ ｒｕｄｏｍｏｎａ＋　ｐｕｒ＋ｏｃｉｎｉａ）　（ＡＴＣＣ１５９５８）または シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐ、　ｌ１ｕｏｔｅｓｃｅ＋＋５）（ＮＲ ＲＬ　Ｂ−１１）　がある。

有用なペルオキシダーゼの他の可能性がある供給源はＢ、Ｃ，５ａｕｎｄｅ＋　 ｅｌ　ａｌ、、前掲、　ｐｐ、　４１−４３に掲載されている。

本発明に従い用いられる酵素を産生ずる方法は、当業界において、例えばＦＥＢ Ｓ　ＬｅＮｅｚ、　１６２５．１７３（１）　；Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎ ｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃ＋ｏｂｉｏ１ｏｇ７．Ｆｅｂ、ｌ９８５．Ｈ， ２７３−２７８；　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃ＋ｏｂｉｏｌ、　Ｂｉｏ＋ｅｃｈｎ ｏ１．２６．１９８７．　ｐｐ、　１５８−１６３；　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ ｇｙ　ＬｅＮｅｒ＋、　９（５）、　１９８７．　ｐｐ、　３５７−３６０；　 Ｎ［ｕｒｅ、　３２６．２．　Ａｐ「ｉｌ、　１９８７；　ＦＥＢＳ　Ｌｅｖｅ 「ｓ、　４２７０．２０９（２）、　９．３２１；ＥＰ１７９　４８６；ＥＰ２ ００　５６５；ＧＢ２１６７　４２１；ＥＰ１７１　０７４；Ａｇ＋ｉｃ、Ｂｉ ｏｌ、Ｃｈｅｍ、　５０　（１）、　１９８６．　ｐ、　２４７で記載されてい る。

特に好ましいペルオキシダーゼは洗浄液の典型的ｐＨ。

即ち６．５〜１０．５、好ましくは６．５〜９．５、最も好ましくは７．５〜９ ．５のｐＨで活性であるものである。このような酵素は、例えばＲ，Ｅ、Ｃｈｉ ｌｄｓ　ａｎｄ　Ｗ、Ｇ、Ｂａ＋ｄｓｌｅＹ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１．１４５ ．１９７５．９ｐ、　９３−１０３に記載されたＡＢＴＳアッセイを用いて、好 アルカリ性微生物による関連酵素産生物についてスクリーニングすることにより 単離される。

他の好ましいペルオキシダーゼは、良好な熱安定性と、非イオン系、カチオン系 またはアニオン系界面活性剤、洗剤ビルダー、リン酸等のような常用洗剤成分に 対する良好な安定性を示すものである。

他のグループの有用なペルオキシダーゼはクロロおよびブロモペルオキシダーゼ のようなハロペルオキシダーゼである。

更に、ペルオキシダーゼ酵素は、その酵素をコードするＤＮＡ配列と、その酵素 をコードするＤＮＡ配列を発現させる機能をコードするＤＮＡ配列とを保有した 組換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細胞を、その酵素を発現させる条件 下で培地中において培養し、その酵素を培養物から回収することからなる方法に より産生されうるちのであってもよい。

その酵素についてコードするＤＮＡ断片は、例えば、前記微生物のもののような 関心ある酵素を産生ずる微生物のｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーについて確 立し、酵素の全または一部アミノ酸配列に基づき合成されたオリゴヌクレオチド プローブとのハイブリツド形成によるような慣用的操作で陽性クローンについて スクリーニングするか、あるいは適切な酵素活性を発現するクローンについて選 択するか、あるいは天然酵素に対する抗体と反応性であるタンパク質を産生ずる クローンにつ（１て選択することにより単離してもよい。

選択されると、ＤＮＡ配列は、特定の宿主生物で酵素を発現させる適切なプロモ ーター、オペレーターおよびターミネータ−配列と、問題の宿主生物でベクター を複製させうる複製源とを含んだ適切な複製発現ベクター中に挿入される。

