JPH0774228B2

JPH0774228B2 - 新規抗生物質

Info

Publication number: JPH0774228B2
Application number: JP60255157A
Authority: JP
Inventors: メイ・デイーン―ミング・リー; マイケル・グリーンスタイン; デビツド・ポール・ラベダ
Original assignee: アメリカン・サイアナミド・カンパニ−
Priority date: 1984-11-16
Filing date: 1985-11-15
Publication date: 1995-08-09
Anticipated expiration: 2010-08-09
Also published as: LV12523A; PT81493B; NO163574B; LV12523B; EP0182152A3; EP0182152B1; IL93418A0; NO163574C; FI86892B; IL76878A0; FI854510A0; HU195855B; IL93417A0; IL93416A0; DK168388B1; EP0182152A2; MX9203146A; PT81493A; IL93421A0; HUT41839A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、LL-E33288α₁−Br、LL-E33288α₁−Ｉ、LL-E
33288α₂−Br、LL-E33288α₂−Ｉ、LL-E33288α₃−Br、
LL-E33288α₃−Ｉ、LL-E33288α₄−Br、LL-E33288β₁−
Br、LL-E33288β₁−Ｉ、LL-E33288β₂−Br、LL-E33288
β₂−Ｉ、LL-E33288γ₁−Br、LL-E33288γ₁−Ｉ及びLL-
E33288δ₁−Ｉと称せられる新規な抗バクテリヤ剤及び
抗腫瘍剤、その発酵による製造法、その粗溶液からの回
収及び濃縮法、及びその精製法に関する。本発明は、希
釈形の、粗濃縮物としての、種々の又はすべての成分の
複合物としての、個々の成分の純粉形としての抗バクテ
リヤ及び抗腫瘍剤、そして新規なミクロモノスポラ（mi
crospora）種をその範囲内に含む。

本発明のLL-E33288抗生物質は非常に関連した化合物で
ある。14種の抗生物質は発酵物から回収され、先ずLL-E
33288ヨウ素複合物又はLL-E33288臭素複合物のいずれか
のLL-E33288複合物の混合物として得られる。一般にLL-
E33288抗生物質のヨウ素含有成分（例えばα₁−Ｉ、α₂
−Ｉ、α₃−Ｉ、β₁−Ｉ、β₂−Ｉ、γ₁−Ｉ及びδ₁−
Ｉ）は無機又は有機ヨウ化物を含む媒体を用いる発酵に
おいてのみ見出され、一方臭素含有成分（例えばα₁−B
r、α₂−Br、α₃−Br、α₄−Br、β₁−Br、β₂−Br及び
γ₁−Br）は無機又は有機ブロマイドを含む媒体中での
発酵においてのみ見出される。LL-E33288複合体におけ
る成分の比は、臭素及びヨウ素含有抗生物質の双方の発
酵に依存して変化するが、LL-E33288β₁及びLL-E33288
γ₁は主成分であり、その合計は錯体の凡そ90％をな
す。LL-E33288α₁、LL-E33288α₂、LL-E33288α₃、LL-E
33288α₄−Br、LL-E33288β₂及びLL-E33288δ₁−Ｉは少
量の成分であり、その合計は錯体の凡そ10％である。

LL-E33288抗生物質はグラム陽性及びグラム陰性バクテ
リヤに対して活性である。その各の成分は、特に薬剤の
DNA損傷を直接に又は間接に開始する能力を測定する生
化学的誘導分析（Biochemical Induction Assay）〔R.
エレスプル（Elesupuru）及びM.ヤルモリンスキー（Yar
molinsky）、エンバイロメンタル・ムタゲネシス（Envi
romental Mutagenesis）、１、65〜78（1979）〕の改変
において活性であることもわかつた。この分析におい
て、LL-E33288β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Brの双方は１
×10^-6mcg/ml以下の濃度において活性があつた。

第１図はLL-E33288β₁−Brの紫外線吸収スペクトルであ
り；第２図はLL-E33288β₁−Brの赤外線吸収スペクトルであ
り；第３図はLL-E33288β₁−Brのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第４図はLL-E33288β₁−Brの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルであり；第５図はLL-E33288γ₁−Brの紫外線吸収スペクトルであ
り；第６図はLL-E33288γ₁−Brの赤外線吸収スペクトルであ
り；第７図はLL-E33288γ₁−Brのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第８図はLL-E33288γ₁−Brの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルであり；第９図はLL-E33288α₂−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり、第10図はLL-E33288α₃−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり、第11図はLL-E33288β₁−Ｉの紫外線吸収スペクトルであ
り；第12図はLL-E33288β₁−Ｉの赤外線吸収スペクトルであ
り；第13図はLL-E33288β₁−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第14図はLL-E33288β₁−Ｉの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルであり；第15図はLL-E33288γ₁−Ｉの紫外線吸収スペクトルであ
り；第16図はLL-E33288γ₁−Ｉの赤外線吸収スペクトルであ
り；第17図はLL-E33288γ₁−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；そして第18図はLL-E33288γ₁−Ｉの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルである。

LL-E33288β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Brの物理化学的特
性は下記の通りである： LL-E33288β₁−Br １）凡その元素分析:C48.6;H5.6;N2.9;S9.1;及びBr5.
5（元素Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びBrだけが存在するとい
うことは化学分析用電子分光法（ESCA）によつて決定し
た）；２）融点:146〜150℃（分解）；３）比旋光度：▲〔α〕²⁶ _D▼＝−49±10°（0.1％エ
タノール）；４）紫外線吸収スペクトル：第１図の通り（メタノー
ル；酸性メタノール；塩基性メタノール）；５）赤外線吸収スペクトル：第２図の通り（KBr
法）；６）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第３図の通り
（300MHz、CDCl_３）；７）炭素−13核磁気共鳴スペクトル：第４図の通り
（75.43MHz、CDCl_３、TMS基準のppm）、重要なピークは
下の通り、 17.60(q); 17.64(q); 18.9(q); 19.7(q); 22.4(q); 22.8(q); 23.5(q); 34.3(t); 36.9(t); 39.2(t/d); 47.8(d); 51.7(q); 52.7(q); 54.6(t/d); 56.3(q); 52.2(q); 57.8(d); 61.0(q/d); 61.7(d); 62.4(t); 66.9(d); 68.4(d); 69.1(d); 69.7(d); 70.2(d); 71.1(d); 71.9(d); 72.1(s/t); 76.1(d); 81.0(d); 83.3(s); 88.2(s); 97.4(d); 99.7(d); 100.8(s); 102.5(d); 115.1(s); 123.4(d); 124.4(d); 126.5(d); 130.2(s); 130.8(s); 144.6(s); 149.3(s); 149.5(s); 191.7(s); 192.4(s); ８）分子量;FAB-MSで決定して⁷⁹Br/⁸¹Brに対してそれ
ぞれ1333/1335; そして９）分子式:C₅₄Ｈ₈₄Ｎ_３Ｏ₂₂Ｓ₄Br、1258.3699（⁷⁹B
r）及び1260.3726（⁸¹Br）における正確な質量を高分解
能FAB-MSで決定し、Ｃ₅₂Ｈ₈₁Ｎ_３Ｏ₂₁Ｓ_３Br（Ｍ＋Ｈ−
Ｃ₂Ｈ₄OS）であると決定した。

