JPS6359880A - プロテインａで被覆した生物学的粒子及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、プロティンＡで被覆した生物学的粒子に関し
、さらに詳しくは抗体感作浮遊細胞に取り込まれる機能
を有し、生化学的研究試材等としての有用性を有する生
物学的粒子及びその用途に関するものである。

（従来の技術） 各種細胞に外来の物質を取り込ませる方法としては、　
（１）マイクロマニピーレイターやインジェクトスコー
プを用いるいわゆる細胞内注射法〔ジャーナル・オプ・
サイエンシーズ（Ｊ、５ｅｉ−８ｅｒ、　、）Ｂ。

９．３０７（１９１４）及び１ヱリスロポイエシス・ア
ンド・ディファレンシエーションーイン・フレンドｍロ
イケミ子・セ／Ｉ／　”　（”Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｅ
ｓｉｓａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｓｎｔｉａｔｌｏｎ　ｉｎ
　Ｆｒ１ｅｎｄ　ｌ＠ｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｌｓつ。

エルスピア−／ノースーホーラントバイオメティカルプ
レス（Ｅｌｓｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ　
ＢｉｏｍａｄｉｃａｌＰｒｃｓ）。

ビー、ブイ、アムステルダム（Ｂ、Ｖ、　Ａｍａｔｓｒ
ｄａｍ（１９８０）　＋　ｉｎ　Ｐｒｏｓｍ１等〕、（
２）リポゾームを用いてリポゾーム内の物質を細胞内に
注入する方法〔”メソッドインセルビオロジー″（”Ｍ
ｓｔｈｏｄｌｎ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ’）アカデ
ミ−・プレス、ニューヨーク（Ａｃａｄ　、Ｐｒ５ｓｓ
　＋Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）、１４　、３４−６８頁（１９
７６）　：］、　（３）ＨＶＪウィルスを用いる方法〔
プロシーデングス・オプ・ナショナル・アカデミ−・オ
ブ・サイエンシーズ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ−Ａｃａｄ。

Ｓｃ（、）　ＵＳＡ、７２　、４０７１頁（１９７５）
）、また赤血球中に覗り込ませた物質を細胞融合の原理
で取り込ませる方法（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　２
４９　、４４９頁（１９７４））等が知られている。

（発明が解決しようとする問題点） 従来技術によればそれぞれ目的に応じた方法が選択され
ているが、いずれもμｍ単位の物質を効率良く他の細胞
に取り込ませることが出来ないという欠点を有している
。

そのため、ある程度の大きさをもつ各種の生物学的粒子
の各種細胞に対する作用・効果を細胞レベルで検討する
ことが不可能であった。

一方、本発明者はプロティンＡを担持する生物学的粒子
の各種作用について研究したところ、上記従来技術では
細胞に取り込ませることのできない大きさの粒子をプロ
ティンＡでｉｌｌしたものが抗体感作浮遊細胞に吸着す
るばかりでなく、その細胞内に取り込まれることを見い
出し本発明を完成した。

なお、プロティンＡを適轟な担体に結合させ、抗体産生
細胞の定値、ＩｇＧの精製等に用いることは知られてい
る（特開昭４９−１３３５１８号公報等）が、抗体感作
浮遊細胞に取り込まれる機能を有するプロティンＡを結
合せしめた粒子は従来既知の文献に未載である。

（問題点を解決するための手段） しかして、本発明は抗体感作浮遊細胞に取り込ませうる
プロティンＡで被覆した生物学的粒子及びその用途が提
供される。

本発明にいうプロティンＡとは、通常は黄色ブドウ球＠
（Ｓｔ息ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａ　ｕ　ｒ　ａ　ｕ
　ｓ　）の細胞壁に由来するものであるが、それが組み
換えＤＮＡ手法を用いて調製されるもの〔例えば、ジャ
ーナル・オプ・パクテリオロノー（Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ、）１５９　、７１３　。

１９８４；特開昭５９−１１３８９０号公報等〕をも包
含するものであって、唾乳動物の免疫グロブリンＧ（Ｉ
ｇＧ）のＦｅ部分に特異的に結合しつるタン・ぐり質を
いう。

次に、プロティンＡで被覆した生物学的粒子にいう粒子
とは、生物学上用いられる粒子であって、本発明の目的
を達成できるものであれば、それが生物であるか、非生
物であるかを問わない。例えば、黄色ブドウ球菌、大腸
菌、ネズミチフス菌等の病原性微生物や、クロモ−２−
ム（染色体）、リポ〜２−ム（脂質人工膜）自体もしく
は抗癌剤等の生理活性物質を含有させたリポ・２−ム等
を挙げることができる。