次いで、得られた発現ベクターは真菌細胞のような適切な宿主細胞中に組み込ま れて形質転換するが、その好まし゛い例はアスペルギルスの種、最も好ましくは アスペルギルス・オリザまたはアスペルギルス・ニガーである。

真菌細胞は、それ自体公知の方法で、プロトプラスト形成およびプロトプラスト の形質転換、しかる後細胞壁の再生を含めたプロセスにより形質転換してもよ（ 鴬。宿主微生物としてアスペルギルスの使用は（ノボ・インダストリ社の）ＥＰ 第２３８．０２３号明細書で記載されており、その内容は参考のため本明細書の 開示の一部とされる。

一方、宿主生物は細菌、特にストレプトミセスおよびバチルスの株または大腸菌 でもよい。細菌細胞の形質転換は、例えばＴ、Ｍａｎｉａｔｉｓ　ａｔ　ａｌ、 、Ｍｏ１ｅｃｕｌａ＋　Ｃｌｏｎｉｏｇ：Ａ　Ｌａｂｏ＋ａｊｏＢ　Ｍａｎｕａ ｌ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　）Ｉｘ＋ｂｏ＋、　１９８２で記載されたように 、常法に従い行える。

適切なりＮＡ配列のスクリーニングおよびベクターの構築も標準操作により実施 してよい（ｃｌ、Ｔ、Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔａｌ、、前掲）。

形質転換された宿主細胞を培養するために用いられる培地は、問題の宿主細胞を 増殖させる上で適したいかなる慣用的な培地であってもよい。発現された酵素は 好都合には培地中に分泌され、遠心または濾過による培地からの細胞の分離、硫 酸アンモニウムのような塩による培地のタンパク質性成分の沈降後、イオン交換 クロマトグラフィー、アフイニテイクロマトグラフイー等のようなりロマトグラ フイー操作を含めた周知の操作によりそれから回収される。

初めにまたはそのプロセス中に、Ｈ２Ｏ２は例えば０．００１〜５　ｍＭ、特に ０．０１〜１ｍＭの量で加えられる。コプリヌスのペルオキシダーゼを用いると きには０．０１〜０．２５ｍＭのＨ２Ｏ２が好ましく、Ｂ、プミルスのペルオキ シダーゼでは０．１〜１ｍＭＨ２Ｏ２である。

過酸化水素は過酸化水素またはその前駆体、好ましくはベルボレートまたはベル カーボネートとして加えられる。使用できる過酸化水素前駆体の量は選択される ペルオキシダーゼの具体的性質に依存し、例えばコプリヌスのペルオキシダーゼ は５％以下でベルボレートを含有した洗剤組成物に用いられるべきである。

本発明による方法では、過酸化水素形成用に酵素的方法を利用することが望まし い。このため、本発明による方法では初めにまたは洗浄および／またはすすぎ工 程中に過酸化水素を生成しうる酵素系（即ち、酵素およびそのための基質）を更 に加えてもよい。

過酸化水素生成系の１つのこのようなカテゴリーには、分子状酸素と有機または 無機基質を各々過酸化水素と酸化基質に変換することができる酵素が含まれる。

これらの酵素は低レベルの過酸化酵素しか生成しないが、それらはペルオキシダ ーゼの存在が生成する過酸化水素の効率的な利用を保証することから、本発明の 方法でかなり有利に用いられる。

好ましい過酸化水素生成酵素は、洗剤組成物中に含有されることが都合よく、安 価で容易に入手しうる基質で作用するものである。このような基質の例は、グル コースオキシダーゼによる過酸化水素生成のために利用されるグルコースである 。適切なオキシダーゼとしてはフェノール類および関連物質のような芳香族化合 物で作用するもの、例えばカテコールオキシダーゼ、ラッカーゼがある。他の適 切なオキシダーゼは尿酸オキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、アルコール オキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ、アミログルコシダ ーゼおよびコレステロールオキシダーゼである。

好ましい酵素系はアルコールおよびアルデヒドオキシダーゼである。

顆粒洗剤用に更に好ましい系には固体アルコール類、例えばグルコースがあるが 、これは酸化でグルコースオキシダーゼにより触媒されてグルクロン酸になり、 過酸化水素を形成する。