LL-E33288γ₁−Br １）紫外線吸収スペクトル：第５図の通り（メタノー
ル；酸性メタノール；塩基性メタノール）；２）赤外線吸収スペクトル：第６図の通り（KBr
法）；３）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第７図の通り
（300MHz、CDCl₃）；４）炭素−13核磁気共鳴スペクトル：第８図の通り
（75.43MHz、CDCl₃、TMS基準のppm）、重要なピークは
下の通り、 14.4 17.6 17.9 19.0 19.7 − 22.8 − − 34.0 37.6 39.5 42.1 − 51.6 52.7 54.1 56.3 57.3 − 59.3 61.1 61.8 61.9 67.2 68.18 68.23 69.7 70.1 70.8 71.1 71.7 71.8 76.1 − 81.0 82.9 88.4 − 97.8 100.0 100.2 101.3 103.0 115.3 123.0 124.9 126.9 130.4 131.1 131.8 138.0 144.7 − 149.5 149.6 155.6 192.5 192.9 ５）分子式:UV、IR、¹Ｈ-NMR及び¹³Ｃ-NMRのデータ
を、LL-E33288β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Ｉのそれらと
比較することによりＣ₅₃Ｈ₈₂Ｎ₃Ｏ₂₂Ｓ₄Br;そして６）分子量：分子式から計算して⁷⁹Br/⁸¹Brに対して
それぞれ1319/1321。

LL-E33288α₁−Ｉ、LL-E33288α₂−Ｉ、LL-E33288α_３
−Ｉ、及びLL-E33288β₁−Ｉ及びLL-E33288γ₁−Ｉの物
理化学的特性は下記の通りである： LL-E33288α₁−Ｉ１）分子量:1145、FAB-MSで決定。

LL-E33288α₂−Ｉ１）化学分析用電子分光法（ESCA）により次の元素を
含有する及び含有するだけである:C、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、
I; ２）分子量:1131、FAB-MSで決定；そして３）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第９図に示す通
り（300MHz、CDCl₃）。

LL-E33288α₃−Ｉ１）分子量:1066、FAB-MSで決定；そして２）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第10図に示す通
り（300MHz、CDCl₃）。

LL-E33288β₁−Ｉ１）紫外線吸収スペクトル：第11図の通り（メタノー
ル；酸性メタノール；塩基性メタノール）；２）赤外線吸収スペクトル：第12図の通り（KBr
法）；３）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第13図の通り
（300MHz、CDCl₃）；４）炭素−13核磁気共鳴スペクトル：第14図の通り
（75.43MHz、CDCl₃、TMS基準のppm）、重要なピークは
下の通り、 − 17.5 17.6 18.9 − 22.4 22.8 23.4 25.4 34.3 36.9 39.2 − 47.9 51.6 52.8 54.8 56.3 57.2 57.9 60.9 61.6 62.2 67.0 68.4 68.4 69.1 69.6 70.4 71.1 71.8 72.2 76.2 − 80.8 83.3 88.1 93.6 97.4 99.6 99.6 − 102.6 112.4 123.4 124.4 126.4 − − 133.4 − − − − − − 192.3 192.6 ５）分子式:UV、IR、¹Ｈ-NMR及び¹³Ｃ-NMRのデータ
を、LL-E33288β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Ｉのそれらと
比較することによりＣ₅₄Ｈ₈₄Ｎ₃Ｏ₂₂Ｓ₄I;そして６）分子量:1381、分子式から計算。

LL-E33288γ₁−Ｉ１）化学分析用電子分光法（ESCA）により次の元素を
含有する及び含有するだけである:C、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、
I; ２）凡その元素分析:C48.8、H5.4、N2.8、S2.9、I9.
2; ３）分子量:1367、FAB-MSで決定；４）分子式:C₅₃Ｈ₃₂Ｎ₃Ｏ₂₂Ｓ₄Ｉ、Ｍ＋Ｈに対する正
確な質量は高分解能FAB-MSにより1368と決定した。Ｃ₅₃
Ｈ₈₃Ｎ₃Ｏ₂₂Ｓ₄Ｉに対して3397; ５）紫外線吸収スペクトル：第15図の通り（メタノー
ル；酸性メタノール；塩基性メタノール）；６）赤外線吸収スペクトル：第16図の通り（KBr
法）；７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第17図の通り
（300MHz、CDCl₃）；８）炭素−13核磁気共鳴スペクトル：第18図の通り
（75.43MHz、CDCl₃、TMS基準のppm）、重要なピークは
下の通り、 14.5(q) 17.6(q) 17.6(q) 18.9(q) − − 22.8(q) − 25.4(q) 34.1(t) 37.0(t) 39.1(t) 42.3(t/s) − 51.5(d) 52.8(q) 54.8(t) 56.3(q) 57.2(q) − 60.4(d) 60.9(q) 61.3(t) 61.7(q) 67.0(d) 68.4(d) 68.5(d) 69.2(d) 69.7(d) 70.5(d) 71.1(d) 71.8(d) 72.1(s) 75.7(d) 75.8(d) 80.9(d) 82.8(s) 88.1(s) 93.5(s) 97.3(d) 99.6(d) 99.7(d) 100.8(s) 102.6(d) − 123.4(d) 124.4(d) 126.2(d) 130.2(s) 131.0(s) 133.4(s) 139.1(s) 143.0(s) 145.1 150.6(s) 151.5(s) 154.5 192.0(s) 192.5(s) LL-E33288成分は高速液体クロマトグラフイー（HPLC）
によりまた薄層クロマトグラフイー（TLC）により最も
簡便に分離され且つ同定される。対応するヨウ素化及び
臭素化成分のHPLCによる分離は不可能でないけれど困難
である；しかしながら、それらはTLCで区別することが
できない。

HPLCによるLL-E33288-Brの好適な分析的分離には次の条
件を使用する：カラム：「セパラライト（Separalyte）Ｃ₁₈5m」、4.6m
m×25cm〔アナリチケム・インターナーシヨナル（Analy
tichem International）〕；溶媒：アセトニトリル:0.2M水性酢酸アンモニウム（6
0:40）；流速:1.5ml/分検知器:254nm及び280nmにおける二重波長UV; 感度:0〜0.02A.U.F.S. 第IA表は、これらの条件下におけるLL-E33288β₁−Br、
LL-E33288β₂−Br、及びLL-E33288γ₁−Brの凡その保持
時間と保持容量を示す。

