JPH0757178B2 - プロテインａで被覆した生物学的粒子及びその用途 - Google Patents
プロテインａで被覆した生物学的粒子及びその用途Info
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- JPH0757178B2 JPH0757178B2 JP61201376A JP20137686A JPH0757178B2 JP H0757178 B2 JPH0757178 B2 JP H0757178B2 JP 61201376 A JP61201376 A JP 61201376A JP 20137686 A JP20137686 A JP 20137686A JP H0757178 B2 JPH0757178 B2 JP H0757178B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、プロティンＡで被覆した生物学的粒子に関
し、さらに詳しくは抗体感作浮遊細胞に取り込まれる機
能を有し、生化学的研究試材等としての有用性を有する
生物学的粒子及びその用途に関するものである。
し、さらに詳しくは抗体感作浮遊細胞に取り込まれる機
能を有し、生化学的研究試材等としての有用性を有する
生物学的粒子及びその用途に関するものである。
（従来の技術） 各種細胞に外来の物質を取り込ませる方法としては、
（１）マイクロマニピュレイターやインジェクトスコー
プを用いるいわゆる細胞内注射法〔ジャーナル・オブ・
サイエンシーズ（J.Sci.Ser.,）B.９,307（1914）及び
“エリスロポイエシス・アンド・ディファレンシエーシ
ョン・イン・フレンド・ロイケミア・セル”（“Erythr
opoiesis and differentiation in Friend leukemia ce
lls"），エルスビアー／ノース−ホーランドバイオメデ
ィカルプレス（Elsvier/North−Holland BiomedicalPrc
e），ビー・ブイ・アムステルダム（B.V.Amsterdam（19
80）,in Press.等〕、（２）リポゾームを用いてリポゾ
ーム内の物質を細胞内に注入する方法〔“メソッドイン
セルビオロジー”（“Method in Cell Biology"）アカ
デミー・プレス、ニユーヨーク（Acad.Press,Nes Yor
k）、14,34−68頁（1976）〕、（３）HVJウイルスを用
いる方法〔プロシーデングス・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシーズ（Proc.Natl.Acad.Sc
i.）USA,72,4071頁（1975）〕、また赤血球中に取り込
ませた物質を細胞融合の原理で取り込ませる方法〔ネイ
チャー（Nature）249,449頁（1974）〕等が知られてい
る。
（１）マイクロマニピュレイターやインジェクトスコー
プを用いるいわゆる細胞内注射法〔ジャーナル・オブ・
サイエンシーズ（J.Sci.Ser.,）B.９,307（1914）及び
“エリスロポイエシス・アンド・ディファレンシエーシ
ョン・イン・フレンド・ロイケミア・セル”（“Erythr
opoiesis and differentiation in Friend leukemia ce
lls"），エルスビアー／ノース−ホーランドバイオメデ
ィカルプレス（Elsvier/North−Holland BiomedicalPrc
e），ビー・ブイ・アムステルダム（B.V.Amsterdam（19
80）,in Press.等〕、（２）リポゾームを用いてリポゾ
ーム内の物質を細胞内に注入する方法〔“メソッドイン
セルビオロジー”（“Method in Cell Biology"）アカ
デミー・プレス、ニユーヨーク（Acad.Press,Nes Yor
k）、14,34−68頁（1976）〕、（３）HVJウイルスを用
いる方法〔プロシーデングス・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシーズ（Proc.Natl.Acad.Sc
i.）USA,72,4071頁（1975）〕、また赤血球中に取り込
ませた物質を細胞融合の原理で取り込ませる方法〔ネイ
チャー（Nature）249,449頁（1974）〕等が知られてい