液体洗剤用に更に好ましい系には、例えば溶媒としても作用する液体アルコール 類が含まれる。例えばエタノール／エタノールオキシダーゼである。

本発明による組成物で用いられるオキシダーゼの量は、洗濯で１分間当たり０． ０１〜１０ｐｐｍのＡｖＯを一定に生成する上で少くとも十分であるべきである 。例えばグルコースオキシダーゼでは、これは一定通気下５０〜５０００　Ｕ／ ｌ　グルコースオキシダーゼ、０．００５〜０．５％グルコースのときに室温お よびｐＨ６〜１１、好ましくは７〜９で達成できる。

初めにまたは洗浄および／またはすすぎ工程中におけるペルオキシダーゼ用のも う１つの酸化性基質の添加は、用いられるペルオキシダーゼの染料移り抑制効果 を高める。これは着色物質の漂白または他の変化に関与するこの基質の短時間ラ ジカル、または他の酸化状態の形成に起因すると考えられる。このような酸化性 基質の例は金属イオン、例えばＭｎ　、ハライドイオン、例えばクロリドもしく はプロミドイオンまたはフェノール類のよう２．４−ジクロロフェノールである 。本目的のために用いてよいフェノール性化合物の他の例は、Ｍ、Ｋａｔ＋＋　 ａｎｄ　Ｓ、Ｓｈｉｍｉｓｕ、Ｐｌａｎｔ　Ｃａ１ｌ　ＰｔＢ＋ｉｏ１．２６（ ７）、１９８５．ｐｐ、ｌ２９１−１３０１　（ｃｌ特に表１）またはＢ、Ｃ， ５ａｕｎｄｅｒ＋　ｅｌ　ａｔ、、前掲、ｐｐ。

１４１以下に示されたものである。添加される酸化性基質の量は約１μＭ〜１ｍ Ｍであることが適切である。

本発明による方法において、ペルオキシダーゼは典型的には洗剤組成物の成分と して加えられ、洗浄液体１リツトル当たり０．０１〜１００ｍｇ酵素／１洗浄液 の量で加えられる。このようにして、それは非粉散性顆粒、液体、特に安定化さ れた液体または保護された酵素の形で洗剤組成物中に含有される。非粉散性顆粒 は例えば米国特許第４．１０６．９９１号および第４．６６１．４５２号明細書 （双方ともノボ・インダストリ社）で開示されたように調製され、場合により当 業界で公知の方法によりコーティングしてもよい。液体酵素調製物は、例えば確 立された方法に従いプロピレングリコールのようなポリオール、糖もしくは糖ア ルコール、乳酸またはホウ酸を加えることで安定化させてもよい。他の酵素安定 剤は当業界で周知である。保護された酵素はＥＰ第２３８．２１６号明細書で開 示された方法に従い調製される。洗剤組成物はペルオキシダーゼ用の基質を１種 以上含んでもよい。通常、本発明の洗剤組成物の溶液のｐＨは好ましくは７〜１ ２、特に７．５〜９．５である。洗浄ｐＨは選択されたペルオキシダーゼに依存 し、例えばコプリヌスのペルオキシダーゼは９．５以下の洗浄ｐＨで適用される べきである。

洗剤添加物 本発明の組成物は常用量でこのような洗剤組成物の常用成分を含有することがで きる。このため、アニオン系、ノニオン系、両性、双極性または常用されないカ チオン系の有機界面活性剤およびそれらの混合物が存在してもよい。適切な界面 活性剤は当業界で周知であり、このような化合物の詳細なリストは米国特許第３ ，７１７，６３０号および米国特許出願第５８９，１１６号明細書に示されてい る。

本発明で有用な洗剤組成物は１〜９５％、好ましくは５〜４０％のノニオン系、 アニオン系、双極性またはそれらの混合物を含有する。洗剤ビルダーは無機また は有機、リン酸または非リン酸、水溶性または不溶性および他の水溶性の塩とし て存在でき、この種類の塩も有機洗剤が存在するか否かにかかわらず用いてよい 。適切なビルダーの記載は米国特許第３，９３６．５３７号および米国特許出願 第５８９，１１６号明細書で示されている。