ヨウ素を含むLL-E33288成分の好適な分析的HPLC分離は
次の条件を用いる：カラム:RCM−100ラジアル・コンプレツシヨン・モジユ
ール（Radial Compression Module）を有するノバーパ
ク（NOVA-PAK）C16ラジアル−パク（Radial-PAK）カー
トリツジ〔ミリポア（Millipore）、ウオーターズ・ク
ロマトグラフイー部門（Waters Chromatography Divisi
on）〕；溶媒：アセトニトリル:0.2M水性酢酸アンモニウム（5
0:50）；流速:1.2ml/分；検知器:254nm及び280nmにおける二重波長UV; 感度:0〜0.02A.U.F.S. 第IB表はこれらの条件下におけるLL-E33288α₁−Ｉ、LL
-E33288α₂−Ｉ、LL-E33288α₃−Ｉ、LL-E33288β₁−
Ｉ、LL-E33288β₂−Ｉ、LL-E33288γ₁−Ｉ及びLL-E3328
8δ₁−Ｉの凡その保持時間及び保持容量を示す。

LL-E33288成分は次のTLC系で分離し且つ同定した：吸着剤：アルミニウム・シートにコーテイングしたシリ
カゲル60F₂₅₄、層の厚さ0.2mm、EM試剤：検知器：短波長UVランプ（254nm）下での消光作用及び
枯草菌（Bacillus subtilis）又は改良された生化学的
誘導分析を用いるバイオオートグラフイー（bioautogra
phy）による視覚化；溶媒系:I,0.1M水性燐酸二水素カリウムで飽和した酢酸
エチル； II,0.1M水性燐酸二水素カリウムで飽和した酢酸エチル
中３％イソプロパノール； III,酢酸エチル：メタノール（95:5）。

第II表はこれらの３つの系におけるLL-E33288成分の凡
そのRf値を示す：以上の理化学的性質から、本発明の化合物（又は抗生物
質）は、下記構造式で示され、例えば、特定化合物とそ
れらの具体的な置換基の組み合わせとの関係は下記表に
示すとおりである。

なお、下記表中のＲ₁は、式で表わされる糖残基であり、Ｒ₃は式で表わされる糖残基を意味する。

なお、上記構造式において、部分のは、示されている二重結合の下部を通って伸びた連結基
を意味し、HO基が結合する炭素が三重結合の一方の炭素
と単結合によって連結していることを表わす。

LL-E33288α₁−Br、LL-E33288α₂−Br、LL-E33288α₃−
Br、LL-E33288α₄−Br、LL-E33288β₁−Br、LL-E33288
β₂−Br、LL-E33288γ₁−Br、LL-E33288α₁−Ｉ、LL-E3
3288α₂−Ｉ、LL-E33288α₃−Ｉ、LL-E33288β₁−Ｉ、L
L-E33288β₂−Ｉ、LL-E33288γ₁−Ｉ及びLL-E33288δ₁
−Ｉと称せられる新規な抗バクテリヤ剤及び抗腫瘍剤
は、ミクロモノスポラ・エチノスポラ種カリケンシスの
新規な種の調節された条件下での培養中に生成する。こ
の微生物は、アメリカン・サイアナミド社（American C
yanamid Company,Pearl River,New York）のメデイカル
・リサーチ部門（Medical Research Division）の培養
物保管所に培養物番号LL-E33288号として保管されてい
る。この新しい微生物の生育培養物は、米国農業省（Pe
oria Illinois）のノーサン・リージヨナル・リサーチ
・センター（Nothern Reginal Research Center）、カ
ルチユア・コレクシヨン・ラボラトリー（Culture Coll
ection Laboratory）に、1984年８月９日に預託されて
おり、その永久保管に加えられた。それはそのような預
託によりNRRL15839と称せられる。本特許願の未決中
の、NRRL15839と称せられるそのような培養物の入手
は、37C.F.R.§1.14及び35U.S.C.§122の下で権利の与
えられた特許及び登録商標委員会（Commissioner of Pa
tents and Trademarks）の決定するものに限られ、そし
てそのような培養物の公開性に対するすべての制限は本
特許願の特許が認められた時、最終的に取り除かれる。

培養物LL-E33288はテキサスで集められたカリチエ（Cal
iche）粘土土壌試料から分離した。

ミクロモノスポラ（Micromonospora）属のNRRL15839種
という一般的な同定は、形態学的に及び化学的に確認し
た。この種は生長菌糸において単一に又は集合して単胞
子を生成する。気中性菌糸は観察されなかつた。電子顕
微鏡による検査は、胞子がいぼ状であることを示した。
全細胞分析は、この種がジアミノピメリン酸（DAP）の
メソ異性体を含有することを示した。DAPの３−OH誘導
体が、多（主）量に存在した。更にこの種はその全細胞
糖加水分解物中にキシロースと痕跡量のアラビノースの
存在を示した（全細胞糖パターン、Ｄ型）。

マクロ形態学及び生理学的検討から、NRRL15839はM.エ
チノスポラの亜種と考えうると結論した（エチノスポラ
種パリダ（pallida）に最も近い）。NRRL15839の形態学
についてのデータを第Ａ及びＢ表に示す。生理学的デー
タを第Ｃ及びＤ表に示す。

第Ｃ表 NRRL-15839の炭水化物の利用アラビノース＋セルロース − フルクトース＋グルコース＋イノシトール − マンニトール − ラフイノース ± ラムノース＋スクロース＋キシロース＋第Ｄ表 NRRL-15839の生理学的反応下記物質の加水分解カゼイン＋キサンチン − ヒポキサンチン − チロシン＋アデニン − ゼラチン＋ジヤガイモ殿粉＋エスクリン＋下記酵素の生産ナイトレート・リダクターゼ＋ホスフアターゼＷウレアーゼ −下記物質上での生長サリシン − ５％NaCl − リソザイム汁 −下記物質の脱カルボキシル化酢酸塩＋安息香酸塩 − クエン酸塩 − 乳酸塩 − マレイン酸塩 − ムチン酸塩 − シユウ酸塩 − プロピオン酸塩＋ピルビン酸塩＋コハク酸塩 − 酒石酸塩 −下記物質からの酸アドニトール − アラビノース＋セロビオース＋デキトスリン＋デユルシトール − エリスリトール − フルクトース＋ガラクトースＶグルコース＋グリセロール − イノシトール − ラクトース − マルトース＋マンニトール − マンノース＋ α−メチルＤ−グルコシド − メリビオース − ラフイノース＋ラムノース＋サリシン＋ソルビトール − スクロース＋トレハロース＋キシロース＋ β−メチルＤ−キシロシド −下記温度での生長 10° − 42° ＋ 45° ＋＋＝正；−＝負;V＝可変;W＝弱突然変異体LL-E33288-R66、NRRL-15975の誘導体化発酵の収量を改善する努力において、元培養物LL-E3328
8（NRRL-15839）を接種し、50の単一コロニーを分離し
た。これらをNS₁〜NS₅₀と表示した（NS＝自然選択）。