かかる粒子をプロティンＡで被覆するには、それ自体公
知の方法例えば、（１）粒子に塩化クロムあるいはゲル
タールアルデヒド、ジイソシアネート類のごとき複数の
官能基を有する交差結合性試薬を用いてプロティンＡと
粒子を結合せしめるか（ｆｌＪえば、特開昭４９−１３
３５９７号公報）、（２）粒子を構成している抗原に対
する抗体を用意し、まず抗体で粒子を感作し、次いで可
溶性プロティンＡを直接もしくは二次抗体を介して結合
させる方法がある。かかる抗体としては、ポリクロナー
ル抗体もしくはモノクロナール抗体が用いられる。

ポリクロナール抗体は抗原物質をウサギに免疫して得ら
れた抗血清が、モノクロナール抗体としてはＫｏｈｌｅ
ｒ　＆　Ｍｉｌａｔａｌｎの方法〔ネイチャー（Ｎａｔ
ｕｒｅ）、　２５６　：　４９５〜４９７　、１９７５
　〕に従って製造したものを用いることができる。

かくして得られるプロテインＡで被覆した生物学的粒子
は、それが数ノ血の大きさを有するものであっても抗体
感作浮遊細胞に吸着し、さらにその細胞内に取り込まれ
る機能を有し、それ自体生化学的研究試料として有用で
あるばかりで々く、各種生理活性物質を包含せしめた場
合は、殺紹抱剤もしくは細胞増殖剤として用いうる可能
性を有する。

なお、抗体感作浮遊細胞にいう浮遊細胞とは、リンパ系
細胞、腹水癌細胞等の浮遊培養できる細胞をいい、より
具体的には、マウス・エールリッヒ癌細胞やマウス・ミ
エローマ細胞等を包含する概念である。なお、かかる細
胞は各細胞を異種動物に注射することにより得られる抗
体を用いて抗体感作細胞とすることができる。

以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、
もとより本実施ＰＪにより本発明が限定されるものでは
ない。

実施例Ｊ１ ネズミチフス萌（東京慈恵会医科大学病院中央検査室由
来）をハート・インツユウジ薗ン寒天平板上で３７℃−
晩培養し生理的食塩水に懸濁する。

蕗を生理的食塩水で３回洗ったのち０．６％の割合でホ
ルマリンを加え３７℃で一晩放置する。ホルマリン処理
菌を生理的食塩水で洗った後生置数にして１億個／　ｍ
ｌの濃度に調整する。この醒液を１週間に１回、計５回
、ＩＣＲマウス（雌、５週令）に１ｒｎｌずつ腹腔内接
種を行う。最終注射後１週たったところで心臓採血によ
り全採血を行い抗血清を得た。この抗血清を１０００倍
に希釈し等量の生理的食塩水に懸濁した１０００万個の
あらたに培養したネズミチフス歯と３７℃、３０分間感
作させた。抗体感作萌を生理的食塩水で３回洗ったのち
抗マウス１ｇＭウサギ抗血清と室温で３０分反応させた
。再度生理的食塩水で３回洗った後１００μｇ／ゴの可
溶性プロティンＡを室温で３０分反応させた。これを生
理的食塩水で３回洗って１００万個の抗体感作細胞浮遊
液に混合した。３７℃で４時間反応させたのちギムデ染
色を行ったところ１００チの細胞が１から６個の菌を取
り込んでいることがわかった。

実施例２ 実施例１と同じ要領で得られたネズミチ７ス醍をリン酸
緩衝食塩水（…７．２，０．ＯＩＭＩＪン酸バッファー
＋　０．１５　Ｍ　ＮａＣ４）中に１億個、／づの割合
で懸濁し、これを１ゴにビーカーにとり等量の１００μ
ｆｊ／ａｔの可溶性プロティンＡを加えてマグネチック
・スターラーで攪拌しながら２５％のゲルタールアルデ
ヒドを３　ｍｌｌ見見室温３０分反応させる。この菌を
生理的食塩水で３回洗って実施例１と同じ要領で抗体感
作細胞と反応させた。細胞による茎の取り込みは実施９
！Ｉ　１とほぼ同じ結果が得られた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗体感作浮遊細胞に取り込ませうるプロテインＡで
   被覆した生物学的粒子。 ２、プロテインＡを抗体を介して生物学的粒子に結合せ
   しめた特許請求の範囲第１項記載の粒子。 ３、生物学的粒子が微生物細胞である特許請求の範囲第
   １項または第２項記載の粒子。 ４、微生物細胞がネズミチフス菌である特許請求の範囲
   第３項記載の粒子。 ５、生物学的粒子をプロテインＡで被覆することを特徴
   とする該粒子を抗体感作浮遊細胞に取り込ませる方法。 ６、抗体感作浮遊細胞がマウス・エールリッヒ癌細胞ま
   たはマウス・ミエローマ細胞である特許請求の範囲第５
   項記載の方法。