る。
（発明が解決しようとする問題点） 従来技術によればそれぞれ目的に応じた方法が選択され
ているが、いずれもμｍ単位の物質を効率良く他の細胞
に取り込ませることが出来ないという欠点を有してい
る。
ているが、いずれもμｍ単位の物質を効率良く他の細胞
に取り込ませることが出来ないという欠点を有してい
る。
そのため、ある程度の大きさをもつ各種の生物学的粒子
の各種細胞に対する作用・効果を細胞レベルで検討する
ことが不可能であった。
の各種細胞に対する作用・効果を細胞レベルで検討する
ことが不可能であった。
一方、本発明者はプロティンＡを担持する生物学的粒子
の各種作用について研究したところ、上記従来技術では
細胞に取り込ませることのできない大きさの粒子をプロ
ティンＡで被覆したものが抗体感作浮遊細胞に吸着する
ばかりでなく、その細胞内に取り込まれることを見い出
し本発明を完成した。
の各種作用について研究したところ、上記従来技術では
細胞に取り込ませることのできない大きさの粒子をプロ
ティンＡで被覆したものが抗体感作浮遊細胞に吸着する
ばかりでなく、その細胞内に取り込まれることを見い出
し本発明を完成した。
なお、プロティンＡを適当な担体に結合させ、抗体産生
細胞の定量、IgGの精製等に用いることは知られている
（特開昭49−133518号公報等）が、抗体感作浮遊細胞に
取り込まれる機能を有するプロティンＡを結合せしめた
粒子は従来既知の文献に未載である。
細胞の定量、IgGの精製等に用いることは知られている
（特開昭49−133518号公報等）が、抗体感作浮遊細胞に
取り込まれる機能を有するプロティンＡを結合せしめた
粒子は従来既知の文献に未載である。
（問題点を解決するための手段） しかして、本発明は抗体感作浮遊細胞に取り込ませうる
プロティンＡで被覆した生物学的粒子及びその用途が提
供される。
プロティンＡで被覆した生物学的粒子及びその用途が提
供される。
本発明にいうプロティンＡとは、通常は黄色ブドウ球菌
（Staphylococcus aureus）の細胞壁に由来するもので
あるが、それが組み換えDNA手法を用いて調製されるも
の〔例えば、ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（J.
Bacteriol.）159,713,1984;特開昭59−113890号公報
等〕をも包含するものであって、哺乳動物の免疫グロブ
リンＧ（IgG）のFe部分に特異的に結合しうるタンパク
質をいう。
（Staphylococcus aureus）の細胞壁に由来するもので
あるが、それが組み換えDNA手法を用いて調製されるも
の〔例えば、ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（J.
Bacteriol.）159,713,1984;特開昭59−113890号公報
等〕をも包含するものであって、哺乳動物の免疫グロブ
リンＧ（IgG）のFe部分に特異的に結合しうるタンパク
質をいう。
次に、プロテインＡで被覆した生物学的粒子にいう粒子
とは、微生物細胞をいい、例えば、黄色ブドウ球菌、大
腸菌、ネズミチフス菌等の病原微生物細胞を挙げること
ができる。
とは、微生物細胞をいい、例えば、黄色ブドウ球菌、大
腸菌、ネズミチフス菌等の病原微生物細胞を挙げること
ができる。
かかる粒子をプロティンＡで被覆するには、それ自体公
知の方法例えば（１）粒子に塩化クロムあるいはグルタ
ールアルデヒド、ジイソシアネート類のごとき複数の官
能基を有する交差結合性試薬を用いてプロティンＡと粒
子を結合せしめるか（例えば、特開昭49−133597号公
報）、（２）粒子を構成している抗原に対する抗体を用
意し、まず抗体で粒子を感作し、次いで可溶性プロティ
ンＡを直接もしくは二次抗体を介して結合させる方法が
ある。かかる抗体としては、ポリクロナール抗体もしく
はモノクロナール抗体が用いられる。ポリクロナール抗
体は抗原物質をウサギに免疫して得られた抗血清が、モ
クロナール抗体としてはKohler ＆ Milsteinの方法〔ネ
イチャー（Nature），256:495〜497,1975〕に従って製
造したものを用いることができる。
知の方法例えば（１）粒子に塩化クロムあるいはグルタ
ールアルデヒド、ジイソシアネート類のごとき複数の官