これらの分離体の発酵は、中程度の胞子形成を示すもの
が一般にLL-E33288複合物の良好な生産体であることを
示した。分離体NS₆をこの群の代表例として選別した。

分離体NS₆を出発媒養物として用いることにより、胞子
懸濁液を準備し、種々の突然変異原にさらした。単一コ
ロニーをニトロソグアニジン処理から分離したが、いず
れもがLL-E33288複合物のかなり改良された生産体であ
ると認められなかつた。続いて一連の紫外線照射から単
一コロニーを得、これから分離体UV610を高収量突然変
異体として選別した。次いで分離体UV610を画線培養
し、分離体１〜７を得た。亜分離体UV610（３）を更な
る仕事のために分離した。

LL-E33288複合物の高能力の抗バクテリヤ性及び抗腫瘍
性のために、一度発酵中に限られた濃度の抗生物質が生
合成されると、それは生産培養物にとつて有毒／禁止剤
となりうる。従つてLL-E33288抗生物質複合物に耐性の
ある分離体を得ることに努力した。

発酵に対して使用し且つペプトン、デキストロース、糖
密及び水からなる媒体のフラスコに接種するために用い
る如く、分離体UV610（３）の生長体を準備した。この
媒体にはLL-E33288β₁−Brを８μg/mの濃度で補充し
た。このフラスコから多くの接種を行ない、７日目に耐
性の固体群を得た。全体で97のコロニー（R1〜R97）を
分離した。分離体R66を能力的に改善されたLL-E33288β
₁−Brの生産体として選別した。

経過を下に図式的に表わす：この突然変異体R66は、上述のアメリカン・サイアナミ
ド社メデイカル・リサーチ部門の培養物保管所に培養物
番号LL-E33288R66として保管されている。この新しい微
生物の生活培養物は上述のカルチユア・コレクシヨン・
ラボラトリーに、1985年６月６日に預託され、永久保管
に加えられている。それはそのような預託によりNRRL15
839と称せられる。本特許願の未決中の、NRRL15839と称
せられるそのような培養物の入手は、37C.F.R.§1.14及
び35U.S.C.§122の下で権利の与えられた特許及び登録
商標委員会（Commissioner of Patents and Trademark
s）の決定するものに限られ、そしてそのような培養物
の公開性に対するすべての制限は本特許願の特許が認め
られた時、最終的に取り除かれる。

形態学的には、NRR-15975はNRRL-15839よりも少ない胞
子を形成する。NRRL-15975とNRRL-15839の比較を第DD表
に示す。

化学的にはNRRL-15839及びNRRL-15975の双方は同一の全
細胞糖パターン（Ｄ型：キシロース及び痕跡量のアラビ
ノース）を示す。全細胞のジアミノピメリン酸分析は、
15975がメソ異性体を生成しないが、３−ヒドロキシ誘
導体だけを生成することを示す（NRRL-15839は両化合物
を含む。）。これは化学分類学の表示を変えるものでは
ない。

生理学的試験は、NRRL-15839及びNRRL-15975が２つの生
理学的反応においてだけ異なるということを示す（参照
第Ｄ表）。NRRL-15975はナイトレート・リダクターゼに
対して負であり、乳酸塩の利用に対しては正である。NR
RL-15839は両方に対して弱く正であるが、今や数ケ月間
傾斜法で維持した後負になつた。従つてこれらの特性は
この分類に対する変数と考えるべきである。

これらの新規な抗バクテリヤ剤及び抗腫瘍剤の生産に対
して、本発明はこの特別な有機体に或いは例示の目的だ
けで示した上記の生長の顕微鏡的特性に完全に答える微
生物に制限されないということを理解すべきである。事
実、Ｘ線照射、紫外線照射、Ｎ′−メチル−Ｎ′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、アクチノフアージなどに
さらすような種々の手段によつてこれらの有機体から作
られる突然変異体を用いることは望ましく、またそれが
意図されている。

LL-E33288成分の試験管内での抗バクテリヤ活性を、標
準的な寒天希釈法により、ある範囲のグラム陽性及びグ
ラム陰性バクテリヤに対して決定した。ペトリ血には、
２倍に減少する濃度の抗生物質を含むミユラー（Muelle
r）−ヒントン（Hinton）を注いだ。寒天の表面を、可
動複製具を用いて１〜５×10⁴のバクテリヤのコロニー
形成単位を接種した。約35℃での培養約18時間後にバク
テリヤ種の生長を禁止させるLL-E33288成分の最低濃度
をその種に対する最小禁止濃度として記録した。

結果を第III表に要約する。

抗腫瘍性剤としての適合性を決定するために化合物を試
験するある種の生体内試験系及び手順が、ナシヨナル・
キヤンサー・インスチチユート（National Cancer Inst
itute）によつて開発された。これはゲラン（Geran）
ら、「キヤンサー・ケモセラピー・レポーツ（Cancer C
hemotherapy Reports）」第III部、第３巻、２号（197
2）に報告されている。この手順は抗腫瘍剤の試験分野
で一般に行なわれる確立された標準選別試験である。こ
れらの系のうちで、リンパ球白血病P388、メラニン沈着
黒色腫B16、L1210白血病及びコロン26腺ガンは本発明に
とつて特に重要である。これらの腫瘍はマウスにおける
移植可能な腫瘍として試験に利用される。一般にこれら
の試験において、処置した動物（Ｔ）の、対照動物
（Ｃ）に対する平均生存期間の増加％によつて示される
有意義な抗腫瘍活性は、人間の白血病及び固定腫瘍にお
いて同様の結果をもたらす。

リンパ球白血病P388試験使用した動物は、すべて一方の性の、体重が最小17gで
あり且つすべてが3gの範囲内にあるBDF₁マウスであつ
た。試験群当り５又は６匹のマウスを用いた。腫瘍の移
植は、リンパ球白血病P388の10⁶の細胞を含む希アシチ
ツク（ascitic）流体0.5mlの腹腔内注射によつた。この
P388系においてLL-E33288抗生物質を、個々のβ₁−Br及
びγ₁−Brとして且つすべての成分（臭素成分）の複合
物として試験した。試験化合物を指示投与量で、１、５
及び９日（腫瘍接種に対して）に通常の食塩水中0.2％
クルセル（Klucel）での溶液0.5mlにして腹腔内投与し
た。30日間に亘り、マウスの体重を測り、生存数をレギ
ユラー（regular）基準で記録した。中位生存期間及び
処置（Ｔ）／対照（Ｃ）に対する生存期間の比を計算し
た。正の対照化合物はシスプラチンで、指示投与量によ
り１、５及び９日目に0.2％クルセル0.5mlにして腹腔内
注射した。結合を第IV表に示す。