洗剤ビルダーは０〜５０％、好ましくは５〜４０％で存在する。

洗剤組成物で用いられる他の成分、例えば起泡増進または抑制剤、酵素安定剤ま たは活性化剤、汚物懸濁剤、汚物放出剤、蛍光増白剤、研磨剤、殺菌剤、変色防 止剤、着色剤および香料も用いてよい。

これらの成分、特に酵素、蛍光増白剤、着色剤および香料は、それらが組成物の 漂白成分と適合するように選択されることが好ましい。

本発明による洗剤組成物は液体、ペーストまたは顆粒形である。酵素はあらゆる 便利な形で、例えば粉末または液体として処方することができる。酵素は酵素安 定剤の含有により液体中で安定化させてもよい。液体洗剤は安定化された過酸化 水素前駆体も更に含有してよい。本発明による顆粒組成物は“コンパクト形”で もよく、即ちそれらは慣用的な顆粒洗剤より比較的高い密度、即ち５５０〜９５ ０　ｇ／ｌを有してもよく、このようなケースにおいて、本発明による顆粒洗剤 組成物は慣用的な顆粒洗剤と比較して少量の“無機充填剤塩”を含有し、典型的 な充填剤塩はサルフェートおよびクロリドのアルカリ土類金属塩、典型的には硫 酸ナトリウムであり、“コンパクト”洗剤は典型的には１０％以下で充填剤塩を 含む。

本発明は、着色布帛を伴う布帛洗濯操作中に出会う溶解懸濁染料の布帛間蚤こお （する染料移りを抑＠ｉｌｌするための方法にも関する。

その方法では前記のよう（こして布帛を洗濯溶液と接触させる。

本発明による方法は洗浄工程過程で実施されること力（都合よい。洗浄工程は好 ましく（よ５〜７５℃、特↓こ２０〜６０℃で実施される。処理溶液のｐＨＩよ 好ましくｌよ７〜１２、特に７〜９．５である。

本発明のによる方法および組成物（よ洗濯操作中で追加的に用いてもよい。

下記例は本発明と、それ力１ら得られた予想外に優れたカラーケア効果を説明す るものである。

邑↓ １１↓憾五１づ１（ザエユヒ旦Ｖ時 下記試験を行った： 試験条件： 洗浄温度−６０℃（昇温サイクル） 洗浄時間：４０ｍ１ｎ ｐ）ｌ＝７．５ 水硬度：４ｍω０１７シ 洗剤濃度＝１％ 洗剤組成：ｃｒｌ、ＥＰＡ３５０　０９８、例１セルラーゼ： １）ノボ・ノルディスク（Ｎｏｖａ　Ｎｏ＋ｄｉｓｋ）供給のセルザイム（Ｃｅ 山！７ｍ！■）＝参照例２）４３ｋＤエンドグルカナーゼ ＝本発明によるセルラーゼ 試験結果： セルラーゼによるＣ１４−ＣＭＣ除去％無セルラーゼ洗剤（＝参照例）　Ｏ 洗剤子セルザイム■ １、５ｍｇタンパク質／Ｌ（１５０ｘ　１０−６％）　１２．７３、　Ｑａ＋ｇ タンパク質／Ｌｌ（１（［１８−６％）　１７．７４．５ｍｇタンパク質／Ｌ　 （４５ＱＸ　１Ｇ−６％］　２１．５洗剤＋４３ｋＤエンドグルカナーゼ ９．３ｍｇタンパク質八　へ３０ＸｌＯ’％）　２０．３結果の考察： 上記データは、市販セルザイムよりも、本発明のセルラーゼに関する請求の範囲 に記載されたノくラメ−ターの優秀性を証明している。