能基を有する交差結合性試薬を用いてプロティンＡと粒
子を結合せしめるか（例えば、特開昭49−133597号公
報）、（２）粒子を構成している抗原に対する抗体を用
意し、まず抗体で粒子を感作し、次いで可溶性プロティ
ンＡを直接もしくは二次抗体を介して結合させる方法が
ある。かかる抗体としては、ポリクロナール抗体もしく
はモノクロナール抗体が用いられる。ポリクロナール抗
体は抗原物質をウサギに免疫して得られた抗血清が、モ
クロナール抗体としてはKohler ＆ Milsteinの方法〔ネ
イチャー（Nature），256:495〜497,1975〕に従って製
造したものを用いることができる。
かくして得られるプロティンＡで被覆した生物学的粒子
は、それが数μｍの大きさを有するものであっても抗体
感作浮遊細胞に吸着し、さらにその細胞内に取り込まれ
る機能を有し、それ自体生化学的研究試料として有用で
あるばかりでなく、各種生理活性物質を包含せしめた場
合は、殺細胞剤もしくは細胞増殖剤として用いうる可能
性を有する。
は、それが数μｍの大きさを有するものであっても抗体
感作浮遊細胞に吸着し、さらにその細胞内に取り込まれ
る機能を有し、それ自体生化学的研究試料として有用で
あるばかりでなく、各種生理活性物質を包含せしめた場
合は、殺細胞剤もしくは細胞増殖剤として用いうる可能
性を有する。
なお、抗体感作浮遊細胞にいう浮遊細胞とは、リンパ系
細胞、腹水癌細胞等の浮遊培養できる細胞をいい、より
具体的には、マウス・エールリッヒ癌細胞やマウス・ミ
エローマ細胞等を包含する概念である。なお、かかる細
胞は各細胞を異種動物に注射することにより得られる抗
体を用いて抗体感作細胞とすることができる。
細胞、腹水癌細胞等の浮遊培養できる細胞をいい、より
具体的には、マウス・エールリッヒ癌細胞やマウス・ミ
エローマ細胞等を包含する概念である。なお、かかる細
胞は各細胞を異種動物に注射することにより得られる抗
体を用いて抗体感作細胞とすることができる。
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、
もとより本実施例により本発明が限定されるものではな
い。
もとより本実施例により本発明が限定されるものではな
い。
実施例１ ネズミチフス菌（東京慈恵会医科大学病院中央検査室由
来）をハート・インフュウジョン寒天平板上で37℃一晩
培養し生理的食塩水に懸濁する。菌を生理的食塩水で３
回洗ったのち0.6％の割合でホルマリンを加え37℃で一
晩放置する。ホルマリン処理菌を生理的食塩水で洗った
後生菌数にして１億個/mlの濃度に調整する。この菌液
を１週間に１回，計５回、ICRマウス（雌,5週令）に1ml
ずつ腹腔内接種を行う。最終注射後１週たったところで
心臓採血により全採血を行い抗血清を得た。この抗血清
を1000倍に希釈し等量の生理的食塩水に懸濁した1000万
個のあらたに培養したネズミチフス菌と37℃、30分間感
作させた。抗体感作菌を生理的食塩水で３回洗ったのち
抗マウスIgGウサギ抗血清と室温で30分反応させた。再
度生理的食塩水で３回洗った後100μg/mlの可溶性プロ
ティンＡを室温で30分反応させた。これを生理的食塩水
で３回洗って100万個の抗体感作細胞浮遊液に混合し
た。37℃で４時間反応させたのちギムザ染色を行ったと
ころ100％の細胞が１から６個の菌を取り込んでいるこ
とがわかった。
来）をハート・インフュウジョン寒天平板上で37℃一晩
培養し生理的食塩水に懸濁する。菌を生理的食塩水で３
回洗ったのち0.6％の割合でホルマリンを加え37℃で一
晩放置する。ホルマリン処理菌を生理的食塩水で洗った
後生菌数にして１億個/mlの濃度に調整する。この菌液
を１週間に１回，計５回、ICRマウス（雌,5週令）に1ml
ずつ腹腔内接種を行う。最終注射後１週たったところで
心臓採血により全採血を行い抗血清を得た。この抗血清
を1000倍に希釈し等量の生理的食塩水に懸濁した1000万
個のあらたに培養したネズミチフス菌と37℃、30分間感
作させた。抗体感作菌を生理的食塩水で３回洗ったのち
抗マウスIgGウサギ抗血清と室温で30分反応させた。再
度生理的食塩水で３回洗った後100μg/mlの可溶性プロ
ティンＡを室温で30分反応させた。これを生理的食塩水
で３回洗って100万個の抗体感作細胞浮遊液に混合し