T/C×100（％）が125又はそれ以上の場合、試験化合物
は有意義な抗腫瘍活性を有すると考えられる。

メラニン沈着黒色腫B16 使用した動物は、すべてが同一性の、体重が最小17gで
あり且つすべてが3gの範囲内にあるBDF₁マウスであつ
た。試験群当り通常６匹のマウスを用いた。メラニン沈
着黒色腫Ｂ₁₆の腫瘍の1g部分を、均衡塩の冷溶液10ml中
で均一にし、そして均質化物の0.5ml部分を試験マウス
の各に腹腔内に移植した。LL-E33288抗生物質を、個々
のβ₁−Br及びγ₁−Br成分として、またすべての成分の
複合物（臭素複合物）としてＢ₁₆の系において試験し
た。試験化合物は種々の投与量で１〜９日（腫瘍接種に
対して）に腹腔内投与した。60日間にわたり、マウスを
秤量し、生存数をレギユラー基準で記録した。中位生存
期間及び処置（Ｔ）／対照（Ｃ）に対する生存期間の比
を計算した。正の対照化合物はシスプラチン又はアドリ
アマイシンであつた。この試験結果を第Ｖ表に示す。T/
C×100％が125又はそれ以上の場合、試験化合物は有意
義な抗腫瘍活性を有すると考えられる。

リンパ球白血病L1210試験使用した動物は、すべてが一方の性で、体重が最小17g
であり且つすべてが3gの範囲内にあるBDF₁マウスであつ
た。試験群当り６匹のマウスを、また対照群に18匹を用
いた。腫瘍の移植は、リンパ球白血病L1210の0.5mlを、
マウス当り10⁵の細腸の濃度で腹腔内注射することによ
つた。LL-E33288抗生物質を、個々のβ₁−Br成分として
且つすべての成分の複合物（臭素複合物）としてL1210
系において試験した。試験化合物は種々の投与量で１、
５及び９日或いは１〜９日（腫瘍接種に対して）に投与
した。30日にわたり、マウスを秤量し、生存数をレギユ
ラー基準で記録した。中位生存期間及び処置（Ｔ）／対
照（Ｃ）動物に対する生存期間の比を計算した。正の対
照化合物は1,4−ジヒドロキシ−5,8−ビス〔〔２−（２
−ヒドロキシエチルアミノ）エチル〕アミノ〕アンスラ
キノン二塩酸塩又はシスプラチンであり、指示投与量で
腹腔内投与した。結果を第VI表に示す。T/C×100（％）
が125又はそれ以上の場合、試験化合物は有意義な抗腫
瘍活性を有すると考えられる。

コロン26腺ガン試験使用した動物は、体重が最小17gであり且つすべてが3g
の範囲内に入るCD₂Ｆ₁の雌のマウスであつた。試験群に
は５又は６匹のマウスを用い、一方未処置の対照群とし
ては５又は６匹の動物の３群を各試験に対して用いた。
腫瘍の移植は、抗生物質を含むイーグル（Eagle）MEM媒
体中２％コロン26腫瘍ブライ0.5mlを腹腔内（又は皮
下）注射することによつた。LL-E33288抗生物質を、す
べての成分の複合物（臭素複合物）としてコロン26系で
試験した。試験化合物を１、５及び９日（腫瘍移植投与
に対して）に腹腔内投与した。30日間にわたり、マウス
を秤量し、レギユラー基準において死亡数を記録した。
処置（Ｔ）／対照（Ｃ）動物に対する中位生存期間を計
算した。正の対照化合物はシスプラチンであつた。結果
を第VII表に示す。T/C×100（％）が130又はそれ以上の
場合、試験化合物は有意義な抗腫瘍活性を有すると考え
られる。

M5076肉腫 M5076網状細胞肉腫を、皮下移植によりC57B2/6の雌のマ
ウスに植えつけた。抗腫瘍活性の分析において、いずれ
かの性のBDF₁マウスに、10％腫瘍ブライ0.5mlを腹腔内
接種した。LL-E33288抗生物質を、すべての成分の複合
物（臭素複合物）としてM5076系において試験した。試
験化合物を、腫瘍接種を０日にして１、９、13及び17日
に腹腔内投与した。各薬剤の投与量に対して60日間にわ
たり中位生存日数を決定し、処置（Ｔ）／対照（Ｃ）動
物に対する生存期間の比を計算した。

この試験の結果を、シスプラチンで得られた結果と比較
して第VIII表に示す。T/C×100（％）が125又はそれ以
上の場合、試験化合物は有意義な抗腫瘍活性を有するも
のと考えられる。

同一の方法で次のヨウ素成分を抗腫瘍活性について試験
した。

一般的な発酵条件ミクロモノスポラ・エチノスポラNRRL15839又はNRRL159
75の培養は、多種類の液体培養媒体中で行なうことがで
きる。これらの新規な抗バクテリヤ剤及び抗腫瘍剤の生
産に有用である媒体は、同化しうる炭素源、例えば殿
粉、砂糖、糖密、グリセロールなど；同化しうる窒素
源、例えば蛋白、蛋白加水分解物、ポリペプチド、アミ
ノ酸、トウモロコシ浸漬液など；及び無機アニオン及び
カチオン例えばカリウム、ナトリウム、アンモニウム、
カルシウム、サルフエート、カーボネート、ホスフエー
ト、クロライドなど、及び臭素（臭化ナトリウム）又は
ヨウ素（ヨウ化カリウム）のいずれかの源を含む。痕跡
量の元素例えばホウ素、モリブデン、銅などは媒体の他
の成分の不純物として供給される。タンク及びビンのば
つ気は、無菌の空気を、発酵媒体の表面中に又は表面上
に強制的に導入することによつて供給される。タンクの
更なる攪拌は機械的攪拌翼によつて行なわれる。シリコ
ーンのような消泡剤も必要に応じて添加することができ
る。

抗生物質LL-E33288の一般的な単離及び分離法全マツシユを有機溶媒例えば酢酸エチル又はジクロルメ
タンで抽出することにより、LL-E33288抗生物質を発酵
汁から回収する。有機抽出物中に含まれる抗生物質複合
物を、低級炭化水素からの選択的沈殿によつて更に精製
する。このようにして得られた粗LL-E33288抗生物質複
合物を、シリカゲル、セフアデツクス（Sephadex）LH-2
0〔フアーマシア・フアイン・ケミカルズ（Pharmacia F
ine Chemicals）〕及びＣ₁₈結合のシリカを用いる一連
のカラムクロマトグラフイーにより更に精製し且つ個々
の成分に分離する。

次の限定する意味を有さない実施例と関連して、本発明
を更に詳細に記述する。

実施例１接種物の調製１次接種物を生長させるために用いる代表的な媒体を次
の処方に従つて調製した：ビーフ抽出物約0.2％トリプトン約0.5％デキストロース約0.5％デキストリン約2.4％炭酸カルシウム約0.4％イースト抽出物約0.5％水 100％にする十分な量この媒体をpH7.0に調節し、次いで殺菌した。この無菌
媒体の、フラスコ中の100ml部分に接養物NRRL15839の凍
結した菌糸を接種した。この接種した媒体を回転振とう
機に取りつけ、32℃で48時間激しく攪拌した。次いでこ
の培養した媒体を用いて、14lの発酵器中の上記無菌媒
体10lを接種した。この媒体を32℃で攪拌しながら48時
間培養し、２次接種物を得た。次いでこの２次接種物を
用いて、タンク中の上記無菌媒体300lを接種し、180〜2
00rpmで駆動された攪拌翼によつて攪拌しつつ30℃で48
時間培養し、３次又は種接種物を得た。