し ２組各４タイプの洗剤組成物を調製するが、すべてコンパクト顆粒に基づいてい る。

このようなコンパクト顆粒洗剤組成物は典型的には下記成分を含有している。

直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）１１％アルキルサルフェート　５ ％ ノニオン系　６％ クエン酸三ナトリウム　１５％ ゼオライト　３２％ クエン酸　６％ ポリマー　４％ キレート化剤　（１，２％ 硫酸ナトリウム　５％ ケイ酸ナトリウム　２％ ベルボレート　０．５％ フェノールスルホネート　０．１％ 上記洗剤組成物を下記のよう１ご補充した：Ａ）４３ｋｌ）エントクルカナーゼ およびペルオキシダーゼ含有せず＝参照例 Ｂ）４３ｋＤエンドグルカナーゼ含有 Ｃ）ペルオキシダーゼ含有 Ｄ）４３ｋＤエンドグルカナーゼおよびペルオキシダーゼ含有 Ｃ）ペルオキシダーゼ含有 Ｄ）セルザイム■およびペルオキシダーゼ含有各組の第一タイプの洗剤組成物は セルラーゼおよびペルオキシダーゼを全く含有していない（参照組成物：Ａ）。

第１組の洗剤組成物において、４３ｋＤエンドグルカナーゼは２ｍｇ酵素タンパ ク質／洗浄溶液リットル（５５ｃｅＶＵ／リツトル）のレベルで加える。第２組 の洗剤組成物において、セルザイム■は７６ｍｇ酵素タンパク質／洗浄溶液リッ トル（５５ｃｅｖｕ／リットル）のレベルで加える。

試験条件ニ ーミール（Ｍｉｅｌｅ）洗浄機で試験 −コツトンプログラム、低水レベル（１８リツトル）、一温度４０℃ 一洗濯物の内訳 １）清潔な洗濯物１ｋｇニ ーコツトン１５０ｇ　（テリー） 一編布コットン１５０ｇ　（下着） −織布コツトン２００ｇ ２）白色度等吸付は用；３種の白色で汚れのある物品（各４つの複製物） ３）酸性赤色１５１号染料付着１０　Ｘ　５　ｃｍナイロン：低い染料移動レベ ルにするため ４）典型的洗濯汚物源を与えるために調製された汚れ一硬水（１５ｇ＋ｓ／ｇｌ ｌｎ） −洗剤濃度＝０．６％ 試験操作： 試験の意図は、試験される組成物と参照組成物との間で、漸次的に４回洗濯され たテキスタイル品の白色度を比較するため等である。３種の汚れのある物品をこ の試験のために用いた。物品の各処理毎に、４つの複製物を用いた。試験される 物品は平坦な中間色勾配表面上で光源と平行に並べる。光源として蛍光を用いる ；標準日光（Ｄ６５）と適合するようにデザインされた１０８０ワツトの光を出 す２７フイリツプス（Ｐｈｉｌｉｐｓ）　“コールド”カラーＴＬ４０１５７゜ 色Ｔ０は７４００　Ｋであり、色反射率は優れており（９４）、光出力は４６　 ＬＭ／Ｗである。差異はパネルスコア単位（ｐｓＩ＋）で記録するが、正であれ ば参照処理よりも性能上よい。