た。37℃で４時間反応させたのちギムザ染色を行ったと
ころ100％の細胞が１から６個の菌を取り込んでいるこ
とがわかった。
実施例２ 実施例１と同じ要領で得られたネズミチフス菌をリン酸
緩衝食塩水（pH7.2,0.01Mリン酸バッファー＋0.15M NaC
l）中に１億個/mlの割合で懸濁し、これを1mlにビーカ
ーにとり等量の100μg/mlの可溶性プロティンＡを加え
てマグネチック・スターラーで攪拌しながら2.5％のグ
ルタールアルデヒドを3ml加え室温で30分反応させる。
この菌を生理的食塩水で３回洗って実施例１と同じ要領
で抗体感作細胞と反応させた。細胞による菌の取り込み
は実施例１とほぼ同じ結果が得られた。
緩衝食塩水（pH7.2,0.01Mリン酸バッファー＋0.15M NaC
l）中に１億個/mlの割合で懸濁し、これを1mlにビーカ
ーにとり等量の100μg/mlの可溶性プロティンＡを加え
てマグネチック・スターラーで攪拌しながら2.5％のグ
ルタールアルデヒドを3ml加え室温で30分反応させる。
この菌を生理的食塩水で３回洗って実施例１と同じ要領
で抗体感作細胞と反応させた。細胞による菌の取り込み
は実施例１とほぼ同じ結果が得られた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:42）
Claims (5)
- 【請求項１】抗体感作浮遊細胞に取り込ませうるプロテ
インＡで被覆した微生物細胞。 - 【請求項２】プロテインＡを抗体を介して微生物細胞に
結合せしめた特許請求の範囲第１項記載の微生物細胞。 - 【請求項３】微生物細胞がネズミチフス菌である特許請
求の範囲第１項または第２項記載の微生物細胞。 - 【請求項４】微生物細胞をプロテインＡで被覆すること
を特徴とする該細胞を抗体感作浮遊細胞に取り込ませる
方法。 - 【請求項５】抗体感作浮遊細胞がマウス・エールリッヒ
癌細胞またはマウス・ミエローマ細胞である特許請求の
範囲第４項の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61201376A JPH0757178B2 (ja) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | プロテインａで被覆した生物学的粒子及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61201376A JPH0757178B2 (ja) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | プロテインａで被覆した生物学的粒子及びその用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6359880A JPS6359880A (ja) | 1988-03-15 |
| JPH0757178B2 true JPH0757178B2 (ja) | 1995-06-21 |
Family
ID=16440046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61201376A Expired - Lifetime JPH0757178B2 (ja) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | プロテインａで被覆した生物学的粒子及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0757178B2 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60138464A (ja) * | 1983-12-27 | 1985-07-23 | Denka Seiken Co Ltd | 新規な抗原定量法 |
-
1986
- 1986-08-29 JP JP61201376A patent/JPH0757178B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6359880A (ja) | 1988-03-15 |
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