実施例２タンク発酵発酵媒体を次の配合に従つて調製した：デキストロース約0.5％スクロース約1.5％ペプトン、細菌学的級約0.2％二塩基燐酸カリウム約0.01％糖密約0.5％炭酸カルシウム約0.5％臭素又はヨウ素源痕跡量水 100％にする十分な量上記媒体2800l部分を殺菌し、次いで実施例１に記述し
た如く調製した３次（種）接種物300lを接種した。マツ
シユ１当り無菌空気0.53l/分の速度でばつ気を行な
い、110rpmで駆動される攪拌翼によつて攪拌した。温度
を約28℃に維持し、発酵を約97時間後に終らせ、この時
点でマツシユを収穫した。

発酵を、LL-E33288抗生物質の生産に関して、抗バクテ
リヤ活性、生化学的誘導分析（induction assay）、TLC
及びHPLC分析により監視した。

全体の収穫したマツシユをpH6に調節し、次いで1/2のマ
ツシユの容量の酢酸エチルで抽出した。この酢酸エチル
抽出物をシロツプに濃縮し、これをヘキサンで２回洗浄
し、珪藻土を通して過した。この珪藻土の過残渣を
酢酸エチルと完全に混合し、過した。液を3lまで濃
縮し、過剰の無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いでヘキ
サンを添加することによつて沈殿させ、粗LL-E33288複
合物約26.7gを得た。

実施例３ LL-E33288α₁−Br、α₂−Br、α₃−Br及びα₄−Brの、L
L-E33288β₁−Br、β₂−Br及びγ₁−Brからの分離実施例２からの粗LL-E33288複合物（臭素複合物）約26.
7gを等しく３つの部分に分け、0.1M水性燐酸二水素カリ
ウムで飽和した酢酸エチルで充填し且つ平衡化された３
つの別々の2.4×110cmのシリカゲルカラム〔シリカ・ボ
エルム（Silica Woelm）、32〜63m、ボエルム・フアー
ム（Woelm Pharm）〕でのクロマトグラフイーに供し
た。このカラムを最初に3ml/分の流速で18時間同一の溶
媒により流出させ、18mlずつ画分を集めた。次いで流出
液を酢酸エチル：メタノール（95:5）に変え、流出を８
時間続けた。最後にカラムを酢酸エチル：メタノール
（90:10）で10時間流出させた。得られた画分を、改良
した生化学的誘導分析（BIA）によつて分析した。正の
画分を、シリカゲル60をコーテイングしたシートを用い
るTLCにより分析し、0.1M水性燐酸二水素カリウムで飽
和した酢酸エチル中３％イソプロパノールの溶媒系で展
開し、改良BIAを用いるバイオオートグラフイー（bioau
tography）で検知した。

３つのカラムからのLL-E33288α₁−Br、α₂−Br、α₃−
Br及びα₄−Brを含む画分（LL-E33288α−Br複合体）を
集め、乾固するまで濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解
し、少量の水で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、前述のように沈殿させて、粗LL-E33
288α−Br複合物約4.2gを得た。

γ−Brを含むLL-E33288β₂−Br、β₁−Br及びγ₁−Brを
含有する３つのカラムからの画分を集め、上述のように
処理して、γ−Brを含有する粗LL-E33288β−Br複合物
約2.0gを得た。

実施例４ LL-E33288β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Brの分離実施例３からのγ−Brを含有するLL-E33288β−Br複合
物約1.9gを、メタノール：水（90:10）で平衡化させた2
5×10cmセフアデツクスLH-20カラムにより、1.2ml/分の
流速でクロマトグラフイーにかけ、15mlずつ画分を集め
た。画分をBIAで検定し、活性について前述のようにTLC
で分析した。LL-E33288β₁−Br、β₂Br及びγ₁−Brの殆
んどを含有する画分21〜26を集め、メタノールを除去し
て濃縮し、得られた水性混合物を凍結乾燥して、LL-E33
288β₁−Br約10％、LL-E33288β₂−Br1％及びLL-E 3328
8γ₁−Br4％を含有する部分的に精製された複合物約435
mgを得た。

γ−Brを含有する上で部分的に精製したLL-E33288β−B
r錯体を等しく分割し、酢酸エチル：メタノール（98:
2）で充填し且つ平衡化した２つの1.5×100cmのシリカ
ゲルカラム〔キーゼル・ゲル（Kiesel Gel）60、40〜63
μｍ、クロマトグラフイーに対するEM生成物〕により1m
l/分の流速でクロマトグラフイー処理し、12mlずつ画分
を集めた。画分を前述のように検定し且つ前述のように
TLCで分析し、主にLL-E33288β₁−Brを含む画分を集
め、濃縮し、ヘキサンから沈殿させて、純度80％のLL-E
33288β−Br約26mgを得た。LL-E33288γ₁−Brを含有す
る画分（LL-E33288β₁−Brの直後に流出）を集め、処理
して純度30％のLL-E33288γ₁−Br約4.5mgを得た。LL-E3
3288β₂−Br（LL-E33288β₁−Brの直前に流出）を含む
いくつかの画分を集め、処理して痕跡量のLL-E33288β₂
−Brを得た。

実施例５ LL-E33288β₁−Brの最終精製実施例４からの純度80％のLL-E33288β₁−Brの約26mg
を、同一の条件下に行なつた他の発酵からの同様の純度
の他のLL-E 33288β₁−Br試料を一緒にした。この一緒
にしたβ₁−Br約38mgの全量を、ホワツトマン（Whatma
n）PLKC₁₈F100mのコーテイングされたTLCプレートを用
いる逆相分取用TLCで更に精製し、メタノール:pH4.0の
0.1M酢酸アンモニウム緩衝液（90:10）で展開した。Rf
＝0.66で展開し且つ短波長UVランプ（254nm）下での消
光作用によつて視覚化したLL-E33288β₁−Brを含むバン
ドを切り取り、抗生物質を、0.1M水性燐酸二水素カリウ
ムで飽和した酢酸エチル中10％イソプロピルアルコール
で吸着剤から洗い落した。この溶液を濃縮し、残渣を酢
酸エチルに溶解し、少量の水で洗浄した。LL-E33288β₁
−Brを含有する有機溶液を前述のように処理し、純度90
％のLL-E 33288β₁−Br約24.5mgを得た。この試料を、
0.1M水性燐酸二水素カリウムで飽和した酢酸エチル中３
％イソプロピルアルコールで展開するシリカゲル〔シリ
カゲルGFでコーテイングしたプレート、1000m、アナル
テク（Analtech）〕での分取用TLCで更に精製した。Rf
＝0.7で展開する短波長UVランプ（254nm）下に消光する
主バンドを切り取り、抗生物質をジクロルメタン：メタ
ノール（80:20）で吸着剤から洗い出した。LL-E33288β
₁−Brを含有する有機溶液を前述したように処理し、実
施的に純粋なLL-E33288β₁−Br約18.8gを得た。