評価基準（ＰＳＵ等級） ０＝同等 ＰＳＵ等級データは統計的数え直しであり、４複製物の平均が出され、ＬＳＤ　 （最小有意差）力（表１および１１で示されている。

表Ｉ： 上記結果は、本発明のペルオキシダーゼ／４３ｋＤ組合せが双方の成分の個別作 用の合計よりも統計上有意に優れた性能を有することを明らかに示している。

例ＩＩＩ　−Ｈ１＋ 下記組成物を製造する。

ａ）コンパクト顆粒洗剤・例１１〜１ｖ例　Ｉｌｌ　ＩＶ 直鎖アルキルベンゼンスルホネート　１１．４　１０．７０獣脂アルキルサルフ エ−ｈ　１．８０　２．４０Ｃ４５フルキルサルフエート　３．００　３．１０ ７エトキシル化Ｃ４５アル−’−ル４．００　４．００１１エトキシル化獣脂ア ルコール　１．８０　１．８０分散剤　０．０７　０．１ シリコーン液　０．８０　０．８０ クエン酸三ナトリウム　１４．００　１５．０［ｌクエン酸　３．００　２．５ ０ ゼオライト　３２．５０　３２．１０ マレイン酸アクリル酸コポリマー　５．００　５．００ＤＥＴＭＰＡ　１．００ 　Ｇ、２Ｇ セルラーゼ４３　ｋＤ１ンドグルカナーゼ　０．０３　０．０２５アルカラーゼ 　０．６０　０．６０ リパーゼ　０．３６　０．４０ アミラーゼ　０．３０　Ｇ、３゜ ケイ酸ナトリウム　２．００　２．５０硫酸ナトリウム　３．５０　５．２０ ＰＶＰ　Ｏ，３０Ｇ、５０ ベルボレート　０．５　１ フエノールスルホネート　０．１　０．２ペルオキシダーゼ　０．１　０．１ その他　１００まで ｂ）慣用的顆粒洗剤二側Ｖおよびｖ１ 硫酸ナトリウム　１５．０　＋８．０ ゼオライトＡ　２６．８　２２．０ ナトリウムニトリロトリアセテート　５．０　５．０セルラーゼ４３ｋＤエンド グルカナーゼ　Ｏ，０２Ｇ、０３ＰＶＰ　Ｏ，５０，７ ＴＡＥＤ　３．０　３．０ ホウ酸　４．０− ベルボレート　０，５１ フエノールスルホネート　０，１　０．２ペルオキシダーゼ　０．１　０．２ その他　＋００まで Ｃ）液体洗剤−例’／Ｉ［およびｖ１１１Ｃ１２−１４アルケニルコハク酸　３ ．１１　８．０クエン酸−水和物　１（１，Ｑ　１５．０ナトリウムＣ１２−１ ５アルキルサルフェート８．０　ｇ、０セルラーゼ４３ｋＤｚンドグルカナーゼ 　［１，２［１，０５ＰＶＰ　１．０　２．０ 起泡抑制剤　１１５　０．１５ 水およびその他　１００部まで 配列表 ＣＧＡＡＡＴＧＡＣＡ　ＣＴＣＣＣＡＡＴＣＡ　ＣＴＧＴＡＴＴＡＧＴ　ＴＣＴ ＴＧＴＡＣＡＴ　ＡＡＴＴＴＣＧＴＣＡ　ＴＣＣＣＴＣＣＡfＧ　１０２４ ＧＡＴＴＧτＣＡＣＡ　ＴＡＡＡＴｃＣＡＡＴ　ＣＡＧＩ、ＡＡＣＡＡｉ　［、 ＡＧＴＡＣ１０６０配列番号２： Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ＧＩｙ　Ｖａｌ　 Ａｌａ　丁ｙｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇ１ｎ４５Ｓｏ　５５ Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　 Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ａｌａ　ＴｈｒＳｅｒ　Ｉｌ＠Ａｌ ａ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｃｙｓ　Ｃｙ ｓ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｇ＋ｕＬｅｕ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ 　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ 　Ｖａｌ　Ｇ１ｎ９５　ｔｏｏ　１０５ Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｃａｌｙ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ 　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｓ■ １１０　ＩＩｓ　１２０ 、ｌｌｅ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　１１ｅ　Ｐｈｅ 　Ａｓｐ　Ｃ１ｙ　Ｃｙｓ　ｌｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｐｈ■ ＋２５１３０　