実施例６ LL-E33288β₁−Brの最終的な精製実施例４からの純度30％のLL-E33288γ₁−Br約4.5mg
を、同一の条件下に行なつた他の発酵からの同様の純度
の他のLL-E33288γ₁−Br試料と一緒にした。この一緒に
した試料18mg全部を、0.1M燐酸二水素カリウムで飽和し
た酢酸エチル中２％イソプロピルアルコールで展開する
シリカゲル（シリカゲルGFをコーテイングしたテーパ付
きのプレート、アナルテク）での分取用TLCで更に精製
した。Rf＝0.5で展開する短波長UVランプ（254nm）下に
消光する主バンドを切り取り、前述のように処理して実
質的に純粋なLL-E33288γ₁−Br約4.3mgを生成した。

LL-E33288臭素複合物の生産に好適な発酵媒体は次の通
りであつた：成分％スクロース 2.0 硫酸第一鉄・7H₂Ｏ 0.01 硫酸マグネシウム・7H₂Ｏ 0.02 炭酸カルシウム 0.5 ペプトン 0.2 糖密 0.5 臭化ナトリウム 0.05 水 100％にする十分な量しかしながら、ヨウ化カリウムとしてのヨウ素の発酵媒
体への添加は、１）発酵中の生長を著しく高める；２）大腸菌＃300及び枯草菌＃308に対する生物分析に
おける禁止域を増大させる；３） TLCプレートのバイオオートグラフイーにおけるL
L-E33288β₁−Ｉ及びγ₁−Ｉで実質的な活性を与える；
そして４） TLCで検出される如く他の成分を高める、ことに
よつて実質的な改良を与えた。

次の２つの媒体はLL-E33288ヨウ素複合物の生産に好適
である：実施例７傾斜培養物NRRL-15839の表面を引かいて菌糸状胞子懸濁
液を準備し、これに無菌蒸留水5mlを添加した。次いで
この態濁液を用いて、次の処方の、500mlのフラスコ中
の無菌種媒100mlに接種した。

イースト抽出物 0.5％ビーフ抽出物 0.3％トリプトン 0.5％殿粉 2.4％デキストロース 0.5％炭酸カルシウム 0.4％水 100.0％にするのに十分な量この種フラスコを200rpmの回転振とう機により28℃で３
〜４日間培養し、段階Ｉの接種物を得た。

この段階Ｉの接種物を用いて同一の無菌媒体の段階IIの
接種物に接種し、これを同一の条件下に２日間培養し
た。

次いで段階IIの接種物を用いて処方スクロース 2.0％硫酸第一鉄・7H₂Ｏ 0.01％硫酸マグネシウム・7H₂Ｏ 0.02％炭酸カルシウム 0.5％ペプトン（MARCOR） 0.2％糖密 0.5％ヨウ化カリウム 0.05％水 100.0％にする十分な量の無
菌発酵媒体100mlに接種した。

この媒体を200rpmの振とう機において28℃で５日間培養
し、この時点でマツシユを収穫した。

ヨウ化カリウム４〜20μg/mlの濃度が最適のようであつ
たが、2mg/mlの濃度は収量を低下させるように見えなか
つた。

NRRL-15839は、ヨウ化カリウムが、NRRL-15975が生産す
るのに良好な1.5〜3.5μg/mlに対して非常に低量（0.2
〜0.3μg/ml）だけ存在する場合にLL-E33288β₁−Ｉを
生産するように誘導することができた。

ヨウ素媒体中でのβ₁−Ｉ及びγ₁−Ｉの収量は、NRRL-1
5975を用いる臭素媒体中での対応する臭素化化合物β₁
−Br及びγ₁−Brの収量よりも２〜８倍大きい。

実施例８ LL-E33288α₁−Ｉ、α₂−Ｉ及びα₃−Ｉの、LL-E33288
β₁−Ｉ、β₂−Ｉ、γ₁−Ｉ及びδ₁−Ｉかなら分離 NRRL-15975及び無機ヨウ化物含有の媒体を用いる発酵75
00lに由来する素LL-E33288複合物約41.3gを２つの部分
に分け、酢酸エチルで充填し且つ平衡化した２つの2.5
×110cmのシリカゲルカラム（シリカ・ボエルム、32〜6
3μｍ）のクロマトグラフイーに供した。先ずカラムを
酢酸エチルにより4ml/分の流速で４時間流出させ、20ml
ずつ画分を得た。次いで流出液を、0.1M水性燐酸二水素
カリウムで飽和させた酢酸エチルから、0.1M水性燐酸二
水素カリウムで飽和した酢酸エチル中10％イソプロピル
アルコールまで24時間にわたつて凹形グラジエントにか
けた。最後にカラムを、0.1M水性燐酸二水素カリウムで
飽和した酢酸エチル中10％イソプロピルアルコールで夜
通し流出させた。画分をBIAで検定し、活性画分を実施
例３に記述したようにTLCで分析した。

２つのカラムからのLL-E33288α₃−Ｉを含む画分（86〜
107）を集め、前述したように処理して素LL-E33288α₃
−Ｉ約2.1gを得た。

２つのカラムからのLL-E33288α₁−Ｉ及びα₂−Ｉを含
む画分（182〜253）を集め且つ処理してLL-E33288α₁−
Ｉ及びα₂−Ｉの粗混合物約4.2gを得た。

２つのカラムからのLL-E33288β₂−Ｉ及びβ₁−Ｉを含
む画分（254〜272）を集め且つ処理してLL-E33288β₂−
Ｉ及びβ₁−Ｉの粗混合物約1.2gを得た。

２つのカラムからのLL-E33288γ₁−Ｉを含む画分（273
〜302）を集め且つ処理して純度30％のLL-E33288γ₁−
Ｉの約1.9gを得た。

２つのカラムからのLL-E33288δ₁−Ｉを含む画分（303
〜302）を集め且つ処理して部分的に精製されたLL-E332
88δ₁−Ｉの約1.3gを得た。

実施例９ LL-E33288γ₁−Ｉの精製実施例８からの純度30％のLL-E33288γ₁−Ｉの約900mg
を、酢酸エチル：ジクロルメタン：エタノール（2:2:
1）で平衡化させた2.5×120cmのセフアデツクスLH-20の
カラムにより、1ml/分の流速でクロマトグラフイーにか
け、12mlずつ画分を集めた。画分を検定し、前述のよう
にTLCで分析し、そしてLL-E33288γ₁−Ｉを含むもの
（画分24〜33）を集め且つ処理して純度64％のLL-E3328
8γ₁−I428mgを得た。