１３５ Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ａｒｇτｙｒ　Ｇｌｙ　Ｇ ｌｙ　ｌｉｅ　Ｓｅｒ　Ｓ＠ｒ　Ａｒｑ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ１４０　１４５　１５ ０　＋５５ Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　 Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｔｒｐ　Ａｒｑ　Ｐｈ＠Ａｓｐ　Ｔｒｐ：Ｐ ｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｓ ｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｒｑ　Ｇｉｎ　Ｖａ＋Ｇｌｎ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇｌ ｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｒｑ　Ｔｈｒ　ＧＴｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｑ　Ａｒ ｇ　Ａｓｎ　Ａｓｐ＋９０　１９５　２００ Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｖａｔ　Ｃａｎ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　 Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ＾ｌａ　ＧｌｕＡｒｇ　Ｔｒｐ　Ａｌ ａ　Ｇｉｎ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｇ’１．ｙ　Ｔｒｐ　Ｓｅｒ　 Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　”’　Ｔｈｒ　Ｃｙ■ Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　 Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｔｒｐ　Ｔｙｒ　Ｈａｓ　Ｇｉｎ　Ｃｙｓｅｕ 配列番号３： にＡＡＴＴＣＧＣＧＧ　（：Ｃ（、ＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＴＣＡＴＴＣＡ　ＴＴ ＣＴＴＴＡＧＡＡ　ＴＴＡＣＡＴＡＣＡＣＴＣＴＣＴＴＴＣ`Ａ　６０ ＴＣＣＴＣＴＣＡＴＧ　ＡＧＣＡＧＧＣＴＴＧ　ＴＣＡＴＴＧＴＡＴＡ　ＧＣＡ ＴＧＧＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣＣＡＡＧ　ＴＧＴＴＣＧＡＣＣb１３３４ ＴＴＧＴＴＧＴＡＣＡ　ＴＡＧＴＡＴＡＴＣＴ　ＴＣＡＴＴＧＴＡＴＡ　ＴＡＴ ＴＴＡＧＡＣＡ　ＣＡＴＡＧＡＴＡＧＣＣＴＣＴＴＧＴＣＡf　１３９４ ＣＧＡＣＭＣＴＧＧ　ＣＴＡＣＡＡＭｆ；Ａ　ＣＴＴＧＧＣＡＧＧＣＴＴＧＴＴ ＣＭＴＡ　ＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴ　ＴＴＣＣＴＣＣＡＴＡ　P４５４ ＮμＡυＡＭＡＡＭ〜φん功　１４７３配列番号４゜ しｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｈａ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　 Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｇ１ｎ２７５　、２８０　 ２８５ Ｉｈｒ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｖａｔ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　 Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｇ１ｎ平成　６　年　６　 月　７　日 特　許　庁　長　官　殿 ｌ　事件の表示 平成　５年特許願第５０８５４２号 ＰＣＴ／ＵＳ　９２１０９２０４ ２　発明の名称 染料移り抑制組成物 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 ザ、ブロクター、エンド、ギャンブル。

カンパニー ５　補正命令の日付 発送日　平成　年　月　日 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＳＥ）、０ Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ ，ＳＮ、　ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ３， ＦＩ、　ＨＵ。

ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、Ｎ０２ＰＬ、　ＲＯ，ＲＵ、　Ｓ Ｄ、　ＵＳ

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．ペルオキシダーゼ活性を示す酵素 −過酸化水素または過酸化水素前駆体、または過酸化水素を生成しうる酵素系 −追加の酸化性基質および −セルラーゼ を含んでなり、該セルラーゼが試験溶液中セルラーゼタンパク質２５×１０−６ 重量％でＣ１４ＣＭＣ法に従い固定放射性標識カルボキシメチルセルロースを少 くとも１０％除去するものであることを特徴とする、染料移り抑制組成物。
2. ２．セルラーゼが、ヒューミコラ・インソレンスＤＳＭ１８００に由来する高度 精製約４３ｋＤセルラーゼまたは上記４３ｋＤエンドグルカナーゼと相同的であ るセルラーゼに対する抗体と免疫反応性である、均一なエンドグルカナーゼ成分 から本質的になるものである、請求項１に記載の染料移り抑制組成物。
3. ３．セルラーゼのエンドグルカナーゼ成分が約５．１の等電点を有するものであ る、請求項２に記載の染料移動抑制組成物。
4. ４．エンドグルカナーゼ成分が、そのエンドグルカナーゼ成分またはそのエンド グルカナーゼ成分の前駆体をコードするＤＮＡ配列と、エンドグルカナーゼ成分 またはその前駆体をコードするＤＮＡ配列を発現させる機能をコードするＤＮＡ 配列とを保有した組換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細胞を、エンドグ ルカナーゼ成分またはその前駆体を発現させる条件下で培地中において培養し、 エンドグルカナーゼ成分を培養物から回収することからなる方法により産生され 得るものである、請求項２または３に記載の洗剤組成物。
5. ５．セルラーゼが添付の配列表の配列番号２で示されたアミノ酸配列を有するか 、またはエンドグルカナーゼ活性を示すそのホモログである、請求項１に記載の 染料移り抑制組成物。
6. ６．セルラーゼがヒューミコラの種、例えばヒューミコラ・インソレンスにより 産生され得るものである、請求項３に記載の染料移り抑制組成物。
7. ７．セルラーゼ化合物が、添付の配列表の配列番号４で示されたアミノ酸配列を 有するエンドグルカナーゼ酵素であるか、またはエンドグルカナーゼ活性を示す そのホモログである、請求項１に記載の洗剤組成物。
8. ８．エンドグルカナーゼ酵素がフサリウムの種、例えばフサリウム・オキシスポ ルムにより産生され得るものである、請求項７に記載の洗剤組成物。
9. ９．酵素が、その酵素をコードするＤＮＡ配列を含んだＤＮＡ構築物により産生 されたものである、請求項５〜８のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
10. １０．前記ＤＮＡ配列が添付の配列表の配列番号１または３で示されたものであ る、請求項９に記載の洗剤組成物。
11. １１．宿主細胞が、トリクロデルカまたはアスペルギルスのような真菌の株、好 ましくはアスペルギルス・オリザまたはアスペルギルス・ニガーあるいはハンセ ヌラまたはサッカロミセスの株、例えばサッカロミセス・セレビサの株に属する 酵母細胞である、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
12. １２．宿主細胞が、細菌の株、例えばバチルス、ストレプトミセスまたは大腸菌 である、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
13. １３．ペルオキシダーゼ活性を示す酵素がコプリヌスまたはＢ．プリルスの株に 由来するものである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の染料移り抑制組成 物。
14. １４．過酸化水素前駆体がペルポレートまたはペルカーボネートである、請求項 １〜１３のいずれか一項に記載の染料移り抑制組成物。
15. １５．ペルポレートのレベルが洗浄溶液の１μＭ〜１０ｍＭである、請求項１４ に記載の染料移動抑制組成物。
16. １６．追加酸化性基質が金属イオン、ハライドイオンまたはフェノールのような 有機化合物、例えばＰ−ヒドロキシケイ皮酸、２，４−ジクロロフェノールまた はフェノールスルホネートから選択されるものである、請求項１〜１５のいずれ か一項に記載の染料移り抑制組成物。
17. １７．過酸化水素を生成しうる酵素系がグルコースオキシダーゼ、尿酸オキシダ ーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、アミンオキシダー ゼ、アミノ酸オキシダーゼおよびコレステロールオキシダーゼからなる群より選 択されるオキシダーゼである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の染料移り 抑制組成物。
18. １８．非粉散性顆粒、液体、特に安定化された液体または保護された酵素系の形 をした洗剤添加物である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の染料移り抑制 組成物。
19. １９．請求項１〜１８のいずれか一項に記載された洗剤添加物を含んでなる、洗 剤組成物。
20. ２０．顆粒形、コンパクト顆粒形または液体形である、請求項１９に記載の洗剤 組成物。
21. ２１．布帛が洗浄液中で一緒に洗浄および／またはすすぎ洗いしたときに染色布 帛から他の布帛へのテキスタイル染料の移りを抑制するための方法であって、上 記布帛を請求項１〜２０のいずれか一項で記載された組成物と接触させ、ペルオ キシダーゼが０．０１〜１００ｍｇ／１洗浄溶液のレベルで用いられ、過酸化水 素のレベルが洗浄溶液の０．００１〜５ｍＭであり、追加酸化性基質の絶対量が １μＭ〜１ｍＭであり、セルラーゼが０．００５〜４０ｍｇ酵素タンパク質／洗 浄溶液リットルの量で加えられる、方法。