上の試料22mgを、アセトニトリル:0.2M水性酢酸アンモ
ニウム（55:45）で平衡化させた0.8×24cmのセプラライ
ト（Sepralyte）Ｃ₁₈〔35〜60μｍ、アナリチケム（Ana
lytichem）〕カラムにより、2ml/分の流速でクロマトグ
ラフイーにかけ、12mlずつ画分を集めた。画分を検定
し、前述のようにTLCで分析し、純粋なLL-E33288γ₁−
Ｉを含むものを集め且つ処理して純粋なLL-E33288γ₁−
Ｉの7.7mgを得た。

実施例10 LL-E33288β₁−Ｉ及びβ₂−Ｉの精製実施例８からのLL-E33288β₂−Ｉ及びβ₁−Ｉの粗混合
物約600mgを、酢酸エチル：ジクロルメタン：エタノー
ル（2:2:1）で平衡化させた2.5×100cmセフアデツクスL
H-20のカラムにより、1ml/分の流速でクロマトグラフイ
ーにかけ、12mlずつ画分を集めた。画分を検定し、前述
のようにTLCで分析し、そしてLL-E33288β₂−Ｉ及びLL-
E33288β₁−Ｉを含むもの（画分23〜31）を集め且つ処
理してLL-E33288β₂−Ｉ及びβ₁−Ｉの部分的に精製さ
れた混合物81mgを得た。

上記試料を、ヘキサン：ジクロルメタン：エタノール
（3:1:1）で平衡化させた1.5×90cmのセフアデツクスLH
-20のカラムにより、0.8ml/分の流速でクロマトグラフ
イーにかけ、12mlずつ画分を得た。画分を検定し、前述
のようにTLCで分析し、そしてLL-E33288β₂−Ｉ（画分1
7〜30）及びLL-E33288β₁−Ｉ（画分31〜38）を含むも
のを別々に集め且つ処理して、部分的に精製されたLL-E
33288β₂−Ｉの31mg及び純度80％のLL-E33288β₁−Ｉの
20mgを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はLL-E33288β₁−Brの紫外線吸収スペクトルであ
り；第２図はLL-E33288β₁−Brの赤外線吸収スペクトルであ
り；第３図はLL-E33288β₁−Brのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第４図はLL-E33288β₁−Brの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルであり；第５図はLL-E33288γ₁−Brの紫外線吸収スペクトルであ
り；第６図はLL-E33288γ₁−Brの赤外線吸収スペクトルであ
り；第７図はLL-E33288γ₁−Brのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第８図はLL-E33288γ₁−Brの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルであり；第９図はLL-E33288α₂−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第10図はLL-E33288α₃−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第11図はLL-E33288β₁−Ｉの紫外線吸収スペクトルであ
り；第12図はLL-E33288β₁−Ｉの赤外線吸収スペクトルであ
り；第13図はLL-E33288β₁−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；第14図はLL-E33288β₁−Ｉの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルであり；第15図はLL-E33288γ₁−Ｉの紫外線吸収スペクトルであ
り；第16図はLL-E33288γ₁−Ｉの赤外線吸収スペクトルであ
り；第17図はLL-E33288γ₁−Ｉのプロトン核磁気共鳴スペク
トルであり；そして第18図はLL-E33288γ₁−Ｉの炭素13核磁気共鳴スペクト
ルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:29）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式［式中、Ｒ₁は、式で表わされる糖残基であり、Ｒ₃は式で表わされる糖残基を意味し、各化合物が各基との間で、で表わされる関係を有する］で示される化合物LL-E33288α₂−Ｉ、LL-E33288α₃−
Ｉ、LL-E33288β₁−Ｉ、LL-E33288γ₁−Ｉ、LL-E33288
β₁Br及びLL-E33288γ₁−Brからなる群より選ばれる化
合物、あるいは前記各化合物と同様の抗細菌性及び抗腫
瘍性活性を有し、かつミクロモノスポラ（Micromonospo
ra）属に属するそれらの化合物を生産しうる微生物を栄
養培地で培養することによって生産することができ、ａ）シリカゲルシート上でのTLCにおいて、下記の各
溶媒系でのRf値、即ちｉ） 0.1M水性燐酸第二水素カリウムで飽和した酢酸エ
チル、Rf＝0.67; ii） 0.1M水性燐酸第二水素カリウムで飽和した酢酸エ
チル中３％イソプロパノール、Rf＝0.80;及び iii）酢酸エチル：メタノール（95:5）、 Rf＝0.80、を有する；そしてｂ）分子量:1145を有する；化合物LL-E33288α₁−Ｉ、ならびにこれらの２種以上の
化合物を含む混合物。
【請求項２】下記式［式中、Ｒ₁は、式で表わされる糖残基であり、Ｒ₃は式で表わされる糖残基を意味し、各化合物が各基との間で、で表わされる関係を有する］で示される化合物LL-E33288α₂−Ｉ、LL-E33288α₃−
Ｉ、LL-E33288β₁−Ｉ、LL-E33288γ₁−Ｉ、LL-E33288
β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Brからなる群より選ばれる
化合物、あるいは前記各化合物と同様の抗細菌性及び抗
腫瘍性活性を有し、かつミクロモノスポラ（Micromonos
pora）属に属するそれらの化合物を生産しうる微生物を
栄養培地で培養することによって生産することができ、ａ）シリカゲルシート上でのTLCにおいて、下記の各
溶媒系でのRf値、即ちｉ） 0.1M水性燐酸第二水素カリウムで飽和した酢酸エ
チル、Rf＝0.67; ii） 0.1M水性燐酸第二水素カリウムで飽和した酢酸エ
チル中３％イソプロパノール、Rf＝0.80;及び iii）酢酸エチル：メタノール（95:5）、 Rf＝0.80、を有する；そしてｂ）分子量:1145を有する；化合物LL-E33288α₁−Ｉ、あるいはこれらの２種以上の
化合物を含む混合物の製造方法であって、該化合物を生産しうるミクロモノスポラ（Micromonospo
ra）属に属する菌株を、栄養培地で培養し、こうして得
られた培養物から、前記各化合物または該化合物の２種
以上を含む混合物を回収することを特徴とする前記製造
方法。
【請求項３】前記栄養培地が、同化しうる炭素源、窒素
源、臭素及び無機塩を含有し、そして化合物LL-E33288
β₁−Br及びLL-E33288γ₁−Brを選択的に生産すること
を特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の製造方法。
【請求項４】前記栄養培地が、同化しうる炭素源、窒素
源、沃素及び無機塩を含有し、そして化合物LL-E33288
α₁−I;LL-E33288α₂−I;LL-E33288α₃−I;LL-E33288β
₁−Ｉ及びLL-E33288γ₁−Ｉを選択的に生産することを
特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の製造方法。